Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Гистологические и гистохимические изменения в репродуктивных органах самок свиней к периоду полового созревания

п

На правах рукописи

Савельева Любовь Николаевна

ГИСТОЛОГИЧЕСЖИЕ И ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В РЕПРОДУКТИВНЫХ ОРГАНАХ САМОК СВИНЕЙ К ПЕРИОДУ ПОЛОВОГО СОЗРЕВАНИЯ

Специальность 16.00.02-патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Улан-Удэ, 2007

003052754

Работа выполнена на кафедре гистологии и патоморфологии ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова»

Научный руководитель - доктор биологических наук,

профессор Сиразиев Ромазан Закарьянович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Хибхенов Лопсон-Доржо

Владимирович доктор биологических наук, профессор Лебедева Светлана Николаевна

Ведущая организация - ФГОУ ВПО «Иркутская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита диссертации состоится «20» марта 2007 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д. 220.006.01 при ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» (670024, г. Улан-Удэ, ул. Пушкина 8, Факс (301-2) 44-21-33, E-mail bgsha @ bgsha.ru).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова»

Автореферат разослан «20» февраля 2007 г.

кандидат биологических наук, доцент

Учёный секретарь диссертационного сс

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность работы. Перед сельскохозяйственной наукой ставятся важные задачи по улучшению воспроизводства стада сельскохозяйственных животных, в том числе и свиней. Для успешной работы по воспроизводству животных требуются глубокие фундаментальные знания строения и функционирования органов размножения.

Изучением морфофункциональных особенностей репродуктивных органов свиней при различных физиологических состояниях занимались G. W.Corner (1921), F.F.McKenzie (1926), Э.Х. Ламбур (1959), Х.В.Кюбар (1983), К.М.Курносов (1975), В.Г.Бирюков (1979), A.E.Friess et.al. (1980), V.Dantzer (1985), Г.А Игумнов, Р.З. Сиразиев (1985), Р.З. Сиразиев (1987), Н.И. Харенко, В.Ф. Коваленко (1998), Я. Баарс с со-авт. (1998), Р.З. Сиразиев (2003) и др. В доступной литературе встречаются лишь единичные работы, посвященные изучению возрастных микроморфологических изменений половой системы свинок к периоду полового созревания (Hadek R., Getty R., 1959; Касенова Е.К., 1972; Ильин П.А., Коган A.M., 1979). Они носят фрагментарный характер, касаются отдельных органов и не раскрывают полной картины морфофункциональных изменений в воспроизводительных органах.

Изучение закономерностей развития тканей органов половой системы свиней является частью проблемы познания индивидуального развития животных, которые послужат основой для направленного воздействия на продуктивные качества животных, квалифицированного определения оптимальных сроков осеменения, повышения оплодотворяемости, снижения эмбриональной смертности, разработки методов стимуляции и регуляции репродуктивной функции, профилактики и лечения функциональных нарушений и заболеваний воспроизводительных органов.

1.2 Цель и задачи исследований. Работа является самостоятельным разделом комплексной научно-исследовательской темы кафедры гистологии и патоморфологии ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» (номер государственной регистрации 019700 05368).

Целью настоящих исследований явилось изучение возрастных изменений, протекающих в воронке, ампуле, перешейке яйцеводов, рогах, теле, шейке матки и влагалище свиней с 1 месяца после рождения до наступления половой зрелости. Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Выявить особенности структурной организации воронки, ампулы, перешейка яйцеводов, рогов, тела, шейки матки и влагалища в постнатальном онтогенезе.

2. Используя методы современной гистохимии, установить распределение в тканях органа углеводных компонентов (гликогена, нейтральных, кислых сульфатированных и сиалогликопротеинов, кислых сульфатированных протеогликанов и гиалуронатов), а также уровень общего белка.

1.4 Научная новизна. Научная новизна работы состоит в комплексном изучении репродуктивных органов: яйцеводов (воронки, ампулярной части, перешейка), матки (рогов, шейки и тела), собственно влагалища самок свиней к периоду полового созревания с использованием микрометрического, биометрического анализа и современных гистохимических методов. >

Проведены детальные микрометрические измерения высоты покровного эпителия, толщины собственно слизистой, мышечной, серозной оболочек всех исследуемых половых органов, а также диаметра эндомеграль-ных желёз, кровеносных сосудов и высоты гландулоцитов. Дана характеристика и дифференциация углеводных, белковых компонентов в тканях репродуктивных органов в соответствии с возрастными изменениями.

1.5 Теоретическая и практическая значимость. Работа дополняет и углубляет имеющиеся данные о гистофизиологии половой системы свиней. Полученные данные имеют фундаментальное и прикладное значение для эволюционной, видовой, возрастной и экспериментальной морфологии, гистохимии и патоморфологии тканей репродуктивных органов. Они необходимы для изучения физиологии размножения, профилактики и лечения заболеваний и функциональных нарушений воспроизводительных органов. Результаты исследований могут быть использованы при написании соответствующих разделов учебных пособий по анатомии, гистологии, гистохимии, акушерству, гинекологии и биотехнологии и в учебном процессе в ВУЗах зооинже-нерного, ветеринарного и биологического профилей.

1.6 Внедрение результатов исследований. Полученные результаты используются в учебной и научной работе на кафедрах анатомии, гистологии, акушерства и биотехнологии животных ФГОУ ВПО «Бурятская ГСХА им. В.Р.Филиппова», «Иркутская ГСХА», «Уральская ГАВМ», Хакасском государственном университете, «Красноярском ГАУ», ГНУ НИИВВС СО РАСХН.

1.7 Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и одобрены на международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию профессора В.Я.Суетина «Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 2004), международной конференции молодых учёных Сибирского Федерального округа « Научное обеспечение устойчивого развития АПК в Сибири», (Улан-Удэ, 2004), «Проблемы и перспективы ветеринарии в 21 веке», международной научно-практической конференции, посвящённой 70-летию факультета ветеринарной медицины Бурятской ГСХА им. В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2005), международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных» посвященной 75-летию УГАВМ (Троицк, 2005), на второй международной научно-практической конференции молодых ученых «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых Сибирского отделения РАСХН (Новосибирск, 2006), опубликованы в «Вестнике БГУ» Серия 2. Биология (Улан-Удэ, 2006).

1.7 Публикации. Основные результаты научных исследований по теме диссертации отражены в 7 печатных работах.

1.8 Основные положения, выносимые на защиту:

1. Микроморфологическая характеристика воронки, ампулы и перешейка яйцеводов, рогов, тела и шейки матки, собственной части влагалища.

2. Возрастные изменения содержания гликогена, нейтральных, кислых сульфатированных, сиалогликопротеинов, кислых сульфати-рованных протеогликанов, гиалуронатов и белковых компонентов в тканях половых органов.

1.9 Структура и объём диссертации. Работа изложена на 134 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, анализа, выводов, практических предложений и внедрения. Список литературы включает 145 источников, в том числе 33 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 7 таблицами, 50 микрофотографиями, 4 диаграммами.

2. Собственные исследования

2.1 Материал и методы исследований. Материалом исследований служили собственная часть влагалища, рога, тело и шейка матки, яйцеводы клинически здоровых свинок крупной белой породы 1-, 2-, 3-, 4-, 5-,

6- месячного возраста постнатального периода онтогенеза, по три животных в каждой группе. Опытный материал был получен в осенне-зимний период 2003-2004 годов в цехе убоя свинокомплекса «Николаевский» Тар-багатайского района Республики Бурятия.

Для гистологического и гистохимического анализа кусочки из собственной части влагалища, вентральной стенки шейки матки, средней части рогов матки и воронки, ампулы, перешейка яйцеводов фиксировались в 10%-ном растворе нейтрального формалина, жидкости Карнуа, нейтральной фиксирующей смеси А.Л.Шабадаша (1947) и заключались в парафин.

Для изучения гистоморфологии депарафинированные срезы окрашивали гематоксилин-эозином, железным гематоксилином по Гей-денгайну (Ромейс Б., 1953), по ван Гизон в оригинальной прописи (Роскин Г.И., Левинсон А.Б., 1957).

Высоту покровного эпителия воронки, ампулы, перешейка яйцеводов, рогов матки, тела матки, шейки матки, толщину собственно слизистой, мышечной и серозной оболочек, а также диаметр маточных желез и высоту гландулоцитов измеряли окуляр-микрометром в 30 полях зрения с применением микроскопов «Carl Zeiss» и «Spencer».

Полученные числовые данные макро- и микрометрических показателей подвергались статистической обработке по H.A. Плохинс-кому (1970) и с использованием компьютерных программ "Microsoft Excel". Гликоген, другие ШИК-положительные вещества выявляли по методу A.JI. Шабадаша (1947). Для дифференциации гликогена от других ШИК-положительных компонентов срезы перед окраской подвергались обработке амилазой слюны в течение 20 минут при температуре 37°С (Кононский А.И., 1976).

Для обнаружения нейтральных гликопротеинов учитывали ШИК-реакцию после предварительной обработки срезов фенилгидразином в течение одного часа при комнатной температуре. Кислые группы углеводных соединений выявляли альциановым синим при pH 2,7 (Mowry R.W., 1956) и при pH l,0(LevR.,SpicerS.S., 1964),толуидино-вым синим при pH 4,6 по В.В.Виноградову и В.Б.Потаповой (1964).

При гистохимической дифференциации различных групп углеводных и белковых компонентов биополимеров пользовались работами Г.А. Игумнова и H.A. Дериглазовой (1969), В.В. Виноградова (1971), М.Г. Шубича с соавт. (1975), А.И. Кононского (1976), М.Г. Шубича и Г.М. Могильной (1979, 1985), X. Луппа (1980), А.Д. Луци-

ка с соавт. (1989), А.П. Попова (2004), Р.З. Сиразиева (2004).

Для идентификации углеводных компонентов ставили соответствующие химические и ферментативные контроли (Quinterelli G.,1961, Виноградов В.В.,1971, Шубич М.Г., Могильная Г.М.,1979).

Для выявления общего белка использовали метод тетразониево-го сочетания по J.F. Danielli с применением прочного синего Б по M.S. Burstone (Пирс Э., 1962).

Интенсивность гистохимических реакций определяли визуально. Изменения в тканях, наблюдаемые в связи с возрастом, выявляли методом сравнения окрашенных препаратов. Изучение и микрофотографирование исследуемых объектов проводили с использованием микроскопа фирмы "Motic" модели DMWB1 - 223 со встроенной видеокамерой, компьютера с платой видеозахвата и программного обеспечения (программы soft VidCap32rus, ACD See32) при увеличении ЮОх, 400х.

2.2 Полученные результаты 2.2.1 Морфологическая и гистохимическая характеристика яйцеводов свиней

Яйцеводы поросят извилистые длинные ( 15-20см). В них различают: воронку, ампулу, перешеек.

В воронке во все исследуемые сроки отмечается сложная складчатость (1-го, 2-го, 3-го, 4-го порядков). Просвет в воронке по отношению к другим отделам яйцевода наибольший. Подобные данные описаны у поросят, овец и коров (Schmolte К., 1911; Schilling Е., 1962; Королёва В.А., 1964). По данным Е. Schilling (1962), между складками имеются лишь щелевидные пространства шириной, примерно, равные диаметру яйцеклетки (100-200 мкм).

М.И. Джоробеков (1975) установил, что у коз воронка и ампула покрыты двухрядным эпителием. По мнению Г.И.Хетагуровой (1968,1969), двурядность эпителия яйцеводов крольчих обусловлена массовым выклиниванием клеток из эпителиального пласта. По нашим данным, покровный эпителий в воронке яйцеводов у свинок во все исследуемые периоды однослойный ложномногорядный. Ядра секреторных, реснитчатых и выклинивающихся клеток расположены на разных уровнях.

Т.А Сууроя (1973) сообщает о различной высоте покровного эпителия в воронке и начальной части ампулярного отдела органа.

По нашим данным, высота эпителиального пласта изменяется с возрастом. В 1 месяц она равна 13,0±0,37 мкм, в 6 месяцев -25,1±0,54 мкм. В цитоплазме эпителиоцитов воронки выявляется ШИК-реакция, обусловленная высоким содержанием гликогена, нейтральных, кислых сульфатированных гликопротеинов, которая с возрастом усиливается, содержание общего белка значительно не изменяется.

Собственный слой слизистой содержит неравномерно распределённые клеточные элементы и рыхло расположенные коллагено-вые волокна. В глубине собственной пластинки клеточных элементов несколько меньше. Толщина собственной пластинки от оснований складок до мышечной оболочки с увеличением возраста становится больше. Если в 1 месяц она равна 50,8±1,64 мкм, то в 6 месяцев - 83,7±4,42 мкм. В соединительной ткани, стенке кровеносных сосудов собственно слизистой обнаруживается умеренное количество нейтральных гликопротеинов, кислых сульфатированных протеогли-канов и гиалуронатов. Среди клеточных элементов выделяются единичные тканевые базофилы, содержащие значительное количество сульфатированных углеводно-белковых компонентов.

Мышечная оболочка воронки слабо развита. Во все сроки она представлена циркулярным слоем пучков миоцитов, продольный слой отсутствует. Сосуды, обеспечивающие кровоснабжение мышечной оболочки, различного диаметра. Толщина мышечной оболочки варьирует и соответствует в 1 и 6 месяцев - 19,7±1,15 мкм и 53,4±0,96 мкм. У 1 - 2-месячных свинок в миоцитах обнаруживается незначительное количество гликогена, содержание общего белка нарастает по мере увеличения возраста. В соединительнотканных прослойках мышечной оболочки выявляется умеренное количество нейтральных гликопротеинов, кислых сульфатированных протеогликанов.

В ампулярной части яйцеводов во все исследуемые сроки слизистая оболочка сложноскладчатая. Эпителий, выстилающий слизистую оболочку, однослойный ложномногорядный, соотношение реснитчатых и секреторных клеток, приблизительно, одинаковое.

М.И. Джоробеков (1975) в эпителии ампулы яйцеводов у коз в стадию покоя выделяет реснитчатые, безреснитчатые и вакуолизиро-ванные клетки. Присутствие последних у свиней нами не выявлено.

По нашим наблюдениям, высота эпителия в 1 месяц составляет 15,4±0,41 мкм, максимальный её показатель отмечается в 4 месяца -25,4±0,07 мкм, затем он становится достоверно ниже (22,8±0,63 мкм).

Гистохимически в цитоплазме эпителиоцитов ампулы в первые два месяца отмечено содержание гликогена, позже он не идентифицируется. При этом содержание нейтральных, кислых сульфатированных гликопротеинов увеличивается. Наибольшее их количество отмечено в 5 - 6-месячном возрасте.

Собственно слизистая от оснований складок до мышечной оболочки слабо выражена и с возрастом динамично утолщается. Если в 1 месяц толщина её составляет 18,3±2,16 мкм, то в 6 месяцев -25,6±1,81 мкм. Расположение клеточных элементов в собственной пластинке с 3-4- месячного возраста становится более плотным.

Толщина мышечной оболочки достоверно увеличивается с 3 месяцев (Р<0,001). Дифференциация на циркулярный и продольный слои пучков миоцитов начинает проявляться в 5 месяцев. Соотношение циркулярного и продольного слоев приблизительно 10:1. В мио-цитах обнаруживается общий белок. У 5 — 6-месячных свинок его содержание становится наиболее высоким. В соединительнотканных прослойках ампулы большее содержание гиалуронатов выявляется до 4-месячного возраста, позднее нарастает уровень нейтральных гликопротеинов, кислых сульфатированных протеогликанов.

Слизистая оболочка перешейка яйцеводов имеет простую складчатость, просвет отдела узкий. Покровный эпителий однослойный столбчатый, образован, преимущественно, секреторными клетками. Наши результаты согласуются с наблюдениями Ш.Д.Галстян (1939), Г.И. Хетагуровой (1968,1969), Т.А.Сууроя (1973), М.И. Джоробекова (1975) по крольчихам, свиньям, коровам козам. Высота эпителиального пласта максимальный показатель имеет в 4-месячном возрасте (20,5±0,40 мкм). Затем, в 5-6 месяцев, она незначительное уменьшается. В апикальной зоне эпителиоцитов идентифицируется гликоген и общий белок, содержание которых нарастает со 2-го по 4-й месяцы. В большем количестве в цитоплазме эпителиальных клеток выявляются нейтральные, кислые сульфатированные гликопротеины.

Высота покровного эпителия и толщина собственно слизистой от оснований складок до мышечной оболочки с возрастом достоверно увеличиваются (Р <0,001). Уровень кислых сульфатированных протеогликанов и гиалуронатов в соединительной ткани перешейка невысокий.

Мышечная оболочка в данном отделе во все исследуемые возраста представлена циркулярным и продольным слоями. Циркулярный слой развит сильнее. В 1- и 2-месячном возрасте соотношение их со-

ставлнег 3:1, в последующие периоды оно равняется ] 0; I. В строме мышечной оболочки располагаются различного калибра кровеносные сосуды. В миоцитах мышечной оболочки накопление общего белка происходит до 4-месячного возраста, позднее - стабилизируется. К половозрелому возрасту содержание нейтральных пш ко протеинов и кислых сульфатированных протеогликанов увеличивается в интиме сосудов,

2.2.2 Возрастная структурно-функциональная характеристика

матки свиней

Матка у свиней двурогая. Она состоит из рогов, тела и шейки матки. Стенка всех отделов матки представлена слизистой, мышечной и серозной оболочками.

В роге матки слизистая оболочка в 1-6-месячном возрасте имеет слабо выраженную складчатость. Мы согласны с мнением ряда акторов (Фетисов И А., 1966; Игумнов ГА., 1969, Савельев Б. П. 1969; Яковлева Л.С., 1975; Черных В.Г., 1983; 2002; Сиразиев Р.З., 1991; 2004; Малакшинова Л.М., 1998;Томитова ЕЛ., 1998; Коробенко Е.Н„ 2005), которые считают, что слизистая оболочка матки выстланана однослойным столбчатым эпителием. Ядра энителиоцитов овальной формы, располагаются на разных уровнях, кариоплазма включает зёрна гетерохроматина. Высота энителиоцитов остаётся стабильной до 5 месяцев (20,4±1,56 мкм, рис. 1), затем она достоверно увеличивается (30,2±1,99 мкм; Р<0,001). Мы считаем, что к периоду полового созревания в клетках эпителиального покрова происходит усиление синтетических процессов, вследствие чего наблюдается увеличение высоты эпителиоцитов.

Ошейка матки ■ тел о матки Прог матки

Рис, 1 Высота покровного эпителия рот а, тела и шейки мягки

Собственно слизистая представлена соединительной тканью, содержащей клеточные элементы, которых больше вблизи эпителия и в области расположения желёз. С 4-месячного возраста толщина собственно слизистой увеличивается в два раза.

В собственной пластинке располагаются маточные железы. По данным П.А. Соколова (1976), A. Kress, L. Mardi (1990), Z. Uernerova (1992), JI.M. Малакшиновой (1998), y разных видов животных закладка желёз происходит в разные периоды онтогенеза. Авторы считают, что железистая ткань приобретает интенсивное развитие с наступлением половой зрелости.

Нами установлено, что эндометральные железы распределены по всему эндометрию, но в глубине собственно слизистой их больше. С 3 месяцев дистальные отделы их доходят до миометрия. В 5 -6-месячном возрасте достоверно увеличивается высота гландулоци-тов и диаметр желёз. В просвете желёз обнаруживается наличие большого количества секрета.

Мышечная оболочка рогов матки хорошо развита. В 1,2, 3 месяца циркулярный и продольный слои миометрия не имеют чётких границ. В последующие сроки наблюдается отчётливая дифференциация внутреннего и наружного слоев. Динамичное утолщение миометрия наблюдается с 4 месяцев.

В собственной пластинке слизистой оболочки, реже в соединительнотканных прослойках мышечной оболочки в 1 - 4-месячном возрасте встречаются тканевые базофилы, с 3 месяцев их количество увеличивается, в 5 и 6 месяцев наблюдается больше мелких деграну-лированных тканевых базофилов.

В апикальной части эпителиоцитов и гландулоцитов до 4-месячного возраста выявляется небольшое количество гликогена, несколько выше содержание нейтральных, кислых сульфатированных гли-копротеинов. В 5-6 месяцев в эпителии гликоген не обнаруживается, а уровень углеводно-белковых биополимеров, наоборот, заметно растёт. Содержание суммарного белка в покровном и железистом эпителии наиболее высоким становится к периоду половой зрелости. Высокий уровень белковых и углеводно-белковых соединений, по нашему мнению, является отражением активных биохимических процессов, происходящих в эпителиальных структурах эндометрия по мере их дифференциации.

В соединительной ткани собственно слизистой и мышечной обо-

лочки во все исследуемые возраста выявляется умеренное количество сульфатированных протеогликанов, а до 3-месячного возраста -также и гиалуронатов.

В миоцитах миометрия в 1, 2, 3 месяца отмечается реакция на гликоген и общий белок. Содержание последнего в последующем нарастает, а гликогена в миоцитах - снижается.

Покровный эпителий тела матки однослойный столбчатый, к 6 месяцам высота его составляет 24,2±0,46 мкм. Ядра эпителиоцитов округло-овальной формы содержат мелкозернистый гетерохроматин. В эндометрии располагаются маточные железы. В подэпителиаль-ной зоне собственно слизистой желёз очень мало, большее их количество сосредоточено в глубине эндометрия. Диаметр эндометраль-ных желёз 1-месячных свинок составляет 46,2±2,77, у 2 - 3-месячных животных он становится достоверно меньше (Р^0,01). К 4 месяцам, в спонгиозном слое собственно пластинки железы вновь укрупняются (Р^0,05). Наибольший диаметр желёз обнаруживается у 6-месячных животных (51,2±0,77; Р^0,001). Толщина собственной пластинки утолщается по мере увеличения возраста свинок.

тело матки рог матки

возраст, ме с.

Рис 2 Динамика высоты железистого эпителия рога и тела матки поросят

Циркулярный и продольный слои мышечной оболочки во все исследуемые сроки хорошо дифференцируются, за исключением 1 -месячного возраста. Пучки гладкомышечных клеток в циркулярном слое имеют более плотное расположение, чем в продольном. Мио-метрий с возрастом достоверно (Р<0,001) утолщается. Микрометрические показатели наружного и внутреннего слоёв к 6-месяцам соответствуют 2105,9±29,15 мкм и 1180,6 ±36,79 мкм. Хорошо выраженные соединительнотканные прослойки отмечаются в 5-6 месяцев.

Между наружным и внутренним слоями мышечной оболочки располагаются кровеносные сосуды различной величины, максимальный диаметр которых отмечен в 4 месяца (136,4±32,40 мкм).

В надъядерной части цитоплазмы и по апикальному краю клеток покровного и железистого эпителия выявляются нейтральные, кислые сульфатированные гликопротеины и общий белок. Интенсивность реакции на углеводные соединения с возрастом усиливается. В отдельных соединительнотканных клетках собственно слизистой вблизи желёз в 1-, 2-, 3-месячном возрасте обнаруживается гликоген, в дальнейшем он не идентифицируется. Уровень нейтральных и сульфатирован-ных протеогликанов в строме органа становится несколько выше. В миоцитах миометрия содержится суммарный белок, гликоген.

Слизистая оболочка шейки матки образует сложные поперечные и продольные складки. Во все исследуемые периоды она покрыта однослойным столбчатым эпителием, в котором различают реснитчатые и секреторные клетки. Высота цервикального эпителия в 1 месяц составляет 14,8±0,29 мкм, в 3-4 месяца эпителий шейки матки становится достоверно выше (Р <0,001) и наибольшую высоту он приобретает в 6 месяцев (41,8±0,51; Р<0,001). С увеличением возраста собственная пластинка утолщается.

В мышечной оболочке отмечается мощный внутренний - циркулярный и меньшей толщины наружный - продольный слои. Особенно это хорошо выражено к 5 - 6 месяцам. Циркулярный слой в два раза толще продольного.

Во все исследуемые сроки в секрете и цитоплазме эпителиоци-тов шейки матки обнаруживаются нейтральные, кислые сульфатированные и сиалогликопротеины, а также общий белок. Последние в первые три месяца выявляются в меньшем количестве. По данным Г.А.Игумнова (1968), Ибрагимова Э.К. (1991), Р.З.Сиразиева (1991, 1999), Черных В.Г. (2000), Малакшиновой Л.М. (1998), А.П. Попова (2004), Р.З.Сиразиева с соавт. (2004), Черных В.Г. соавт. (2004), нейтральные, кислые сульфатированные и сиалогликопротеины выполняют протективную функцию.

В соединительной ткани собственной пластинки обнаруживаются кислые, сульфатированные протеогликаны, гиалуроновая кислота, содержание последней с возрастом уменьшается. В соединительнотканных клетках, волокнистых структурах обнаруживается

общий белок, а в тканевых базофилах выявляется много сульфатсо-держаших углеводно-белковых соединений.

2.2.3. Морфофункцнопальиые изменении во влагалище свиней

Собственная часть влагалища состоит из слизистой, мышечной оболочек и адвентиции.

С 2 месяцев слизистая оболочка становится складчатой. Вагинальный эпителий состош из двух слоев клеток, поверхностные клетки кубические. Толщина эпителиального покрова и собственно слизистой достоверно увеличиваются, достигая к 4-месячному возрасту максимума (36,2±0,71 мкм; 268,2*4,87 мкм соответственно, Р£0,001). В 5 месяцев вагинальный эпителий становится тоньше, в 6 месяцев - вновь утолщается (Р— 0.005; рис. 3).

Рис. 3 Высота покровного эпителия слизистой оболочки влагалища

Мышечная оболочка до 3 месяцев представлена косо расположенными широкими и короткими пучками гладкомыщечных клеток. С 4 месяцев она дифференцирована на циркулярный и продольный слои. Продольный слой в два раза толще циркулярного. Мышечная оболочка постепенно утолщается и к 6 месяцам составляет 3454,7±3,62 микрометра,

В цитоплазме поверхностных эпителиальных клеток слизистой оболочки влагалища гликоген обнаруживается у 1 - 2-месячных животных, в последующие возраста наблюдается увеличение его количества и уровня нейтральных, кислых сульфатированных и сиалог-ликопротеинов, чуть меньше выражена реакция на общий белок.

Мы считаем, что нарастание уровня гликогена характеризует функциональное состояние тканей органа, в зависимости от которого поступающие к ним углеводы могут откладываться в виде глико-

гена. Ряд авторов считают, что гликоген - эффективная и резервная форма глюкозы (Страйер.Р., 1984; Сиразиев Р.З., 2004).

Об увеличение гликогена в клетках эпителия в период охоты сообщают Г.А. Игумнов (1968), Б.П. Савельев (1969), В .Я. Суетин (1971), М.И. Джоробеков (1975), Ю. Ай. и Ч. Цзуэ-чен (1985), В.Г. Черных (1983, 2004), Р.З. Сиразиев (1991,2004), JIM. Малакшинова(1998), Е.А. Томи-това (1998) у ячих, коров, коз, мышей, кобыл, свиней, крольчих.

По мнению М.Г. Шубича, Г.М. Могильной (1979), кислые гли-копротеины действуют как факторы биологической защиты.

Нам не удалось выявить в вагинальном эпителии гиалуронаты, что не согласуется с данными W. Branscheid, W. Holtz (1988). По нашим наблюдениям, в межклеточном веществе стромы органа с возрастом увеличивается количество кислых сульфатированных проте-огликанов, а гиалуронатов - уменьшается. Реакция на общий белок в волокнистых и клеточных структурах соединительной ткани и мио-цитах мышечной оболочки усиливается с 2 месяцев.

Выявленные возрастные морфологические и гистохимические изменения в тканевых структурах репродуктивных органов дают нам основание считать, что наступление половой зрелости у самок свиней происходит в возрасте 6 месяцев после рождения.

ВЫВОДЫ

1. Яйцевод поросят длинный, включает воронку, ампулу, перешеек, стенка которых образована слизистой, мышечной, серозной оболочками. Слизистая оболочка воронки, ампулы и перешейка слож-носкладчатая, выстлана ложномногорядным эпителием, представленным секреторными и реснитчатыми клетками. Мерцательные клетки в перешейке не выявляются. Высота покровного эпителия в разных отделах органа неодинаковая, наибольшая она в ампуле, к половозрелому возрасту высота эпителия заметно увеличивается. Во все исследуемые периоды мышечная оболочка в перешейке яйцевода более выражена и толще, чем в ампуле и воронке. В последних мышечная оболочка представлена только циркулярно направленными пучками гладкомышечных клеток, а в перешейке ещё и тонким слоем продольных пучков миоцитов.

2. В эпителиальной выстилке яйцеводов выявляются общий белок, гликоген, нейтральные, кислые сульфатированные гликопро-теины, уровень последних с возрастом нарастает. В строме собствен-

но слизистой, соединительнотканных прослойках мышечной оболочки, стенках кровеносных сосудов всех отделов яйцевода обнаруживаются нейтральные гликопротеины, кислые сульфатированные про-теогликаны и гиалуронаты.

3. Слизистая оболочка матки складчатая. Покровный эпителий рога, тела матки однослойный столбчатый, шейки матки — однослойный столбчатый мерцательный, с возрастом он становится выше. В собственно слизистой рога матки в 1 - 4-месячном возрасте наблюдается образование эндометральных желёз путём погружения покровного эпителия в собственную пластинку. До 4-месячного возраста железы располагаются ближе к покровному эпителию, а в последующем они пронизывают весь эндометрий. Маточные железы выстланы однослойным низкостолбчатым эпителием, в рогах матки он выше, чем в теле матки.

4. В цитоплазме эпителиоцитов всех отделов матки, гландуло-цитов обнаруживаются общий белок и углеводно-белковые соединения, с возрастом отмечается накопление нейтральных, кислых сульфа-тированных гликопротеинов, а в шейке матки и сиалогликопротеинов. Гликоген в небольшом количестве в эпителии рога матки обнаруживается в первые два месяца, в теле матки - в первые три, в последующем - он не идентифицируется, в шейке матки гликоген не выявляется.

5. Слизистая оболочка влагалища слабоскладчатая, вагинальный эпителий состоит из двух слоёв клеток, поверхностные клетки кубические. Высота вагинального эпителия изменяется асинхронно. Диф-ференцировка мышечной оболочки на внутренний - циркулярный и наружный - продольный слои отмечается с 4 месяцев. Гликоген обнаруживается в эпителии влагалища у 1 - 2-месячных животных, затем его количество снижается, а у 5 - 6-месячных свинок - нарастает. Уровень нейтральных, кислых сульфатированных и сиалогликопротеинов в эпителиальной выстилке с возрастом становится выше, а содержание общего белка не изменяется.

6. В соединительной ткани слизистой и мышечной оболочек исследуемых органов выявляются тканевые базофилы, количество которых с возрастом увеличивается. К 5-месячному возрасту, особенно в матке, наблюдается их активная дегрануляция

7. В гладкомышечных клетках мышечной оболочки яйцеводов, матки и влагалища обнаруживаются общий белок, гликоген, углеводно-белковые биополимеры, содержание которых неодинаковое в различные возрастные периоды.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Полученные данные могут использоваться в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно- практических занятий на биологических, зооинженерных и ветеринарных факультетах профильных высших учебных заведений. При написании соответствующих разделов учебников и справочных руководств по функциональной, возрастной морфологии, физиологии, акушерству и гинекологии домашних животных. В практической деятельности при изучении возрастной и видовой морфологии, в ветеринарной гинекологии. Для проведения экспериментальных наблюдений с целью выяснения актуальных вопросов физиологии размножения, патогенеза, терапии функциональных нарушений в гениталиях.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Савельева, Л.Н. Гистоструктура эндометрия в препубертат-ный период у свинок / Л.Н.Савельева, Р.З.Сиразиев // «Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой, возрастной и экспериментальной морфологии», научно-практ. конф., посвящ. 100-летию В.Я.Суетина.- Улан-Удэ: Изд-во ФГОУ ВПО «Бурятская ГСХА им. В.Р.Филиппова», 2004.- С.153-155.

2. Савельева, Л.Н. Микрометрические показатели эпителия матки поросят / Л.Н. Савельева // «Научн. обеспечение устойчивого развития АПК в Сибири»: Мат. конф. молодых ученых Сиб. Фед. округа.- Улан-Удэ: Изд-во ФГОУ ВПО «Бурятская ГСХА им. В.Р.Филиппова», 2004,- С. 234-235.

3. Савельева, Л.Н. Гистоструктура миометрия свиней / Л.Н. Савельева // «Проблемы и перспективы ветеринарии в 21 веке»: Меж-дунар. науч.-практ. конф., посвящ. 70-летию фак-та ветеринарной медицины БГСХА им. В.Р. Филиппова.- Улан-Удэ: Изд-во ФГОУ ВПО «Бурятская ГСХА им. В.Р.Филиппова», 2005.- С.43-44.

4.Савельева, Л.Н. Гистологическая характеристика стенки матки поросят / Савельева Л.Н., Р.З. Сиразиев // «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных»: Материалы междунар. научно-практ. конф., посвящ. 75-летию УГАВМ.- Троицк: УГАВМ, 2005,- С.67-70.

5. Савельева, Л.Н. Гистоморфология слизистой оболочки рогов и шейки матки свиней / Л.Н. Савельева // «Новейшие направления

развития аграрной науки в работах молодых ученых»: Труды 2-й международной научно-практической конференции молодых ученых. -Новосибирск: РАСХН Сиб. отд-ние.- 2006. - С.375-378.

6. Савельева, Л.Н. Гистоструктура шейки матки свинок / Л.Н. Савельева, Р.З. Сиразиев // Вестник БГУ, серия 2: Биология.-Улан-Удэ: Изд-во Бурятского ун-та, 2006,- Вып. 8.- С.255-258.

7. Савельева, Л.Н. Гистологическая и гистохимическая характеристика яйцеводов поросят к периоду полового созревания / Л.Н. Савельева // Материалы междунар. научно-практ. конф., «Стратегия развития высшего профессионального образования и науки в Сибири в 20 веке», посвящ. 75-летию ФГОУ ВПО «Бурятская ГСХА им. В.Р. Филиппова» - Улан-Удэ: Изд-во ФГОУ ВПО «Бурятская ГСХА им. В.Р.Филиппова», 2007.-С. 107-111.

Подписано в печать 12.02.2007. Бумага офс. № 1. Формат 60x84/16 Уч. изд. л. 1,2. Тираж 100. Заказ № 423. Цена договорная.

Издательство ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» 670024, г. Улан-Удэ, ул. Пушкина, 8.

Актуальность работы. Перед сельскохозяйственной наукой ставятся важные задачи по улучшению воспроизводства стада сельскохозяйственных животных, в том числе и свиней. Для успешной работы по воспроизводству животных требуются глубокие фундаментальные знания строения и функционирования органов размножения.

Изучением морфофункциональных особенностей репродуктивных органов свиней при различных физиологических состояниях занимались

G.W.Corner (1921), F.F.McKenzie (1926), Э.Х.Ламбур (1959), Х.В.Кюбар (1983), К.М.Курносов (1975), В.Г.Бирюков (1979), A.E.Friess et.al. (1980), V.Dantzer (1985), Г.А Игумнов, Р.З. Сиразиев (1985), Р.З. Сиразиев (1987),

H.И. Харенко, В.Ф. Коваленко (1998), Я. Баарс с соавт. (1998), Р.З. Сиразиев (2003) и др. В доступной литературе встречаются лишь единичные работы, посвященные изучению возрастных микроморфологических изменений половой системы свинок к периоду полового созревания (Hadek R., Getty R., 1959; Касенова Е.К., 1972; Ильин П.А., Коган A.M., 1979). Они носят фрагментарный характер, касаются отдельных органов и не раскрывают полной картины морфофункциональных изменений в воспроизводительных органах.

Изучение закономерностей развития тканей органов половой системы свиней является частью проблемы познания индивидуального развития животных, которые послужат основой для направленного воздействия на продуктивные качества животных, квалифицированного определения оптимальных сроков осеменения, повышения оплодотворяемости, снижения эмбриональной смертности, разработки методов стимуляции и регуляции репродуктивной функции, профилактики и лечения функциональных нарушений и заболеваний воспроизводительных органов.

Цель и задачи исследований. Работа является самостоятельным разделом комплексной научно-исследовательской темы кафедры гистологии и патоморфологии ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Р. Филиппова» (номер государственной регистрации 019700 05368).

Целью настоящих исследований явилось изучение возрастных изменений, протекающих в воронке, ампуле, перешейке яйцеводов, рогах, теле, шейке матки и влагалище свиней с 1 месяца после рождения до наступления половой зрелости. Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Выявить особенности структурной организации воронки, ампулы, перешейка яйцеводов, рогов, тела, шейки матки и влагалища в постнатальном онтогенезе.

2. Используя методы современной гистохимии, установить распределение в тканях органа углеводных компонентов (гликогена, нейтральных, кислых сульфатированных и сиалогликопротеинов, кислых сульфатированных протеогликанов и гиалуронатов), а также уровень общего белка.

Научная новизна. Научная новизна работы состоит в комплексном изучении репродуктивных органов: яйцеводов (воронки, ампулярной части, перешейка), матки (рогов, шейки и тела), собственно влагалища самок свиней к периоду полового созревания с использованием микрометрического, биометрического анализа и современных гистохимических методов.

Проведены детальные микрометрические измерения высоты покровного эпителия, толщины собственно слизистой, мышечной, серозной оболочек всех исследуемых половых органов, а также диаметра эндометральных желёз, кровеносных сосудов и высоты гландулоцитов. Дана характеристика и дифференциация углеводных, белковых компонентов в тканях репродуктивных органов в соответствии с возрастными изменениями.

Теоретическая и практическая значимость. Работа дополняет и углубляет имеющиеся данные о гистофизиологии половой системы свиней.

Полученные данные имеют фундаментальное и прикладное значение для эволюционной, видовой, возрастной и экспериментальной морфологии, гистохимии и патоморфологии тканей репродуктивных органов. Они необходимы для изучения физиологии размножения, профилактики и лечения заболеваний и функциональных нарушений воспроизводительных органов. Результаты исследований могут быть использованы при написании соответствующих разделов учебных пособий по анатомии, гистологии, гистохимии, акушерству, гинекологии и биотехнологии и в учебном процессе в ВУЗах зооинженерного, ветеринарного и биологического профилей.

Внедрение результатов исследований. Полученные результаты используются в учебной и научной работе на кафедрах анатомии, гистологии, акушерства и биотехнологии животных ФГОУ ВПО «Бурятская ГСХА имени В.Р.Филиппова», «Иркутская ГСХА», «Уральская ГАВМ», Хакасском государственном университете, «Красноярском ГАУ», ГНУ НИИВВС СО РАСХН.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и одобрены на международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию профессора В.Я.Суетина «Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 2004), международной конференции молодых учёных Сибирского Федерального округа « Научное обеспечение устойчивого развития АПК в Сибири», (Улан-Удэ, 2004), «Проблемы и перспективы ветеринарии в 21 веке», международной научно-практической конференции, посвящённой 70-летию факультета ветеринарной медицины Бурятской ГСХА им. В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2005), международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных» посвященной 75-летию У ГАВМ (Троицк, 2005), на второй международной научно-практической конференции молодых ученых «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых Сибирского отделения РАСХН (Новосибирск, 2006), опубликованы в «Вестнике БГУ» Серия 2. Биология (Улан-Удэ, 2006).

Публикации. Основные результаты научных исследований по теме диссертации отражены в 7 печатных работах.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Микроморфологическая характеристика воронки, ампулы и перешейка яйцеводов, рогов, тела и шейки матки, собственной части влагалища.

2. Возрастные изменения содержания гликогена, нейтральных, кислых сульфатированных, сиалогликопротеинов, кислых сульфатированных протеогликанов, гиалуронатов и белковых компонентов в тканях половых органов.

Структура и объём диссертации. Работа изложена на 134 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, анализа, выводов, практических предложений и внедрения. Список литературы включает 145 источников, в том числе 33 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 7 таблицами, 50 микрофотографиями, 4 диаграммами.

5 ВЫВОДЫ

1. Яйцевод поросят длинный, включает воронку, ампулу, перешеек, стенка которых образована слизистой, мышечной, серозной оболочками. Слизистая оболочка воронки, ампулы и перешейка сложноскладчатая, выстлана ложномногорядным эпителием, представленным секреторными и реснитчатыми клетками. Мерцательные клетки в перешейке не выявляются. Высота покровного эпителия в разных отделах органа неодинаковая, наибольшая1 она в ампуле, к половозрелому возрасту высота эпителия заметно увеличивается. Во все исследуемые периоды мышечная оболочка в перешейке яйцевода более выражена и толще, чем в ампуле и воронке. В последних мышечная оболочка представлена только циркулярно направленными пучками гладкомышечных клеток, а в перешейке ещё и тонким слоем продольных пучков миоцитов.

2. В эпителиальной выстилке яйцеводов выявляются общий белок, гликоген, нейтральные, кислые сульфатированные гликопротеины, уровень последних с возрастом нарастает. В строме собственно слизистой, соединительнотканных прослойках мышечной оболочки, стенках кровеносных сосудов всех отделов яйцевода обнаруживаются нейтральные гликопротеийы, кислые сульфатированные протеогликаны и гиалуронаты.

3. Слизистая оболочка матки складчатая. Покровный эпителий рога, тела матки однослойный столбчатый, шейки матки - однослойный столбчатый мерцательный, с возрастом он становится выше. В собственно слизистой рога матки в 1 - 4-месячном возрасте наблюдается образование эндометральных желёз путём погружения покровного эпителия в собственную пластинку. До 4-месячного возраста железы располагаются ближе к покровному эпителию, а в последующем они пронизывают весь эндометрий. Маточные железы выстланы однослойным кубическим эпителием, в рогах матки он выше, чем в теле матки.

4. В цитоплазме эпителиоцитов всех отделов матки, гландулоцитов обнаруживается общий белок и углеводно-белковые соединения, с возрастом отмечается накопление нейтральных, кислых сульфатированных гликопротеинов, а в шейке матки и сиалогликопротеинов. Гликоген в небольшом количестве в эпителии рога матки обнаруживается в первые два месяца, в теле матки - в первые три, в последующем - он не идентифицируется, в шейке матки гликоген не выявляется.

5. Слизистая оболочка влагалища слабоскладчатая, вагинальный эпителий состоит из двух слоев клеток, поверхностные клетки кубические. Высота вагинального эпителия изменяется асинхронно. Дифференцировка мышечной оболочки на внутренний - циркулярный и наружный -продольный слои отмечается с 4 месяцев. Гликоген обнаруживается в эпителии влагалища у 1 - 2-месячных животных, затем его количество снижается, а у 5 - 6-месячных свинок - нарастает. Уровень нейтральных, кислых сульфатированных и сиалогликопротеинов в эпителиальной выстилке с возрастом становится выше, а содержание общего белка не изменяется.

6. В соединительной ткани слизистой и мышечной оболочек исследуемых органов выявляются тканевые базофилы, количество которых с возрастом увеличивается. К 5-месячному возрасту, особенно в матке, наблюдается их активная дегрануляция

7. В гладкомышечных клетках мышечной оболочки яйцеводов, матки и влагалища обнаруживаются общий белок, гликоген, углеводно-белковые биополимеры, содержание которых неодинаковое в различные возрастные периоды. i

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Полученные данные могут использоваться в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно- практических занятий на биологических, зооинженерных и ветеринарных факультетах профильных высших учебных заведений. При написании соответствующих разделов учебников и справочных руководств по функциональной, возрастной морфологии, физиологии, акушерству и гинекологии домашних животных. В практической деятельности при изучении возрастной и видовой морфологии, в ветеринарной гинекологии. Для проведения экспериментальных наблюдений с целью выяснения актуальных вопросов физиологии размножения, патогенеза, терапии функциональных нарушений в гениталиях.

118