Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Гастропротективное и ранозаживляющее действие экстракта коры дуба

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ БУРЯТСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕН-

НАЯ АКАДЕМИЯ

На правах рукописи

УДК 619:615.32-092(591.477+616-001 +2616.33-002)

ГАСТРОПРОТЕКТИВНОЕ И РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ЭКСТРАКТА КОРЫ ДУБА

16.00.02.- Патология, онкология и морфология животных

ТАРНУЕВ ДМИТРИЙ ВЛАДИМИРОВИЧ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Улан-Удэ, 1997

Работа выполнена в Бурятской государственной сельскохозяйственной академии и Бурятском институте биологии СО РАН

Научные руководители: -Заслуженный деятель науки Республики Бурятия, доктор ветеринарных наук

Жанчипов Г.Ш.

-Кандидат медицинских наук Убашеев И.О.

Официальные оппоненты:

-Доктор биологических наук, профессор Батоев Ц.Ж. -Кандидат ветеринарных наук, доцент Оножеев A.A.

Ведущая организация - Проблемная лаборатория иммунохимии пестицидов Восточно-Сибирского государственного технологического университета, г.Улан-Удэ.

Защита состоится -ССд-^У?^ 1997 года в А часов

на заседании диссертационного Совета Д-120.79.01 в Бурятской государственной сельскохозяйственной академии ( 670020 г. Улан-Удэ, ул. Пушкина, 8).

Автореферат разослан "<М> " 1997.

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат ветеринарных наук,

доцент Г.А.Игумнов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Поискам путей активного влияния на процессы восстановления, т.е. созданию оптимальных условий регенерации повреж^-денных органов и тканей, уделялось большое внимание исследователями во все времена.

Особую актуальность в медицине и ветеринарии представляет задача восстановления структурно-функционального состояния органов системы пищеварения, что объясняется исключительным многообразием выполня^емых ими функций в процессе жизнедеятельности организма. В общей структуре заболеваний органов пищеварительной системы и у человека и у животных, большой процент занимает патология желудка. В частности, гастритные изменения и язва желудка у продуктивных животных являются типичной проблемой, обусловленной целым рядом причин: интенсивным использованием сильно концентрированных, силосных и иногда не совсем доброкачественных кормов, стрессами из-за плохих условий содержания и другими.

Не теряет своей актуальности в настоящее время и проблема лечения ран в ветеринарной медицине, несмотря на большое количество предло=--женных методов, что объясняется высокой частотой встречаемости раневых повреждений у сельскохозяйственных животных.

В связи с вышесказанным, изучение патогенетических механизмов повреждения желудка, повышение эффективности профилактики и лечения заболеваний органов гастродуоденальной зоны, раневых повреждений ко~-жи, создание новых эффективных средств фармакотерапии их является одной из актуальных проблем ветеринарной и фармацевтической науки.

В настоящее время уделяется особое внимание разработке и внедрению новых лекарственных средств природного происхождения, ускоряющих восстановительные процессы в поврежденных органах и тканях. В этом плане представляет значительный интерес

использование при патологии желудка и раневых повреждениях кожи препаратов из коры дуба, содержащих целый комплекс биологически активных веществ и широко применявшихся в народной медицине и ветеринарии при самых различных недугах.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований явилось изучение характера влияния экстракта коры дуба,' приготовленного по ресурсосберегающей технологии, на развитие восстановительных процессов в стенке желудка на самых различных моделях повреждений, а также на заживление кожных ран.

На основании цели исследований определился ряд конкретных задач в настоящей работе:

1) изучение влияния экстракта коры дуба на развитие восстановительных процессов в стенке желудка белых крыс на моделях острых язв, вызванных бутадионом, атофаном, аспирином, иммоби-лизационным стрессом, по методу Шея;

2) изучение влияния экстракта коры дуба на восстановительные процессы в желудке белых крыс на модели хронической язвы по Окабэ;

3) исследование особенностей действия экстракта коры дуба при желчном гастрите ("рефлюкс" - гастрите) у белых крыс;

4) изучение влияния экстракта коры дуба на биоэлектрическую активность желудка кроликов на модели язвы по Окабэ;

5) изучение характера влияния линимента из экстракта коры дуба на заживление раневых повреждений кожи у белых крыс.

Научная новизна. В диссертации впервые дана оценка гастропротективного и ранозаживляющего действия новых природных препаратов: экстракта коры дуба и линимента из него в опытах на животных. Установлено, что испытуемые природные лекарственные средства способствуют более ускоренному, по сравнению с контролями, заживлению язвенных дефектов и исчезновению гастрит-ных проявлений в стенке желудка крыс и кроликов, стимуляции заживления раневых повреждений кожи у крыс.

Кроме этого, в работе установлено, что патологический процесс в стенке желудка у кроликов (язва по Окабэ) сопровождается угнетением биоэлектрической активности желудка. Введение подопытным животным экстракта коры дуба оказывало стимулирующее влияние на восстановление электрической активности желудка в процессе заживления язвенного дефекта в стенке органа. Выявлен-

ный факт свидетельствует о потенциальной возможности использования электрогастрографии при оценке тяжести патологии и фарма-котерапевтической эффективности испытуемых лекарственных средств.

Практическая ценность работы. Выполненные исследования представляют значительный интерес в теоретическом и практическом аспектах. Полученные данные об эффективности препаратов на основе коры дуба при экспериментальных повреждениях желудка и ранах кожи позволили реко^мендовать их в Фармкомитет МЗ России.

Полученные новые материалы об электрической активности желудка у кроликов позволяют судить о том, что электрогастрогра-фия как метод объективной оценки состояния желудка и других органов пищеварительной системы может широко применяться для оценки эффективности лекарственных средств в эксперименте и ветеринарной практике. В целом, полученные данные могут быть использованы и учтены не только в научно-исследовательской работе, на практике, но и в учебном процессе на лекциях и практических занятиях, при написании учебников, справочных пособий, рекомендаций по профилактике и лечению внутренних незаразных болезней сельскохозяйственных животных.

Внедрение результатов научных исследований. Полученные данные используются в учебной и научной работе кафедр гистологии, физиологии и терапии Бурятской, Московской, Казанской, Уральской государственных сельскохозяйственных академиях.

Материалы исследований по настоящей теме вошли в комплексную работу: информационный листок (Ы 45-93) "Стимуляция регенерации поврежденных органов и тканей", выпущенный Бурятским Центром научно-технической информации (1993).

После рассмотрения материалов экспериментальных исследований по экстракту коры дуба в Фармкомитете МЗ России, а также в Фармсовете Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации испытуемый препарат может быть рекомендован для испытания в условиях клиники и для дальнейших этапов до получения готового лекарственного средства.

Положения, выносимые на защиту:

1. Экстракт коры дуба - новое лекарственное средство в виде быстрорастворимого порошка, приготовленного по ресурсосберегающей техно>-логии, оказывает выраженное гастропротективное действие на экспери^ментальных моделях острых и хронической язв желудка, желчного гастрита у белых крыс и кроликов.

2. Испытуемый препарат способствует более ускоренному, чем в контроле, восстановлению угнетенной биоэлектрической активности желудка, свидетельствующему о нормализации моторной деятельности органа.

3. Линимент из экстракта коры дуба ускоряет заживление раневых повреждений кожи, обусловливая более интенсивное развитие грануляционной ткани и созревание рубца, а также раннюю эпителизацию раневого дефекта.

Апробация работы. Основные материалы экспериментальных иссле>-дований доложены и обсуждены на: Научно-практических конференциях ветеринарного факультета Бурятского сельскохозяйственного института (Улан-Удэ, 1990 1992); Международной конференции "Экологическая патология и ее фармакокоррекция" (Чита, 1991); Научной конференции Восточно-Сибирского технологического университета (Улан-Удэ, 1995); Всероссийской конференции "Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, кли-ники"(Чита,1995); Региональной научно-практической конференции молодых ученых "Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины" (Иркутск, 1995).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 5 научных работ.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на ¡¿С страницах компьютерного текста, содержит ^^габлиц, иллюстрирована ¿^^фотографиями, электрогастрограммами и графиками. Она состоит из введения, четырех глав, выводов, практических предложений и списка литературы, состоящего изисточников, из ко-торых^Синостранных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Эксперимента-льные исследования в диссертационной работе проведены в два основных этапа: 1) оценка влияния экстракта коры дуба на восстановительные процессы при повреждениях стенки желудка, 2) изучение ранозаживляющего действия линимента из экстракта коры дуба.

Экстракт коры дуба получен по ресурсосберегающей технологии в виде красновато-коричневого порошка со специфическим запахом, легкорастворимого в теплой воде. Технологический процесс его получения вклю^-чает следующие стадии: 1) измельчение сырья; 2) экстракция дозированного лекарственного сырья горячей водой при 80-90 0 С; 3) отстаивание водного экстракта с последующим его фильтрованием; 4) сепарирование водного экстракта; 5) упаривание водного экстракта и повторное сепарирование; 6) сушка методом распыления.

Для приготовления 2%, 3% и 5% линимента из экстракта коры дуба в качестве мазевой основы использован ланолин.

Всего в опытах использовано 120 белых мышей, 570 белых крыс, 25 кроликов и 8 собак.

Нами дана оценка безопасности экстракта коры дуба в остром и хроническом опытах.

При определении ЬО50 экстракта из коры дуба были проведены серии опытов на мышах с массой 18-20 г и белых крысах с массой 160-180 г. Основные параметры острой токсичности препарата вычисляли при помощи статистического метода по Керберу (Першин, Гвоздева, 1961).

Токсическое действие препарата при длительном его введении было проверено на мышах с массой 18-25 г, крысах с массой 160-210 г, собаках с исходной массой 3-11 кг. Разным группам каждого вида животных препарат вводили в установленных трех дозах: 1/10 ЫЗбо (терапевтическая), 1 /'8 и 1/6 И)5о. Контрольным группам животных вводили дистиллированную воду в том же объеме. В сроки забоя: 2 и 4 месяца" для мышей, 3 и 6 месяцев для крыс, 6 месяцев для собак определяли массу исследуемых животных, массу и структурное состояние их внутренних органов, а также коэффициенты массы внутренних органов,- дающих возможность проследить отклонения от существующих стандартных норм.

Противоязвенную активность экстракта коры дуба и препарата сравнения - кверцетина исследовали на общепринятых моделях острой язвы желудка, вызванных введением крысам бутадиона (Varro Csernay,1963), атофана (Varro Csernay, 1963 ), аспирина (Шалимов и соавт., 1989), по методу Shay et al (1975), по методу Okabe et al (197 Г) и путем иммобилизационного стресса (Шалимов и соавт., 1989). Кроме того, исследовали гастропротективную активность экстракта коры дуба путем введения медицинской желчи.

Опыты проведены на белых беспородных крысах обоего пола с исходной массой 180-200 г, голодавших до начала эксперимента 18 часов при свободном доступе к воде. Исследуемый препарат - экстракт коры дуба давали животным в терапевтической дозе 47,0 мг/кг массы (1/10 от LD50 ) в виде водного раствора внутрижелудочно, согласно схемы эксперимента. В качестве препарата сравнения был использован кверцетин в изоэффективной дозе: 50 мг/кг массы 1 раз в сутки, оказывающий выраженное антиульцерогенное и антиок-сидантное влияние. Для оценки параметров желудочной секреции животным накладывали лигатуру на привратник ( гексенал, 70 мг/кг). Через 12-14 часов крыс умерщвляли. Желудок разрезали по большой кривизне и подсчитывали число деструкций, которые подразделяли на точечные кровоизлияния, эрозии, полосовидные язвы и легкие (пььлевидные) поражения. Для каждого вида повреждений слизистой оболочки желудка (СОЖ) рассчитывали "язвенный индекс" Паулса (Оболенцева, Ходжай, 1964). Кроме того, рассчитывали среднее число каждого вида деструкций на одно животное в группе, и их размеры.

В экспериментах на крысах по моделированию язвенных повреждений желудка определяли темп желудочной секреции, общую кислотность желудочного сока, содержание свободной соляной кислоты по методу Михаэлиса, исследовали ферментообразующую функцию желудка по В.Т. Туголукову (Меньшиков и соавт.,1987).

Перекисное окисление липидов определяли по содержанию малонового диальдегида в гомогенате стенки желудка крыс (Сталвная И.Д. 1977) при иммобилизационном стрессе.

У подопытных кроликов вызывали модель хронической ацетатной Язвы желудка по Окабэ, которая, как было указано выше, разработана .на белых крысах. Нами же этот метод модифицирован применительно к крсъ-яикам.

Размеры язвенного кратера снимали на 7, 14 и 21 сутки.

Для получения графического изображения биоэлектрической активности желудка кроликов в экспериментах использовали отечественный электрогастрограф ЭГС-4М. Электрогастрограммы (ЭГГ) снимали на 5-7, 12-14 и 19-21 сутки с начала опытов. При анализе полученных ЭГГ определяли общий уровень биоэлектрической активности - ОУБА (усл.ед.), частоту импульсов в минуту - ЧИ, среднюю величину амплитуды - СБА (мВ) по С.М. Лисовской (1958).

Ранозаживляющее действие линимента из экстракта коры дуба изучено на моделях линейной и плоскостной кожно-мышечных ран (Коллагенопластика в медицине, 1978; Пономарева-Астраханцева, 1954). Во всех сериях опытов на раневые поверхности повреждения кожи крыс наносили линимент из экстракта коры дуба тонким равномерным слоем. Лечение начинали в первые часы после нанесения ран. В качестве контроля изучали у крыс "естественное" заживление ран или заживление ран при нанесении ланолина, а в качестве препарата сравнения применяли масляно-бальзамическую эмульсию А.В.Вишневского.

На 8 сутки эксперимента осуществляли тензиометрию линейных ран. Для определения прочности образовавшегося рубца был приспособлен прибор для оценки модуля эластичности резины ВН-5307.

Клинические исследования плоскостных ран проводили на 1,3, 7, 14, 21 сутки. В эти сроки отмечали состояние ран, качество и зрелость грануляции, характер раневого отделяемого, состояние окружающих тканей, сроки полной эпителизации и полного заживления раны. После снятия размеров плоскостных ран рассчитывали процент уменьшения их за одни сутки.

В указанные сроки животных умерщвляли: белых мышей и белых крыс - путем мгновенной декапитации; собак - электротоком; кроликов - воздушной эмболией.

Для патоморфологических исследований кусочки внутренних органов и кожи фиксировали в 10-12 % растворе нейтрального формалина. Срезы готовили из кусочкой, залитых в целлоидин-парафин, на санном микротоме. Полученные срезы органов окрашивали гематоксилин-эозином, по ван Гизону, альциановым синим, толуидиновым синим на протеогликаны (Г.А. Меркулов, 1969; А.Ф. Киселев, 1982; О.В. Волкова, Ю.К. Елецкий, 1982). Для гистохими-

ческих методов исследований готовили свежезамороженные срезы на• криостате марки МК-25. Использовались гистохимические методики: выявление гликогена ШИК-реакцией по Мак-Манусу - Хочки-су, липидов - Суданом черным "Б" по Беренбауму, активность сукци-натдегидрогеназы (СДГ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) - по Нахласу, щелочную фосфотазу (ЩФ) по 'методу Гомори ( Э. Пирс, 1962; X. Луппа, 1980).

Фотографирование микропрепаратов осуществляли на микроскопе МБИ-15.

Биометрическую обработку результатов исследований проводили по методу Стьюдента-Фишера в модификации Е.Е. Монцеви-чюте-Эрингене (1964).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Оценка безопасности экстракта коры дуба. При внутриб-рюшинном введении белым мышам экстракта коры дуба дозы препарата подбирались так, чтобы были группы животных с дозой, не вызывающей гибель особей, а также группы животнь!Х с дозой, вызывающей 100% гибель животных. Результаты экспериментов, проведенных на белых мышах, показали, что Ь05о экстракта коры дуба при внутрибрюшинном введении белым мышам составляет по Кер-беру 468,7+22,5 мг/кг. Различия показателей ЬОбо у белых мышей-самцов и мышей-самок были незначительными, и на этом основании были объединены группы мышей по соответствующим дозам с учетом результатов наблюдения на животных обоего пола. На основании полученных данных можно заключить, что экстракт коры дуба при внутрибрюшинном его введении белым мышам по классификации К,К. Сидорова (1973) относится к группе малотоксичных веществ.

При внутрибрюшинном введении экстракта коры дуба белым крысам обоего пола ЬЭ5о соответствовала 470,5+31,4 мг/кг, что также позволяет отнести его к группе малотоксичных веществ по классификации К.К. Сидорова (1973). •

При внутрижелудочном введении препарата белым мышам установить ЬОбо не удалось. Препарат вводили животным зондом в желудок в максимально допустимом объеме- раствора (0,5 мл). При этом дозу, равную 468,7 мг/кг (ЬБ50 при внутрибрюшинном введе-

нии белым мышам), увеличивали от 2 до 10 раз. Введение препарата белым мышам в дозе 5148 мг/кг не вызывало гибели животных в течение. 14 суток. При внутрижелудочном введении экстракта коры дуба белым крысам обоего пола также не удалось установить Е-О5о-Препарат вводили зондом в желудок крысам, объем вводимого раствора, допустимого для внутрижелудочного введения им, соответствовал 2 мл. В этом объеме вводили препарат животным в дозах от 1000 до 5500 мг/кг. Однако, летальных исходов не наблюдали ни в одной группе крыс при наблюдении в течение 14 суток.

В результате проведенных исследований также установлено, что на месте аппликаций линимента из экстракта коры дуба не наблюдалось изменений кожи ни в течение всего периода (20 дней), ни после нанесения разрешающей аппликации линимента, т.е. препарат не обладает местнораздражающим, аллергизирующими свойствами в дозах от 2 до 20% ЦОйо.

Данные исследований хронической токсичности экстракта коры дуба на основании изучения структурного состояния внутренних органов, а так=-же результаты проведенной статистической обработки весовых коэффициентов внутренних органов мышей, крыс и собак свидетельствовали об отсутствии выраженных патоморфоло-гических изменений при введении терапевтической дозы (1/10 ЬОэо) экстракта коры дуба в течение 6 месяцев.

2. Оценка гастропротективного влияния экстракта коры дуба на белых крысах. В случаях введения животным бутадиона и экстракта коры дуба в СОЖ число точечных кровоизлияний (3,0±0,24) было достоверно меньше (Р<0,05), чем в контроле (10,0±1,07). Индекс Паулса для точечных кровоизлияний при лечении экстрактом коры дуба равнялся 3,0 при значении такового в контроле, равном 10,0. Средние размеры эрозий .и индекс Паулса для эрозий были также ниже, чем в контроле, при использовании экстракта коры дуба. Такая картина наблюдается при определении размеров полосовидных язв и индекса Паулса для -них. Во всех случаях у животных, получавших наряду с бутадионом экстракт коры дуба,"рельеф СОЖ был менее сглажен, а также в меньшей степени была выражена ее гиперемия. У животных опытных групп, получавших экстракт коры дуба и кверцетин, количество кровоизлияний, эрозий и полосовидных язв на одно животное, а также процент пылевидных кровоизлияний были достоверно меньше, чем в контроле.

Результаты анализа и обработки возникших деструктивных изменений СОЖ у подопытных животных при атофановом повреждении желудка сводились к следующему. У животных, получавших экстракт коры дуба и кверцетин, были в меньшей степени выражены гиперемия и сглаженность рельефа СОЖ, по сравнению с таковыми у животных контрольной группы. Средние размеры эрозий у крыс, получавших экстракт коры дуба и кверцетин, по сравнению с контролем, были достоверно меньше. Средние размеры эрозий у животных опытной группы были более чем в 2 раза меньше, чем у крыс, леченных кверцетином. Среднее число эрозий на 1 животное в опытной группе (0,75±0,18) было достоверно ниже,кчем в контроле (1,5± 0,24). Значение индекса Паулса для эрозий у крыс, леченных экстрактом коры дуба, было значительно меньше, чем в контроле и группе сравнения. Кроме того, на модели атофанового повреждения СОЖ крыс среднее число точечных кровоизлияний на 1 животное в контрольной группе составляло 9,0+0,71 , индекс Паулса равнялся 9,0 , а в опытной группе эти показатели были достоверно меньше, чем в контроле и равнялись соответственно 4,75± 0,77 и 3,56. Подобная картина сохранялась и для'полосовидных язв и индекса Паулса для них.

Результаты исследований по оценке противоязвенной активности экстракта коры дуба на модели язвы желудка по Шею показали, что у крыс, не получавших препараты, в 100 % случаев отмечаются точечные кровоизлияния, а в опытной группе последние встречаются только у 50% животных. Гиперемия, отечность и сглаженность рельефа СОЖ были выражены значительно сильнее у крыс контрольной группы, чем у животных, леченных экстрактом коры дуба и кверцетином. Аналогичная картина наблюдается при подсчетах данных по пылевидным кровоизлияниям. Средний размер эрозий у животных в контрольной группе составлял 49,3±6,97 мм2, а у крыс, получавших кверцетин и экстракт коры дуба, последний равнялся соответственно 22,0± 1,28 и 10,0±0,69 мм2 (Р<0,05). Среднее количество эрозий на 1 животное и индекс Паулса для них были также меньше, чем в контроле, у животных из группы сравнения и опытной группы.

Результаты, полученные на модели повреждения СОЖ крыс введением аспирина, свидетельствовали о том, что применение экстракта коры дуба приводило к достоверному уменьшению средних

размеров эрозий СОЖ у животных опытной группы (15,7±1,43 мм2) по сравнению с контролем (46,67±4,8 мм2). У животных, получавших экстракт коры дуба, среднее число эрозий на 1 животное было меньше, чем в контроле. Среднее число и индекс Паулса для таких деструкции, как полосовидные язвы и точечные кровоизлияния, были также меньше, чем в контроле, у животных опытной группы. Гиперемия и сглаженность рельефа СОЖ были несколько менее выражены у крыс, которым вводили экстракт коры дуба, чем у крыс, получавших кверцетин и только воду. Размеры поверхности СОЖ, пораженной пылевидными кровоизлияниями, у животных контрольной группы были достоверно больше, чем у животных опытной группы и группы сравнения.

Результаты, полученные на модели повреждения СОЖ им-мобилизационным стрессом , показали, что гиперемия, отечность, сглаженность рельефа СОЖ были выражены в меньшей степени у животных опытной группы, чем у животных контрольной группы и группы сравнения. Площадь пораженной пылевидными кровоизлияниями СОЖ у животных, получавших кверцетин и экстракт коры дуба, была меньше, чем в контроле (Р<0,05). Средние размеры эро--зий у крыс опытной группы достигали 66,8±10,5 мм2, что достоверно меньше, чем у крыс контрольной группы (107,5±7,7 мм2); Среднее число эрозий на 1 животное и индекс Паулса для эрозий были также меньше, чем в контроле, у леченных экстрактом коры дуба животных. При применении последнего среднее число точечных кровоизлияний на 1 животное было почти в 2 раза меньше, чем в контроле (разница достоверна).

При внутрижелудочном введении подопытным крысам медицинской желчи при макроскопии желудка на 10 сутки у животных, получавших кверцетин и экстракт коры дуба, и контрольных крыс отмечались следующие изменения слизистой оболочки: отечность, гиперемия, участки щы-аноза, пылевидные кровоизлияния, единичные эрозии, обширные очаги ма>-церации, подслизистые кровоизлияния; в преджелудке - интенсивная инъекция сосудов. В наибольшей степени изменения в желудке крыс были выражены в контрольной группе. У них сильнее проявлялись гиперемия (3,25 усл.ед.), пылевидные кровоизлияния (63,75±3,92 %), были больше размеры и количество эрозий (соответственно 119,81120-,9 мм2 и

2,75±0,18), полосовидных язв (12,56±2,9 мм и 3,0±0,69), количество точечных кровоизлияний (8,0±0,69). У крыс опытной группы и группы сравнения эти показатели достигали меньших величин. Так, у животных, получавших экстракт коры дуба, значительно меньше были размеры эрозий (35,6±3,6 мм2), а также их количество (1,25±0,14). Разница между опытом и контролем достоверна.

На 20 сутки эксперимента у крыс с гастритом, получавших экстракт коры дуба, уменьшились отечность и гиперемия СОЖ, снизилось поражение точечными и пылевидными кровоизлияниями. Значительно меньше, по сравнению с контролем, были размеры эрозий: 0,7+0,17 мм2 при 25,2+0,56 мм2 в контроле. Среднее число эрозий на 1 животное в опытной группе составило 0,5±0,23 при 2,62±0,21 в контроле. Средние размеры полосовидных язв в опытной группе составили 1,8+0,12 мм. Этот же показатель у крыс контрольной группы равнялся 3,21±0,36 мм. Разница между опытом и контролем достоверна.

Темп секреции желудочного сока и содержание в нем пепсина в течение всего эксперимента у крыс с желчным гастритом, получавших экстракт коры дуба, были выше, чем в контроле.

У крыс всех 3 групп на 7 сутки течения ацетатной язвы по Окабэ макроскопически выявлено следующее : СОЖ несколько ги-перемирована, рельеф ее сглажен, вокруг язвенного дефекта сосуды инъецированы. На дне язвенных кратеров желудка у контрольных животных обнаруживаются гнойно-некротические массы. Отмечается нарушение тонуса гладкой мускулатуры желудка, которое проявляется в форме гастростаза и в перерастяжении его стенок.

Средняя площадь язвенных кратеров в стенке желудка (табл.1) у крыс контрольной группы достигала 150,0±16,3 мм2, что почти в 1,5 раза превышало таковую у крыс, получавших кверцетин (104,0±11,0 мм2), и почти в 3 раза превышало таковую у крыс, леченных экстрактом коры дуба (50,6±7,1 мм2).

У животных, получавших экстракт коры дуба, дно язвенного дефекта во всех случаях по сравнению с контролем было очищено от некротических масс. Дно язвы имело сферическую поверхность. Репаративные процессы проявлялись в разрастании тонковолокнистой грануляционной ткани, пронизанной многочисленными капиллярами, которые располагались преимущественно перпендикулярно к

поверхности язвы. Между ними просматривалось значительное количество лейкоцитов, лимфоидных и плазматических клеток, а также молодых фибробластов, дающих положительную реакцию на ЩФ. Кроме разрастания грануляционной ткани, репаративные процессы проявлялись при окраске по ван Гизону фибробластической реакцией в подслизистом слое. В остальном гистологическая картина изменений СОЖ соответствовала контролю.

В покровно-ямочном эпителии и железистом аппарате СОЖ в краях повреждения гистохимически выявляется повышенная по. сравнению с контролем активность СДГ и ЛДГ, что свидетельствует об активации регенераторных процессов в слизистой оболочке.

На 14 сутки эксперимента при применении экстракта коры дуба "и кверцетина отмечены уменьшение сглаженности рельефа СОЖ, отсутствие гнойно-некротических масс в дне кратеров, некоторое повышение тонуса гладкой мускулатуры стенки желудка. Средняя площадь язвенного кратера составила у животных, получавших кверцетин - 47,6±4,9 мм2, экстракт коры дуба - 36,0+5,0 мм2. У животных, которым вводили экстракт коры дуба, края слизистой оболочки смыкались с боковой выпуклостью пролиферирующей грануляционной ткани. Выпуклое дно язвенного дефекта выравнивалось. Ближе к поверхности и на поверхности зрелой грануляционной ткани просматривались группы клеток, дающих окраску на мукоидный секрет, что может свидетельствовать о дифференцировке клеток по типу железистого эпителия.

Таблица 1.

Средняя площадь язвенных кратеров (мм2) у крыс с хронической ацетатной язвой по Окабэ ( М ± т ; п=8 )

Условия опыта Сроки исследований, сутки

7 14 21

Контроль 150,0 ± 16,3 126,0 ± 12,4 81,3 ± 18,3

Кверцетин 104,0 ±11,0* 47,6 ± 4,9* 36,0 ± 9,3

Экстракт коры дуба 50,6 ± 7,1* 36,0 ± 5,0 * 20,6 ± 2,5*

Примечание : *- достоверность по сравнению с контролем, р<0,05.

К 21 суткам исследований у животных группы сравнения средняя площадь язвенного дефекта уменьшилась до 36,0±9,3 мм2, а у животных опытной группы - до 20,6±2,5 мм2. У некоторых крыс, получавших испытуемый препарат, на поверхности язвы можно было наблюдать тонкую соединительнотканную оболочку, дающую слабую ШИК - позитивную реакцию, что свидетельствовало о незначительном содержании мукоидного секрета. Послойная архитектоника, свойственная обычной СОЖ, отсутствовала.

В некоторых случаях обнаруживалась наползание истонченного железистого эпителия на дефект. В строме имело место инфильтрация лейкоцитами, плазматическими и лимфоидными клетками различной интенсивности.

Иногда на поверхности язвы обнаруживался покрывающий эпителиальный пласт, к которому из глубины грануляционной ткани поднимался слой зрелой грубоволокнистой фиброзированной ткани, дающий рубец на поверхности язвы. Цитоплазма фибробластов давала ШИК - положительную реакцию.

У животных, получавших экстракт, коры дуба, темп секреции желудочного сока был достоверно выше во все сроки исследований, чем таковой у крыс контрольной группы. Выраженное снижение общей кислотности и содержания свободной соляной кислоты в желудочном соке крыс контрольной группы отмечается во все сроки исследований. У крыс опытной группы на 7 и 14 сутки эксперимента содержание свободной соляной кислоты в желудочном соке находится примерно на одном уровне и увеличивается к 21 суткам, т.е. имеется тенденция к восстановлению кислотообразующей функции желудка в этой группе. Содержание пепсина в желудочном соке у животных, получавших экстракт коры дуба, было достоверно выше, чем в контроле, во все сроки исследований.

В целом, вышеизложенные результаты исследований свидетельствуют о том, что на указанных моделях повреждения СОЖ экстракт коры дуба предотвращает угнетение кислото- и ферментоо-бразующей функций желудка и оказывает антиульцерогенное действие.

Проведенные патоморфологические исследования свидетельствуют о значительном фармакотерапевтическом влиянии экстракта коры дуба при экспериментальной язве 'желудка у белых крыс. На фоне введения препарата в использованной'дозе наблюдали актива-

цию регенераторных процессов, ускорение инволюции грубых дест-рукций и раннее восстановление морфофункционального состояния желудка.

У кроликов с хронической ацетатной язвой желудка, полученной по методу Окабэ, дана электрофизиологическая оценка влияния экстракта ко—ры дуба путем регистрации электрических потенциалов желудка. Установлено, что язвенное повреждение стенки желудка кроликов сопровождается угнетением биоэлектрической активности этого органа.

Введение животным экстракта коры дуба оказывало стимулирующее влияние на восстановление электрической активности желудка в процессе заживления язвенного дефекта в стенке органа (табл. 2). Выявленный нами факт свидетельствует о потенциальной возможности электрогастрографии для оценки тяжести патологического состояния животных при язвенном повреждении желудка и фармакотерапевтичеекой эффективности испытуемых лекарственных средств.

Таблица 2.

Показатели электрической активности желудка у кроликов с хронической ацетатной язвой желудка по Окабэ (М + т; п=!7)

Сроки, Условие П о к азатели элект о г р а м м

сут. опыта ОУБА ЧИ СВА

(усл. сд.) в мин. (мВ)

Интактный контроль 114,7 ± 3,8 2,1 ± 0,05 1,0 ± 0,04

5-7 Контроль 75,4 ± 4,9 1,44 + 0,04 0,99 ± 0,06

Экстракт коры дуба 85,8 ± 3,4* 1,71 ± 0,03 * 1,02 ± 0,04

12-14 Контроль 40.8 ± 3,9 1,27 ± 0,03 0,7 ± 0,03

Экстракт коры дуба 83,44 ± 2,84 * 1,85 + 0,08 * 0,91 ± 0,04 *

19-21 Контроль 64,3 ± 3,8 1,45 ±0,02 ' 0.93 ± 0,05

Экстракт коры дуба 124,4 ± 3,46 * 1,36 ± 0,03 1,57 +0,04 *

Примечание: *- достоверность по сравнению с контролем, р <

0,0 5.

3. Оценка ранозаживляющего действия экстракта коры дуба.

Анализ микро- и макроскопических изменений в ране у животных исследуемых групп позволяет говорить о том, что во всех случаях заживление дефектов кожи на модели плоскостной раны происходит посредством вторичного натяжения с образованием рубца. В случаях применения линимента на основе экстракта коры дуба у подопытных животных раньше по сравнению с контролем (нелеченные животные) и животными, леченными мазью Вишневского, происходило формирование зрелой грануляционной ткани и превращение ее в рубцовую ткань, а также быстрее шел процесс эпителизации раневой поверхности.

Данным гистологического анализа раневых кожно-мышечных дефектов соответствовали и результаты тензиометрии. В частности, испытуемый препарат способствовал образованию к 8 суткам опытов рубца, более прочного, чем в контроле. Под влиянием линимента из экстракта коры дуба при раневых повреждениях кожи отмечено ускорение динамики сокращения площади ран по срокам (см. рис.), что также обусловлено пролиферацией соединительнотканных элементов, т.е. более интенсивным развитием грануляционной ткали и созреванием рубца по сравнению с контролем.

СМ" 4,00

3,00

2,00

Г,СО

0,00

21

3 Контроль

□Мазь Вишневского

03% Линимент экстракта ксры дуба

СуПчИ

Рис. Динамика изменеиий площади ран у крыс.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Несомненно, гастропротективное и ранозаживляющее действия экстракта коры дуба и линимента на его основе следует объяснить противовоспалительным, стимулирующим регенерацию тканей и адсорбирующим эффектами в связи с наличием в коре дуба биологически активных веществ (дубильные вещества, кумарины, катехи-ны, галловая кислота, витамины, полифенолы и др.). В ряду последних заслуживают внимания полифенольные соединения, широкий спектр фармакологического действия которых вытекает из важной биологической роли* их в биохимических процессах в живой ткани". Биологическая роль полифенольных комплексов сводится и к участию их в тканевом дыхании, усилению неспецифической сопротивляемости организма, тонизирующему действию, стимуляции регене-

рации, пролиферации клеток и т.д.(Г.П. Березовская, 1970; Л.С. Евсеенко, 1968; Колла В.Э.,'Билич ПЛ.,1978 ).

Практически все фенольные соединения обладают антиокислительной активностью. Антиоксидантные свойства отмечены у фла-воноида кверцетина, галловой кислоты и ее производных, их наличие тормозит развитие свободнорадикальных окислительных реакций, что является положительным фактором в восстановлении гоме-остаза организма и регенерации поврежденных органов и тканей.

В наших опытах при введении белым крысам с повреждением желудка после иммобилизационного стресса экстракта коры дуба содержание малонового диальдегида в гомогенате стенки желудка равнялось 3,4 ±0,11 нмоль/г ткани при значении его в контроле, равном 4,0 ±0,12 нмоль/г ткани желудка. Разница между опытом и контролем была достоверна (р<0,05). Этот факт свидетельствует в целом об ингибирующем влиянии экстракта коры дуба на перикис-ное окисление липидов и его мембраностабилизирующем эффекте, обусловливающих стимуляцию регенераторных процессов в поврежденных органах и тканях.

Фенольные соединения экстракта коры дуба, поступающие в организм животных per os, оказывают местное воздействие на слизистую оболочку пищеварительного тракта и общее резорбтивное воздействие на его моторику, секреторную и всасывательную функции. Вяжущее действие дубильных веществ обусловлено их способностью осаждать белки с образованием плотных альбуминатов. При нанесении на раневую поверхность они вызывают частичное свертывание белков слизи или раневого экссудата, что приводит к образованию пленки, защищающей от раздражения нервные окончания подлежащих тканей, при этом уменьшаются болевые ощущения.

Содержащийся в экстракте коры дуба комплекс биологически активных веществ вызывает уменьшение воспалительной реакции, ослабляет раздражение СОЖ и раневой поверхности кожи, способствует ликвидации поверхностных эрозий и изъязвлений, что обусловливает гастропротективный и ранозаживляющий эффекты".

выводы

1. Экстракт коры дуба - новое лекарственное средство в виде легкорастворимого порошка, приготовленного по ресурсосберегающей технологии, не обладает при внутрижелудочном способе введения острой и хронической токсичностью, что позволяет отнести его к группе безвредных веществ по общепринятой классификации.

2. Экстракт коры дуба оказывает выраженное гастропротек-тивное действие на экспериментальных моделях хронической и острых язв желудка, желчного гастрита у белых крыс и кроликов :

а) экстракт коры дуба в использованной дозе при экспериментальной язве желудка у крыс способствовал активации регенераторных процессов, ускорению инволюции грубых деструкций и раннему восстановлению морфологического состояния стенки желудка ;

б) изучаемый препарат при- различных повреждениях СОЖ у крыс уменьшает степень угнетения кислото- и ферментооб-разующей функций и способствует более ускоренному их восстановлению.

3. При хронической ацетатной язве желудка у кроликов, вызванной по методу Окабэ, выявлено угнетение.биоэлектрической активности желудка.

4. Экстракт коры дуба при введении кроликам с хронической ацетатной язвой обеспечивает более ускоренное, чем в контроле, восстановление показателей электрогастрограмм.

5. Электрогастрография является объективным методом оценки функционального состояния желудка и может быть использована для диагностики и лечения патологии желудка у животных.

6. Линимент из экстракта коры дуба ускоряет заживление раневых повреждений кожи, обусловливая более интенсивное развитие грануляционной ткани и созревание рубца, а также более раннюю эпителизацию раневого дефекта.

7. Следует предположить, что выявленные гастропротектив-ный и ранозаживляющий эффекты экстракта коры дуба и его линимента обусловлены преимущественным влиянием входящих в их состав полифенольных соединений, обладающих антиоксидантными и антирадикальными свойствами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Выявленный нами в эксперименте на животных факт стимулирующего влияния экстракта коры дуба на восстановительные процессы в слизистой оболочке при язвенных повреждениях желудка позволяет рекомендовать его для профилактики ,й лечения гастритов и язв желудка у сельскохозяйственных животных.

2. Установленная фармакотерапевтическая эффективность линимента из экстракта коры дуба при раневых повреждениях кожи дает основание предложить его для внедрения в практику.

3. Полученные данные свидетельствуют о том, что метод регистрации электрических биопотенциалов желудка (электрогастрография) у животных может быть использована для оценки лекарственной терапии, в частности, влияния фитопрепаратов при патологических состояниях желудка у лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Работы, опубликованные по теме диссертации:

1. Антиульцерогенное влияние экстракта коры дуба при экспериментальной язве желудка у кроликов / / Экологическая патология и ее фармакокоррекция. - Чита, 1991. - С.74.

2. Линимент из экстракта коры дуба как стимулятор заживления ран кожи у крыс // Труды Бурятского СХИ. Ветеринария,- Улан-Удэ, 1992. - С. 111-114.

3. Биоэлектрическая активность органов как объективный показатель состояния их функций // Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины. Материалы региональной научно-практической конференции молодых ученых. - Иркутск, 1995. - С. 205-206.

4. Гастропротективное действие экстракта коры дуба // Тезисы докладов Всероссийской научной конференции "Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники.- Чита, 1995. - С.159-160.

5. Оценка гастропротективного действия экстракта коры дуба // Сборник научных трудов ВСГТУ. Серия: Химия биологически активных веществ. - Улан-Удэ, 1995. - С.88-95.