Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Функционально-метаболический статус и его коррекция при острой печёночной недостаточности у животных

РГБ ОД

1 о дп? и®

Министерство образования Российской Федерации

Московский государственный университет прикладной биотехнологии

На правах рукописи

Беляков Иван Максимович

Функционально - метаболический статус и его коррекция при острой печёночной недостаточности у животных.

16.00.02 - патология, онкология, морфология животных

Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора ветеринарных наук.

Москва 2000

Работа выполнена на Кафедре незаразных болезней животных Московского государственного университета прикладной биотехнологии Министерства образования и в Лаборатории интенсивной печёночной терапии Центрального научно-исследовательского института гастроэнтерологии Министерства здравоохранения РФ.

Официальные оппоненты:

- доктор ветеринарных наук профессор Савойский А.Г.

- доктор ветеринарных наук профессор Брагин Г.И.

- доктор биологических наук Дорожкин В.И.

Ведущая организация:

Российский университет дружбы народов.

Защита диссертации состоится «льлА 2000 г. в /у часов на заседании диссертационного совета Д 063.46.03 при Московском государственном университете прикладной биотехнологии по адресу: Москва, 109316. ул. Талалихина, 33. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного университета прикладной биотехнологии.

Автореферат разослан «%$> {.М/С^Э^И— 2000 г.

Ученный секретарь диссертационного

канд. вет. паук, доцент ^—Серегин И.Г.

I. Общая характеристика работы

1.1. Актуальность темы. Понимание природы любого патологического процесса становится возможный при ясном представлении биохимических, анатомо-морфологических и динамических функциональных связей его с клинико-физиологическим состоянием организма как единого целого. При этом одним из важнейших аспектов является выяснение основных струкгурно-функциональных параметров пораженной ткани, органа или системы, играющих ведущую роль в патогенезе болезни. В этом отношении важнейшее значение приобретает оценка морфо- функционального состояния печени как основного «барьерного» органа, ответственного за поддержание физиологических параметров гомеосгаза. Печень ответственна за переработку поступающих в организм метаболитов, синтез большинства белков плазмы крови, прежде всего альбуминов, фибриногена, протромбина, некоторых фракций глобулинов, многих ферментных систем; непосредственно участвует в уг-леводно-липидном, витаминном обмене, пищеварении. Динамика, последовательность, качественные и количественные параметры, пределы их изменений при различных патологических унитарных, полиэтиологигческих, первичных и вторичных, острых и хронических, органных и системных нарушениях всегда имеют важнейшее или определяющее значение в обосновании лечебных, профилактических и прогностических заключений.

Различным аспектам этих проблем, в каждом случае носящих свои индивидуальные черты и особенности, посвящено много работ ведущих специалистов как в нашей стране, так и за рубежом (Аруин Л. И. и др., 1987; Блюгер А.Ф., 1975; Гальперин Э.И. и др., 1978; Григорьев П.Я., Яковенко Э.П., 1990; Гулак П.В. и др., 1985; Жаров А.В. и др., 1979, 1995, 1996; Кольцов П.А., Шатихин А.И., 1994; Логинов А.С. и др., 1984, 1989, 1990; Тармакова С.С., 1999; Лонша-коваКС., 1999; Петров Р.В., 1982; Рысс Е.С., 1983; Селезнев С. А., 1971; Тареев Е.М., 1976; Уша Б.В., 1979, 1993; Таланов Г.А., Хме-левский Б.Н., 1991; Хазанов А.И.., 1988; Шайхаманов М.Х., 1992; Cugler R., 1981; Howard R., Dersch L„ 1968; Кате H.S., 1980; Kolb E„ 1979; Seglen P. 0., 1976; Vido et el., 1980 и др.).

Основополагающие по отдельным аспектам проблемы работы этих и других авторов внесли большой вклад как в понимание закономерностей патогенеза полиэтиологических печеночных наруше-

нии, создающих методологическую и методическую основу для лечебно-профилактических и прогностических обоснований, так и в общую концепцию патологии в целом. Вместе с тем, расширение и углубление представлений о роли печени в патогенезе болезней, выработке качественных и количественных критериев оценки ее мор-фо- функциональных показателей в динамике представляет и на современном уровне знаний трудную, многоплановую, но крайне актуальную задачу. До настоящего времени, например, дискуссионным остается вопрос о клинической идентификации критериев острой печеночной недостаточности и «печеночной комы» как одной из трех биологических причин, летальности; не сформулирована в законченном виде как терминологическая, так и фактическая сущность этих понятий, по своей сути обычно выходящих далеко за границы представлений об органной патологии. Исходя из этого разработка принципов, методов и способов их идентификации и коррекции остаются крайне актуальной проблемой клинической ветеринарии.

1. 2. Цела и задача исследований. Антропогенные и техногенные нарушения экологии и экосистем в целом, широкое и нередко неаргументированное применение средств химического синтеза (лекарственные вещества, гербициды, ФОС, ХОС, дефолианты, ан-тиоксиданты); плесени, афлотоксины, соли тяжелых металлов и др. в кормах для животных, использование стимуляторов роста и продуктивности являются обычной причиной отравлений продуктивных и пользовательных животных. Острые и нередко массовые отравления животных в конечном итоге приводят если не к смерти, то обычно к необратимым изменениям паренхиматозных органов, прежде всего печени.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

♦ изучить совокупность и последовательность метаболических проявлений и функционально-морфологических нарушений в динамике печеночной недостаточности;

♦ проанализировать и обобщить синдромный комплекс полиэтиологической острой печеночной недостаточности и ре-ципрокности гепато- линеальной системы при этих состояниях;

♦ изучить параметры морфологической сохранности и функциональной активности нативных интактных и лиофилизи-рованных гепатоцитов, спленоцитов и панкреацитов;

♦ получить средства и апробировать возможности транзи-торной патогенетической коррекции ОПН- синдрома с использованием аллогенных и ксеногенных шггактных потенцированных нативных и лиофшшзированных гепатоцитов, панкреацитов и спленоцитов в монокультуре и физиологически адекватных композициях при энтеральном и парентеральном их применении;

♦ сформулировать патогномоничные качественные и количественные критерии патогенеза острой печеночной недостаточности;

♦ определшъ клинические параметры завершения репара-тивных процессов при острой печеночной недостаточности.

1.3. Практическая ценность работы состоит в разработке новых средств и методов гепатопротективной транзиторной коррекции функциональной активности гепато-линеальной системы при полиэтиологическом ОПН- синдроме в системе комплексной терапии животных, включая терминальные состояния. Препараты обладают ростспшулирующим действием при энтеральном использовании для здоровых животных.

1.4. Апробация материалов исследований

♦ Результаты исследований в 1992-99гг. ежегодно рассматривались на Ученом совете веггеринарно-санитарного факультета МГУПБ;

♦ Доложены на:

О Международной научно-практической конференции по ветеринарной медицине мелких домашних животных (Москва, 1994) ; препараты «Гепатовит» и «Гепатоцель» экспонировались на выставке научно-технических достижений конференции;

О Международной научной конференции «Прикладная биотехнология на пороге XXI века» (Москва, 1995); препараты «Гесплен» и «Гепатоцель» экспонировались на выставке научно-технических достижений конференции;

О Международной научно-технической конференции «Актуальные проблемы ветеринарно-санигарного контроля сельскохозяйственной продукции» (Москва, 1995); О Международной научно-технической конференции «Пшца, экология, человек» (Москва, 1995); препарат

«Гесплен» экспонирован на выставке научно-технических достижений конференции; О ХХШ Научной сессии ЦНИИ Гастроэнтерологии Минздрава РФ (Москва, 1996);

О Ш Международной научно-технической конференции «Пища, экология, человек» (Москва, 1999).

♦ Материалы исследований экспонированы на:

О ВДНХ СССР, павильон «Ветеринария», удостоены Бронзовой медали (удостоверение № 44946, по Постановлению № 651- Н);

О ВВЦ РФ павильон «Животноводство», 1996 г.; О Международной выставке ветеринарной медицины, средств ухода и питания для домашних и сельскохозяйственных животных «Анимед- 96» (Москва, ВВЦ, 1996 г.).

♦ Опубликованы в центральной периодической печати (Ж. Сельскохозяйственная биология, 1994, 2, с. 125-136; 1998, 4, с. 14-23; Ж, Ветеринария, 1999, 1, с. 47-48; Ж. Аграрная наука, 1999, 3, с. 25-27) , в ряде публикаций региональных конференций и симпозиумов (поименованы в списке литературы к автореферату).

Президиумом УМС Минздрава РФ подтверждена успешная апробация использования ксеногенных гепатоцитов при печеночной недостаточности у людей в ЦНИИ Гастроэнтерологии Минздрава РФ (Акт о внедрении от 12. 04. 1993).

1.5. Реализация результатов исследований

♦ Предложена технология получения интакгных потенцированных наганных и лиофилизированных гепатоцитов, пан-креацитов, спленоцитов и их физиологически адекватных композиций для транзигорной коррекции острой печеночной недостаточности.

♦ Разработан «Способ консервирования интакгных клеток печени» (Решение ВНИИГПЭ от 25.05.1995 № 93025259 (025610) о выдаче патента на изобретение);

♦ ГУВ МСХиП РФ 08.06.1993 г. утверждено «Временное наставление по применению «Гепатоцеля» для собак в порядке широкого производственного опыта» (Per. № 000116011) и Технические условия (ТУ) на гепатоцель (№ 9332-001206847-93).

♦ ГУВ МСХиП РФ 25.05.1993 г. утверждено «Временное наставление по применению препарата «Гепатовит» для лечения животных с синдромом печеночной недостаточности» (№ 000199-011) и Технические условия (ТУ) к нему (№ 9332002-200847-94);

♦ Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ 26.04.1996 г. утверждено «Временное наставление по применению «Гесплена» в ветеринарии» (Per. № 13-5-2/595) и Технические условия (ТУ) к нему.

♦ Материалы по применению разработанных препаратов вошли в справочные руководства «Болезни собак» М., Нива России, 1996, 350с.; «Пропедевтика внутренних незаразных болезней животных», М., Квадрат-С, 1998, 477 е.; «Лечим собаку. Справочная книга», М., Евразийский регион, 1988, 221 е.; «Общая и клиническая ветеринарная рецептура», М, Колос, 1998,551 е.; «Кошкав вашем доме», М., Нива России, 1999, 225 е.; «Здоровье вашей собаки. Справочник» , М., Нива России, 1999, часть П, 224 е.; изданы в виде методических указаний «Комплексная терапия при полиэтиологическом синдроме печеночной недостаточности животных», М., МГАПБ, 1993,36 с.

Результаты исследований используются согласно :

1) «Договора о двустороннем научно-техническом сотрудничестве между МГУПБ и ветеринарно-медицинского факультета Фракийского университета» Москва, МГУПБ; Болгария, Стара Загора, 26.01.1999 г.;

2) Договоров о двустороннем научно-техническом сотрудничестве между ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии (ВНИИСХБ) и Московским государственным университетом прикладной биотехнологии (МГУПБ), Москва, № 712 от 20.03.1997 г. и № 712 от 05.01.1998 г. по проблеме «Разработка эффективного воспроизводимого безинъекцион-ного рецегггорноопосредованного транспорта генетического материала в зиготы и ранние эмбрионы сельскохозяйственных животных с целью получения животных биореактивов» и «Дополнительного соглашения о научно-техническом сотрудничестве» от 01.03.1999 г. к Договору № 712 от 5.01.1998 г. на 1999 год.

1. б. Публикации. Материалы исследований опубликованы в монографиях, учебниках, справочных руководствах, нормативных документах, методических указаниях, методических рекомендациях, статьях в центральной периодической печати, материалах Международных и Всероссийских конференций и симпозиумов. Автором опубликовано более 160 научных работ, в т. ч. 45 по теме диссертации.

1. 7. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 4 страницах и состоит из введения, обзора отечественной и иностранной литературы по проблеме, изложения материалов и методов исследования; результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и предложений, списка литературы из 297 источников, в том числе 205 отечественных и 92 иностранных. Работа содержит 30 таблиц и 8 рисунков.

1.8. На защиту выносятся следующие положения:

1. Патогенез клинического, морфологического, функционального и метаболического статуса в динамике острой печеночной недостаточности.

2. Синдромальные критерии патогенеза гепато-линеальной системы.

3. Адаптивная и органопротекгивная стимуляция антитоксической функции печени при дисфункции пищеварения.

2. Собственные исследования.

2. 1. Материал и методы исследовании. Исследования выполнены на Кафедре незаразных болезней животных Московского государственного университета прикладной биотехнологии, в Лаборатории интенсивной печеночной терапии Центрального научно-исследовательского института гастроэнтерологии Минздрава Р.Ф., АОЗТ "Микомс", АОЗТ 'Тамп" (Москва), Талдомском, Воскресенском, Раменском мясокомбинатах (Московская область), Ассоциации крестьянских хозяйств "Ильинское" и "Приволжское" Тверской области; АКХ им. Цаликовой Северно-Осетинской АР, с-зе "Емецкий" Архангельской области, свиноводческих комбинатах "Губкинский" Белгородской области и "Индустриальный" Краснодарского края.

Лабораторные и стационарные клинические, биохимические и морфологические исследования проводились на базе МГУПБ и ЦНИИ Гастроэнтерологии МЗ РСФСР; клиническая медицинская апробация гепатопротективного действия полученных препаратов

проводилась в Отделении острых эндотоксихозов НИИ СП им. Н.В. Склифосовского (акад. АМН Мусселиус С.Г.) В опытах использовано 126 белых мышей, 90 крыс линии Вистар, 87 щенков беспородных в возрасте 4-6 месяцев, 49 поросят- отьемышей, 98 подсвинков с живой массой 82-86 кг.

В производственных условиях экспериментальные исследования проведены на 73 подсвинках, 129 телятах молозивного возраста и 60 телятах 3-х месячного возраста.

Материалы исследований обрабатывались методами вариационной статистики по Стьденту с использованием компьютерных программ статистической обработки результатов лабораторных исследований.

Клинические исследования проводились общепринятыми методами (температура, пульс, дыхание, габитус; состояние кожи и слизистых; лимфатической, сердечно-сосудистой, дыхательной, пищеварительной, мочевой и нервной систем).

Общеклинические гематологические исследования включали определение количества гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, подсчет лейкограмм, измерение СОЭ, гематокритной величины.

Биохимические исследования крови, как правило, включали определение содержания й сыворотке крови общего белка рефрактометрически на приборе PK (Польша) и его фракций (на полиакри-ламидном геле); резервной щелочности плазмы (по Ван-Сляйку); глюкозы крови с биотестом Лахема (Прага), 'Тлюкоза ферметатив-но" № 253438-77 6380 ПИД-50-839-90; остаточного азота сыворотки (по Аселю); мочевины с биотесгом Лахема "Мочевина-150" № 2534388773880 ПНД 50-364-89; общего кальция сыворотки (по Вичеву и Коракашову); неорганического фосфора (по Ивановскому); активности щелочной фосфатазы сыворотки ( по Боданскому в модификации автора); ретинола сыворотки по Бесси в модификации A.A. Анисовой, ретинола печени методом омыления с пирогаллолом, диспротеинемию определяли с биотестом Лахема 'Тимоловая проба-150" № 253348774130-89, сиаловые кислоты в сыворотке крови (по Свеннерхольму).

Активность соматических и цитоплазматических ферментов определялась с биотесгами серии № 2534387384 ПНД-50-367-89; ACT и АЛТ- № 25343877240 ПНД-50-370-89. На анализаторе Ciba Coming Express-550 (Великобритания) определялись мочевина, хо-

лесгерин, креатин, триглицериды, активность лакгатдегидрогеназы, биллирубин, натрий сыворотки и калий крови.

В моче определяли белок (по сульфасалициловой пробе), сахара (по Гайнесу), ацетоновые тела (по Лестрале), билирубин (по Га-рисону- Фуше), уробилиноген (по Богомолову), желчные кислоты (по Гай -^Крафту), кровь и кровянные пигменты (по Колло), инди-кан (по Яффе).

Детрит исследовали на стеаторрею, крахмал, скрытую кровь, граппозитивность и грамнегативность микробного пейзажа

Щенки и поросята-доноры паренхиматозных органов до экстирпации содержались 10-12 часов на голодной даете, после чего подвергались премедикации: подкожно вводили смесь, состоящую из 1,0 мл фармакопейного раствора проксидола, 1,0 мл 1%-ного раствора атропина и 0,5 мл димедрола на 10 кг живой массы. Через 10-15 мин после инъекции непосредственно в операционной подкожно вводили 4,5-5 мл колипсовета и 1-2 мл 2%-ного раствора гексенала. Глубину наркоза определяли по исчезновению мигательного рефлекса, психомоторных реакций и повороту глазного яблока во внутренний угол глазной щели. После наступления наркоза с соблюдением хирургической техники асептики и антисептики извлекали печень, селезенку и поджелудочную железу. Визуальную оценку состояния органов осуществляли по размеру, цвету, форме, консистенции, состоянию капсулы, гомогенности. В условиях мясокомбинатов органы извлекали после оглушения животных с соблюдением асептики и антисептики, без премедикации.

Донорские органы незамедлительно подвергались обработке по разработанной с авторским участием технологии.

Получение ингактных гепатоцитов, панкреацитов и спленоци-тов проводи.™ по принципу Берри и Френда, но по авторской технологии. После экстирпации донорских органов в условиях хирургической операционной их сразу помещали в буферный раствор Хенкса с хлоргексидином. Если органы получали в условиях мясокомбината, их помешали в чемодан-холодильник внутрь двустенного полихлорвинилового сосуда, между стенками которого имелся лед. Органы незамедлительно доставлялись в операционную. В стерильных условиях органы подвергались катетеризации и ретроградной перфузии (печени-после перевязки желчных протоков и удаления желчного пузыря). После отмывки органов от крови буферным раствором Хенкса в них вводились ферменты из расчета 20 мг гиа-

луронидазы, 1 мг коллаГеназы на 100,0 мл и в термостатных условиях (+ 37° С), при непрерывном помешивании (100-120 об/мин) проводили оксигенацию в течете 10 мин. После этого проводили скарификацию и повторную ферментную обработку и оксигенацию в течение 20. мин., органы диспергировали и проводили третью обработку в течение 10 мин. Полученную суспензию фильтровали сначала через металлический (с диаметром пор 100 мкм), затем капроновый фильтр (с диамелром пор 40 мкм). В фильтрат для отмывки клеток вносили буферный раствор Хенкса из расчета 1:3, центрифугировали при 1000 об/мин 4 мин., сливали надосадочную жидкость, в остаток вносили питательную среду 199 и помещали в холодильник при 0... +4° С до консервации.

Морфологическую сохранность паренхиматозных клеток исследовали путем световой и фазово-контрастной микроскопии после внесения 0,2%-ного раствора трипанблау. Консервация осуществлялась методами сублимационной и распылительной сушки.

Сублимация проводилась на аппарате УТ-2 (Германия) при вакууме 50-100 мм рт. ст. в течение 24-48 часов при -50° С и температуре досушивания не выше 25°С, а на отечественной установке ТГ-50 при -40° С и при досушивании не выше 25°С. В качестве крио-протектора использовали среду 199. При этих данных адгезивный эффект был минимальным.

Распылительная сушка велась на установке "Мобильный монитор" при температуре на входе в сушильную камеру от 90-100° С до 100-120° С, а на выходе от 45-50° С до 35-45° С. В качестве крио-протектора использовалась также среда 199 в соотношении 1:5.

Ампульная расфасовка проводилась по ГОСТ 64-2-485 (стеклянные ампулы) и по ТУ 49961 в цефлен (желатиновые капсу-. лы). Бутылирование сыпучих форм и флаконирование проводили в ТОО "Фермент" (г. Москва).

Полученные препараты качественно оценивались по общепринятой методике (внешний вид, цвет, запах, влажность, стерильность, объемная масса, дисперсность). Контроль вакуума в ампулах и флаконах проводили по ГОСТ 280083-89 (ст. СЭВ 6278-88): «Препараты биологические. Методы контроля вакуума в ампулах и флаконах». Дисперсность порошков определялась на цифровом анализаторе Leiiz TAS Plus (Германия). Влажность препаратов определяли по ГОСТ 24061-89 (СТ СЭВ 6279-89) «Препараты биологические сухие. Метод определения влажности».

Функциональная активность определялась фотометрически в разведенных средой 199 пробах по активности синтеза белка, мочевины, скорости эндогенного дыхания, синтеза глюкозы. Детоксика-ционную способность оценивали по поглощению и выделению бромсульфапеина.

При определении белково-синтетической функции интакгные клетки в среде 199 инкубировали в течение 2 часов при +37° С. Контроль проводили через 30, 60, 90 и 120 минут. Через 30 мин в надосадочной жидкости интакгных нативных клеток обнаруживалось 3,78±0,19 мг% белка, а в надосадочной жидкости лиофилиза-тов 3,29±0,33 мг%. Через 2 часа эти показатели увеличивались соответственно до 5,1±0,31 мг% и4,41±0,24 мг%.

Мочевинообразовательную активность растворенных в среде 199 клеток определяли с реактивом «Лахема-50» в качестве источника аммония. Через 30 мин. содержание мочевины в надосадочной жидкости достигало б,43±1,8 ммоль/л и продолжало расти в течение 2,5 часов. Активность нативных субстратов была выше, чем в лио-филизатах ( около 3,1%).

Активность глюкогенеза определяли с реактивом фирмы «Лахема» «Глюкоза ферментативно» при инкубации субстрата нативных и лиофилизированных клеток в среде 199 при +37° С в течение 2-х часов. Через 30 мин. содержание глюкозы в надосадочной жидкости достигало 119,б±2,7 ммоль/л и 97,3±3,1 ммоль/л, увеличивалось к концу инкубации до 131±1,9 ммоль/л и 119,7±2,3 ммоль/л соответственно.

Детоксикационная функция исследовалась по поглощению и выделению бромсульфапеина в параллельных (контроль) пробах при +37° С в течение 2,5 часов четырехкратно. Через 0,5 часа содержание бромсульфапеина снижалось на 0,98 ед. в субстрате интахтных нативных клеток и на 0,59 ед. - в лиофилизате; к концу инкубации показатели составили 1,99 ед. и 1,33 ед. соответственно.

Скорость эндогенного дыхания определяли поляриметрически до и после стимуляции дыхания НАДН (серия 30314 фирмы Serva, при +30° С). В среде 199 в течение 30 мин. субстраты нативных и лиофилизированных клеток инкубировали, после чего на поляро-графе ПГ-7 измеряли скорость эндогенного дыхания, которая соответственно составляла 2,1± 0,4 нмоль/мин и 1,4±0,7 нмоль/мин. Добавление'в субстрат никотинамидадениннуклеотида (НАДН) согласно стандартной методике скорость эндогенного дыхания в суб-

страте нативных клеток изменялось с 2,1 ±0,4 до 2,27 нмоль/мин., а в лиофилизате - с 1,4±0,7 до 1,51 ±0,3 нмоль/мин. В контроле она была близкой к нулевой.

Токсикологические исследования проводились в соответствии с «Требованиями к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ» (Методические рекомендации Фармакологического совета ГУВ МСХ РФ, М., 1986) на белых мышах живой массой 18-20 г и крысах линии «Вистар» живой массой 180-200 г.

При испытании препаратов на отсутствие у них антимикробных свойств использовали «Сухую питательную среду для контроля стерильности» (тиогликолевую) ТУ-42-14 № 161-79 и жидкую среду Сабуро. В две пробирки со средой Сабуро вносили по I мл суспензии клеток в изотоническом растворе; затем в третью пробирку вносили по 0,1 мл микробной взвеси тест- штаммов St aureus 6538 Р, Е. coli АТЕС 259222, Вас. subtilis 885-653. Посевы на тиогликолевой среде инкубировали при 30-35° С 48 часов, на среде Сабуро при 20-25° С 72 часа. Все пробы давали рост, свидетельствуя об отсутствии антимикробных свойств субстратов.

Стерильность препаратов испытывали по ГОСТ 28085-89 «Препараты биологические. Методы бактериологического контроля стерильности». Испытывали на выявление жизнеспособности бактерий семейства Enterobacteriaceae видов Pseudomonas aeruginosa и St aureus (наличие которых в стерильных лекарственных веществах не допускается), а также Candida albicans. Рост на питательных средах отсутствовал.

Безвредность препаратов испытывалась на белых мышах. Пробы, растворенные в буферной среде Хенкса (по 3 ампулы из серии), вводили подкожно в дозе 0,5 мл. В течение 7 суток все животные не проявили признаков патологии.

Предварительные исследования гепатопротективного действия препаратов проводились на беспородных щенках 4-5 месячного возраста и поросятах- отьемышах на фоне экспериментального моделирования острой печеночной недостаточности путем подкожного введения четыреххлористого углерода трехкратно в течение 24 часов в дозе 0,6 мл/кг трое суток.

2. 2. Разработка средств и методов гепатопротектнвпоя коррекция острой печеночной недостаточности н нх лаборатор-но- клиническая апробация. На первом этапе исследований была

поставлена задача разработать технологию получения интакгных нативных и лиофилизированных паренхиматозных клеток, их скрининга, получение фармакологических форм препаратов, их дозирования и изучить гепатопротекгивное действие аллогенных и ксено-генных интактных нативных гепатоцитов при острой печеночной недостаточности. Под научным руководством чл. - корр. РАСХН проф. Уша Б. В. разработана технология получения изолированных гепатоцитов, на что получено решение ВГНИИГПЭ о выдаче патента на изобретение «Способ консервации интакгных клеток печени» № 93025259 (025610) от 28.05.1995, в соавторстве.

Департаментом ветеринарии МСХиП РФ утверждены «Временное наставление по применению гепатоцеля для собак в порядке широкого производственного опыта» (№ 9-5-2/78 от

08.06.1993), «Технические условия на опытную партию препарата гепатоцель» (№ 9332-001-206847-95-93); «Временное наставление по применению препарата гепатовиг» (№ 000199-011 от

25.05.1994) и «Технические условия на опытную партию препарата гепатовиг» (№ 9332-002-206847-99) . Научный руководитель чл. -корр. РАСХН проф. Уша Б. В., ответственный исполнитель доц., ст. н. сотр. Беляков И. М.

Были получены сыпучие, флаконированные и ампульные комплексные препараты гесплена на основе аллогенных и ксеногенных интакгных лиофилизированных гепатоцитов и спленоцитов, одобренные Фармакологическим советом Департамента ветеринарии МСХиП РФ (№ ФС/ДВ-144 от 22.12.1995). Департаментом ветеринарии МСХиП РФ утверждены «Временное наставление по применению гесплена в ветеринарии» (№ 13-5-2/595 от 26.04.1996), «Технические условия на препарат гесплен» (30.04.1996) и проведены испытания гепатопротективного эффекта комплексных препаратов на основе аллогенных и ксеногенных интакгных нативных и лиофилизированных гепатоцитов, спленоцитов и панкреацитов в разработанных авторами композициях и технических условиях, обеспечивающих максимальное исключение адгезивно- аггрегаци-онных реакций при минимальной лизосомальной активности; морфологическую и биохимическую сохранность нативных интакгных клеток до 85-90% в течение 36-48 часов в субстрате при +4° С, что обеспечивало достаточную техническую возможность получения фармакологических препаратов в лиофшшзированной сыпучей, флаконированной, ампульной и капсульной формах.

Лабораторно-клинические исследования гепатопротективного эффекта препаратов проводили на крысах, щенках, поросятах на фоне острого гепатита индуцированного четыреххлористым углеродом, и спонтанной диареи у телят. Клиническая картина ОПН-синдрома у щенят и поросят развивалась быстро и достигла максимума на 3-5 сутки после завершения интоксикации, проявлялась стеатореей, рвотой, угнетением, спазмофилией, эксикозом, эноф-тальмией, тахисистолией, тахипноэ, икгеричностью, тастгипоэсте-зией, анорексией на фоне полидипсии и гипотермии.

Основные гематологические показатели характеризовались по-лицитемией, увеличением гематокрита, относительной гиперпро-теинемией, гипербилирубинемией, ретенционной азотемией, снижением резервной щелочности плазмы, гипохолестеринемией и гипогликемией. Снижались уровень сиаловых кислот и активность щггоплазматических ферментов. Отмечались пшокалыдаемия при опрежающем снижении ионизации общего кальция, гипофосфате-мия, пшонатриемия и пгаокалиемия.

Урологически констатировались протеинурия, глюкозурия, уробилинурия, индиканурия на фоне полиурии и поллакизурии. Мо-фологически в центрифугате отмечались повышение содержания эритроцитов, лейкоцитов, эпителия, появление цилиндров, аморфного кальция и уратов.

Гистологически в печени отмечалась типичная картина острой токсической дистрофии.

Летальность животных колебалась в пределах 16% у крыс, 14% у щенят, 19% у поросят, 6% у телят.

Применение гепатоцеля энтерально в дозе 0,12 г/кг двукратно в день в течение 5 суток и парэнтерально- путем перитонеального диализа в дозе 0,6 г/кг в течение 3-х суток, а гепатовита энтерально по 0,2 г/кг в виде желатиновых капсул до 10 суток (в зависимости от клинического состояния животных) оказало существенный гепа-топротективной эффект. Летальность крыс снизилась соответственно до 9 и 8%, щенят до 4 и 3 %, поросят до 11 и 9%, а у телят она отсутствовала У здоровых животных энтеральное применение препаратов гепатоцель и гепатовит в дозе 0,12-0,2 г/кг обусловливало росгосгимулирующий эффект в пределах 10-12% по отношению к контролю (не получавшим препарат здоровым животным).

При ОПН- синдроме препараты улучшали и восстанавливали общеклинический статус на 3-5 сутки от начала гепатопротективной

стимуляции (на 3-4 суток быстрее выздоравливающих без гепато-протективной коррекции животных), нормализовались гематологические показатели, белково-углеводный, липидный, электролитный обмен, резервная щелочность плазмы, «печеночные тесты» (AJIT, ACT, ЩФ- аза, ГТТП, АХЭ, ЛДГ), а также урологические показатели.

Морфологически в печени была хорошо выражена полигональная дольчатая структурная организация; гепатоциты имели гомогенную структуру, ядра овальные, оксифильные, с четкой хромати-новой картиной, без вакуолизации и других типичных признаков дистрофии, что указывает на завершение репаративных процессов в контролируемый период реконвалесценции.

В последние годы большое внимание обращается на изучение взаимосвязей в функциональной активности гепато-линеальной системы как едином функциональном целом. Исходя из этого была поставлена задача исследовать, как эту взаимосвязь можно использовать в интересах клинической практики. Наряду с гепагоцитами были получены интакгные нативные и лиофилизированные спленоци-ты и отработаны оптимальные композиции двухвалентного препарата в физиологически адекватных количественных сочетаниях (% масс) :

гепатоциты... 100-90 спленоциты... 0-10

Полученный препарат «Гесплен» представляет собой ампулы с порошками светло-серого (гепатоциты) и светло-розового (спленощггы) цвета, растворимые в официнальном растворе Хенкса, физиологическом и изотоническом растворах натрия хлорида. Выпускается в стеклянных ампулах по 30,0 мг или 60,0 мг гепатоцитов и 3,0 мг или 6,0 мг спленоцитов, а также во флаконах по 10,0 мл, содержащих по 125,0 мг лиофилизированных гепатоцитов и спленоцитов соотношении 10:1.

Оценка функциональной активности лиофилизированных гепатоцитов и спленоцитов проводилась прежде всего по показателям белково- мочевино- глюкозосинтетической функции в среде 199. Для контроля использовали свежевыделенные нативные интакгные гепатоциты и спленоциты. Органоспецифические функции смеси лиофилизированных гепатоцитов и спленоцитов контролировались через каждые 30 мин инкубации в ультратермостате при + 37° С в течение 2 часов. К концу инкубации отмечалось достоверное воз-

растение количества альбуминов (с 4,2±0,72 мг% до 16,1 ±0,43 мг%) в надосадочной жидкости. Близка к этим показателям была и динамика синтеза альбуминов лиофилизированными клетками (ниже на 8-11%).

Нативные и лиофилизированные гепатоцигы в смеси их со спленоцитами в течение 2 часов синтезировали мочевину и глюкозу, количество которых возрастало соответственно до 10,9±0,094 ммоль/л и 8б,0±3,78 ммоль/л. Следовательно, смесь лиофилизиро-ванных гепатоцитов и спленоцитов проявила более высокую моче-виносинтетическую и глюкозосинтетическую активность за счет ре-ципрокной функции спленоцитов.

Детоксихационную функцию нативных гепатоцитов, спленоцитов и лиофилизатов определяли по поглощению и выделению бром-сульфалеина (табл. 1).

Таблица 1

Время, мин Экстинкция свежевыде- Экстинкция лиофилизатов ленной смеси гепатоцитов и спленоцитов

контроль с сульфалеином 2,52

30 1,71 ±0,06 1,68 ±0,10

120 1,41 ±0,08 1,24 ±0,20

Экстинкция нативных гепатоцитов и спленоцитов поддерживалась около 2 часов, при этом содержание бромсульфалеина в клетках снизилось с 1,68 до 1,24 ед. Приведенные данные подтверждают сравнительно большую функциональную активность и цитологическую сохранность лиофилизатов при избранных технологических параметрах.

Надо иметь в виду, что приведенные данные для их определения требуют относительно много времени (несколько часов) и поэтому могут использоваться больше для ретроспективной характеристики получаемых материалов. Исходя из этого для экспресс-оценки удобнее пользоваться методом витальных красителей.

Функциональная активность гесплена при интраперитонеаль-ном и подкожном диализе на терапевтическом уровне сохраняется в течение 2-х часов, а при пероральном остаточные продукты метабо-лизации препарата экскретируются из организма к концу вторых суток По клиническим показаниям лиофилизаты гепатоцитов и спле-

ноцитов могут применяться в различных количественных сочетаниях. Такая возможность создается за счет раздельной их фасовки в двух количественных объемах каждая.

Результаты коррекции геспленом острой печеночной недостаточности у крыс.

Подопытные крысы были разделены на 5 групп. Контролем служила группа крыс, не получавшая гесплен.

За основу дозы гесплена, установленной экспериментальным путем, брали 2-107 гепатоцитов и спленоцитов в соотношении 10:1. Исходя из того, что используемая внутриклеточная среда отделена от крови клеточными мембранами, которые способствуют коррекции концентрации веществ в разделенных средах и препятствуют переходу через них высокомолекулярных соединений, прежде всего белков, транзиторное интраперитонеальное и подкожное введение лиофилизатов гепатоцитов и спленоцитов при предложенных нами параметрах и технологии использования дает возможность избежать возникновения иммуноконфликгных ситуаций.

Протекгивная эффективность исследовалась в опытах с экспериментально воспроизведенным ОПН- синдромом после подкожного введения крысам линии Вистар четыреххлористого углерода в дозе 0,6 г/кг живой массы в течение 3-х суток. Контролем служили здоровые животные-аналоги.

Изыскание оптимальных терапевтических доз препарата проведено в интервале доз от 0,20 до 1,00 г/кг живой массы (табл. 2).

Таблица 2

Терапевтическая эффективность лиофилизнрованных гепатоцитов, спленоцитов и гесплена при двукратном примене-иии

Группы, Доза, Гепатоциты Спленоциты Гесплен

п= 10 г/ кг пало % пало % пало %

1 0,2 10 100 10 100 10 100

2 0,4 6 60 7 70 4 40

3 0,6 2 20 3 30 1 10

4 0,8 - - 1 10 - -

1,0

Животные с экспериментальной острой печеночной недостаточностью находились под наблюдением до 25 суток, в течение ко-

торых проводились систематические клинические наблюдения и биохимические исследования крови. Учитывались выживаемость и продолжительность срока жизни, процент выздоровления, а также результаты патоморфологических исследований.

В начальный период отмечалась анорексия, адинамия, сонливость, афазия, агрессивность при контактировании, взъерошенность шерстного покрова, цианоз, тахикардия, полипноэ, диарея. В сыворотке крови отмечено повышение концентрации аммиака до 2,54±0,12 мг%, мочевины до 86,9±0,83 мг%, билирубина до 6,62±0,бЗ мг%. Такие животные были отнесены к I группе-с острой печеночной недостаточностью (табл. 3) .

Таблица 3

Терапевтическая эффективность лиофилизированпых клеток гепатопнтов, спленопитов н гесплена при трехкратном

применении

Группы, Доза, Гепатоциты Спленоциты Гесплен

п=10 г/кг пало % пало % пало %

1 0,2 8 80 9 90 8 80

2 0,4 5 50 7 70 6 60

3 0,6 1 10 3 30 1 10

4 0,8 - - 1 10 - -

5 1,0 - - - - - -

В результате однократного ингерперитонеального диализа гесплена (П группа) продолжительность жизни увеличивалась, летальность снизилась на 81,4%. Несколько более низким был лечебный эффект после подкожного диализа (Ш группа) в двукратной дозе гесплена Продолжительность жизни увеличивалась на 53,4%, а летальность снизилась трехкратно. Более высокая летальность отмечена при пероральном применении гесплена однократно через сутки (IV группа), но ниже чем в контрольной группе на 40%. Средняя продолжительность жизни в контрольной группе (не получавшей препарат), составила 6,0±2,3; во второй-23,4±1,2; в третъей-18,2±1,3 и четвертой-15,1±2,2 суток.

Таким образом, более высокие результаты при коррекции острой печеночной недостаточности получены при интраперитонеаль-ном диализе, а более низкие- при энтеральном, но во всех случаях получены более благоприятные результаты, чем в контроле, исходя из чего можно обосновать способ применения препарата. Вместе с

тем, результаты применения гесплена во всех случаях были более благоприятными, чем при использовании одних гепатоцитов (гепатоцель, гепатовит). Это подтверждает очевидное и статистически достоверное потенцирующее реципрокное влияние спленоцитов (Р<0,001).

Результаты коррекции острой печеночной недостаточности у собак.

Клинический и биохимический контроль за состоянием щенков продолжался до 25 суток. Клиническая картина острой печеночной недостаточности после введения четыреххлористого углерода развивалась остро и демонстративно (тахикардия, сердечно-сосудистая недостаточность, полипноэ, иктерус, атаксия, спазмофилия, диарея, цианоз). По биохимическим показателям на следующий день после интоксикации общий белок сыворотки понизился с 7,45±0,7 до 5,84±0,8 г/%, аммиак- с 0,32±0,02 мг% повысился до 1,52±0,03 мг%, мочевина- с 31,3±0,62 мг% снизилась до 9,58±0,12 мг%, общий холестерин- с 146±7,2 мг% повысился до 215,3±2,3 мг%, глюкоза крови- 66,4±0,48 мг% повысилась до 87,б±1,4 мг%, остаточный азот сыворотки крови - с 25,1±1,8 повысился до 46,7±2б,3 мг%, резервная щелочность плазмы с 48,4±2,1 снизилась до 3б,2±3,2 об% С02, билирубин общий сыворотки с 0,13±0,01 повысился до 0Д1±0,02 мг%, билирубин прямой- с 0,03±0,004 повысился до 0,45±0,003 мг%. После интраперитонеального диализа через сутки общий белок сыворотки крови повысился до 7,2±0,04 г%, мочевина- до 36,4±0,8 мг% , аммиак снизился до 0,68±0,31 мг%, холестерин снизился до 206,2±б,7 мг%, глюкоза крови повысилась до 98,0±2,4 мг%, билирубин общий составил 0,39±0,07 мг%, а прямой-0,2б±0,03 мг%, остаточный азот составил 44,3±1,9 мг%.

Клинический статус оставался тяжелым: сохранялось угнетение, астения, цианоз, полипноэ, тахисистолия, диарея, ясно проявился эксикоз, не исчезли истеричность слизистых, снизился тур-гор кожи, выражены анорексия, сухость слизистой ротовой полости.

Повторный диализ (через день) оказал более выраженное влияние на клинико-биохимический статус больных животных и после третьего диализа с геспленом (через неделю) указанные показатели практически возвратились к исходному уровню (до интоксикации). На высоте развития болезни (вторые сутки) задержка выведения бромсульфалеина достигла 42±1,9 %, а к седьмому- снизилась до 23±1,4 %.

Для реабилитации животных методом активного диализа в двойной дозе гесплена через двое суток потребовался более длительный срок (9-10 суток) и четыре сеанса диализа Энтеральное лечение дало более низкие результаты при более длительном курсе лечения (13-15 суток). Два животных из 10 погибли.

В контрольной группе животных, не получавших гесплен, отмечено тяжелое клинико-физиологическое состояние. Летальность составила 70% (на трегьи-чегвертые сутки после интоксикации). Резкое исхудание, иктерус, тахисистолия, диарея, эксикоз, гиподинамия, алкаптонурия, анальная эктазия, тремор, атаксия, абазия, анорексия различной степени выраженности у оставшихся живыми животных сохранялись более длительное время. Биохимические показатели крови также не возвратились к исходным (до интоксикации). ГГатоморфологические изменения у павших животных купировались в паренхиматозных органах, прежде всего в печени, и характеризовались жировой дистрофией, отеком, холестазом, застоем крови в сосудистой сети и признаками развития гипертрофического цирроза.

Приведенные данные свидетельствуют о высокой эффективности гесплена при острой печеночной недостаточности у собак, особенно при интралеритонеальном диализе. Иммунологических конфликтов при этом отмечено не было, что дает основания рекомендовать гесплен для энтеральной и парэнтеральной транзисторной коррекции при ОПН- синдроме.

Принципиальных качественных и количественных отличий от вышеописанных в динамике клинико-морфологических и биохимических показателей при экспериментальном остром токсическом гепатите у поросят отмечено не было.

Энтерально в первой группе телят препарат вводили за 0,5 часа до кормления из расчета 125,0 мг лиофилизата гепатоцитов и спле-ноцитов в 200,0 мл жидкости Хенкса, среды 199 или изотонического раствора натрия хлорида на 10,0 кг живой массы.

При интралеритонеальном диализе (вторая группа животных) через катетер вводили раствор гесплена в жидкости Хенкса из расчета 40,0 мл на 1 кг живой массы (30,0 мг гепатоцитов и 3,0 мг спленоцитов на 10 кг живой массы) при +39° С.

Активность препарата при парэнтеральном применении сохранялась не менее 2 часов, после этого перфузат отсасывали и проводили дополнительную внугрибрюшинную перфузию растворителя-

ми. Диализ проводили с интервалом в двое суток до восстановления клинического статуса животных (трех- пятикратно).

Испытания гепатопротекгивного действия препаратов при дисфункции пищеварения у телят проводили в производственных условиях.

I группа телят (11 телят - аналогов, простая диспепсия). Гематологические показатели были следующие: гематокрит 51- 61% (57%); гемоглобин 11,8- 12,9 (12,3) г%; эритроциты 6,7- 7,2 (7,0) млн/мкл; лейкоциты 7,1- 7,9 (7,5) тыс/мкл; общий беяок 7,5- 8,2 (7,9) г%; СОЭ (60 мин) 0,75- 0,8 (0,78).

II группа телят (12 телят-аналогов, простая диспепсия). Исходные клинико-гематологические показатели были сходными и количественно сопоставимыми с животными I группы.

П1 группа телят (9 телят-аналогов, контроль, простая диспепсия). Лечение проводилось традиционными способами без применения гесплена.

После проведенного лечения у телят первой группы гематок-ритная величина снизилась на 12,3%, гемоглобин на 17%, количество эритроцитов на 24,2%, лейкоцитов на 30,6%, общего белка на 18%, СОЭ (60 мин) на 15,3%. Это указывает на существенное улучшение водно-электролитного баланса Диарея исчезла на 3-4 сутки. Летальности не было.

У животных второй группы нормализация водно-электролитного обмена (по клиническим и гематологическим показателям) происходила к исходу 2-3 суток, отхода не было.

Среди животных третьей группы 4 теленка из 9 пало, а выздоровление оставшихся длилось до 10 и более суток. Они отставали в росте, упитанности, развитии от животных первой и второй групп.

Приведенные данные позволяют сделать заключение о высокой эффективности лечения диспепсий геспленом, особенно при интра-перитонеальном применении.

На завершающем (третьем) этапе клинико-лабораторных исследований была поставлена цель получить и испытать эффективность транзиторного гепатопротекгивного действия препаратов на основе аллогенных и ксеногенных ингактных нативных и лиофили-зированных потенцированных гепатоцитов, спленоцитов и пан-креацитов в физиологически адекватных композициях и фармакологических формах для энтерального и парентерального применения при полиэтиологаческом ОПН- синдроме.

Наработка, фармакологический скрининг, лабораторные испытания были проведены в установленном порядке и показали отсутствие противопоказаний к энтеральному и парентеральному применению.

Клиническая апробация гепатопротекгивной активности новых препаратов показала высокий стимулирующий эффект при полиэтиологическом О ПН- синдроме, в том числе при терминальных состояниях. На этой основе создалась возможность широкой производственной апробации способов и средств гепатопротекгивной коррекции патогенеза полиэтиологической острой печеночной недостаточности у продуктивных и пользовательных животных.

2. 3. Производственная апробация средств н методов тран-зиторной коррекции острой печеночной недостаточности.

2. 3.1. Патогенез белкового обмена при острой печеночной недостаточности.

Общей закономерностью белковосинтетической функции в организме является его непрерывность и равновесие в процессах анаболизма и катаболизма, обусловленных как физиологическими, так и патологическими причинами и играющими определяющую роль в стабилизации гомеостаза, иммунобиологической реактивности и резистентности. Важнейшую роль в этих сложных и энергоемких процессах играет функциональное состояние печени- основного «барьерного» органа с большими антитоксическими и компенсаторными потенциями. Исходя из этого оценка уровня и состояния белкового обмена в целом и белково-синтетической функции печени приобретают важное значение в выяснении патогенеза полиэтиологического ОПН- синдрома.

Так, в наших опытах уровень протеинемии при ОПН- синдроме у щенков на 5 сутки после интоксикации снизился с 68,3±0,8 г/л до 55,3±0,7 г/л (Р < 0,001). Следует однако отметить, что оценку этой динамики необходимо давать с учетом степени эксикоза, характеризуемого гематокритной величиной, т. е. абсолютной и относительной тенденции к пшопротеинемии, подтверждаемыми клиническими данными (энофтальмия, эксикоз, диарея, гипоэстезия, полипноэ, анорексия, поллакурия, анальная эктазия). На этом фоне более па-тогномонично проявляется гипоальбуминемия как признак снижения рибосомальной активности гепатоцитов. К 5 суткам содержание альбуминов в белковом спекгоре сыворотки крови снизилось с 50,5±0,7% до 41, НО,6% и затем стабилизировалось, медленна воз-

Таблица № Ч.

Белковый обмен при ОПН-синдроме

П/п Показатели Время исследования

До интоксикации 3 сутки 5 сутки 10 сутки 20 сутки

1. Общий белок (г/л) 68,3+0,8 61,6+0,9 55,3+0,7 56,1+0,4 61,7+0,7

2. Альбумины (%) 50,5+0,7 44,3+0,2 41,1+0,6 42,5+0,5 44,8+0,4

3. Л - глобулины {%) 14,2+0,3 16,1+0,4 17,8+0,7 17,2+0,4 16,9+0,1

4. ¿Ь - глобулины (%) 23,8+0,4 26,9+0,6 27,1+0,2 24,2+0,3 25,3+0,5

5. у - глобулины (%) 11,5+0,5 12,7+0,3 14,0+0,5 16,1+0,4 15,6+0,2

6. Креатин (мкмоль/л) 4 63±0,3 53,1+1,1 10,4 ±/,ъ

7. Мочевина сыв. (ммоль/л) 4,8+0,1 5,9±0,02 6,8+0,04 6,3+0,04 5,9±0,4

8. Остаточный азот крови (ммоль/л) 18,6+0,6 29,7+0,4 41,3±0,7 40,1+0,5 32,8+1,4

9. Билирибин сыв. (мкмоль/л)

10. - общий 2,27+0,05 3,1±0,02 5,8±0,01 5,4+0,03 5,0±0,06

11. - конъюгированный 2,2+0,05 1,6+0,01 1,1+0,02 1,2+0,01 1,4±0,02

12. - неконъюгированный - 1,5+0,03 4,7+0,02 4,2+0,05 3,6±0,01

13. Тимоловая проба - + +++ ++ +

14. Индекс анаболизма (<3) 1,71 3,02 4,69 4,48 3,34

Таблица № 3.

__Белковый обмен при гепптощютективиой коррекции ОПН

КУЙ п/п Показатели Время исследования

до интоксикации 3 сутки 5 сутки 10 сутки 20 сутки

1. Общин белок (2%) 69,1 ±0,4 64,7 ±0,7 62,5 ± 1,2 64,9 ± 0,6 67,8 ± 0,4

2. Альбумины (%) 51,1 ±0,1 46,1 ±0,4 46,0 ± 0,5 47,1 ±0,3 46,3 ±0,6

3. а- глобулины (%) 14,8 ±0,2 15,9 ±0,6 17,1 ± 1,1 16,3 ±0,4 17,2 ±0,3

4. (3- глобулины (%) 21,3 ±0,3 24,1 ±0,3 23,6 ± 0,7 21,0 ±0,2 21,4 ±0,6

5. X— глобулины (%) , 12,8 ±0,4 13,8 ±0,7 13,3 ±0,5 15,6 ±0,6 15,1 ±0,8

6. Креатин (мкмоль/л) 48,4 ±0,9 51,6 ± 0,6 55,7 ± 0,4 54,1 ± 0,5 49,7 ± 1,3

7. Мочевина сыв. (ммоль/л) 4,6 ±0,5 5,7 ± 0,7 6,3 ± 0,6 5,3 ±0,4 4,8 ±0,2

8. Остат.азот крови (ммоль/л) 19,3 ±0,4 25,7 ±0,6 33,9 ±0,5 26,8 ±0,7 22,7 ± 0,3

9. 10. П. 12. Билирубин сыв. (ммоль/л) - общий - конъгагнропанный - неконыогнрованный 2,31 ±0,02 2,31 ± 0,02 2,96 ± 0,04 ■ 2,0 ±0,07 0,96 ± 0,02 4.3 ± 0,03 . 1,9 ±0,04 2.4 ±0,01 3.1 ±0,05 2.2 ± 0,07 0,9 ±0,04 2,7 ± 0,06 2,3 ±0,021 0,4 ± 0,06

13. Тимоловая проба - + ++ + -

14. Индекс анаболизма 2,24 1,58 1,15 1,52 1,87

растая до 44,8±0,4% к 20 суткам. Глобулиновые фракции проявили тенденции к росту. Катаболическую направленность белкового обмена в острой фазе гепатита подтверждает рост креатинемии с 46,3±0,3 мкмоль/л до 70,4±1,3 мкмоль/л на 10 сутки (Р < 0,001), а также динамика содержания азотистых шлаков: мочевина сыворотки с 4,8±0,1 ммоль/л к 5 суткам возросла до 6,8±0,04 ммоль/л (Р < 0,001), а остаточный азот с 18, 6±0,б ммоль/л до 41,3±0,7 моль/л (Р < 0,001). Показатели билирубинемии на 3 сутки после интоксикации закономерно возрастали: общий билирубин с 2,27±0,05 мкмоль/л к 5 суткам повысился до 5,8±0,01 мкмоль/л, причем на 3 сутки появился неконьюгированный билирубин (1,5±0,03 мкмоль/л), поднявшись к 5 суткам до 4,7±0,02 мкмоль/л (Р < 0,001), указывая на резкое снижение его конъюгации в печени с глюкуроновой кислотой, т. е. снижение антитоксических функций печени, что подтверждает и динамика тимоловой пробы. Для количественной характеристики качественных нарушений синтетической функции нами предложен индекс анаболизма, отражающий отношение общего белкового азота сыворотки крови к остаточному. Так, в рассматриваемом случае он с 1,71 увеличивался к 5 суткам до 4,69 (Р < 0,001), табл. 4.

При гепатопротекгавной коррекции острой печеночной недостаточности (табл. 5) стабилизация печеночной функции по показателям белкового обмена наступала уже на 3-5 сутки, что хорошо иллюстрируется динамикой индекса анаболизма, креатинемии, билирубинемии и азотистого обмена Восстанавливался клинический статус: снижалась и исчезала гиповолемия, прекращались диарея, анорексия; исчезали абазия и гипоэстезия, восстанавливалась двигательная активность, температура тела, частота пульса и дыхания.

2. 3. 2. Динамика активности соматических и цнтонлазма-тических ферментных систем. Высокая чувствительность и ранняя информативность исследования ферментной активности при различных патологических состояниях в клинической практике является общепризнанной, несмотря на частую неспецифичносгь и непа-тогномоничность их динамики. Тем не менее исследование активности ряда соматических и цитоплазматических ферментных систем может служить отправным интегральным критерием оценки функционального состояния печени.

Как видно из таблицы б, динамика активности разных ферментных систем при острой печеночной недостаточности неодина-

Таблица № б.

Ферментный профиль .. . при ОПН-синдроме

П/п Показатели Время исследования

До интоксикации 3 сутки 5 сутки 10 сутки 20 сутки

1. Алакин-аминотрансфераза сыворотки (К.Ф.2.6.1.2)- AJIT (мкмоль/ч-мл) ■ 0,53+0,003 0,61+0,001 0,67±0,002 0,61 ±0,003 0,57+0,002

2. Аспартат-аминотрансфераза сыв. (К.Ф.2.6.1.1) ACT (мк>моль/чсмл) 0,51 ±0,002 0,59+0,001 0,51+0,003 0,58+0,002 0,52+0,001

3. oL- амилаза сыв. (К.Ф.3.2.1.1.) (мг/ч-мл) 16,4+0,003 12,8+0,006 11,2+0,004 10,4+0,003 11,4±0,004

4. Ацетилхолинэстераза крови (К.Ф.3.1.1.7) (мкмоль/мин. мл) 2,3+0,001 1,6+0,002 1,3±0,001 1,4 ±0,003 1,6+0,005

5. Холинэстераза сыв. (К.Ф.3.1.1.8) (мкмоль/ч.мл) 360,5+6,41 404,5+3,72 480,7+4,23 488,4±5,31 392,3+4,13

6. Глютаматдегидрогеназа сыв. (К.Ф. 1.4.1.2.) (нмоль/мин.мл) 0,28+0,001 0,33+0,002 0,38+0,001 0,44±0,004 0,36±0,003

7. Щелочная фосфагаза сыв. (ед. Бод.) (К.Ф.3.1.3.1.) 4,6+0,001 6,1 ±0,002 8,3+0,003 12,4+0,006 9,13+0,005

8. Лактатдегидрогеназа сыв (К.Ф. 1.1.1.2.7.) (мкмоль/ч^лл) 0,42+0,002 0,68+0,001 0,76±0,002 0,61+0,003 0,58+0,004

9. Липаза сыв. (К.Ф.3.1.1.3.) (нмоль/ч.мл) 46,8+0,8 54,2+0,3 58,9±0,6 57,7+0,8 54,6+0,7

кова и развивается с различной интенсивностью. Активность тран-саминирования, умеренно повышаясь в острой фазе гепатита, протекает на фоне снижения активности амилазы, из чего можно сделать вывод о реципрокной функциональной зависимости между состоянием печени и поджелудочной железы (г - 0,41}. Еще более выражена отрицательная регрессия трансаминирования с ацетилхо-линэстеразной активностью (г - 0,64). Наоборот, активность холи-гостеразы в этих случаях проявляла высокодостоверное (Р < 0,001) повышение.

Активность глютаматдегидрогеназы, лакгатдегидрогеназы и липазы, проявив общую тенденцию к росту, не проявляла патогно-монической специфичности, отражая общее метаболическое напряжение в печени.

Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови определяли по принципу Боданского в модификации автора: вместо применяемого для получения фосфомолибденовой сшш по методу Фиске-Себорроу гидрохиново- содово- сернистого редуцирующего реактива мы использовали аскорбиновую кислоту (по принципу С. А. Ивановского при определении неорганического фосфора в сыворотке крови). Результаты исследования выражались в единицах Боданского (мг%/ мл в 1 час при + 37° С).

Оказалось, что активность энзима коррелирует с активностью гепатита. Для количественной характеристики интенсивности патогенеза при ОПН- синдроме нами предлагается определение индекса активности щелочной фосфатазы, отражающего его отношение к неорганическому фосфору в сыворотке крови. Показатель имеет и объективное прогностическое значение, т. к возвращается к исходному уровню только с завершением репаративных процессов в печени, что подтверждается клиническими данными.

При гепатопротекгивной коррекции острой печеночной недостаточности (табл. 7) ферментный профиль крови отражал сравнительно высокий функциональный потенциал органа. Активность трансаминирования уже на 5 сутки после интоксикации не превышала 0,98±0,001 мкмоль/ч-мл (по AJIT) и 0,84±0,005 мкмоль/ч-мл (по ACT), а индекс де Ритисане превышал 0,85. Сравнительно быстрое и стабильное восстановление «ферментного зеркала» печени по показателям цитоплазматических ферментов отражает высокую гепатопротекгивную эффективность транзиторной коррекции ОПН-синдрома и также подтверждается морфологическими данными.

Таблица № 7. . . . ... 1

•'.Ферментный профиль . : при гспатопротектншюн коррекции ОГШ

п/п Показатели Время исследопапия < :

После ' интоксикации 3 сутки 5 сутки 10 сутки ' 20 сутки

1. Алашш-лминргрансфераза сыв. (К.Ф.2.6.1.2) - АЛТ (мкмоль/ч-мл) 1,33 ±0,002 1,17 ±0,003 0,98 ± 0,001 0,86 ±0,001 0,55 ± 0,002

2. ' Лспартатгаминотрапсфераза сыв. (К.Ф.2.6. l.i.) - ACT (мкмоль/ч-мл) 1,12 ±0,003 0|95 ± 0,002 0,84 ± 0,005 0,72 ± 0,003 0,47 ± 0,002

3. а - амилаза сыв. (К.Ф.3.2.1.1.) ' (мг/ч-мл) ■ 9,8 ± 0,02 . 10,4 ±0,03 12,2 ±0,04 18,7 ±0,03 19,3 ±0,01

4. Индекс дс 1'итнса 0,84 0,81 0,85 0,84 0,85

5. Ацитилхолипэстераза крови (К.Ф.3.1.1.7.) (мкмоль/мнн.мл) 0,93 ± 0,002 1,24 ±0,001 . ' 1,73 ±0,003 2,12 ±0,004 ' 2,44 ± 0,002

6. Глютаматдегидрогепаза сыв. (К.Ф. 1.4.1.2.) (пмоль/мни.мл) 0,88 ± 0,002 0,69 ± 0,003 0,61 ±0,002 0,42 ±0,001 0,38 ±0,001

7. Щелочная фосфатаза сыв. (К.Ф.3.1.3.1.) (ед.Бод.) 8,67 ±0,02 . 8,13 ±0,03 7,64 ±0,01 6,21 ±0,03 4,09 ± 0,02

■ 8. Лактатдегмдрогеназа сыв. (К.Ф. 1.1.1.27.) (мкмоль/ч.мл) .0,49 ±0,001 0,58 ±0,002 0,61 ±0,001 0,53 ± 0,002 0,47 ±0,001

9. Липаза сыв. (К.Ф.3.1.1.3) (нмоль/ч.мл) 81,4 ±0,6 78,6 ±0,3 69,9 ± 0,4 • 52,| ±0,3 49,2 ± 0,2

2. 3.3. Лнпидпо-углеводпый обмен н резервная щелочность при острой печеночной недостаточности. Состояние и уровень обмена триглицеридов, высших жирных кислот, гексоз и пентоз, моно- и дисахаридов находятся под непосредственным регулирующим метаболическим контролем печени и поджелудочной железы. Процессы их обмена и метаболизации обеспечивают энергетический и материальный обмен печени и организма в целом, являются источниками энергии макроэргических связей АТФ, АДФ, АМФ, ацетил- коэнзима А, триозофосфатов и окислительного метилирования, что и определяет состояние промежуточного обмена в целом, уровень общей неспецифической реактивности и резистентности, одним из интегральных показателей которых является резервная щелочность плазмы крови.

Общие липиды в крови щенков при острой печеночной недостаточности снижались до 4,1 ±0,04 г/л на пятые сутки после интоксикации и в дальнейшем не переходили рубежа 4,3±0,03 г/л. Аналогичная динамика характерна и для липопротеидов, содержание которых с 3,б±0,03 г/л снижалось до 2,4±0,01 г/л в пятые сутки и до 2,3±0,02 г/л в десятые сутки. Эти данные приобретают важное значение с учетом того, что поступающие в кровь НЭЖК адсорбируются на альбуминах (синтез которых происходит в рибосомах гепато-цитов) и поступают в печень, где и происходит ресинтез триглицеридов. Часть жирных кислот в ней образуют фосфолипиды и эфиры холестерина, а липиды входят в состав липопротеидов. Последние на 7-21% состоят из белка, 79-93% липидов (из которых 13-56% относятся к триглицеридам, 20-28% - к фосфолипидам, 15-48% - к эфирам холестерина и 8-10% - к свободному холестерину).

Сказанное объясняет, почему при острой печеночной недостаточности имело место снижение холестерина в сыворотке крови (с 4,8±0,02 ммоль/л до 3,б±0,03 ммоль/л в пятые сутки после интоксикации), атакже фосфолипидов (с 2,1±0,01 г/л до 1,2±0,04 г/л).Таким образом, динамика, патогенез и интенсивность гиполипемии могут быть своеобразными «маркерами» активности гепатита (табл. 8).

Интерес к изучению патогенеза обмена гликопротеидов возрос в последние годы в связи с выяснением их роли в формировании и поддержании функций неспецифической резистентности организма и роли в этих процессах сиаловых кислот- ацетилированных производных нейраминовой кислоты. Сиаповые кислоты входят в состав цитоплазмы, цитоплазматических мембран, мембран митохондрий,

Таблица № в.

Липидный, углеводный обмен и резервная щелочность плазмы крови при ОПН-синдроме

П/п Показатели Время исследования

До интоксикации 3 сутки 5 сутки 10 сутки 20 сутки

1. Липиды общие сыв. (г/л) 5,4+0,02 4,3+0,01 4,1+0,04 4,2+0,026 4,3+0,03

2. Липопротеиды сыв. (г/л) 3,6+0,03 2,8+0,01 2,4+0,01 2,3+0,02 2,6+0,01

3. Холестерин сыв. (ммоль/л) 4,8+0,02 4,1+0,01 3,6+0,03 3,5+0,02 3,6+0,04

4. Фосфолипиды общ. сыв. (г/л) . 2,1±0,01 1,6+0,02 1,2+0,04- 1,3±0,06 1,5+0,03 ■

5. Резервная щелочность плазмы (об% С02) 52,1+1,2 49,3+2,2 43,8+1,4 40,8+1,3 41,3+0,9

6. Сиаловые кислоты сыв. (мг/л) 620,6+6,36 540,3+4,82 460,6+3,23 476,7+6,41 488,6+3,65

7, Глюкоза крови (ммоль/л) 3,87 3,14+0,06 2,13+0,04 2,11+0,07 2,31+0,05

Таблица №9.

Липндцын, углеводный обмен и резервная щелочность плазмы кровн при гепатоиротею-ивной коррекции ОПН

№№ п/п Показатели Время исследования

Исходные данные 3 сутки 5 сутки 10 сутки 20 сутки

1. Липиды общие сыв. (г/л) 4,2 ± 0,04 4,1 ±0,05 4,9 ± 0,04 5,8 ± 0,02 6,1 ±0,02

2. Липопротеиды сыв. (г/л) 2,7 ± 0,05 2,5 ± 0,03 3,7 ± 0,04 3,7 ± 0,04 3,8 ±0,01

3. Холестерин сыв. (ммоль/л) 3,1 ±0,02 3,0 ±0,01 3,6 ±0,03 4,4 ±0,01 5.2 ±0,01

4. Фосфолипиды общие сыв. (г/л) 1,6 ±0,004 1,4 ±0,004 1,9 ±0,005 2,2 ± 0,003 2,2 ± 0,002

5. Резервная щелочность плазмы крови (об% С02). 42,6 ± 1,2 41,3 ±0,9 44,9 ±0,6 50,2 ± 0,3 51,6 ±0,4

6. Сиаловые кислоты (мг/л) 443,1 ±6,21 450,6 ±3,54 469,8 + 5,11 561,7 ±6,24 615,3 ±3,71

7. Глюкоза крови (ммоль/л) 1,98 ±0,003 1,99 ± 0,003 2,13 ±0.004 3,85 ±0,002 3,81 ±0,001

микросом и оказывают регулирующее влияние на процессы, происходящие на поверхности биологических мембран. Концентрация гликопротеидов позволяет судить о существенных сторонах патогенеза ОПН- синдрома, тяжести патологического процесса и их прогнозе. Так, у щенков при ОПН- синдроме концентрация сиаловых кислот с б20,б±6,3б мг/л к пятым суткам снизилась до 460,6±3,23 мг/л, что коррелирует с энергетическим потенциалом цикла трикар-боновых кислот (Кребса) - основного источника макроэнергегиче-ских связей в процессах промежуточного обмена. Интегрально это проявляется гипогликемией. Глюкоза крови при острой печеночной недостаточности снизилась с 3,87±0,09 ммоль/л до 2,13±0,04 ммоль/л на пятые сутки и 2,11±0,07 ммоль/л на десятые сутки после интоксикации. Патогенетически это приводит к снижению рибосо-мальной активности (гипоальбуминемия, цитоплазматическая гипо-ферментация). Этим же объясняется снижение резервной щелочности плазмы крови (в рассматриваемом случае с 52,1±1,2 об% СО^ до 40,8±1,3 об% С02 на десятые сутки) как признака алиментарного ацидоза, наводнения крови продуктами незавершен-ных«метаболических цепей» вследствие истощения аэробного (трикарбонового) цикла гликолиза, прежде всего в печени (Р < 0,001).

При гепатопротекгивной коррекции ОПН- синдрома (табл. 9) показатели липидно- углеводного обмена были выше по всем рассматриваемым показателям и нормализовались на 3-5 сутки, указывая на высокодостоверное и сравнительно более быстрое восстановление энергетического потенциала печени, в частности в рибо-сомальной и митохондриальной системах, что и подтверждается динамикой белкового обмена и ферментативной активности. Резервная щелочность плазмы крови с 42,б±1,2 об% С02 повысилась к десятым суткам до 50,2±0,3 об% С02 (Р < 0,001), что является выражением стабилизации буферных систем, восстановления гомео-статических показателей в нормальных параметрах и сочетается с нормализацией показателей клинико- физиологического статуса.

2. 3. 4. Минеральной, витаминный и электролитный обмен при ОПН- синдроме. Выяснение роли Са4* в регуляции проницаемости цитоплазматических мембран, стабилизации синтициальных связей и его участия в транспортных внутриклеточных процессах расширило интерес к динамике его фракций в крови при многих патологических состояниях, в том числе и печени. Кальций- протеи-

ТАБЛИЦА N210.

Состояние минерального, электролитного и витаминного обмена при ОПН-синдроме •

Показатели Время исследования

До интоксикации 3 сутки 5 сутки 10 сутки 20 сутки

Кальций общий сыв. (ммоль/л) 2,64 ± 0,02 2,44 ± 0,03 2,25 ± 0,01 2,14 + 0,04 2,31 ± 0,005

Кальций ионизированный сыв. (ммоль/л) 1,46 ±0,01 0,85 ± 0,01 0,80 ± 0,03 0,88 ± 0,02 1,12 ±0,001

Фосфор неорг. Сыв. (ммоль/л) 1,25 + 0,03 0,82 ± 0,02 0,76 ± 0,01 0,81 ± 0,01 0,93 ± 0,02

Натрий сыв. (ммоль/л) 134,6 ± 3,1 158,7 ± 2,6 161,3 ± 2,8 152,1 ±t,f- 146,3 ± 1,9

Калий крови (ммоль/л) 14,2 ± 0,0 18.8 ± 0,9 19,1 ± 1,1 17,3 ±0,4 16,2 ± 0,5

Ретинол сыв. (мкмоль/л) 0,84 ± 0,001 0,61 ± 0,001 0,23 ± 0,03 0,18 ± 0,04 0,19 ± 0,02

Аскорбиновая кислота сыв. (мкмоль/л) 15,3 ± 0,04 12,2 ± 0,02 10,3 ± 0,04 9,9 ± 0,02 10,1 ± 0,04

Цианкобаламин сыв. (нмоль/л) 0,32 t 0,003 0,24 ± 0,001 0,21 ± 0,001 0,22 ± 0,003 0,23 ± 0,002

Эрго- и холекальциферолы сыв. (мкмоль/л)

Тиамин (вит.В2) сыв. (мкмоль/л) 0,063 ± 0,001 0,041 ± 0,001 0,033 ± 0,001 0,032 ± 0,002 0,036 ± 0,001

Ретинол в печени (мкг/г) 35,2 ± 0,4 24,1 ± 0,2 18,3 ±0,4 11,3 ± 0,3 11,4 ±0,2

наты, выполняющие важные соматические функции в общем метаболическом пути, следовательно, находятся и в патогенетической зависимости от рибосомальной активности гепатоцитов- основных продуцентов альбуминов.

При острой печеночной недостаточности щенков (табл. 10) содержание общего кальция в сыворотке крови с 2,64±0,02 ммоль/л к десятым суткам после вакцинации снизилось до 2,14±0,04 ммоль/л, (Р < 0,001). Такое снижение протекало на фоне снижения общего белка (табл. 4). Эти процессы происходили на фоне опережающего снижения ионизации фракций кальция, способных к диссоциации при физиологических параметрах буферных систем внутренней среды. Так, с 1,25±0,03 ммоль/л содержание Са*"1" в сыворотке крови снизилось до 0,80±0,03 ммоль/л на пятые сутки и коррелировало со снижением буферной емкости крови при остром гепатите (табл. 8). Падение содержания неорганического фосфора в сыворотке крови происходило интенсивнее, чем общего кальция, но количественно было близко к уровню Са^, что, по-видимому, можно отнести за счет сохранения инерциальной синтетической активности органической матрицы костного депо и процессов конденсации его в гад-роксиапатите при остром гепатите. Подтверждением этого является сохранение суммарной рештенофотооссеометрической плотности пяточной кости в этот период.

Изменения в водно-электролитном балансе организма при ОПН- синдроме состояли в увеличении выхода К* из внутриклеточной среды вследствие повышения проницаемости цитоплазматиче-ских мембран, что подтверждается тимоловой и бромсульфалеино-вой пробами, а также данными динамики аскорбиновой, сиаловых кислот, цианкобаламина и тиамина (табл. 10).

Динамика ретинола в сыворотке крови и печени указывает на прогрессирующее снижение депонирования ретинола печенью и высокодостоверного (Р < 0,001) снижения его резорбции и поступления в кровь.

При гепатопротективной коррекции динамика минерального, витаминного и электролитного обмена была более благоприятной (табл. 11) и по контролируемым показателям восстанавливалась на исходном уровне на пятые сутки (по фосфатемии, натриемии, ка-лиемии, кальциемии, цианкобаламину). Однако уровень ретиноло-вого обмена, показатели тиамина, аскорбиновой кислоты оставались ниже исходных, что можно объяснить повышенной утилизаци-

ТАБЛИЦА №

Состояние минерального, электролитного и витаминного обмена при гепатопротективной коррекции ОПН - синдрома

Показатели Время исследования

До интоксикации 3 сутки 5 сутки 10 сутки 20 сутки

Кальций общий сыв. (ммоль/л) 2,73 ± 0,02 2,14 ± 0,01 2,48 ± 0,04 2,62 ± 0,03 2,69 ± 0,05

Кальций ионизир. сыв. (ммоль/л) 1,46 ± 0,03 0,72 ± 0,06 0,96 ± 0,02 1,13 ± 0,04 1,32 ± 0,01

Фосфор неорг. сыв. (ммоль/л) 1,31 ± 0,04 1,12 ± 0,06 1,27 ± 0,07 1,34 ± 0,02 1,41 ± 0,04

Натрий сыворотки (ммоль/л) 138,2 ± 2,3 143,2 + 1,9 139,9 + 2,1 130,1 ± 3,0 128,8 ± 1,9

Калий крови (ммоль/л) 14,8 ± 0,4 17,3 ± 1,1 18,5 ± 0,8 14,9 ± 0,4 13,8 ± 0,7

Ретинол сыв. (мкмоль/л) 0,89 ± 0,004 0,66 ± 0,003 0,51 ± 0,006 0,48 ± 0,003 0,49 ± 0,001

Аскорбиновая кислота сыв (мкмоль/л) 15,6 ± 0,04 11,2 ± 0,02 11,8 + 0,05 12,4 ± 0,02 14,7 ± 0,03

Цианкобаламин сыв. (мкмоль/л) 0,31 + 0,004 0,22 ± 0,003 0,26 ± 0,006 0,30 ± 0,002 0,32 ± 0,004

Эрго- и холекальциферолы (мкмоль/л)

Тиамин сыв. (мкмоль/л) 0,065 ± 0,003 0,042 ± 0,004 0,039 ± 0,001 0,049 ± 0,003 0,058 ± 0,005

Ретинол в печени (мкг/г) 35,3 ± 0,9 26,1 ± 0,6 19,8 ± 0,4 24,4+ 0,5 27,6+ 0,8

ей в тканевых и клеточных репаративных процессах периода рекон-валесценции.

2. 3. 5. Динамика гематологических показателей. Состояние гемопоэза при острой печеночной недостаточности отражает явления его ингибиции продуктами токсикоза и достигает максимума к десятым суткам после интоксикации. Содержание эритроцитов снизилось с 6,9±0,08 млн/мм3 до 5,5±0,03 млн/мм3 (Р < 0, 001), причем эта тенденция сочеталась с параллельным снижением содержания гемоглобина с 12,3±0,07 г% до 9,6±0,02 г%, т. е. возникает состояние пернициозно- гипохромной анемии. О функциональном напряжении гемопоэза говорят также состояние лейкопоэза и изменения лейкограммы. Достоверную ингибицию лейкопоэза (с 9,6±0,04 до 8,1 ±0,03 тыс/мм3 на десятые сутки), количественно хотя и не следует еще рассматривать, по нашему мнению, как признак клинической лейкопении, но качественные изменения лейкограммы свидетельствуют о дальнейшей возможности ее прогнозирования в связи с появлением на пятые сутки юных нейтрофилов и двукратным повышением содержания палочкоядерных нейтрофилов к десятым суткам. Лимфоцитарная и моноцитарная реакция указывают на соответствующий ответ на повреждение гепатоцитов (табл. 12).

Тенденция к повышению гематокритной величины коррелирует с повышением показателей СОЭзо и СОЭ«ь отражая соответствующее степени эксикоза изменение агрегатного состояния коллоидно-дисперсных систем крови, не восстанавливающихся и к десятым суткам после интоксикации.

Гепатопротекгивная транзиторная коррекция ОПН- синдрома выявила четко выраженное благотворное и щадящее влияние на ге-мопоэз (табл. 13).

Состояние эритропоэза, индуцированное «токсигенным ударом», инерциально поддерживалось в тенденции некоторого роста, не оказав ингибирующего влияния на продукцию гемоглобина, т. е. возникающая некоторая тенденция к гипохромии по сути отражает восстановление агрегатного состояния крови от относительной ги-поволемии.

Появившиеся после интоксикации юные нейтрофилы (2-1%) исчезли из кровотока к пятым суткам, снизилось содержание палочкоядерных нейтрофилов, что следует рассматривать как снижение напряжения в лейкопоэзе и подтверждается показателями лимфо- и монопоэза, восстановлением гематокритного показателя и СОЭ.

Таблица N12,

Гематологические показатели при ОПН-синдтюме

N пп Показатели Время иследовалия

до интоксикации 3 сут. 5 сут. 10 сут.

Эритроциты (млм.мм3) 6.9±0.08 6.8±0.07 6.1±0.02 5.5±0.03

Гемоглобин (2%) 12.3±0.07 11,9±0.03 10.2±0.04 9.6±0.02

Лейкоциты (тыс.мм"*) 9.6±0.04 9.0±0.02 8.8±0.03 8.1±0.03

Лейкограмма (%)

- базофилы 0.6±0.002 0.7±0.001 1.2±0.001 1.3±0.001

- эозинофилы 5.8±0.01 6.4±0.01 5.6±0.02 5.3±0.03

Нейтрофилы

- миэлоциты

- юные 1.0±0.001 1.8±0.001

0 - палочкоядерные 4.0±0.002 6.5±0.03 8.3±0.04 9.1±0.02

1 - сегментоядерные 48.1±0.03 43.1±0.02 38.1±0.001 36.2±0.03

2 -Лимфоциты 38.2±0.7 39.6±0.3 40.2±0.02 40.1±0.04

3 - Ионоциты 3.3±0.001 3.7±0.002 5.6±0.003 6.2±0.001

4 Гематокрит (%) 44.8±0.3 42.9±0.2 48.1±0.06 46.7±0.05

5 СОЭзо 0.8±0.001 1.1±0.001 1.4±0.001 1.5±0.001

6 СОЭео 2.6±0.001 3.5±0.001 4.6±0.003 5.3±0.002

Таблица № И-

Гематологические показатели при гепатоиротективиой коррекции ОПИ

№№

п/п Показатели Время исследования

Исходные

данные 3 сутки 5 сутки 10 сутки 20 сутки

1. Эритроциты (млн/мм3) 6,9 ± 0,7 6,8 ±0,8 7,3 ± 0,6 7,2 ± 0,4 7,3 ± 0,5

2. Гемоглобин (г %) 10,4 + 0,4 10,1 ±0,3 10,3 ±0,4 11,6 ±0,2 12,7 ±0,3

3. Лейкоциты (тыс/мм3) 5,8 ±0,5 6,3 ± 0,4 6,6 ± 0,3 7,2 ± 0,5 6,9 ± 0,2

4. Лейкограмма (%): - базофилы 0,6 ±0,01 0,5 ±0,01 0,5 ±0,01 0,6 ±0,01 0,8 ±0,01

— эозинофилы - нейтрофилы: 5,5 ±0,3 5,1 ±0,2 5,7 ± 0,2 7,6 ± 0,3 7,5 ± 0,4

- миэлоциты - - - - -

- юные 2,0 ± 0,1 1,0 ±0,1 - - -

- палочкоядерные 11,3 ±0,2 11,8 ±0,3 11,0 ±0,2 8,7 ± 0,4 8,5 ±0,1

- сегментоядерные 45,4 ± 0,6 43,8 ±0,7 42,6 ± 0,5 45,4 ± 0,6 45,9 ±0,4

- лимфоциты 31,9 ±0,3 33,6 ±0,4 36,1 ±0,2 32,8 ± 0,2 31,7 ±0,3

- /ивнцучгЬ 3,3 ± 0,2 4,2 ±0,1 4,1 ±0,1 4,9 ±0,1 5,6 ±0,1

5. Гематокрит (%) 54,8 ± 0,6 55,1 ±0,4 51,2 ±0,7 46,4 ± 0,2 49,8 ±0,1

б. СОЭ.о 0,5 ± 0,002 0,4 ± 0,003 0,6 ± 0,002 0,9 ± 0,001 0,9 ±0,001

7. соэ™ 1,9 ±0,1 1,8 ±0,1 2,3 ± 0,3 2,5 ± 0,2 2,5 ±0,1

Таблица № Урологические показатели при ОПН-синдроме

п/№ Показатели Время исследования

до интоксикации 3 сут. 5 сут. 10 сут.

1 Белок - + + ++

2 Сахар - ± + +

3 Ацетон .тела - ± + ++

4 Желчные кислоты — + +++ +++

5 Кровь - ++ +

6 Кров.пигмент - ± ++ +

7 Билирибин - + ++ Н11! 1

8 Уробилин - + +++ +++

9 Индикан - + ++ ++

ТАБЛИЦА N2

Урологический синдром

при гепатопротективной коррекции ОПН

Показатели В ремя исследования

До инстоксикации 3 сутки 5 сутки 10 сутки 20 сутки

Белок - - + -

Сахар - + - -

Индикан - ± - -

Желчные кислоты , - ± + -

Кетоновые тела — ± ±

Хлориды (ммоль/л) 191,4 ±3,1 184.2 ± 2,7 179,4 ±2.7 188,7 ±5,2

Относительная плотность 1,027 ±0,001 1,029 ± 0,002 1,037 ± 0,005 1,032 ± 0,001 I

РН 6,2 ± 0,04 6,1 ± 0,03 6,1 ±0,01 6,3 ± 0,04

Кровяные пигменты: • билирубин • уробилин - + ± + + -

Эпителий + ++ ++ +

Эритроциты + +++ ++ +

Лейкоциты + ++ + + I

Цилиндры и цилиндроиды - + - -

2. 3. 6. Дипамнка урологических показателей. Депурацион-ная функция почек и ее показатели в моче являются отражением патологических изменений вследствие индуцированной острой печеночной недостаточности, дисфункции пищеварения и наводнения крови продуктами незавершенных метаболических процессов. К третьим суткам после интоксикации в моче выявлены следы альбу-моз, а затем - к пятым суткам- белка. К третьим суткам возникали следовая глюкозурия, ацетонурия; к пятым суткам отмечено значительное количество желчных кислот, кровяных пигментов, билирубина и уробилина- маркеров печеночных нарушений. Индикан-производное индоксилсерной кислоты циклического ряда как непа-тогномоничный продукт белкового распада позволяет судить об усилении гнилостных и десквамативных процессов при дисфункции пищеварения и экзокринной гипофункции печени (табл. 14).

При гепатопротективной коррекции ОПН- синдрома урологические данные имели существенные различия (табл. 15) . Следы альбумоз появившиеся на пятые сутки, затем исчезали. Следовая глюкозурия и индиканурия через трое суток исчезали. Имело место некоторое повышение клеточных составляющих центрифугата и кровяных ттттг-чгстгг-в; рН мочи оставалась слабокислой, а относительная плотность сохранялась в нормальных пределах. Приведенные данные говорят в пользу удовлетворительной депурационной функции и морфологического состояния почек.

2. 4. Заключение. Анализ литературных данных и результатов исследований по изучению патогенеза полиэтиологического синдрома острой печеночной недостаточности показывают, что эта проблема продолжает оставаться одной из наиболее актуальных задач науки и клинической ветеринарии. Вместе с тем, как видно из результатов экспериментальных исследований, понимание и объективная оценка качественных и количественных критериев патогенеза клинико-физиологических и морфофункциональных закономерностей при полиэтиологическом ОПН- синдроме открывает и саму возможность ее коррекции, а также стимуляции процессов реконва-лесценции и репарации.

В результате проведенной работы была исследована совокупность, последовательность и реципрокная обусловленность динамики возникающих при острой печеночной недостаточности нарушений, роль в этих процессах функционального состояния гепато-линеаяьной системы, патогномоничносгь отдельных и совокупных

критериев патогенеза гомео стаза в целом при ОПН- синдроме. Полученные средства патогенетической- транзиторной экстракорпоральной коррекции полиэтиологической острой печеночной недостаточности и стимуляции функциональной активности гепато-линеальной системы на основе потенцирования интактных натив-ных и лиофилизироввнных аллогенных и ксеногенных гепатоцитов, спленоцитов и панкреацитов в моновалентных и поливалентных физиологически адекватных композициях позволяют успешно решать клинические задачи при неотложных, экстремальных и терминальных ситуациях. Показана принципиальная и практическая возможность прогнозирования и предупреждения возникновения острой печеночной недостаточности на основе предложенной совокупности «сигнальных» тестов, имеющих основополагающее значение в патогенезе метаболических нарушений.

Функциональное ослабление печени в динамике морфологических проявлений состоит в последовательно нарастающих процессах альтерации, снижения гомогенности и просветления ядерной субстанции, зернистой, белковой, жировой дистрофии; гипобиоза, некробиоза и цитолиза в сочетании с гисгиоцитарной, лейкоцитарной, особенно лимфоцитарной инфильтрацией ретикулярных стро-мальных структур, перипортальных и били арных трактов (цитолиз); дискомплексацией и аннигиляцией в некробиотических очажках трабекулярной, балочной архитектоники; прогрессирующего холе-стаза, венозного застоя крови, четкой выраженности пространств Диссе и эпителиальной пролиферации слизистой оболочки желчных протоков.

Печень имеет дрябловатую консистенцию, увеличена, с поверхности имеет неравномерный саговый вид, иногда заметны пе-техии в глиссоновой капсуле, выражена портальная гипертензия (полнокровие в системе воротной вены). Слизистая желчного пузыря гиперемична, с признаками отека Ductus choledochus сужен, с выраженным валиком на выходе в двенадцатиперстную кишку.

Кардиальный морфологический комплекс при остром гепатите состоит в возникновении диффузной картины альтерации с появляющимися и возрастающими признаками зернистой миокардио-дистрофии. В миокарде снижается содержание гранул формазана (признак снижения ферментативной окислительно-восстановительной активности). На ЭКГ вольтаж зубца R снижен, расширен комплекс QRS, зубец S в третьем отведении низкий и

глубокий («левограмма») в максимуме возбуждения желудочков. Сегмент БТ располагается ниже изопотенциальной линии, а зубец Т уменьшен (характерный признак дистрофии миокарда). Интервал Р-С> увеличивается, указывая на снижение функций проводимости и возбудимости миокарда, возможна спонтанная экстр асистолия.

Возникают также морфологические признаки начинающегося панкреатита: увеличение органа в объеме, его лимфоцитарная и гис-тиоцитарная импрегнация; застой секрета, стриктура протока и катаральное состояние его слизистой.

Урологический синдром морфологически дополняется картиной развития острого очагового диффузного гломерулонефрита: отечностью коркового слоя, гиперемией клубочков, отечностью капсул Боумена- Шумлянского с признаками лимфоцитарной инфильтрации. В извитых канальцах вторичного порядка местами обнаруживаются зернистые цилиндры и цилиндроиды, иногда с лейкоцитарной и эпителиальной импрегнацией.

Селезенка гиперемирована, несколько увеличена, уплотнена, сочная, при надавливании на разрезе выделяется красно-бурая кашицеобразная пульпа. Возникают признаки гиперплазии. Фолликулы селезенки увеличены, гиперемированы; ретикулярная формация четко обозначена, с признаками серозной инфильтрации, эозино-фильна.

Клинические проявления дисфункции пищеварения (диарей) дополняются и конкретизируются при острой печеночной недостаточности симптомокомплексом патоморфологических изменений в виде экссудативного катарально-серозного гастро- дуоденита с вовлечением в процесс и дистальных отделов кишечника по мере усиления печеночной недостаточности. Характерны полнокровие слизистой, отечность, обилие полиморфноядерных лейкоцитов и деск-вамированного эпителия, полнокровие подслизистого слоя.

Энзиматическая недостаточность выступает в виде копрологи-ческого синдрома: повышения рН, креатореи, наличия крахмала, скрытой крови и кровяных пигментов, стеатореи; возрастания дис-бакгериоза (грамнегативной микрофлоры), содержания полигонального эпителия, появления индикана, меркаптана, фибрина, белкового экссудата, снижения активности ЩФ- азы и энтерокиназы, снижения содержания стеркобилина. Таким образом, морфологический комплекс при острой печеночной недостаточности выходит далеко за пределы только органной патологии, что и следует учитывать при

комплексной коррекции патогенеза возникающих в организме нарушений.

2.5 Выводы

1. Приоритетными ранними индикаторными тестами при ОПН -синдроме являются определение активности органоспецифических ферментов (ЩФ, ЛДГ, АХЭ, ACT, АЛТ, ГДГ) в крови, уровня липидного, пигментного, ретинолового обмена и анализ нагрузочных проб.

2. Снижение уровня общих липидов, липопротеидов, холестерина и общих фосфолипидов при острой печёночной недостаточности отмечается как явление патогномоничное и патогенетически закономерно связано со снижением резервной щёлочности плазмы крови, гипогликемией и интенсивным снижением содержания сиаловых кислот.

3. Динамика изменений протеинограммы при острой печёночной недостаточности отражает тенденцию к гипопротеинемии, относительной гипергаммаглобулинемии, ретенционной азотемии, протекающих на фоне неконыогированной гипербилирубинемии и креатинемии.

4. Между активностью ацетилхолинэстеразы и трансаминаз при ОПН-снндроме характерна отрицательная регрессия, количественно отражающая степень нарушения антитоксической функции печени.

5. При острой печёночной недостаточности отмечено существенное и опережающее по отношению к плазме крови снижение содержания в печени ретинола вследствие снижения его метаболизации. У телят отмечено достоверное снижение содержания каротиноидов в плазме при замедлении их депонирования печенью.

6. В острой фазе печёночной недостаточности отмечено снижение содержания общего кальция в сыворотке крови при опережающем замедлении его ионизации, что следует рассматривать как признак повышения проницаемости клеточных мембран гепатоцитов и ослабления межклеточных синтициальных взаимодействий, морфологически подтверждаемых методами витальных красителей.

7. Количественной характеристикой интенсивности снижения

белковообразовательной функции печени при острой печёночной недостаточности может служить индекс анаболизма, отражающий отношение количества белкового азота к остаточному азоту в сыворотке крови.

8. Индекс активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови является объективным критерием состояния и степени нарушения ферментообразующей функции гепатоцитов и холестаза. Он возвращается к исходному уровню с завершением репаративных процессов в печени.

9. Объективными признаками и мерой холестаза являются бромсульфалепновая и тимоловая пробы, максимальная выраженность которых совпадает с появлением морфологически выраженных билиарных поражений, не исчезающих полностью с завершением клинической стадии реконвалесценсии.

10. Динамика гематологических показателей при ОПН- синдроме носит неспецифический характер и отражает изменения агрегатного состояния коллоидно-дисперсных систем крови, состояние эксикоза, относительной полицитемии и " левого сдвига " в лейкограмме.

11. Урологический синдром острой печёночной недостаточности состоит в следовой протеинурни и кетонурии, повышении экскрекцни хлоридов, снижении рН и относительной плотности. Морфологически в центрифугате отмечается повышение содержания полигонального эпителия, эритроцитов и лейкоцитов, а также индикана и кровяных пигментов. Неорганизованные включения центрифугата неспецифичны.

12. Морфологически репаративные процессы в печени при ОПН -синдроме завершаются с возвращением к исходному уровню индекса анаболизма, индекса активности щелочной фосфатазы и коэффициента отрицательной регрессии между активностью трансаминаз и ацетилхолинэстеразы. В этой фазе реконвалесценции восстанавливается активность ЛДГ, ГДГ, липазы сыворотки крови, что имеет и основополагающее прогностическое значение.

13. Предложены высокоактивные средства для транзиторной патогенетической и заместительной коррекции полиэтиологической острой печёночной недостаточности и стимуляции гепато - линеальной системы с использованием потенцированных лиофилизированных аллогенных и ксеногенных гепатоцитов, спленоцитов и панкреацитов в индивидуальных фармакологических формах и физиологически адекватных композициях. Оптимальный гепатопротективный эффект получен при энтеральиом и подкожном использовании гепатоцеля и гепатовита в дозе 12 мг/ кг однократно в сутки в течение 5 дней; при интраперитонеальном применешш-в дозе бмг/ кг живой массы; для гесплена энтеральная доза составляет 125 мг/ 10 кг живой массы; интраперитонеальная- 30 мг гепатоцитов и 3 мг спленоцитов, а подкожная - соответственно 60 и 6 мг на 10 кг живой массы.

14. Поливалентные препараты при ОПН - синдроме оказывают более высокое коррегирующее и стимулирующее влияние на функциональную активность гепато-линеальной системы, что указывает на их реципрокное взаимодействие.

15. У клинически здоровых животных при энтеральиом применении разработанных фармакологических средств отмечены активизация промежуточного обмена и рост стимулирующий эффект в пределах 10-12%

2.6 Предложения

1. Разработана технология получения интактных нативных и лиофилизированных потенщгрованных клеток паренхиматозных органов (Решение ВНШ1ГПЭ о выдаче патента на изобретение № 93025259/14 от 28.05.1995. Авторы: Гладских Л.В., Уша Б.В., Беляков И.М., Панин А.Н., Опарин Ю.Г., Бруслик В.Г.).

2. Разработан оригинальный гепатопротективный фармакологический препарат "Гепатоцель" на основе интактных аллогенных и ксеногенных гепатоцитов "Временное наставление по применению Гепатоцеля для собак п порядке широкого производственного опыта", № 9-5-2/78 от 08.06.93;

"Технические условия на опытную партию препарата гепатоцель" № 9332001-206847-93, утв. Департаментом ветеринарии МСХиП РФ).

3. Разработан оригинальный фармакологический препарат для транзиторной коррекции острой печёночной недостаточности - Гепатовит ("Временное наставление по применению препарата гепатовит", № 00199-011 от 25.05.1994; "Технические условия на опытную партию препарата гепатовит", № 9332-002-206847-99. Утв. Департаментом ветеринария МСХиП РФ).

4. Разработан оригинальный двухвалентный фармакологический препарат Гесплен - стимулятор роста и гепато- линеальной системы на основе интактных лиофилизированных гепатоцнтов и спленоцитов ("Временное наставление по применению гесплена в ветеринарии", № 13-52/595 от 26.04.1996 "Технические условия на опытную партию препарата гесплен" от 30.04.1996. Утв. Департаментом ветеринарии МСХиП РФ).

5. Разработан оригинальный трехвалентный фармакологический препарат "Гесптрин" на основе интактных потенцированных лиофилизированных гепатоцитов, спленоцитов и панкреацитов для транзиторной коррекции и стимуляции функциональной активности гепато-линеальной системы, показавший высокую эффективность при полиэтиологическом ОПН - синдроме. (Представляется к утверждению в установленном порядке).

6. Предложены качественные и количественные показатели жизнеспособности, морфологической сохранности и функциональной активности донорских интактных нативных и лиофилизированных гепатоцитов, спленоцитов и панкреацитов в моновалентных и физиологически адекватных композициях.

I 7. Предложены качественные и количественные индикаторное тесты оценки функционального состояния гепато-линеальной системы у продуктивных и пользовательных животных.

Список работ по материалам диссертации

1. Беляков И. М. "Диагностика внутренних незаразных болезней сельско хозяйственных животных." М., Колос, 1975,288 с.

2. Беляков И. М. "Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови." Ветеринария, 1976, №11, с.112

3. Беляков И. М. "Способ определения активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови сельскохозяйственных животных." МСХ СССР, ГУВ, свид. на рац. предл. №115-28/93 от 01.Y1.1976 г.

4. Шарабрин И. Г., Солун А. С., Беликов И. М. и др. "Методические рекомендации по изучению влияния травостоя культурных пастбищ на клинико-физиологическое состояние молочных коров." Одобрены ГУВ МСХ СССР М., ВАСХНИЛ, 1977,82 с.

5. Смирнов А. М., Беляков И. М. и др. "Практикум по клинической диагностике внутренних незаразных болезней сельскохозяйственных животных." JL, Колос, 1978,272 с.

6. Беляков И. М. "Изучение метаболических болезней животных." "Вестник с/х науки", 1979, №4 с. 120-122.

7. Беляков И. М. "Профилактика желудочно-кишечных заболеваний молодняка/ в условиях животноводческих комплексов." (Аналитический обзор) М., ВНИИТЭИСХ, 1979,57 с.

8. Ионов П. С., Беляков И. М., Уша Б. В., Шайхаманов М. X., Шаптала И. П. "Диагностика и терапевтическая техника в ветеринарии."(Справочная книга) М., Колос, 1979,224 с.

9. Коромыслов Г. Ф., Беляков И. М. и др. "Методические рекомендации по биохимическим исследованиям крови и других биологических субстратов с/х животных." М., ВАСХНИЛ, 1980,64 с.

10. Беляков И. М., Обухов Л. М., Белов В. И. "Методические рекомендации по лабораторным методам исследования мочи с/х животных." М., ВАСХНИЛ, 1980, 66 с.

11. Беляков И. М. "Методические рекомендации по клиническому исследованию животных." М., ВАСХНИЛ, 1980,64 с.

12. Беляков И. М. "Методические рекомендации по ферментным методам исследованиям крови животных." М.( ВАСХНИЛ, 1980,49 с.

13. Самохин В. Т., Петров П. Е., Беляков И. М. и др. "Методические указания по применению унифицированных биохимических методов исследований крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях."(Утверждено ГУВ МСХ СССР 03.04.1981) М., ВАСХНИЛ, 1981,83 с.

14. Беляков И. М., Белов В. И. "Профилактика метаболических болезней овец" (Обзорная информация). М., ВНИИТЭИСХ, 1981,60 с.

15. Беляков И. М. "Влияние некоторых факторов на биохимические показатели венозной и артериальной крови в норме и патологии". В кн.: Вопросы ветеринарной науки и практики. Сб. II. тр. МВА, 1974, т. 73, часть 11, с. 169-170.

16. Беляков И. М. "Пропедевтика внутренних незаразных болезней животных". М., Колос, 1984,336 с.

17. Кондрахин И.П., Беляков И.М. и др. "Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии" М., Агропромиздат, 1085,287 с.

18. Смирнов A.M., Беляков И.М. и др. "Практикум по диагностике внутренних незаразных болезней с/х животных". М., Агропромиздат, 1985,255 с.

19. Лукьяновский В.А., Беляков И.М. и др. "Болезни собак". М., Россельхозиздат, 1988,384 с.

20. Смирнов А.М., Беляков И.М. и др. "Клиническая диагностика внутренних незаразных болезней животных". М., Агропромиздат, 1988,512 с.

21. Беляков И.М. и др. "Практикум по клинической диагностике с рентгенологией". М., Агропромиздат, 1992, 288 с.

22. Уша Б.В., Беляков И.М., Гладских Л.В. "Морфологические и биохимические показатели крови и костного мозга животных". М., МГАПБ, 1993 г., 10 с.

23. Беляков И.М., Уша Б.В., Гладских Л.В. "Клинико-лабораторное исследование крови животных". М., МГАПБ, 1993,24 с.

24. Беляков И.М., Гладских Л.В., Штукарева М.Ю. "Получение, динамика морфологического и функционально-метаболического статуса и критерии жизнеспособности изолированных гепатоцитов в связи с использованием в клинической практике". С/х биология, 1994, №2, с.125-136.

25. Уша Б.В., Беляков И.М., Бруслик В.Г. "Опыт лечения при экспериментальном ОПН-синдроме у собак". Тезисы докл. Международной научно-практической конф. "Актуальные проблемы вет.-сан. Контроля с/х продукции " М., МГАПБ, 1995, с.95-96.

26. Бруслик В.Г., Беляков И.М., Уша Б.В. "Экстракорпоральный способ применения изолированных гепатоцитов в лечении печеночной недостаточности". М., ЦНИИГЭ АМН, Мат-лы ХХШ научной сессии, 1996.

27. Уша Б.В., Беляков И.М., Бруслик В.Г. "Новые методы коррекции гомеостаза животных при ОПН-синдроме". Тезисы докл. Международной научно-практической конф. "Актуальные проблемы вет.-сан. контроля с/х продукции". М., МГАПБ, 1995, с.95-96.

28. Беляков И.М. "Клиническое исследование животных". (Учебное пособие). М., МГАПБ, 1996,85с.

29. Беляков И.М. и др. "Болезни собак". М., Нива России, Евразийский регион, 1996,350 с.

30. Беляков И.М. "Ферментные методы исследования крови животных". М., МГАПБ, 1996,50 с.

31. Беляков И.М., Уша Б.В., Бруслик В.Г., Гончаров JI.A. "Временное наставление по применению Гесплена в ветеринарии". Утв. Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 26.04.1996 г. № 13-5-2/595 М., МСХиП РФ, 1996, 20 с.

32. Беляков И.М., Уша Б.В., Бруслик В.Г., Гончаров Л.А. "Гесплен. ТУ на опытную партию". Утв. Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 30.04.1996 г., 11 с.

33. Беляков И.М., Порфирьев И.А. "Методология клинического диагноза и прогноза внутернних болезней животных". М., РУДН, 1995,34 с.

34. Беляков И.М. "Справочные таблицы по курсу пропедевтики внутренних незаразных болезней животных". М., МГУПБ, 1998,104 с.

35. Уша Б.В., Беляков И.М. "Пропедевтика внутренних незаразных болезней животных". М., Квадрат -С, 1998,477 с.

36. Лукьяновский В.А., Беляков И.М. и др. "Лечим собаку" (1 и 11 книги). М., Нива России, 1998,221 е., 173 с.

37. Уша Б.В., Беляков И.М. "Экспериментальное обоснование и сравнительная характеристика терапевтической эффективности использования интактных аллогенных и ксеногенных спленоцитов, гапатоцитов и панкреацитов при острой печеночной недостаточности животных". С/х биология, 1998, № 4, с.14-23.

38. Уша Б.В., Беляков И.М. "Новые высокоэффективные препараты из сырья животного происхождения". Ветеринария, 1999, № 1, с.47-48.

39. Уша Б.В., Беляков И.М. "Транзисторная гепатопротективная терапия при ОПН-синдроме у животных". Аграрная наука, 1999, № 3, с.25-27.

40. Бруслик В.Г., Беляков И.М., Уша Б.В. "Экстракорпоральный способ применения изолированных гепатоцитов в лечении печеночной недостаточности". Мат-лы ХХШ научной сессии ЦНИИ гастроэнтерологии. М., АМН, 1996, с.147-149.

41. Кроха Н.Г., Беляков И.М., Курилова Н.М. "Сравнительная оценка уровня и состояния промежуточного обмена по показателям метаболизма каротиноидов и ретинола в крови и печени". Мат-лы Ш Международной научно-технической конференции "Пища, экология, человек". М., МГУПБ, 1999, с.150.

42. Уша Б.В., Беляков И.М. "Динамика каротиноидного и ретинолового обмена при дисбактериозе и печеночной недостаточности у телят раннего возраста". Мат-лы Ш Международной научно-технической конференции "Пища, экология, человек". М., МГУПБ,1999, с.172.

43. Беляков И.М. "Метрическая система клинической лабораторной диагностики в ветеринарии". М., МГУПБ, 1999,79 с.

44. Уша Б.В., Беляков И.М. "Патогенез постнатального ОПН-синдрома при дисфункции пищеварения". В кн.: "Роль зооветобразования в профилактике болезней и лечения животных". М., МГАВМиБ, с.168-170.

45. Лукьяновский В.А., Беляков И.М. и др. "Здоровье вашей собаки". М., Нива России, 1999. Книга I - 221 е., книга П - 173 с.

1.1 .Актуальность темы.

Понимание природы любого патологического процесса становится возможным при ясном представлении биохимических, анатомо-морфологических и динамических функциональных связей его с клинико-физиологическим состоянием организма как единого целого. При этом одним из важнейших аспектов является выяснение основных структурно-функциональных параметров поражённой ткани, органа или системы, играющих ведущую роль в патогенезе болезни. В этом отношении важнейшее значение приобретает оценка морфо-функционального состояния печени как основного "барьерного" органа, ответственного за поддержание физиологических параметров гомеостаза. Печень ответственна за переработку поступающих в организм метаболитов, синтез большинства белков плазмы крови, прежде всего альбуминов, фибриногена, протромбина, некоторых фракций глобулинов, многих ферментных систем; непосредственно участвует в углеводно-липидном, витаминном обмене, пищеварении. Динамика, последовательность, качественные и количественные параметры, пределы их изменений при различных патологических унитарных, полиэтиологических, первичных и вторичных, острых и хронических, органных, системных нарушениях всегда имеют важнейшее или определяющее значение в обосновании лечебных, профилактических и прогностических заключений.

Различным аспектам этих проблем, в каждом случае носящих свои индивидуальные черты и особенности, посвящено много работ ведущих специалистов как в нашей стране, так и за рубежом ( Аруин Л.И. и др., 1987: Блюгер А.Ф.,1975; Гальперин Э.И. и др., 1978; Григорьев П.Я., Яковенко ЭЛ.,1990; Гулак П.В. и др., 1985; Жаров A.B. и др. 1979; 1995, 1996; Кольцов П.А., Шатихин А.И. 1994; Логиноа A.C. и др. 1984, 1989, 1990; Тармакова С.С-.1999; Лоншакова К.С., 1999; Петров Р.В., 1982; Рысс Е.С., 1983;Селезнёв С.А., 1971;Тареев Е.М.,1976; Уша Б.В., 1979, 1993;

Хазанов А.И.,1988; Шайхаманов М.Х., 1992; Таланов Г.А., Хмелевский Б.Н., 1991; Cugler R., 1981; Howard R., Dersch L., 1968; Kare H.S., 1980; Kolb E., 1979; Seglen P.O., 1976; Vido et AI., 1980 и др.).

Основопологающие по отдельным аспектам проблемы работы этих и других авторов внесли большой вклад как в понимание закономерностей патогенеза полиэтиологических печёночных нарушений, создающих методологическую и методическую основу для лечебно-профилактических и прогностических обоснований, так и в общую концепцию патологии в целом. Вместе с тем, расширение и углубление представлений о роли печени в патогенезе болезней, выработке качественных и количественных критериев оценки её морфо-функциональных показателей в динамике представляет и на современном уровне знаний трудную, многоплановую, но крайне актуальную задачу. До настоящего времени, например, дискуссионным остаётся вопрос о клинической идентификации критериев острой печёночной недостаточности и "печёночной комы" как одной из трёх биологических причин летальности; не сформулирована в законченном виде как терминологическая, так и фактическая сущность этих понятий., по всей сути обычно выходящих далеко за границы представлений об органной патологии. Исходя из этого разработка принципов, методов и способов их идентификации и коррекции остаются актуальной проблемой клинической ветеринарии.

6. Выводы

1. Приоритетными ранними индикаторными тестами при ОПН -синдроме являются определение активности органоспецифических ферментов (ЩФ, ЛДГ, АХЭ, ACT, АЛТ, ГДГ) в крови, уровня липидного, пигментного, ретинолового обмена и анализ нагрузочных проб.

2. Снижение уровня общих липидов, липопротеидов, холестерина и общих фосфолипидов при острой печёночной недостаточности отмечается как явление патогномоничное и патогенетически закономерно связано со снижением резервной щёлочности плазмы крови, гипогликемией и интенсивным снижением содержания сиаловых кислот.

3. Динамика изменений протеинограммы при острой печёночной недостаточности отражает тенденцию к гипопротеинемии, относительной гипергаммаглобулинемии, ретенционной азотемии, протекающих на фоне неконьюгированной гипербилирубинемии и креатинемии.

4. Между активностью ацетилхолинэстеразы и трансаминаз при ОПН-синдроме характерна отрицательная регрессия, количественно отражающая степень нарушения антитоксической функции печени.

5. При острой печёночной недостаточности отмечено существенное и опережающее по отношению к плазме крови снижение содержания в печени ретинола вследствие снижения его метаболизации. У телят отмечено достоверное снижение содержания каротиноидов в плазме при замедлении их депонирования печенью.

6. В острой фазе печёночной недостаточности отмечено снижение содержания общего кальция в сыворотке крови при опережающем замедлении его ионизации, что следует рассматривать как признак повышения проницаемости клеточных мембран гепатоцитов и ослабления межклеточных синтициальных взаимодействий, морфологически подтверждаемых методами витальных красителей. 7. Количественной характеристикой , интенсивности снижения белковообразовательной функции печени при острой печёночной недостаточности может служить индекс анаболизма, отражающий

182 отношение количества белкового азота к остаточному азоту в сыворотке крови.

8. Индекс активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови является объективным критерием состояния и степени нарушения ферментообразующей функции гепатоцитов и холестаза. Он возвращается к исходному уровню с завершением репаративных процессов в печени.

9. Объективными признаками и мерой холестаза являются бромсульфалеиновая и тимоловая пробы, максимальная выраженность которых совпадает с появлением морфологически выраженных билиарных поражений, не исчезающих полностью с завершением клинической стадии реконвалесценсии.

10. Динамика гематологических показателей при ОПН- синдроме носит неспецифический характер и отражает изменения агрегатного состояния коллоидно-дисперсных систем крови, состояние эксикоза, относительной полицитемии и " левого сдвига " в лейкограмме.

11. Урологический синдром острой печёночной недостаточности состоит в следовой протеинурии и кетонурии, повышении экскрекции хлоридов, снижении рН и относительной плотности. Морфологически в центрифугате отмечается повышение содержания полигонального эпителия, эритроцитов и лейкоцитов, а также индикана и кровяных пигментов. Неорганизованные включения центрифугата неспецифичны.

12. Морфологически репаративные процессы в печени при ОПН -синдроме завершаются с возвращением к исходному уровню индекса анаболизма, индекса активности щелочной фосфатазы и коэффициента отрицательной регрессии между активностью трансаминаз и ацетилхолинэстеразы. В этой фазе реконвалесценции восстанавливается активность ЛДГ, ГДГ, липазы сыворотки крови, что имеет и основополагающее прогностическое значение.

13. Предложены высокоактивные средства для транзиторной

I « патогенетической и заместительной коррекции полиэтиологической острой печёночной недостаточности и стимуляции гепато - линеальной системы с использованием потенцированных лиофилизированных аллогенных и ксеногенных гепатоцитов, спленоцитов и панкреацитов в индивидуальных фармакологических формах и физиологически адекватных композициях. Оптимальный гепатопротективный эффект получен при энтеральном и подкожном использовании гепатоцеля и гепатовита в дозе 12 мг/ кг однократно в сутки в течение 5 дней; при интраперитонеальном применении-в дозе 6мг/ кг живой массы; для гесплена энтеральная доза составляет 125 мг/ 10 кг живой массы; интраперитонеальная- 30 мг гепатоцитов и 3 мг спленоцитов, а подкожная - соответственно 60 и 6 мг на 10 кг живой массы.

14. Поливалентные препараты при ОПН - синдроме оказывают более высокое коррегирующее и стимулирующее влияние на функциональную активность гепато-линеальной системы, что указывает на их реципрокное взаимодействие.

15. У клинически здоровых животных при энтеральном применении разработанных фармакологических средств отмечены активизация промежуточного обмена и рост стимулирующий эффект в пределах 10-12%

7. Предложения

1. Разработана технология получения интактных нативных и лиофилизированных потенцированных клеток паренхиматозных органов (Решение ВНИИГПЭ о выдаче патента на изобретение № 93025259/14 от 28.05.1995. Авторы: Гладских JI.B., Уша Б.В., Беляков И.М., Панин А.Н., Опарин Ю.Г., Бруслик В.Г.).

2. Разработан оригинальный гепатопротективный фармакологический препарат "Гепатоцель" на основе интактных аллогенных и ксеногенных гепатоцитов "Временное наставление по применению Гепатоцеля для собак в порядке широкого производственного опыта", № 9-5-2/78 от 08.06.93; "Технические условия на опытную партию препарата гепатоцель" № 9332-001-206847-93, утв. Департаментом ветеринарии МСХиП РФ).

3. Разработан оригинальный фармакологический препарат для транзиторной коррекции острой печёночной недостаточности - Гепатовит ("Временное наставление по применению препарата гепатовит", № 00199-011 от 25.05.1994; "Технические условия на опытную партию препарата гепатовит", № 9332-002-206847-99. Утв. Департаментом ветеринарии МСХиП РФ).

4. Разработан оригинальный двухвалентный фармакологический препарат Гесплен - стимулятор роста и гепато- линеальной системы на основе интактных лиофилизированных гепатоцитов и спленоцитов ("Временное наставление по применению гесплена в ветеринарии", № 13-5-2/595 от 26.04.1996 "Технические условия на опытную партию препарата гесплен" от 30.04.1996. Утв. Департаментом ветеринарии МСХиП РФ).

5. Разработан оригинальный трехвалентный фармакологический препарат "Гесптрин" на основе интактных потенцированных лиофилизированных гепатоцитов, спленоцитов и панкреацитов для транзиторной коррекции и стимуляции функциональной активности гепато-линеальной системы, показавший высокую эффективность при полиэтиологическом ОПН - синдроме. (Представляется к утверждению в установленном порядке).

6. Предложены качественные и количественные показатели жизнеспособности, морфологической сохранности и функциональной активности донорских интактных нативных и лиофилизированных гепатоцитов, спленоцитов и панкреацитов в моновалентных и физиологически адекватных композициях.

7. Предложены качественные и количественные индикаторные тесты оценки функционального состояния гепато-линеальной системы у продуктивных и пользовательных животных.

5. Заключение

Анализ литературных данных и результатов исследований по изучению патогенеза полиэтиологического синдрома острой печёночной недостаточности показывают, что эта проблема продолжает оставаться одной из наиболее актуальных задач науки и клинической ветеринарии. Вместе, с тем, как видно из результатов экспериментальных исследований , понимание и объективная оценка качественных и количественных критериев патогенеза клинико-физиологических и морфофункциональных закономерностей при полиэтиологическом ОПН-синдроме, особенно в терминальных ситуациях, открывает и саму возможность её коррекции, а также стимуляции процессов реконвалесценции и репарации.

В результате проведённой работы была исследована совокупность, последовательность и реципрокная обусловленность динамики возникающих при острой печёночной недостаточности нарушений, роль в этих процессах функционального состояния гепато-линеальной системы, патогномоничность отдельных и совокупых критериев патогенеза гомеостаза в целом при ОПН-синдроме. Полученные средства патогенетической транзиторной экстракорпональной коррекции полиэтиологической острой печёночной недостаточности и стимуляции функциональной активности гепато-линеальной системы на основе потенцированных интактных нативных и лиофилизированньк аллогенных и ксеногенных гепатоцитов, спленоцитов и панкреацитов в моновалентных и поливалентных физиологически адекватных композициях позволяют успешно решать клинические задачи в неотложных, экстремальных и терминальных ситуациях. Показана принципиальная и практическая возможность прогнозирования и предупреждения возникновения острой печёночной недостаточности на основе предложенной совокупности "сигнальных" тестов, имеющих основополагающее значение в патогенезе метаболических нарушений.

Функциональное ослабление печени в динамике морфологических проявлений состоит в последовательно нарастающих процессах альтерации, снижения гомогенности и просветления ядерной субстанции, зернистой, белковой, жировой дистрофии; гипобиоза, некробиоза и цитолиза в сочетании с гистиоцитарной, лейкоцитарной, особенно лимфоцитарной инфильтрацией ретикулярных стромальных структур, перипортальных и билиарных трактов (цитолиз); дискомплексацией и аннигиляцией в некробиотических очажках трабекулярной, балочной архитектоники; прогрессирующего холестаза, венозного застоя крови, чёткой выраженности пространств Диссе и эпителиальной пролиферации слизистой оболочки желчных протоков.

Печень преобретает дрябловатую консистенцию, увеличина, с поверхности имеет неравномерней саговый вид, иногда, заметны петехии в глассоновой капсуле, выражена портальная гипертензия (полнокровие в системе воротной вены). Слизистая желчного пузыря гиперемична, с признаками отёка, Ductus choledochus сужен, с выраженным валиком на выходе в 12-перстную кишку.

Кардиальный морфологический комплекс при остром гепатите, состоит в возникновении диффузной картины альтерации с появляющимися и возрастающими признаками зернистой миокардиодистрофии. В миокарде снижается содержание гранул формазана (признак снижения ферментативной окислительно-восстановительной активности). На ЭКГ вольтаж зубца R снижен, расширен комплекс QRS, зубец S в третьем отведении низкий и глубокий ("левограмма") в максимуме возбуждения желудочков. Сегмент ST распологается ниже изопотенциальной линии, а зубец Т уменьшен (характерный признак дистрофии миокарда). Интервал Р-Q увеличивается, указывая на снижение функций проводимости и возбудимости миокарда, возможна спонтанная экстрасистолия.

Возникают также морфологические признаки начинающегося панкреатита: увеличение органа в объёме, его лимфоцитарная и гистиоцитарная импрегнация; застои секрета, стриктура протока и катаральное состояние его слизистой.

Урологический синдром морфологически дополняется картиной развития острого очагового диффузного гломерулонефрита: отёчностью коркового слоя, гиперемией клубочков, отёчностью капсул Боумена-Шумлянского с признаками лимфоцитарной инфильтрации. В извитых канальцах вторичного порядка местами обнаруживаются зернистые цилиндры и цилиндроиды, иногда с лейкоцитарной и эпителиальной импрегнацией.

Селезёнка гиперемирована, несколько увеличена, уплотнена, сочная, при надавливании на разрезе выделяется красно-бурая кашицеобразная пульпа. Возникают признаки гиперплазии. Фолликулы селезёнки увеличены, гиперемированы; ретикулярная формация чётко обозначена, с признаками серозной инфильтрации, эозинофильна.

Клинические проявления дисфункции пищеварения (диареи) дополняются и конкретизируются при острой печёночной недостаточности симптомокомлексом патоморфологических изменений в виде эксудативного катарально-серозного гастро-дуоденита с вовлечением в процесс и дистальных отделов кишечника по мере усиления печёной недостаточности. Характерны полнокровие слизистой- отёчность, обилие полиморфноядерных лейкоцитов и десквамированного эпителия, полнокровие подслизистого слоя.

Энзиматическая недостаточность выступает в виде копрологического синдрома: повышения рН, креатореи, наличия крахмала, скрытой крови и кровяных пигментов, стеатореи, возрастания дисбактериоза (содержания грамнегативной микрофлоры), содержания полиганального эпителия, появления индикана, меркаптана, фибрина, белкового эксудата, снижения активности ЩФ-азы и энтерокиназы, снижения содержания стеркобилина. Таким образом, морфологический комплекс при острой печёночной недостаточности выходит далеко за пределы только органной патологии, что и следует учитывать при комплексной коррекции патогенеза возникающих в организме нарушений.