Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармакотоксикологические свойства Реамберина

На правах рукописи

ПЕТРОВ Александр Николаевич

ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА РЕАМБЕРИНА

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Санкт - Петербург 2003

Работа выполнена на кафедре фармакологии и токсикологии Санкт -Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, в .тбораюрии НТФФ ПОЛИСАН, в Институте Токсикологии Минздрава РФ. в клинике доктора Валеевой и Институте ветеринарной биологии.

Научный руководитель - доктор биоло1 ических наук, профессор

Андреева Надежда Лукояновна

Научный консультант - доктор биологических наук

Андросов Николай Сергеевич

Официальные оппоненты:

- доктор ветеринарных наук Соколова Лидия Николаевна

- кандидат ветеринарных наук Селютина Ольга Сергеевна

Ведущая организация - Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина

Защита диссертации состоится « 25 » декабря 2003 г. в « 13 » часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.03 при Санк1 -Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (196084, Санкг - Петербург, ул. Черниговская, дом 5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт -Пе1ербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Автореферат разослан ноября 2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

Черкай З.Н.

2.0Q5 -/4,

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В клинической практике ветеринарных врачей довольно часто наблюдаются состояния тяжелой эндогенной интоксикации и тканевой гипоксии, возникающие у животных при различных видах заболеваний.

При этом тканевая гипоксия, т.е. нарушение процессов тканевою дыхания, существенно осложняет течение основного заболевания, поскольку приводит к запуску целого комплекса негативных процессов в opi анизме больного.

Гипоксия является одним из ведущих компонентов в синдроме как экзО-, так и эндогенных интоксикаций, вызванных различными ксенобиотиками.

В част нос i и, тканевая гипоксия играет замешую роль в формировании патологических процессов, связанных с активацией свободнорадикального окисления и истощением возможностей системы антиоксидантной и антиперекисной защиты.

В то же время, одним из основных повреждающих факторов, формирующих критические состояния, является нарушение про - и антиоксидантных систем, получившее название «окислительного стресса».

В последние годы доказана важная роль процессов свободно-радикального окисления липидов клеточных мембран в развитии [епаюцеллюлярного повреждения (Romero F.J., Bosch-Morell F., Romero M.J.. Jareno E.J. 1988; Look M.P., Gerard A., Rao G.S., Sudhop T. 1999). Практика показывает, что печеночно-клеточная недостаточное гь. возникающая вследствие дисфункции гепатопитов, - явление хараюерное для критических состояний любых этиологий. Предотвращение процессов цитолиза в больном организме (и в первую очередь - цитолиза ¡сиаюциюв) одно из лечебных мероприятий, которое позволит ветеринарному врачу сделать течение заболевания более благоприятным.

Снижение тяжести гипоксии и ее последствий, обусловленных нарушением транспорта и утилизации кислорода, позволит в свою очередь препятствовать дальнейшему прогрессированию нарушений системы гомеостаза.

Интенсивная терапия критических состояний у собак с тяжелыми инфекционными заболеваниями, отравлениями, возникшими в ходе хирургических вмешательств или травм, - требует быстрого применения наиболее эффективных в конкретном случае препаратов. В го же время список препаратов, корректирующих нарушения биохимических процессов в организме животных, не слишком велик.

Например, антигипоксанты и антиоксиданты в виде инфузионных растворов, т.е. способных максимально быстро прглщтггт по irr прпцтп и

1 Рос. национальная! библиотека J

1кани больного животного, вообще до недавнего времени отсутствовали в арсенале ветеринарного врача.

Исследователи давно пытались создать лекарственные препараты, использующие комплекс положительных биологических эффектов субстратного антигипоксаша - янтарной кислоты. Реамбсрин - первый инфузионный препарат янтарной кислоты, созданный Петербургской научно-технологической фармацевтической фирмой «Полисан», на протяжении нескольких лет позволяет медикам на практике успешно реализовывать все положительные эффекты сукцината.

Поэтому нам представлялось весьма целесообразным изучить возможность применения этою отечественного аншгипоксическо!о и деюксицирующего препарата Реамберин в терапии эндогенных интоксикаций различной этиологии у собак.

Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось комплексное изучение безвредности и терапевтической эффективности препарата Реамберина в терапии критических состояний ор1 анизма собак.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

• изучить в лабораторных условиях острую, подострую и хроническую токсичность препарата Реамберин;

• изучить в лабораторных условиях цитопротективное и I епагоиротекторное действие препарата Реамберин;

• определить эффективность препарата Реамберин в терапии эндогенных интоксикаций различных этиологий у собак.

Научная новизна. Впервые проведен комплексный анализ динамики биохимических маркеров эндогенной интоксикации, течения перекисных процессов цитолиза и функционального состояния гепатоцитов у собак с синдромом эндогенной интоксикации различной этиологии.

Выяснена и обоснована эффективность применения препарата Реамберин в практике ветеринарного врача мелких домашних животных при терапии эндогенных интоксикаций различного генеза. Практическая ценность работы. Получены научно-обоснованные результаты применения Реамберина, как средства антигипоксической и дегоксицирующей терапии собак.

Разработано временное наставление по применению Реамберина в ветеринарии.

Полученные данные используются в учебном процессе на кафедре фармакологии и токсикологии Санкт - Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

На защиту выносятся. Научно-обоснованные рекомендации по применению Реамберина в ветеринарии.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуж^1гды..наХ11, XIII, XIV международных, межвузовских конференциях «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт Петербург.

2000. 2001, 2002 г.г.), а также на конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов Санкт - Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Публикации научных исследований. По материалам диссерт ационнон работы опубликовано 5 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 168 страницах компьютерного текста, содержит 48 таблиц, 27 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений. Список литературы включает в себя 214 источников, в том числе 54 зарубежных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы и методы исследований

Исследования проведены на кафедре фармакологии и токсиколо! ии Санкт- Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, в лабораюрии НТФФ ПОЛИСАН, в Институте Токсикологии Минздрава РФ, в клинике доктора Валеевой и в институте ветеринарной биологии.

В лабораторных экспериментах использовали 1086 белых крыс, 210 белых мышей, 30 морских свинок, 7 собак. Клинические испытания проведены на 16 собаках.

В работе использовали раствор для внутривенных инфузий Реамберин, разработанный в Санкт - Петербургской научно-[схнологической фармацевтической фирме «Полисан». В ходе лабораторных исследований Реамберин вводили внутривенно (в случае необходимости перорально) различным подопытным животным, проверяя безвредность препарата и сравнивая его действие с препаратами: оксибутираг натрия, пирацетам, мафусол, карсил. В ходе клинических испытаний препарат вводили внутривенно животным, поступившим в клиники с симптомами тяжелой эндогенной интоксикации различной этиологии.

Препарат Реамберин представляет собой раствор для инфузий следующего состава: натрия хлорид - 6.0 г; калия хлорид - 0,3 г; магния хлорид - 0,12 I: N41 -дсзокси-О-глюцитол-1 ил)-1Ч-метиламмония натрия сукцината - 15.0 г; вода для инъекций—до 1 л.

1-дезокси-1-(Н-метиламино)-с1-глюцитол (МГА) является

нетоксичным высокоактивным солеобразующим и стабилизирующим агентом и использован в составе Реамберина для улучшения фармакологических и фармакокинетических свойств. Основное действующее вещество в составе Реамберина - натрия сукцинат является солью янтарной кислоты.

Основной фармакологический эффект препарата обусловлен способностью сукцината усиливать компенсаторную активность аэробного гликолиза, снижать степень угнетения окислительных процессов в цикле Кребса в условиях гипоксии с увеличением содержания АТФ и креатинфосфата. Рсамбсрин активизирует антиоксидантную систему ферментов и тормозит процессы перекисного окисления липидов в ишемизированных органах, оказывая мембраностабилизирующсе действие.

Прежде чем приступить к оценке эффективности Реамберина в лабораторных и клинических условиях, мы провели исследования безвредности препарата.

Для оценки острой токсичности препарат Реамберин вводили белым мышам и крысам внутривенно и внутрижелудочно (через атравмагический зонд) в возрастающих дозах.

При оценке подострой и хронической токсичности в эксперименте на крысах и собаках изучали действие терапевтической дозы (245 мг/кг) и дозы, превышающей терапевтическую в 10 раз (соответственно 2450 мг/кг). Учитывая трудности с внутривенным введением животным, им вводили указанные дозы в форме 10% и 25% растворов. При этом собакам внутривенная инфузия препарата проводилась в течение 90 дней в различные вены, а крысам препарат вводили внутривенно в течение 30 дней. Затем переходили на пероральное введение. В ходе эксперимента контролировали динамику массы тела; потребление корма и воды: дсюксицирующую функцию печени (по продолжительности гсксеналового сна); проводили анализ мочи до применения препарата, через 30 и 90 дней после начала применения; регистрировали спонтанную двигательную активность крыс при помощи автоматического регистратора «Coulburn Instruments», где каждые 5 минут на протяжении 35 минут регистрировалось количество движений; через 90 дней после начала эксперимента исследовали показатели периферической крови и характер миелограммы; у крыс по 10 животных каждого пола из каждой экспериментальной группы после 30 и 90 дня опыта подвергали вскрытию.

Оценку иммунотоксического и аллергенного действия Реамберина проводили на мышах линии СВА, морских свинках и крысах обоего пола, при этом исследовали отдельно реакцию общей анафилаксии, непрямую реакцию дегрануляции тучных клеток, определяли массу лимфоидных органов, фаюцитарную активность макрофагов, титр гемаглютининов в сыворотке крови, выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа.

После изучения безопасности Реамберина, были проведены лабораторные исследования терапевтической эффективности препарата в различных условиях и в сравнении с другими препаратами.

Цитопротективное действие Реамберина было исследовано на самках мышей линии СЗН/Sn, полученных из питомника Ранполово РАМН, генетически предрасположенных к опухолям молочной железы. Начиная с 3,5 месячного возраста, мыши получали 5 раз в неделю в течение всей жизни перорально 0,2 мл водопроводной воды (контроль) или 0,2 мл Реамберина. Животных ежедневно подвергали пальпированию на наличие опухолевого роста. Павших животных подвергали аутопсии.

Гепатопротекторное действие Реамберина изучали на модели офавления барбамилом. четыреххлористым углеродом (острое и хроническое), хлористым аммонием. Исследования проводили на крысах, препаратами сравнения служили Пирацетам, Мафусол, Карсил

В ходе клинических испытаний Реамберин в терапевтических дозах вводили собакам (самцам), поступившим с признаками тяжелой эндогенной интоксикации, различной этиологии. До лечения и через 3 дня ишенсивной терапии, включавшей Реамберин, осуществляли контроль семнадцати биохимических показателей крови: АЛТ, ACT, щелочная фосфатаза, кислая фосфатаза, -ЛДГ, церулоплазмин, тимоловая проба, общий белок сыворотки, общие липиды сыворотки, глюкоза сыворотки, холестерин, билирубин,- SH-группа, малоновый диальдегид, ВНСММ, олитпептиды, СОЭ. Все биохимические исследования проводили по общепринятым методикам.

В юрой этап клинических исследований проводили в клинике и лаборатории института ветеринарной биологии. В ходе эюго этапа мы снова исследовали собак, поступавших в клинику с симптомами эндогенной интоксикации, и контролировали динамику изменений некоторых биохимических показателей крови в процессе лечения. Взятие крови производили при поступлении, на третий и на пятый день терапии, включавшей Реамберин. Изучали динамику показателей АЛТ, ACT и креатинина.

Цифровые данные подвергнуты статистической обработке. Различия между относительными величинами "оценены с помощью критерия Стьюдента, рассчитанного по формуле относительных величин.

Автор выражает глубокую признательность и благодарность научному руководителю - доктору биологических наук, профессору Андреевой Н.Л.. заведующему кафедрой фармакологии и токсикологии профессору Соколову В.Д., а также заведующему лаборатории института токсикологии Минздрава РФ Колбасову С.Е., коллективам НТФФ ПОЛИСАН. клиники доктора Валеевой и института ветеринарной биологии за консультации, методическую и практическую помощь в проведении исследований.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Исследования безвредности Реамберина

Была изучена острая, подострая и хроническая токсичность препарата Реамбсрин. При изучении острой токсичности препарата, для крыс-самцов была определена ЛД» = 10800 ± 1700 мг/кг. При этом для снижения гиперволемической нагрузки на сердце использовали более концентрированный раствор - 10%. Подострую и хроническую гоксичнос1ь Реамберина изучали на крысах в терапевтической и дсся!икра!ной дозах, в период от 30 до 90 дней, первые 30 дней внутривенно, а затем перорально. По результатам вскрытия и гистологического исследования ежедневное введение препарата Реамберин в дозах 245 и 2450 мг/кг внутривенно в течение 30 и в дозах 2450 и 24500 мг/кг перорально в период от 30 до 90 дней крысам обоего пола не вызывало изменений в месте введения - стенке вены, гиперемий, эрозий или кровоизлияний в слизистой пищевода и желудка, а также не сопровождалось развитием дистрофических, деструктивных, очаговых склеротических изменений в паренхиматозных клетках и строме внутренних органов.

Далее изучали аллергенное и иммунотоксическое действие Реамберина. В соответствии с методическими рекомендациями Фармкомитета при изучении сенсибилизирующих свойств препарата Реамберин была оценена возможность развития анафилактического шока после внутрибрюшинного введения морским свинкам обоего пола терапевтической и в 10 раз большей дозах этого препарата в течение 30 дней. В контроле (К) животные получали равный объем изотонического рас Iвора. Через 21 день после окончания введения препарата веем подопытным и контрольным группам была введена разрешающая доза Реамберина. При этом не выявили симптомов анафилактического шока ни у одного животного из группы самок или самцов морских свинок. В контрольных группах самок и самцов также не обнаружили никаких реакций на введение препарата.

Исследовали влияние препарата на массу иммунокомпетенгных органов животных при внутривенном пути введения. Не было обнаружено различий в массе тимуса и селезенки у животных из контрольных и подопытных групп. По результатам вскрытия и макроскопического исследования оказалось, что введение препарата Реамберин в подосгром эксперименте в терапевтической и в деся I ь раз большей дозах к изменению массы центральных органов иммунной системы не приводит.

Таким образом, полученные экспериментальные данные позволяют заключить, что препарат Реамберин не токсичен и не обладает аллергенными и иммунотоксическими свойствами.

3.2. Цитопротективное действие Реамберина

Нами было проведено исследование действия продолжительного введения Реамберина на возникновение спонтанных опухолей у мышей высокораковой линии СЗН/Sn. В результате введения Реамберина в субпопуляции долгоживущих мышей (проживших более 470 дней) наблюдалось существенное уменьшение частоты спонтанных опухолей и увеличение средней продолжительности жизни (табл. 1). Так, на 68 дней увеличилась средняя продолжительность жизни животных и более чем в 5 раз снизилась часкма новообразований. Известно, что развитие опухолей молочной железы у самок мышей СЗН обусловлено вирусом рака молочной железы (MTV) [Головкин В. А и соавт. 1991]. Одной из причин о i четливого тормозящего возникновения опухолей молочной железы у мышей действия Реамберина может быть его нормализующее влияние на энергетику митохондрий, пораженных вирусом [Агпамазян Э.К.. и соавт. 1997]. Существенную роль, по-видимому, играет нормализующее действие сукцината на энергообеспечение центров нейроэндокринной системы, в частности, способность ЯК снижать порог чувствительности гипогаламо-гипофизарной системы к гомеостатическим сигналам [ Ковспенко А.Л., Шигарова Л. В. 2000].

Таблица !.

Противоопухолевое действие Реамберина

Показатель Мыши, прожившие > 470 дней, контроль Мыши, прожившие > 470 дней, Реамберин

Кол-во мышей 12 12

СПЖ, дни 570 638*

МПЛГ -Т.н. "" -Л"" fsAI 839

Кол-во мышей с 12(100%) 1" (18%)

опухолями

Число опухолей 26' 2

Число опухолей на 1 2.17 1.00

мышь

Аденокарцинома 9(75%) 2х (18%)

молочной железы

Лейкоз 4 0

Прочие опухоли 0 1

Примечания: * разница с контролем достоверна, Р < 0.05.

Следовательно, полученные результаты позволяют сделать вывод, что Реамберин обладает циюнротективным и противоопухолевым действием.

3.3. Гепатопротекчявное действие Реачберина

Четыреххлористый углерод (ЧХУ) относится к числу наиболее aipecciiBHbix ксенобио1Иков. Одним из ключевых звеньев naioiенеза травления ЧХУ. как и многими друтми химическими веществами, являйся тканевая гипоксия [Кигаь Г Б. Харабаджахьян АВ, 197Н] ЧХУ является специфическим тенатотронным ядом, вызывающим в с\блега.1ьных дозах развитие острот и хронического lenaima. цирроза печени ¡Holland J.J , Kennedy S.l.T J980. Shubert M.. Joshi В . 1992].

Острое юксическое повреждение печени вызывали подкожным введением живо i ным сублетальной дозы ЧХУ - 4 мл/ki (50% раствор на вазелиновом масле). Реамберин (100 и 250 мг/кг). препараты сравнения Пирацетам (200 мг/кг) и Мафусол (200 мг/ki) вводили внутрибрюшинно за 30 мин. до отравления ЧХУ. Об эффективности исследуемых препаратов судили по выживаемости животных. Наблюдения вели в течение трех суток. Полученные данные (табл. 2) свидетельствуют. что внуфибрюшинная инъекция летальной дозы ЧХУ приводила к гибели 90"о животных в течение 72 часов. Введенные за 30 мин до инъекции ЧХУ Реамберин (100 и 250 мг'кг), Пирацетам и Маф\сол. снижали смертность живо1ных за этот же период времени лишь на 10% .

Таким образом. Реамберин в исследованных дозах, также как и препараты сравнения, не оказывал выраженного ан!токсического действия при остром отравлении одним из агрессивных токсикантов -чстыреххлористым углеродом.

Таблица 2

Влияние Реамберина на выживаемость крыс при введении летальной дозы

ЧХУ

Группа животных Кол-во животных в опыте Погибшие животные. % Выжившие животные. %

■ЧХУ 20 90 ¡0

Реамберин 100 мг/ki - ЧХУ 20 80 20

.Реамберин 250 мг/кг - ЧХУ 1 20 80 20

'Пирацетам - ЧХУ 20 80 20

Мафусол - ЧХУ 20 80 20

Наличие антигиноксических свойств у Реамберина послужило основанием лля изучения его гепаюпро гекторно! о действия при хроническом токсическом повреждении печени гепатотропным ядом ЧХУ

Для моделирования хроническою поражения печени ЧХУ вводили крысам внутрибрюшинно в дозе 0.4 мл'кг (50% раствор на вазелиновом масле), ежедневно в течение четырех суток. На седьмые су1ки от начала введения ЧХУ развиваются наибольшие морфолот ические и функциональные изменения в ткани печени. При исследовании 1снагопро1ек1орного эффекта Реамберина (100 и 250 мг'кг). пирацетама (200 М1 К1) и карсила (20 мг/кт) все указанные вещества вводили животным внуфибрюшинно два раза в сутки в течение 10 суток (за ¡рое сугок до начала затравки ЧХУ. в течение четырех суток вместе с ЧХУ и трое суюк после окончания инъекций ЧХУ)

Антитоксическую функцию печени оценивали по продолжи тельност и гекссналового сна. отражающего состояние микросомальной ферментативной системы, метаболизирующей ксенобио1Ики. Гексенал вводили животным с токсически поврежденной печенью внутрибрюшинно в дозе 80 мг/кг. О степени повреждения печеночной ткани судили с помощью таких биохимических тестов, как содержание малоновою диа тьдегида (МДА) и гликогена, о пигментообразователыюп функции по ч ровню билирубина в сыворотке крови (табл. 3).

У животных, получавших Реамберин (100 и 250 мт/кл) и карсил, продолжи 1сльностъ Iексеналового сна заметно сокращалась по сравнению с труппой контроля (на 102-99% и 130% соответственно). Следовательно, по своем} антитоксическому эффект\ Реамберин в дозе 100 и 250 м! кг приближался к Iепатопротектору карсилу. Другой препарат сравнения -пирацетам не оказывал влияния на продолжительность Iексеналового сна животных с поврежденной печенью (22.1 ± 0.94 против 22.7 ± 0.90 мин в контроле).

Токсическое повреждение печени ЧХУ у крыс сопровождалось увеличенном количества малонового диальдегида МДА на 75°о, ню свидетельствует об усилении интенсивности процессов ПОЛ. В !кани печени ошечалось значительное снижение содержания гликогена (с 7.4 ~ 1 до 3.7 ± 0 30 г%), демонстрирующее нарушение углеводною обмена Кроме того, отмечалось увеличение концентрации билирубина в сыворотке крови (с 28 9 1.9 до 53.0 ± 3.8 мкм.л). отражающее нарушение шп ментообразоватсльной функции печени.

Использованные с лечебной целью Реамберин (100 и 250 мт'кг). пирацетам и карсил в равной степени снижали уровень МДА в ткани печени, препятствовали истощению запасов гликогена в тспатоцитах и оказывали защитное действие на пигментообразовательную функцию печени, снижая уровень билирубина до исходной величины.

Таблица 3

Защитное действие Реамберина при экспериментальном токсическом повреждении печени ЧХУ

Группа животных Время гексеналового сна МДА, нМ/г Гликоген печени, г% Билирубин. мкМ/л

мин. %

Ингактные 8 7+0.84 100 2.8+0.14 7 4+13 28 9+ 1.9"'

ЧХУ (контроль) 22 7+0.9* 261 4.9+_0.21"- 3.7+ 0.30" 53.0^3.8"

Реамберин 100 мг/кг -ЧХУ 13.8+2.1* 159 3.3±0.11* 7 3+0.57* 27.0+2.4"

Реамберин 250 мг/кг + ЧХУ 14.1+_2 9* 162 3.1+0.25* 6.8±0.51* 27.9+ 2.2*

Пирацетам ЧХУ 22.1+0.94* 254 3.8+0.20* 7.6+. 1.1" 29.7+.2.1*

Карсил + ЧХУ 11.4+1.1* 131 3.1+.0.15* 7.2+0.73" 25.0+1.8-

Примечание: * - достоверные отличия от показателей в интактной группе (Р<0,05).

3.4. Клинические исследования

Нами было исследовано шесть собак (самцов) поступивших с клиникой тяжелой эндогенной интоксикации, как правило, инфекционной этиологии. Клинически у всех животных отмечали угнетенное состояние, понос и (или) рвоту, анорексию, обезвоживание, снижение тургора кожи, тусклость шерстного покрова.

В ходе исследования терапевтического действия «Реамберина» при токсических состояниях у собак осуществляли ежедневный внешний осмотр и контроль семнадцати биохимических показателей крови до лечения и через 3 дня интенсивной терапии, включавшей «Реамберин».

Первый анализ крови, взятый у собак при поступлении, выявил у всех животных повышение показателей AJIT, ACT, ЛДГ, церулоплазмина, холестерина, билирубина, тимоловой пробы, СОЭ - что подтверждало наличие острых воспалительных процессов в печени. Повышение уровней щелочной фосфатазы и кислой фосфатазы свидетельствовали об интенсивных процессах цитолиза, в первую очередь - 1епатоцигов. Снижение общего белка и общих липидов указывает на снижение синтетической функции печени, развившейся в результате патологии opiaHa. При этом снижение SH-группы показало снижение синтеза глутатиона, необходимого для работы обезвреживающей системы печени.

Значительное повышение уровня малонового диальдегида явилось показателем активно идущих процессов перекисного окисления липидов в организме. Биохимическим тестом, подтвердившим наличие тяжелой эндогенной интоксикации, стали исследования веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) и олигопептидов. Таким образом, у вссх животных было зафиксировано усиление процессов ПОЛ, состояние сильной эндогенной интоксикации и печеночно-клеточной недостаючности, развившихся в результате инфекционных заболеваний или отравлений. После трех дней лечения у больных было отмечено улучшение общего состояние, повышение активности, прекращение поноса и (или) рвоты, уменьшение обезвоживания, повышение тургора кожи, улучшение состояния шерстного покрова. Для повторного проведения комплекса биохимических исследований были взяты пробы крови у каждого животного.

Улучшение состояния животных выразилось в тенденции к нормализации практически всех исследованных биохимических показателей. что подтверждало снижение степени эндогенной интоксикации, интенсивности процессов перекисного окисления липидов, цитолиза гепатоцитов, улучшение функционального состояния [етш оцитов: уменьшение воспалительных процессов, нормализацию синтетической функции печени.

АСТ

АЛТ

2

пробы крови

3

2

пробы крови

3

рис.1. Динамика активности АСТ (ед.изм. мккаг/л)

рис.2. Динамика активности АЛТ (ед.изм. мккат/л)

На рисунках 1-4 приведено графическое изображение динамики показателей АЛТ, ACT. малонового диальдегида и ВНСММ.

(1) - показатель при поступлении в клинику,

(2) - при повторном исследовании,

(3) - норма.

пробы крови пробы крови

рис.3. Показатели МДА

(ед.изм. нмоль'мг белка)

В следующем эксперименте отслеживали динамику основных биохимических маркеров состояния печени и креатинина в ходе трех отборов проб: при поступлении в клинику (1), на третий (2) и на пятый день терапии (3).

Проведенные исследования состояния АЛТ, ACT и креатинина демонстрировали стабильную динамику нормализации по всем показателям во втором и третьем отборе, с тенденцией к полной нормализации после лечения.

Эти данные полностью соответствовали клиническим проявлениям улучшения состояния пациентов: исчезновение рвоты, поноса, повышение тургора кожи, повышение активности животных, появление аппетита; а !акже данным литературы и результатам лабораторных исследований о I епатопротективном эффекте Реамберина.

рис. 4. Динамика показателя ВНСММ

(f\n тли4 v а ^ yv^.ium. j , v. f

4. ВЫВОДЫ

1. Реамберин в рекомендованных терапевтических (150 - 245мг/кг по СН или 10 - 15 мл/кг раствора в сутки), а также десятикратно превышенных дозах не проявляет токсического действия на основные жизненно важные системы организма: сердечнососудистую, дыхательную, выделительную, а также на функцию печени и на показатели гомеостаза.

2. Реамберин в рекомендованных терапевтических дозах, а также десятикратно превышенных дозах не обладает аллер! енными и иммунотоксическими свойствами.

3. Установлено цитопротективное действие у Реамберина.

4. Гепатопротекторное действие Реамберина на лабораторных животных и плотоядных, сопоставимо с таковым известного импортного гепатопротектора карсила.

5. Реамберин улучшает дезинтоксикационную функцию печени, активирует антиоксидантную систему ферментативного звена, снижая процесс перекисного окисления липидов, обладае! мембраностабилизирующим действием.

6. На фоне лечения Реамберином отмечается улучшение общею состояния пациентов, снижаются проявления эндогенной интоксикации и сокращаются сроки лечения и реабилитации.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Реамберин может быть рекомендован для применения в повседневной практике ветеринарного врача в качестве дезинтоксикационного, антигипоксического. мембраностабилизирующего средства при нарушениях гомеостаза, токсических состояниях различной этиологии, гипоксических состояниях различного генеза (критические состояния, ранний постоперационный период, массивная кровопотеря. острая сердечная недостаточность, различные виды дыхательной недосточности, нарушения кровообращения органов и тканей), на фоне гепатитов разной этиологии.

2. Разработано временное наставление по применению «Реамберина» в ветеринарии (представлено в ветбиофармсовет).

3. Полученные результаты используются в учебном процессе на кафедре фармакологии и юксикологии Санкт - Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Петров А.Н. Оценка эффективности препарата Реамберин на течение заболеваний, сопровождающихся сильной интоксикацией. Экспресс-информация «Новые ветеринарные препараты и кормовые добавки». СПб., 2001.-Вып.9.-С.20-22.

2. Соколов В.Д. Петров А.Н. Влияние сукцината натрия на процессы жаневого дыхания // Материалы XIII международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармаколо! ические срсдс 1ва в ветеринарии». СПб., 2001.- С.65-67.

3. Андреева Н.Л., Петров А.Н. Изучение цитопротективного действия Реамберина // Материалы Российской научно-практической конференции «Новые пробиотические и иммунотропные препараты в ветеринарии». Новосибирск, 2003. - С. 15-16.

4. Петров А.Н. Изучение эффективности Реамберина при интоксикации хлористым аммонием // Экспресс - информация «Новые ветеринарные препараты и кормовые добавки».СПб., 2003.- Вып. 14,-С.20-21.

5. Петров А.Н. Клинические исследования Реамберина // Экспресс -информация «Новые ветеринарные препараты и кормовые добавки». СПб., 2003.- Вып. 14,- С.22.

22.11.03 г. Зак. 185-100 РТП ИК «Синтез» Московский пр.. 26

f

V

i í I

I

í

If

Qoog -fl 20 098

Актуальность темы

В клинической практике ветеринарных врачей довольно часто наблюдаются состояния тяжелой эндогенной интоксикации и тканевой гипоксии, возникающих у животных при различных видах заболеваний.

При этом тканевая гипоксия, т.е. нарушение процессов тканевого дыхания, существенно осложняет течение основного заболевания, поскольку приводит к запуску целого комплекса негативных процессов в организме больного.

Гипоксия является одним из ведущих компонентов в синдроме как экзо-, так и эндогенных интоксикаций, вызванных различными ксенобиотиками.

В частности тканевая гипоксия играет заметную роль в формировании патологических процессов, связанных с активацией свободнорадикального окисления и истощением возможностей системы антиоксидантной и антиперекисной защиты.

В то же время, одним из основных повреждающих факторов, формирующих критические состояния, является нарушение про - и антиоксидантных систем, получившее название «окислительного стресса».

В последние годы доказана важная роль процессов свободно-радикального окисления липидов клеточных мембран в развитии гепатоцеллюлярного повреждения [Romero F.J., Bosch-Morell F., Romero M.J., Jareno E.J., 1988; Look M.P., Gerard A., Rao G.S., Sudhop Т., 1999]. Практика показывает, что печеночно-клеточная недостаточность, возникающая вследствие дисфункции гепатоцитов, — явление характерное для критических состояний любых этиологий. Предотвращение процессов цитолиза в больном организме (и в первую очередь — цитолиза гепатоцитов) как одно из лечебных мероприятий, которое позволит ветеринарному врачу сделать течение заболевания более благоприятным, активно используется в терапии критических состояний.

Снижение тяжести гипоксии и ее последствий, обусловленных нарушением транспорта и утилизации кислорода, позволит в свою очередь препятствовать дальнейшему прогрессированию нарушений системы гомеостаза.

Интенсивная терапия критических состояний у собак с тяжелыми инфекционными заболеваниями, отравлениями, возникшими в ходе хирургических вмешательств или травм - требует быстрого применения наиболее эффективных в конкретном случае препаратов. В то же время список лекарств, корректирующих нарушения биохимических процессов в организме животных, не так уж велик.

Например, антигипоксанты и антиоксиданты в виде инфузионных растворов, т.е. способных максимально быстро проникать во все органы и ткани больного животного, вообще до недавнего времени отсутствовали в арсенале ветеринарного врача.

Исследователи давно пытались создать лекарственные препараты, использующие комплекс положительных биологических эффектов субстратного антигипоксанта - янтарной кислоты. Реамберин - первый инфузионный препарат янтарной кислоты, созданный Петербургской научно-технологической фармацевтической фирмой «Полисан», на протяжении нескольких лет позволяет медикам на практике успешно реализовывать все положительные эффекты сукцината.

Поэтому нам представлялось весьма целесообразным изучить возможность применения этого отечественного антигипоксического и детоксицирующего препарата Реамберин в терапии острых интоксикаций различной этиологии у собак.

Цели и задачи исследований

Целью настоящей работы явилось комплексное изучение безвредности и терапевтической эффективности препарата Реамберина в терапии собак при тяжелых интоксикациях.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

• изучить в лабораторных условиях острую, подострую и хроническую токсичность препарата Реамберин

• изучить в лабораторных условиях цитопротективное и гепатопротекторное действие препарата Реамберин

• определить эффективность препарата Реамберин в терапии эндогенных интоксикаций различных этиологий.

Научная новизна

Впервые проведен комплексный анализ динамики биохимических маркеров эндогенной интоксикации, течения перекисных процессов цитолиза и функционального состояния гепатоцитов у собак с синдромом эндогенной интоксикации различной этиологии.

Изучена и обоснована эффективность применения препарата Реамберин в практике ветеринарного врача мелких домашних животных при терапии эндогенных интоксикаций различного генеза.

Практическое значение работы

Полученные результаты исследований позволяют рекомендовать Реамберин в качестве дезинтоксикационного и антигипоксического средства в терапии критических состояний различной этиологии у собак.

Разработано временное наставление по применению Реамберина в ветеринарии.

Полученные данные используются в учебном процессе на кафедре фармакологии и токсикологии Санкт Петербурской Государственной академии ветеринарной медицины.

На защиту выносится

Научно обоснованные рекомендации по применению Реамберина в ветеринарии

Апробация

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на XII, XIII, XIV межгосударственных, межвузовских конференциях «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт Петербург, 2000, 2001, 2002 г), а также на конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов Санкт Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 168 страницах компьютерного текста, содержит 48 таблиц, 27 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственно исследований, выводов, практических предложений. Список литературы включает в себя 214 источников, в том числе 54 зарубежных авторов.

4. ВЫВОДЫ.

1. Реамберин в рекомендованных терапевтических дозах (150 - 245мг/кг по натрия сукцинату или 10-15 мл/кг раствора в сутки), а также десятикратно превышенных дозах не проявляет токсического действия на основные жизненно важные системы организма: сердечно-сосудистую, дыхательную, выделительную, а также на функцию печени и на показатели гомеостаза.

2. Реамберин в. рекомендованных терапевтических дозах, а также десятикратно превышенных дозах не обладает аллергенными и иммунотоксическими свойствами.

3. Установлено цитопротективное действие Реамберина на лабораторных животных.

4. Гепатопротекторное действие отечественного препарата Реамберин, сопоставимо с таковым известного импортного гепатопротектора Карсила.

5. Реамберин улучшает дезинтоксикационную функцию печени, активирует антиоксидантную систему ферментативного звена, снижая процесс перекисного окисления липидов, обладает мембраностабилизирующим действием.

6. На фоне лечения Реамберином отмечается улучшение общего состояния животных, снижается степень проявлений эндогенной интоксикации и сокарщаются сроки лечения и реабилитации.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Реамберин может быть рекомендован для применения в повседневной практике ветеринарного врача в качестве дезинтоксикационного, антигипоксического, мембраностабилизирующего средства при нарушениях гомеостаза, токсических состояниях различной этиологии, гипоксических состояниях различного генеза (критические состояния, ранний постоперационный период, массивная кровопотеря, острая сердечная недостаточность, различные виды дыхательной недостаточности, нарушения кровообращения органов и тканей), на фоне гепатитов разной этиологии.

2. Разработано временное наставление по применению «Реамберина» в ветеринарии (Представлено в ветбиофармсовет).

3. Полученные результаты используются в учебном процессе на кафедре фармакологии и токсикологии Санкт Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины.