Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармакологическая и токсикологическая характеристика торилема и его испытание при респираторных заболеваниях телят

РГБ ОД

--------------

российская людаш сыьскохозяйстезшх наук

. всероссийжий научн0-пссл5д0ват£льсш1й -в2герш1ар1ый институт патологии, йашакологш и терапии

На правах рукописи

' гафурова альбина ьодшовна

ШОДШСШЕСШ И ТОКрИКОЛОШВСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТОРИЛША И ЕГО испытание при респираторных заболеваниях телят

(16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Вороная - 1993

Работ» выполнена в лаборатории фармакологии, химиотерапии и токсикологии Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии иыени Я.Р.Коваленко (ВйЭВ).

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор И.В.Сидоров . .

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наух В.А.Антилов;

кандидат медицинских наук Р.И.Китаева

Ведущее учреждение- Всероссийский-Государственный научно-

исследовательский институт контроля, ' стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Защита диссертации состоится " 30" 1993 г.

в " (О " часов на заседани Специализированного совета Д.020.65.02 по защите докторских диссертаций при Всероссийском научно-исследовательской ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии.

' Адрес: 394087 г.Воронеж, ул.Ломоносова, 114-6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии.

Автореферат разослан " 1993 г.

Ученый секретарь Специализированного совета Ы.Н.Аргунов

------------I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

. Актуальность темы. Создание широкой сей!" промышленных животноводческих комплексов с большой агломерацией животных явилось причиной массового распространения инфекционных респираторных заболеваний молодняка крупного рогатого скота. Эти заболевания приобрели широкое распространение и наносят значительный экономический ущерб.

Массовое возникновогше респираторных болезней регистрируется преимущественно среди молодняка на фоне пониженной естественной резистентности, обусловленной нарушением технологии содержания, кормления и воздействием стрессовых факторов (Данилевский В.М., 1985; Конопаткин A.A., 1985; Карпуть И.И., 1985).

Респираторные заболевания рассматривают как комплексную проблему. при которой патогенная и условно-патогенная микрофлора вызывает тяжелую патологию на фоне неблагоприятных факторов сшштарно-гигаэ-нического порядка и иммунодефицитных состояний организма (Головиз-нин Ю.В., 1983; вортушый В.А., 1985).

Высокая концентрация животных на ограниченной территории, поступающих из различных хозяйств-поставщиков, создает условия, при которых легко реализуется воздушно-капельный и воздушно-пылевой пути передачи патогенных микроорганизмов, что неизбежно ведет к'возрастанию риска возникновения эпизоотических вспышек массовых респираторных болезней (Сюрин В.Н. с соавт., 1985; Конопаткин A.A., 1984).

Существупцие рекомендации по терапии респираторных инфекций базируются преимущественно на бактериостатичееком действии антибиотиков и других химиотерапевтических препаратов, а недостаточность эффективности средств специфической профилактики связана с полиэтио-логичностью респираторных заболеваний (Конопенко П.Я., IS87).

3 связи с этим одной из первоочередных задач, стоящих перед ветеринарной наукой, является разработка и внедрение в производство новых эффективных препаратов для леченая реопираторных заболеваний

молодняка в скотоводческих хозяйствах.

Большого внимания заслуживают препараты, производные нитрофу-ранового ряда. Oidi обладают антимикробной активностью в отношении многих микроорганизмов, возбудителей как респираторных, так и же-лудочно-кшнечных заболеваний животных. Положительной чертой их применения является практическое отсутствие развития резистентности к нем со сторо:ш микроорганизмов. Особенно широкое применение нитро-фураиы нашли в терапии желудочно-кишечных заболеваний (Шевцова В.Н., 1985; Костромитинов H.A., Х990). Новое поколение нитрофуранов -имино-производные ненасыщенных 5-нитро$урановых альдегидов и кетонов, обладают более широким спектром действия. Из этой группы со- * единений перспективным является новое химиотералевтическое средство - торилем, который активен в отношении многих грамполсисигельннх и грамотрицательных микроорганизмов, грибов.

Поль п задачи исследований. Целью настоящей работы являлось изучение фармакологических и токсикологических свойств торилема и определение возможности применения препарата в сочетании с поверхностно-активным веществом - этонием для терапии бактериальных респираторных заболеваний телят. Для достижения указанной цели перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Определить в опытах in vitro спектр антимикробной активности торилема в отношении некоторых музейных штаммов возбудителей респираторных и нелудочно-кшечных заболеваний животных.

2. Установить основше параметры токсичности и кумуляции препарата, возмахсные отдаленные отрицательные последствия его применения, переносимость и безвредность для животных.

3. Изучить характер клинических, гематологических и биохимических изменений в организме животных при введении торилема.

4. Изучить закономерности распределения ü накопления препарата по органам и тканям и установить сроки его йыведения из организ-'

- ма животных. -

5. Дать ветеринарно-санитарную оценку качества цяса анвоишх после аэрозольного применения торилема.

6. Определить возможность приме иония торилема в сочетании с этонием для лечения респираторных заболеваний молодняка крупного рогатого окота.

Научная новизна. Впервые установлена высокая антимикробная активность сочетания торндома с этонием в отношении основ!шх возбудителей респираторных заболеваний телят.

Изучен характер клинических, гематологических и некоторых биохимических изменений в организме'животных при применении торшюма.

Изучены основные фармакокинетические свойства торилема на кроликах-самцах с учетом параметров токсичности и возможного отдаленного действия препарата.

Экспериментально обоснована целесообразность применения торилема для терапии респираторных заболеваний животных.

Разработан метод ингаляционного применения торилема в сочетании с этонием.

Практическая; ценность т)аботы. На основании проведенных исследований разработан комплексный препарат юрилем в сочетании с этонием и внедрен в практику рациональный метод применения его в аэрозольной форме для химиотерапии респираторных заболеваний телят бактериальной этиологии. Дана ватеркнарно-санитарная оценка качества мяса животных, получавших торилем в аэрозольной форме и определены сроки убоя их на мясо. Разработано "Временное наставление по применений комплексного препарата, содержащего торилем с этонием в аэрозольной форме при респираторных заболеваниях телят".

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и получили положительную оценку:

- на конференции молодых ученых ВИЭВ, май 1990 г.;

- на Всероссийской научной конференции "Экологические проблемы животноводства и совершенствование подготовки ветеринарных врачей", Троицк, июнь 1992 г.;

- на научных совещаниях лаборатории фармакологии, химиотерапии и'токсикологии БИЭВ в 1990-1992 гг.;

- на годовых отчетах лаборатории фармакологии, химиотерапии и токсикологии ВИЭВ по НИР в 1990-1992 гг.;

- да заседании Ученого Совета ВИЭВ, декабрь 1992 г.;

- на межлабораторном заседании ВИЭВ, апрель 1993 г. Публикации. По теме диссертации опубликованы 2 научные статьи, в которых изложены положения и выводы диссертации.

Объем и структура диссерташщ. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, и рекомендаций для практики. Диссертация иллюстрирована 25 таблицами и 4 рисунками. Список .литературы содеркит 190 наименований работ, из которых 40 зарубежных,

2. СОБСТВЕННЫЕ ШСЛВДШАНШ

2.1. Материалы и методы исследования. '• .

Исследования проведены в 1990-1992 гг. в соответствии с планом НИР 01.06.02Д в лаборатории фармакологии, химиотерапии и токсикологии ВИЭВ, а такяе в совхозе "Бобровский" Троицкого района Челябинской.области; совхозе "Ульянино" Люберецкого района Московской области и УОПХ ТуркСЖИ. '. . -

В работе было использовано 430 белых мышей, 36 кролика, 70

белых крыс, 116 телят, 360 куриных эмбрионов.

В экспериментах" были использованы препараты торилем и атоний.

Торилем - Р -(5-1гатро-2-£;ура1Шл) гфопен-2-альдоксим. Новое

хшиотерапевтическое средство из группы шггрофуранов, синтезированный в Институте Органического синтеза Латвии.

Торилем - порошок темнозелтого цвета, без вкуса и запаха, легко растворил в дпмэтилсульфоксцце, плохо в опирте и ацетоне, практически но раотворим в воде. Препарат отличается большой стойкостью и не теряет овоих свойств при длительном хранении. Торилем предложи в качестве действующего начала в медицинском препарате "ШИЛЗОГ*, рекомендуемом для лечения ожогов, ран, грибковых и микробных заболеваний1 кожи. По сравнению с известными фунгиостатикачи (нистатин, нитрофурилен) торилем более активен в отношении дерматофитов.

Исследованиями, проведенными в Институте органического синтеза Латвии, было установлено» что торилем обладает антибактериальной активность!; в отношении грашоложителыш; и грамотрицательных микрооргшшзмов.

В опытах использовали раствор торилема в чистом дшотилсуль-фокевдэ.

Этонлй - 1,2-этилен-бис-(А/ -диыетнлкарбдецилоксиметил)-ашо--ния дихлорад.

Синтезирован в Черновицком Гос. университете в 1970 году В.П.Денисенко. Представляет собой белый кристаллический порошок со слабым специфическим запахом. Легко растворил в воде, спирте, изотоническом растворе хлорида натрия.

Этоний является бисчетвертичным аммониевым соединением. Препарат годами сохраняется в растворах и не выпадает в осадок. Обладает смачивающей, солюбилизирулцей способностью, является сильным электролитом.

Обладает выраженной бактэриостатической и бактерицидной активностью в отношении стрептококков, стафилококков и других микроорганизмов, оказывает детоксицирующее действие на стафилококковый токсин.

В опытах использовали раствор атония в дистиллированной воде.

Определение .спектра антимикробной активности торилема и его сочетания с этоннам проводили методом серийных разведений в жидкой питательной среде in vitro по методу Першина (1971).

■ Острая токсичность торилема изучена на 190 белых мышах живой массой 18-20 г при внутрижелудочном введении и на 70 белых крысах при внутрижелудочном и внутрибршинном способах введения. Вычисление параметров токсичности проводили по методу Литчфилда и Уилкок-сона (1949).

Хроническую токсичность изучали на 90 белых мышах при внутри- ^ желудочном введении доз 1/100; .1/50 и 1/10 ДЦ^, установленной ранее при однократном введении, в течение одного месяца.

Для выявления кумулятивных свойств торилема использовали метод "субхронической" токсичности (' Lira K.s. et al. 1961). Опыты проведены на 30 белых мышах в течение 24 дней. Коэффициент кумуляции вычисляли по формуле Ю.С.Когана и В.В.Станкевича (I9S4).

Оценку змбриотоксической и тератогенной активности торилема проводили на 360 куриных эмбрионах согласно "Методическим указаниям по тестированию тератогенной и змбриотоксической активности новых лекарственных препаратов на эмбрионах кур" (1988).

Переносимость и безвредность определяли на телятах методом ингаляции в аэрозольной форме■торилема, при которой.учитывали клинические, гематологические (количество гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, факторы неспецифической резистентности организма - ли-зощмную и бактерицидную активность сыворотки крови, фагоцитарную . активность нейтрофилов) и биохимические (активность щелочной фос-. фатазы, ацетилхолинэстеразы и Na+, К^-АТФ-азы) показатели до и . после применения препарата.

Аэрозольную форму препарата создавали с помощью струйного аэрозольного генератора (САГ-I), который.под давлением воздуха

_3,5-5,0-атм. обеспечивает образование аэрозольных частиц размером от 5 до 20 микрон. Расчет распыляемой дозы лехарствашшх препаратов производили по формуле В.Н.Квятковского (1986).

Количество эритроцитов и гемоглобина в крови определяли фотоколориметрическим методом, лейкоцитов - в счетной камере Горяева.

Лизоцимиую активность сыворотки крови определяли по методу В.Т.Дорофейчук (1988); бактержхвднуп активность сыворотки крови -по методу О.В.Смирновой (1905); фагоцитарную активность нейтрофилов определяли по Н.С.Кисляк (1971).

Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови телят определяли по методу Боданского.

Активность ацетилхолин?стеразы цельной крови определи по методу М.М.ЭЙдельмана в модификации Ф.П.Кохтюка (1973).

Активность На+, К*-АТФ-азы определяли по методу Л.Я.Якушевой и Л.И.Орловой (1970).

При изучении влияния торилема на антитоксическую функцию печени использовали методику Д.Р.Розина (19в4), в основе которой ленит способность различных химических веществ влиять на продолжительность сна белых шпей, вызванного гексеналом. Под опытом находилось 100 белых мышей массой 18-20 г.

Влияние торилема на слизистую оболочку изучали на кроликах (12 голов) путам введения водного раствора торилема, 10 % рабочего • раствора торилема на диметилсульфоксвде и сухого вещества - торием в конъштивальный мешок глаза. Учет реакции проводили визуально.

При изучении закономерностей распределения торилема по органам и тканям использовали метод Бушарда в' модификации Сонина "Определение нитрофуранов в органах, тканях и биологических жидкостях организма". При определении фармакокинетических параметров торилем вводили аэрозольно и внутривенно. Для обработки полученных экспериментальных данных использовали графический метод анализа фармакоки-

нетики при одночастевой модели по уравнению: С - С0 е~Кэл ; ig с « ige0 _ в

Ветеринарно-санитарная оценка качества мяса проводилась с использованием органолептических (ГОСТ 7269-79) и лабораторных (ГОСТ 23392-78) методов исследования.

Терапевтическое действие торилема в сочетании с этонием испы-• тывали на телятах I-3-месячного возраста в хозяйствах Московской области и Туркмении. Эффективность оценивали по быстроте и полноте устранения клинических признаков респираторных заболеваний, а такие. по сохранности животных в сравнении с цринятыми в хозяйствах метода- * ми терапии респираторных болезней телят.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ КХЭДОВАНИЙ

3.1. Антимикробная активность торилема в опытах in vitro.

Опыты по определению бактериостатической и бактерицидной актив- . ности торилема проводили методом серийных разведений в жидкой питательной среде по методу Г.Н.Поршина (1971).

В опытах (при 3-хкратной повторяемооти) использовали бульонные смывы с 24 часовых культур, стандартизированных до содержания 10^-10® микробных тел в I мл,, следущих музейных штаммов микроорганизмов: Pasteure IIa haemolitica биот. А; уР. multocida Сер. А, В, D, Staphylococeus aureus й 201189:219; Streptococus JS 284;

Salmonella dublin , S. enteritidisj Echeriohla coli K-I2; Proteus X-I9.

При определении антимикробной активности сочетания торилема с этонлем использовали растворы црепаратов в жидкой питательной среде в соотношении: 9 частей торилема п I часть этония.

Результаты, полученные в опытах, представлены в таблице I. Из табл. I видно, что торилем обладает высокой антимикробной

Таблица I

Противомикробкая активность торилема л его сочетания с зтонием в опытах

,-ij i (Ышшлатьная бактериостатическая,Минимальная бактериццп-

' Штаммы микроорганизмов 'концентрация (мкзумл^ *ная концентрация (мкг/мл2

п/п! !~тор;шзм Т торилем с этонйем ""¡торилем ¡торилем с зтонием

I. Pasteurella siultocida

сер. А ШТ. 736 12,5 10,0 нале 500 12,5

2. г"- сер. В ШТ. 1281 12,5 10,0 12,5

з. шт. "Одесса' 12,5 10,0 .12,5

4. шт. 681 12,5 10,0 - 12,5 12,5 ;

5. сер. Д шт. KOC-I 12,5 10,р 12,5 i

6. —— шт. 740 12,5 10,0 —Tt-. 12,5 i

7. Paateurolla haemolitica, биот. А 10,0 - 12,5 10,0 " 10,0 ; «о

8. Staphylococcus aureus N 201189 12,5 12,5 25,0 j

9. К 2Т9 12,5 12,5 _г _ 25,0 j

Ю. -Streptococcus H 284 25,0 25,0 и 25,0, ;

11. Salmonella Dublin сэр. С 100,0 50,0 50,0 - 100,0 I

12. Salmonella enteidtidia 50,0 50,0 — 50,0 - 100,0 :

13« Echerickia coli К -12 50,0 25,0 ioo.o ;

14. Proteus X -19 50,0 25,0 50,0 ;

активностью В отношении pasteurella haeraolitlca и p. multooida (Минимальная подавлявдая концентрация - ШК = 10,0 - 12,5 мкг/мл); Staphylococcus aureus (МПК * 12,5 мкг/мл);' Streptococcus Я 284 (МПК >» 25,0 мкг/мл) и менее активен в отношении salmonella dublin, S. enteritidis, Echerichia coli K-12, Proteus X-19 (ШК « 50,0-

-100,0 мкг/мл), но не обладает бактерицидной активностью в отношении всех испытуемых штаммов микроорганизмов.

Опыты по определению противомикробной активности при сочетанием применении торилема с этонием щюводали аналогичным методом. Опытами установлено, что активность торилема в сочетании с этонием возрастает, причем, если торилем оказывал только бактериостатическое действие, не обладая бактерицидной активностью, то при сочетанном применении минимальная бактерицидная активность торилема составляет в отношении P0steurella haemolitica и У. multooida - 10,0-12,5 мкг/мл; а В отношении Salmonella dublin и s» enteritidis, coli, Proteus МЕЖ препаратов составила or 50,0 до 100,0 мкг/мл.

Следовательно, комбинированное применение торилема с этонием оказывает выраженный синергизм в отношении всех испытуемых

штаммов микроорганизмов, особенно в отношении Pasteurella multooida и P. haemolitica . Принимая во внимание одно из ведущих мест, занимаемых пастереллами в этиологии респираторных заболеваний, и учпты- , вая полученную высокую антимикробную активность торилема .мы решили изучить : его лечеб^ эффективность при респираторных заболеваниях пастереллезной этиологии на животных после более полного изучения фармакологически свойств торилема .

3.2. Определение параметров токсичности, переносимости, безвредности и кумуляции торилема .

Определение степени токсичности торилема при однократном введении проведали на белых мышах и белых крысах при двух способах введе-

ння - внутрижелудочный н внутрцбршшшый. Препарат вводили в воде I % водной суспензии в разных дозах животным,опытных групп, в наядой группе было по 10 белых мшззй и 7 белых крыс. При внутрибрдапн-ном введении торилема белым крысам доз от 100 до 200,0 мг/кг массы тела с интервалом мезду дозами 25,0 мг/кг параметры токсичности сведущие (мг/кг): JOJq - 100,0; ЛД16 - 118,0; ЛД^ - 150 (132,0 + 169,0); ДДэд - 154,0; ДЦ100 - 200,0.

При внутризселудочном введении доз от 500,0 до 1500,0 мг/кг с интервалом мезду дозами 250,0 мг/кг параметра токсичности препарата для крыс составляют (мг/кг): ДЦд - 500,0; ДЦ^ - 670,0; ДЦд0 - 917,0 (723 4 IIII); ЛД^ - 1260,0; -Д^од - 1500,0.

По классификации Л.И.Медведя (1964) следует, что торилем является малотоксичным соединением для белых крыс.

При определении токсичности для белых мышей при внутрияелудоч-ном введении торилема в дозах от 50,0 до 400,0 мг/кг массы тела С' интервалом между дозами - 50,0 мг/кг били установлены слвдупщно параметры токсичности препарата (мг/кг): ДБ^ - 50,0; J0¡-¡-g - 145,0; ДДзд - 200 а82,6 + 219,0); ЛД^ - 300,0; ДД100 - 100,0.

По классификации Л.И.Медведя (1964), торилем является средна-токсичным соединением для белых мышей.

Клинические симптомы острой интоксикации'у подопытных животных характеризовались поражением центральной и периферической нервной системы - угасанием зрительных и слуховых рефлексов, нарушением координации движений, понижением чувствительности кожного покрова, парезом конечностей.

При внутрихелудочаом введении торилема в дозе 1Д0 ДЦд0 от ус-тановлешюй ранее, при однократном введении белым мышам в течение одного месяца ежедневно токсического эффекта не обнаружено.

При использовании теста "субхронической токсичности" по изучении кумулятивных свойств препарата установлено, что коэффш&ент ку-

вдшщни торилема при внутрижелудочном введении составляет 8,3, что свидетельствует об отсутствии кумулятивных свойств препарата.

В опытах по определению эмбриотоксичесйого и тератогенного действия торилема препарат вводили в желточный мешок эмбрионов кур в вице масляной эмульсии. При этом вводили следуйте дозы препарата: 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 5,0; 10,0; 15,0 мг/кг массы тела. В результате проведенного опыта на 360 куриных эмбрионах установлено, что торилем является высокотоксичным соединением для куриных эмбрионов - ЛДзд - 3,8 (3,09 + 4,56) мг/кг, ко не обладает тератогенным эффектом в дозах до I ДО ДДдц.

Для выяснения безвредности и переносимости аэрозолей торилема в сочетании с этонием для телят, при однократном и многократном ингаляционном введэшш, опыты были проведены на 15 животных 2-3-месячного возраста. При однократном введении торилем испытывали в дозах 11,0 мг/кг; 110,0 мг/кг; 550,0 мг/кг массы тела; дозы этония при этом составили 1,1 мг/кг; II,0 мг/кг; 55,0 мг/кг массы тела; при многократном применении в течение 5 дней с интервалом введения 24 часа и-экспозицией 30-40 мин, доза торилема составляла ПО,0 мг/кг массы тела, этония - 11,0 мг/кг массы тела. При введении торилема в дозах 11,0 и 110,0 от/кг массы тела токсических явлений и побочного действия на организм телят установлено не было. Торилем в дозе 550,0 от/кг массы тела после одно1фатного применения вызывал у животных симптомы слабой интоксикации, плохо переносился животными.

При определении характера гематологических и биохимических изменений в организме нами установлено, что торилем в дозе'110,0 мг/кг в сочетании с этонием в дозе 11,0 мг/кг массы тела не вызывает изменений основных гематологических и биохимических показателей 1фови. Показатели неспецифической резистентности организма после многократного применения торилема в указанной дозе повышались до верхней границу физиологической нормы и составили: лизоцшная активность сыво-

ротки крови - 22,5 % против 14,6 % до применения препарата; бактерицидная активность сыворотки крови - 47,3 % против 39,0 % до обработки препаратом; фагоцитарная активность нейтрофилов - 70,3 '/против 60,4 ¡2 до применения препарата.

Отсутствие отрицательного влияния торилема в дозе 110,0 мг/'-на организм подтверждают также лабораторные исследования действия торилома на антитоксическую функцию почени и еллзиетне оболота:.

Опыты по определению влияния торилема на антитоксическую функцию печени с использованием гексеналовой пробы были проведены на 100 белых мышах, которым препарат вводили внутринелудочно в виде водной суспензии в дозе 110,0 мг/кг массы тела однократнй и многократно (ежедневно в течение пяти дней). При этом установлено, что торилем в указанной дозе не вызывает изменений в продолжительности сна белых мышей, вызванного гексеналом (гекоенал вводили подкожно в дозе 80 иг/кг ¡/леей тела после введения препарата), что свидетельствует о идентичности метаболизма гексенала в ошт:шх л контрольных группах.

Влияние торилема на состояние слизистых оболочек изучалось по степени местного раздражающего действия препарата на слизистую оболочку глаз кроликов и проводилась визуально. Реакцию учитывали через 30 минут, I, 3, 6, 24 и 48 часов. При этом изменещю слизистой оболочки глаз (покрасне1ше) отмечали только после введения растворителя диметил-сульфоксида. Торилем в чистом виде и в ввде водной суспензии не вызывал раздражения слизистой оболочки. Следовательно, торилем но оказывает раздражающего действия на слизистые оболочки глаз.

3.3. Фармакокпнотлка торилема

Изучение особенностей фарг-шеокаиехики торилема в крови гшвоиых' проводили на 24 кроликах-самцах. Препарат вводили в дозе 110,0 мг/кг внутривенно и аэрозольно. Концентрацию торилема в плазме крови опре-

делили через 30 ьащут, I, 3, 6, 9, 12, 24 и 48 часов после внутривенного введения и начиная с первого часа после ингаляционного введения. При этом установлено,, что максимальная концентрация торилема в плазме крови составила 16,0 мкг/мл при внутривенном введении через 30 минут, а при ингаляционном-через 3 часа. Препарат не обнаруживался в крови кроликов через 12 часов после внутривенного вве-де!шя и 48 часов после ингаляционного введения.

На основе полученных результатов определены основные фармако-кинетические параметры торилема в крови при двух способах введения: среднее время удержания препарата в крови составляет при ингаляционном введении 12,3, а при внутривенном - 2,89 час. Общий объем рас- . пределения - 0,777 и 0,565, соответственно, по способам введения. Бпоусвояемость торилема при ингаляционной введении составляет 0,3X5. Эти данные фарыакокинетики свидетельствуют о том, что при ингаляционном введении торилем держится в организме кроликов в течение более длительного времени по сравнению с внутривенным введением и хорошо усваивается, что является положительной предпосылкой для химиотерапии респираторных заболеваний.

• В опытах на кроликах проводилось также изучение закономерностей распределения и накопления препарата по органам и тканям животных при однократном и много1фатном (однократно, ежедневно в течение 5 дней) ингаляционном применении торилема в дозе 110,0 мг/кг массы тела. Убой кроликов производили через 12, 24 и 48 часов после однократного применения и через 24, 48 и 72 часа после многоьфатного.

В результате проведенных исследований было установлено, что основная масса торилема, при ингаляции , накапливается в лег-

ких и составляет, через 24 часа после однократного применения 16,4 мкг/мл. Далее в убывающем порядке следуют печень II;8; почки 8,4; сердце 5,6; селезенка 2,6 к мышечная.ткань 1,1 мкг/мл. Через 48 часов после однократного применения следы препарата обнаруживаются

только в легких, печени и почках.

При многократной ютгаляпии 'максимальное количест-

во торилема отмечали через 24 ч после последнего применения в легких - 23,6 мкг/мл, далее в убыванием порядке следуют лечонь - 19,6; почки - 16,9; сердце - 11,8 мкг/мл. Постепенно снижаясь, пронарат полностью выводится из организма через 72 часа.

- Па основании полученных данных бшш рассчитаны фарлакокиноп-ческие параметры торилема для органов Я тканей при многократном ингаляционном' применении. Общий объем распределения в легких, печени, почках колеблется от 0,226 до 0,263 л; в сердце и мышечной ткани 0,230 и 0,240 л соответственно. Мерой продолжительности пребывания препарата в организме животного служит среднее время удергшшя. В нашем случае максимальным временем удержания обладают легкие -38,2 ч, что является закономерным при ингаляционной введении.

Учитывая данные фармакокинеттси, указывающие на то, что бакто-риостатическая концентрация препарата в тканях легкого удерживается не менее 24 часов, было отмечено, что повторное введение препарата с целью поддержания в организме постоявшой подавляющей микроорганизмы концентрации целесообразно проводить один раз в сутки.

3.4. Бетеринарно-санитарная оценка качества мяса телят после введения торилема

Опыты по ветеринарно-санитарной оценке качества мяса проводили на телятах после пятикратного ингаляционного введения торилема з дозе 110,0 мг/кг массы тела с учетом органолептических дашшх, результатов физико-химического, биохимического и бактериологического исследований. Убой животных производили через I и 3 суток послв Применения препарата.

В результате осмотра туш-установлено, что корочка подсыхания

!.оид бледно-розового цвета, слегка влажная, мышечная ткань плотная и упругая светло-красного цвета со свойственным запахом, жир белого цвета. Через сутки после убоя присутствует посторонний запах думетилсульфоксзда, полностью исчезающий при варке мяса. При убое ■животных через 3 суток посторонний запах у мяса отсутствует. Бульон, подученный при варке мяса, прозрачный, ароматный, посторонние запахи отсутствуют. Концентрация водородных ионов в исследуемых пробах находилась в пределах 5,7-6,13, что характеризует созревшее мясо, с нормально протекаодими биохимическими процессами. Бонзиди-новая проба во всех испытуемых пробах была положительной, что согласовывается с показателями рЫ и указывает на нормальное течение • процессов созревания мяса телят, формальная реакция и реакция с модным купоросом отрицательная, что является характерным для доброкачественного мяса, с нормально протекающими биохимическими процессами.

Микроскопия мазков показала абсолютную стерильность мяса телят опытных групп. При посеве на питательные среды рост культур не установлен.

• При введении экстракта из мяса подопытных животгшх белым мышам по методике И.П.Западника (1962, 1983) не было установлено клинических симптомов интоксикации и падежа.

Учитывая результаты, полученные при ветеринарно-санитарной оценке качеству мяса телят, через 24 часа после многозфатной ингаляции . . торилема , можно сделать вывод, что оно не соответствует ГОСТу 7269-79 в связи с тем, что сохраняет запах растворителя препарата. Спустя 3 суток после последнего применения торилема мясо- телят не отличается по показателям от мяса интактных животных, соответствует ГОСТам 7269 и 23392-78.

3.5. Лечение респираторных заболеваний телят аэрозолью торилема с этонием

После проведения испытаний в различных хозяйствах Московской области и Тур1кмешютана было установлено, что тортом в дозе 110,С мг/кгмассы тела в сочетшши с этонием в дозе 11,0 мг/кг массы тела является оптимальной дозой для терапия респираторных айбсшшашЛ молодняка крупного рогатого скота.

Для получения аэрозоля использовали струйный аэрозольный генератор (САГ-Х), рабочие растворы препаратов диспергировали одновременно из разных стаканов генератора под давлением воздуха 3,5-5,0 атм.

В качестве контроля использовали группы больных животных, лечение которых проводили с использованием бензмпегшцп.: дша натрл--вой соли по I млн. ЗД/кг внутримышечно с интервалом в 12 часов в точение 10 дней; тетрахлорвда - 5-10 тыс. ¡Ж/кг внугримнпоччо с интервалом в 12 часов в течение 5 дней, в соотзетств:ш со схемой лечения, проводкой непосредственно для терапии респираторы«. заболеваний в этих хозяйствах.

В качестве метода-сравнения проводилось лечение телят аэрозолью препарата флуренизида в сочетании с этонием по т.тотсду, разработанному ранее в лаборатории фармакологии к химиотерапии ВИЭВ для терапии респираторных болезней молодняка пастереллезной этиз-логииС1991>.

Результаты, получегпша в опытах, представлены в таблице 2.

Из данных таблицы видно, что торило:,! в сочетшши о этошге" в аэрозольной форме обладает хорошей терапевтической эффективностью - 98,2 % (совхоз "Ульяшшо") и 100 $ (УОПХ ТуркОИ).

В контрольных группах из 10 жнвотных, леченых натриевой сото пенициллина, после 10 дней лечения выздоровел только I толеиок,

Таблица 2

Лечебная эффективность торилема в сочетании с этонием ппи респираторных заболеваниях телят

Наименование 'наименование! Д°за ! Способ ! ЙШРРОвело , Тешлевт.

хозяйства ¡живота/гол ! препарата ! мг/кг 1 применения!леД«ия 1полностью!неполн.! Э1№зкт> *

"Ульянино"

Московская область

55 10

торилем + этоний

110,0 11,0

бензилпени- I млн.

цидлина

натриевая

соль

аэроэольно | £азй

в/м

2 раза в день

10 дней

54 I

I

9

98,2 10,0

10

флуренизвд + 30,0 ^3^0 1 ^ этоний 5,0 5 дней

10

100,0

УОПХ ТуркСХИ

'10 10

торилем + 110,0 I раз

этоний II ,0 аэрозольно 5 даей

тетрахлорид 5-10 тыс. в/м БД

2 раза в день 5 дней

50

100,0 90,0

■эффективность составила 10 %, в группе с терапией тетрахлоридом лечебный эффект составил 90 %. В группе животных, леченых аэро-золью флуренизвда с этонием эффективность составила 100 %,

Выздоровление телят, подвергавшихся лечению, проявилось исчезновением хрипов в трахеи и легких, кашля, серозных или серозт.-гнойных истечений из носовых полостей, нормализацией температуры тела, пульса, дыхания, общего состояния животных. Выздоровление животных наступало после 5 ингаляционных обработок торилвыои.

Следовательно, результаты испытания показали, что торилем является эффективным средством для химиотерапии респираторных болезней телят в дозе 110,0 мг/кг массы тела в сочетании сгэтонием в дозе 11,0 мг/кг массы тела при введении методом ингаляции в • аэрозольной форме.

Таким образом, торилем в дозе 110,0 мг/кг в сочетании с этонием в дозе 11,0 от/кг массы тела в аэрозольной форма может быгь рекомендован для производственных испытаний в хозяйстгах с целью терапии массовых респираторных заболевший молодняка крупного рогатого скота.

ВЫВОДЫ

1. Торилем - ( $> -/5-нитро - 2 -фурашш/пропон-2-альдоксим) -новый препарат из группы производных нитрофурана, обладает выраженной антимикробной активностью в отношении грамотрицатольной и грашоложительной микрофлоры, хорошо переносится животными и моле от быть рекомендован в качестве хилиотерацевтического средства прп респираторных заболеваниях телят.

2. Минимальная бактерпостатическая концентрация торклема in vitro составляет для p. haemolitica И p. multocida 12,5-10,0 мкг/мл; для staphylococcus aureus - 12,5 мкг/мл; streptococcus cus $ 284 - 25,0 мкг/мл и для энтеробактерий s. dublin,

3, oateritidio, coll> Proteus ~ " 50,0 мкг/мл.

Бактерицидным действием препарат не обладает.

3. Сочетанное применение торилема с этониём в условиях vitro вдвое снинает минимальную бактериостатическую концентрацию препарата в отношении 3. dublin, 3. enterltidis, £. coli (;Я1К = 25,0 - 50,0 мкг/мл) и оказывает бактерицидное действие в отношешш Р. haemolitica . в концентрации 12,5 - 10,0 мкг/мл.

4. Торклем является среднетокоичным соединением для белых шшей - ДД50 Г1РИ введении внутрь составляет 200 (189,6 + 219,0) :.с/кг и малотоксичным для белых крыс: ДД^ при введении внутрь

917 (727 + IIII) от/кг и при внутрибрюшинном введе1ши - 150 (132,0+ + 169,0) мг/кг массы тела. Препарат не оказывает местного раздра-яащего действия на слизистые оболочки, не обладает кумулятивными свойствами и не изменяет антитоксическую функцию печени.

5. Торилен обладает выраженным эмбриотоксическим действием,

ЯВЛЯЯСЬ ВЫСОКОТОКСИЧНЫМ СОеДИНеНИеМ ДЛЯ КУРИНЫХ ЭМбрИОНОВ ClügQ «

= 3,8 (3,09 ± 4,56) мг/кг, но не оказывает тератогенное действие на них.

... 6. Клинические признаки отравления лабораторных животных то-р.оемом характеризуются нарушением функций центральной и периферической нервной, сиотемы, проявляющимся угасанием зрительных и слуховых рефлексов, чувствительности кожного покрова, общим угнетением, нарушением координации движений, парезом конечностей.

7. Наиболее рациональной лекарственной формой торилема для ингаляционного применения в виде аэрозолей является 10 $-ный раствор препарата в диметилсульфоксиде. При сочетанном применении торилема с этонием количественное отношение препаратов Целесообразно соблюдать в соотношении 9:1, соответственно.

8. После введения торилема в терапевтической дозе 110,0 мг/кг максимальная концентрация препарата (16,0 мкг/мл) в плазме крови

.создается-через 3 часа после аэрозольного и 30 минут после внутривенного введения. Торилем полностью выводится из крови после однократного аэрозольного введения через 48 часов, после внутриветюго

- через 12 часов, среднее время удержания препарата в крови составляет, соответственно, 12,3 и 2,89 часа; общий объем распределения

- 0,777 и 0,565; период полувыведения - 8,71 и 2,00. При аэрозольном введении характерным является высокий уровень показателя 6т-усвояемооти препарата (0,315).

9. Основными органами-накопителями торилема после аэрозольного введения являются легкие, печень, почки и сердце (в убывающем порядке). Препарат полностью выводится из органов , и ткадейр-швотннх через 48 часов после однократного применения и через 72 часа -после многократного. Наиболее высокий показатель сред* то урозип удержания препарата ( ИНГ ) характерен для легочной ткани и составляет 38,2 ч (при многократном.введении).

10. Торилем при ингаляционном введении в аэрозоли ной форме г. дозах 11,0 - 110,0 мг/кг в сочетании с этонием (в соотношении 9:1) хорошо переносится животными, является безопасным и не вызывает изменений основных гематологических и биохимических (активность

К^АТФ-азы, щелочной фосфатазы, ацетилхолинэстеразы) показателей.

11. В терапевтической дозе (110,0 мг/кг массы тела) торилем оказывает положительное влияние на состояние неспецифической резистентности организма телят, повышая лпзоцимную и бактерицидную активность сыворотки'крови и фагоцитарную активность нейтрофклстз до уровня верхней границы физиологической нормы.

■ 12. Аэрозольная форма торилема в дозе НО мг/кг (по препарату) в сочетании с этонием в дозе 11,0 мг/кг массы тела обладает высокой лечебной эффективностью при ресшфаторных заболеваниях телят бактериальной этиологии.

13. По показателям ветеринарно-санитарной оценки мясо телят, убитых «ерез 72 vaca после последнего применения аэрозолей ториле-ма, не отличается по качеству от мяса интактных-животных и соответствует ГССТу 7269-79. При убое животных в более ранние сроки (иерез 24 vaca посла обработки) мясо и органы телят имеют специфический запах растворителя (ДМСО).

5. прашмзские приложения

На основании результатов экспериментальных исследований предлагается:

1. Новый' нитрофурановый прзпарт торилем для терапии бактериальных респираторных заболеваний телят. Для повышения эффективности тори лем монет использоваться в сочетании с этонием, в виде аэрозолей в форме раствора дтаетилсульфоксида. ¡

2. Проект^ временного наставления по применению препарата тори-лема в аэрозольной форме при респираторных болезнях телят.

3. С целью получения доброкачественного киса, убой- животных, .л-зченных торилемом в аэрозольной форле, проводить не ранне 72 vacan после последнего применения препарата.

. ■ 'V ' 6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

/','.' I. Гафурова A.M. Параметры токсиедоети нового хшиотерапевти-ческого препарата И0С-П84. Материалы Всероссийской научной конференции "Экологические проблемы животноводства и совершенствование подготовки ветеринарных врачей". г.Челябинск, 1992, с. 15.

2. Гафурова A.M. Антимикробная активность нового химиотера-певтического препарата И0С-1184. Бюллетень ВИЭВ, Ы,, 1992, вып.