Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармакодинамика селенорганических препаратов и их применение в животноводстве

На правах рукописи

ФАРМАКОДИНАМИКАСЕЛЕНОРГАНИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЖИВОТНОВОДСТВЕ

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Краснодар - 2004

Работа выполнена в Краснодарском научно-исследовательском ветеринарном институте и Саратовском государственном аграрном университете им. Н.И. Вавилова.

Научный консультант: заслуженный деятель науки Российской

Федерации, доктор ветеринарных наук, профессор Антипов В.А.

Официальные оппоненты: Мишанин Юрий Федорович,

доктор биологических наук, профессор;

Мерзленко Ольга Валерьевна, доктор ветеринарных наук;

Кудинова Светлана Петровна, доктор биологических наук;

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский

ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии

Защита состоится « $ » диссертационного совета Д 220.038.07 в Кубанском государственном аграрном университете (350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан « £ » июня 2004 г.

«

июля 2004 г. в « ту» часов на заседании

Ученый секретарь диссертационного совета

Ж

В.Н. Боровой

г/?#7 - ^ /S3 £9

г бзип

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. За два последних десятилетия человечество определило проблему селенодефицитности организма для человека и животных. Во многих регионах России селендифицитность организма вызвана низким содержанием данного микроэлемента в почвах. Сюда относятся территории Восточной Сибири и Забайкалья, Поволжья, зоны Урала, Карельской, Архангельской и Ленинградской областей (Г.А. Вощенко, Г. А. Дремина, 1996).

Из-за неравномерного распределения элемента в различных регионах земного шара, в связи с экологическими факторами, в ряде стран выявляются болезни, связанные с его недостатком: беломышечная болезнь молодняка животных, токсическая дистрофия печени поросят, эксудативный диатез цыплят (Г.И. Титов, 1963; 1966; 1976; В.И. Георгиевский, Б.Н. Анненков, В.Т. Самохин, 1979; Я. Никитин, А. Маловастая, 1980; Л.А. Минина и др., 1969, 1983; М.Н. Андреев, A.A. Кудрявцев, 1985; и др.). Установлено, что поступление с кормом микроэлементов, даже в условиях черноземных областей обеспечивает лишь на 30-70% потребность в них организма (В.Т. Самохин, 1997).

Селен участвует во многих окислительно-восстановительных процессах, обладает антиоксидантным и антитоксическим действием. В этих процессах он взаимодействует с витамином Е. Вместе они влияют на обмен белка, жира, углеводов. Селеном богаты иммунные клетки, он входит в состав белков организма. Его биологическая роль заключается в формировании активных центров ферментов, ответственных за метаболизм аминокислот, перемещение электронов в дыхательных цепях, разрушение липоперекисей (А.Б. Атлавин, М.Р. Апсите, 1979; В.И. Георгиевский, Б.Н. Анненков, В.Т. Самохин, 1979; М.А. Андреев, А.П. Кудрявцев, 1985; А.И. Журавлев, В.Т. Пантюшенко, 1989; Ю.Ф. Мишанин, 1992).

В настоящее время недостаток селена, как правило, восполняется внесением в различные минеральные и минерально-витаминные добавки неоргани-

ческих соединений в виде селенита и селената натрия. Вместе с тем, широко применяемые в настоящее время селенит натрия и селенат натрия весьма токсичны для организма (Г. Роса, 1995).

Известно, что биодоступность многих элементов выше, если они находятся в составе органических соединений (Б.Д. Кальницкий, 1980).

В итоге многолетних исследований российскими учеными Б.И. Древко и А.Ф. Блинохватовым (1970-2000 гг.) удалось найти селеносодержащие органические вещества (диацетофенонилселенид и селенопиран), свободные от недостатков, и которые существенно отличаются от неорганических препаратов селена. Они обладают значительно меньшей по сравнению с селенитами и селе-натами токсичностью, высокой липофильностыо, что обеспечивает возможность их пролонгированного действия.

Разработка и стандартизация новых селенорганических препаратов группового и индивидуального применения имеют большое значение для успешного проведения мероприятий по предупреждению и ликвидации болезней, связанных с недостатком селена в организме.

1.2. Цель и задачи исследований. Основной целью настоящей работы было изучить влияние нового селенорганического препарата ДАФС-25 на метаболические процессы в организме животных и птицы, определить оптимальные дозы препарата для различных видов животных в условиях традиционного и промышленного животноводства, обеспечивающие интенсивный рост живой массы, высокое качество получаемой продукции и повышающие рентабельность производства. Исходя из вышеизложенного перед нами были поставлены следующие задачи:

-изучить биологическую активность препарата ДАФС-25; - определить основные параметры токсичности препарата; -дать ветеринарно-санитарную оценку продуктов убоя животных и птиц при его применении;

-изучить основные стороны фармакодинамики и фармакокинетики препарата;

-отработать оптимальные параметры и эффективность применения препаратов селена в животноводстве и ветеринарии;

—внедрить препарат ДАФС в практику отечественного животноводства.

1.3. Научная новизна. Разработаны дозы и предложен ветеринарной практике и животноводству страны новый селенорганический препарат ДАФС-25.

На основании комплексных фармакотоксикологических, гематологических исследований показано, что препарат ДАФС-25 относится к пятому классу по кумулятивному действию и не обладает мутагенными свойствами. Он значительно повышает иммунный статус птицы и качество мясной продукции. Выявлены высокие антиоксидантные свойства препарата, его действие на белковый, жировой и углеводный обмен, и как следствие его влияние на интенсивный рост и развитие животных и птицы. В работе впервые разработаны при различных путях введения дозы ДАФС-25 для цыплят-бройлеров, кур-несушек, свиней, телят, коров и кроликов.

Проведенные исследования являются необходимым звеном в решении народнохозяйственной проблемы увеличения производства мяса путем целенаправленного регулирования метаболизма и интенсивности роста живой массы животных и птицы путем внесения ДАФС-25 при выращивании и откорме животных и птицы. По результатам исследований получен патент № 2051681 РФ от 10.01.1996.

1.4. Практическое значение и внедрение. Результаты исследований могут служить обоснованием к применению нового биологически активного вещества диацетофенонилселенида в практике животноводства и ветеринарии, позволяющего усовершенствовать технологию выращивания и откорма сельскохозяйственных животных и птицы как в традиционных, так и промышленных условиях ведения отрасли, полнее реализовать потенциальные возможности использования питательных свойств корма и повысить качество мясной продукции.

По результатам исследований разработаны нормативные технические документы, утвержденные Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ - ТУ №9337 - 001 - 26880895 - 96; и Наставление по применению № 13-5-2/668, одобренное Ветфармбиосоветом Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ - Per. № ПВР 2.04.018/5 - 96. Организовано промышленное производство препарата в условиях ООО «Сульфат» (г. Саратов).

Разработка нормативной документации позволила обеспечить внедрение препарата ДАФС в практику животноводства в масштабах России (в более 30 регионах), организовать промышленное производство в условиях ООО «Сульфат» г. Саратов в объеме до 300 кг в год.

1.5. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на следующих научно-практических конференциях: конференции молодых ученых «Проблемы ветеринарной биотехнологии и инфекционной патологии животных» (Москва, ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко, 1988); XI Всесоюзный конференции по биологической роли микроэлементов и их применение в сельском хозяйстве и медицине (Самарканд, 1990); конференции «Физиологические механизмы развития экстремальных состояний» (Санкт-Петербург, 1995,); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (Москва, 1995); международной конференции «Загрязненность экологических систем токсикатами и актуальные вопросы современной фармакологии и токсикологии». (Троицк,

1996); Российской научно-практической конференции, посвященной 200-летию Саратовской губернии, «Экология здоровья и природопользования» (Саратов,

1997); научно-практической конференции, посвященной 80-летиго проф. В.Н. Авророва. «Актуальные проблемы ветеринарной хирургии» (Воронеж, 1997); XVII сьезде физиологов России (Ростов-на-Дону, 1998); научно-практической конференции, посвященной 55-летию ГУ Краснодарской НИВС (Краснодар, 2001); научно-практических конференциях профессорско-преподавательского

состава аспирантов, стажеров (Саратов, 1992, 1993, 1995, 1996, 2000, 2001, 2002, 2003); на заседании Ветеринарного фармакологического совета Департамента ветеринарии МСХ РФ (1992,1996).

1.6. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Разработка показаний к применению ДАФС-25.

2. Токсикологическая оценка препарата.

3. Фармакологические свойства препарата.

4. Влияние ДАФС-25 на рост и продуктивность сельскохозяйственных животных и птицы.

1.7. Публикации. По материалам диссертации опубликована 35 работ, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемым вопросам; получен 1 патент.

1.8. Структура и объем работы. Работа изложена на 290 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований, заключения, практических предложений, списка литературы и приложений. В работе использовано 391 источник литературы, в том числе 176 зарубежных. Диссертация содержит 105 таблиц и 24 рисунка.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные исследования проводились в Краснодарском научно-исследовательском ветеринарном институте, Саратовской академии ветеринарной медицины и биотехнологии, Саратовском государственном аграрном университете им. Н.И. Вавилова, Саратовском НИИ кардиологии Саратовского медицинского университета, областной ветеринарной станции и межрегиональной

лаборатории болезней птиц г. Саратова, Воронежском государственном аграрном университете и краевой ветеринарной лаборатории «Краснодарская».

Научно-производственные опыты и широкие испытания проведены в условиях птицефабрик и животноводческих хозяйств Саратовской области, свиноводческих хозяйств Воронежской, Белгородской и Калининградской областей и Краснодарского края.

Работа выполнялась с 1983 по 2002 год по темам НИР Краснодарского НИВИ по заданию РАСХН (номера государственной регистрации: 01.9.80006908; 01.9.10043700), СГАУ им. Н.И. Вавилова, Московской сельскохозяйственной академии им. К.А. Тимирязева.

Экспериментальные исследования, научно-производственные опыты проводились с целью изучения фармакологических свойств селенорганического препарата ДАФС-25, его токсичности, мутагенности, биологической активности, антиоксидантных свойств, влияния на обмен веществ у различных видов сельскохозяйственных животных, а также с целью разработок доз селенистых препаратов для животных и птицы.

В экспериментах использованы белые крысы (38 гол.), куры (20 гол.). Научно-производственные испытания проведены на свиньях (96 гол.), цыплятах-бройлерах (151245 гол.) и курах-несушках (19062 гол.), крупном рогатом скоте (200 гол.), и кроликах (75 гол.).

При организации нормированного кормления, изучение продуктивности, взятие средних образцов мяса, крови, кормов клинически руководствовались методическими положениями и установками, разработанными ВИЖ и ВАСХ-НИЛ.

Первичное токсикологическое и фармакологическое исследование ДАФС-25 проводили согласно требованиям ФК МЗ СССР и Ветфармсовета Департамента ветеринарии МСХиП РФ к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ, а также с учетом имеющихся по этому вопросу других руководств (МЛ. Беленький, 1993; К.К. Сидоров, 1973 и др.).

Изучение острой токсичности проводили методом Deichmann & Le Blank (1943) на белых крысах (8 гол.) при однократном внутреннем введении в различных дозах. О токсичности их действия судили по количеству погибших животных после их применения, картине интоксикации и патологоанатомического вскрытия павших животных. Подострую токсичность изучали на крысах (30 гол.) методом Lim (1961) путем назначения препарата в дозах, превышающих рекомендуемую в лечебно-профилактических целях.

Патоморфологические исследования птицы, убитой после применения им ДАФС-25 изучали общепринятыми гистологическими методами.

Для фиксации патологического материала использовали 10% раствор нейтрального формалина, жидкость Карнуа, 96%-ный и абсолютный этиловый спирт. Срезы толщиной 10-15 мкм готовились на замораживающем микротоме. При окраске срезов применяли гематоксилин и эозин. Патоморфологические исследования сопровождались фотографированием участков тканей органов с ярко выраженной структурой или с отклонением от нормы, для чего использовался микроскоп МБИ-15 с фотонасадкой МФН-12 и фотокамера "Зенит-Е".

Отбор проб и органолептическое исследование мяса проводили по ГОСТам 7269-79, 2023-74, 9959-74. Бактериологическое исследование мяса проводили по ГОСТу 21237-75. Для физико-химического исследования мяса использовали методы, рекомендованные ГОСТами 23392-78, 7702.1-74, 23042-86, «Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов» (1983, 1988), которые включают органолептическую оценку, бактериоскопию мазков отпечатков, продуктов первичного распада белков, коэффициента кислотность-окисляемость, активность фермента пероксидазы (В.А. Макаров и др., 1987).

Химический состав мяса определяли с использованием методов Ю.Ф. Куранова, С.Ф. Хруцкой (1972). В мышечной ткани определяли количество воды высушиванием при t -105°С, внутримышечного жира по Сосклету (1997) экстрагированием высушенной навески мяса этиловым спиртом, белко-во-качественный показатель - расчетным методом по соотношению оксипро-

лина и триптофана, аминокислоты - на автоматическом анализаторе Т-339 (Т.Д. Козаренко и др., 1975, 1981), pH -потенциометрически, триптофан - по Гремм, Смит и др. в модификации Вербицкого и Детерджа 1982), оксипролин - по Нойману и Логану в модификации Вербицкого, согласно ГОСТу 23041-78.

В крови определяли: содержание эритроцитов и гемоглобина - на эритро-гемометре; лейкоцитов в камере Горяева; активность глутатионпероксидазы по Paglia и Valentine (1967), содержание общего, восстановленного и окисленного глутатиона йодометрически по Вудворду и Фрею, в модификации В.Е. Эйдри-гевича и В.В. Раевской (1966); содержание диеновых коныогатов (ДК) и окси-диеновых (OK) определяли спектрометрически по поглощению раствора липи-дов сыворотки крови при 233нм и 275нм оксидиеновых коныогатов, 3. Плацер и др. 1970; активность супероксиддисмутазы изучали по ее способности конкурировать с нитросиним тетразолием за супероксидные анионы по методу Чева-ри (1985), содержание общего кальция и неорганического фосфора в плазме крови проводили с использованием метода фотометрического титрования (Б.Д. Кальницкий и др. 1988); содержание витамина Е в сыворотки крови определяется с помощью высокоэффективной жидкостной хромотографии на хромото-графе «Минихром» со сканирующим УФ детектором, активность каталазы сыворотки крови по методу М.А. Королюк (1988); концентрацию общего белка в сыворотке крови определяли рефрактометрическим методом, белковые фракции сыворотки крови электрофоретически по методике описанной А.Е. Гурвич (1966), липопротеиды определяли в электрофоретических фракциях сыворотки крови по Е.А. Васильевой (1982), общие липиды - методом экстрагирования в аппарате Соксклета.

Определение резервной щелочности, витаминов А,ВЬК, каротин, лимонную кислоту проводили по методикам, описанным в руководстве В.И. Антонова, В.И. Федотова, H.A. Сухой (1989). В химусе тонкого кишечника определяли активность общих протеаз - по Кунитцу, химотрипсина и трипсина - по Ку-нитцу в модификации В.А. Галочкина (В.А. Галочкин, 1970; H.V. Bergmeyer, 1963).

Исследование мутагенной активности препарата выполнялось на базе Пензенской ГСХА под руководством к.б.н. A.M. Крюкова. В изучении этого вопроса использовались работы и методики (К.В. Затти, М.М. Тихомировой, 1976; A.M. Крюкова, С.В. Лункова, 1987; С.А. Danieli, G. Barlujani, 1981).

Фармакокинетические исследования селеноорганического препарата ДАФС-25 проведены на овцах цигайской породы. Для этого использовали методику статистических моментов, разработанную в лаборатории фармакокине-тических исследований Российского научно-исследовательского центра профилактической медицины МЗ России. Модельно-независимый метод статистических моментов позволяет дать обобщенную характеристику фармакокинетиче-ских процессов без применения каких-либо структурных моделей путем оценки интегральных параметров, относящихся ко всему организму животного в целом. Системные параметры не зависят от типа и структуры модели. Основным достоинством этого метода является его объективность; полученные оценки фармакокинетических параметров в минимальной степени зависят от выбора модели и других объективных факторов.

Содержание селена в кормах, яйце и большеберцовой кости определяли энергодисперсионным рентгенофлюоресцентным анализом в ВНИИЗ (г.Калинин). В крови, в органах и тканях селен определяли флуорометрически с 3,3-диаминобензидином (И.Й. Назаренко, И.В. Кислова, Т.М. Гусейнов, 1975).

Интенсивность флуоресценции определяли на лабораторном электронном флуорометре ЭФ-ЗМ, снабженной ртутнокварцевой лампой и светофильтрами: первичный ФК-1 - с максимумом пропускания 366 нм и двумя вторичными - с узким максимумом пропускания при 530 нм.

Количество селена в пробе рассчитывали по формуле

Х = ——где X - количество селена в пробе, мкг;

К - концентрация стандартного рабочего раствора (0,2 мкг/г);

F - уровень флуоресценции опытной пробы;

f- интенсивность флуоресценции Н-гексана;

С - показатель стандарта по гальванометру (60);

ш - навески исследуемой пробы (г).

По ходу экспериментов и научно-производственных опытов учитывали сохранность - по количеству сохранившегося поголовья и анализа причин падежа; живую массу - взвешиванием молодняка по периодам выращивания; интенсивность яйцекладки ежедневным учетом количества снесенных яиц.

Полученные экспериментальные данные подвергнуты статистической обработке по общепринятым в биологии методам (Е.К. Меркурьева, 1970) с использованием современных программ на компьютере. Достоверность различий оценивали при Р < 0,05.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Получение, физико-химическая характеристика и контроль производных селена

Полученный препарат ДАФС-25 является оригинальным отечественным селенорганическим соединением, в химическом отношении представляющим собой диацетофенонилселенид. ДАФС-25 содержит 25% органически связанного селена. По внешним данным он представляет собой порошок от белого до светло-желтого цвета со специфическим запахом. Препарат нерастворим в воде, растворим в маслах в концентрации 1:50. Препарат хранят в сухом, защищенном от света и хорошо проветриваемом помещении при температуре от +5 до +20 градусов. При таких условиях срок годности препарата составляет 2 года со дня изготовления. Его выпускают массой в 1 кг в герметически запаянных пакетах из полиэтиленовой пленки. Указанная тара обеспечивает сохранность и качество продуктов. ДАФС-25 изготавливают согласно технологическому per-

ламенту, разработанному организацией-изготовителем и утвержденному в установленном порядке. Производство препарата налажено на ООО «Сульфат» г. Саратов.

Контроль и сертификация ДАФС-25 должны соответствовать техническим условиям, утвержденным в установленном порядке Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия от 02.07.1996 г.

Разработанный метод синтеза халькогенсодержащих 1,5-дикетонов позволяет получать необходимый продукт с достаточной степенью чистоты и высокими выходами. (Патент № 2051681 РФ, 10.01.1996. Бюл. № 1, Б.И. Древко, В.А. Антипов, О.И. Жуков, Л.А. Фоменко, Л.И. Маркова, Р.И. Древко, Т.Н. Родионова, В.И. Ефремов, В.Г. Харченко).

Полученное в результате реакции соединение восстанавливают до соответствующего диорганилселенида, который охарактеризован при помощи данных элементного анализа, спектров ядерно-магнитного резонанса и ИК-спектрометрии. ИК спектры всех полученных халькогенсодержащих дикетонов содержат полосы поглощения карбонильных групп в области 1650-1685 см-1 и полосы поглощения, характерные для арильных заместителей 1570-1610 см"1.

Другим оригинальным отечественным препаратом является Селенолин. В химическом отношении предсталяет 2%-ный раствор диацетофенонилселенида (ДАФС-25) в растительном масле. Цвет раствора от светло-желтого до темно-желтого. Выпускают в форме стерильного раствора, расфасованного по 5 мл в стеклянные флаконы, закрытые резиновыми пробками и обкатанные алюминиевыми колпачками. Каждую единицу фасовки маркируют в соответствии с нормативной документацией и снабжают временным наставлением по применению. Хранят в защищенном от света месте при температуре от 10 до 25 °С. Срок годности при соблюдении условий хранения 24 месяца со дня изготовления. Технические условия (ТУ) разработаны ЗАО «Биоамид» г. Саратов совместно с Саратовским государственным аграрным университетом им. Н.И. Вавилова.

3.2. Токсикологические свойства ДАФС-25

Изучением степени токсичности ДАФС-25 установлено, что он обладает умеренной токсичностью для животных. Максимально переносимой дозой является 350 мг/кг живой массы. LDso составляет 385 мг/кг, LD(oo - 420 мг/кг.

По классификации H.H. Медведева (1968) препарат ДАФС-25 относится к 5 классу по кумулятивному действию.

В ходе эксперимента по определению пороговой дозы препарата ДАФС-25 были проведены гематологические и иммунологические исследования крови крыс. Определенный интерес по данным наших исследований имеют изменения в лейкоцитарной формуле опытных животных. Так начиная, со второго периода (5-сутки) дачи препарата происходило нарастание процента лимфоцитов, в то время как количество нейтрофилов, и особенно сегментоядерных, неуклонно снижалось до критических величин. У выживших животных в среднем соотношение процента нейтрофилов к лимфоцитам было 1:99 отсутствие в мазках крови базофильных и эозинофильных лейкоцитов, а также моноцитопения, вероятно, свидетельствует об угнетающем влиянии исследуемого образца препарата на лейкоцитообразующую функцию костного мозга.

Для оценки генетической активности ДАФС-25 изучена общая мутагенная активность данного соединения на дрозофиле в тесте ДЛМ. При этом мутагенной активности при его содержании в питательной среде в концентрациях 1,6 и 16 мг/кг не установлено.

При изучении патоморфологии внутренних органов цыплят-бройлеров при применении ДАФС-25 не установлено структурных изменений органов и тканей, в том числе жизненно важных органов - печени, почек, желудка и кишечника. Наряду с этим значительно повышается иммунный статус птицы, что четко заметно в органах иммунной системы - селезенке, фабрициевой сумке, в лимфофолликулах кишечника, печени, легких и желудке. Длительное назначение ДАФС-25 в дозе 1,6 мг/кг корма не оказывает токсического воздействия на органы и ткани.

Результаты контрольного убоя, обвалки туш и анализа химического состава позволили сделать вывод о положительном влиянии ДАФС-25 на выход и качество мяса и субпродуктов. Химический состав мышечной ткани свиней опытных и контрольных групп отличался незначительно. Различия в пользу животных, получавших ДАФС-25, установлены в живой массе и массе туш, в содержании мышечной ткани и шпика, а также в содержании общего количества незаменимых и заменимых аминокислот в мышечной ткани. Прирост живой массы в этой группе по нашим расчетам составил 411,0г, что на 63,5 г больше, чем в группе позитивного контроля и на 128,0 г больше, чем в группе негативного контроля.

Проведенная оценка доброкачественности мяса от подопытных животных по комплексу признаков показала полную доброкачественность мяса при применении ДАФС-25. По некоторым показателям органолептической оценки и биохимических исследований качество мяса поросят опытных групп превосходило контроль. Полученные результаты при изучении стойкости мяса при хранении говорят о том, что охлажденное мясо всех подопытных групп животных при соблюдении режима хранения длительное время сохраняет свои первоначальные положительные качества.

Проводя оценку качества мяса цыплят-бройлеров опытной группы, мы установили, что у опытной группы оно отличалось более выраженными положительными органолептическими показателями при дегустационной оценке по сравнению с отрицательным контролем.

По всем изученным показателям качество мяса цыплят первой контрольной группы значительно уступало таковым у цыплят второй и третьей групп. По химическому составу мясо птиц второй и третьей групп практически не отличалось. Несколько больше содержание сухого вещества и незаменимой аминокислоты триптофана зарегистрировали в образцах мяса цыплят третьей опытной группы. Соответственно и белково-качественный показатель в этой группе был выше по сравнению со второй группой на 8,3% (Р<0,05).

Для проведения органолептической оценки мяса были отобраны образцы тканей подопытных цыплят. Согласно методике ВАСХНИЛ проведена тепловая обработка всех образцов, комиссионная дегустационная оценка аромата консистенции и вкуса мяса. Во второй и третьей группе мясо характеризовалось как сочное, с нежным ароматом, без постороннего привкуса и запаха. По сумме баллов наивысшую оценку получило мясо цыплят третьей опытной группы, самая низкая оценка была выставлена образцам мяса от цыплят первой группы.

3.3. Фармакологические свойства препарата ДАФС-25

При изучении механизма биологического действия препарата ДАФС-25 определяли его влияние, главным образом, на антиоксидантную, иммунологическую функции и другие биохимические показатели, отражающие его участие в обмене веществ. Влияние ДАФС-25 на показатели обмена веществ у сельскохозяйственной птицы проводили на цыплятах бройлерах в возрасте от 1 до 60 дней на Елшанской птицефабрике Саратовской области.

По принципу аналогов было сформировано 4 группы цыплят по 200 голов в каждой: 1 группа - контрольная, получала основной рацион (ОР) с естественным содержанием селена (0,09-0,18 мг на 1 кг корма); группы 2, 3, 4 (опытные) получали ОР с добавлением ДАФС-25 до общего содержания селена 0,1, 0,2, 0,4 мг/кг на 1 кг корма соответственно.

Об антиоксидантных свойствах ДАФС-25 судили по определению в крови цыплят активности ферментов: глутатионпероксидазы, супероксиддисмута-зы, а также различных форм глутатиона, супероксиданионрадикала и продуктов ПОЛ (диеновых и оксидиеновых коныогатов) (табл. 1).

Самая высокая активность фермента глутатионпероксидазы отмечалась в группе, где содержание селена в рационе составляло 0,4 мг на кг корма. Такая тенденция отмечалась на протяжении всего опыта. В 60-ти дневном возрасте активность этого фермента в 4 опытной группе составляла 10,62 НАДФН/мин, против контроля 7,72 НАДФН/мин.

Влияние ДАФС-25 на свободно-радикальное окисление у птиц

Группы Возраст, дни

15 I 30 I 45 60

Общий глутатион, мг%

1 32,41+0,16 26,71±0,55 27,6310,67 36,74Ю,47

2 35,61+0,66* 27,32±0,58* 25,1710,92* 36,7411,51

3 44,21+1,54* 35,92±0,67* 30,7010,49* 36,7011,54

4 42,98+1,68* 41,45±1,59* 32,2410,94* 39,9110,62*

Восстановленный глутатион, мг%

1 23,96±0,59 19,6510,49 21,4910,23 30,7011,22

2 28,55±0,66* 18,7311,09 17,1912,40 24,5611,16

3 30,3910,68* 27,3210,83* 16,2712,67 27,6311,49

4 25,79+0,89 33,46Ю,91* 23,0310,42* 30,7011,83

Окисленный глутатион, мг%

1 8,45±0,20 7,06+1,22 6,1410,67 6,0410,55

2 7,06±1,11 8,59+0,49 7,9810,40 12,1810,66*

3 13,82+0,69* 8,6010,67 14,2110,94* 9,0710,54*

4 17,1911,16* 7,9911,33 9,2110,35* 9,2110,34*

Глутатионпероксидаза, НАДФН/мин

I 2,32±0,17 3,32+0,42 6,7610,60 7,7210,19

2 7,73±0,32* 5,1210,84* 8,6910,17* 8,1110,01

3 9,66+0,82* 6,0910,33* 10,6311,13* 9,19+0,75*

4 8,7010,27* 6,12+0,46* 11,6011,47* 10,6210,92*

Супероксиддисмутаза, ед/мин

1 400,00±2,13 188,0010,32 114,6711,50 120,0013,14

2 400,00±3,79 216,0012,12* 205,3311,14* 200,0012,68*

3 438,6711,80* 240,0013,80* 286,5615,95* 255,5613,80*

4 440,0012,25* 249,3814,61* 244,44+1,70* 222,2314,74*

Супероксиданионрадикал, ед/мин

1 975±1,12 129711,25 123212,20 121811,55

2 1075±2,59* 122411,90 142811,17* 143612,09*

3 1237+4,23* 170714,14* 208313,13* 207211,47*

4 1125+1,95* 179912,32* 2126+5,16* 223711,14*

Диеновые коныоГаты, мкМ/л

1 12,7±0,27 14,0910,19 13,2010,27 12,1010,11

2 6,4±0,34* 7,7210,11* 11,36+0,22* 13,6010,22

3 9,0+0,14* 12,7010,22* 11,8010,23* 14,1010,17

4 7,1+0,19* 10,0010,20* 10,9010,13* 12,7010,25*

Оксидиеновые коныогаты, ед/гш

1 0,10+0,003 0,0810,003 0,0710,01 0,05+0,009

2 0,06±0,006* 0,0310,004* 0,06+0,006 0,05+0,01

3 0,0810,005* 0,07+0,006 0,0510,003 0,0510,01

4 0,08±0,005* 0,0410,02* 1 0,0510,01 0,0610,003

Содержание всех форм глутатиона у опытных групп животных было также выше, чем в контроле. Значительная разница наблюдалась по окисленному глутатиону. Так его количество у цыплят в 1 группе (контрольной) в 60 дней составило 6, 05 мг% против 12,18; 9,07 и 9,21 мг% во 2, 3 и 4 группах.

Элемент селен следует относить, прежде всего к адаптогенам животного мира, учитывая, что пероксиды и гидроперокиды образуются и накапливаются преимущественно в условиях окислительного стресса, являющегося универсальным последствием любого его вида.

Именно поэтому роль селена во многом заключается в адаптации к окислительным стрессам при частичном выходе организма за пределы оптимальной, «разрешенной» ему природой зоны равновесия с атмосферным кислородом. Селен как бы расширяет границы этой «разрешенной» зоны и помогает организму относительно безопасно существовать в условиях интенсификации окислительных процессов.

Изученное нами влияние селеноорганического препарата ДАФС-25 на активность фермента супероксиддистутазы в крови цыплят-бройлеров показало, что ее активность с возрастом птицы уменьшается и увеличивается в зависимости от содержания селена в рационе.

Самая высокая активность этого фермента отмечалась в 45-дневном возрасте. Ее активность в опытных группах в этом возрасте составляла соответственно 205,3; 286,6 ед/мл против 114,7 ед/мл в контроле.

Отмечено нарастание уровня супероксиданионрадикала в зависимости от возраста и содержания селена в рационе цыплят-бройлеров, что говорит о повышении обменных процессов в организме цыплят, получавших в рационе ДАФС-25. Самый высокий его уровень отмечается в 60 дней - 1436,4; 2072,0; 2236,7 ед/мл в опытных группах против 1218,2 ед/мл в контроле.

Интенсивное снижение продуктов ПОЛ, мы наблюдали в возрасте от 15 до 45 дней. Уровень ДК в крови цыплят-бройлеров в 1 контрольной группе в 15-днсвном возрасте составил 12,7 мкмоль /л, в 45 дней 13,2 мк моль/л, тогда как во 2-й опытной группе уровень ДК колебался от 6,4 до 11,4 мк моль/л, в 3-й

опытной группе от 9,0 до 11,8 мк моль/л и в 4-й опытной группе от 7,1 до 10,9 мк моль/л. Динамика оксидиеновых коньюгатов была аналогична диеновым.

Снижение уровня ДК и ОД показывает, что антиокислительная система у опытных групп цыплят-бройлеров хорошо выражена и надежно защищена. Селен способен непосредственным или косвенным образом позитивно влиять на многие звенья антиоксидантной системы организма.

Усиление активности супероксиддисмутазы при одновременном увеличении супероксиданиона в крови цыплят-бройлеров приемлемо и при ведении в их рацион препарата ДАФС-25.

Полученные нами данные наглядно демонстрируют, что селеноорганиче-ский препарат ДАФС-25, обладает сильными антиоксидантными свойствами.

В наших экспериментах содержание общего белка было выше в крови опытных цыплят и составило 5,03 г% против контроля 3, 54г % (табл. 2).

Содержание альбуминов в контрольной группе колебалось от 33,3 до 36.4 % против 38,1 - 39,7% в опыте. Бета-глобулины колебались от 10,5 до 12,5 % в контрольной группе против 15,7-16,1 % в опыте.

Как показали наши исследования, ДАФС-25 положительно влияет на ли-пидный обмен, конкретно на альфа- и бета-липопротеиды сыворотки крови цыплят-бройлеров. Так содержание альфа-липопротеидов у цыплят контрольной группы в возрасте 60 дней составляло 14, 2 % против 18,0% в опыте. Количество бета-липопротеидов соответственно 32,7% против 45, 6%.

Скармливание комбикорма с добавлением ДАФС-25 оказало влияние на ферментсекретиругощую функцию поджелудочной железы (табл. 3). Анализ активности ферментов содержимого тонкого отдела кишечника птицы показал, что изменение корма сказывается не только на процессах синтеза и выделения, но и на гидролизующем действии энзимов. Сила воздействия зависит от количества добавленного в комбикорм препарата ДАФС-25. При дозе селена 0,4 мг/кг корма средняя концентрация ферментов увеличилась на 40% для общих протеаз, химотрипсина на 29% и трипсина на 50%. При этом повысилась доля химотрипсина и трипсина в общей протеолетической активности с 74% до 82%.

Влияние ДАФС-25 на биохимические показатели

в сыворотке крови цыплят-бройлеров

Группы Возраст, дни

15 30 60

Общий белок, г%

1 3,20+0,14 3,35±0,13 3,5410,11

2 3,35±0,17 3,35±0,23 4,9910,28*

3 3,58±0,43 4,1610,11 4,5910,14*

4 3,63±0,27 4,38+0,15* 5,0310,26*

Альбумины, %

1 36,37+0,56 35,09+0,25 33,3210,44

2 39,8710,12* 39,17±0,14* 37,1510,22*

3 39,9010,18* 38,49±0,48* 37,4710,37*

4 39,67+0,17* 39,02+0,37* 38,0810,29*

Бета-глобулины, %

1 10,27± 0,29 12,04+ 0,46 10,4910,37

2 14,28± 0,48* 14,23+ 0,35* 12,3710,22*

3 14,б5± 0,61* 17,87± 0,37* 12,4910,29*

4 16,06+0,58* 18,56± 0,42* 15,6610,58*

Альфа-липопротеиды

1 12,52± 0,13 16,57± 0,24 14,2210,40

2 12,75+0,31 17,96 ±0,67 17,1910,63

3 13,58+0,45 18,43± 0,54* 17,3610,33*

4 16,22± 0,32* I 17,52±0,67* 18,0210,77*

Бета-липопротеиды

1 36,38+0,54 34,66± 0,70 | 32,7310,38

2 43,27± 0,78* 46,6210,68* 41,9110,25*

3 44,34± 0,30* 46,3710,11* 45,1610,27*

4 44,89± 0,35* 46,1910,37* 45,5610,21*

Активность пищеварительных ферментов в химусе цыплят-бройлеров под влиянием ДАФС-25, (Е/мл)

Группы Возраст, дни

15 30 60

Общая протеаза

1 2,28± 0,14 2,40± 0,23 3,28 ±0,22

2 2,78± 0,40 2,91±0,15 3,44± 0,09

3 3,01±0,55 3,2210,11* 3,60± 0,41

4 3,31±0,10* 3,5310,33* 4,50±0,14*

Трипсин

1 0,9 8± 0,09 1,07± 0,14 1,41±0,12

2 0,99± 0,12 1,30± 0,33 1,80± 0,09*

3 1,00 ±0,09 1,43 ±0,19 1,91±0,14*

4 1,32± 0,13 1,49± 0,12 2,38± 0,09*

Химотрипсин

1 0,43+ 0,06 0,60±0,10 0,96± 0,16

2 0,51± 0,08 0,73 ±0,12 1,09± 0,15

3 0,60+0,14 0,67± 0,09 1,11 ±0,20

4 0,82± 0,22 0,77± 0,10 1,10 ±0,14

Комплексное применение препарата ДАФС-25 и кормового антибиотика флавомицина в рационе цыплят-бройлеров дало еще более обнадеживающие результаты. У цыплят-бройлеров улучшилась усвояемость корма. Отмечено улучшение всасывания минеральных веществ в организме, повысился общий и промежуточный обмены, о чем свидетельствуют положительные показатели резервной щелочности, концентрация общего белка в сыворотке крови, кальция и фосфора, уровня лимонной кислоты, а также количества витаминов А, Е, К, В1.

По показателям резервной щелочности необходимо отметить достоверное физиологическое увеличение ее у цыплят 3 опытной группы, получавшей ДАФС-25 с флавомицином, по сравнению с контролем (48,50% С02 против 47,75% СОг). Объем концентрации % СОг в контрольной и 2 опытной группах находился в физиологических пределах.

Концентрация общего белка в сыворотке крови между группами животных существенных различий не имела. В организме птицы кальциевый метаболизм происходит наиболее интенсивно. Отложение его у цыплят мясных пород находится в прямой зависимости от массы тела.

Содержание кальция у цыплят-бройлеров, получавших ДАФС-25 и одновременно ДАФС-25 с флавомицином, достоверное увеличилось в опытных группах по сравнению с контролем соответственно на 33,3-20,0%.

Содержание витамина Е в плазме крови у всех птиц в опыте было недостаточным - 0,65-0,70 мг%. У цыплят контрольной группы отмечались лишь следы токоферола. В группах, где задавали селен и селен с флавомицином, его количество приближалось к физиологической норме. Селен снижал потребность в витамине Е и способствовал удерживанию его в плазме крови. Однако и витамин Е снижает потребность в селене, поддерживая его в активной форме и предупреждая потери его из организма.

Содержание витамина В) у всей опытной птицы было в пределах нормы. У цыплят, получавших препарат ДАФС-25 и ДАФС-25 с флавомицином, его содержание было несколько больше, но различия не достоверны - 2,0 мг% против 1,73 мг% в контроле.

Содержание витамина К у всех цыплят было в пределах физиологической нормы, с небольшим увеличением в крови цыплят 2 и 3 опытных групп - 38сек в опытных группах против 37 сек в контрольной.

Сравнительная оценка применяемых в рационе цыплят опытных групп препарата ДАФС-25 и селенита натрия показала более эффективное влияние препарата ДАФС-25 на основные биохимические показатели крови птицы: увеличение общего и окисленного глутагиона, альбуминов и бета-глобулинов, об-

щего белка, альфа и бета липопротеидов в сыворотке крови, снижение диеновых коньюгатов. Полученные данные указывают, что препарат ДАФС-25 обладает более высокой биологической активностью и доступностью для организма, чем селенит натрия.

Также, как и у мясной птицы, нами отмечено, что под влиянием ДАФС-25 в дозе 1,6 мг/кг корма, у кур-несушек в возрасте от 23 до 47 недельного возраста наблюдались стимуляция гемопоэза, нормализация белкового, углеводного, липидного и минерального обмена, о чем свидетельствовали показатели общего белка, глюкозы, холестерина, общего кальция и неорганического фосфора.

При этом нормализовалось перекисное окисление липидов в организме кур-несушек. Содержание витаминов А и С в плазме крови подопытных кур свидетельствует о достаточной биологической доступности этих витаминов из корма (табл. 4).

В нашей работе были попытки проследить во взаимоотношениях селена с витамином А, который также имеет право считаться компонентом антиокислительной системы. Эти взаимоотношения могут быть опосредованы через йод-содержащие гормоны и белки.

Данные последних лет свидетельствуют о том, что селен, контролирует обмен йода, будучи составной частью двух йодтирониндейодиназ (ишш И, Наюппо М, Оге§оНп С, 1985). Последние катализируют превращения относительно малоактивного тироксина (Т4) в более активный гормон трийодтиронин (Т3), одной из функций которого является участие в образовании тиреоглобу-лина, обладающего функцией каротиназы - фермента, катализирующего превращение каротина в витамин А (К.Д. Валюшкин, 1981).

Наличие препарата в рационе кур-несушек старшего возраста (330 - 510 дней) позволяет поддерживать у них обмен веществ и репродуктивную систему в пределах физиологических норм, что дает нам возможность дольше использовать птицу, получая достаточно высокую яйценоскость.

Таблица 4

Морфологические и биохимические показатели крови и сыворотки кур-несушек под влиянием ДАФС-25,47 нед. возраста Показатели \ Группы

1 ОР без стан- ! 2 | ОР со стан- з 1 ОР + стан- |

дартного пре-микса ! дартным пре-1 миксом дартный пре- | микс + ДАФС

: Эритроциты, млн/мкл 3,01 ±0,07 | 3,3210,09 3,4110,08 ;

1 Гемоглобин, г/л 70,6± 1,86 ; 76,311,90* 79,111,76* 1

Гематокрит, % 20,0±0,73 ; 24,110,81* 25,110,72* !

Общий белок, г% 3,3910,21 | 4,9610,23* 5,0410,21* :

' АсАТ, мкм/мл 4,91 ±0,72 ! 3,4110,69 2,8710,71 |

АлАТ, мкм/мл 0,93±0,87 0,76+0,89 0,6710,78

1 Холестерин, мг% 97.1 ±4,41 | 91,014,02 86,914,11 !

Кислотная емкость, мг% 303,2±12,7 ! 327,8112,2 зз1,4ю,72 ;

Кальций, мг% 12,710,62 | 14,4+0,94 15,010,58* 1

Фосфор, мг% 4,6+0,51 4,910,63 5,210,58 (

Глюкоза, мг% 168,7±4,7 212,315,3* 213,414,2* 1

МДА. нМоль/мл 0,28+0,02 0.18+0.01* 0.15+0,01*

ПВК, мг% 2,6910,19 1.6910,11* 1,6310,15*

Вшамин А, мг% 32,611,77 58.312,30* 61,712,7*

Витамин С, мкг/мл 16,810,38 Г" 25,310,42* 28,710,61* ;

Изучая влияние препарата ДАФС-25 на организм телят в возрасте от 3 до 6 месяцев, необходимо отметить, что телята данною возраста хорошо реагировали на дополнительное введение в их организм селена в форме ДАФС-25.

В наших опытах на телятах препарат ДАФС-25 использовали при пол-кожном и пероральном путях введения в разных дозах и в разные сроки. Проведенные опыты свидекмьств.мот. что независимо 01 пути введения препарата

телята, получавшие определенные дозы селена, развивались лучше, чем их «сверстники» из контрольных групп.

Несмотря на то. что опыты проводились в разных хозяйствах, мы отмечали низкое содержание селена в сыворотке крови животных - 0,020 - 0,030 мкг/мл при норме 0,1 мкг/мл. К 6 месячному возрасту, уровень селена у всех опытных животных увеличился примерно в 6,5 - 10 раз и более.

С обеспечением организма животных селеном повысились и многие биохимические показатели крови, отражающие уровень обмена веществ.

К 6 месячному возрасту у телят опытных групп увеличилось содержание общего белка на 8,3 - 9,7% по сравнению с контролем. Отмечено повышение в этом возрасте содержания альбуминовых и глобулиновых фракций на 3,3 -6,3% и 5,0 - 9,8% соответственно.

Введение препарата ДАФС-25 в организм телят опытных групп способствовало стабилизации фермента катапазы от 14,9 мкМ/л в 1 опытной группе до 16,50 мкМ/д во 2 опытной группе. Достоверно снизилось содержание диеновых коныогатов у всех животных опытных групп на 12,4; 19,7 и 16,1%. Поддержание необходимого физиологического уровня селена в организме телят положительно повлияло на фосфорнокальциевый обмен. Содержание кальция в опытных группах увеличилось по сравнению с контролем на 12,5 - 13,9%, фосфора на 19,5- 23,9%.

По нашему мнению, полезность селеновых препаратов может проявиться только в отдельные критические фазы, как, например период вынашивания плода, брачные периоды. Как показали результаты наших исследований у коров сухостойного периода, которым вводили препарат ДАФС-25 в виде инъекций, повышался уровень селена в крови пропорционально введенной дозе до физио-лошческой нормы (габл. 5).

В результате установлены положительные показатели крови \ коров опытных 1р\пп: увеличение эрщроцитов, лейкоцитов и гемоглобина, увеличение общего белка и белковых фракций.

Таблица 5

Влияние ДАФС-25 на показатели крови сухостойных коров

Показатели До эксперимента Через 30 дней Через 60 дней

Контроль 1- опыт 2-опыт Контроль 1- опыт 2-опыт Контроль 1-опыт 2-опыт

Катапаза, мкМ/мл 2,01±0,01 2,0710,07* 2,0410,09 2,1710,03 3,10Ю,07* 3,5010,06* 2,ЗОЮ,02 3,2910,05* 3,6910,07*

ДК, мкМ/мл 2,00±0,07 2,1810,05 2,09+0,03 2,17+0,03 1,9810,01* 1,7710,09* 2,3010,04 1,9010,02* 1,6810,06*

Селен, мкг/мл 0,009+ 0,007 0,011± 0,001 0,0091 0,008 0,0101 0,003 0,0151 0,001 0,030± 0,002* 0,0101 0,002 0,0201 0,003 0,0601 0,004*

Эритроциты, млн/мкл 5,3±0,3 5,4±0,2 5,3±0,3 5,6+0,2 5,9+0,2 6,110,1 5,510,1 6,5±0,3* 6,610,1

Лейкоциты, тыс/мкл 6,94+0,07 6,7810,10 6,9310,08 6,9510,10 8,40Ю,07* 7,431 0,009* 7,0010,009 9,301 0,003* 8,101 0,005*

Гемоглобин, г/л 91,35+ 0,21 92,001 0,15 92,171 0,23 92,051 0,17 97,15+ 0,20* 100,001 0,19* 91,201 0,23 102,12+ 0,25* 105,171 0,17*

Общий белок, г% 7,2010,23 7,30+0,16 7,3010,15 7,30+0,09 8,6010,02* 8,6010,08* 7,3010,15 8,9010,16* 8,9010,23*

Альбумины, г% 3,90±0,21 3,7010,14 3,9010,14 4,10+0,05 4,2010,04 4,2010,07 4,1010,06 4,2010,05 4,30+0,03*

Глобулины,г% 3,3+0,19 3,610,12 3,410,14 3,210,07 4,410,07* 4,610,05* 3,210,17 4,7Ю,10* 4,610,12*

Кальций, мг% 10,04±0,07 10,0010,09 10,0710,05 10,20+0,05 10,3810,08 10,6010,07 10,6010,09 10,7010,06 10,90Ю,08

Фосфор, мг% 4,70±0,20 4,6010,10 4,60Ю, 10 4,8010,10 5,00Ю,20 5,2010,30 4,9010,10 5,2010,30 5,6010,40

Витамин Е, мг% 0,21±0,03 0,2310,06 0,2510,06 0,2610,01 0,4110,03* 0,90Ю,01* 0,2610,01 0,4510,01* 0,5110,02*

Таким образом, препарат ДАФС-25 совместно с нитамином действует благоприятно на отдельные звенья белкового обмена, что положительно сказалось на общем состоянии коров.

Введение ДАФС-25 коровам сухостойного периода с интервалом в 14 дней способствовало значительному повышению активности антиоксидантного фермента каталазы от 3,1 до 3,7 мк М/мл против 2,2 - 2,3 мк М/мл в контроле.

По результатам исследований у коров отмечено снижение диеновых коныогатов до 1,68 - 1,77 мк М/мл против 2,17 - 2,30 мк М/мл в контроле.

С применением ДАФС-25 установлено поддержание достаточного уровня кальция и фосфора в сыворотке крови коров - 10,7 - 10,9 мг и 5,2 - 5,6 мг % в опытных группах, против 10,6 мг% и 4,9 мг% в контроле, увеличение и сохранение физиологического уровня витамина Е в сыворотке крови опытных коров, что очень важно для воспроизводительной функции коров, а также для профилактики многих гинекологических заболеваний. Количество витамина Е у всех опытных коров за период опыта увеличилось до 0,45 - 0,51 мг% против 0,26 мг% в контроле.

Между деятельностью витамина Е как стабилизатора клеточных мембран и селенсодержащими глутатионпероксидазами давно установлена причинно-следственная связь. Однако, селен не может заменить витамин Е и далее только антиоксидантные функции токоферола.

А вот взаимное предохранение друг друга от окислительного разрушения является лишь малой составной частью синергизма витамина Е и селена.

Высокая биологическая активность препарата показана и при включении его в рацион свиней. При анализе состояния биохимических показателей крови, наблюдали биологическую доступность для организма опытных свиней витаминов А и С? из стандартного и опытного рационов. Активность аланиновой и аспарагиновой грансаминаз в опытной группе, получавшей ДАФС-25, были значительно ниже, чем в контроле, что является свидетельством положительного влияния селена на печень и мышечную ткань. Отсутствие биологически ак-

тивных веществ в рационе поросят резко снижает фагоцитарную активность лейкоцитов и концентрацию иммуноглобулинов (табл. 6).

Таблица б

Биохимические показатели крови поросят при назначении ДАФС-25

Показатели крови Группы

1-контроль комбикорм без витаминно-минерального премикса 2-контроль комбикорм +премиксК51-1+ селенит натрия 3-опыт комбикорм + премикс +ДАФС-25

1. Содержание витаминов в крови

А; мг% 11,б±0,25 19,0±0,29* 19,4±0,30*

С, мг% 0,3±0,01 0,9±0,01* 0,8±0,02*

2. АсАТ м/моль 96,8±12,1 91,3±11,1 77,9±9,1

3. АлАТ м/моль 101,б±12,3 96,1±9,7 85,3±10,0

4. Фагоцитарная активность лейкоцитов 72,3±2,21 79,9±2,30 80,5±1,57*

5. Иммуноглобулины, ед. 9,11±1,26 19,52±2,86* 18,11±3,04*

б. Холестерин, мг% 99,3± 11,3 84,2±10,4 72,8±9,8

При изучении действия диацетофенонилселенида (ДАФС-25) и селенита натрия на рост и развитие микроорганизмов, включающие грибы микро- и мак-ромицеты, а также некоторые бактерии. Установили, что в опыте с селенитом натрия на исследуемых средах не наблюдалось никаких изменений в скорости роста колоний и морфологических признаков мицелия шампиньонного двуспо-рового от контрольных; в опыте с ДАФС-25 происходило резкое угнетение роста грибов и бактерий при концентрации последнего 0,1%. По мере уменьшения концентрации проявление токсичности снижалось, но оставалось заметным даже при концентрации 0,0001% по сравнению с контролем.

3.4. Фармакокинетика препарата ДАФС-25

В результате проведенных исследований установлено, что накопление селена в сыворотке крови овец зависит от введенной дозы ДАФС-25. Логично просматриваются три периода накопления селена в сыворотке крови: период

всасывания, максимальной концентрации и элиминации. Наиболее интенсивное накопление селена в сыворотке крови происходит в течение первых З-б часов при ведении дозы 1,0 мг/кг, а при введении дозы 0,1 мг/кг в более поздние сроки. К 24 часам концентрация селена в крови начинает понижаться, что свидетельствует об усилении процессов элиминации. Следует отметить, что снижение концентрации селена в сыворотке крови овец после инъекции ДАФС-25 до исходного уровня происходит относительно медленно и плавно.

При введении дозы 0,1 мг/кг концентрация селена в крови приближается к исходному уровню к 6-10 суткам после начала опыта, а при дозе 1,0 мг/кг в более отдаленные сроки.

При рассмотрении полученных результатов следует, что в организме контрольной птицы уровень селена, был ниже физиологических норм. Так в порядке понижения показателей селен в органах и тканях у птицы контрольной группы обнаружен в следующей последовательности: почки < печень < селезенка < стенка мышечного желудка < стенка тонкого кишечника < стенка железистого желудка < головной мозг < кровь < грудная мышца < сыворотка крови < легкие < мышца сердца. Кроме того, необходимо отметить, что селен в организме депонируется в больших количествах в паренхиматозных органах (почки, печень, селезенка, желудочно-кишечный тракт) и меньше в других органах и тканях.

При анализе данных по опытной группе птицы было установлено, что во всех исследуемых субстратах селена, содержалось достоверно больше, чем в контроле. В опытной группе цыплят, как и в контрольной, больше всего содержалось селена в почках, печени, селезенке и стенке мышечного желудка, а в остальных тканях и органах с колебаниями сохранилось примерно та же тенденция, как и в контроле. Необходимо отметить и гот факт, что меньше всего селена, содержалось в крови и ее сыворотке. Однако в крови в обоих случаях его было больше, что указывает на связь части селена с форменными элементами крови.

3.5. Эффективность селенорганических препаратов в животноводстве

В опытах на курах-несушках в возрасте от 120 до 330 дней из трех изучаемых доз (0,15, 0,30, 0,50 мг/кг) в виде селенита натрия, оптимальной терапевтической дозой установили 0,3 мг селена на кг корма.

Оптимальной дозой ДАФС-25 для цыплят-бройлеров, кур-несушек является 1,6 мг/кг корма, в виде премикса или внесения его путем многоступенчатого перемешивания. Однако, изучая периодичность изменений метаболического статуса цыплят-бройлеров, мы пришли к выводу о необходимости дополнительного введения селена в рацион. Таким образом, добавки в рацион цыплят-бройлеров препарата ДАФС-25 в количестве 3,2 мг на кг корма в течение первых двух недель и 1,6 мг на кг в течение последующих недель, способствовало более экономному расходованию энергетического потенциала в организме птицы.

Оптимальной дозой для телят в возрасте от 3 до 6 месяцев является 0,2 мг/кг массы тела 1 раз в 2 недели путем подкожного введения в виде масляного раствора в область шеи и 0,2 мг на кг живой массы тела также 1 раз в 2 недели при перорапьном пути введения.

Эффективной дозой для коров сухостойного периода является 70 мг ДАФС-25 в виде масляного раствора подкожно в область шеи с первого дня периода до отела с интервалом в 14 дней, один раз в сутки. В комплексе рекомендуем водить препарат нитамина по 6 мл на голову, внутримышечно.

Для свиней в возрасте 6 месяцев необходимо применять витаминно-минерапьный премикс с добавлением 1,6 мг ДАФС-25 на килограмм. В данной разработке надо отметить преимущества премикса с добавлением ДАФС-25 в сравнении с стандартным премиксом.

Для кроликов в возрасте от 45 до 230 дней препарат рекомендуется вводить в дозе 0,2 мг на кг живой массы в виде внутримышечных инъекций масляного раствора через каждые 2 недели, а при пероральном пути введения кроли-

кам в возрасте от 60 до 150 дней его вводить ежедневно в дозе 3,2 мг на кг корма.

Проведена разработка новой инъекционной формы селеноорганического препарата селенолина.

Дозы были разработаны для телят с 10 до 13 месячного возраста и для коров сухостойного периода.

Наиболее эффективной дозой для телят является 0,2 м г на кг живой массы (в расчете на ДАФС-25) вводимой подкожно в область шеи 2 раза в месяц.

Оптимальной дозой селенолина для коров сухостойного периода оказалась доза 90 мг на одно животное за 60, 30 и 15 дней до предполагаемого отела (5 мл селенолина содержит 90 мг ДАФС-25).

Использование премиксов включающих диацетофенонилселенид в рационе цыплят-бройлеров позволило получить птицу со стандартной живой массой, увеличить яичную и мясную продуктивность, улучшить качественные показатели яиц, снизить затраты корма (табл. 7).

Использование ДАФС-25 в дозе 1,6 мг/кг корма при выращивании цыплят-бройлеров увеличивает продуктивность от 3,4% до 18% в зависимости от условий содержания, кросса птицы, повышает сохранность птицы на 6-15% по сравнению с контролем.

Введение в рацион курам-несушкам премикса, содержащего ДАФС-25 в дозе 1,6г на 1 тонну, увеличивает не только продуктивность птиц, но и повышает качество яиц.

По полученным данным, средняя масса яиц от кур опытных групп составляла 53 г и была выше на 10,6% по сравнению с контролем.

Яйценоскость на среднюю несушку увеличивалась на 6-21,4% по сравнению с контрольной группой.

Применение селенита натрия в дозе 0,3 мг/кг корма в рацион кур-несушек привело к увеличению средней яйценоскости птицы на 11,5% по сравнению с контролем.

Таблица 7

Продуктивность с.-х. животных и птицы при внесении в рацион оптимальных доз селена

Серии опы тов Вид животных Препарат, доза Кол-во голов Масса тела, кг Прирост массы тела, кг Валовой сбор яиц, шт. (*) Среднесуточный прирост, г Яйценоскость на среднюю несушку, %(*) %к кон Тро-лга

Начало Конец

1 Цыплята-бройлеры, 15-60 дней ДАФС-25,1,6 мг/кг корма ■ 800 0,164 1,805 1,641 30,08 18,7

2 Цыплята- бройлеры, 1-47 дней ДАФС-25,1,6 мг/кг корма +Флавомицин 37,5 мг/кг корма 30000 0,093 1,698 1,605 34,9 18,6

3 Куры-несушки, 23-47 нед. ДАФС-25,1,6 мг/кг корма 540 ■ 1,611 1,800 20114* 67,0* 46,9

4 Куры- несушки, 330- 510дн. ДАФС-25, 1,6 мг/кг корма 9000 - 1,680 259540* 79,0* 8,2

5 Куры-несушки, 120-330 дн. Селенит натрия, 0,3 мг/кг корма 1066 1,025 1,605 105815* 73,1* 19,8

6 Свиньи, 6 мес. ДАФС-25,1,6 мг/кг корма 96 74,1 123,5 49,4 411,0 47,8

7 Телята с 3-6 мес. 0,2 мг ДАФС-25 на1 кг м.т. 2 р. в месяц 40 104,9 179,6 74,7 622,0 16,5

8 Телята с 10 до 13 мес. 0,2 мг, 2% р-ра селеноли-на на 1 кг м.т., 1 раз в 14 дн. 40 235,8 314,1 78,3 870,0 28,6

9 Кролики 45-230 дн. ДАФС-25, 0,2 мг на 1 кг м.т. 2 р. в мес. п/к 15 0,644 2,450 1,806 9,8 6,5

10 Кролики 60-150 ДН. ДАФС-25 -3,2 мг/кг корма 30 0,980 2,310 1,330 14,8 39,3

Перорапьное введение препарата ДАФС-25 телятам в возраст от 3 до б месяцев в дозе 0,2 мг/кг массы тела 1 раз в 14 дней увеличивало среднюю живую массу опытной группы животных на 12,4% по сравнению с контролем. Доза ДАФС-25, 0,2 мг на кг живой массы тела 1 раз в 14 дней в виде подкожных инъекций, способствовала увеличению живой массы телят к 6 месячному возрасту на 8,6% по сравнению с контролем.

Зарегистрировано благотворное влияние ДАФС-25 и нитамина на воспроизводительную функцию коров. При введении препарата в дозе 70 мг на животное, у коров снизилось задержание последа на 14%, на 37% заболеваемость эндометритом, на 20% маститом. На 15 дней уменьшился сервис - период (табл. 8).

Применение селенолина для коров сухостойного периода в дозе 90 мг на животное при подкожном пути введения способствовало профилактике задержания последа, заболеваемости коров эндометритами, маститами. Отмечено снижение сервис - периода на 15 дней по сравнению с контролем.

Таблица 8

Профилактическое действие ДАФС-25 при послеродовых заболеваниях у коров

Показатели Группы

Контрольная 1 -опытная 1 2-опытная

Кол-во коров в группе 10 10 I 10

Доза препарата, мг - 35 70

Задержание последа, % 15±0,1 5±0,3 1±0,5

Эндометриты, % 40±0,1 10±0,2 "1Ыо,з 3±2,1

Маститы 25±0,2 5±1,7

Сервис-период, дни | 72±2,8 68±1,2 | 57±1,5

2% инъекционный препарат селенолина в дозе 0,2 мг на кг массы тела 2 раза в месяц, применяемый подкожно телятам с 10 до 13 месяцев способствовал

увеличению живой массы к концу выращивания телят на 6,8% по сравнению с контролем.

Внутримышечное введение препарата ДАФС-25 кроликам в возрасте от 45 до 230 дней в дозе 0,2 мг на кг массы тела через каждые две недели способствовало увеличению живой массы кроликов на 6,5%. Содержание селена в мясе к концу выращивания составило 0,33 мкг/г.

Применение ДАФС-25 в рационе кроликов в возрасте от 60 до 150 дней в дозе 3,2 мг/кг корма при ежедневном приеме способствовало приросту живой массы на 39,3%. Убойный выход кроликов опытной группы был выше на 2,4% по сравнению с контролем. Мясо-костное соотношение опытных групп животных составило 4,09 против 2,95 в контрольных.

Использование премиксов с селенитом натрия и премикса с ДАФС-25 в рационе свиней 6 месячного возраста к концу выращивания привели к увеличению прироста живой массы свиней соответственно на 5,4 и 13,4%.

35

4. ВЫВОДЫ

1. Препарат ДАФС-25 является оригинальным отечественным селеноор-ганическим соединением, в химическом отношении представляющим собой ди-ацетофенонилселенид. ДАФС-25 содержит 25% органически связанного селена. Контроль качественных показателей препарата осуществляется в соответствии с разработанными методами и определяется по органолептическим и физико-химическим показателям, характеризующим его внешний вид, цвет, запах, массовую долю действующего вещества, температуру плавления, полную растворимость в оливковом масле, безвредность.

2. Диацетофенонилседенид малотоксичен для теплокровных животных и птиц как при изучении острой токсичности так подострой. Доза 350 мг/кг массы тела является максимально переносимой дозой препарата при однократном пероральном введении - 1Л>50. Доза - 385 мг/кг массы тела, вызвавшая гибель, является среднесмертельной дозой при однократном введении - 1ЛЭ5(). Доза 420 мг/кг массы тела вызвавшая гибель животного, является абсолютно смертельной дозой Ы)]00. При изучении подострой токсичности - Ы)50 при многократном скармливании препарата равна суммарной дозе препарата - 2017 мг/кг массы тела за 1-20 дней опыта. По кумулятивному действию препарат относится к 5 классу.

При длительном многократном его введении в оптимальных дозах не оказывает токсического влияния на организм животных и птицы. Не изменяет вкусовых и других качеств мяса. Гистологические исследования показали, что ДАФС-25 не вызывает патоморфологических изменений в структуре внутренних органов.

Препарат при его содержании в питательной среде в концентрациях 1,6 и 16 мг/кг корма в тесте ДЛМ на дрозофиле не вызывает мутагенной активности.

3. Фармакодинамика селенорганических препаратов (ДАФС-25, селенолина) характеризуется активизацией антиоксидантной системы за счет увеличения различных форм глутагиона общего, восстановленного и окисленного

соответственно на 26,8; 17,9 и 57%, активности ферментов глутатионперокси-дазы на 84% и супероксиддисмутазы на 40,5%, увеличении активности катала-зы на 81,7-84,4%, при достоверном снижении диеновых и оксидиеновых конь-югатов соответственно на 30 и 50%, малонового диальдегида на 39,4%. Установлена коррелятивная зависимость между различными дозами ДАФС-25 в рационе и активностью протеаз поджелудочной железы. Увеличение органического селена на 0,1 мг ведет за собой увеличение активности протеаз на 0,52 Е/мл. При этом повысилась доля химотрипсина и трипсина в общей протеоли-тической активности с 74% до 82%.

4. Механизм действия ДАФС-25 проявляется в активизации основных видов обмена веществ, в том числе белкового, углеводного, липидного, минерального и витаминного обменов, за счет увеличения общего белка и его фракций на 6,2 - 53,2%, глюкозы на 26,5%, а и Р липопротеидов на 14,6-31,7% и снижения холестерина на 8,5%, увеличения общего кальция на 18,1% и неорганического фосфора на 4,3%, витаминов - А на 89,2%; Е на 96%; С на 70,8%; В1 на 8,1% стимуляции эритро- и гемопоэза.

5. ДАФС-25 повышает естественную резистентность организма животных и птицы за счет повышения фагоцитарной активности лейкоцитов на 11,3%, контентрации иммуноглобулинов на 87,6%. Гистологические исследования показали, что препарат ДАФС-25 приводит к активизации иммунологических центров за счет четко выраженной структуры фолликулов в бурсе Фабрициуса, а также Т и В - лимфоцитов в селезенке

6. При изучении действия препарата ДАФС-25 и селенита натрия на рост и развитие микроорганизмов, включающих грибы микро- макромицеты, а также некоторых бактерий, в опыте с селенитом натрия на исследуемых средах не наблюдалось никаких изменений в скорости роста колоний и морфологических признаков мицелия шампиньонного двуспорового от контрольных, в опыте с ДАФС-25 происходило резкое угнетение роста грибов и бактерий при концентрации последнего 0,1%. Результаты дают основание считать, что ДАФС-25

обладает фунгицидным и бактерицидным действием при концентрации выше 0,0001%.

7. Фармакокинетика препарата ДАФС-25 характеризуется накоплением селена в сыворотке крови овец в зависимости от введенной дозы препарата. Наиболее интенсивное накопление селена в сыворотке крови происходит в течение первых 3-6 часов при введении дозы 1,0 мг/кг, а при введении дозы 0,1 мг/кг в более поздние сроки. К 24 часам концентрация селена в крови начинает понижаться, что свидетельствует об усилении процессов элиминации.

При введении селена в дозе 0,1 мг/кг сухого вещества корма концентрация его в крови приближается к исходному уровню к 6-10 суткам после введения, а при дозе 1,0 мг/кг в более отдаленные сроки.

Селен в организме распределяется неравномерно, так, в порядке понижения показателей, селен в организме и тканях обнаружен в следующей последовательности: почки - печень - селезенка - стенка мышечного желудка - стенка тонкого кишечника - стенка железистого желудка - головной мозг - кровь -грудная мышца - сыворотка крови - легкие - мышца сердца.

8. Препарат ДАФС-25 в разработанных нами дозах способствует лучшему росту и развитию животных и птиц, повышению их продуктивности и сохранности.

- ДАФС-25 в составе комбикормов или премисов в дозе 1,6 мг/кг корма при выращивании цыплят-бройлеров увеличивает прирост массы тела от 3,4 до 18%, повышает сохранность птицы на 6-15% по сравнению с контролем.

- введение в рацион курам-несушкам премикса, содержащего ДАФС-25 в дозе 1,6 г на 1 тонну, увеличивает яйценоскость на среднюю несушку на 621,4% по сравнению с контролем, повышая качество яиц.

- пероральное введение препарата ДАФС-25 телятам в возрасте от 3 до 6 месяцев в дозе 0,2 мг/кг массы тела 1 раз в 14 дней увеличивало среднюю живую массу опытной группы животных на 12,4% в сравнении с контролем.

- доза ДАФС-25 - 0,2 мг/кг массы тела в виде подкожных инъекций 1 раз в 14 дней способствовала увеличению живой массы телят к 6 месячному возрасту на 8,6%.

- ДАФС-25 обладает выраженной профилактической активностью при послеродовых осложнениях коров. Под влиянием препарата, введенного подкожно в дозе 70 мг на животное совместно с нитамином в дозе б мл внутримышечно за 60, 45, 30 и 15 дней до отела уменьшилось задержание последа на 14%, послеродовым эндометритом на 37%, заболеваемость маститом на 20%, на 15 дней уменьшился сервис-период.

- внутримышечное введение ДАФС-25 кроликам в возрасте от 45 до 230 дней в дозе 0,2 мг/кг массы тела через каждые две недели способствовало увеличению живой массы на 6,5%.

- применение ДАФС-25 в рационе кроликов в возрасте от 60 до 150 дней в дозе 3,2 мг/кг корма при ежедневном приеме способствовало приросту живой массы на 39,3%.

- премиксы с селенитом натрия и ДАФС-25 в рационе свиней 6 месячного возраста к концу выращивания привели к увеличению прироста живой массы свиней соответственно на 5,4 и 13,4%.

9. Результаты контрольного убоя, обвалки туш и анализа химического состава позволили сделать вывод о положительном влиянии ДАФС-25 на выход и качество мяса и субпродуктов. Химический состав мышечной ткани свиней опытных и контрольных групп отличался незначительно. Различия в пользу животных, получавших ДАФС-25, установлены в живой массе и массе туш, в содержании мышечной ткани и шпика, а также в содержании общего количества незаменимых и заменимых аминокислот в мышечной ткани.

Качество мяса цыплят-бройлеров опытной группы отличалось более выраженными положительными органолептическими показателями при дегустации и оценке по сравнению с отрицательным контролем (4,8 балла в опыте против 4,6 баллов - в контроле). Установлено большее содержание сухого

вещества и некоторых аминокислот, в том числе триптофана. Белково-качественный показатель был выше на 8,3%.

10. Для лучшего роста и развития телят на откорме в возрасте от 10 до 13 месяцев рекомендуется применять новый препарат - селенолин подкожно, телятам в дозе 0,2 мг/кг массы тела 2 раза в месяц, который увеличивает живую массу к концу выращивания телят на 6,8% по сравнению с контролем.

Введение 2% селенолина для коров сухостойного периода в дозе 90 мг на животное за 60, 30 и 15 дней до отела способствует профилактике задержания последов, эндометритов, маститов, при этом сервис-период снижается на 15 дней.

Препарат селенолин активизирует гемопоэз, увеличивает количество гамма-глобулинов в сыворотке крови, витамина Е, активности фермента ката-лазы и снижению диеновых коныогатов.

11. Материалы по фармако-токсикологической оценке препаратов ДАФС-25 и селенолина рассмотрены и рекомендованы Советом по ветеринарным препаратам Департамента ветеринарии МСХ РФ к применению в ветеринарной практике и животноводстве. Производство их налажено в заводских условиях ЗАО «Сульфат» (г.Саратов), ЗАО «Биоамид» (г.Саратов). Результаты широких производственных испытаний препарата ДАФС-25 подтвердили его высокую биологическую активность и влияние на рост и развитие с.-х. животных и птицы, а также профилактической эффективности при послеродовых осложнениях коров.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического применения в животноводстве и ветеринарии рекомендуются новые отечественные препараты селеноорганического происхождения ДАФС-25 и селенолин с целью профилактики болезней, связанных с недостатком селена, стимуляции роста и развития молодняка сельскохозяйственных животных и птиц, а также профилактики послеродовых осложнений у коров.

Результаты исследований отражены в документах, утвержденных (согласованных) Департаментом ветеринарии МСХ РФ:

- Наставление по применению ДАФС-25 в ветеринарии N° 13-5-2/668, одобренное Ветфармбиосоветом Департамента ветеринарии - Per. №: ПВР 2.04.018/5-96;

- Временное наставление по применению препарата Селенолин для профилактики послеродовых осложнений у коров и повышения привесов телят и молодняка на откорме (№ 13-4-03/0837 от 08.08.03 г).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Родионова Т.Н. Применение селена в рационе кур-несушек для повышения продуктивности: Инф. листок / Саратовский ЦНТИ - Саратов, 1988. №501.

2. Родионова Т.Н. Стимуляция продуктивности и потребления корма курами-несушками при введении в рацион селенита натрия: Инф. Листок/ Саратовский ЦНТИ. Саратов, 1988. №624.

3. Родионова Т.Н. Влияние различных доз селена в рационе кур-несушек на продуктивность и некоторые показатели окислительно- восстановительных процессов // Бгол./ ВИЭВ - М., 1989. - Т. 68 - С. 11.

4. Родионова Т.Н. Селен в рационе кур // Степные просторы. - Саратов, 1989.-№2,- С.20

5. Родионова Т.Н. Активность окислительно-восстановительных ферментов крови кур при различном количестве селена в рационе // Сб. научн. тр./ ТСХА.-М., 1989,- С. 18-22

6. Родионова Т.Н. Влияние добавок селена на продуктивность и показатели обмена веществ у кур-несушек: Автореф. дис. канд. биол. наук М., 1989. -19с.

7. Родионова Т.Н. Влияние добавок селена на продуктивность и некоторые показатели обмена веществ у кур-несушек //Материалы XI Всесоюзной конференции по биол. роли микроэлементов и их применение в с-х и медицине. - Самарканд, 1990. - С. 191-193.

8. Родионова Т.Н. Динамика белков и белковых фракций сыворотки крови у кур-несушек при включении в рацион различных доз селена //Диагностика и профилактика болезней с.-х. животных //Сб. научн. тр. / СХИ. -Саратов. 1992.-С.121-128.

9. Родионова Т.Н.. Васильев В.Ю., Нестерова Е.И. Изменение состояния репродуктивной системы кур-несушек при добавлении в рацион селена

//Актуальные проблемы биотехнологии и медицины: Юбилейный сб. научи. тр. / СХИ. - Саратов, 1993.-С.105-109.

Ю.Смирнов М.И., Родионова Т.Н., Васильев В.Ю. и др. Применение селено-органического препарата ДАФС-25 в рацион кур-несушек для повышения их продуктивности и сохранности. // Инф. листок Саратовского ЦНТИ. Саратов, №203.1993.

11 .Родионова Т.Н., Васильев В.Ю., Нестерова Е.И. и др. Использование селеновых соединений для повышения продуктивности и коррекции обменных процессов в организме птицы. //Успехи физиологических наук. -М., 1994.-№4.-С. 39.

12.Родионова Т.Н. Антиоксидантные и ростостимулирующее действие селе-ноорганического препарата ДАФС-25 //Материалы научн.-произв. конф. проф. преп. состава аспирантов, стажеров и студентов / СГАВМиБ. - Саратов, 1995.-С. 31-32.

13.Родионова Т.Н., Васильев В.Ю., Смирнов М.И. Действие селенооргани-ческого препарата ДАФС-25 на активность пищеварительных ферментов и содержание селена в некоторых органах и тканях цыплят-бройлеров //Материалы научн. - произв. конф. проф. преп. состава аспирантов, стажеров и студентов / СГАВМиБ. - Саратов, 1995. - С. 32-33.

14.Родионова Т.Н., Васильев В.Ю., Смирнов М.И., Шумарева Т.Ю. Антиок-сидантное ферментостимулирующее действие селеноорганического препарата ДАФС-25 /Физиологические механизмы развития экстремальных состояний: Материалы конф. - СПб. - Наука, 1995. - С. 72.

15.СмирновМ.И., Родионова Т.Н., Васильев В.Ю., Шумарева Т.Ю. Применение селеноорганического препарата ДАФС-25 для повышения продуктивности и профилактики заболеваний птицы. //Актуальные проблемы вет-сан. контроля с.-х. продукции: Материалы междунар. научн. -практ. конф. - М., 1995. - С. 93-94

16.Смирнов М.И., Васильев В.Ю., Родионова Т.Н., Шумарева Т.Ю Влияние селеноорганического препарата ДАФС-25 на перекисное окисление ли-

пидов и продуктивность с-х птицы. //Материалы междунар. конф.: Загрязненность экологических систем токсикатами и актуальные вопросы современной фармакологии и токсикологии. - Троицк, 1996. - С.11

17.Смирнов М.И., Васильев В.Ю., Родионова Т.Н., Шумарева Т.Ю Влияние селеноорганического препарата ДАФС-25 на перекисное окисление ли-пидов. //Материалы научн. - произв. конф. проф. преп. состава, аспир. и стажеров. - Саратов, 1996. -Ч. 1. - С. 17-18.

18.Родионова Т.Н., Васильев В.Ю., Смирнов М.И. Содержание аминокислот в плазме крови и печени цыплят-бройлеров при добавлении в рацион селеноорганического препарата ДАФС-25 // Материалы научн,- произвол, конф. проф. преп. состава, аспир. и стажеров. - Саратов, 1996,- Ч. 1 - С.18-19

19.Древко Б.И., Антипов В.А., Жуков О.И., Родионова Т.Н и др. Средство для лечения и профилактики болезней, вызываемых недостаточностью селена в организме с-х животных и птицы //Патент 2051681 РФ 10.01.1996 г.Опубл. Бюл. №1.

20.Смирнов М.И., Родионова Т.Н., Васильев В.Ю. и др. Влияние селеноорганического препарата ДАФС-25 на антиоксидантную обеспеченность организма и развитие с.-х. птицы. //Материалы Российской научн. - практ. конф. посвященной 200-летию Саратовской губернии. - Саратов, 1997. -С. 8.

21.Родионова Т.Н., Головина И.В. Патоморфологическая картина внутренних органов кур при применении ДАФС-25 // Актуальные проблемы ветеринарной хирургии: Материалы науч. конф. посвященной 80-л. проф. В.Н. Авророва. - Воронеж, 1997. - С. 17.

22.Родионова Т.Н., Васильев В.Ю. Некоторые аспекты действия селеноорганического препарата ДАФС-25 // Тез. докл. ХУП съезда физиологов. -Ростов на Дону, 1998. - С. 214

23.Родионова Т.Н., Белаш В.А. Влияние ссленорганического препарата ДАФС-25 на некоторые показатели обмена веществ и продуктивность

кур-несушек // Актуальные проблемы среды и организма животных: Юбилейный сб. науч. работ: 150-лет. СГАВМиБТ. - Саратов, 1998. -С. 26-28.

24.Родионова Т.Н., Блинохватов А.Ф., Крюков A.M. К механизму биологического действия селеноорганического препарата ДАФС-25 //Актуальные проблемы среды и организма животных: Юбилейный сб. науч. работ: 150-лет. СГАВМиБТ. - Саратов, 2000. - С. 6-8.

25.Родионова Т.Н. Применение селенистых препаратов в птицеводстве: Рекомендации. Ассоциация Аграрное образование и наука. - Саратов, 2000. -6с.

26.Родионова Т.Н., Васильев В.Ю., Ульихина Л.И. Селеноорганический препарат ДАФС-25 в кормлении кроликов // Зоотехния. - 2001. - №3, -С. 20-21.

27.Панфилова М.Н., Родионова Т.Н., Носова O.A. Влияние селеноорганического препарата ДАФС-25 в различных дозах на гематологические показатели телят при пероральном применении // Материалы науч.- практ. конф., посвященной 55-л. ГУ Краснодарской НИВС. - Краснодар, 2001. -Том 1.-С. 124-125.

28.Родионова Т.Н. Изучение антиоксидантных свойств нового селеноорганического препарата ДАФС-25 //Материалы науч. - практ. конф., посвященной 55-л. ГУ Краснодарской НИВС. - Краснодар, 2001. - Том 1. -С.124-125.

29.Родионова Т.Н., Демкин Г.П. Патоморфологическая характеристика иммунных органов птиц при скармливании селенистых препаратов // Материалы науч. -практ. конф. института ветеринарной медицины и биотехнологии. Саратов, 2001. - Вып. 2 - С. 90-91.

30.Родионова Т.Н., Ульихина Л.И. Влияние селенсодержащей подкормки на продуктивность кроликов // Материалы науч.-практ. конф. института ветеринарной медицины и биотехнологии. - Саратов, 2001. - Вып. 2 -С. 190-192.

31.Родионова Т.Н., Панфилова М.Н. Обмен веществ и мясная продуктивность молодняка крупного рогатого скота под влиянием селена // Сельскохозяйственная биология. - 2003. - №2. - С. 108-109.

32.Родионова Т.Н. Использование селеноорганического препарата ДАФС-25 в животноводстве // Ветеринария Поволжья. - 2003. - №2 (5), - С. 26-27.

33.Родионова Т.Н., Панфилова М.Н. Влияние ДАФС-25 на воспроизводительную функцию коров // Ветеринария. - 2004, №3. - С. 31-33.

34.Родионова Т.Н., Панфилова М.Н., Воронин С.П., Гуменюк А.П. Применение селенолина для коров в сухостойный период. // Окружающая среда и здоровье: Сб. материалов Всероссийской научн.-практ. конф. /РИО ПГСХА. - 2004. - С. 129-131.

35.РодионоваТ.Н., Панфилова М.Н., Воронин С.П., Гуменюк А.П. Эффективность применения селенолина при откорме телят. //Окружающая среда и здоровье: Сб. матер. Всероссийской науч.-практ. конф. /РИО ПГСХА.-2004.-С.148-151.

36.Антипов В.А., Турченко А.Н., Васильев В.Ф., Родионова Т.Н. и др. Болезни селеновой недостаточности у птиц и животных //Рекомендации. -Краснодар, 2004. - 34 С.

Отпечатано в типографии «Манускрипт» Заказ № 145 , Формат А4 210x297. Тираж 100 экз.

РНБ Русский фонд

2007-4 18369

Актуальность темы. Во многих регионах России селендифицитность организма вызвана низким содержанием данного микроэлемента в почвах. Сюда относятся территории Восточной Сибири и Забайкалья, Поволжья, зоны Урала, Карельской, Архангельской и Ленинградской областей (Г.А. Вощенко, Г.А. Дремина, 1996).

Из-за неравномерного распределения элемента в различных регионах земного шара, в связи с экологическими факторами, в ряде стран выявляются болезни, связанные с его недостатком: беломышечная болезнь молодняка животных, токсическая дистрофия печени поросят, эксудативный диатез цыплят (Г.И. Титов, 1963; 1966; 1976; В.И. Георгиевский, Б.Н. Анненков, В.Т. Самохин, 1979; Я. Никитин, А. Маловастая, 1980; Л.А. Минина и др., 1969, 1983; М.Н. Андреев, А.А. Кудрявцев, 1985; и др.). Установлено, что поступление с кормом микроэлементов, даже в условиях черноземных областей обеспечивает лишь на 30-70% потребность в них организма (Самохин В.Т., 1997).

Селен участвует во многих окислительно-восстановительных процессах, обладает антиоксидантным и антитоксическим действием. В этих процессах он взаимодействует с витамином Е. Вместе они влияют на обмен белка, жира, углеводов. Селеном богаты иммунные клетки, он входит в состав белков организма. Его биологическая роль заключается в формировании активных центров ферментов, ответственных за метаболизм аминокислот, перемещение электронов в дыхательных цепях, разрушение липоперекисей (А.Б. Атлавин, М.Р. Апсите, 1979; В.И. Георгиевский, Б.Н. Анненков, В.Т. Самохин, 1979; М.А. Андреев, А.П. Кудрявцев, 1985; А.И. Журавлев, В.Т. Пантюшенко, 1989).

В настоящее время недостаток селена, как правило, восполняется внесением в различные минеральные и минерально-витаминные добавки неорганических соединений в виде селенита и селената натрия. Вместе с тем, широко применяемые в настоящее время селенит натрия и селенат натрия весьма токсичны для организма (Роса Г., 1995).

Известно, что биодоступность многих элементов выше, если они находятся в составе органических соединений (Кальницкий Б.Д., 1980).

В итоге многолетних исследований российскими учеными Б.И. Древко и А.Ф. Блинохватовым (1970-2000 гг.) удалось найти селеносодержащие органические вещества, свободные от недостатков - диацетофенонилселенид и селе-нопиран, которые выгодно отличаются от селенита и селената натрия. Они обладают существенно меньшей по сравнению с селенитом натрия и селенатами токсичностью, высокой липофильностью, что обеспечивает возможность их пролонгированного действия.

Разработка и стандартизация новых селенорганических препаратов группового и индивидуального применения имеют больше значение для успешного проведения мероприятий по предупреждению и ликвидации болезней, связанных с недостатком селена в организме (диацетофенонилселенид (ДАФС-25), селенопиран (СП-1), Сел-Плекс и др.) (Б.И. Древко, А.Ф. Блинохватов).

Цель и задачи исследований. Основной целью настоящей работы было изучить влияние нового селенорганического препарата ДАФС-25 на метаболические процессы в организме животных и птицы, определить оптимальные дозы препарата для различных видов животных в традиционных и промышленных условиях, обеспечивающие интенсивный рост живой массы, изучение качества продукции и рентабельность производства. Исходя из вышеизложенного перед нами были поставлены следующие задачи:

-изучить биологическую активность препарата ДАФС-25; -определить параметры острой и подострой токсичности препарата ДАФС-25;

-изучить кумулятивные свойства ДАФС-25;

-выявить влияние ДАФС-25 на патоморфологические органы и ткани цыплят-бройлеров и кур-несушек;

-дать ветеринарно-санитарную оценку продуктов убоя животных и птиц при применении препаратов ДАФС-25;

-изучить отдельные стороны фармакодинамики препарата ДАФС-25;

-изучить фармакокинетику препарата ДАФС-25;

-отработать оптимальные параметры применения препаратов селена в животноводстве и ветеринарии;

-изучить влияние ДАФС-25 на рост и продуктивность сельскохозяйственных животных и птиц.

Научная новизна. Разработаны дозы и предложен ветеринарной практике и животноводству новый селенорганический препарат ДАФС-25.

На основании комплексных фармакотоксикологических, гематологических исследований доказано, что препарат ДАФС-25 относится к пятому классу по кумулятивному действию, не обладает мутагенными свойствами. Он значительно повышает иммунный статус птицы и качество мясной продукции. Выявлены высокие антиоксидантные свойства препарата, его действие на белковый, жировой и углеводный обмен, и как следствие его влияние на интенсивный рост и развитие животных и птицы. В работе впервые разработаны при различных путях введения дозы ДАФС-25 для цыплят-бройлеров, кур-несушек, свиней, телят, коров и кроликов.

Проведенные исследования являются необходимым звеном в решении народнохозяйственной проблемы увеличения производства мяса путем целенаправленного регулирования метаболизма и интенсивности роста живой массы животных и птицы путем внесения биологически активного вещества ДАФС-25 при выращивании и откорме в традиционных и промышленных условиях. По результатам исследований получен патент № 2051681 РФ от 10.01.1996.

Практическое значение и внедрение. Результаты исследований могут служить обоснованием к применению нового биологически активного вещества диацетофенонилселенида, позволяющего усовершенствовать технологию выращивания и откорма молодняка сельскохозяйственных животных и птицы в традиционных и промышленных условиях, полнее реализовать потенциальные возможности использования питательных свойств корма и повысить качество мясной продукции. л

По результатам исследований разработан нормативный технический документ, утвержденный Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ - (ТУ №9337 - 001 - 26880895 - 96); Наставление по применению № 13-5-2/668 одобренное Ветфармбиосоветом Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ - Per. № ПВР 2.04.018/5 - 96. Организовано промышленное производство препарата в ООО «Сульфат» г.Саратов.

Апробация работы Материалы диссертации доложены на следующих научно-практических конференциях:

1. На конференции молодых ученых. - «Проблемы ветеринарной биотехноло

1 гии и инфекционной патологии животных» (Москва, ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко, 1988).

2. XI Всесоюзный конференции по биологической роли микроэлементов и их применение в сельском хозяйстве и медицине (Самарканд, 1990).

3. На конференции - «Физиологические механизмы развития экстремальных состояний» (Санкт-Петербург, 1995).

4. На международной научно-практической конференции - «Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (Москва, 1995).

5. Международной конференции «Загрязненность экологических систем ток-сикатами и актуальные вопросы современной фармакологии и токсикологии». (Троицк, 1996).

6. Российской научно-практической конференции, посвященной 200-летию Саратовской губернии. «Экология здоровья и природопользования» (Саратов, 1997). t

7. Научно-практической конференции, посвященной 80-летию проф. В.Н. Ав-ророва. «Актуальные проблемы ветеринарной хирургии» (Воронеж, 1997).

8. XVII съезде физиологов России (Ростов- на- Дону, 1998).

9. Научно-практической конференции, посвященной 55-летию ГУ Краснодарской НИВС (Краснодар, 2001).

10. Научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава аспирантов, стажеров (Саратов, 1992, 1993, 1995, 1996, 2000, 2001, 2002, 2003).

11. На заседании Ветфармсовета (1992, 1996).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Разработка показаний к применению ДАФС-25.

2. Фармакокинетическая оценка препарата ДАФС-25.

3. Фармакологические свойства препарата ДАФС-25.

4. Влияние ДАФС-25 на рост и продуктивность сельскохозяйственных животных и птицы.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 35 работ, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемым вопросам; получен 1 патент.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространение селена в природе и его распределение в организме

Селен - открыт И.Я. Берцелиусом в 1817 г. и вошел в VI группу таблицы Д. И. Менделеева с порядковым номером 34 (атомный вес 78,96). В соединениях селен проявляет валентность равную 2, 4, 6 и относится к рассеянным элементам. В природе он встречается, в основном, в виде примесей в рудах сульфидных, молибдатных, фосфоритных и серных месторождений. Селен является ближайшим аналогом серы, что объясняется их электронной гомологией, селен образует две кислоты - селенистую НгЭеОз и селеновую F^SeO^ соли которых называются соответственно селенитами и селенатами. Селен дает соединения с 16 химическими элементами. По цвету это темно-серое с коричневым оттенком вещество, амфорный селен - красного цвета (А.В. Чечеткин, В.И. Воронянский, 1982).

В промышленности главным источником получения селена служат шла-мы медьэлектролитных заводов, а также шламы сернокислого и целлюлозного производства.

Содержание селена в магматических породах редко превышает 0,05 мг/кг. В осадочных породах он связан с глинистой фракцией и поэтому наименьшее его количество отмечается в песчаниках и известняках (Н.А. Уразаев, Г.П. Новошинов, В.Н. Локтионов, 1985). Значительно выше наличие селена в самородной сере и сульфидных минералах, где его концентрация может достигать 200 мг/кг. В сернистых отложениях осадочного происхождения его содержание обычно не ниже 1 мг/кг. При химическом выветривании горных пород селен легко окисляется, при этом степень его окисления, как и растворимость, зависит от окислительно-восстановительных условий и рН среды. Адсорбция селенитов минералами во многом зависит от рН среды (W.M. Allen, P.R. Moore, B.F. Sanson, 1981 ). Например, в кислой почве (рН 5,3 - 6,5) мало водорастворимого селена, а в щелочных почвах он находится в виде селенит-иона - Se03, который хорошо мигрирует (JI.A. Кудрявцев, 1974).

В природе минералы селена в чистом виде встречаются весьма редко (В.В. Ермаков, 1974). Они присутствуют в основном во многих природных сульфидах, что обусловлено аналогичностью физико-химических свойств селена и серы, сходством в строении их внешних оболочек. Следствием этого является геохимическое подобие серы и селена и их совместное присутствие в природе, что позволяет по содержанию серы ориентировочно рассчитать уровень селена в земной коре, исходя из соотношения серагселен = 6000:1, характерным для сульфидов различного происхождения (М.А. Али-Заде, Г.Ч. Рзакулиев, Ф.П. Атакишева, 1977).

В почве селен встречается в виде элементарного и пиритного селена, се-ленидов, селенитов и в виде органических соединений. По своим свойствам се-леноорганические вещества подобны соединениям серы и представлены такими же типами (JI.A. Кудрявцева, 1974). Содержание селена в почве не менее 50 мкг/кг (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1976) считается пороговым. Почвы, где селена меньше 0,35-0,95 мг/кг, принято считать дефицитными по содержанию селена. В среднем количество селена в почве находится на уровне 0,2 мг/кг с колебанием от 0,005 до 1,1 мг/кг. В хозяйствах, неблагополучных по мышечной дистрофии молодняка животных, почвы пастбищ имеют рН 5,3-6,5 и характеризуются чрезвычайно малым содержанием водорастворимого селена (А.П. Кудрявцев, 1979). Более обогащены им пойменные каштановые почвы, черноземы и сероземы 0,3 - 1 мг/кг. В дерново-подзолистых и песчаных присутствует 0,05 - 0,2 мг/кг (В.В. Ермаков, В.В. Ковальская, 1974).

Селинит-ион доминирует в более глубоких слоях почвы, тогда как верхние, богатые гумусом горизонты, могут содержать селен в форме селенат-иона в незначительных количествах. Органические соединения селена могут переводиться растениями в селенаты и обмениваться в почвах (Bethe, 1974). Одновременно существуют и восстановительные процессы, которые преобладают.

Существенную роль в геохимическом цикле селена играют процессы биологического метилирования, в результате которых образуются его летучие формы. Селенит-ионы, образующиеся при окислительных процессах, достаточно стабильны и могут мигрировать до тех пор, пока не будут адсорбированы минеральными или органическими частицами. Именно поэтому в некоторых углях и глинистых отложениях содержание селена повышено. По-видимому, селениты - преобладающие формы этого элемента, которые адсорбируются глинистыми минералами, особенно монтмориллонитами и оксидами железа (D.V. Frost, 1973).

Несколько больше селена содержится в воде. По мнению А.П. Виноградова (1957) вода с содержанием селена менее 0,4 мг/л относится к слабообеспеченным водам. В воде рек, ледников и скважин селена больше, чегд в морской и океанской. Его содержание в морской воде, по данным А. П. Виноградова (1957) составляет 0,4 мг /л, а поданным А. Хеннига (1976) - 0,0009 мг/л. Незначительная концентрация селена в морских и океанских водах, как считают авторы, обусловлена сильной адсорбцией его ионов минералами. Точный уровень селена в питьевой воде сельскохозяйственных животных и птиц не установлен.

Неравномерное распределение селена в почве и воде обуславливает различную концентрацию его растениях разных природно-климатических зон. Установлена определенная корреляция между содержанием селена в почве и кормовых растений с одной стороны, и в организме животных, с другой (С.Ф. Алешко, 1971; Т.Ф. Беренштейн, 1974; С.А. Лапшин, 1988).

Недостаточное поступление селена из почвы в растения и организм животных обусловлено наличием в ней форм селена, недоступных для поглощения растениями. Полагают, что водорастворимые соединения селена наиболее доступны для растений. Имеются данные (В. Pehrson, 1984), свидетельствующие о тесной связи между содержанием селена в растениях и содержанием се-ленат-йода в растворе. Однако и другие формы этого элемента могут быть растворимы в почвах. Поэтому авторы делают вывод, что в среднем около 45% всего селена почв может быть доступно для растений, причем эти формы могут экстрагироваться. С другой стороны, атмосферные выпадения являются важным источником этого элемента в почвах. Кубота с сотрудниками рассчитали (J. Kubota, 1976), что дождевая вода, которая выпадает на земную поверхность, включает в себя селен и другие источники, такие как вулканические эксгаляции и промышленные выбросы, в частности, за счет сжигания угля.

Важную роль в биогенной миграции селена играют микроорганизмы, восстанавливающие селенаты до селенитов, а затем до металлического селена и окисляющие селениды. Микроорганизмы синтезируют селенметионин, селено-цистин и метилируют неорганические соединения элемента (И.Г. Гайворонская, 1984). В условиях лабораторного эксперимента микроорганизмы способны извлекать селен из горных пород и переводить его в раствор, а также откладывать в клетках (В.В. Ермаков, В.В. Ковальский, 1974). Микроорганизмы обладают высокой кумулятивной способностью.

На территории бывшего СССР имеется ряд субрегионов с низким содержанием селена: страны Прибалтики, Белоруссия, Бурятия, Якутия, Центральная и Восточная Сибирь, Нечерноземная зона европейской части (П.Т. Лебедев, 1968, Л.А. Минина, 1973). По данным А.Н. Гюльахмедова, Х.А. Халиловой (1974) территория Азербайджана является биологической провинцией с низким и средним содержанием селена в зональных типах почв. Реже встречаются субрегионы с повышенным содержанием селена, что связано с интенсивной миграцией соединений элемента в растения из почв, образовавшихся на вулканических осадочных породах (сланцах, песчаниках). (В.В. Ковальский, В.В. Ермаков, 1967).

В. Pehrson (1984) обнаружил, что определенные виды кормовых растений обладают свойством накапливать большие количества селена. Были выявлены целые районы с растительностью, богатой селеном, особенно в западных штатах Америки - Колорадо, Дакоте, Кебраске, Канзасе и нескольких южных. Позднее районы с аналогичной растительностью установлены в Новой Зеландии, Ирландии, Израиле, Северной части Австралии.

Изучению распределения селена в растениях посвящены многочисленные исследования, однако физиологическая роль селена все еще не известна. Существует мнение, что он может вовлекаться в определенные метаболические процессы, особенно в растениях, активно его концентрирующих, но необходимость этого элемента для развития растений однозначно не установлена (A.L. Moxon, D.C. Mahan, 1974). Растворимые формы селена легко извлекаются растениями из почв, при этом существенных различий в интенсивности его поглощения различными видами не отмечено (Н.М. Маковцев, 1983).

Доступность селена для растений зависит от ряда факторов, среди которых наиболее важным является рН среды. Например, из почв с низким содержанием селена растения поглощают его значительно больше при температурах выше 20°С, нежели в период более прохладных сезонов с температурой ниже 15°С (P. Linaberg, et al., 1972; N. Lannek, 1968). Огромное влияние на концентрацию селена в травах оказывают дожди. Особенно часто низкие содержания этого элемента в растениях отмечались в районах с обильными дождями.

Выявлена положительная линейная корреляция между содержанием селена в тканях растений и в почвах, а по данным A. Mathis et al. (1982), реакция растений на общее содержание селена в почвах была более четкой, нежели на количество растворимых форм. Поглощение селена растениями зависит от климатических условий, водного режима почв, окислительно-восстановительного потенциала, рН и содержания полуторных оксидов в почвах.

Впервые селен был обнаружен в растениях в 1932 г. французским химиком Таволгу. О.A. Bethe, H.F. Eppson, (1974) показали, что при одинаковом уровне селена в почве растения проявляют избирательную способность к элементу. Активнее других злаков поглощает селен пшеница. К селеновым индикаторам относятся отдельные виды астрагалов, некоторые астры, красный мухомор. В целом наибольшая концентрация селена характерна для ядовитых грибов. Высокое содержание селена наблюдается в семенах чины посевной (М. Yoshida et al., 1987). На накопление селена в растениях оказывает влияние интенсивность использования пахотных земель. При неправильной заготовке и хранении кормов зерна злаков теряют свыше 50 % селена, в грубых кормах содержание его уменьшается в 3 раза (JI.A. Кудрявцева, 1967). При многократном внесении препарата селена в почву наблюдается накопление его в растениях. Высокая влажность почв, особенно искусственное орошение приводит к его выщелачиванию и обеднению растений с этим микроэлементом. В сеяных травах с орошаемых участков содержание селена значительно меньше, чем в тех же травах с суходолов. Причины низкого содержания селена в растениях - недостаток его в почвах, а также его низкая доступность для растений на кислых почвах (JI.A. Кудрявцева, 1974). В кислой заболоченной почве содержание доступного для растений селена понижено до 1% от его валового количества. Повышение рН почвы обеспечивает значительное повышение его водорастворимых форм — селенитов и селенатов.

Количество селена в кормах непостоянно, зависит от различных факторов: времени года, вида уборки, хранения, и других. Корма, заготовленные с опозданием, долго лежащие под дождем или солнцем содержат меньше селена. При содержании селена меньше 0,017-0,080 мг/кг корма у животных возникают признаки заболевания селеновой недостаточности. Если в кормах содержание селена невелико (от 0,17 до 0,07 мг/кг воздушно-сухого вещества корма), это хозяйство считается неблагополучным. Нормальное содержание селена в кормах колеблется в пределах 0,06 - 1,0 мг/кг воздушно-сухого вещества корма (А.Н. Гюльахмедов, Г.И. Дильбази, 1974).

По данным А.Р. Вальдман (1979) в кормах хозяйств, неблагополучных по беломышечной болезни молодняка сельскохозяйственных животных, уровень селена в 1,5-4 раза ниже в сравнении с благополучными. В частности, в сене здесь селена содержится 0,02-0,10 мг/кг, а в сене из благополучных хозяйств этого микроэлемента содержалось 0,07-0,16 мг/кг. Изучая концентрацию в кормах Р.Н. Одынец (1976) установил, что при натуральной влажности в сене люцерновом содержалось 4,5-9,2 мг%, в травяной муке - 7,5-12,2, силосе кукурузном - 2,8, ячменной дерти - 7,7-9,0 мг%. В кормах Иссык-Кульской котловины количество селена колебалось от 0,1 до 0,29 мг в 1 кг сухого вещества (Георгиевский В. И., Люпов Ф. Г., 1973).

Содержание селена в разных кормах неодинаково. Так с мая высокая концентрация селена обнаружена в сене, сенаже, комбикорме, соломе пшеничной от 0,64 до 0,238 мг/кг воздушно - сухого вещества. В кислом жоме, кукурузном силосе от 0,028 до 0,077 мг/кг воздушно — сухого вещества. Оптимальное содержание селена в корме свиней считается 0,1-0,5 мг на 1 кг сухого вещества; концентрации свыше 3-5 мг/кг токсичны (Цветкова Н. С., 1993).

В литературе имеется много сообщений о содержании селена в кормах. Так, в зеленой массе люцерны, клевера лугового, на поливе травосмеси, кукурузы его содержалось в среднем и с колебаниями соответственно (мг/кг): 0,23(0,10-0,54), 0,21(0,06-0,57), 0,20(0,14-0,26) и 0,19(0,12-0,20), в кукурузном силосе - 0,16(0,10-0,19), в сене люцерновом - 0,37(0,13-0,56), в соломе -0,16(0,13-0,20), в свекле кормовой - 0,23(0,03-0,042) (Weisner Е. et al., 1982).

В природе селен (также как и токоферолы) находятся только в почвенных растениях. Количество его зависит от способности растений накапливать элемент в биомассе и от содержания его в почвах. Понижено содержания элемента в дерново-подзолистых, повышенно в торфяных и горных карбонатных почвах.

Его содержание в костре составляет 0,130 мг/кг сухого вещества, в лебеде 0,120, листьях шиповника 0,125 и астрогалах 0,204 мг/кг. В некоторых образцах пшеницы содержится очень мало - 0,003 мг в осоте — 0,005, зеленой массе -0,003 мг/кг (Н.А. Голубкина, С.А. Хотимченко, 1994).

На накопление селена в растениях влияют формы селеновых соединений, характерных для той или иной почвы. Наиболее важны соли селенистой кислоты - селениты, являющиеся основной формой растворенных соединений селена, которые находятся на глубине 30-90 см от поверхности. Количество их в большей степени зависит от характеристик почвы и составляет не более 10% (В.В. Ермаков, В.В. Ковальский, 1974; Gissel-Nieison Gunner, 1975).

Усвоение селена растениями зависит также от вида удобрений, вносимых в почву. В частности, суперфосфат снижает накопление и усвоение селена растениями на 20-30% в результате образования трудномигрирующих неподвижных форм соединений селена.

Аминокислоты, азотосодержащие органические соединения, белки способствуют накоплению селена в растительном и животном организмах (С.Н. Герасимов, 1967).

Труднодоступной формой селена для растений является почти нерастворимый комплекс железо-селенит, который часто находится во влажных кислых почвах. Поглощению селена растениями может препятствовать наличие в почве таких веществ как сера (H.L. Lakin, 1972).

Уменьшение в почве доступных для растений форм селена усугубляется тем, что с фекалиями животных выделяются в основном нерастворимые формы селена - триметилселенид и элементарный селен (Б.П. Сучков, 1971).

Перечисленные выше факторы в различном сочетании обусловливают значительные колебания в содержании селена в кормах в пределах 0,005-500 мг/кг. Причем растения - концентраторы селена могут накапливать его свыше 5000 мг/кг сухого вещества (В.В. Дюкарев, 1977, 1982; Хеннинг, 1976).

Селен характеризуется неоднородным распределением в организмах растений, что определяется особенностями питания последних. Как правило, наиболее высокие его содержания отмечаются в верхушках побегов, в семенах. А также в корнях растений.

Выявлена значительная вариабельность селена в различных частях растений: от 0,023 мг/кг в кочерыжках кукурузного початка до 2,663 мг/кг в высушенном белке яйца, а также в зерне кукурузы от 0,017 до 0,219 мг/кг (R.C. Peterson, C.N. Butler, 1971). Растения концентраторы селена (астрагалы) поглощают его из почвы в 5-50 раз больше, чем обычные растения в тех же условиях. Содержание селена в астрагалах может достигать 3000-4000 мг/кг сухого вещества. Механизм этой способности пока не известен, значительная часть селена (особенно в стеблях и листьях) находится в водорастворимой форме (JI.H. Гюльахмедов и др., 1974).

В пшенице содержание селена в зависимости от места произрастания может варьировать в пределах 4-21 400 мкг/кг, в люцерне - в пределах 10 -5000 мг/кг (В.Д. Сидельникова, 1999). В США и Канаде содержание селена в пшенице составляет около 600 мкг/кг, в районах токсикоза - до 2 мг/кг, в России - 80-120 мкг/кг, в селендефицитных биогеохимических провинциях Китая — до 5 мкг/кг, в селендефицитной Читинской области - 6-28 мкг/кг.

Б.П. Сучков (1971) изучая содержание селена в продуктах питания человека на Украине заключает, что в условиях этого региона страны едва ли возможна хроническая интоксикация людей и животных селеном. Вместе с тем, нельзя исключать вероятность возникновения заболеваний, связанных с алиментарной селеновой недостаточностью.

Содержание селена в продуктах питания городов России (с учетом производных продуктов) колеблется в пределах (в мкг/кг): мука пшеничная - 80-600, мука ржаная - 6-70, крупы — 10-200, хлеб пшеничный и ржаной (в пересчете на сухую массу) — 60-400 и 50-300 соответственно, говядина - 100-400, колбасы -60-200, цыплята - 200, рыба 150-450, морепродукты - 300-600, молоко сухое -10-150, молоко цельное - 10-15, творог, сыры - 100-150, яйца - 100-250.

Овощи и фрукты содержат крайне мало селена и являются поэтому плохими источниками микроэлемента для человека.

Метаболизм селена у животных до известной степени сглаживает влияние на организм человека предельно высоких или крайне низких концентраций селена в почве. Однако отдельные органы животных (особенно печень, почки) могут накапливать микроэлементы в высоких концентрациях.

При употреблении в пищу исключительно местных продуктов влияние геохимической специфики местности может иметь решающее значение в обеспеченности организма человека селеном, вызывающая селендефицитные состояния или токсикозы. Вода, как правило, не вносит значимого вклада в поступление селена в организм животных и человека, однако атмосферные осадки являются важным источником селена для растений (Сидельникова В.Д., 1999).

С учетом данных о накоплении селена в растениях, а также известных химических характеристик почв составлены карты распределения микроэлемента на территории США и Канады, Китая и России. Содержание селена в растениях и почве России приводится на рис.1.

Содержание селена в почве и растениях оказывает существенное влияние на концентрацию его в теле животных. По данным некоторых исследователей (А.Н. Kanter, 1970), концентрация селена в теле животных колеблется от 1 до 3 мг/кг живой массы, в организме птиц не превышает 0,02 мг/кг.

С 1957 года по отношению к селену у исследователей начало формироваться мнение, как о необходимом и весьма важном в биологическом отношении факторе питания. В этой связи отечественными и зарубежными авторами проводятся исследования по изучению содержания селена в почве, воде, продуктах питания, органах животных и человека, а также выявлению особенностей его миграции в биосфере.

Учитывая разносторонние свойства и функции селена, представляется целесообразным рассмотрение его и выполняемой им функции в биологической цепи: почва - растение - животное - продукция — человек. У растений важнейшей химической формой является селенометионин (Se-Met). Большая часть селена в животных тканях присутствует в виде Se-Met и селеноцистеина - Sec. Первый включается на место метионина в различные белки, второй участвует в образовании активного центра целого ряда селенсодержащих белков (СБ) -глутатионпероксидаз (GPX), йодтирониндейодиназ (ID) и селенопротеина Р (SelP) могут присутствовать и другие формы, т.к. селен тканей до сих пор полностью не охарактеризован. Se-Met не синтезируется в организме, не регулируется селеновым статусом животного и может рассматриваться как не регулируемый запас селена. Когда потребление диетического селена прекращается, потребность организма в микроэлементе обеспечивается за счет круговорота пула Se-Met.

It

Рис. 1. Содержание селена в растениях и почве России

1 - выраженный дефицит селена, 2 - умеренный недостаток селена, 3 - относительно нормальный уровень селена в среде, 4 - повышенное содержание селена в растениях и среде, 5 - участки селеновых аномалий и потенциальных биогеохимических гиперпровинций

При смене района высокого потребления на район селенового дефицита уровень селена в крови у мигрантов снижается очень медленно (M.F. Robinson, 1976) при сохранении активности селензависимой GPX эритроцитов.

Sec - форма селена, ответственная за биологическую активность микроэлемента, поскольку присутствует в активном центре всех известных в настоящее время СБ (V.N. Gladysbev et al., 1999). Регулирование этого высокореакционного соединения, необходимое, чтобы свести к минимуму его участие в биохимических реакциях вне клетки, происходит на клеточном уровне. В настоящее время отсутствуют данные о возможности замещения цистеина на Sec в белках, как это происходит с Se-Met. Поскольку Sec включается в тРНК, не исключена возможность существования других биологически активных форм микроэлемента (A.J. Wittwer et al., 1989).

Всасывание селена зависит от перевариваемости белков и от формы соединений селена: селенат всасывается лучше, чем селенит, а селен из зерна лучше чем из переработанных продуктов. (K.Y. Jenkins, R.C. Dikson, М. Hidiro-gler, 1970). Поступая с кормами или добавками, селен быстро всасывается как у жвачных, так и у моногастричных животных. У свиней и овец местом максимальной адсорбции является нижняя часть тонкого кишечника. В желудке (сычуге) и толстом отделе кишечника всасывание не происходит (Р.Т. Jensen, 1977, А.Н. Rebar et al., 1977).

Поступление неорганического селена в плод затруднено, что связано с барьерной функцией плаценты. Селен-метионин и селен-цистеин проникает через плаценту легче, чем селенит (М. Hidiroglow, K.Y. Jenkins, 1972). У жвачных значительная часть находящегося в рубце селена превращается при участии микрофлоры в селен-цистеин и селен-метионин.

Абсорбирование селена организмом происходит в тонкой кишке, среди г сегментов которой несколько большую скорость транспорта обеспечивает двенадцатиперстная кишка (P.D. Whangeret al., 1977). При внедрении цыплятам

•ус

Na2 SeC>3 наблюдали снижение абсорбирования радиоактивной метки от верхней к нижней части кишечника. Абсорбционную способность оценивали путем заражения цыплят различными формами Eimeria, вызывающими кишечный кокцидиоз и поражающими кишечник в специфических местах (G.M. Pestiet al., 1976). При поражении двенадцатиперстной кишки и верхнего отдела ободочной кишки развивался экссудативный диатез, что указывало на низкий се

75 леновый статус и снижение связывания белками Se в двенадцатиперстной кишке. При поражении ободочной кишки развития экссудативного диатеза или изменения абсорбирования селена практически не наблюдали.

Исследование влияния формы микроэлемента на его абсорбцию показало, что L-Se-Met переносится против градиента концентрации из мукозной в серозную часть аналогично L-Met (процесс ингибировался L-Met, а скорость переноса Se-Met была в 2 раза выше, чем DL-Se-Met) (K.R. McConnel et al., 1965; R.P. Spenser et al., 1961). При хроматографировании мукозной и серозной жидкостей хомяков, которым вводили Se-Met и Met, было зарегистрировано лишь одно пятно, обладающее у-излучением, что свидетельствовало об отсутствии химических превращений Se-Met в процессе транспорта (R.P. Spenser et al., 1961).

Абсорбция Na2SeC>3 (селенита) происходит по другому механизму и включает участие GSH, причем при равных концентрациях селена в мукозной и серозной части абсорбирования не наблюдается. Дезактивация GSH диэтилма-леатом снижала скорость переноса метки и уменьшала степень ее аккумулирования клетками, а введение GSH усиливало транспорт (W.A. Abbot et al., 1982; D. Eberle et al., 1981). Экспериментальные данные указывают на то, что селен вступает в неферментативную реакцию с GSH с образованием селенглутатиона G-S-Se-S-G (Н.Е. Gantber et al., 1968), который может служить субстратом для у-глутамилтрансферазы и таким образом переносится через мембраны клеток. Поскольку селеновый статус экспериментальных животных почти не влияет на величину абсорбирования вводимого селенита (P.G. Reasbeck et al., 1981), следует предложить, что для этого соединения регуляторный механизм абсорбции

75 отсутствует. Снижение переноса Se-селенита наблюдается при введении в организм свинца (эксперимент на цыплятах (D.G. Brown et al., 1972)). Способствующего накоплению микроэлемента в стенках кишки. Возможно, в этом случае селен связывается со специфическими белками, препятствующими транспорту микроэлемента.

Селенсодержащие аминокислоты абсорбируются по специфическому механизму аналогично аминокислотам. Так, в экспериментах in v ivo на собаках установлено, что количество абсорбированного за 2 ч. Se-Met в 2 раза больше, чем Sec, и в 4 раза больше, чем селенита (Н. Mykkanen et al., 1984).

В отличие от Na2Se034^, Na2SeC>4 (селенат) абсорбируется преимущественно стенками ободочной кишки (S. Wolfram et al., 1985) аналогично сульфату, а процесс абсорбирования ингибируется сульфат-ионом. Аккумулирование шестивалентного селена не зависит от присутствия селенит-иона.

Исследование влияния различных селенсодержащих биологически активных добавок (обогащенная селеном спирулина, автолизат селен обогащенных дрожжей) на состояние кишечного барьера у крыс при анафилаксии (И.В. Гмо-шинский и др., 1998; Н.А. Голубкина и др., 2000; В.К. Мазо и др., 1997) показало полную нормализацию проницаемости кишечного барьера, нарушенного вследствие развития реакции системной анафилаксии.

В сравнении с животными, не получавшими добавки, у крыс, получавших селен, отмечалось снижение содержания небелковых тиоловых соединений в слизистой оболочке кишки. Введение крысам GSH не приводило к нормализации кишечной проницаемости в отношении полиэтиленгликоля (ПЭГ-4000), снижало уровень селена в плазме крови, уменьшало величину соотношения Se плазмы / Se эритроцитов в 1,6 раза и способствовало накоплению селена стенками тонкой кишки. При этом коэффициент корреляции между уровнем селена в стенках кишки и плазме крови составил - 0,720 (р < 0,001). Действие GSH на перераспределение селена в организме, по-видимому, опосредовано SelP плазмы крови. Хроматографическое разделение белков плазмы крови крыс показало, что введение сенсибилизированным животным GSH снижает содержание SelP при сохранении активности GPX. Совместное же введение GSH и селено-богащенной спирулины восстанавливает уровень SelP.

Совместное введение GSH и селенобогащенной спирулины способствовало нормализации всех параметров: кишечной проницаемости, уровня селена в плазме и стенках кишки. Полученные результаты свидетельствуют о возможности использования препаратов селена в антиоксидантной диетотерапии пищевой аллергии, синдрома мальабсорбции, инфекционных заболеваний желудочно-кишечного тракта.

Степень абсорбции селена зависит также в значительной степени от потребления (3-каротина и, по-видимому, других жирорастворимых витаминов, аккумулирование которых организмом происходит также в тонкой кишке (Н.А. Голубкина и др., 1996). Так, у больных атрофическим гастритом совместный прием селена и |3-каротина повышал уровень селена в сыворотке крови в 1,8 раза, в то время как использование одного селена в органической форме (селенообогащенные дрожжи) - только в 1,5 раза. Полученные данные подтверждают целесообразность совместного использования селена и витаминов ^ не только в связи с синергизмом их действия как природных антиоксидантов, но также из-за увеличения аккумулирования селена организмом.

Количество и распределение СБ в органах и тканях млекопитающих зависит от специфичности их экспрессии, селенового статуса организма, длительности приема селена и химической формы селена в рационе. При дефиците селена уровень СБ снижен, однако включение микроэлемента осуществляется в первую очередь в наиболее важные белки и ткани - репродуктивные и эндокринные органы, мозг. Скелетные мышцы и сердце снабжаются селеном медленнее (D. Bebne et al., 1995).

Наиболее чувствительны к дефициту селена GPX, их концентрация в тканях при значительном недостатке поступления микроэлемента с пищей снижается в первую очередь (C.D. Thomson, 1998). По-видимому, регулирование биосинтеза белков в той или иной ткани осуществляется на уровне мДНК (R.F. Burk, К.Е. Hill, 1993).

Селен, как и сера, содержится во всех тканях, жидкостях и клетках организма, но распределен неравномерно. По содержанию в них селена органы и ткани располагаются в следующем убывающем порядке: почки, печень, поджелудочная железа, селезенка, кости, скелетные мышцы, мозг, легкие.

Значение имеет не только уровень селена в рационе, но и соединение, в виде которого он поступает в организм. При даче селенаминокислот, накопление элемента вдет интенсивнее, чем при даче селенита натрия. Распределение селена в организме аналогично распределению серы: 50-52% его приходится на мышечную ткань, 14-15% - на кожу, шерсть, роговое вещество, 10% - на скелет, 8% - на печень, 15-18% на остальные ткани (А.Н. Cantor, М. Scott, 1975, 1976). Селен, введенный в рубец жвачных, выделяется главным образом с калом и лишь незначительная часть через почки. После инъекции селен выделяется с мочой. Достаточно большие количества могут выделяться с молоком. Часть всосавшегося селена в форме диметилселенида выделяется с выдыхаемым воздухом. Добавка арсенита вызывает снижение количества селена, возрастает его выделение с калом (от 10 до 350), при этом его количество, выделяемое через почки, не меняется (М. Car, S. Bank, 1969).

Содержание селена в цельной крови разных видов животных колеблется от 5 до 18 мг в мл. в эритроцитах его вдвое выше, чем в плазме, поэтому 70% общего селена крови приходится на эритроциты (Van Vleet J.F., 1976).

Таким образом, оптимальная концентрация селена в крови животных, при которой в любых случаях отсутствует проявление признаков его недостаточности, можно считать 0,1-0,2мкг/мл. Эта концентрация, по мнению исследователей, принимается в качестве физиологической нормы. А.А. Кудрявцев (1974) нормальным уровнем селена в крови считает 0,06-0,12 мкг/мл, или в среднем-0,1 мкг/мл.

При беломышечной болезни уровень селена в крови снижается до 0,010,12 мкг/мл и ниже. Нижним пределом нормы содержания селена в крови крупного рогатого скота считают 0,03-0,05 мг/кг в цельной крови. Колебания в содержании элемента в сыворотке крови находятся в пределах 0,02-0,77 мкг/мл при норме 0,05-0,40 мкг/мл (Gissel-Nielsen Gunner, 1975).

Метаболизм селена можно представить следующим образом. Селен, поступающий в организм животных с кормами, всасывается в тонком отделе кишечника, главным образом в 12-перстной кишке через мембраны микроворсинок в интрапузырьковые пространства и прочно фиксируется компонентами мембран. В рубце жвачных селен не всасывается, но часть его может переводиться в нерастворимые формы и выводиться с фекалиями (J. Awad et al., 1973).

Всосавшийся в ткани животного селен фиксируется главным образом в составе глобулинов. Это наблюдается при введении как селенита (селената) натрия, так и селено-аналогов серусодержащих аминокислот (селенометионин, селеноцистин). Селен включается и в другие серусодержащие соединения -глутатион, тиамин, биотин, таурин (Е. Wiesner et al., 1982). В тканях различные формы селена окисляются до селенита, который восстанавливается до селени-да. Селенид используется для образования собственных биологически активных форм селена. Конечным продуктом обмена в виде селенометионина, селенита или селената натрия является триметилселенид, который образуется из диметилселенида и выводится из организма с мочой.

Поступивший в организм селен выделяется с мочой и фекалиями. В опытах с радиоактивным изотопом селена в виде селенита натрия удалось установить, что 40% селена удаляется через печень. В течение 14 суток селен выводится с мочой 10%, фекалиями - 17%. Экскреция селена с мочой и фекалиями представляет собой механизм, обеспечивающий коррекцию потребления селена (M.F. Robinson et al., 1985). Так, расчет баланса селена в период истощения и обогащения показал селенсберегающий эффект при дефиците селена и положительное выведение микроэлемента при использовании селенобогащенной диеты (О.A. Levander et al., 1981). Показательно, что соотношение количества селена, экскретируемого с мочой и фекалиями, меняется в зависимости от уровня потребления микроэлемента (О.A. Levander et al., 1981). Неорганические соли легче выводятся из организма, что делает их более безопасными при потреблении, чем органические соединения.

При приеме препаратов дрожжей (отечественного «Биоселен» и финского «Селена»), имеющих сходное содержание микроэлемента, но различающихся специфичностью аккумулирования селена органами и тканями (Н.А. Голубкина и др., 1996), предел выведения селена с мочой достигается при дозе 400 мкг/сут, что указывает на существование строгого регуляторного механизма процесса экскреции, действующего в интервале потребления 50-400 мг/сут. Возможно, именно этот интервал следует принимать за физиологически допустимый в нормальной жизнедеятельности человека. Этот интервал хорошо перекрывается с интервалом необходимого и достаточного потребления селена, составляющего 50-200 мкг/сут, но несколько расширяет его границы.

Первые положительные данные о защитном действии селена в отношении развития злокачественных опухолей были получены в США при повышении уровня потребления микроэлемента до 400 мкг/сут (L.C. Clark et al., 1996).

Потребление жирорастворимого селенопирана (В.А. Галочкин и др., 1998) в виде раствора на подсолнечном масле определяет линейный характер кривой выведения, напоминающей зависимость выведение - доза для селената натрия в дозе 50-800 мкг/сут. Однако доля выводимого селена в этом случае существенно ниже, чем при использовании селената натрия (65% против 8090%). Кроме того, селенопиран не обладает лаг-периодом - небольшим интервалом (0-50 мкг/день), характерным для остальных препаратов селена, когда поступление дополнительного количества селена с пищей не влияет на уровень экскреции микроэлемента с мочой. Являясь жирорастворимым соединением, селенопиран, возможно, претерпевает те же превращения, что и липидные компоненты пищи, и, скорее всего, может оказывать благотворное влияние на ли-пофильную PHGPX. Использование этого препарата в животноводческих хозяйствах Пензенской области увеличило концентрацию селена в мясе до 2 мг/кг. В то же время потребление жителями такого продукта не сказывалось на уровне селена в сыворотке крови, составившем 99 мкг/л и характерном для населения России в целом (N.A. Golubkina, G. Alfthan, 2000).

Уровень экскреции селена с мочой зависит от различных физиологических изменений и патологий. В частности, снижение экскреции селена с мочой во вре.мя беременности - феномен, обеспечивающий сохранение селена в организме матери и адекватное снабжение им плода. Из мочи выделены две формы селена, одна из которых идентифицирована как (CH3)3Se. Однако она не всегда является главной формой селена мочи. Так, если у крыс уровень выводимого триметилселенида может составлять 40% (I.S. Palmer et al., 1969), то у человека, потребляющего мясную пищу, с триметилселенидом выводится всего 18% потребляемого селена (Н.Е. Hsieb, 1977).

Другой путь выведения селена - экскреция фекалиями - обеспечивает возможность выведения неусваиваемых форм селена. Одной из таких форм может быть элементарный селен, способный образовываться из селенита натрия в присутствии высоких доз аскорбиновой кислоты. Частично элементарный селен, а также другая неусваиваемая форма селена - SeS2 - подвергается метаболизму под влиянием фагоцитоза.

Увеличение селена в рационе приводит к повышению его концентрации элемента в крови, печени, почках, в яйцах кур (Latshaw et al., 1977, 1979). Отложение селена в мышцах коррелирует с содержанием элемента в крови. При отложении селена в 1 кг прироста массы тела в количестве 25, 31 и 86 мкг концентрация элемента в крове составляла 0,01; 0,03 и 0,20 мкг/мл (Х.В. Тагиров, 1965). У различных животных его уровень в органах и тканях имеет значительные колебания. Так, содержание селена в печени крупного рогатого скота 0,120,25 мкг/г, овец -0,11-0,24, свиней-0,33-0,61 и птицы -0,50-0,62 мкг/г ткани (Магальникова Н.Ф.,1971., Гробовский A.M., 1974), а в мясе крупного рогатого скота - 0,036-0,072 мкг/г, свиней - 0,092-0,14, овец - 0,050-0,83, птицы - 0,210,24.

Доказана зависимость концентрации селена в сыворотке крови коров от стадии стельности. Максимальная концентрация селена отмечена на 6 месяце стельности. Величина уровня элемента в крови носит сезонный характер. В пастбищный период количество селена в крови увеличивалось, а в зимний снижалось (М. Mutanen, Н. Mykkanen, 1984). Концентрация селена в крови и кале отражает его статус в организме крупного рогатого скота (Дильбази Г. И., 1976, 1981). Установлено, что существует связь между концентрацией селена в крови коров в крови новорожденных телят. Концентрация селена у матерей достоверно коррелировала с концентрацией элемента в крови телят в возрасте 0, 1 и 3 недели (Kincaid, 1989). Концентрация селена в крови животных зависит от времени взятия крови (В.Г. Егоров, Е.Т. Загородное, И.Г. Коромыслов, 1982).

В крови молочных коров в Польше уровень селена превышал норму (0,56-0,19 мкг/мл). В одних районах уровень селена был выше летом, в других -осенью (R. Nowosad, 1977, 1986). Повышение его содержания в рационе на 40% сопровождалось увеличением концентрации в молоке лишь на 27%. В плазме крови всех групп она была в 3-5 раз выше, чем в молоке (H.R. Conrad, A.L. Мохоп, 1979). Уровень его в молоке от 0,008 до 0,024 мг/л зависит от зоны содержания молочного скота и изменяется по годам. По мнению некоторых авторов (Т. Grega, 1978) концентрация селена в молоке коров в меньшей степени зависит от содержания этого элемента в рационе. Так, при скармливании коровам селенита натрия в количестве 1770 или 260 мг/гол/сутки в течение 10 дней, концентрация его в кале увеличилась в 10 раз, моче - в 40, а в молоке лишь в 3 раза.

В исследованиях с использованием радиоизотопного селена он обнаружен в альбумине, а также в бета- и гамма-фракциях глобулина плазмы крови, что свидетельствует о наличии в плазме двух типов связи селена с протеином. При этом альбуминовая фракция выполняет функцию транспортировки селена. Селен содержится и в форменных элементах крови (до 70%). В сыворотке крови он составляет 0,02-0,07 мкг/мл, в форменных элехМентах - 0,05-0618 мкг/г в зависимости от его уровня в рационе (В.Н. Иванов и др., 1995).

После введения в организм цыплят радиоактивного изотопа селена по концентрации располагались: 12-перстная кишка - печень - почки - перо - тощая и подвздошная кишка - селезенка - поджелудочная железа — кровь - грудные мышцы (А.Б. Атлавин, М.П. Аписите, 1979, Н. Figueiras et al., 1984).

При селеновой недостаточности снижается концентрация селена в шерстном покрове. Так, в исследованиях (Kursa Y., 1975) установлено низкое содержание микроэлемента в шерсти телят, больных беломышечной болезнью (0,18 мг/кг сухого вещества). Среди животных, получавших селен, его уровень в шерсти был более 0,29 мг/кг.

Отмечена достоверная корреляция между уровнем селена в рационе и концентрацией его в молоке животных (Alja Aline et al., 1981; A.G. Hunter, et al., 1982; M. Lamand, 1972). Селен может депонироваться практически в клетках всех тканей, за исключением жировой ткани (JT.C. Колесниченко с соавт., 1990). При селеновой недостаточности у свиней в печени обнаружено 0,668-0,052 ч/млн селена, а у больных - 0,300-0,1 ч/млн; в сердечной мышце больных свиней селена - 0,051-0,041 ч/млн, а у здоровых - 0,164-0,06 ч/млн (С. Nebbia, 1982). В головном мозге верблюдов (F. Berseheider, G. Reetz, 1982) его было 0,72-0,94 ч/млн сухого вещества, в сердце - 0,46-1,34; в толстой кишке - 0,621,73; в тонкой кишке - 0,71-1,55; почках - 5,95-7,45; печени - 0,52-2,23; легких - 3,1-5,30; лимфатических узлах - 1,55-1,93; мышцах - 0,52-2,50; селезенке -0,82-2,20; сычуге - 0,67-1,11; надпочечниках - 1,49-4,18. С.Н. Касумов, Р.А. Нижмеддинов (1976) обнаружили концентрацию селена в крови ягнят 0,230,71 мкг/кг, в почках - 3,80-7,56 мкг/кг, в печени - 0,92-4,61 мгк/кг. В исследованиях крови 108 здоровых овец было установлено (С.Н. Касумов, 1979) содержание селена 1,0-2,0 мкг/мл, а 0,75 мкг/мл и ниже при беломышечной болезни.

В мышечной ткани, желудочно-кишечном тракте, костях и почках, печени ягнят сосредоточено около 40, 12,10,7 и 6% общего количества селена в теле (без учета содержания его в коже). Средняя концентрация селена в почках составляет 0,64 мкг/г сырой ткани, что в 7-27 раз выше, чем в других органах и тканях (Y.H. Watkinson, 1984).

4. ВЫВОДЫ

1. Препарат ДАФС-25 является оригинальным отечественным селеноор-ганическим соединением, в химическом отношении представляющим собой ди-ацетофенонилселенид. ДАФС-25 содержит 25% органически связанного селена. Контроль качественных показателей препарата осуществляется в соответствии с разработанными методами и определяется по органолептическим и физико-химическим показателям, характеризующим его внешний вид, цвет, запах, массовую долю действующего вещества, температуру плавления, полную растворимость в оливковом масле, безвредность.

2. Диацетофенонилседенид малотоксичен для теплокровных животных и птиц как при изучении острой токсичности так подострой. Доза 350 мг/кг массы тела является максимально переносимой дозой препарата при однократном пероральном введении - LD50. Доза - 385 мг/кг массы тела, вызвавшая гибель, является среднесмертельной дозой при однократном введении - LD50. Доза 420 мг/кг массы тела вызвавшая гибель животного, является абсолютно смертельной дозой LD100. При изучении подострой токсичности - LD50 при многократном скармливании препарата равна суммарной дозе препарата - 2017 мг/кг массы тела за 1-20 дней опыта. По кумулятивному действию препарат относится к 5 классу.

При длительном многократном его введении в оптимальных дозах не оказывает токсического влияния на организм животных и птицы. Не изменяет вкусовых и других качеств мяса. Гистологические исследования показали, что ДАФС-25 не вызывает патоморфологических изменений в структуре внутренних органов.

Препарат при его содержании в питательной среде в концентрациях 1,6 и 16 мг/кг корма в тесте ДЛМ на дрозофиле не вызывает мутагенной активности.

3. Фармакодинамика селенорганических препаратов (ДАФС-25, селенолина) характеризуется активизацией антиоксидантной системы за счет увеличения различных форм глутатиона общего, восстановленного и окисленного соответственно на 26,8; 17,9 и 57%, активности ферментов глутатионперокси-дазы на 84% и супероксиддисмутазы на 40,5%, увеличении активности каталазы на 81,7-84,4%, при достоверном снижении диеновых и оксидиеновых коньюгатов соответственно на 30 и 50%, малонового диальдегида на 39,4%.

Установлена коррелятивная зависимость между различными дозами ДАФС-25 в рационе и активностью протеаз поджелудочной железы. Увеличение органического селена на 0,1 мг ведет за собой увеличение активности протеаз на 0,52 Е/мл. При этом повысилась доля химотрипсина и трипсина в общей протеолитической активности с 74% до 82%.

4. Фармакодинамика препарата ДАФС-25 характеризуется активизацией основных видов обмена веществ, в том числе белкового, углеводного, липидно-го, минерального и витаминного обменов, за счет увеличения общего белка и его фракций на 6,2 - 53,2%, глюкозы на 26,5%, аир липопротеидов на 14,631,7% и снижения холестерина на 8,5%, увеличения общего кальция на 18,1% и неорганического фосфора на 4,3%, витаминов - А на 89,2%; Е на 96%; С на 70,8%; В] на 8,1% стимуляции эритро- и гемопоэза.

5. ДАФС-25 повышает естественную резистентность организма животных и птицы за счет повышения фагоцитарной активности лейкоцитов на 11,3%, контентрации иммуноглобулинов на 87,6%. Гистологические исследования показали, что препарат ДАФС-25 приводит к активизации иммунологических центров за счет четко выраженной структуры фолликулов в бурсе Фабрициуса, а также Т и В - лимфоцитов в селезенке

6. При изучении действия препарата ДАФС-25 и селенита натрия на рост и развитие микроорганизмов, включающих грибы микро- макромицеты, а также некоторых бактерий, в опыте с селенитом натрия на исследуемых средах не наблюдалось никаких изменений в скорости роста колоний и морфологических признаков мицелия шампиньонного двуспорового от контрольных, в опыте с ДАФС-25 происходило резкое учащение роста грибов и бактерий при концентрации последнего 0,1%. Результаты дают основание считать, что ДАФС-25 обладает фунгицидным и бактерицидным действием при концентрации выше 0,0001%.

7. Фармакокийетика препарата ДАФС-25 характеризуется накоплением селена в сыворотке крови овец в зависимости от введенной дозы препарата. Наиболее интенсивное накопление селена в сыворотке крови происходит в течение первых 3-6 часов при введении дозы 1,0 мг/кг, а при введении дозы 0,1 мг/кг в более поздние сроки. К 24 часам концентрация селена в крови начинает понижаться, что свидетельствует об усилении процессов элиминации.

При введении дозы 0,1 мг/кг концентрация селена в крови приближается к исходному уровню к 6-10 суткам после введения, а при дозе 1,0 мг/кг в более отдаленные сроки.

Селен в организме распределяется неравномерно, так, в порядке понижения показателей, селен в организме и тканях обнаружен в следующей последовательности: почки - печень - селезенка - стенка мышечного желудка - стенка тонкого кишечника - стенка железистого желудка - головной мозг - кровь -грудная мышца - сыворотка крови - легкие - мышца сердца.

8. Препарат ДАФС-25 в разработанных нами оптимальных дозах способствует лучшему росту и развитию животных и птиц, повышению их продуктивности и сохранности.

- ДАФС-25 в составе комбикормов или премисов в дозе 1,6 мг/кг корма при выращивании цыплят-бройлеров увеличивает прирост массы тела от 3,4 до 18%, повышает сохранность птицы на 6-15% по сравнению с контролем.

- введение в рацион курам-несушкам премикса, содержащего ДАФС-25 в дозе 1,6 г на 1 тонну, увеличивает яйценоскость на среднюю несушку на 621,4% по сравнению с контролем, повышая качество яиц. Средняя масса яиц от кур опытных групп составляла 53г, что на 10,6% выше, чем в контроле.

- пероральное введение препарата ДАФС-25 телятам в возрасте от 3 до 6 месяцев в дозе 0,2 мг/кг массы тела 1 раз в 14 дней увеличивало среднюю живую массу опытной группы животных на 12,4% в сравнении с контролем.

- доза ДАФС-25 - 0,2 мг/кг массы тела в виде подкожных инъекций 1 раз в 14 дней способствовала увеличению живой массы телят к 6 месячному возрасту на 8,6%.

- ДАФС-25 обладает выраженной профилактической активностью при послеродовых осложнениях коров. Под влиянием препарата, введенного подкожно в дозе 70 мг на животное совместно с нитамином в дозе 6 мл внутримышечно за 60, 45, 30 и 15 дней до отела уменьшилось задержание последа на 14%, послеродовым эндометритом на 37%, заболеваемость маститом на 20%, на 15 дней уменьшился сервис-период.

- внутримышечное введение ДАФС-25 кроликам в возрасте от 45 до 230 дней в дозе 0,2 мг/кг массы тела через каждые две недели способствовало увеличению живой массы на 6,5%.

- применение ДАФС-25 в рационе кроликов в возрасте от 60 до 150 дней в дозе 3,2 мг/кг корма при ежедневном приеме способствовало приросту живой массы на 39,3%.

- премиксы с селенитом натрия и ДАФС-25 в рационе свиней 6 месячного возраста к концу выращивания привели к увеличению приросту живой массы свиней соответственно на 5,4 и 13,4%.

9. Результаты контрольного убоя, обвалки туш и анализа химического состава позволили сделать вывод о положительном влиянии ДАФС-25 на выход и качество мяса и субпродуктов. Химический состав мышечной ткани свиней опытных и контрольных групп отличался незначительно. Различия в пользу животных, получавших ДАФС-25, установлены в живой массе и массе туш, в содержании мышечной ткани и шпика, а также в содержании общего количества незаменимых и заменимых аминокислот в мышечной ткани.

Качество мяса цыплят-бройлеров опытной группы отличалось более выраженными положительными органолептическими показателями при дегустации и оценке по сравнению с отрицательным контролем (4,8 балла в опыте против 4,6 баллов в контроле). Химическим анализом установлено большее содержание сухого вещества и некоторых аминокислот, в том числе триптофана. Белково-качественный показатель был выше на 8,3%.

10. Для лучшего роста и развития телят на откорме в возрасте от 10 до 13 месяцев рекомендуется применять новый инъекционный препарат селенолин подкожно телятам в дозе 0,2 мг/кг массы тела 2 раза в месяц. При этом увеличение живой массы к концу выращивания телят составило 6,8% по сравнению с контролем. У телят активизируется эритропоэз, улучшается обмен веществ, повышается антиоксидантная система организма.

Применение 2% селенолина для коров сухостойного периода в дозе 90 мг на животное при подкожном введении за 60, 30 и 15 дней до отела способствовало профилактике задержания последа, заболеваемости эндометритатами, маститами. Сервис-период снизился на 15 дней. Препарат селенолин способствовал увеличению гемопоэза, гамма-глобулинов в сыворотке крови, витамина Е, активности фермента каталазы и снижению диеновых коньюгатов.

11. Материалы по фармако-токсикологической оценке препаратов ДАФС-25 и селенолина рассмотрены и рекомендованы Советом по ветеринарным препаратам Департамента ветеринарии Российской Федерации к применению в ветеринарной практике. Производство их налажено в заводских условиях ЗАО «Сульфат» (г.Саратов), ЗАО «Биоамид» (г.Саратов). Результаты широких производственных испытаний препарата ДАФС-25 подтвердили его высокую биологическую активность и влияние на рост и развитие с.-х. животных и птицы, а t также профилактической активности при послеродовых осложнениях коров.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического применения в животноводстве и ветеринарии рекомендуются новые отечественные препараты селеноорганического происхождения ДАФС-25 и Селенолин с целью профилактики болезней связанных с недостатком селена, стимуляции роста и развития молодняка с/х животных и птиц, а также послеродовых осложнений у коров.

Результаты исследований нашли отражение в документах утвержденных (согласованных) Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации: ДАФС-25 - технические условия № 9337-00126880895-96; наставление по применению ДАФС-25 в ветеринарии № 13-52/668 одобренное Ветфармбиосоветом Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ - Per. №: ПВР 2.04.018/5-96; Селенолин - Временное наставление по применению препарата Селенолин для профилактики послеродовых осложнений у коров и повышения привесов телят и молодняка на откорме (№ 13-4-03/0837 от 08.08.03г

257