Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикология 5,7-дизамещенных-4,6-динитробензофуроксана

На правах рукописи

ШИНДАЛА МОХАММДД КХАЛИД

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЯ 5,7-ДИЗАМЕЩЕННЫХ-4,6-ДИНИТРОБЕНЗОФУРОКСАНА

16.00.04 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань-2004

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины»

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор

Гарнпов Талгат Валирахманович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

Тремасов Михаил Яковлевич

доктор ветеринарных наук, профессор

Софронов Владимир Георгиевич

Ведущая организация:

Чувашская государственная сельскохозяйственная академия

Защита состоится 2004 года в часов на

заседании диссертационного совета Д-220.034.02 при ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» (420074, г. Казань, Сибирский тракт, 35, ФГОУ ВПО «КГАВМ»).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан 2004 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

И.Г. Галимзянов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Микозы и саркоптоидозы широко распространены среди всех видов животных (А.И. Ятусевич, 1999; С.М. Федоров, М.Н. Шеклакова, 2001 и др.). Пораженность акарозами и дерматомикозами у собак и кошек составляет 32 - 45% от общего числа больных животных (B.C. Ше-ховцев, И.А Машкей и др., 1997; Н.Ф. Фирсов, Г.А. Каратунов, 1999; Л.Н. Гордиенко, Е.В. Пильщик, 1999 и др.).

Имеющиеся средства для лечения дерматомикозов и саркоптоидозов из-за высокой токсичности для теплокровных животных, недостаточной эффективности при применении в разных климатических условиях, отрицательного действия на структуру кожи, эмбриотоксичности или иных отдаленных последствий действия не удовлетворяют отечественную ветеринарную практику. Поэтому изыскание перспективных малотоксичных и эффективных соединений для лечения и профилактики паразитарных и инфекционных болезней кожи животных на сегодняшний день остается актуальной задачей ветеринарии.

В настоящее время поиск новых акарицидов ведется на основе ранее известных соединений (фосфорорганические соединения, хлорорганические соединения, авермектины, пиретроиды и другие), а также среди бензофурок-санов - перспективных источников разработки новых фунгицидных и акари-цидных препаратов.

Цель и задачи исследований. Основная цель исследований - изучение биологической активности, фармако-токсических свойств 5,7-дизамещенных-4,6-динитробензофуроксана и разработка эффективного средства для лечения дерматомикозов и саркоптоидозов животных.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи: 1. Изучить физико-химические свойства замещенных динитробензофу-

2 Определить биологическую активность производных динитробензо-фуроксана и выявить наиболее перспективное соединение.

3. Определить параметры токсичности, кумулятивные свойства одного из производных динитробензофуроксана, обладающего выраженной биологической активностью.

4. Изучить влияние наиболее перспективного соединения на общее состояние, морфологический и биохимический состав крови, состояние центральной нервной системы лабораторных животных, определить наличие и характер гистоморфологических изменений, возникающих в организме животных после его применения

5. Определить отдаленные последствия действия производного динитро-бензофуроксана на организм животных.

6. Разработать лекарственные формы, дозы и схемы применения производного динитробензофуроксана для лечения акарозов и дерматомико-зов животных, изучить

роксана.

Научная новизна. Впервые установлено, что замещенные динитро-бензофуроксана (всего 14 соединений) проявляют антимикробную, антими-когическую и акарицидную активность. Определены параметры токсичности 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксана. Доказано отсутствие отрицательного влияния его на общее состояние, гематологический состав, функциональное состояние центральной нервной системы, морфологию тканей животных при однократном и длительном применении. Показано отсутствие отдаленных последствия действия (мутагенность, эмбриотоксич-ность) 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксана на организм животных. Разработаны лекарственные формы и схемы применения замещенного динитробензофуроксана при псороптозе кроликов, отодектозе и микроспории собак и кошек.

Практическая ценность. Результаты исследоаний могут быть использованы для целенаправленного синтеза новых биологичесик активных оседи-нений в ряду динитробензоурокснаов. Практичесике арзработки диссертации рекомендуется использовать в учебной работе при чтении лекций, по химии биологичесик активных соединенпий. В ветеринарную практику рекомендован новый препарат «Эктоцид», обладающий широким спектром действия в отношении возбудителей кожых болезней животных. «Эктоцид» в виде 0,1% мази обеспечивает полоное выздоровление животных при псороптозе, ото-дектозе и микроспории.

. Апробация работы. Материалы диссертации обсуждены и получили положительную оценку на международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам агропромышленного комплекса (Казань, 2003), международной конференции «Химия и биологическая активность кислород- и серосодержащие гетероциклов» (Черноголовка, 2003).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- 5,7-дизамещенные-4,6-динитробензофуроксана проявляют выраженную антимикробную, антимикотическую и акарицидную активность;

- 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксан малотоксичен, не кумулируется в организме животных при длительном применении;

- 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксан в рекомендуемой концентрации и кратности применения не оказывает отрицательного действия на общее состояние, состав крови, морфологию тканей, состояние центральной нервной системы животных, не обладает мутагенным, эмбрио-токсическим действием;

- 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксана в виде 0,1% мази обеспечивает высокий терапевтический эффект при псороптозе кроликов, отодектозе и микроспории собак и кошек.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на ... страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений и списка литературы. Работа иллюстрирована 5 рисунками и содержит 10.таблиц.

2. МАТЕРИАЛ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проведены в 2001-2004гг в условиях лаборатории кафедры физиологии и этологии животных ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» согласно плану научных исследований по прилагаемой схеме (рис.1).

Объектами исследований служили 14 соединений (5,7-дизамещенные-4,6-динитробензофуроксана), направленно синтезированные на кафедре ХТО-СА КГТУ с целью поиска новых биологически активных соединений. В качестве растворителя соединений в экспериментах использовали диметил-сульфоксид (димексид, Р.75.244.9), для приготовления суспензии — стеа-рокс-6 (ГОСТ 8980-75).

Экспериментальная часть работы выполнена на 30 белых беспородных мышах, 200 белых беспородных крысах, 36 кроликах.

Определение бактериостатической активности препаратов in vitro проводили методом серийных разведений в жидкой питательной среде (С.Н.Милованова, 1971). Бактерицидную активность 5,7-(4-гидроксифенил-амино)-4,6-динитробензофуроксана изучали путем воздействия его на тест объекты при комнатной температуре (19-22*С) и дальнейшего культивирования Е. coli и St. aureus на МПА (С.Н.Милованова, 1971). Бактериостатические и бактерицидные свойства определяли визуально по отсутствию роста культуры в пробирках после суточной и пятисуточной инкубации при температуре 37°С.

Антимикотическое действие 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксана определяли по отношению к Trichophiton gypseum и Microsporum lanosum методом серийных разведений (С.Н.Милованова, З.Г.Степанищева, 1971).

Акарицидную активность препаратов определяли на клешах Psoroples cuniculi, выделенных из свежих соскобов по методу Алфимовой А. В. (1949). Клещей подвергали воздействию водных суспензий препаратов в концентрациях от 0,00025% до 0,5%, контрольных - 0,5 % раствора стеарок-са.

Об акарицидной активности препаратов судили по показателю СК50, которую высчитывали по формуле Кербера С. (1931).

Острую токсичность 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитро-бензофуроксана («Эктоцида») изучали на белых беспородных крысах живой массой 150-200 г, белых беспородных мышах живой массой 18-25 г. Соединения вводили однократно в различных дозах в виде 10 % водной суспензии внутрижелудочно. Контрольным животным вводили раствор эмульгатора в дистиллированной воде или растворитель. Расчеты параметров острой токсичности проводили по методу Миллера и Тейнтера (1944).

Определение раздражающих свойств «Эктоцида» на кожу и слизистые оболочки осуществляли при ежедневном нанесении препарата в течение 25 дней методу (Методические указания, 1985).

Рис. 1. Общая схема исследований Кумулятивные свойства определяли по методу «субхронической токсичности» (Lim R.K., Rink K.G., Glass H.G., Soaje-Echague E., 1961). Контрольным животным вводили 2 % раствор эмульгатора. Расчет коэффициента

кумуляции производили по формуле, предложенной Ю.С Каганом и П.В.Станкевичем (1970).

Изучение аллергенного действия «Эктоцида» проводили на кроликах методом эпикутанных аппликаций (Методические указания, 1985).

Оценку мутагенного действия замещенного динитробензофуроксана изучали на примере His+ реверсий у ауксотрофного по гистидину штамма Ва 13 Salmonella thyphimurium, имеющего мутацию в гене hisG46.

Эмбриолетальное и тератогенное действие препарата изучали на белых беспородных крысах (Методические указания, 1986).

Для морфологических исследований патматериал фиксировали в 10 % формалине. Окраску срезов проводили гематоксилин-эозином.

Влияние замещенного динитробензофуроксана на морфологический и биохимический состав периферической крови изучали по общепринятым методикам. Изучение влияния «Эктоцида» на функциональное состояние нервной системы осуществляли тест-методом «открытое поле» на белых крысах.

Клинические испытания препарата проводили в условиях учебно-опытного хозяйства ФГОУ ВПО «КГАВМ» и ветеринарных клиник районов г. Казани.

Статистическую обработку цифрового материала осуществили на компьютере с использованием табличного процессора Microsoft Excel.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Физико-химические свойства 5,7-дизамеш,енных-4,6-динитробензофуроксана.

5,7-дизамещенные-4,6-динитробензофуроксана по внешнему виду представляют собой порошки оранжевого или темно-красного цвета, не растворимые в воде, хорошо растворимые в органических растворителях (диме-тилсульфоксид, изопропиловый спирт и др.). 5,7-бис(4-гидрокси-фениламино)-4,6-динитробензофуроксан - твердое кристаллическое вещество темно-красного цвета, с температурой плавления 195-196°С. Соединение хорошо растворяется в диполярном растворителе - диметилсульфоксиде, в полярных растворителях — ацетонитриле, диоксане, а также в ацетоне. Плохо растворяется в изопропиловом спирте, этиловом спирте, не растворяется в воде.

Нами совместно с Спатловой Л.В. изучено действие 0,4% соляной кислоты и 5% раствора бикарбоната натрия на структуру 5,7-бис(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксана. Реакция с 0,4% соляной кислотой протекала с образованием осадка темно-красного цвета, при действии на 5,7-бис(4-ги-дроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксан щелочным раствором при комнатной температуре наблюдалось мгновенная реакция, которая протекала с образованием осадка ярко красного цвета. Осадки представляют собой твердые кристаллические вещества с соответствующей окраской.

к

Для установления структуры полученных осадков нами была использована ИК-спектроскопия. ИК - спектры записывали на двухлучевом спектрометре UR-20 в области 400 - 4000 см -1.

В литературе есть сведения о том, что при действии кислот и щелочей реакция протекает с нарушением фуроксанового цикла. Полученные нами результаты подтверждают это утверждение. Предположительно происходит размыкание фуроксанового кольца по слабой внутрициклической связи N(0)-О и в зависимости от природы второго реагента размыкание заканчивается образованием продуктов разных типов. В случае 5,7-бис(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксана, по-видимому, происходит реакция гидролиза.

3.2. Биологическая активность замещенных динитробензофуроксана

3.2.1. Антибактериальная активность

Антибактериальную активность замещенных динитробензофуроксана изучали на патогенных штаммах E.coli и St. aureus. Показателем бактерио-статической активности служила минимальная бактериостатическая концентрация (МБСК).

Замещенные динитробензофуроксана обладают выраженным антимикробным действием. Введение атома хлора к ароматическому ядру замещающего амина приводит к увеличению антибактериальной активности (МБСК - 0,03 %) по сравнению с метоксильными производными, а введение второго атома хлора в мета-положение к первому повышает антибактериальную активность в 15 раз (МБСК - 0,002 %). Если второй атом хлора введен в ор-то-положение к первому, бактериальная активность повышается не столь значительно (МБСК - 0,004 %). Такая же активность (МБСК - 0,004 %) достигается при введении в качестве заместителей гидроксильных групп, как в орто-, так и в пара- положении.

Введение в пара-положение атома брома к ароматическому ядру замещающего амина приводит к снижению антибактериальной активности по сравнению с хлорпроизводными (МБСК - 0,06 %). Такая же активность (МБСК - 0,06 %) достигается и при введении 4- карбоксиэтилфениламинной группы. Минимальная бактериостатическая концентрация составляет 0,5 % при введении в ароматическое ядро замещающего амина 2-аменодифенильной группы, а в случае введения групп аминоазобензола, 4-аминодифенила, 2-метил-5-хлоранилина увеличивается до 0,25 %, при введении метоксильной группы - до 0,125%.

Наиболее активным бактериостатиком среди изученных соединений является 5,7-(4-гидроксифениламйно)-4,6-динитробензофуроксан, который задерживает рост St. aureus и Е .coli в концентрации 0,004 %.

У 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробе113офуроксана была изучена бактерицидная активность. Установлено, что замещенное динитробен-зофуроксана in vitro проявляет стабильную бактерицидную активность в от-

ношении использованных тест микробов при экспозиции 60 минут в концентрации 0,5 %.

3.2.2. Антимикотическая активность

Фунгистатическую активность замещенных динитробензофуроксана определяли на Microsporum lanosum и Trichophyton gypseum.

Установлено, что фунгистатическая активность производных бензофу-роксана зависит от положения заместителей в ароматическом ядре замещающего амина динитробензофуроксана. Так, при наличии в пара - положении метоксильной группы производные динитробензофуроксана проявляют высокую фунгистатическую активность (МФСК - 0,006%). При введении ме-токсильной группы в орто - положение фунгистатическая активность снижается в 10 раз (МФСК — 0,06%). При введении атом хлора в орто - положение в ароматическом ядре замещающего амина динитробензофуроксана минимальная фунгистатическая концентрация составляет 0,002%. Такая же активность (МФСК - 0,002%) достигается и при замене атома хлора на гидро-ксильную группу в орто - положении, а в случае введения второго атома хлора в орто - положение к существующему приводит к снижению фунги-статической активности в 2 раза (МФСК — 0,004 %). Однако, введение второго атома хлора в мета - положение приводит к снижению фунгистати-ческой активности в 3 раза (МФСК - 0,006 %). Замена атома хлора на атом брома в пара - положении снижает фунгистатическую активность в 6,25 раза (МФСК - 0,0125%). Минимальная фунгистатическая концентрация составляет 0,003% при введении в ароматическое ядро замещающего амина динитробензофуроксана 4-карбосиэтилфенильной или 4-аминодифенильной групп, а в случае введения аминоазобензольной группы - 0,015%. Однако, при замене аминоазобензольной группы на 2-аминодифенильную фунгистатическая активность снижается в 8,4 раза (МФСК - 0,025%).

5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксан обладает самой высокой фунгистатической активностью среди замещенных динитро-бензофуроксана. МФСК этого соединения по отношению к Microsporum lanosum составляет 0,00075 %, к Trichophiton gypseum - 0,003%.

У этого соединения была изучены фунгицидная активность. 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофурок-сан in vitro проявляет стабильную фунгицидную активность при 15 минутной экспозиции. Минимальная фунгицидная концентрация при указанной экспозиции составила для М. lanosum - 0,0015%, для Т. gypseum - 0,025%.

3.2.3. Акарицидная активность

Изученные соединения обладают выраженным акарицидным действием. При введении атома хлора в орто-положение в ароматическом ядре замещающего амина динитробензофуроксана СК50 составляет 0,004%, а в случае введения второго атома хлора в орто-положение к первому акарицидная активность снижается в 3,5 раза (СК50- 0,014%). Однако, введение атома хлора относительно метильной группы в пара - положение приводит к снижению акарицидной активности в 7,5 раза (СК50 - 0,03). Замена атома хлора па атом брома в пара-положение снижает акарицидную активность в 11,5

раз (СК50 - 0,046). Среднесмертельная концентрация для клещей Рзогсрев сишсиЦ составляет 0,1% при введении в ароматическое ядро замещающего амина динитробензофуроксана 2-метоксифениламинной, 4-метил-З-хлорфениламинной, 4-карбосиэтилфенильной, 3,5-дихлорфениламинной. 2-аминодифенильной групп, а в случае введения аминоазобензольной группы акарицидная активность снижается в 2 раза (СК50 - 0,2%). Однако, при замене аминоазобензольной группы на 4-метоксифениламинную акарицидная активность снижается в 5 раз (СК50 - 0,5%).

Таким образом, замещенные динитробензофуроксана обладают выраженным акарицидным действием. Среди изученных соединений самой высокой акарицидной активностью обладают 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксан (СК50- 0,0009 %) и 5,7-(2-гидрокси-фениламино)- 4.6-динитробензофуроксан (СК50- 0,0013 %).

Таким образом, самая высокая биологическая активность характерна для гидроксильных производных динитробензофуроксана. Фармако-токсические свойства 5,7-(2-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофурок-сана («Эктоцида») были изучены подробно.

33. Определение параметров острой токсичности «Эктоцида»

Острую токсичность «Эктоцида» изучали на 30 беспородных белых мышах обоего пола живой массой 18-25 г путем однократного введения в желудок 10% водной суспензии исследуемого соединения в дозах от 1000 до 5000 мг/кг, контрольным животным - 1 % раствор эмульгатора.

Однократное пероральное введение исследуемого препарата в дозе до 3000 мг/кг не вызывало изменений в поведении и общем состоянии животных. Эту дозу мы приняли за максимально переносимую (МПД). В течение 10 суток после введения препарата животные оставались подвижными, активными, хорошо поедали корм.

По мере увеличения доз исследуемого препарата (3500-5000 мг/кг) отмечалось общее угнетение животных. Мыши забивались в угол, потирали лапами мордочку, встряхивали головой, выгибали спину. Последнее может быть вызвано раздражением рецепторов слизистой желудка. Гибель животных наступала через 8-36 часов после введения препарата.

При патологоанатомическом исследовании погибших животных были отмечено асфиксическое сердце, гиперемия и отек легких, полнокровие слизистых оболочек желудка и тонкого отдела кишечника, печени и почек.

После установления числа животных, павших за все время наблюдения, рассчитывали ЛД50 по методу Миллера и Тейнтера (1944).

Таблица 1. Параметры острой токсичности «Эктоцида» при введении в ___желудок__

Вид животных Дозы, мг/кг

лд1А ЛД50 ЛД„<

белые мыши 3150 3850±353,7 4650

Согласно ГОСТ 12.1.007-76, «Эктоцид» относится к веществам III класса токсичности.

Введение «Эктоцида» в дозе 3000 — 6000 мг/кг в виде 10% водной суспензии в желудок белым крысам не вызывало каких-либо изменений в их поведении и общем состоянии. Параметры острой токсичности не были определены, так как объем суспензии токсических доз превышал объем, допустимый для введения в желудок. По такой же причине нами не установлены параметры токсичности замещенного динитробензофуроксана при накожном применении.

3.4. Выяснение кумулятивного действия «Эктоцида»

Исследования проводили на 30 белых беспородных крысах обоего пола живой массой 150-200 г. Животным вводили исследуемый препарат в желудок в виде 5% водной суспензии в дозе 2 мг/кг и 20 мг/кг. Контрольной группе животных вводили 2% раствор эмульгатора (стеарокс-6).

В первой группе при многократном введении препарата в возрастающих дозах от 2 мг/кг до 22,8 мг/кг гибели подопытных крыс не наблюдали. За весь опытный период животные получили 257,5 мг/кг исследуемого соединения, что в 128,7 раз превышает лечебную дозу. Первые клинические признаки отравления наблюдались на 21-й день после введения «Эктоцида» в дозе 15,19 мг/кг, суммарная доза при этом составила — 120,69 мг/кг. Симптомы отравления проявлялись через 15-20 минут и характеризовались незначительным угнетением общего состояния животных. Спустя 2-3 часа состояние животных было удовлетворительным, они хорошо поедали корм и пили воду. Начиная с 23 суток и до конца опыта (28 сутки) животные после введения препарата находились в состоянии угнетения, отказывались от корма, забивались в угол. Эти признаки исчезали через 3-5 часов. Отсутствие гибели подопытных животных в течение всего периода эксперимента свидетельствует о том, что препарат не кумулируется в организме.

Во второй группе при многократном введении препарата в возрастающих дозах от 20 мг/кг (в 10 раз превышающей лечебную дозу) до 227,82 мг/кг гибель одной крысы наступила от суммарной дозы - 1206,875 мг/кг. За весь период животные получили 2573,75 мг/кг препарата. Первые клинические признаки отравления проявились на 11-й день после введения замещенного динитробензофуроксана в суммарной дозе - 335 мг/кг. При этом животные беспокоились, пытались зарыться в подстилку что, возможно, является следствием воздействия суспензии исследуемого препарата на рецепторы слизистой желудка. Начиная с 18 суток и до конца опыта, у белых крыс отмечали состояние угнетения, взъерошенность шерсти, временный отказ от корма. Всего погибли 2 крысы: одна от суммарной дозы 1662, 5 мг/кг, а другая от суммарной дозы 2573,75 мг/кг.

Результаты эксперимента показывают, что в дозах в 10 раз превышающих лечебную «Эктоцид» не обладает кумулятивным свойством.

3.5. Определение местного действия «Эктоцида» на слизистые оболочки

и кожу

Действие «Эктоцида» на слизистые оболочки определяли путем нанесения 2 капель 0,1 % суспензии на конъюнктиву глаза кроликов в течение 10 дней. Состояние животных оценивали через 5,30, 60 минут после нанесения препарата ежедневно в течение 10 дней.

При нанесении суспензии замещенного динитробензофуроксана на слизистую оболочку глаза отмечали гиперемию, сохраняющуюся 4-5 часов, слезотечение, продолжающееся 1-2 часа. В последующие сроки наблюдения никаких патологических изменений не обнаруживали. У животных контрольной группы, которым вводили раствор стеарокса-6, наблюдалась незначительная гиперемия, слезотечение, прекращающееся в течение 15-20 минут.

Местное действие «Эктоцида» на кожу изучали на 25 белых беспородных белых крысах живой массой 150-200 г. Крысам применяли растворы препарата в диметилсульфоксиде в концентрации 0,1 и 1 % и в 70% спирте этиловом в таких же концентрациях; а также 0,1% суспензию препарата на стеароксе-6 в течение 25 дней. За подопытными животными вели клиническое наблюдение в течение двух месяцев (определяли эластичность кожи, наличие воспалительных процессов, отека, утолщения кожной складки, шелушения, изъязвления, некроза, расчесов).

У крыс, которым применяли 0,1%-й раствор препарата в диметилсуль-фоксиде, симптомы раздражающего действия не обнаружены. При применении 1%-го раствора, наблюдалось раздражение кожи, о чем свидетельствовала гиперемия, сохранявшаяся 4-6 дней после последнего нанесения. Кожа теряла свою эластичность, становилась сухой, утолщалась, наблюдалось шелушение эпидермиса и образование корочки. Спустя 25 дней после прекращения применения препарата происходило отторжение корочек вместе с шерстью, обнажалась молодая кожа, которая вновь начинала покрываться шерстью. У крыс, которым применяли 0,1%-й раствор препарата в 70 % спирте этиловом, отмечалась незначительная гиперемия кожи. 1%-й раствор препарата в 70 % спирте этиловом вызывал незначительную гиперемию, расчесы, на месте которых выступали капли крови. Отмеченные клинические признаки начинали проявляться на девятый день применения препарата. При нанесении на кожу 0,1% суспензии замещенного динитробензофуроксана отмечалась незначительная гиперемия кожи, которая сохранялась в течение 2-3 дней после последнего применения препарата.

Таким образом» установлена зависимость степени раздражающего действия «Эктоцида» от концентрации. В высоких концентрациях (1 % растворы в ДМСО и этиловом спирте) замещенное динитробензофуроксана вызывает различные обратимые изменения кожи (гиперемия, шелушение эпидермиса, образование корочки), а в лечебной концентрации не оказывает отрицательного воздействия на кожу и слизистые оболочки животных.

3.6. Выявление аллергизирующего действия «Эктоцида»

Аллергенные свойства замещенного динитробензофуроксана изучали на 10 кроликах массой 2-2,5 кг. Перед опытом оценивали первично-раздражающее действие препарата путем однократных накожных аппликаций различных его разведений с целью определения концентрации, которая не вызывает реакцию кожи животных. Для «Эктоцида» это 0,1 %.

Затем животных сенсибилизировали путем многократных аппликаций вещества в 0,1 % концентрации на один и тот же участок кожи. В качестве растворителя использовали диметилсульфоксид. На поверхность кожи наносили 0,1 мл раствора замещенного динитробензофуроксана, выдерживали 4 часа и смывали дистиллированной водой. На 30-й день нанесения препарата у кроликов наблюдалась слабая гиперемия кожи, и нанесение раствора было прекращено. Через 21 день после последней аппликации на кожу свежевы-стриженного участка спины наносили разрешающую дозу (1 мл) препарата в той же концентрации. Учет реакции проводили через 24 часа. Признаков аллергической реакции у экспериментальных животных не выявили. Следовательно, «Эктоцид» не обладает аллергизирующим действием.

3.7. Изучение отдаленных последствий действия «Эктоцида»

Эмбриотоксическое действие «Эктоцида» или отсутствие такового выявляли путем накожной аппликации в дозе 2 мг/кг в виде 0,1% раствора в ДМСО 60 беременным самкам с 1- го по 10-й день, 11-го по 19-й день и с I-го по 19-й день беременности. Контрольным крысам наносили накожно диметилсульфоксид, а также была группа интактных белых крыс.

Эмбриотоксическое действие выявляли после эвтаназии и вскрытия самок на 20-й день беременности по 6 животных из контрольной и каждой опытной группы. При этом подсчитывали в матке число живых и мертвых плодов, мест имплантации, в яичнике — количество желтых тел. Плоды взвешивали, измеряли длину плода и осматривали на наличие анатомических аномалий и кровоизлияний. Показателем эмбриолетальности считали пред -и постимплантационную эмбриональную смертность, показателем терато-генности - морфологические (анатомические) пороки развития, а также общую задержку развития плодов.

Выявлено, что нанесение на кожу 0,1 % раствора «Эктоцида» в терапевтической дозе с 1 - 10, с 11 - 19, с 1-19 дни беременности не вызвало достоверных изменений в росте, развитии и количестве плодов, а также в их массе и краниокаудальных размерах по сравнению с контролем. При осмотре ни в одной опытной группе морфологических пороков развития плодов не выявлено, что говорит об отсутствии тератогенного действия препарата.

Для выявления нарушений эмбрионального развития, проявляющихся в постнатальном периоде жизни, вели наблюдение за оставшимися белыми крысами.

В течение беременности клиническое состояние животных опытных групп не отличалось от таковых контрольной группы. Животные охотно по-

СДАЛИ корм, адекватно реагировали на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители. Состояние кожного покрова, слизистых оболочек крыс опытных и контрольных групп также было в норме. Продолжительность беременности колебалась от 21 до 22 дней. Количество приплода, а также масса новорожденных крысят в опытной группе не отличались от аналогичных показателей в контрольной.

Это свидетельствует о том, что нанесение на кожу беременных самок 0,1% раствора замещенного динитробензофуроксана в терапевтической дозе не оказывает отрицательного действия на рост и развитие плодов.

Наблюдения были продолжены на трех поколениях белых крыс. Для этого физиологически зрелых трех самок и одного самца первого поколения крыс, получавших препарат в дозе 2 мг/кг в виде 0,1% раствора, помещали в одну клетку. Во второй группе к трем физиологически зрелым самкам первого поколения подсаживали одного интактного физиологически зрелого самца и учитывали количество и качество приплода. В третьей группе находились интактные крысы (3 самки и 1 самец). Проводили наблюдение за ними в течение 45 дней и учитывали количество и качество их приплода. В каждой из указанных групп были получены по 15-18 крысят, которые развивались так же, как и контрольные животные. Сроки развития и становления сенсорно-двигательных рефлексов крысят контрольных групп и опытных не отличались друг от друга.

При исследовании количества и качества второго и третьего поколений крыс, получавших накожно препарат в дозе 2 мг/кг в виде 0,1 % раствора, не было выявлено никаких отклонений ни в их количестве, ни в развитии. Следовательно, «Эктоцид» не обладает отдаленными последствиями действия на репродуктивную систему животных.

Мутагенную активность «Эктоцида», согласно методике, изучали в два этапа. На первом этапе исследований определяли минимальную концентрацию, при которой полностью подавляется рост используемого штамма Salmonella thiphimurium. Для «Эктоцида» она составила 2,5 мг/мл.

На втором этапе проводили полуколичественное определение генных мутаций с внесением растворов препарата в слой полужидкого агара без метаболической активации in vitro.

Учет результатов проводили через 48 часов инкубации, подсчитывая число колоний ревертантов. Опыты проводили в трехкратной повторности.

При концентрациях замещенного динитробензофуроксана в минимально - глюкозной среде выше 400 мкг / мл наблюдается более низкое число мутантов в сравнении с контролем, что связано с превалированием токсичности препарата. При снижении концентрации препарата число колоний ревертангов возрастает, достигая максимума при концентрации 200 мкг/мл. При дальнейшем снижении концентрации снижается и мутагенная активность.

Количество мутаций в опытных и контрольных чашках не различается более чем в 2,5 раза. Следовательно, мутагенный эффект 5,7-(4-

гидроксифсниламино)-4,6-динитробензофуроксана на использованной мутационной модели не выявлен.

3.8. Изучение влияния «Эктоцида» на морфологический и биохимический состав крови

Исследования были проведены на 10 клинически здоровых кроликах массой 2,5 - 3 кг, подобранных по принципу аналогов. Препарат наносили в ушные раковины в виде 0,1% раствора в ДМСО в дозах 2 мг/кг. За 3 дня до начала опыта брали кровь для исследования. После этого кролику наносили исследуемый препарат 10 дней подряд, кровь для исследования брали на 4 -10 день от начала опыта и через 3-7 дней после прекращения применения препарата.

Анализ полученных результатов показал, что «Эктоцид» в виде 0,1 % раствора при десятикратной обработке не вызывает достоверных изменений в морфологическом составе крови. Количество эритроцитов, гемоглобина, нейтрофилов, моноцитов, эозинофилов, базофилов оставались в пределах физиологических норм. Однако отмечено достоверное изменение содержания общего количества лейкоцитов и лимфоцитов в сторону увеличения. До обработки животных количества лейкоцитов составляло 9,1*109±0,3/л, лимфоцитов - 61,5 ± 0,2 %, на 10 день применения препарата количество лейкоцитов достигло 10,3* 109 ±0,3/л, лимфоцитов - 62,7+0,9%. Отмеченные изменения носили обратимый характер и через 7 суток после последнего применения препарата возвращались к исходным величинам.

Исследование биохимических показателей крови проводилось на тех же группах кроликов, что и при изучении морфологических показателей крови. При этом установлено, что десятикратная обработка «Эктоцидом» в виде 0,1 % раствора не вызывает достоверных изменений содержания общего белка и глюкозы. До обработки у животных содержание общего белка составляло 72,55 + 0,66 г/л, глюкозы - 4,67 + 1,7 м Моль /л, а к концу опыта указанные показатели имели значения 72,4 ± 0,29 г/л и 4,61 ± 0,8 мМоль 1п соответственно.

Таким образом, десятикратная обработка «Эктоцидом» в виде 0,1% раствора не оказывает отрицательного влияния на морфологический и биохимический состав крови кроликов.

3.9. Влияние «Эктоцида» на центральную нервную систему

Оценку функционального состояния нервной системы при воздействии «Экоцида» проводили на 30 белых беспородных крысах обоего пола, массой 150-200 г на «открытом поле». Крысам применяли исследуемый препарат на-кожно в виде 0,1% раствора в диметилсульфоксиде и в виде суспензии в дозах 2 мг/кг и 20 мг/кг. Контрольным животным вводили дистиллированную воду.

час до введения препарата и через I, 3, 6, 12, 24, 48 часов после применения средства, каждое животное помешали в открытое поле и вели наблюдение в течение 3 минут за двигательной активностью (число пересеченных линий) и исследовательской активностью (число обследованных отверстий).

Таблица 2. Функциональное состояние центральной нервной системы крыс под влиянием «Эктоцида» в разных дозах и способах применения

№ До опыта Интервал исследований, часы

группы 1 3 6 12 24 48

Число пересеченных линий

1. 32,4±0,1 32,5±0,5 32,8±0,1 33,2±0,9 33,7±0,2 34±0,6 34,3±0,1

2. 32,3±0,8 32,4±0,1 31,7±0,5 32,1 ±0,2 32,6±0,7 33±0,3 33,3±0,6

3. 32,3±1,3 32,4±0,5 32,7±1,7 33,1±1,4 33,6±0,9 33,9±0,3 34,2±1,2

4. 32,1 ±0,6 32,2±0,9 32,5±0,6 32,9±0,4 33,4±0,8 33,7±0,1 34,0±0,7

Контроль 32,5±0,4 32,6±0,7 32,9±0,1 33,3±0,8 33,8±0,2 34,1 ±0,7 34,4±0,1

Число обследованных отверстий

1. 1б,2±0,9 16,2±0,1 16,4±0,7 16,6±0,9 16,8±0,1 17,0±0,2 17,1 ±0,3

2. 16,1 ±0,2 16,2±0,7 15,8±0,1 16,0±0,3 16,3±0,7 16,5±0,1 16,6±0,4

3. 16,1 ±0,5 16,2±0,3 16,3±0,7 16,5±0,1 16,8±0,4 16,9±0,1 17,1 ±0,9

4. 16±0,4 16,1 ±0,7 16,2±0,2 16,4±0,3 16,7±0,1 16,8±0,5 17,0±0,4

Контроль 16,2±0,7 16,3±0,1 16,4±0,8 16,6±0,4 16,9±0,2 17,1 ±0,5 17,2±0,1

Результаты исследований показали, что изменений в двигательной и исследовательской активности между опытными и контрольной группами не произошло. Следовательно, «Эктоцид» не оказывает отрицательного действия на регулирующую функцию центральной нервной системы.

3.11. Разработка лекарственных форм и изучение лечебной эффективности «Эктоцида» при кожных болезнях животных

В связи с плохой растворимостью «Эктоцида» в воде возникла необходимость подобрать подходящие растворители для создания удобных для применения лекарственных форм. Лучшим растворителем для «Эктоцида» является диметилсульфоксид.

Суспензии. При разработке стойких суспензий в качестве поверхностно - активных веществ нами использовались ПЭО - 400 и стеарокс — 6. Для приготовления суспензии навеску исследуемого вещества растирали в ступке сомульгатором в различных соотношениях и по каплям добавляли дистиллированную воду. Полученную суспензию помещали в химические стаканчики

и оставляли при комнатной температуре на 24 часа, 5, 10 суток после чего взбалтывали и визуально проверяли на однородность.

Установлено, что «Эктоцид» образует стабильную суспензию при использовании в качестве эмульгатора стеарокс-6 в соотношении 1 : 0.5 (1 часть препарата и 0,5 части стеарокса — 6). После 24 часового хранения определяли однородность суспензии.

Мази. В качестве мазевой основы использовали ПЭО - 400, ПЭ0-1500 и вазелин. Для приготовления мази навеску исследуемого препарата растворяли в диметилсульфоксиде в соотношении 1 : 1 и добавляли полиэтиленок-сиды до необходимого объема. Наиболее стойкая мазь получена на основе ПЭ0-400.

Кроме того, для лечения псороптоза кроликов были разработаны ушные капли - 0,1% раствор «Эктоцида» в 70% спирте этиловом.

Лечебная эффективность «Эктоцида» при чесотке и дерматомико-зах животных.

Диагноз на псороптоз, отодектоз и микроспорию ставили на основании эпизоотологических данных, клинических признаков и результатов исследования соскобов, взятых с мест поражения.

Для исследования лечебной эффективности лекарственных форм «Эктоцида» данных препаратов были созданы четыре группы кроликов, пораженных псороптозом в разной степени. Первой группе применяли 0,1% -ную жидкую мазь «Эктоцида» на ПЭО - 400, второй группе - 0,1% - ный раствор «Эктоцида» в этиловом спирте (70*), третьей - 0,1 % водную суспензию, четвертой группе - ушные капли «Барс».

Лечение проводили после предварительной очистки ушной раковины от чешуек, корок и экссудата или без этого. Кратность обработок зависела от степени поражения. На второй день после каждой обработки с пораженных участков брали соскоб на наличие живых или мертвых клещей. При отсутствии клещей лечение животных прекращали. Интервал обработок препаратами больных кроликов определяли, учитывая, что средний срок развития личинок в яйце (в среднем 5 — 6,5 суток) и возможность их выхода на кожу животных через 6 суток.

После одно- и трехкратного применения 0,1%-ной жидкой мази «Эк-тоцида» у животных прекращался зуд, исчезало беспокойство, отсутствовали повторные расчесы, на второй день наступало отторжение корок. В соско-бах, взятых на второй и четвертый день, после применения препарата отсутствовали живые клещи. На 2-3 дни после начала лечения на местах отторжения появлялась юная эпителиальная ткань, уменьшался воспалительный отек. Полное выздоровление кроликов наступало через 9 - 10 дней.

Применение 0,1% спиртового раствора «Эктоцида» также оказалось эффективным, но сроки лечения были более длительными (16-18 день). Такая же лечебная эффективность характерна и для 0,1% суспензии.

Применение ушных капель «Барс» не обеспечило выздоровления контрольных животных.

При огодектозс собак и кошек применяли жидкую мазь «Эктоцида» двух - трехкратно с интервалом 6 дней. Контрольных животных лечили препаратом «Барс». Установлено, что «Эктоцид», обладает выраженной лечебной эффективностью. После первого применения у животных уменьшается беспокойство, прекращается зуд. Отторжение корочек, прилипших к поверхности ушных раковин, начиналось на 2-3 сутки лечения. Исходя из биологического цикла развития клещей, на 6 день была проведена повторная обработка животных. После повторного применения препаратов внутренняя поверхность ушных раковин и наружного слухового прохода становилась чистой, розовой и влажной, кожа эластичной. Полное выздоровление наступало в среднем на 10-12 день после начала лечения. Препарат не раздражает кожу и не вызывает побочных местных и общих эффектов.

Таким образом, 3-6 - кратное с интервалом 6 дней применение «Эктоцида» в виде 0,1%-ной жидкой мази обеспечивает полное выздоровление животных от отодектоза.

При микроспории собак и кошек применяли 0,1% мазь «Эктоцида» трех-шести кратно с интервалом в один день. Кратность применения варьировала в зависимости от степени поражения животных. Контрольным животным применяли 5% - ный спиртовый раствор йода. Установлено, что «Экто-цид» является эффективным средством для лечения дерматомикозов собак и кошек. Животные легко переносят 3-х - 6-ти кратное применение мази замещенного динитробензофуроксана с интервалом в один день. Уже после первого применения животные меньше беспокоятся, охотнее принимают корм. Повторное применение ускоряет отторжение корочек и появление под ними волос. Появление роста волос на пораженных местах наступает в среднем через 8-10, полное выздоровление - через 12-14 дней.

Применение 5% - ного раствора йода не обеспечило выздоровление контрольных животных. Их повторно лечили 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксаном.

ТаблицаЗ. Терапевтическая эффективность «Эктоцида»

Болезни Лекарственная форма Количество животных Кратность применения, дни Сроки выздоровления

Псороптоз кроликов 0,1% жидкая мазь 6 2-3, повтор через 6 дней 9-10

0,1% спиртовой раствор 5 2-3,. повтор через 6 дней 16-18

0,1% водная суспензия 5 2-3, повтор через 6 дней 18-20

Коп гроль ушные капли «Барс» 5 10 1 выздоровления нет | |

1 ! | Болезни 1 Лекарственная форма Количество животных Кратность применения, ДНИ' Сроки вы 1до-ровления

Отодектоз собак 0,1% жидкая мазь 13 3-6, повтор через 6 дней 10-12

контроль ушные капли «Барс» 5 10 выздоровления нет

Отодектоз кошек 0,1% жидкая« мазь- 11 3-6, повтор через 6 дней 10-12

контроль ушные капли «Барс» 8 5-7 выздоровления нет

Микроспория собак 0,1% жидкая мазь 8 3-6, через день 12-14

контроль 5% спиртовым раствор йода 3 1 раз в день, 10 дней выздоровления нет

Микроспория кошек 0,1% жидкая^ мазь 7 3-6, через день 12-14

контроль 5% спиртовый раствор йода 5 1 раз в день, 10 дней выздоровления нет

4. ВЫВОДЫ

1. Все изученные 14 соединений в ряду 5.7-дизамещенных-4,6-динитробензофуроксана обладают выраженным антимикробным, антимико-тическим и акарицидным свойством. Биологическая активность бис-фениламинопроизводных-4,6-динитробензофуроксана зависит от природы заместителя в ароматическом ядре замещающего амина. Менее выражена биологическая активность у этил, метокси, бромзамещенных динитробен-зофуроксана (минимальная бактериостатическая концентрация по отношению к St. aureus, E. coli - 0,125%; минимальная фунгистатическая концентрация по отношению Tr. gypseum и М. lanosum — 0,1%). При наличии атома хлора активность соединений повышается на порядок. Однако, наибольшей биологической активностью обладают соединения, содержащие в своем составе гидроксильные группы. Так, у 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксана («Эктоцид») минимальная бактериостатическая концентрация для St. aureus и Е. coli составляет 0,004%, минимальная фунгистатическая концентрация для Tr. gypseum 0,003%, М. lanosum 0,0007%, а среднесмертельная концентрация для P. cuniculi 0,0009%. Аналогичную активность проявляет и соединение 5,7-(2-гидроксифениламино)-4,6-дин итробензофу роксан.

2. «Эктоцид» при внутрижелудочном введении относится к Ш классу опасных веществ. Его ДДзо для белых мышей при оральном применении 3850+353,7 мг/кг, ЛД16- 3150 мг/кг, ЛД84, - 4650 мг/кг. Белые крысы более

устойчивы к препарату, они не погибают при оральном введении «Эктоцида» в дозе 6000 мг/кг.

3. «Эктоцид» в концентрациях 0,1-1% при многократном (25 дней) применении не оказывает раздражающего действия на кожу. Ежедневное в течение 10 дней нанесение 0,1% суспензии «Эктоцида» на слизистую глаза кролика вызывает слезотечение в течение 1-2 часов и гиперемию - 4-5 часов.

4. «Эктоцид» не обладает кумулятивным, аллергенным и мутагенным действием.

5. «Эктоцид» в дозе 2 мг/кг при многократном накожном применении в виде 0,1% раствора на диметилсульфоксиде не оказывает отрицательного влияния на живую массу, морфологический и биохимический состав крови, не вызывает изменений в гистоструктуре тканей и органов животных, не проявляет эмбриотоксического и тератогенного действия.

6. При накожном и внутрижелудочном применении «Эктоцид» в дозах 2 мг/кг и 20 мг/кг в виде 0,1% раствора в диметилсульфоксиде и в виде суспензии не оказывает отрицательного действия на регулирующие и координирующие функции центральной нервной системы и не изменяет поведенческие реакции животных.

7. Наиболее устойчивой лекарственной формой «Эктоцида» является 0,1% мазь на ПЭ0-400 и 0,1% раствор на диметилсульфоксиде. Водные суспензии и спиртовый раствор «Эктоцида» в указанной концентрации менее устойчивы.

8. «Эктоцид» в форме 0,1%-ной жидкой мази на ПЭ0-400 обладает хорошей лечебной эффективностью при псороптозе кроликов, отодектозе собак и кошек. 0птимальной схемой лечения является ежедневная обработка пораженных участков кожи в течение 2-3 дней и при необходимости повторное применение через 6 дней. Полное выздоровление животных пораженных указанными эктопаразитами наступает в течение 10-12 дней от начала лечения.

9. «Эктоцид» в виде 0,1% мази обеспечивает полное выздоровление собак и кошек, пораженных микроспорией через 12-14 дней от начала лечения при трех-шести кратном применении с интервалом 24 часа.

10. «Эктоцид» в виде 0,1% мази на ПЭ0-400 высокоэффективен при микроспории собак и кошек при 3-6 кратном применении с интервалом 24 часа. В зависимости от степени поражения полное выздоровление наступает через 12-14 дней от начала лечения.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. При направленном синтезе соединений в ряду динитробензофурок-санов необходимо учитывать, что в структуре наиболее биологически активных веществ должны присутствовать хлор- и гидроксильные заместители в ароматическом ядре замещающего амина.

2. При создании лекарственных форм труднорастворимых соединений, предназначены для наружного применения с успехом можно использовать как основу ПЕ0-400.

3. Для лечения болезней кожи животных паразитарной и микошческой этиологии предложено новое высокоэффективное средство - «Эктоцид», который рекомендуется использовать наружно в виде 0,1% концентрации.

4. В установленном порядке подано на патент «5,7-дизамещенный-4.6-динитробензофуроксан общей формулы С6К406Я1 обладающей акарицидной и бактерицидной активностью» № 2003119046 от 24.06.03.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Юсупова Л.М., Гарипов Т.В., Ишкаева Д.Р., Шиндала М.К. Ветфурок-сан - новое средство дл лечения саркоптоидозов и дерматомикозов животных. // Ветеринарный врач. - 2002.№2. - С. 77-79.

2. Юсупова Л.М., Спатлова Л.В., Фаляхов И.Ф., Гарипов Т.В., Шиндала М.К. Биологическая активность функциональнозамещенных нитро-производных бензофуроксанов. // Материалы второй международной конф. «Химия и биологическая активнсоть кислород- и серосодержащих гетероциклов». - Черноголовка, 2003. - С. 122.

3. Шиндала М.К. Акарицидная актвиность производных бензофуроксана. // Материалы науч.-произв. конф. по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса. - Казань, 2003. - С.268-270.

4. Шиндала М.К. Антимикробная активность производных бензофурок-сана. // Материалы науч.-произв. конф. по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса. - Казань, 2003. - С.270-272.

Подписано к печати 34.0$, Заказ Тираж/^экз. Бумага офсетная

Формат 60x84/16 Усл.-печ. I. О Печать М80

Центр информационных технологий КГАВМ 420074, Казань, Сибирский тракт, 35.

1121 2 4 6 4

Микозы и саркоптоидозы широко распространены среди всех видов •животных (А.И. Ятусевич, Рубина Л. И.,.«Ятусевич и д 1999 и др.). В связи с этим ежегодно лечебной и профилактической обработке против стригущего литая подвергаются свыше 50%, против псороптоза - 13 % крупного рогатого скота и овец. Эти заболевания помимо экономического ущерба представляют серьезную опасность как для животных, так и для человека. Экологически неблагополучную ситуацию создают кожные заболевания собак и кошек. Пораженность акарозами и дерматомикозами у собак и кошек составляет 32 - 45% от общего числа больных животных (B.C. Ше-ховцев, И.А. Машкей и др., 1997; Н.Ф. Фирсов, Г.А. Каратунов, 1999; Л.Н. Гордиенко, Е.В. Пильщик, 1999 и др.).

Имеющиеся средства для лечения дерматомикозов и саркоптоидозов из-за высокой токсичности для теплокровных животных, недостаточной эффективности при применении в разных климатических условиях, отрицательного действия на структуру кожи, эмбриотоксичности или иных отдаленных последствий действия не удовлетворяют отечественную ветеринарную практику. Кроме того, частое применение препаратов, содержащих антибиотики и другие цитостатики, может привести к образованию устойчивых видов возбудителей кожных болезней.

Поэтому изыскание перспективных малотоксичных и эффективных соединений для лечения и профилактики паразитарных и инфекционных болезней кожи животных на сегодняшний день остается актуальной задачей ветеринарии.

В настоящее время поиск новых акарицидов ведется на основе ранее известных соединений (фосфорорганические соединения, хлорорганические соединения, авермектины, пирегроиды и другие), а также среди бензофу

Л/ рокснов.

Среди бензофуроксанов, замещенных такими функциональными груп-• • нами, как окси, метокси, хлор- и нитро-, найдены эффективные инсектициды и фунгициды (G. Tappi, P.V.Forri, 1948, 1950, 1951; А.С. Салахова, Л.М. Юсупова, И.Ф. Фаляхов и др., 1997, 1999 и др.). Это позволяет считать производные бензофуроксана перспективным источником разработки новых фунгицидных и акарицидных препаратов.

Цель и задачи исследований. Основная цель исследований - изучение биологической активности, фармако-токсических свойств 5,7-дизамещенных-4,6-динитробензофуроксана и разработка эффективного средства для лечения дерматомикозов и саркоптоидозов животных, g В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

1. Изучить физико-химические свойства замещенных динитробензофу-роксана.

2. Определить биологическую активность производных динитробензо-фуроксана и выявить наиболее перспективное соединение.

3. Определить параметры токсичности, кумулятивные свойства одного из производных динитробензофуроксана, обладающего выраженной биологической активностью.

4. Изучить влияние наиболее перспективного соединения на общее состояние, морфологический и биохимический состав крови, состояние центральной нервной системы лабораторных животных, определить наличие и характер гистоморфологических изменений, возникающих в организме животных после его применения .

5. Определить отдаленные последствия действия производного динитробензофуроксана на организм животных.

6. Разработать лекарственные формы, дозы и схемы применения производного динитробензофуроксана для лечения акарозов и дерматомикозов животных, изучить терапевтическую эффективность.

Научная новизна. Впервые установлено, что замещенные динитробен-* зофуроксана (всего 14 соединений) проявляют антимикробную, антимикотическую и акарицидную активность. Определены параметры токсичности 5.7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксана. Доказано отсутствие отрицательного влияния его на общее состояние, гематологический состав, состояние центральной нервной системы, морфологию тканей животных при однократном и длительном применении. Показано отсутствие отдаленных последствия действия (мутагенность, эмбриотоксичность) 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксана на организм животных. Разработаны лекарственные формы и схемы применения замещенного ди-нитробензофуроксана при псороптозе кроликов, отодектозе и микроспории собак и кошек.

Практическая ценность. 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитро-бензофуроксан в виде 0,1% мази эффективен при псороптозе кроликов, отодектозе и микроспории-собак и кошек.

Апробация работы. Материалы диссертации обсуждены и получили положительную оценку на международной научно-производственной конфеч ренции по актуальным проблемам агропромышленного комплекса (Казань, 2003), международной конференции «Химия и биологическая активность кислород- и серосодержащие гетероциклов» (Черноголовка, 2003).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- 5,7-дизамещенные- 4,6-динитробензофуроксана проявляют выраженную антимикробную, антимикотическую и акарицидную активность;

- 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксан малотоксичен, не кумулируется в организме животных при длительном применении;

- 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксан в рекомендуемой концентрации и кратности применения не оказывает отрицательного действия на общее состояние, состав крови, морфологию тканей, состояние центральной нервной системы животных, не обладает мутагенным, эмбрио-токсическим действием;

- 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксана в виде 0,1% мази обеспечивает высокий терапевтический эффект при псоропточе кроликов, отодектозе и микроспории собак и кошек.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на12'остРа" ницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений и списка литературы. Работа иллюстрирована \4 рисунками и содержит 19 таблиц. Список литературы включает 257 источников.

ВЫВОДЫ

1. Все изученные 14 соединений в ряду 5.7-дизамещенных-4,6-динитробензофуроксана обладают выраженным антимикробным, антимико-тическим и акарицидным свойством. Биологическая активность бис-фениламинопроизводных-4,6-динитробензофуроксана зависит от природы заместителя в ароматическом ядре замещающего амина. Менее выражена биологическая активность у этил, метокси, бромзамещенных динитробензофуроксана (минимальная бактериостатическая концентрация по отношению к St. aureus, Е. coli - 0,125%; минимальная фунгистатическая концентрация по отношению Tr. gypseum и М. lanosum - 0,1%). При наличии атома хлора активность соединений повышается на порядок. Однако, наибольшей » биологической активностью обладают соединения, содержащие в своем составе гидроксильные группы. Так, у 5,7-(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксана («Эктоцид») минимальная бактериостатическая концентрация для St. aureus и Е. coli составляет 0,004%, минимальная фунгистатическая концентрация для Tr. gypseum 0,003%, М. lanosum 0,0007%, а среднесмертельная концентрация для P. cuniculi 0,0009%. Аналогичную активность проявляет и соединение 5,7-(2-гидроксифениламино)-4,6-д и н итробензофу роксан.

2. «Эктоцид» при внутрижелудочном введении относится к III классу опасных веществ. Его ДД50 для белых мышей при оральном применении -3850±353,7 мг/кг, ЛД16- 3150 мг/кг, ЛД84 - 4650,мг/кг. Белые крысы более устойчивы к препарату, они не погибают при оральном введении «Эктоцида» в дозе 6000 мг/кг.

3. «Эктоцид» в концентрациях 0,1-1% при многократном (25 дней) применении не оказывает раздражающего действия на кожу. Ежедневное в течение 10 дней нанесение 0,1% суспензии «Эктоцида» на слизистую глаза кролика вызывает слезотечение в течение 1-2 часов и гиперемию - 4-5 часов.

4. «Эктоцид» не обладает кумулятивным, аллергенным и мутагенным действием.

5. «Эктоцид» в дозе 2 мг/кг при многократном накожном применении в виде 0,1% раствора на диметилсульфоксиде не оказывает отрицательного влияния на живую массу, морфологический и биохимический состав крови, не вызывает изменений в гистоструктуре тканей и органов животных, не проявляет эмбриотоксического и тератогенного действия.

6. При накожном и внутрижелудочном применении «Эктоцид» в дозах 2 мг/кг и 20 мг/кг в виде 0,1% раствора в диметилсульфоксиде и в виде рецензии не оказывает отрицательного действия на регулирующие и координирующие функции центральной нервной системы и не изменяет поведенческие реакции животных.

7. Наиболее устойчивой лекарственной формой «Эктоцида» является 0,1%. ; , мазь на ПЭО-400 и 0,1% раствор на диметилсульфоксиде. Водные суспензии и спиртовый раствор «Эктоцида» в указанной концентрации менее устойчивы.

8. «Эктоцид» в форме 0,1%-ной жидкой мази на ПЭО-400 обладает хорошей лечебной эффективностью при псороптозе кроликов, отодектозе собак и кошек. Оптимальной схемой лечения является ежедневная обработка пораженных участков кожи в течение 2-3 дней и при необходимости повторное применение через 6 дней. Полное выздоровление животных пораженных указанными эктопаразитами наступает в течение 10-12 дней от начала лечения.

9. «Эктоцид». в виде 0,1% мази обеспечивает полное выздоровление собак и кошек, пораженных микроспорией через 12-14 дней от начала лечения при грех-шести кратном применении с интервалом 24 часа.

10. «Эктоцид» в виде 0,1% мази на ПЭО-400 высокоэффективен при микроспории собак и кошек при 3-6 кратном применении с интервалом 24 часа. В зависимости от степени поражения полное выздоровление наступает чере; 12-14 дней от начала лечения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. При направленном синтезе соединений в ряду динитробензофурок-санов необходимо учитывать, что в структуре наиболее биологически активных веществ должны присутствовать хлор- и гидроксильные заместители в ароматическом ядре замещающего амина.

2. При создании лекарственных форм труднорастворимых соединений, предназначены для наружного применения с успехом можно использовать как основу ПЕО-400. 3. Для лечения болезней кожи животных паразитарной и микотической этиологии предложено новое высокоэффективное средство - «Эктоцид», который рекомендуется использовать наружно в виде 0,1% концентрации.

4. В установленном порядке подано на патент «5,7-дизамещенный-4,6-динитробензофуроксан общей формулы C6N4O6R1 обладающей акарицидной и бактерицидной активностью» № 2003119046 от 24.06.03.