Унифицированные подходы к анализу метаболиков, химиотерапевтических, анальгезирующих и противовоспалительных лекарственных средств методом ВЭЖХ

Салахов, Ильгиз Анясович

Диссертации по медицине → Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Унифицированные подходы к анализу метаболиков, химиотерапевтических, анальгезирующих и противовоспалительных лекарственных средств методом ВЭЖХ

ДИССЕРТАЦИЯ

Унифицированные подходы к анализу метаболиков, химиотерапевтических, анальгезирующих и противовоспалительных лекарственных средств методом ВЭЖХ - диссертация, тема по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Салахов, Ильгиз Анясович Казань 2010 г.

Ученая степень: кандидата химических наук

ВАК РФ: 14.04.02

Автореферат диссертации по медицине на тему Унифицированные подходы к анализу метаболиков, химиотерапевтических, анальгезирующих и противовоспалительных лекарственных средств методом ВЭЖХ

На правах рукописи

„ Л

004606«»

САЛАХОВ ИЛЬГИЗ АНЯСОВИЧ

Унифицированные подходы к анализу метаболиков, химиотерапевтнческих, анальгезирующих и противовоспалительных лекарственных средств методом ВЭЖХ

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

1 I, ет ?910

Казань - 2010

004606288

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Казанский государственный технологический университет»

Научный руководитель: доктор химических наук, профессор

Гармонов Сергей Юрьевич

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор

Будников Герман Константинович

доктор фармацевтических наук, профессор Егорова Светлана Николаевна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Российский университет

дружбы народов» (г. Москва)

Защита состоится «30» июня 2010 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 212.080.07 при Казанском государственном технологическом университете по адресу: 420015, г. Казань, ул. К. Маркса, 68, А-330.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Казанского государственного технологического университета.

Электронный вариант автореферата размещен на сайте Казанского государственного технологического университета Мррг/Лу^у.кзШ.ги.

Автореферат разослан « » мая 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Г.Н. Нугуманова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Лекарственные средства (ЛС) с химиотерапевтиче-ским, анальгезирующим, противовоспалительным и метаболическим действием составляют приоритетные фармакологические группы современных препаратов и находят широкое применение в медицинской практике для лечения различных заболеваний. В тоже время их полифункциональный состав, различные химические свойства, а также многокомпонентность лекарственных форм (ЛФ) требуют применения избирательных и чувствительных методов для контроля качества этих лекарственных веществ (ЛВ) в субстанциях, смесях синтеза и готовых ЛС.

Совершенствование принципов стандартизации и контроля качества ЛС, обеспечивающих их терапевтическую активность и безопасность применения, обуславливает разработку, унификацию и валидацию методов анализа ЛС на этапах их создания, производства и потребления. К таким методам в полной мере относится высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), которая за последние десятилетия во многом определила заметный прогресс в фармации и практической медицине.

ВЭЖХ как универсальный и высокочувствительный метод анализа, которому в раде случаев нет альтернативы, позволяет одновременно осуществлять контроль за содержанием нескольких ЛВ, вспомогательных компонентов и возможных токсичных примесей в многокомпонентных ЛС, отличаясь при этом высокой точностью и воспроизводимостью.

Однако более широкое использование ВЭЖХ в практике рутинного фармацевтического анализа ограничено отсутствием унифицированных подходов к созданию методик анализа. В настоящее время для определения какого-либо ЛС и примесей в них применяются свои аналитические процедуры подготовки проб и методики ВЭЖХ анализа, которые в каждом конкретном случае предписывают использование разных колонок, подвижных фаз (ПФ) и детекторов. Очевидно, что эти обстоятельства приводят к необходимости каждый раз изменять параметры хроматографической системы и осуществлять ее калибровку, что, в конечном итоге, значительно увеличивает продолжительность всего анализа, требует высокой квалификации персонала и, наконец, существенно повышают стоимость анализа.

Один из возможных путей решения этой проблемы - разработка максимально унифицированных, экономичных и экспрессных методик подготовкипробы и хроматографическйх процедур. Реализация такого подхода, очевидно, позволит снизить расходы на проведение контроля и более широко внедрить ВЭЖХ в практику фармацевтического анализа. Это направление расширения возможностей контроля качества ЛС при использовании метода ВЭЖХ, безусловно, представляется нам важным и актуальным.

Диссертационная работа выполнялась при поддержке Гранта Президента Российской Федерации (МД-2523.2008.3).

Научным консультантом по работе являлась к.х.н. Ахметова Л.Т.

Цель работы состояла в создании комплекса унифицированных способов контроля качества метаболиков, химиотерапевтических, анальгезирующих, противовоспалительных лекарственных средств в многокомпонентных лекарственных и технологических смесях с использованием обращенно-фазной ВЭЖХ.

Для достижения цели решались следующие задачи:

- изучение условий хроматографического разделения и режимов градиентного элюирования, расчет и оценка параметров пригодности хроматографической системы и обоснование путей унификации методик определения ряда JIB химио-терапевтического, анальгезирующего, противовоспалительного и метаболического действия;

- выявление факторов, обеспечивающих чувствительность и избирательность определений JTB и компонентов их синтеза (антибиотиков, водо- и жирорастворимых витаминов, производных карбоновых кислот и фенолов, хлорнитрозаме-щенных бензофуроксанов), выбор рабочих условий детектирования исследуемых веществ в условиях обращено-фазной ВЭЖХ при изократическом и градиентом режиме элюирования;

- оценка влияния компонентов анализируемой матрицы на регистрируемый в условиях ВЭЖХ аналитический сигнал;

- унификация процедур подготовки образцов лекарственных форм и технологических смесей синтеза для определения в них методом ВЭЖХ вышеперечисленных препаратов;

- определение метрологических характеристик разработанных способов для подтверждения их соответствия требованиям, принятым для фармацевтического анализа.

Научная новизна:

- установлены условия хроматографического разделения парацетамола, аскорбиновой и ацетилсалициловой кислот, анальгина, кофеина, дибазола, папаверина и 4-аминофенола в условиях обращено-фазной ВЭЖХ, выявлены факторы повышения избирательности и чувствительности определения этих JIB в сложных по составу ЛФ андипала, цитрамона, антигриппина, антиангина и цитрапака;

- найдены и обоснованы рабочие условия высокочувствительного и избирательного определения смеси водорастворимых витаминов С, Вь В2, В5, Вй, В9, Вп, В|2, Р, РР, Н и жирорастворимых витаминов (А, Д2, Е), а также витексина-2-рамнозида, рутина и гиперозида при использовании градиентного элюирования, подобраны условия пробоподготовки таблетированных и жидких ЛФ на их основе при высокопроизводительных аналитических определениях ЛВ;

- установлены условия хроматографического разделения близких по физико-химическим свойствам соединений 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана, 4-нитро-5,7-дихлорбензофуроксана и 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана, а также исходных компонентов их синтеза 1-нитро-2,4,6-трихлорбензола и 3,5-дихлор-2,4,6-тринитро-1-азидбензола; разработана методика количественного определения этих веществ в биологически активных смесях и показана возможность ее

использования для контроля качества многокомпонентных ЛФ наружного применения и постадийного контроля синтеза хлорнитропроизводных бензофуроксана;

- разработаны подходы по установлению подлинности, количественному одновременному определению JIB и примесей в смесях на основе напроксена и те-ноксикама методом ВЭЖХ и обосновано их использование для контроля качества новых гелеобразных ЛФ;

- предложена унифицированная ВЭЖХ методика для идентификации и определения цефазолина, цефатоксима, ципрофлоксацина, амоксициллина, натриевых солей ампициллина и бензилпенициллина, пирацетама, рибоксина, бифоназола, флуконазола, тербинафина, диклофенака-натрия и трамадола на колонке с обра-щенно-фазовым сорбентом типа "С 18" при использовании двухкомпонентной ПФ, что существенно повышает экономичность всего метода.

Практическая значимость. Разработаны экспрессные и чувствительные методики одновременного и избирательного ВЭЖХ-определения ряда ЛВ химиоте-рапевтического, противовоспалительного, анальгезирутощего действия, а также регуляторов обменных процессов в реакционных смесях, субстанциях и ЛФ.

Предложенные методические подходы могут быть использованы для расширения возможностей контроля качества ЛС и рекомендованы для применения в рамках проведения сертификации для обеспечения безопасности ЛС. Разработанные подходы позволяют повысить эффективность фармацевтического анализа путем использования одностадийных, высокопроизводительных, чувствительных и экспрессных ВЭЖХ методик ЛВ, значительно упростить и ускорить процессы пробоподготовки анализируемых образцов ЛФ.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в ГУ «Центр по контролю качества и сертификации лекарственных средств Республики Татарстан», в испытательной лаборатории ООО «Аналит продакт» (г. Санкт-Петербург) и в учебный процесс ГОУ ВПО «Казанский государственный технологический университет» в дисциплине «Контроль качества лекарственных препаратов».

На защиту выносится:

- схема унифицируемого подхода и оптимизация хроматографического разделения ЛВ путем изменения рН ПФ, добавления модификаторов алкиламинов и додецилсульфата натрия;

- применение предложенного алгоритма анализа для установления условий определения примесей, вспомогательных веществ и действующих компонентов за одно ВЭЖХ определение в лекарственных и технологических смесях;

- результаты исследования по хроматографическому разделению антибиотиков, водо- и жирорастворимых витаминов, производных карбоновых кислот и фенолов, хлорнитрозамещенных бензофуроксанов в условиях обращено-фазной ВЭЖХ;

- результаты изучения влияния состава и рН ПФ, условий градиентного элюирования, данных по оценке пригодности предложенных хроматографиче-

ских систем и свойств определяемого вещества на выбор условий избирательного и чувствительного детектирования ЛВ и компонентов их синтеза;

- обоснование и подбор рабочих условий высокочувствительного и избирательного определения парацетамола, аскорбиновой и ацетилсалициловой кислот, анальгина, кофеина, дибазола, папаверина, витаминов С, Вь В2, В5, Вб, Вц, В12, РР, А, Д2, Е, витексина-2-рамнозида, рутина, гиперозида, а также нормируемых примесей с использованием спектрофотометрического и спектрофлуориметриче-ского детектрирования, новых способов пробоподготовки лекарственных форм на основе этих ЛВ для высокопроизводительного определения;

- схема проведения анализа сложных смесей на основе 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана, 4-нитро-5,7-дихлорбензофуроксана и 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана, а также компонентов их синтеза 1,3-динитро-2,4,6,-трихлорбензола и 3,5-дихлор-2,4,6-тринитро-1-азидбензола;

- методики определения цефазолина, цефатоксима, ципрофлоксацина, амок-сициллша, натриевых солей ампициллина и бензилпенициллина, пирацетама, рибоксина, бифоназола, флуконазола, тербинафина, диклофенака-натрия, трамо-дала в субстанциях и лекарственных формах с применением ВЭЖХ.

- результаты исследования метрологических характеристик разработанных способов определения, полученные путем обработки экспериментального материала, подтверждающие их соответствие требованиям, принятым для фармацевтических методов анализа.

Апробация работы. Результаты работы и основные положения диссертации были доложены и обсуждены на XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 2007), XII Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2007), XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008), III Всероссийской конференции «Аналитические приборы» (С.Петербург, 2008), Всероссийской конференции «Химический анализ» (Москва, 2008), II Международном форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж, 2008), Всероссийской конференции «Теория и практика хроматографии. Хроматография и нанотехнологии» (Самара, 2009); III Всероссийской конференции «Аналитика России» (Краснодар, 2009); I Всероссийской конференции «Современные методы химико-аналитического контроля фармацевтической продукции» (Москва, 2009), 65-ой Всероссийской конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2010).

Публикации: по материалам диссертации опубликовано 6 статей и 9 тезисов докладов.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов, заключения, указателя литературы, включающего 224 источника. Работа изложена на 173 страницах машинописного текста, иллюстрирована 68 рисунками, 74 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В первой главе рассмотрены современное состояние и перспективы развития ВЭЖХ ЛВ. Обсуждены подходы по повышению избирательности и чувствительности определений ЛВ, а также расширения возможностей ВЭЖХ в фармацевтическом анализе.

Во второй главе дано описание объектов, методов и средств исследования и методик проведения анализа. В работе применяли жидкостные хроматографы: LC-20 фирмы "Schimadzu" (Япония) с диодно-матричным и флуоресцентным детекторами; SERIES 200 фирмы Perkin Elmer (США) с УФ детектором.

Использовали спектрофотометр SPECORD 40 (AnalitykJena, Германия), рН-метр 211 (Hanna, Румыния), центрифугу Minispin Plus (Eppendorf, Германия), ультразвуковую ванну L-0,16/18 (Россия), установку для получения сверхчистой воды Simplicity Millipor (Франция).

Использованы ЛС промышленного изготовления различных производителей. Образцы субстанций и ЛФ хлорнитробензофуроксанов предоставлены д.х.н., проф. Юсуповой Л.М. Гели напроксена и теноксикама предоставлены д.фарм.н., доц. Насыбуллиной Н.М. В качестве стандартов применяли стандартные образцы USP, BP, фирм Fluca, Sigma, Aldrich, Exrasynthese и субстанции ЛВ, отвечающие всем требованиям нормативной документации (НД).

В третьей главе приведены результаты по выбору унифицированных рабочих условий определения ЛВ с химиотерапевтической, анальгезирующей, противовоспалительной и метаболической активностью.

Для поиска оптимальных условий разделения и обоснования выбора унифицируемой ПФ требовалось оценить хроматографическое поведение этих ЛВ с учетом активности незащищенных силанолов сорбента (рКа 3,5) в зависимости от изменения дипазона pH ПФ, ограниченного для большинства сорбентов интервалом от 2 до 7,5. При этом можно выделить ЛВ с слабыми (рК<7; кофеин, 4-аминофенол, гуанин, ацикловир, теноксикам, папаверин, нифедипин, рибофлавин, пиридоксин, фолиевая кислота, никотинамид), средними (рК>7; ципрофлок-сацин, лидокаин, тетракаин) и сильными (рК>9; хлорфенирамин, хлоргексидин, бензэтония хлорид, трамадол, фенилэфрин) основными свойствами и слабыми (рК>4; аскорбиновая кислота, парацетамол, метилпарабен, пропилбарабен, на-проксен, фенобарбитал, диклофенак, бензойная кислота, биотин, рутин) и средними (рК>2; ацетилсалициловая, салициловая кислоты, амоксициллин, бензилпе-нициллин, цефазолин, цефотаксим) кислыми свойствами. Было установлено, что использование pH для контроля состояния ионизации аналита в ОФ условиях ВЭЖХ является эффективным приемом для изменения селективности разделения. Ионизированные функциональные группы имеют большую полярность, что приводит к уменьшению удерживания, и обладают ионным взаимодействием с незащищенными и активными силанолами сорбента, что влияет на форму пика и его воспроизводимость. В качестве примера на рис. 1,2 представлено хроматографическое поведение ЛВ с кислыми и основными свойствами.

2,0

4,0

6,0

7,0

8,0

2,0

4,0

он.

Рис. 1. Зависимость фактора удерживания тетракаина (1), пропилпарабена (2), салициловой кислоты (3) от рН ПФ. ХТегга ЯР 18. Элюенты А: 0,02М На2НР04, Н3Р04; Б: ацетонитрил, А/Б=72/28 (об.,%). 40°С

Рис. 3. Схема унифицируемого подхода

Рис. 2. Зависимость коэффициента ассиметрии пика салициловой кислоты (1), тетракаина (2), пропилпарабена (3) от рН ПФ. Условия -см. на рис. 1.

В диапазоне рН ПФ вблизи значений рК JIB присутствуют в растворе одновременно в нейтральной и ионизированной форме. Силанолы сорбента в нейтральной среде ионизированы, что приводит к увеличению их взаимодействия с полярными функциональными группами, приводя к образованию сильного хвостового фактора и снижению эффективности колонки. При рН ниже их рКа на 1-1,5 ед. они находятся в нейтральном состоянии, поэтому подкисление ПФ является общим подходом по установлению вторичных взаимодействий.

Учитывая рабочий диапазон колонки, рК кислот и оснований, свойств свободных силанолов сорбента, ПФ с рН 2 - 3 является наиболее приемлемой для создания стартовых унифицируемых условий определения исследованных JIB (рис. 3). Для создания этих значений рН исследовали ПФ на основе фосфорной, муравьиной, уксусной, трифторуксусной кислот и буферных растворов на их основе.

При разработке новых методик удобство унифицированного элюента заключается в предоставлении стартовых условий анализа, экономии времени, быстрой адаптации хроматографической системы при смене объекта анализа. В растворе фосфатного буфера и фосфорной кислоты нам удалось получить разделение компонентов с наиболее приемлемой селективностью. Так, изучение различных по своим хроматографическим свойствам ЛВ хлорфенирамина малеата, хлоргекси-дина диацетата, бензэтония хлорида, салициловой кислоты и кофеина выявило возможность их разделения на колонках с различной селективностью гидрофобных фаз. При этом большое влияние на разделение оказывают свойства гидрр-фобного сорбента (рис. 4,5). ■, .

_____JL

«„5

420

JL-

420

G.0 10.0 min 0.0 5.0 10.0 15.0 min

Рис. 4. Хроматограммы смеси (мкг/мл): малеат - 1 (60), хлорфенирамин - 2 (60), кофеин - 3 (46), хлоргексидин - 4 (78), салициловая кислота - 5 (64), бензэтония хлорид - 6 (50) при градиенте ПФ: А - 0,5% Н3Р04, Б - ацетонитрил. Symmetry (I) С18; Discovery RP Amide (II). 40 °С

k..........J

420

1__JL.

»220

Рис. 5. Хроматограммы смеси (мкг/мл): малеат - 1 (60), кофеин - 2 (46), хлорфенирамин - 3 (60), салициловая кислота - 4 (64), хлоргексидин - 5 (78), бензэтония хлорид - 6 (50) при градиенте ПФ: А - 0.02 М Na2HP04, Н3Р04 рН 2,5, Б - ацетонитрил: Symmetry (I) СЗ 8; Discovery RP Amide (II) CI 6. 40 °C

В случае неудовлетворительного разделения соединений с третичным атомом азота в ПФ фосфатного буфера возможно изменение селективности разделения при использовании трифторуксусной кислоты. В этом случае удалось достигнуть разделения ЛВ с близкими спектральными и элюационными характеристиками, как сахаринат натрия и хлорфенирамина малеат (рис. 6). Коэффициенты емкости и ассиметрии пиков зависят от концентрации модификатора в ПФ (рис. 7).

mAU

о — 0.0

.JL_______________

462

5.0

10.0

О 0.0

1 2 |3

L. d

"262

6.0

10.0 mln

Рис. 6. Хромагограмма смеси (мкг/мл): аскорбиновая кислота - I (50), парацетамол - 2 (250), сахаринат натрия -3(10), хлорфенирамин -4(12) ПФ: (I) А 0,02М Na2HP04, Н3РО4 рН 2.5; Б ацетонитрил; (II) А 0,025% CF3COOH, 0,25% Н3Р04, Б CH3CN, градиент Б 5—>■ 18 за 9 мин, 1,0 мл/мин. Symmetry С18. 40 °С

Рис. 7. Зависимость коэффициента емкости (1) и ассиметрии пика (2) хлорфенирамина от концентрации модификатора трифторуксусной кислоты в ПФ 0,2 % Н3РО4 - ацетонитрил 95:5 (об., %) на колонке Symmetry С18. Температура 40°С

»262

Рис. 8. Хромагограмма антигрипина (мкг/мл): 4-аминофенол - 1 (0,25), аскорбиновая кислота - 2 (100), парацетамол - 3 (500), сахаринат натрия - 4 (60), хлорфенирамина малеат - 5 (6). Длина волны возбуждения 260 нм, эмиссии 340 нм (I), длина волны 262 нм в (И) ПФ: А 0,05% CF3COOH, Б ацетонитрил, 0,2% Б 3 мин, градиент Б 0,2-* 55 за 10 мин, 55 % Б 2 мин. Symmetry С18. 30 °С

Возможности по унификации анализа можно продемонстрировать на примере многокомпонентных ЛФ антигриппина. В них содержание компонентов сильно различается и они обладают близкими элюационными характеристиками на гидрофобных фазах. Из-за этого в НД на ЛФ антигриппина применяют несколько элюирующих смесей для каждого соединения. Нами предложены условия одно-

временного хроматографического определения действующих, вспомогательных компонентов и нормируемых примесей (рис. 8). При указанных рабочих условиях хорошо воспроизводимые градуировочные зависимости площади пика от содержания аналита записываются в виде уравнений:

для парацетамола 8 = 95417 Сх(мкг/мл) + 9805 (г = 0,9997, п = 15); для аскорбиновой кислоты Б = 22650 Сх(мкг/мл) + 1584 (г = 0,9996, п = 12); для хлорфенирамина малеата Б = 23927 Сх(мкг/мл) - ] 793 (г = 0,9997, п = 14); для сахарината натрия Б = 10445 Сх(мкг/мл) - 1008 (г = 0,9995, п = 14). Предварительно установлено, что вспомогательные вещества, входящие в состав таблеток, определениям не мешают. Возможность ВЭЖХ определения проверена на готовых ЛФ (табл. 1).

Таблица 1. Результаты анализа шипучих таблеток антигриппина промышленной серии 02060607 (п=5, Р = 0,95)

Компоненты Норма по НД, мг Хср S Sx дхср £ср»%

Парацетамол 237,5-262,5 248,3 1,92 0,86 2,38 0,96

Хлорфенирамина малеат 2,7-3,3 3,06 0,052 0,023 0,0646 2,11

Аскорбиновая кислота 46,25-53,75 48,86 1,42 0,64 1,77 3,61

Сахаринат натрия 30 29,21 0,89 0,40 1,11 3,7

4-Аминофенол не более 0,25 6 10"4 4 10_i 1,8 10"5 4,9 10° 8,28

С использованием унифицированного подхода показана возможность за один хроматографический цикл проводить определение наряду с действующим веществом и нормируемых примесей. В качестве примера приведены хроматограммы трамадола и рибоксина (рис. 9, 10).

mAU

1.a o.s о.о

-4

min

Рис. 9. Хроматограмма компонентов таблеток трамадола (2) и примеси цис-трамадола - 0,16 мкг/мл (1). ПФ: А 0.02М Na2HP04, Н3Р04 pH 2,5, Б -ацетонитрил, А/Б=25/75. Pecosphere CI 8. 30 °С

»254

Рис. 10. Хроматограмма раствора рибоксина: гипоксантин - 0,2 мкг/мл (1), гуанозин - 0,3 мкг/мл (2), рибоксин -200 мкг/мл (3). ПФ: 0,5% Н3Р04. Discovery RP Amide С16. 30 °С

В случае 4-аминофенола (АФ) не удалось получить приемлемого разделения, применяя унифицируемую Г1Ф на сорбенте С18. Содержание АФ нормируется во всех ЛФ, содержащих парацетамол и определение осложняется фоном матрицы и малыми его содержаниями (0,05% - 0,5%). В этом случае реализован ион-парный механизм разделения при использовании додецилсульфата натрия (ДДС). Обладая более высокой удерживающей способностью чем, гексил- или октилсульфо-нат, он позволяет при высоком содержании модификатора получать приемлемые времена удерживания АФ, из-за чего остальные компоненты элюируются вместе с пиком перераспределения, не мешая определению примеси. Удерживание соединений с основными свойствами, в частности фенирамина, при этом значительно возрастает, что позволяет достоверно отделять все компоненты смеси от примеси АФ (рис. 11). Наряду со спектрофотометрическим возможно использование более чувствительного флуоресцентного детектора (Еех 260, Еет 340 нм). Градуировочные зависимости площади пика от содержания АФ записываются в виде уравнений:

S = 18089 Сх(мкг/мл) + 630 (г = 0,9998, п = 25), 272 нм, ПрО 0,306 мкг/мл;

S = 319376 Сх(мкг/мл) + 1003 (г = 0,9999, П = 21), ПрО 0,04 мкг/мл.

шШ

Рис. 11. Хроматограмма компонентов таблеток терафлю: 4-аминофенол -2,5 мкг/мл (1), фенирамина малеат (2). ПФ: 0,01M CnH25NaS04, 0.01М Na2HP04, Н3РО4 рН 2,2, Б - ацето-нитрил, А/Б=70/30. Symmetry С18. 40 °С

Определение винпоцетина проведено на основе ПФ алкиламинов при нейтральном значении рН в изократическом режиме, при этом удалось получить полное разделение всех примесей и компонентов с хорошей пригодностью хро-матографической системы (рис. 12).

mAU

200Г _

5а

»270

20 mln

Рис. 12. Хроматограмма винпоцетина (1): этилвинкаминат - 200 мкг/мл (1), гид-роксиимино основание - 50 мкг/мл (2), аповинкамин - 50 мкг/мл (3), винпоцетин - 50 мкг/мл (4), а-этил-транс-винпоцетин - 50 мкг/мл (5), субстанции винпоцетина (II): этилвинкаминат - 1,55 мкг/мл (1), гидроксииминооснование - 0,19 мкг/мл (2), аповинкамин - 0,40 мкг/мл (3), винпоцетин - 200 мкг/мл (4). ПФ: А - 1% ДЭА, 1% ТЭА, Н3РО4 рН=6,7, Б - ацетонитрил, А/В= 30/70. Discovery HS С18. 30°

Применение унифицируемой ПФ на основе фосфорной кислоты позволило разделить наряду с действующим веществом таких активных соединений, как консерванты и предложить способ изократического определения действующих веществ и биологически активных вспомогательных веществ в новых ЛФ - 1% гелях напроксена и теноксикама. Для ЛФ 1% геля теноксикама использовали градиентное элюирование (рис. 13, 14).

350 ЭОТ 250 200 150 100

2.5

5.0

7.5

min

Рис. 13. Хроматограмма компонентов 1% геля теноксикама (мкг/мл): тенок-сикам 1 (50), метилпарабен 2 (15), тоопилбарабен 3 (5). ПФ: А - 0,5% Н3РО4, Б - ацетонитрил - метанол (1:1 об.), А:Б=45:55. X 255 им. Symmetry С18.

Рис. 14. Хроматограмма компонен-1% геля напроксена (мкг/мл):

H3PÖ4, Б - ацетонитрил - метанол (1:1 об) А/Б=45/55. X 255 нм. Symmetry С18.

ВЭЖХ определение по предложенному алгоритму удалось осуществить для субстанций и ЛФ диклофенака, амоксициллина, фунготербина, бензилпеницил-лина натриевой соли, цефазолина натриевой соли, пирацетама, цефатоксима натриевой соли, андипала, азинокса, суппозиторий биопроста, цитрамона, гриппоф-лю, боярышника. Некоторые примеры представлены на рис. 15, 16. шли ...............

' 1

30 20 10

5.0

V I-_■-_-•-10.0 min

J J

2.S

min

454

Рис. 15. Хроматограмма компонентов таблеток гриппофлю (мкг/мл): аскорбиновая кислота-1 (40), фенирэфрин -2 (8), парацетамол - 3 (520), фенира-мин - 4 (16). ПФ: А-0,1% CF3COOH, Б-ацетонитрил, град. Б 1—>7% за 10 мин, 7% Б 2,5 мин. Xterra С18

Рис. 16. Хроматограмма компонентов таблеток боярышника (мкг/мл): хлороге-новая кислота- 1 (18), витексин-2-рамнозид-2 (18,3), рутин- 3 (2,8), гипе-розид - 4 (9,5) в ПФ А - Na2HP04, Н3РО4 pH 2,5,Б-смесь ацетонитрил-метанол (1:1 об.), А/Б=70/30. Discovery RP Amide С16

В четвертой главе представлены результаты по хроматографическому исследованию и унификации определения витаминов. Существующие методики анализа поливитаминных препаратов в большинстве своем используют ион-парные реагенты (ИПР) на основе алкилсульфонатов с алкильными цепями С6-С8 в кислой среде Г1Ф. В этом случае наряду с преимуществами в виде повышения эффективности разделения и улучшения формы пика имеются недостатки. К ним относятся высокая стоимость, сложная подготовка элюента, длительное уравновешивание колонки, негативное влияние ИПР на хроматографическую колонку за счет необратимой сорбции модификатора, а также сложность использования градиентного режима элюирования.

Ряд витаминов являются высокополярными соединениями. На их удерживание и разделение большое значение оказывает pH ПФ и вид сорбента. В кислой среде унифицируемой ПФ витамитты С, Bj, В6, РР имеют низкие значения коэффициента емкости и недостаточную степень разделения пар витаминов Bi и С; РР и Bj; РР и С на различных сорбентах. Приемлемую для количественного определения степень разделения гидрофильных витаминов удалось получить лишь на колонке «Discovery RP Amide С16» при кислом значении pH ПФ (рис. 17).

Изменяя значения pH от 4,0 до 6,9 в ПФ на основе фосфатного буфера было проведено изучение хроматографических характеристик разделения витаминов С, Bj, В6, РР, В5, В2 на сорбенте «Symmetry С18» (рис. 18). Оптимального разделения всей группы витаминов удалось добиться лишь при pH 6,7. Однако пик тиамина при этом обладает недостаточной симметрией и нестабильным временем удерживания. Для смещения времени удерживания тиамина из зоны элюирования пиридоксина и никотинамйда в ПФ добавлен ДДС в концентрации 0,001 М в нейтральной среде. В итоге реализована экспрессная методика анализа витаминов С, В5, В6,РР,В2.

mAU...... _ ........................mAU ____________________

260

200 ■■.: ' 150 100 53

0.0 2.5 6.0 7.5 10.0 ' min

Рис. 17. Хроматограммы смеси витаминов (I) и в таблетках «Гексавит» (II): В,-10 мкг/мл (1), РР - 75 мкг/мл (2), С - 350 мкг/мл (3), В6 - 10 мкг/мл (4), В2 - 10 мкг/мл (5). ПФ: А - 0,02М Na2HP04 - Н3Р04, рН 2.3, Б - ацетонитрил, 0,2% Б 5 мин, градиент Б 0,2->70% за 3 мин, 70% Б 6 мин. Discoveiy RP Amide С16. 35 °С

100

.........М-

.„..Jl .а/Л............

Кft 7«

Л)

4ft А

:у

mírt

*245

'290

Рис. 18. Хроматограммы смеси витаминов: витамин С - 300 мкг/мл (1), В5 - 30 мкг/мл (2), Вб- 10 мкг/мл (3), В,- 7 мкг/мл (4), РР -90 мкг/мл (5). ПФ А: 0,02М Na2HP04 - Н3РО4, рН 6,7 (I); рН 6,5 (И); рН 6,9 (III), Б: ацетонитрил - метанол (1:1 об.), 2% Б 10 мин, градиент Б 2—30% за 8 мин. Symmetry С18. 40 °С

При дальнейшем улучшении элюационных свойств тиамина и разделении сложной смеси витаминов обратили внимание на тот факт, что добавление модификаторов триэтиламина (ТЭА) и диэтиламина (ДЭА) в больших количествах в нейтральной среде аналогично действию ИПР. По этой причине предложен элю-ент на основе относительно высоких концентраций этих модификаторов (на уровне 1 %) при нейтральном значении рН ПФ (табл. 2). В результате улучшилась симметрия и воспроизводимость времен удерживания пика тиамина, изменилась селективность разделения для витамина В5, который элюируется после витаминов С; В(; В6; РР (рис. 19).

Способ характерй-зуется хорошими параметрами разделения и с успехом апробирован на ЛФ различных производителей. Его характеристики отличаются хорошей устойчивостью разделения и порядком элюирования наиболее проблемных гидрофильных витаминов на различных марках сорбентов (Symmetry С18, Luna С18 и др.).

Таблица 2. Режим градиентного элюирования при разделении витаминов с добавками модификаторов ПФ (скорость потока 1 мл/мин)

Элюент А: Элюент Элюент

Время, 1 % ДЭА, 1% Б: В:

мин ТЭА, Н3Р04 CH3CN, метанол,

рН=6,7; % % %

0-5 98 0 2

5-12 98— 90 0—1 2 — 9

12- 14 90— 84 1—5 9—11

14-19 84—70 5—1 5 11 — 15

19-25 70 15 15

25-35 98 0 2

niAU

mAU

1750 Ш 1250 1000 750 500 250

750

500

250

^206

О —

___...

5.0

10.0!

■15.0

21.0

min

5.0

. Ju 10.0

15.0

^—-2M

^267

25.0 min

Рис. 19. Хроматограмма смеси витаминов (I - 206 нм, II - 267 нм, мкг/мл): С — 1 (100), В,- 2 (100), Вб - 3 (75), РР- 4 (100), В5- 5 (250), Вс- 6 (50), Н -7 (100), В,2- 8 (100), В2- 9 (20), Р -10 (30). Discovery HS С18. Условия см. табл. 2.

Характеристики предложенного подхода подтверждены хорошими метрологическими и валидационными параметрами (табл. 3). Найденные условия позволяют проводить определение 10 водорастворимых витаминов в различных препаратах (табл. 4).

Таблица 3. Пригодность хроматографической системы для анализа витаминов в нейтральной среде (п=10, длина волны 206 нм)

Время Сим- Разделение Разделе- Фак- RSD

Вита- УДер- мет- (разреше- ние (се- тор RSD% %

мины жив., рия ние между лектив- УДер- ^уд S

мин пика пиками) ность) жив. пика

С 3,30 1,574 - 0,000 0,652 0,28 2,31

в, 7,79 1,059 26,53 4,447 2,899 0,74 0,65

в6 9,93 0,976 8,41 1,368 3,966 0,82 0,43

РР 11,22 1,294 5,38 1,164 4,614 0,29 0,77

В5 13,50 1,397 9,21 1,247 5,733 0,30 0,47

Вс 18,05 1,068 24,93 1,395 8,026 0,95 0,33

Н 18,50 0,991 3,86 1,030 8,250 0,89 0,86

В|2 20,51 1,041 15,01 1,130 9,256 0,96 0,95

в2 22,26 1,101 11,40 1,095 10,134 0,90 0,68

р 23,51 1,135 8,31 1,066 10,756 0,72 0,33

Таблица 4. Характеристики методики анализа гидрофильных витаминов в нейтральной ПФ на основе алкиламинов

Витамины Оптимальная длина волны, нм Диапазон мкг/мл Наклон Ь г2

С 300 150-500 5261 1653 0,9978

в5 206 5-50 12608 1911 0,9994

в6 324 5-100 53085 2032 0,9994

в, 267 5-100 29581 1057 0,9992

в2 445 5-100 45803 1412 0,9997

РР 262 25 - 250 33258 1921 0,9993

Р 362 10-150 31300 1749 0,9998

Хотя получено разделение для всех компонентов, витамины Вс, Н, В)2 не могут быть определены вместе с остальными, так как они содержатся в значительно меньших содержаниях в ЛФ и требуют иную подготовку пробы. Обычно эти витамины определяются трудоемкими и неточными микробиологическими методами. Было показано, что хроматографическое разделение витаминов Вс и Н возможно в ПФ на основе фосфатного буфера. Определение витамина В и реализовано в ПФ на основе алкиламинов в нейтральной среде за счет его селективного поглощения в длинноволновой области спектра при 361 нм совместно с определением остальных компонентов препарата «Мильгамма», несмотря на его низкое содержание витамина В12 в образце. Используя диодноматричное детектирование с реализована простая методика одновременного количественного определения жирорастворимых витаминов, несмотря на то что содержание витамина Д? и Е отличается в 3000 раз (рис. 20).

262,38

149,65

46,75 -!

mAU

Л.

ntin

Рис. 20. Хроматограммы витаминов в смеси (I) и таблетках, покрытых оболочкой «Компливит мама для беременных и кормящих женщин» (II): А - 90,8 мкг/мл (1), Д. -1 мкг/мл (2), Е - 3200 мкг/мл (3). ПФ А - ацетонитрил: метанол 50:50 по объему, Б - вода, градиент А 98-* 100% за 12 мин, 100% А 8 мин. ДВД 268 нм - 16 мин., 289 нм - 4 мин. Pecosphere С18. 22 °С

В главе 5 проведено изучение хроматографического разделения биологически-активных смесей на основе хлорнитропроизводных бензофуроксана. Эти смеси используются в ветеринарии как эффективные антибактериальные, противогрибковые и акарицидные средства. С целью дальнейшего создания ЛФ на их основе и оптимизации технологии производства исследовано хроматографиче-ское поведение близких по физико-химическим свойствам 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана (4,6-ДН-5,7-ДХБФО), 4-нитро-5,7-дихлорбензофуроксана (4-Н-5,7-ДХБФО) и 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана (5-Н-4,6-ДХБФО) в ОФ ВЭЖХ на различных гидрофобных сорбентах (рис. 21).

Рис. 21. Зависимость селективности разделения и разрешения пиков 4,6-ДН-5,7-ДХБФО и 5-Н-4,6-ДХБФО в ПФ 0,05% CF3COOH - ацетонитрил от марки сорбента

Наличие дополнительной электроноакцепторной нитрогруппы в случае 4,6-ДН-5,7-ДХБФО предполагает более сильные взаимодействия на сорбенте с привитыми нитрильными группами по сравнению с мононитрозамещенными производными. Как и ожидалось, это привело к увеличению времени удерживания и повышению эффективности разделения этих соединений в смеси (рис. 22).

Рис. 22. Хроматограмма 5-Н-4,6-ДХБФО - 100 мкг/мл (1) и 4,6-ДН-5,7-ДХБФО - 100 мкг/мл (2). Колонка: Spheri-5 CYANO. ПФ А: 0,05% CF3COOH; Б: ацетонитрил, А/Б 60/40. 25°С

В тоже время при использовании гидрофобной фазы с измененной селективностью Amide С16 удалось разделить целевые компоненты и возможные техно-

логические примеси, используя изократический режим элюирования с приемлемым для количественного определения временем анализа (рис. 23). Так, определение примеси 1,3-динитро-2,4,6-трихлорбензола (ДНТХБ) позволяет оценивать чистоту получаемых продуктов и контролировать протекание процесса нитрования. Наличие 3,5-дихлор-2,4,6-тринитро-1-азидбензола (ДХТНАБ) в конечных продуктах указывает на нарушение стадии термоциклизации полинитродихлор-фенилазидов, что приводит к снижению выхода хлорнитропроизводных бензофу-роксанов.

Данные по пригодности хроматографкческой системы для определения производных хлорнитробензофуроксанов приведены в таблице 5. Характеристики методики ВЭЖХ определения компонентов синтеза производных бензофурокса-нов приведены в таблице 6. При использовании разработанной методики возможно определение компонентов ЛФ хлорнитозамещенных бензофуроксана на основе физического смешивания компонентов и на основе смеси, полученной в результате синтеза (табл. 7).

409

100 О

'245

А207

Рис. 23. Хроматограмма разделения 5-Н-4,6-ДХБФО (1), 4,6-ДН-5,7-ДХБФО (2), ДНТХБ (3), ДХТНАБ (4). Концентрация компонентов 40 мкг/мл. Discovery RP Amide CI6. X 245 нм (I), 207 нм (II). ПФ А: 0,05 % Н3Р04; Б: ацетонитрил, В: метанол, А: Б: В = 51:34:15. 50°С

Таблица 5. Пригодность хроматографических систем анализа производных бензофуроксанов (п=10, длина волны 245 нм)

Соединение МИН Симметрия пика Число т.т Раз-ре-ше-ние Коэфи-циент селек- Фактор УДер RSD %t вы- RSD % с

тивности жи-вания хода пика пика

5-Н-4,6-ДХБФО 12,5 1,08 10866 - 0,00 5,24 0,29 0,33

4,6-ДН-5,7-ДХБФО 13,3 1,11 10966 1,71 1,08 5,66 0,27 0,35

ДНТХБ 20,6 0,91 5148 8,83 1,65 9,32 0,34 0,45

ДХТНАБ 23,1 0,96 8696 2,28 из 10,5 0,37 0,42

Таблица 6. Аналитические характеристики методики ВЭЖХ анализа производных бензофуроксанов

Компонент нм Диапазон, мкг/мл Наклон Ь Коэф. корр. ПрД, мкг/мл ПрО, мкг/мл

4,6-ДН-5,7-ДХБФО 400 2-200 29316 1525 0,9999 0,05 0,16

5-Н-4,6-ДХБФО 400 2- 100 23122 1213 0,9999 0,04 0,12

ДНТХБ 245 0,5-160 17918 506 0,9998 0,17 0,56

ДХТНАБ 245 0,5-160 49380 -740 0,9998 0,05 0,16

ДНТХБ 207 0,5-160 277401 5026 0,9999 0,01 0,03

ДХТНАБ 207 0,5 -160 95403 -3274 0,9999 0,03 0,10

Таблица 7. Результаты хроматографического определения ЛФ на основе хлорнитропроизводных бензофуроксана (п=4, Р=0,95)

Состав смеси (масс. %) Найдено компонента, % &

5-Н-4,6-ДХБФО (30,6) 4,6-ДН-5,7-ДХБФО (50,2) 30,3±0,7 50,4±1,1 0,04 0,05

5-Н-4,6-ДХБФО (60,5) 4,6-ДН-5,7-ДХБФО (30,2) 60,4±0,6 30,1 ±0,9 0,04 0,06

5-Н-4.6-ДХБФО (80,7) 4,6-ДН-5,7-ДХБФО (15,4) 80,2±0,9 15,2±0,07 0,04 0,04

5-Н-4,6-ДХБФО (0,28) 4,6-ДН-5,7-ДХБФО (0,20) ПЭГ400 (79,7), ПЭГ 1500 (16,9), ДМСО (2,8) 0,26±0,02 0,19±0,02 0,05 0,05

5-Н-4,6-ДХБФО (0,25) 4,6-ДН-5,7-ДХБФО (0,2) Неонол (1,5), Вазелиновое масло (97,5) 0,24±0,02 0,22±0,03 0,06 0,06

5-Н-4,6-ДХБФО (0,5) Моноалкилфениловые эфиры полиэтиленгликоля (1,4) Дистиллированная вода (98) 0,52±0,05 0,05

Таким образом, результаты диссертационной работы демонстрируют высокую эффективность использования разработанного унифицированного подхода к определению широкого ряда лекарственных средств методом ВЭЖХ, что позволяет расширить возможности их контроля качества и обеспечить значительную экономичность фармацевтического анализа.

выводы

1. Предложены подходы к оптимизации хроматографического разделения ряда метаболиков, химиотерапевтических, анальтезирующих и противовоспалительных лекарственных средств в условиях обращенно-фазной ВЭЖХ на основе применения фосфатного буфера (0,02 М; рН 2,5), растворов трифторуксусной кислоты (0,05%), смеси алкиламинов и фосфорной кислоты (1%; рН 6,7), смеси додецилсульфата натрия (0,01 М) и фосфатного буфера (0,01 М; рН 2,3) как унифицированных подвижных фаз при разделении гидрофильных соединений с ио-ногенными кислотными и основными функциональными группами.

2. Для разделения водо- и жирорастворимых витаминов, антибиотиков, производных карбоновых кислот и фенолов, гетероциклических аминов, флавонои-дов и хлорнитрозамещенных бензофуроксанов следует использовать смеси унифицируемых элюентов с ацетонитрилом и метанолом. Выявлено влияние состава подвижных фаз, их рН, содержания в них неводного компонента, режимов изо-кратического и градиентного элюирования на разделение лекарственных веществ, характеризующееся высокой селективностью (более 1,2), разделяющей способностью (более 2,2), эффективностью (более 4500 теоретических тарелок) и симметрией пика (менее 1,18).

3. Впервые установлены условия разделения и количественного определения 10 водорастворимых витаминов в элюенте на основе смеси 1 % раствора диэтила-мина, 1% раствора триэтиламина и фосфорной кислоты (рН 6,7) на сорбенте с фазой С18 при высоких коэффициентах удерживания витаминов В|, В6, РР (2,89; 3,97; 4,61 соответственно) без традиционного применения ион-парных реагентов. При этом хроматографическая система характеризуется хорошей симметрией пиков (менее 1,2), высокой селективностью (более 1,1) и разрешением (более 3,8 для всех соединений) при времени анализа 25 мин.

4. Одновременное ВЭЖХ определение парацетамола, аскорбиновой и ацетилсалициловой кислот, анальгина, кофеина, дибазола, папаверина, 4-аминофенола с диодно-матричным и флуоресцентным детектированием возможно в сложных по составу лекарственных формах андипала, цитрамона, антигриппина, антиангина и цитрапака.

5. Разработаны подходы по количественному одновременному определению лекарственных веществ, нормируемых примесей и консервантов в смесях на основе винпоцетина, рибоксина, трамадола, а также новых гелях напроксена и те-ноксикама с ПрО компонентов до 20 нг/мл при прямой инжекции пробы.

6. Предложена схема проведения ВЭЖХ анализа с нитрильными и амидными фазами сложных биологически активных смесей на основе близких по физико-химическим свойствам 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана, 4-нитро-5,7-дихлорбензофуроксана и 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана, а также исходных и промежуточных компонентов их синтеза с ПрО до 10 нг/мл. Разработанная методика использована для контроля лекарственных форм, препаратов «Димиксан» и

«Тримиксан», а также постадийного контроля процессов нитрования и термоциклизации при их получении.

7. Предложена унифицированная методика идентификациии и определения цефазолина, цефатоксима, ципрофлоксацина, амоксициллина, натриевых солей ампициллина и бензилпенициллина, пирацетама, рибоксина, бифоназола, флуко-назола, тербинафина, диклофенака-натрия, трамадола, позволяющая разделять все соединения в условиях ВЭЖХ на колонке с сорбентом С18 с двухкомпонент-ной подвижной фазой (фосфатный буфер, 0,02 М; pH 2,5 - ацетонитрил), что существенно повышает экономичность всего анализа.

Публикации в изданиях, рекомендованных ВАК для размещения материалов диссертаций:

1. Салахов, И.А. Определение флавоноидов боярышника в лекарственных формах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов // Вестник Казанского технологического университета. - 2007. -№6.-С. 34-36,

2. Гармонов, С.Ю. Количественное определение компонентов антигриппина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / С.Ю. Гармонов, Салахов И. А. // Хим.-фарм. журн. - 2009. - Т. 43, № 11. - С. 56-60.

3. Салахов, И.Д. Контроль качества лекарственных форм на основе боярышника методом жидкостной хроматографии высокого давления / И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов, И.Е. Зыкова // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2009. - №4. - С. 61-63.

4. Салахов, И.А. Контроль качества лекарственного препарата антигриппина методом градиентной ВЭЖХ / И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов, Р.Н. Исмаилова, Н.Г. Николаева, С.М. Горюнова // Вестник Казанского технологического университета. - 2009. - №4. - С. 49-53.

5. Эль-Али, Ф.А. Контроле качества лекарственной формы напроксена наружного применения / Ф.А. Эль-Али,, Н.М. Насыбуллина, И.А. Салахов // Фармация. - 2009. -- №1. - С. 6- 8.

6. Эль-Али, Ф.А. Определение теноксикама в лекарственной форме для наружного применения / Ф.А. Эль-Али* Н.М. Насыбуллина, И.А. Салахов // Фармация. -2009. -№3. - С. 20-23.

Материалы конференций:

1. Гармонов, С.Ю. Аналитические методы в биофармацевтических исследованиях и контроле перекрестного загрязнения химико-фармацевтических производств / С.Ю. Гармонов, Г.Р. Нурисламова, A.B. Яковлева, И.А. Салахов, Н.С. Шитова // Тезисы докл. XVIII Менделеевского съезда по общей и прикладной химии. - М., 2007. - Т.4. - С. 115. > /

2. Салахов, И.А.' Расширение возможностей койТроля качества лекарственных препаратов при использовании систем градиентной ВЭЖХ/ И.А. Салахов,

С.Ю. Гармонов П Тезисы докл. III Всероссийской конференции «Аналитические приборы». - С.-Петербург, 2008. - С. 31.

3. Салахов, И.А. Определение лекарственных веществ и посторонних примесей в лекарственных формах методом градиентной ВЭЖХ / И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов // Тезисы докл. Всероссийской конференции «Химический анализ». -М., 2008.-С. 121-122.

4. Салахов, И.А. Повышение эффективности обеспечения безопасности лекарственных средств на этапе контроля их качества / И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов // Тезисы докладов XV Рос. нац. конгресса "Человек и лекарство", - М., 2008. -С. 561-562.

5. Салахов, И.А. Расширение возможностей ВЭЖХ в контроле качества лекарственных средств / И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов // Материалы II Международного форума «Аналитика и аналитики». - Воронеж, 2008. - Т. 2. - С. 528.

6. Салахов, И.А. Контроль качества лекарственных средств: расширение возможностей при использовании градиентной ВЭЖХ / И.А. Салахов, Г.Р. Нурисла-мова, С.Ю. Гармонов // Тезисы докл. Всероссийской конференции «Теория и практика хроматографии. Хроматография и нанотехнологии». - Самара, 2009. - С.

7. Гармонов, С.Ю. Возможности фармацевтического анализа при использовании градиентной ВЭЖХ / С.Ю. Гармонов, И.А. Салахов, Г.Р. Нурисламова, JI.M. Юсупова // Тезисы докл. III Всероссийской конференции с межд. участием "Аналитика России". - Краснодар, 2009. - С. 62.

8. Гармонов, С.Ю. Оптимизация контроля лекарственных средств и химико-фармацевтического производства при использовании ВЭЖХ / С.Ю. Гармонов, И.А. Салахов, Г.Р. Нурисламова // Тезисы докл. I Всероссийской конференции "Современные методы химико-аналитического контроля фармацевтической продукции". - Москва, 2009. - С. 54-55.

9. Гармонов, С.Ю. Определение витаминов в лекарственных средствах и биологически активных добавках методом ВЭЖХ / С.Ю. Гармонов, И.А. Салахов, Г.Р. Нурисламова // Тезисы докл. 65-ой Всероссийской конференции по фармации и фармакологии. - Пятигорск, 2010. - С. 78.

190.

Соискатель

Салахов И.А.

Отпечатано в ООО «Печатный двор». 2 Казань, ул. Журналистов, 1/16, оф.207

Тел: 272-74-59,541-76-41, 541-76-51. Лицензия ЦЦ №7-0215 от 01.11.2001 г. Выдана Поволжским межрегиональным территориалъпымуправлспием МПТРРФ. Подписано в печать 15.05.2010г. Печл. 1,4 Заказ № К-6Ш. Тираж 100 экз. Формат 6Ш41/16. Бумага офсетная. Печать - ризография.

Оглавление диссертации Салахов, Ильгиз Анясович :: 2010 :: Казань

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

ГЛАВА I. ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

В АНАЛИЗЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ (обзор литературы).

1Л. Возможности ВЭЖХ в фармацевтическом анализе.

1.2. Обращенно-фазная ВЭЖХ в анализе лекарственных средств.

1.3. Объекты фармацевтического анализа в ВЭЖХ, их пробоподготовка и особенности контроля.

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2.1. Оборудование и аппаратура.

2.2. Материалы, реактивы и объекты анализа.

2.2.1 Хроматографические материалы.

2.2.2 Химические реактивы.

2.2.3 Объекты анализа.

2.3. Методы и техника эксперимента.

2.3.1. Условия хроматографического определения.

2.3.2. Пробоподготовка.

ГЛАВА 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ, АНАЛЬГЕЗИРУЮЩИХ И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ

ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ МЕТОДОМ ВЭЖХ.

3.1. Выбор унифицируемых условий определения лекарственных веществ с химиотерапевтической, анальгезирующей и противовоспалительной активностью.

3.2. Возможности одновременного количественного ВЭЖХ определения действующих веществ и примесей в многокомпонентных лекарственных средствах.

3.3. Возможности использования додецилсульфата натрия в качестве ион-парного реагента при определении

4-аминофенола в различных лекарственных препаратах.

3.4. Одновременное количественное определение действующих веществ и консервантов в гелях на основе напроксена и теноксикама.

3.5. ВЭЖХ анализ различных лекарственных средств на основе использования унифицированного подхода к выбору подвижной фазы с оценкой ключевых валидационных параметров.

ГЛАВА 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНОВ В МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ И СМЕСЯХ МЕТОДОМ ВЭЖХ.

4.1. Выбор условий детектирования, неподвижных фаз i и оптимизация пробоподготовки в фармацевтическом анализе витаминов.

4.2. Изучение условий разделения витаминов и их определение при использовании подвижных фаз в кислой среде.

4.3. Изучение условий разделения витаминов и их определение при использовании подвижных фаз в нейтральных средах.

4.4. Использование разработанных подходов для ВЭЖХ определения фолиевой кислоты, биотина, цианокобаламина и состава сложнокомпонентных препаратов на основе жиро- и водорастворимых витаминов.

ГЛАВА 5. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СМЕСЕЙ НА ОСНОВЕ ХЛОРНИТРОПРОИЗВОДНЫХ БЕНЗОФУРОКСАНА.

5.1. Выбор условий детектирования, подвижной и неподвижной фазы при ВЭЖХ анализе хлорнитробензофуроксанов.

5.2. Хроматографический анализ объектов, содержащих в своем составе хлорнитропроизводные бензофуроксана.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Салахов, Ильгиз Анясович, автореферат

ВЭЖХ как универсальный и высокочувствительный метод анализа, которому в ряде случаев нет альтернативы, позволяет одновременно осуществлять контроль за содержанием нескольких ЛВ, вспомогательных компонентов и возможных токсичных примесей в многокомпонентных ЛС, отличаясь при этом высокой точностью и воспроизводимостью.

Один из возможных путей решения этой проблемы - разработка максимально унифицированных, экономичных и экспрессных методик подготовки пробы и хроматографических процедур. Реализация такого подхода, очевидно, позволит снизить расходы на проведение контроля и более широко внедрить ВЭЖХ в практику фармацевтического анализа. Это направление расширения возможностей контроля качества JIC при использовании метода ВЭЖХ, безусловно, представляется нам важным и актуальным.

Диссертационная работа выполнялась при поддержке Гранта Президента Российской Федерации (МД-2523.2008.3).

Научным консультантом по работе являлась к.х.н. Ахметова JI.T.

Цель работы состояла в создании комплекса унифицированных способов контроля качества метаболиков, химиотерапевтических, анальгези-рующих, противовоспалительных лекарственных средств в многокомпонентных лекарственных и технологических смесях с использованием обращенно-фазной ВЭЖХ.

Для достижения цели решались следующие задачи:

- изучение условий хроматографического разделения и режимов градиентного элюирования, расчет и оценка параметров пригодности хроматогра-фической системы и обоснование путей унификации методик определения ряда JIB химиотерапевтического, анальгезирующего, противовоспалительного и метаболического действия;

- выявление факторов, обеспечивающих чувствительность и избирательность определений JIB и компонентов их синтеза (антибиотиков, водо- и жирорастворимых витаминов, производных карбоновых кислот и фенолов, хлорнитрозамещенных бензофуроксанов), выбор рабочих условий детектирования исследуемых веществ в условиях обращено-фазной ВЭЖХ при изо-кратическом и градиентом режиме элюирования;

- оценка влияния компонентов анализируемой матрицы на регистрируемый в условиях ВЭЖХ аналитический сигнал;

Научная новизна:

- найдены и обоснованы рабочие условия высокочувствительного и избирательного определения смеси водорастворимых витаминов С, Bl5 В2, В5, В6, В9, Вц5 В12, Р, РР, Н и жирорастворимых витаминов (А, Д2, Е), а также ви-тексина-2-рамнозида, рутина и гиперозида при использовании градиентного элюирования, подобраны условия пробоподготовки таблетированных и жидких ЛФ на их основе при высокопроизводительных аналитических определениях ЛВ;

- разработаны подходы по установлению подлинности, количественному одновременному определению ЛВ и примесей в смесях на основе на-проксена и теноксикама методом ВЭЖХ и обосновано их использование для контроля качества новых гелеобразных ЛФ;

- предложена унифицированная ВЭЖХ методика для идентификации и определения цефазолина, цефатоксима, ципрофлоксацина, амоксициллина, натриевых солей ампициллина и бензилпенициллина, пирацетама, рибоксина, бифоназола, флуконазола, тербинафина, диклофенака-натрия и трамадола на колонке с обращенно-фазовым сорбентом типа "С 18" при использовании двухкомпонентной ПФ, что существенно повышает экономичность всего метода.

Практическая значимость. Разработаны экспрессные и чувствительные методики одновременного и избирательного ВЭЖХ-определения ряда ЛВ химиотерапевтического, противовоспалительного, анальгезирующего действия, а также регуляторов обменных процессов в реакционных смесях, субстанциях и ЛФ.

На защиту выносится:

- схема унифицируемого подхода и оптимизация хроматографического разделения JIB путем изменения рН ПФ, добавления модификаторов алкила-минов и додецилсульфата натрия;

- результаты изучения влияния состава и рН ПФ, условий градиентного элюирования, данных по оценке пригодности предложенных хроматографи-ческих систем и свойств определяемого вещества на выбор условий избирательного и чувствительного детектирования JIB и компонентов их синтеза;

- обоснование и подбор рабочих условий высокочувствительного и избирательного определения парацетамола, аскорбиновой и ацетилсалициловой кислот, анальгина, кофеина, дибазола, папаверина, витаминов С, Вь В2, В5, В6, Вц, В12, РР, А, Дг, Е, витексина-2-рамнозида, рутина, гиперозида, а таюке нормируемых примесей с использованием спектрофотометрического и спектрофлуориметрического детектрирования, новых способов пробоподго-товки лекарственных форм на основе этих JIB для высокопроизводительного определения;

- методики определения цефазолина, цефатоксима, ципрофлоксацина, амоксициллина, натриевых солей ампициллина и бензилпенициллина, пир-ацетама, рибоксина, бифоназола, флуконазола, тербинафина, диклофенака-натрия, трамодала в субстанциях и лекарственных формах с применением ВЭЖХ.

Апробация работы. Результаты работы и основные положения диссертации были доложены и обсуждены на XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 2007), XII Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2007), XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008), III Всероссийской конференции «Аналитические приборы» (С.Петербург, 2008), Всероссийской конференции «Химический -анализ» (Москва, 2008), II Международном форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж, 2008), Всероссийской конференции «Теория и практика хроматографии. Хроматография и нанотехнологии» (Самара, 2009); III Всероссийской конференции «Аналитика России» (Краснодар, 2009); I Всероссийской конференции «Современные методы химико-аналитического контроля фармацевтической продукции» (Москва, 2009), 65-ой Всероссийской конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2010).

Публикации: по материалам диссертации опубликовано 6 статей и 9 тезисов докладов.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов, заключения, указателя литературы, включающего 224 источников. Работа изложена на 173 страницах машинописного текста, иллюстрирована 68 рисунками, 74 таблицами.

Заключение диссертационного исследования на тему "Унифицированные подходы к анализу метаболиков, химиотерапевтических, анальгезирующих и противовоспалительных лекарственных средств методом ВЭЖХ"

ВЫВОДЫ

1. Предложены подходы к оптимизации хроматографического разделения ряда метаболиков, химиотерапевтических, анальгезирующих, противовоспалительных лекарственных средств в условиях обращенно-фазной ВЭЖХ на основе применения фосфатного буфера (0,02 М; рН 2,5), растворов трифторуксусной кислоты (0,05%), смеси алкиламинов и фосфорной кислоты (1%; рН 6,7), смеси додецилсульфата натрия (0,01 М) и фосфатного буфера (0,01 М; рН 2,3) как унифицированных подвижных фаз при разделении гидрофильных соединений с ионогенными кислотными и основными функциональными группами.

2. Для разделения водо- и жирорастворимых витаминов, антибиотиков, производных карбоновых кислот и фенолов, гетероциклических аминов, флавоноидов и хлорнитрозамещенных бензофуроксанов следует использовать смеси унифицируемых элюентов с ацетонитрилом и метанолом. Выявлено влияние состава подвижных фаз, их рН, содержания в них неврдного компонента, режимов изократического и градиентного элюирования на разделение лекарственных веществ, характеризующееся высокой селективностью (более 1,2), разделяющей способностью (более 2,2), эффективностью (более 4500 теоретических тарелок) и симметрией пика (менее 1,18).

3. Впервые установлены условия разделения и количественного определения 10 водорастворимых витаминов в элюенте на основе смеси 1% раствора диэтиламина, 1% раствора триэтиламина и фосфорной кислоты (рН 6,7) на сорбенте с фазой С18 при высоких коэффициентах удерживания витаминов Вь В6, РР (2,89; 3,97; 4,61 соответственно) без традиционного применения ион-парных реагентов. При этом хроматографическая система характеризуется хорошей симметрией пиков (менее 1,2), высокой селективностью (более 1,1) и разрешением (более 3,8 для всех соединений) при времени анализа 25 мин.

4. Одновременное ВЭЖХ определение парацетамола, аскорбиновой и ацетилсалициловой кислот, анальгина, кофеина, дибазола, папаверина, 4аминофенола с диодно-матричным и флуоресцентным детектированием возможно в сложных по составу лекарственных формах андипала, цитрамона, антигриппина, антиангина и цитрапака.

5. Разработаны подходы по количественному одновременному определению лекарственных веществ, нормируемых примесей и консервантов в смесях на основе винпоцетина, рибоксина, трамадола, а также новых гелях напроксена и теноксикама с ПрО компонентов до 20 нг/мл при прямой ин-жекции пробы.

7. Предложена унифицированная методика идентификациии и определения цефазолина, цефатоксима, ципрофлоксацина, амоксициллина, натриевых солей ампициллина и бензилпенициллина, пирацетама, рибоксина, би-фоназола, флуконазола, тербинафина, диклофенака-натрия, трамадола, позволяющая разделять все соединения в условиях ВЭЖХ на колонке с сорбентом С18 с двухкомпонентной подвижной фазой (фосфатный буфер, 0,02 М; рН 2,5 - ацетонитрил), что существенно повышает экономичность всего анализа.

150

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Салахов, Ильгиз Анясович

1. Ettre, L. S. The Separation Technique of the 20th Century / L. S. Ettre, // Chromatographic 2000. - V.51. - No. 1/2. - P. 7-17.

2. The United States Pharmacopeia (USP27-NF22). 2004.

3. British Pharmacopoeia .2007

4. Государственная фармакопея СССР, выпуск 2, 11-е издание, МЗ СССР, Медицина, Москва (1989), с. 400.

5. Japanese Pharmacopoeia. Fourteenth Edition. 2001

6. European Pharmacopoeia. Fifth edition.

7. Шатц, B.JI. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии / В.Л. Шатц,

8. В. Сахартова-Рига: Зинатне, 1988.-390 с.

9. Карцова, А.А. Жидкостная хроматография в медицине / А.А. Карцова // Соросовский образовательный журнал 2000. - №11. - С. 35- 40.

10. Wilson, I.D. Handbook of analytical separations. Bioanalytical separations /

11. D. Wilson, R.G Smith // Amsterdam. Elsevier scince 2003- 433 p.

12. Kazakevich, Y. Hplc for pharmaceutical scientists / Y. Kazakevich, R. Lobrutto // New Jersey. John Wiley 2007. - 1135 p.

13. Guiochon, G. Fundamentals of Non-linear Chromatography / S.G. Shirazi, A.M. Katti // New York. Academic Press 1994.-701 p.

14. Lode, F. G. Refining the scale-up of chromatographic separations / A. Rosenfeld, Q. S., Yuan, T. W. Root, E. N Lightfoot. // Journal of Chromatography A. 1998. - No.796. - P. 3-14.

15. Wellings, A.D. A practical hahdbook of preparative HPLC / A.D. Wellings // Amsterdam. Elsevier scince 2006. - 193 p.

16. Бидлингмейер, Б. Препаративная жидкостная хроматография / Б. Бидлингмейер. М.:- Мир, - 1990. - 360 с.

17. Lough, W.J. High Performance liquid chromatography. Fundamental principles and practice / W.J. Lough, J.W. Wainer // London. Blackie academic ad professional. -1996. 282 p.

18. Ahuja, S. Handbooh of pharmaceutical analysis by HPLC. / S. Ahuja, M.W. Dong // Amsterdam. Elsevier scince. 2005 - 679 p.

19. Дягтерев, E.B. Анализ лекарственных средств в исследованиях, производстве и контроле качества / Е.В. Дягтерев // Российский Химический Журнал. 2002. Т.46, № 4. - С. 43-51

20. Староверов С.М. Хроматография в отечественной промышленности./ С.М. Староверов // Российский Химический Журнал. 2003.-Т.47, № 1. -С. 111-118

21. Harvey, D. Modern Analytical chemistry/ D. Harvey// Boston. The McGraw-Hill Companies, Inc 2000. - 816 p.

22. Lunn, G. HPLC methods for recently approved pharmaceuticals / G. Lunn.// New Jersey. John Wiley & Sons, Inc., Hoboken 2005. - 717 p.

23. Сакодынский, К.И. Аналитическая хроматография / К.И. Сакодынский. М. : М. Химия, -1993.- 463 с.

24. Яшин, Я.И., Яшин А.Я. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Состояние и перспективы / Я.И. Яшин, А.Я. Яшин // Российский Химический Журнал. 2003. Т.47, № 1. - С. 111-118

25. Рудаков, О.Б. Спутник хроматографиста / Рудаков, О.Б. Воронеж: Водолей, - 2004.- 527 с.

26. Киркленд, Д. Современное состояние жидкостной хроматографии / Д. Киркленд М.: Мир, -1974. - 325 с

27. Микеш, О., Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам / О. Микеш // Под ред. О. Микеша (в 2-х томах). М.: Мир, 1982.-783 с.

28. Даванков ,В.А. Лигандообменная хроматография. /В.А. Даванков, Дж. Навратил, X. Уолтон. -М.: Мир, 1989. 294 с.

29. Provder, Т. Size Exclusion Chromatography (GPC)/ Т. Provder// Washington. American Chemical Society. ACS symposium series; 138 1980. - 829 p

30. Кельнер, P., Аналитическая химия. Проблемы и подходы. / Р. Кельнер, Ж.М. Мерме, М. Отто, М. Видмер. М.: Мир, 2004. - Т.1, - 608 с.

31. Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии / А. Хеншен. М.: Мир, 1988. 688 с.

32. Ковальчук, Т.В. Хроматографические свойства октадецильных фаз высокой плотности,закрепленных на особо чистом силикагеле. / Т.В. Ковальчук, У. Левин, В.Н. Зайцев, В. Енгевальд. / Ж. аналит. химии. -1999. Т.54 - №2 - С. 129

33. Quiming, N.S. Chromatographic Behavior of Uric Acid and Methyl Uric Acids on a Diol Column in HILIC / N.S. Quiming, N. L. Denola, Y. Saito, A. P. Catabay, К Jinno // Chromatographia. 2008. - No39(7/8). - P. 507-515.

34. Wilson, I. Handbook of analytical separation/ I.D. Wilson, R.M. Smith //Amsterdam. Elsevier scince B.V. 2003. - 425 p.

35. Naidong, W. Bioanalytical liquid chromatography tandem mass spectrometry methods on underivatized silica columns with aqueous/organic mobile phases/ W. Naidong //J. Chromatogr. B. 2003. - Vol. 796. - P. 209-224

36. Dell Aversano, С. Hydrophilic interaction liquid chromatography-mass spectrometry for the analysis of paralytic shellfish poisoning (PSP) toxins / C. Dell Aversano, P.Hess, M.A. Quilliam / J. Chromatogr. A. 2005. - Vol.1081. -P. 190-201

37. Schilichtherle-Cerny ,H. Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography Coupled to Electrospray Mass Spectrometry of Small Polar Compounds in Food Analysis . / H. Schilichtherle-Cerny, M. Affloter, C. Cerny / Anal. Chem. 2003. - Vol.75. - P.2349-2354

38. Яшин, Я.И. Наукометрическое исследование состояния и тенденции развития методов жидкостной хроматографии и аппаратуры / Я.И. Яшин,

39. A.Я. Яшин //Ж. аналит. химии.- 1999. Т.54, №6. - С.593-602

40. Meyer,E. Simultaneous determination of endogenous retinoic acid isomers and retinol in human plasma by isocratic normal-phase HPLC with ultraviolet detection / E.Meyer, W.E.Lambert, A.R. De Leenheer // Clin. Chem. 1994. -No 40.-P. 48-51.

41. Kautsky, M.P. Steroid Analysis by HPLC / M.P. Kautsky // New York. Marcel Dekker.- 1981.-378 p.

42. Snyder, L.R. Introduction to Modern Liquid Chromatography / L.R.Snyder, J.J. Kirkland// New York. John Wiley & Sons, Inc. 1979. - 863 p.

43. Dong, M.V. Modern HPLC for Practicing Scientists/ M.V. Dong// New York. John Wiley & Sons, Inc. 2006. - 304 p.

44. Сакодынский, К.И. Аналитическая хроматография./ К.И. Сакодынский,

45. B.В. Бражников, С.А. Волков, В.Ю. Зельвенский, Э.С. Ганкина, В.Д. Шатц. М.: Химия, 1993. - 464 с.

46. Aboul-Enein, H.Y. Rapid Determination of Sildenafil Citrate in Pharmaceutical Preparations Using Monolithic Silica HPLC Column / H.Y.

47. Сакодынский, К.И. Аналитическая хроматография / К.И. Сакодынский. В.В. Бражников, С.А. Волков, В.Ю. Зельвенский, Э.С. Ганкина, В.Д. Шатц. М.: М. Химия, -1993 464 с.

48. Ariens, Е. Stereochemistry: A source of problems in medicinal chemistry/ E. Ariens // Medicinal Research Reviews. 1986. - Vol.8. - No. 4. - P. 451.

49. Blaschke, G. Chromatographic resolutions : XIV. Optical resolution of the racemic anticancer drug ifosfamide and other chiral oxazaphosphorines / G. Blaschke, J. Maibaum // J. Chromatogr. 1986. -Vol.366. - P. 329

50. Okamoto, Y. Resolution of Enantiomers by HPLC on Optically Active Poly(triphenylmethyl Methacrylate) / Y. Okamoto, K. Hatada // J. Lick. Chromatogr. 1986. - Vol.9. - P. 369.

51. Allenmark, S. Optical Resolution by Liquid Chromatography on Immobilized Bovine Serum Albumin / S. Allenmark / J. Liq. Chromatogr. 1986. - Vol.9. -P. 425

52. Peter, M. Comparison of isothiocyanate chiral derivatizing reagents for high-performance liquid chromatography / M. Peter, F. Fulop / Chromatographia. -2002. Vol.56. - No.9/10. - P. 631-636

53. Oliver, R.W.A. HPLC of macromolecules/ R.W.A. Oliver// Oxford. IRL Press. -1989.-236 p.

54. Young, C. An Efficient Approach to Column Selection in HPLC Method Development / C. S. Young, R. J. Weigand// LC GC NORTH AMERICA. -2002. -Vol.20. No.5. - P.464-473.

55. Przybyclel, M. Phase Collapse in Reversed-Phase LC. / M. Przybyclel, R.E. Majors // LC GC Europe. 2002. - Vol.15. - No.10. - P. 2-5.

56. Nagae, N. The Retention Behavior of Reversed-Phase HPLC Columns with 100% Aqueous Mobile Phase. / N. Nagae, T. Enami, S. Doshi // LC GC North America. 2002. - Vol. 20. - No. 10. - P. 964-972.

57. Nondek, L. Retention of pyridine and 2,6-dimethylpyridine on silanized silica : A simple test on residual silanols? / L. Nondek, B. Buszevski, D. Berek // J. Chromatogr. 1986. - Vol.360. - P. 243.

58. Nawrocki, J Influence of silica surface chemistry and structure on the properties, structure and coverage of alkyl-bonded phases for high-performance liquid chromatography / J. Nawrocki, B. Buszevski // J. Chromatogr. 1988. - Vol.449. - P. 1.

59. Pirkle, V.H. The influence of end-capping on the enantioselectivity of a chiral phase . / V.H. Pirkle, R.S. Readnour //Chromatographia. 1991. - Vol.31 - P. 129.

60. Fairbank R.W.P. Role of surface-adsorbed water in the horizontal polymerization of trichlorosilanes/ R.W.P. Fairbank, M.J. Wirth // J. Chromatogr. A. 1999. V. 830. P. 285-291.

61. Wirth, M.J. Horizontal polymerization of mixed trifunctional silanes on silica. 2. Application to chromatographic silica gel / M.J.Wirth, H. Fatunmbi // Anal. Chem. 1993. - Vol.65. - P. 822

62. Wirth, M.J. H. Horizontal polymerization of mixed trifunctional silanes on silica: a potential chromatographic stationary phase / M.J. Wirth, H. Fatumnbi // Anal. Chem. 1992. - Vol.64. - P. 2783

63. Lochmuller C.H. Ion-Pair Chromatography and Related Techniques/ C.H. Lochmuller// Boca Raton. CRC Press 2010. - 201 p.

64. Majors, R. E. Columns for Reversed-Phase LC Separations in Highly Aqueous Mobile Phases / R. E. Majors, M. Przybyciel// LCGC North America. 2002. -Vol.20. -No.7. -P.584-593.

65. Исии, Д. Введение в микромасштабную высокоэффективную жидкостную хроматографию. / Д. Исии // М., Мир, 1991. - 240 с.

66. Рудаков, О.Б. Физико-химические системы сорбат-сорбент-элюент в жидкостной хроматографии. / О.Б. Рудаков, В.Ф. Селеменовю. -Воронеж, 2003.-240 с.

67. Sadek, Р.С. Troubleshooting HPLC System: A Bench Manual/ P.C. Sadek // New York. John Wiley & Sons, Inc. 1999. - 306 p.

68. Ahuja, S. Chromatographic solutions to pharmaceutical analytical problems. / S. Ahuja // Chromatographia. 1992. - Vol. - 34. - No.5(8). - P.411-416.

69. Liu Y., Yoo S. D., Fang L., Jin X., Li L., Ren Y., Yao C., Li T.// Chromatographia. 2009. Published online: 18 June 2009.

70. Boichenko, A. P. Micellar liquid chromatography (Review). Part 1. Fundamentals, retention models and optimization of separation/ A. P. Boichenko, L. P. Loginova, A. U. Kulikov// Методы и объекты химического анализа 2007, - Т. 2, № 2, - С. 92-116.

71. Басова, Е.М. Мицеллярная жидкостная хроматография. / Е.М. Басова,

72. B.М. Иванов, О.А. Шпигун. М.: Успехи химии, 1999. - Т.68, №12.1. C.1083-1101.

73. Armstrong, D. W. Partitioning behavior of solutes eluted with micellar mobile phases in liquid chromatography/ D. W. Armstrong, F. Nome // Anal. Chem. -1981.-Vol.53.-P. 1662-1666

74. Arunyanart, M. Model for micellar effects on liquid chromatography capacity factors and for determination of micelle-solute equilibrium constants // M. Arunyanart, L. J. ClineLove // Anal. Chem. 1984. - Vol.56. - P. 1557-1561.

75. Borgerding, M.F. New Perspectives in Micellar Liquid Chromatography// M.F. Borgerding, Jr. R. L. Williams, W. L. Hinze, E H. Quina / J. Liq. Chromatogr. -1989.-Vol.12.-P. 1367-1406

76. Medina Hernamdez, M. J. Solute-mobile phase and solute-stationary phase interactions in micellar liquid chromatography. A review/ M. J. Medina Hernamdez, M. C. Garcia Alvarez-Coque // Analyst. 1992. - Vol.117. - P. 831.

77. Kulikov, A. U. Comparison of Micellar and Reversed-Phase Liquid Chromatography for Determination of Sulfamethoxazole and Trimethoprim / A. U. Kulikov, A. G. Verushkin, L. P. Loginova // Chromatographia. 2005. -Vol.61. - No.9/10. - P. 455^163.

78. Horvath, C. Liquid chromatography of ionogenic substances with nonpolar stationary phases / C. Horvath, W. Melander, I. Molnar // Anal Chem. 1977. -Vol.49.-P.142-154.

79. Otto, M. Buffer Choice for Tuning the Selectivity in Reverse Phase Chromatography / Otto M., Wegscheider W. // J. Liq. Chromatogr. 1983. -Vol.6.-P. 685-704.

80. Kiel, J.S. A Rapid High Performance Liquid Chromatographic Method for the Simultaneous Measurement of Six Tricyclic Antidepressants /J.S. Kiel, R.K. Abramson, S.L. Morgan, J.V. Voris //J. Liq. Chromatogr. 1983. - Vol.6. - P. 2761-2773.

81. Kaliszan R.pH Gradient Reversed-Phase HPLC / R. Kaliszan, P., Wiczling, M.J. Markuszewski //Anal Chem. 2004. - Vol.76. - P.749-760.

82. Loeser E. Automation of pH Optimization Experiments During LC Development / E. Loeser, S. Babiak, P. Zhu, G. Yowell, M. Konigsberger // Chromatographia. 2006. - Vol63. No.7/8. - P. 345-351.

83. Snyder, L.R. High-Perfomance Gradient Elution / L.R. Snyder, J.W. Dolan// New Jersey. John Wiley & Sons, Inc., Hoboken 2007. - 461 p.

84. Рудаков, О.Б. Растворитель как средство управления процессом в жидкостной хроматографии. / О.Б. Рудаков. Воронеж, 2003 - 300 с.

85. Хубер, JI. Применение диодно-матричного детектирования в ВЭЖХ /Л. Хубер под ред. В.Г. Березкина. -М.: Мир, 1993. 92 с.

86. Scot, R.P.W. Chromatography Detectors/ R.P.W. Scot // New York. M Dekker Inc. 1997. - 536 p.

87. Барам, Г.И., База Данных "ВЭЖХ/УФ Фармакопея" / Г.И.Барам // Тезисы докл. Всероссийский симпозиум «Современные проблемы хроматографии». - М., 2002. - С. 19

88. Барам, Г.И. Новые возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии в фармакопейном анализе. / Г.И.Барам, Д.В.Рейхарт,

89. Е.Д.Гольдберг, Б.Н.Изотов, М.О.Родинко, В.А.Хазанов. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. — Т.135, №1. - с.57-79.

90. Барам, Г.И. Перспективы применения баз данных для определения веществ методом ВЭЖХ./ Г.И.Барам, И.Н. Базарова.// Тезисы докл. VII конференции «Аналитика Сибири и дальнего востока 2004». -Новосибирск, 2004. - С. 8.

91. Зенкевич, И.Г.О роли информационного обеспечения в обращено-фазовой ВЭЖХ (на примере идентификации примесей в дигидрокверцетине). / И.Г. Зенкевич, В.М. Косман // Ж. аналит. химии. -2005. Т.60. - №8. - С.837-841.

92. Valeur, В. Molecular Fluorescence: Principles and Applications / В. Valeur// Weinheim. John Wiley & Sons, Inc. 2001. - 381 p.

93. Lawrence, J.E. Chemical Derivatization in Liquid Chromatography/ J.E. Lawrence, R.W. Frei// Amsterdam. Elsevier.-1976.-213 p.

94. Parriott, D. A Practical Guide to HPLC Detection / D. Parriott// San Diego. Academic Press. 1993. - 293 p.

95. Yeung, E.S. Detectors for liquid chromatography / E.S.Yeung// New York Wiley.-1986.-366 p.

96. Архипов, Д.Б. Современное состояние методологии молекулярной масс-спектрометрии. / Д.Б. Архипов, JI.H. Галь // Ж. аналит. химии. -1999. Т.54. - №6. - С.585

97. Клюев, Н.А. Применение масс-спектрометрии и хромато-масс-спектрометрии в анализе лекарственных препаратов./ Н.А. Клюев // Ж. аналит. химии. 2002. - Т.57. - №6. - С.566-584.

98. Yuzuak, N. Analysis of Azithromycin in Human Plasma by LC-MS-MS / N. Yuzuak, T. Ozden, S.Eren, S.Toptan // Chromatographia Supplement. 2007. - Vol.66.-P.l 15-118.

99. Sturm, S. Analysis of flavonols ofSedum telephium L. leaves by capillary electrophoresis and HPLC-mass spectrometry / S.Sturm, N. Mulinacci, E.Vincieri, H. Stuppner // Chromatographia. 1999. - Vol.50. - No.7/8. - P. 433-438.

100. Meyer, J. Determination of paracetamol (acetaminophen) by HPLC with post-column enzymatic derivatization and fluorescence detection / J. Meyer, U. Karst / Chromatographia. 2001. Vol.54. - No.3/4. - P. 163-167.

101. Gottil, R. Determination of glutathione in pharmaceuticals and cosmetics by HPLC with UV and fluorescence detection / R. Gottil, V. Andrisanol, V. Cavrini, A. Bongini // Chromatographia. 1994. - Vol.39. - No. 1/2. - P. 2328.

102. Siley, С. M. Pharmaceutical and Biomedical Applications of Liquid Chromatography / C.M. Siley, W.J. Lough, I.M. Wainer // Oxford. Pergamon Division of Elsevier. 1994. - 379 p.

103. Deyl, Z. Quality Control in Pharmaceutical Analysis Separation Methods/ Z. Deyl // Amsterdam. Elsevier. -1997. - 241 p.

104. Ahuja, S. Trace and Ultratrace Analysis of HPLC / S. Ahuja // New York. Wiley-lntcrscience. 1992. - 419 p.

105. Mori, S. Size-Exclusion Chromatography / S. Mori, H.G. Barth // Heidelberg. Springer. 1999. - 234 p.

106. Toyoka, T. Modern Derivatization Methods tor Separation Science / T. Toyoka // New York. J. Wiley and Sons. 1999. - 298 p.

107. Spackman, D.H. Automatic recording apparatus for use in the chromatography of amino acid / D.H. Spackman, W.H. Stein, S. Moore // Anal. Chem. 1958. -№30. - P. 1190-1206.

108. Якубке Х.Д. Аминокислоты. Пептиды. Белки / Х.Д. Якубке, X. Ешкайт //М., Мир, 1985.-82 с.

109. Хефтман Э. Хроматография. Практическое приложение метода. В 2-х ч. 4.1. / Э. Хефтман, Т. Кастер, А. Нидервизер, Н. Кацимпулас, А. Куксис, Р. Кротью, р, Рональд// М.: Мир - 1986. - 336 с.

110. Husek, P. Advances in Amino Acid Analysis / P.Husek, P. Simek// LC GC. -2001. -Vol.19. -No.9. P.986-999.

111. Березовский, B.M. Химия витаминов/ B.M. Березовский// М., Пищевая промышленность, 1973. - 632 с.

112. Groen, К. Pharmacokinetics of the enantiomers of bupivacaine following intravenous administration of the racemate / К Groen, P.W.M. Zejilmans, A.G.L. Burm, J.W. Van Kleef// J. Chromatogr. 1994.- No.38. - P 125-129

113. Wynne, P. M. Approaches to the Solid-Phase Extraction of Equine Urine / P. M. Wynne, D. C. Batty, J. H Vine, N. J. K. Simpson // Chromatographic Supplement. 2004. Vol.59. -P.51- 60.

114. Wynne, P.M. Solid Phase Extraction, Principles, Techniques, and Applications/ P.M. Wynne, N. Simpson, Marcel Dekker// New York. CRC Press. 2000. - p. 273-306

115. Gorog, S. Identification and tetermination of impurities in drugs./ S. Gorog // Amsterdam. Elsiever. — 2000. 772 p.

116. Kolb, B. Static Headspace Gas Chromatography, Theory and Practice. 2nd Ed. / B. Kolb, L.S. Ettre // New York. J. Wiley and Sons. - 2006. - 349 p.

117. Глазков, И.Н. Определение органических примесей в фармацевтических препаратах./ И.Н. Глазков, H.JI. Бочкарева, И.А. Ревельский // Ж. аналит. химии. 2005. - Т.60. - №2. - С. 129-136.

118. Хубер Л. Применение диодно-матричиого детектирования в ВЭЖХ / Л. Хубер // М.: Мир. -1993.- 92 с.

119. Afshari, J.T. Rapid spectrophotometric method for the quantitation of acetaminophen in serum / J.T. Afshari, T.Z. Liu //Anal. Chim. Acta. 2001. -Vol.443.-P.165

120. Nagaraia, P. Spectrophotometric method for the determination of paracetamol and phenacetin // P. Nagaraia, K.C.S. Murth, K.S. Rangappa // J.Pharm.Biomed.Anal. 1998.-Vol.17. -P.501.

121. Calatayud, J.M. Flow-injection spectrofluorimetric determination of paracetamol / J.M. Calatayud, C.G.Benito //Anal. Chim. Acta- 1990. -Vol.231.-P.259

122. Koukli, I.I. Continuous-flow chemiluminescence determination of acetaminophen by reduction of cerium(IV) / I.I. Koukli, A.C. Calokerinos, T.P. Hadjioannou // Analyst.- 1989. Vol.114. P.711

123. Bloomfield, M.S. A sensitive and rapid assay for 4-aminophenol in paracetamol drug and tablet formulation, by flow injection analysis with spectrophotometric detection/ M.S. Bloomfield /Talanta 2002. - Vol. - 58. -P. 1301-1310.

124. McEvoy 1 E. Application of MELC and MEEKC for the Analysis of Paracetamol and Related Impurities in Suppositories / E. McEvoy, S. Donegan, J. Power, K. Altria / Chromatographia. 2008. - Vol.68. - No. 1/2. -P. 49-56.

125. Таточенко, B.K. Еще раз о жаропонижающих средствах / В.К.Таточенко// Педиатрия. 2007, № 2, - С. 59-62.149 Мед журнал

126. Маркова, И.В. Фармакология / И.В. Маркова, М.В. Неженцева // Санкт-Петербург. Сотис-1997-470 с.

127. Гаевая, JI.M. Основы фармакотерапии и клинической фармакологии / Л.М.Гаевая, М.Д. Гаевый, П.А. Галенко-Ярошевский,- С.А.Кулешова, A.M. Куянцева, Л.М. Маркова, С.В. Недогода, В.И. Петров, В.Е. Погорелый, Н.В. Рогова // Москва. Феникс 2010 - 800 с.

128. Голубицкийв, Г.Б. Количественный анализ таблеток «Пенталгин ICN» методами градиентной и изократической высокоэффективной жидкостной хроматографии / Г.Б. Голубицкийв, Е.В. Будко, В.М. Иванов //Ж. аналит. химии. 2005. - Т.60. - №10. -С. 1080-1086.

129. Ларионова, С.Г. Оптимизация условий анализа таблеток сложного состава аналгезирующего и спазмолитического действия/ С.Г.Ларионова, Н.Н. Дементьева, Е.Б. Нечаева, П.В. Назаренко, Г.А. Нестерова //Фармация. 2002. - Т.51. - С. 16.

130. Голубицкийв, Г.Б. Количественный анализ таблеток «Пенталгин N» методами градиентной и изократической высокоэффективной жидкостной хроматографии / Г.Б. Голубицкийв, Е.В. Будко, В.М. Иванов // Ж. аналит. химии. 2006. - Т.61. - №1. - С.74-79.

131. Голубицкийв, Г.Б. Количественный анализ таблеток «Пенталгин» методами градиентной и изократической высокоэффективной жидкостной хроматографии / Г.Б. Голубицкийв Е.В. Будко, В.М. Иванов Е.М. Басова // Ж. аналит. химии. 2006. - Т.61. - №4. - С.383-387.

132. Голубицкийв, Г.Б. Анализ многокомпонентногопрепарата от простуды «Максиколд» методом ВЭЖХ с градиентом рН подвижной фазы. / Г.Б. Голубицкийв Е.В. Будко, В.М. Иванов Е.М. Басова // Ж. аналит. химии. -2007. Т.62. - №9. с. 969-972.

133. Ларионова, С.Г.Оптимизация условий анализа таблеток сложного состава аналгезирующего и спазмолитического действия / С.Г.Ларионова, Н.Н. Дементьева, Е.Б. Нечаева, П.В. Назаренко, Г.А. Нестерова /Ж. Фармация. 2002. - № 1. - С. 16-19.

134. Вергейчик, Т.Х. Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе препаратов, содержащих пропифеназон / Т.Х. Вергейчик , Н.С. Онегова // Ж. Фармация. 2002. - №6. - С. 13-16.

135. Голубицкийв, Г.Б. Анализ многокомпонентных лекарственных препаратов при помощи микроколоночных хроматографов серии "Милихром" / Г.Б. Голубицкийв, В.М. Иванов // Вест. Моск. Ун-та. Сер. 2.Химия. 2008. - Т.49. - №4. - С.246-250.

136. Лайпанов, А.Х. Хроматографическое разделение алкалоидов группы тролана / А.Х. Лайпанов, В.Э. Сланский // Хим. Фарм. Журнал. 1991. -№25. - С.75.

137. Metwally, М. E-S. Chromatographic separation and analysis of chloropheniramine maleate, methscopolamine nitrate and phenylephrine hydrochloride in sustained release capsules/ M. E-S. Metwally / Chromatographia. 1999. - Vol.50. - No. 1/2. - P. 113-117.

138. Юрьев, Д.В. Анализ флавонолгликозидов в препаратах и БАД на основе экстракта Ginkgo biloba / Д.В. Юрьев, К.И. Эллер, А.П. Арзамасцев // Ж. Фармация. 2003. - N2. - С.7-9.

139. Бубенчикова, Р.А. Флавоноиды фиалки трехцветной / Р.А. Бубенчикова, И.Л. Дроздова // Ж. Фармация. 2004. - N2. - С. 11-12.

140. Бубенчикова, Р.А. Исследование фенольных соединений листьев лопуха большого (Arctium lappa L.) / Р.А. Бубенчикова, И.Л. Дроздова // Ж. Фармация. 2003. - N3. - С. 12-13.

141. Антипова, Е.А. Определение биологически активных веществ в Alocasia macrorrhiza / Е.А. Антипова, С.М. Юдина, Л.Е.Тимофеева, Е.А. Лейтес / Химия растительного сырья. 2004. - №3. - С. 103-107.

142. Федосеева, Л.М. Изучение флавоноидов сборов на основе листьев бадана толстолистного / Л.М. Федосеева, Л.Е. Кудрикова, А.А. Турчанинов, Ю.С. Сивова / Химия растительного сырья. 2006. - №4. -С. 49-54.

143. Bilia, A. R. Characterization of calendula flower, milk-thistle fruit, and passion flower tinctures by HPLC-DAD and HPLC-MS / A. R. Bilia, D. Salvini,. G. Mazzi, F. F. Vincieri // Chromatographia. 2001. - Vol.53. - No. -3/4-P. 210-215.

144. Sheu, S. J. Determination of ephedra alkaloids by high-performance liquid chromatography/ S. J. Sheu, M.H.Huang // Chromatographia. 2001. -Vol.54.-No. 1/2.-P. 117-119.

145. Краснова, И.Н. Определение аминокислот в сыворотке крови человека методом обращено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии // И.Н. Краснова, Л.А. Карцева, Ю.В. Черкасс // Ж. аналит. химии. 2000. - Т.55. - №1. - С.66.

146. Чернобровкин, М.Г. Определение аминокислот в препарате «Элтацин» // М.Г. Чернобровкин, Н.В. Кольцова, Б.Н. Шепелев // Ж. Фармация. -2004. -№5. С. 18-20.

147. Кожанова, Л.А. Определение водо- и жирорастворимых витаминов в поливитаминных препаратах методом высокоэффективной жидкостнойхроматографии // JI.A. Кожанова, Г.А. Федорова, Г.И. Барам // Ж. аналит. химии. 2002. - Т.57. - №1. - С.53.

148. Арбатский, А.П. Определение витаминов в кормах и пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / А.П. Арбатский, Г.Н. Афоныпин, В.М. Востоков // Ж. аналит. химии. 2004. Т.59. - №12. - С. 1304-1307.

149. Козлов, Э.И. Определение витаминов A, D, Е в поливитаминных препаратах с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии / Э.И. Козлов, И.А. Солунина, М.Л. Любарева, М.А Надточий // Хим. Фарм. Журнал. 2003. - №.37. - С.50.

150. Староверов, В.М. Нормально-фазовая микроколоночная ВЭЖХ. Определение витаминов А,Е,КЗ при их совместном присутствии в масляных растворах / В.М. Староверов, В.И. Дейнека, Л.В. Кричковская // Хим. Фарм. Журнал. 1990. - №.24. - С.85.

151. Савватеев, A.M. Валидация методики анализа препарата «Асковертин» // A.M. Саватеев, В.Л. Белобородов, Н.А. Тюкавкина, В.П. Тихонов // Ж. Фармация. -2004. -№3. С. 11-13.

152. Петров, А.Ю. Стандартизация препарата «Аданол» // А.Ю Петров, С.А. Дмитриченко, А.Л. Коваленко, Л.Е. Алексеева // Ж. Фармация. 2002. -№6. - С.11-13.

153. ICH Topic Q2(R1). Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology. / London. Europian Medicines Agency.- 1995. 15 p.

154. Салахов, И.А. Расширение возможностей контроля качества лекарственных препаратов при использовании систем градиентной ВЭЖХ/ И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов // Тезисы докл. III Всероссийской конференции «Аналитические приборы». С.-Петербург, 2008. - С. 31.

155. Салахов, И.А. Определение лекарственных веществ и посторонних примесей в лекарственных формах методом градиентной ВЭЖХ / И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов // Тезисы докл. Всероссийской конференции «Химический анализ». М., 2008. - С. 121-122.

156. Смирнов, B.C. Современные средства профилактики гриппа и орви / Санкт-Петербург. Фарминдекс- 2004. 145 с.

157. Радциг, Е.Ю. Новые подходы в лечении ОРВИ у детей/ Е.Ю. Радциг// Фармацевтический вестник. 2009. — №32. — С.28-31.

158. НД 42-14117-06, Антигриппин, таблетки шипучие для детей.

159. НД 42-14116-06, Антигриппин, таблетки шипучие для взрослых.

160. Гармонов, С.Ю. Количественное определение компонентов антигриппина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / С.Ю. Гармонов, Салахов И.А. II Хим.-фарм. журн. 2009. - Т. 43, № 11.-С. 56-60.

161. Салахов, И. А. Контроль качества лекарственного препарата антигриппина методом градиентной ВЭЖХ / И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов, Р.Н. Исмаилова, Н.Г. Николаева, С.М. Горюнова // Вестник Казанского технологического университета. 2009. - №4. - С. 49-53.

162. Салахов, И.А. Повышение эффективности обеспечения безопасности лекарственных средств на этапе контроля их качества / И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов // Тезисы докладов XV Рос. нац. конгресса "Человек и лекарство", М., 2008. - С. 561-562.

163. Маркова, И.В. Фармакология / И.В. Маркова, М.В. Неженцев Санкт-Петербург: Сотис. -1997.-473 с.

164. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. -Москва: Новая волна — 2010 1216 с.

165. Эль-Али, Ф.А. Контроль качества лекарственной формы напроксена наружного применения / Ф.А. Эль-Али, Н.М. Насыбуллина, И.А. Салахов // Фармация. 2009. - №1. - С. 6-8.

166. Эль-Али, Ф.А. Определение теноксикама в лекарственной форме для наружного применения / Ф.А. Эль-Али, Н.М. Насыбуллина, И.А. Салахов // Фармация. 2009. - №3. - С. 20-23.

167. Салахов, И.А. Расширение возможностей ВЭЖХ в контроле качества лекарственных средств / И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов // Материалы II Международного форума «Аналитика и аналитики». Воронеж, 2008. - Т. 2. - С. 528.

168. Салахов, И.А. Контроль качества лекарственных средств: расширение возможностей при использовании градиентной ВЭЖХ / И.А. Салахов,

169. Г.Р. Нурисламова, С.Ю. Гармонов // Тезисы докл. Всероссийской конференции «Теория и практика хроматографии. Хроматография и нанотехнологии». — Самара, 2009. С. 190.

170. Салахов, И.А. Определение флавоноидов боярышника в лекарственных формах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов // Вестник Казанского технологического университета. 2007. - №6.- С. 34-36.

171. Михайлов, И.Б. Витамины/ И.Б. Михайлов- Санкт-Петербург: Аст Сова,-2006,- 128 с.

172. Морозкина, Т.С. Витамины/ Т.С. Морозкина, А.Г. Мойсеенко-Минск: Асар.-2002.-114 с.

173. НД 42-11256-01, Мультипрдукт для детей, таблетки растворимые шипучие.

174. Юсупова, JI.M. Средства биологической защиты многоцелевого назначения на основе хлорпроизводных нитробензофуроксана / JI.M. Юсупова, С.Ю. Гармонов, И.М. Захаров, А.Р. Быков, Т.В. Гарипов, И.Ф. Фаляхов // Вестник КГТУ. 2005. - №1. - С. 103-111.

175. Юсупова, Л.М. Фунгицидные и токсикологические свойства функционально замещенных нитробензофуроксанов/ Л.М Юсупова, С.Ю. Гармонов, И.М. Захаров, А.Р.Быков, И.Ф. Фаляхов, Т.В. Гарипов // Химико-фармацевтический журнал. 2008. - Т. 42 — № 4. - С. 73-75.

176. Пат. 2076803 РФ. Фунгицидный состав / Л.М. Юсупова, Б.И. Бузыкин, Ж.В. Молодых, И.Ф. Фаляхов. 1998. - 4 с.

177. Пат. 2032678 РФ. 4-Нитро- или 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксан, обладающий фунгицидной активностью / Л.М. Юсупова, Б.И. Бузыкин, Ж.В. Молодых, И.Ф. Фаляхов. 1998. - 3 с.

178. Пат. 2067863 РФ. Акарицидный состав для лечения чесотки домашних животных / Л.М. Юсупова, Б.И. Бузыкин, Ж.В. Молодых, И.Ф. Фаляхов, Т.В. Гарипов. 1999. - 5 с.

179. Пат. 2058141 РФ. Фунгицидный состав / Л.М. Юсупова, Б.И. Бузыкин, Ж.В. Молодых, И.Ф. Фаляхов, Т.В. Гарипов. 1999. - 3 с.

180. Спатлова Л.В. Синтез и свойства 5,7-замещенных-4,6-динитробензофуроксана: дис. . канд. хим. наук / Л.В. Спатлова. -Казань. -2003. 161 с.

181. Ишкаева Д.Р. Фармако-токсикологическая оценка «Тримиксана»: дис. . канд. биол. наук / Д.Р. Ишкаева. Казань. - 2005. - 134 с.

182. Пат. 2255935 РФ. 5,7-дизамещенный-4,6-динитробензофуроксан общей формулы C6N406(R1)2, обладающий акарицидной и бактерицидной активностью. Юсупова Л.М., Фаляхов И.Ф., Спатлова Л.В. 2004.- 2 с.

183. Шиндалла М.К. Фармако-токсикология 5,7—дизамещенных-4,6-динитробензофуроксана: Автореф. дис. канд. вет. наук / КГАВМ. -Казань, 2004. 16-21с.

184. Гармонов, С.Ю. Фармацевтический анализ хлорпроизводных нитробензофуроксана/ Л.М Юсупова, С.Ю. Гармонов, И.М. Захаров, И.Ф. Фаляхов, Т.В. Гарипов, И.Е. Зыкова// Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. 2007. — №1. — С. 13-16.ь

185. Патент РФ 2194990. Способ определения 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана в биологически активной смеси. С.Ю. Гармонов, А.С. Салахова, JI.M Юсупова, И.Ф. Фаляхов, В.Ф. Сопин . 2002 - 10 с.

186. Юсупова JI.M. Средства биологической защиты многоцелевого назначения на основе хлорпроизводных нитробензофуроксана / JI.M. Юсупова, С.Ю. Гармонов, И.М. Захаров, А.Р. Быков, Т.В. Гарипов, И.Ф. Фаляхов // Вестник КГТУ. 2005. - №1. - С. 103-111.

187. Хмельницкий, Л. И. Химия фуроксанов. Строение и синтез. / Л.И Хмельницкий, С.С. Новиков, Т.И. Годовникова. -М.: Наука. 1996.-383 с.

188. Хмельницкий, Л. И. Химия фуроксанов. Реакции и применение. / Л.И Хмельницкий, С.С. Новиков, Т.И. Годовникова. -М.: Наука. 1996.-430 с.

189. Neue, U.D. HPLC Columns: Theory, Technology and Practice / U.D. Neue// New York Wiley. 1997. - 416 p.

Оглавление диссертации Салахов, Ильгиз Анясович :: 2010 :: Казань

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Салахов, Ильгиз Анясович, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Салахов, Ильгиз Анясович

Похожие научные работы

Каталог диссертаций