Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологические свойства и лечебно-профилактическая эффективность дисульфоцида при колибактериозе овец

На правах рукописи

т од

12 сга

Курамшнна Палснгшш Алсксссвна

ФАР.ЧАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ЛКЧ1'.Г>110-ЛР0Ф11ЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ДНСУЛЬФОЦИДЛ ПРИ КОЛ И БАКТЕРИОЗЕ ОВЕЦ

16.00.04 - ветеринарная фармакология и токсикология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань -2000

Работа иыиолмена в Катзиской Государственной академии пепсрншрноП медицины им. Н.Э. Баумана и Всероссийском научио-нсследонаюльском ветеринарном институте.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук Х.Н. МАКАНВ Научный кинсульшт - доюор ноюрииарнмх наук, профессор. Заслуженный деятель пауки 1'Т Р.Г. I ОСМАНОВ

Официальные оппоненты - доктор биологических паук,

нрск|)ссс1>р !И,Я. П'Г.МЛСОН доктор иегерииарпых паук, акатсмик М.Л. ',АФП1

Ведущая прпнитцня - Чуиашска i Ceni ,r».oi>ni' теш ая академия

Защита состоится Л@U/C>Ht9i- Л/ЮО ■?. и ......часов

па 'заседании диссертационного совет К - 120.22.02. и Качанекой государешейной академии «еюринарной медицины им. 11.3. IjuvMuna (420074. г. Казань. Сибирский тракт, 35. КГЛНМ). С дисссрпацнсй можно ознакомиться u ûhw.ihoicko lui шнекой юсударстксиной академии ветеринарной медицин!.! Автореферат разослан Z6. OS. т- .

Ученый секретари ,incçepiaimo»moio cobcki A I 1 Корнишин

fiîXZ е^^о у ^ О

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Важнейшими условиями эффективного развития животноводства н основном являются: максимальное сохранение новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных и снижение их заболеваемости. Среди заболеваний молодняка животных широко распространены и наносят наибольший экономическим ущерб желудочно-кишечные болезни, сопровождающиеся значительной гибелью, недостаточным ростом и разлитием. Эти болезни характеризуются молиэтиологичностыо н стационарность!» (Н.С. Воронин, 1996; М.А. Сидоров к др., 199S и др.).

В комплексе мероприятии и) профилактике и лечению желудочно-кишечных заболевании важную роль играют антибиотики. Однако из-за. широкого распространения антибиогикорезистеигнич штаммов микрооргашпмов наиболее перспективным и реальным методом позмшепия эффективности лечебных и профилактических мероприятий при желудочно-кишечных болезнях молодняка животных является использование химноюрапентических препаратов с широким спектром действия, с низкими побочными реакциями, чем антибиотики (В.Ф. Ковалев, !980; С.\!. Иавашин н др., 1988; О.1. Псхаков и др., 1984; Т.В. Гарипов, 1996; Chorpa J.ct al, 1978; 13uins J„ 1989; Dcver Z.A., 1991 и др.).

В связи с тем, что н этиологии и патогенезе желудочно-кишечных болезнен важную роли играют различные патогенные бактерии, вирусы, хламидии, а также условно патогенные микроорганизмы, нами проведены изыскания и оценка свойств и отбор химических соединен in, обладающих антимикробной активностью, как против бактерий, так и вирус ¡в и хламидии.

На основании предварительных исследований для выполнения данной работы был отобран препарат из группы сероорганических соединении -диэтилам.мониевая соль сульфоновой кислоты, синтезированный сотрудниками ИОФХ им. Арбузова (г. Казань), названный нами-МК- 1095 (дисульфоцид).

Данный препарат - кристаллический порошок белого цвета, с специфическим запахом, хорошо растворим в воде.

Цель и задачи исследований. Цель исследований - комплексное определение антимикробных, фармако-токснкологическич свойств и лечебно-профилактической эффективности дисульфоцнда при колноактериозе ягнят.

В соответствии с целыо работы были поставлены следующие задачи:

1. Изучить антимикробную активность дисульфоцнда.

2. Определить параметры токсичности, кумулятивные свойства и этдаленных последствий при применении дисульфоцнда на лабораторных животных и ягнятах.

3. Изучить влияние дисульфоцнда на клинический стзгус, гематологические и биохимические показатели крови лабораторных животных I ягнят.

4. Определить динамику распределения препарата в органах, тканях и выделения его иэ организма животных при псроралыюм введении, а также провести ветеринарно-санитарную экспертизу мяса овец.

5. Изучить лечебно-профилактическую эффективность дисульфоцида при колибактернозе ягнят.

Научная нопнчнп. Впервые изучены антимикробная активность, фармако-токснкологическис параметры, влияние дисульфоцида на защитные механизмы, вегетативную нервную систему организма животных, распределение препарата в органах и тканях, сроки убоя животных после курсового введения дисульфоцида, а также отработаны дозы и подтверждена его лечебно-профилактическая эффективность при колибактернозе ягнят. На основании полученных результатов подана заявка на изобретение.

Практическая ценность. Научное обоснование высокой бактерицидной активности дисульфоцида, а также низкая токсичность, отсутствие аллергнзнрующих свойств, тератогенностн, эмбрнотоксичностн и мутагенности позволяет предложить настоящий препарат для внедрения п ветеринарную практику для терапии и профилактики желудочно-кишечных болезней бактериальной этиологии. С учетом высокой терапевтической и профилактической эффективности дисульфоцида при колибактернозе разработана рекомендация по его применению, утвержденная отделом ветеринарии МСХиП Марий-Эл и разработано Временное наставление по применению дисульфоцида при желудочно-кншеччы^ заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных, } гверждеш ое Глав'.ым управлением ветеринарии Г'1'

Апробация работы. Материагм дн г ртацин доложены и получили положительную оценку:

- на ежегодных заседаниях ученого а ач га КГ/4 ЗМ пр и обсуждении отчетов о НИР за 1996-1999 годы;

- на Республиканских научно-производственных конференциях по проблемам животноводства и ветеринарии (Казань 1997, 1998, 1999 и 2000 г.г.).

Основные положении диссертации, выдвигаемые на защиту:

- результаты изучения антимикробной активности дисульфоцида;

- данные исследования по определению параметров токсичности и кумуляции, отдаленных последствий после длнтел! ного применения, раздражающих и аллергнзнрующих свойств, а также влияния дисульфоцида на активность защитных механизмов и вегетативную нервную систему организма лабораторных н сельскохозяйственных животных;

- результаты определения лечебно-профилактической эффективности дисульфоцида при колибактернозе ягнят.

Публнканпи. По материалам диссертации опубликовано 6 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений

и списка литературы. Работа иллюстрирована 20 рисунками н содержит 33 таблицы. Список литературы включает 251 отечественных и 115 зарубежных источникоп.

П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2,1. Материалы и.методы исследования.

Работа выполнялась в 1995-1999 гг на кафедре микробиологии и вирусологии КГАВМ им. Н.Э. Баумана, в лабораториях эпизоотологии и биотехнологии ВНИВИ, а также в республиканских, районных ветеринарных лабораториях и 2-х овцеводческих хозяйствах Республики Татарстан и Марий-Эл стационарно неблагополучных по колибактериозу ягнят. Эксперименты проведены с использованием 7 штаммов микроорганизмов 126 белых мышей, 282 белых крыс, 20 морских свинок, 193 кроликов, 584 ягнят с 2-дневного до 4 месячного возраста.

Опытные и контрольные группы животных формировали по принципу аналогов, создавая одинаковые условия кормления, соответствующие • зоотехническим нормам (М.Ф. То.мэ, 1963).

Определение бактерицидной активности дисульфоцида проводили по методике, предложенной Г.И. Першиным (1971) в модификации A.A.

Полякова (1975). При этом использовали водные растворы препарата в концентрации 10, 20, 25, 30, 40,50, 100 мкг/мл.

В качестве тест-микробов применяли 24-часовые агаровые культуры патогенных штаммов кишечной палочки серогруппы 08А и 0 19, стафилококка, стрептококка, сальмонелл, пастерелл, клостридий. Суспензии бактерий концентрацией 1 млрд.м.к. в мл готовили на физиологическом растворе и мясо-пептонном бульоне (МПБ) с добавлением 5% сыворотки крови лошади. Активность препарата определяли в условиях комнатной температуры (19-24°С) и термостата (37°С). Из каждой пробы комплекса препарата и суспензии бактерий осуществляли высевы через 10, 20, 30, 40, 60 и 120 мин. контакта. Во всех случаях бактерицндность препарата оценивали на основании данных отсутствия роста или резкого снижения концентрации исходной культуры бактерий посеянных на питательные среды.

Активности дисульфоцида в отношении хламндий определяли путей титрования возбудителя хламидиозного аборта овец (ВХАО) на куриных эмбрионах (КЭ) в присутствии испытуемого средства. Титр хламидий выражали в ЭЛДзио.з мл.

На первом этапе этих исследований провели изучение токсичности дисульфоцида (в дозах %. 10, 20, 30 мг/мл) для куриных эмбрионов (по 5 КЭ на дозу). Опыты имели двукратную повторяемость. В основном опыте заражали по 20 КЭ. Эффективность оценивали по количеству выживших КЭ.

Изучение противовирусной активности дисульфоцида в дозах 6,2; 12,5; 25; 50 и 100 мкг/мл проводили на первично трипсинизировашшх кулмурах клеток куриных фибробластов (КККФ), которых заражали вирусом герпеса (штамм

628) 1-100 дозами согласно "Методическим указаниям по отбору, испытаниям и оценке антивирусных химиопрепаратов" (1984).

При определении параметров острой токсичности препарата для животных в качестве базового источника использовали "Методические указания по определению токсических свойств препаратоз, применяемых в ветеринарии и животноводстве" (М, 1988).

Эксперименты проводили с использованием 96 беспородных белых мышей живой массой 18,0-20,0 г, 72 белых крыс живой массой 190-210 г, 36 кроликов живой массой 1,8-2,0 кг, 16 ягнят 2-5 днепного возраста и 28 ягнят 3-4-месячного возраста.

Препарат вводили однократно в различных концентрациях в виде водных растворов белым мышам подкожно, белым крысам, кроликам и ягнятам - в желудок.

В желудок препарат вводили натощак: крысам - катетером, кроликам, ягнятам при помощи шприца с резиновым зондом. Контрольным животным вводили адекватное количество дистиллированном воды.

За подопытными животными вели ежедневное наблюдение в течение 14 суток после последнего введения препарата учитывая клиническую картину интоксикации количество павших и выживших, времени их гибели и результаты патологоанатомического вскрытия павших животных.

Расчеты параметра острой токсичности для лабораторных и сельскохозяйственных животных проводил» по Кербсру (1931) н методом пробит-аналцза по Миллеру н Тсйктерн (197'.).

Эксперименты по.определению суб фошпеской ".оксичности препарата и кумулятивных свойств проводили с ис тольз вашим ic.ni.ix крыс с начальной массой тела ¡00-1 ¡0 г, кроликов с масс )й тел 0 > - и яглят 10-12-дневного возраста. Препарат вводили ежедневно че}; желуд >чно-кишечный тракт в возрастающих дозах в течение 24 суток. На1 и. .пая д< за введнмого препарата для белых крыс и кроликов составляла 0,25 ЛД50, а для ягнят 0,2 ЛД50 при однократном введении. Через каждые 4 дня дозу препарата увеличивали в 1,5 раза (1Лт ег а1,1961).

Контроль клинического состояния животных осуществляли на основании результатов измерения температуры тела, количества дыхательных движений, выраженности слуховых и зрительных рефлексов, а также по реакции на внешние раздражители.

Классификационную оценку токсичности испытуемого средства проводили согласно общепринятой гигиенической классификации токсических веществ (1978).

При оценке кумулятивных свойств препарата использовали тест "субхронической токсичности". Полученные результаты обрабатывали по методу Кербера (1931). Расчет коэффициента кумуляции производили по формуле предложенной Ю.С. Каган, В.В. Станкевич (1964).

Определение кожнораздражающих и аллергизирующих свойств дисульфоцида осуществляли на кроликах альбиносах и морских свинках согласно "Методическим указаниям к постановке исследований по изучению

раздражающих спойств и обоснование ПДК избирательно действующих раздражающих веществ в воздухе рабочей зоны (М., 1980) и "Методическим указаниям к постановке исследований по гигиеническому нормированию промышленных аллергенои в воздухе рабочей зоны" (М., 1988).

Генетические последствия дисульфоцнда изучали согласно "Методическим указаниям по изучению отдаленных последствий пестицидов" тестом Эймса на индикаторных штаммах сальмонелл tiphimurium ТФ-98 и ТА-100.

При длительном поступлении препарата его омбриотоксическое гонадотоксическое и тератогенное действие изучали по 11.11 Жаворонкову с использованием половозрелых кроликов живой массой 2-2,5 кг.

Опенку влияния препарата на клинический статус, кроветворение и вегетатнннмо нервную систему животных осуществляли о экспериментах с использованием белых мышей живой массой 10,0-20,0, кроликов живой массой 1,8-2,0 кг, ягняг 10-15-днсвного и 3-4-месячиого возраста при введении препарата через желудочно-кишечный тракт.

Орально испытуемый препарат вводили в течение 15 суток один раз в день кроликам по 350, 750 и 1500 мг/кг живой массы (0,07-0,38 ЛД50), а ягнятам задавали соответственно 100 и 1500 мг/кг один раз в сутки.

Регистрацию динамики температуры тела, гематологических, биохимических показателей крови проводили до и через 5, 10, 15 <уток после введения препарата.

Морфологические исследования крови включали определение количества эритроцитов, лейкоцитов, уровня гемоглобина, а также выведение лейкоцитарной формулы по общепринятым методам.

Фагоцитарную активность лейкоцитов определяли при томотци опсоно-фагоцитарной реакции. Содержание Т- и B-лимфоцитов определяли по модифицированному методу Джулиус и сотр. (1973), основанному на разделении взвеси лимфоцитов на колонке с нейлоновой ватой (1992). При этом взвесь лимфоцитов выделяли из крови по методу Адамчук и др. (1982).

Определение бактерицидной активности сыворотки крови в отношении E.coli определяли нефелометрнческнм методом в модификации О.В. Бухарина и А.Б. Немного.

Содержание общего белка определяли рсфрактормстрическн, белковые фракции - нефелометрнческнм методом в модификации Каршока (1962), резервную щелочность по методу Раевского (1971).

Влияние дисульфоцида на холино- и адренорецепцшо вегетативной нервной системы изучали используя методику регистрации .моторики отрезка тонкой кишки кролика (ТКК), описанную Е.Л. Эндрю (1974).

Фармакологию дисульфоцида изучали при помощи препаратов анализаторов: ацетилхолина (1х!0'3г/'мл), атропина (!х10"5г/мл), тетраэтиламмония (1х10'5г/мл), аминазина (1х10'5г/мл). Эти препараты вводили в инкубационный раствор на фоне действия дисульфоцида.

Изучение остаточного количества дисульфоцнда в организме животных после его курсового и однократного введения проводили качественным

s

определением методом жидкостной хроматографии, а количественное -микробиологическим методом по В.Ф. Ковалеву через I, 3, 5, 10, 15, 20, 24, 36, 72 и 120 масоь после последнего введения препарата в опытах на кроликах и ягнятах 3-4-месячного возраста.

Для проведения жидкостной хроматографии и определения концентрации дисульфоцида, иигибирующего рост бактерий, готовили биосубстрат из печени, легких, почек, мышц, а мочу и кровь использовали в натнвном виде. Жидкостную хроматографию проводили на хроматографе Grom 4001 с использованием колонки с обращенной фазой Sepakon 6хС18. Чувствительность прибора по данному препарату не ниже 1 х 10'"'М/л. Опыты имел» двукратную повторяемость.

Ветерпиарно-санитарпую жепертизу 24 проб мышечной ткани, взятых при убое животных после обработки лнеульфоцидом из лопаточных и тазобедренных групп мышц, проводили на кафедре ВСЭ КГЛВМ согласно требованиям ГОСТа 7269-79 и ГОСТа 23392-78. С целью изучения сохраняемости охлажденною мяса аналогичные исследования проводили на 5, 10, 15 и 30 сутки хранения при температуре - 10-12"С.

При проведении бактериологических исследований прежде всего исключали обсеменешюсть мяса и внутренних органов микроорганизмами из группы возбудителен пищевых токсикоинфскций.

Биотоксикологию мяса подопытны> xhlothux проводили методом биопробы с использованием 110 к'зысат-отъс.мылей в соответствии с требованиями "Методических реко> енда! .ш чо биол >гической оценке продуктов питания". По окончании опита же i< тных д каптировали и изучали видимую патологоанатомнческую карпну.

Изучение терапевтической эффективно т, приме |ения цисульфоцнда при колибактериозе ягнят различного возраст!, осуще :твляли в двух сериях лабораторно-контролируемых опытов с использованием ягнят с 2-х-дневного до 4-месячного возраста с клиническими проявлениями заболевания с признаками диареи. Эксперименты проводили в условиях овцеводческих хозяйств.

С целью уточнения диагноза, этнологических агентов заболевания и определения клинического статуса подопытных животных проводили клинико-эпизоотологические, гематологические, патологоанатомические и бактериологические исследования материала больных, вынужденно убитых и павших животных по общепринятым методикам.

Оценку эффективности лечения животных осуществляли по результатам клинического наблюдения с регистрацией температуры тела, данных гематологических исследований, динамики фагоцитарной активности лейкоцитов и бактерицидных свойств сыворотки крови, длительности срока курсовой обработки и выживаемости подопытных животных.

Профилактическую эффективность дисульфоцида определяли в двух сериях опытов с использованием 254 ягнят различного возраста. При этом препарат выпаивали в виде водного раствора индивидуально один раз в день в течение 2-3-х суток или задавали групповым способом в смеси с

концентрированным кормом из расчета 40-100 мг/кг массы тела один раз в день в течение 3-х суток.

При оценке профилактического действия дмсульфоцида проводили аналогичные исследования как лри определении его терапевтической эффективности.

Экспериментально полученный цифровой материал обрабатывали с использованием программируемого калькулятора типа "Электроника МК-56" по методике, разработанной Р.Х. Тукшаитовым и Н.Р. Нигматуллиным с последующим применением критерия Стьюдеита(1984).

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТОЕНПЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Оценка антимикробной активности дисульфоцида

При изучении антимикробной активности дисульфоцида установлено, что данное химическое соединение проявляет стабильную бактерицидную активность в отношении всех тест-бактерии через 30 минут непосредственного контакта им витро при концентрации его в водном растворе 20-30 мкг/мл. Препарат в концентрации 10 мкг/мл

обладает хламидностатическим действием, снижая инфекционный татр хламидий п среднем на 3 18, а в концентрации 25 мкг/мл задерживает репродукцию вируса при заражении культур клеток 10 .дозами шруса и в концентрации 12,5 мкг/мл при заражении культур клеток 1-й дозой вируса.

2.2.2. Определение параметров токсичности и кумулятивных свойств дисульфоцида па животных

Данные определения острой токсичности дисульфоцида в опытах на лабораторных животных и ягнятах различного возраста обобщены н представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты определения параметров острой

№№ п/п Вид животных Способ введения, доза мг/кг

годкож/.ый в желудок

лд50 мпд ЛД50 МПД

1. Белые мыши 18,0-20,0 1667 1400 - -

2. Белые крысы - - 3000 2000

3. Кролики 1,8-2,0 кг - - 3833 3000

4. Ягнята 2-5-дневные - - 3250 2000

5. Ягнята 2-3-месячные - - 6000 3000

Анализ данных проведенных исследований показал, что дисульфоцнд согласно ГОСТу \2.\.Ш1-1Ь относится к Iii классу токсичности при внутрижелудочном и подкожном введении лабораторным и сельскохозяйственным животным.

Признаки интоксикации ягнят после введения дисульфоцида зависели от »веденной до'1ы препарата и возраста жиготных. У ягнят 2-5-дневного возраста при введении летальной дозы (5000 мг/кг) признаки интоксикации регистрировали через 5-6 часов, а гибель ягнят наступала через 1-3 суток. В то же время у ягнят 2-3-месячного возраста признаки интоксикации наблюдали при введении 8000 мг/кг через 12-24 часа, а гибель наступала через 2-3 суток после появления признаков интоксикации.

Максимально переносимая доза (МПД) и ЛД,() дисульфоцида при внутрижелудочном введении ягаятал) п 14-16 раз и 16-20 раз были больше, чем терапевтическая доза дисульфоцида, обеспечивающая 94-100%-ный лечебный эффект при колнбактернозе, н это свидетельствует о том, что препарат практически безопасен для животных даже при случайной передозировке.

Низкая токсичность препарата подтверждена патологоаиа-томическими исследованиями органов и тканей при вскрытии животных после введения переносимых доз препарата. При этом деструктивных необратимых изменений в органах и тканях животных не обнаружено.

Обобщенные результаты определени,- суб/рочнческой токсичности и кумулятивных свойств дисульфоцида ia лабораторных животных н ягнятах представлены в таблице 2,

Таблица 2

Данные определения'субхронн» es ¡он toi :мчнссти н

Вид животных ЛДзоМг/кг Коэффициент кумуляции

Кролики 30018 7,6

Белые крысы 13685 4,6

Ягнята 36305 11,2

Экспериментально подтверждено, что дисульфоцнд слаботоксичный препарат и при введении в желудок кроликам и япптам не проявляет кумулятивных свойств. Однако в опытах на крысах регистрировали слабо выраженную кумулятивность.

2.2.3. Определение раздражающего и аллергизирующего (действия дисульфоцида

С целью определения раздражающего действия дисульфоцнд наносили в виде кашицы на воде на безволосые участки кож'и на спине 10 кроликов-альбиносов н 10 белых крыс и в нативнои виде вноенли в конъюнктивальный мешок одного глаза 5 кроликов.

Реакцию кожи регистрировали через одни и 18 часов н оценивали в сравнении с симметричным участком кожи того же животного. За время наблюдения в последующие 7 дней каких-либо функциональных нарушений кожи не отмечено.

После нанесения днсульфоцида на слизистую глаза наблюдавшаяся гиперемия сосудов исчезала спустя 20-24 часа с момента нанесения. Отека слизистой оболочки и выделений из глаза не регистрировали.

Изучение аллергизирующего действия днсульфоцида проведены при на 10 морских спинках с использованием гистамннового шока. Доза гнстамнна была подобрана так, чтобы вызывала у 50% животных гистаминовый шок со смертельным исходом.

Провеяениммн испытаниями установлено, что время наступления гистаминового ; ;ока в контрольной группе равнялась 17,5-20,2 мин, : в опытной - 17,3-"7,5±0,8 мин. Гибель животных в обеих группах наступала через 51-65 мин; т. Животные, оставшиеся в живых, приходили в исходное состояние спус ч 3,5-4 часа с момента введения гнстамнна.

Обобщенный анализ проведенных исследований свидетельствует, что дисульфоцидне обладает раздражающим и аллергнзирующнм действиями.

2.2.4. ¡¡¡учение влияния дисульфоцида на вегетативную нервную систему животных

В первой серии опытов было изучено влияние дисульфоцида на моторику отрезка тонкой кишки кролика (ТКК) с последующим отмыванием. Было установлено, что днеульфоцид при концентрации 1х!05г/мл в водном растворе за три минуты действия увеличивает па 37% амплитуду мышечных сокращений ТКК, на 3% снижает частоту мышечной фнбриляции и обуславливает значительное снижение тонуса препарата ТКК. Устранение действия препарата отмыванием восстанавливало амплитуду сокращений, однако оставались пониженными частота сокращений и тонус препарата ТКК.

Фармакологические изучения действия дисульфоцида на холинэнергнческую парасимпатическую и симпатическую инервашш гладкой мускулатуры показали, что днеульфоцид вызывает существенную активизацию деятельности гладкой мускулатуры, которая пыражается в сенсибилизации холннорецептороп к медиатору ацетилхолину и снижении чу ветви гельносгн к адреномиметнку аминазину. Наиболее значительные изменения претерпевают М-холинорецелторы, о чем свидетельствуют эксперименты с использованием атропина и тетраэтиламмоння.

2.2.5. Изучение отдаленных последствий днсульфоцида

В опытах по оценке мутагенной активности дисульфоцида определяли мутагенность как самого соединения, так и возможных его метаболитов, образующихся в организме животных. При этом установлено, что колоний

ревертантob в опыте по сравнению с контролем было меньше в 23,2-36,6 раза при действии исходного соединения и ¡7-32 раза при дсйк-шип метаболитов.

В экспериментах по определению эмбрио-гонадотоксичности и тератогенности дисульфоцида клиническое состояние, кратность спариваний животных, получавших препарат, не отличались от ннтактных крольчих. В то же время в опытной группе оплодотворенными оказались 94,4 крольчих, а в контрольной - 81,8%. Следовательно, курсовое поступление дисульфоцида в организм самок и самцов кроликов не оказывает отрицательного воздействия на овогенез и спермогенез животных. Этот вывод подтвержден данными развития плодов опытных крольчих, получавших препарат в течение 30 и 4i дней до н после оплодотворения. Количсстио зародышей у крольчих обеих ipynn существенно не отличались. Средняя масса плодов крольчих опытных групп были на 6,9-19,4%, а плаценты - на 12,5-17,5% больше, чем у крольчих контрольной группы. После окрола потомство животных всех групй отличий в развитии не имели.

Обобщенный анализ результатов проведенных исследований позволяет констатировать, что д.'сульфоцнд не обладает мутагенным действием, а также эмбрио- и гонатотокск 'лостью и тератогениостью.

2.2.6. Определение остаточного количества дисульфоцида в оргаиихме овец и его влияние на качество мяса

Результаты качественного определения дисульфоцида в биосубстратах органов и тканей животных показали, что препарат после внутрижелудочного введения обнаруживается в течение 36 часов в экстрактах из легких, исче-нн, почек и моче, а по истечении 72 часов - следы препараты в экстрактах печени и почек.

При определении концентрации дисульфоцида, ннгибнруюшей рост бактерий в биосубстратах органов и тканей животных установлено, что несмотря на качественное обнаружение препарата в организме до 36 часов, его антимикробная концентрация регистрируется лишь в первые 12-15 часов.

Следовательно введение дисульфоцида в дозе 60 мг/кг массы через каждые 12-15 часов обеспечивает непрерывное поддержание его бактерицидного действия в организме подопытных животных. Следует отметить, что ни в один срок исследований в экстрактах из мышечной ткани дисульфоцид не обнаруживался.

Результаты иетеринарно-санитарной экспертизы и бактерио-логических исследований мяса, полученного после убоя овец, обработанных дисульфоцидом, свидетельствуют о его доброкачественности. Эти данные подтверждены бнота<сикологическнми исследованиями проб мяса. Отклонений в клиническом состоянии, развитии крысят и патологических изменений в их внутренних органах после 30-дневного скармливания мясо подопытных и контрольных овец не регистрировали. Мясо подопытных овец не теряло • доброкачественности и при хранении в течгние 30 суток (срок наблюдения) в морозильнике бытового холодильника.

Следовательно, данные хроматографического исследования экстрактов из органов н тканей, а также данные ветеринарно-саннтарной экспертизы продуктов убоя подопытных животных позволяют констатировать, что убой животных на мясо возможно через 5 суток после последнего введения дисульфоцида. Обнаружение препарата в печени, почках и моче дает основание предполагать, что препарат, в основном, выводится из организма через печень и почки.

2 2.8. Пучение влияния дисульфоцида на клинический статус, гематологические и биохимические показатели крови животных

Схема и результаты экспериментов по изучению влияния дисульфоцида на клинический < татус животных обобщены и представлены в таблице 3.

Таб;Вща 3

Тхе! а и результаты определения клинического статуса

№ № гр. Вид опытных живогны X Кол-во животных в группе Режим применения препарата Клиническое состояние животных после курсовой обработки

1. Белые мыши 10 160 мг/кг одни раз вдень в течение 15 суток, внутрижелудочно За период наблюдения (15 сут) отклонений в общем состоянии не отмечено

2. Кролики 5 В желудок 350 мг/кг в течение 15 суток один раз вдень Отклонении в общем состоянии животных не регистрировали При пат.анатомнчес-ком вскрытии кроликов через 1 и 7 суток после курса введения препарата макроскопм-ческих изменений в органах не обнаружено

3. Кролики 5 В желудок. 750 мг/кг в течение 15 суток один раз в день

4. Кролики 5 В желудок 1500 мг/кг

5. Ягнята 5-днев-ные 5 В желудок 100 мг/кг одни раз в день в течение 15 суток За период наблюдения (25 сут) отклонений в общем состоянии и патологоанатомических изменений в органах не регистрировали

6. Ягнята 30-дневные 5 В желудок 1500 мг/кг один раз в день в течение 15 суток

Анализ представленных данных свидетельствует, что курсовая обработка днеульфоцндом не вызывает достоверных изменений гемограмме клинически здоровых животных. Зарегистрированное увеличение Т- и В-лимфоцитов в

крови ппытнм* животных по ср2г::;г:::;:с с ::о::тролгг.;,. также достоверное увеличение фагоцитарной активности лейкоцитов и бактерицидных свойств сыворотки крови (соответственно на 20,5 и 41,6%; Р<0,05), на наш взгляд, оценивается как признак повышения некоторых факторов естественной резистентности организма у данных животных.

Курсовое введение дисульфоцида также не приводит к статистически значимым изменениям уровня общего белка, его фракций и кислотной емкости в сыворотке крови животных. Эти показатели у опытных животных были близки к аналогичным данным у контрольных (Р<0,2).

Таким образом, клшшко-лабораторные исследования животных показали, что курсовая обработка дисульфоцидом в дозе 0,1-0,5 ЛД}0 не оказывает отрицательного влияния на основные гематологические, биохимические показатели и естественную резистентность организма животных.

2.2.9. Результаты обработки оптимальных лечебно-профшактичеекчх доз дисульфоцида при желудочно-кишечных болезнях ягнят

2.2.9.1. Отработке оптимальной терапевтической дозы дисульфоцида при колибактериозе ягпят

Схемы и результаты экспериментов обобщены в таблице 4.

Полученные данные показали, что выздоровление больных животных при обработке дисульфоцидом регистрируется на 4-5-е сутки при пероральном введении препарата из расчета 60 мг/кг массы теля При этом суточная вводимая одному животному доза дисульфоцида составляла 180-500 мг/гол, что равняется 1/27-1/16 ЛД50 при однократном введении препарата. При повышении дозы препарата до 80 и 100 мг/кг результаты лечения существенно не отличались. Сравнительный анализ результатов опыта на 54 ягнятах по изучению терапевтической эффективности дисульфоцидом в производственных условиях с аналогичным» данными при применении левомицетина и норсульфазола, тетрациклина, согласно наставлениям по их применению, показал, что дисульфоцид при колибактериозе острой и подострой формы течения обеспечивает сохранность 94-100% животных и по эффективности на 11,3-27,8% превосходит данные, полученные при применении вышеуказанных препаратов.

Таблица 4

Схема и результаты экспериментов по отработке оптимальной терапевтической дозы днеульфицида на ягнятах

(при пероральном введении).

Л* групп количество животных в группе Состояние животных до опыта гсжим лечении (Внутрнжслудочно з виде раствора! Результаты лечения

1 6 Угнетение, гиподинамия, позывы к корму снижены; диарея - кал жидкий с примесями елнго. а иногда и крови, неприятным запахом; температура тела повышена до 40,54! С. Животные гибнут на 3-4 сутки после появления признаков заболевания. При патологоан атомическом вскрытии -катаральный гастрорэнтерколит, перерождение печени, мелкоточечные кровоизлияния на миокарде, почках. Лабораторно подтвержденный диагноз -колибактериоз, осложненный диплококковый септицемией. Дисульфоцид из расчст~ жиьоп массы два раза и день до клинического выздоровления. Курс лечения 12-13 суток. Выздоровление 3-х ягнят на 12-13 сутки лечения. 3 ягненка пали на 2,4 и 5 с\ч кп опыта.

2 6 Дисульфоцид из расчета 40 мг/кг живой массы два раза в день до клинического выздоровления. Курс лечения 9 суток. Выздоровление 5-ти ягнят на 8-9 сутки лечения. Один ягненок пал на 4 ечтки опыта.

3 6 Дисульфоцид из расчет 60 мг/кг живой массы дм раза в день до клинического выздоровления. Курс лечения 5 суток. Выздоровление всех опытных животных на 4-5 сутки оплыта.

4 6 Дисульфоцид из расчета 80 мг/кг живой массы дна раза в день до клинического выздоровления. Курс лечения 5 суток. Выздоровление всех опытных животных на 4-5 сутки оплыта. Рецидивов заболевания не было.

5 6 Дисульфоцид нз расчета 100 мг/кг живой массы два раза в день до клинического выздоровления. Курс лечения 5 суток. Выздоровление всех опытных животных на 4-5 сутки оплыта. Рецидивов заболевания не было.

6 б Лево.чицитин согласно наставлению по применению от 23.12.35 (Контроль 1). Курс лечения 9 суток. Выздоровление 4-х ягнят на 7-9 сутки лечения. Два ягненка пали на 3 и 5 сутки опыта.

6 Тетрациклин согласно наставлению яэ применению, ¡6.10.85 (Контроль 2). Курс лечения 8 суток. Выздоровление 5 ягнят на 5-8 сутки лечения. Один ягненок пал на 3 сутки опыта.

2.2.9.2. ОтрпбсФКО 'т'""'и,и/я"; нппфиткпшч 'ской дозы дисульфоцида при желудочно-кишечных заболеваниях

Схема и результаты двух серий опытов обобщены и представлены в таблице 5.

Во всех случаях заболевших животных подвергали лечебной обработке дисульфоцидом, при гибели ягнят проводили патологоанатомическое вскрьт г и бактериологическое исследование материала с целью установления диагноза.

Анализ полученных данных свидетельствует, что внутрижслудочное введение дисульфоцида условно здоровым ягнятам на фоне проявления кол »бактериоза среди молодняка овец не обуславливает никаких отклонений в их клиническом состоянии. Выпаивание в виде водного раствора из расчета 60 мг/кг массы тела н вскармливание в смеси с концентрированным кормом из расчета 80 мг/кг массы тела одни раз в день в течение 3-х суток обеспечивает максимальную проф .лантику желудочно-кишечные болезни среди ягнят различного возраста, (ри заболевании 37,9-46,2% молодняка не подвергавших обработке лечебными фепаратами.

Таким образом, экспериментальными исследованиями с использованием 350 ягнят с 5-дневого возраста установлена достаточно высокая лечебно-профилактическая эффективность дисульфоцида при колибактериозе молодняка овец по сравнению с аналогичными показателями ранее известных лечебных средств левомицегина, норсульфазола и тетрациклина.

ВЫВОДЫ

1. Для внедрения в ветеринарную практику предложен новый хнмиотерапевтический препарат дисульфоцид, обладающий стабильными антимикробным» свойствами по отношению грамположнтельных .; грамотрицательных бактерий (кишечная палочка, сальмонеллы, стафилококки, колостридии перфингенс и др.), хламидио и вирусостатическим действием при концентрации его - 10-30 мкг/мл растворителя.

2. По токсикологическим параметрам дисульфоцид относится к соединениям III класса токсичности. ЛД«о при однократном введении: подкожно - белым мышам 1667 мг/кг, внутрижелудочно белым крысам - 3000, кроликам - 3833, ягнятам 2-5-дневного возраста - 3250,2-3-месячного возраста

- 6000 мг/кг массы тела. ЛД!0 хроническая для белых крыс - 13685,4; кроликов

- 30018; ягнят - 36385 мг/кг массы тела. Препарат не обладает кумулятивными свойствами. Коэффициент кумуляции при внутрнжелудочном введении лабораторным и сельскохозяйственным животным составляет 4,6-11,2 в зависимости от вида и возраста животных.

3. Дисульфоцид при курсовом 30-дневном поступлении в организм не обладает мутагенным, эмбриэтоксическим и тератогенными

Таблица5.

Схема и рси'льтаги отработки оптимальной профнлат'ичсекой л<ны дпсульфоиила при к» л »бактериозе ягнят.

Л» группы Кол-во животных е группе (гол) Режим обработки животных. Ре«улыаты экспериментов (наблюдение в течение месяиев).

Ягнятам 5-21 дневною cnipacia ш,н|;шш1.]ц п виде полною puciпора.

1 13 из расчета 40 мг дисульфоцида на кг массы тела один раз в день в течение 2-х еу <vk. "Ь-'олснасмость код»бактериозом - 38,5

2 13 ш расчета 60 мг дисульфоцида на кг массы тела один раз в день в течение 2-х срок. Заболеваемость колибапериоюм - 15.4 %.

3 13 из расчета 80 мг дис> льфишиа на кг массы тела один раз в лень в течение 2-х суток. Заболеваемость колиабактериозом -15,4

4 13 из расчета 40 мг дисульфоцида на кг массы тела один раз в день в течение 3-х суток. Заболеваемость колиабактернозом - 23.0 %.

5 13 из расчета 50 мг дисульфоцида на кг массы тела один раз в день в течение 3-х суток. Заболеваемость колиабакгериозом • 7,7 "«.

6 13 из расчета 60 мг дисульфоцида на кг массы тела один раз и день в течение 3-х суток. Заболевании хпшт с признаками диареи не пегистр иро ВАЛ н.

7 13 из расчета 70 mi дисулыЬошша на м массы тела один раз в день в течение 3-х суток. Заболевания яшят с при Жаками диареи не per не грнровалн.

8 13 из рачета 80 мг дисульфоцида на кг массы тела один раз в день в течение 3-х суток. Заболевания ягнят с признаками диареи не регистрировали

9 13 Животных не обрабатывали лечебными препаратами. Заболели 46.2 в • ai мят с признаками диареи.

Ягнятам 40-61) дневною nojpatia вскармливали в смеси с копигтрнровапныч кормом.

1 27 из расчета 40 мг/кг один раз в день в течение 3-х суток. Заболеваемость колибактериотом -25,9 •«►.

2 29 из расчета 60 мг/кг один раз в день в течение 3-х суток. Заболеваемость кол и бактериозом - 6,9 */•.

3 25 из расчета 80 мг/кг один раз а день в течение 3-х суток. Заболевание колиОактериозом ие -»регистрировано.

4 27 из расчета 100 мг/кг один раз в день в течение 3-х суток. Заболевание кол иба стер иозом не зарегистрировано.

5. 29 Животных не обрабатывали профилактическими препаратами. Заболели 17,9% ягнят.

свойствами. Не мутпгеино как само исходное соединет:так и продукты его

мсТои«1иТ|ЧмССКОГО ПрСпртцСмил.

4. Дигтелыюе введшие (30 суток) длсульфоцнда в дозе 1/2 ЛД:о не оказывает отрицательного воздействия на клштческин статус, гематологические и бкохтшчссхие показатели организма и не вызывает патологических необратимых изменений в органах животных; вызывает активизацию деятельности гладкой мускулатуры, воздействуя на Н- и М- холинорецепторы.

5. При внугрижелудочном введении дисульфоцид в бшетеришишон доз« обнаруживался в печени, почках и ыоче в течение 15-18 часов, что позволяет рекомендовать применял, препарат больным животным два раза п день.

6. По результатам органолептических, биохимических, физико-химических, баэтернологнчсских, биотокснкологических и хроматографических исследований убой животных на мясо возможен через 5 суток поме последнего введения дисульфоцида.

7. Установлено, что оптимальной терапевтической дозой дисульфоцида при колибактсриозе к; подшка овец является 60 мг/кг массы тела два раза и день внутрь в виде ра. твора до полного клинического выздоровления. Срок лечения при колчбакге,>иозе 4-5 дней

Клиническое выздоровление сопровождалось норматизацией функции желудочно-кишечного тракта, предупрелсдением воспалительных процессов, повышение»,; нсспсцпфической рсзистслтостч. Терапевтическая эффективность ссстаалхог 94-100% в зависимости от формы проявления колибактерио-за.

8. Профиликтческая эффективность дисульфоцида при колибакгериоче ягнят обеспечивает при выпаивании дисульфоцида в виде раствора из расчета 60 мг/кг массы тела один раз в течение 3 суток, а при даче с кормом дисульфоцид обеспечивает защиту япшт от заболевания колибактериозом в дозе 80 мг/кг массы тела один раз в сугки в течение тех суток.

Профилактическая эффективность составляла 95-100%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней ягнят предложен новый химиотерапевтический препарат дисульфоцид согласно рекомендации, утвержденной отделом ветеринарнн МСХиП Марий-Эл, 18 января 1999 г.

2. По результатам изучения свойств дисульфоцида разработано «Временное наставление по применению в ветеринарии», утвержденное ГУВ КМ РТ, 10 февраля 1999 г.

СПИСОК ТРУДОВ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Курамшнна В.А. Изучение антимикробной активности препарата МК-95 // Материалы международной конференции, посвящ. 125-летию академии, зань, 1998,-4.1.-С. 52.

2. Курамшнна H.A., Макаев Х.И. Изучение токсикологических рамез ров препарата МК-1095. Там же. - Ч. 11. - С. 137.

3. Курамшнна В.А., Макаев Х.Н., Ильина А.П. Лечебно-офилактнческая эффективность препарата МК-1095 при желудочно-шечных болезнях микробного характера у ягнят // Материалы науч. произв. нф. Казань, 1999.-С. 27.

4. Курамшнна В./ . Определение остаточного количества препарата МК-95 в организме о ¡к i и его влияние на качество мяса. // Материалы ждународной на-чж производ. коиф. по вопросам ветеринарии и шотноводства, посвк'Д. 70-летию зооннж. факультета, Казань, 2000. - Т. 2. Г. 79.

5. Курамшнна В.А. Терапевтическая эффективность препарата МК-95 при колибактериозе ятят^/Там же. - Т. 1. - С. 229.

6. Макаев Х.Н., Равилов А.З., Курамипша В.А. и др. Результаты зработкн нового иротнвомнкробного средства при респираторных и ■лудочно-кишечных заболеваниях (в печати).

¡Kä3 115, Подписано в ¡¡ъчзть 23.Ü5.2C0Ö. Oopi-at ЬО х ti'f /16 ¡1«™; ICÜ aus. X ii.л. 0&сет. участок KTAß«. ¡швакь-'иОи'.Ч