Фармако-токсикологическая характеристика и терапевтическая эффективность имидокарба 5% при бабезиозе собак

Зверев, Артем Александрович

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологическая характеристика и терапевтическая эффективность имидокарба 5% при бабезиозе собак

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Зверев, Артем Александрович Москва 2008 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 16.00.04

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Фармако-токсикологическая характеристика и терапевтическая эффективность имидокарба 5% при бабезиозе собак

На правах рукописи

ООЗДЬ со^

ЗВЕРЕВ АРТЕМ АЛЕКСАНДРОВИЧ

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИМИДОКАРБА 5% ПРИ БАБЕЗИОЗЕ СОБАК

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва -2008

1 2 ДЕК 2008

003457832

Работа выполнена в отделе качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств для животных и биологически активных препаратов Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»)

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Абрамов Владислав Евгеньевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Уразаев Д.Н.

кандидат биологических наук Савенкова Е. Е.

Ведущая организация - Всероссийский научно - исследовательский институт гельминтологии имени К.И. Скрябина (ВИГИС) г. Москва

Защита состоится йГ^уу/^^У^2008 г.1ма заседании диссертационного совета Д 220.011.01 в Федеральном государственном учреждении «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») по адресу: Россия, 123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, д. 5

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов.

Автореферат разослан « >

2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат ветеринарных наук, доцент, Заслуженный ветеринарный врач РФ

'зырев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Среди сезонных паразитарных болезней собак особое место занимает бабезиоз - специфическое трансмиссивное заболевание, вызываемое паразитированием в эритроцитах одноклеточных паразитов - Babesia canis. Возбудитель и продукты его жизнедеятельности являются первым патогенетическим фактором, оказывающим аллергическое воздействие на организм животного.

Клинически заболевание проявляется лихорадкой, бледностью слизистых оболочек, нарушением функций почек и печени, расстройством деятельности сердечно-сосудистой и дыхательной систем, что приводит к полиорганной недостаточности, заканчивающейся, как правило, гибелью животного.

Бабезиоз собак широко распространено во многих странах Европы, Азии, Африки и Америки.

Возбудитель бабезиоза собак - Babesia canis, впервые был обнаружен в Италии Pianom и Galli-Valerio в 1892 году, а в России B.JL Якимовым и B.JI. Любинецким в 1909 г. (A.B. Князевский, 1956).

Переносчиками заболевания являются иксодовые клещи Dermacentor pictus, Dermacentor marginatus, Rhipicephalus sanguineus, Rhipicephalus turanicus.

Химиотерапевтические препараты при бабезиозе собак стали применяться вскоре после установления этиологии и раскрытия сущности самого заболевания. С этой целью отечественными и зарубежными исследователями против B.canis испытано значительное количество лекарственных препаратов различного химического состава. (В.Л. Любинецкий, 1909; В.Л. Якимов, А.Д. Рыбкина, 1965; Б.В. Шумилов, 1971; L.S.Jacobson, 1996 и др.)

Однако большинство из апробированных средств оказалось малоэффективными или высокотоксичными. Лекарственных средств, обладающих длительным профилактическим действием, до настоящего времени не найдено.

Проанализировав мировой опыт лечения бабазиоза собак, Б.А. Тимофеев и И.Г. Карпенко (1977) рекомендовали для применения при бабезиозе плотоядных Азидин (Беренил, Верибен), Трипафлавин, Гемоспоридин, Диамидин, Акаприн, Пи-роплазмин.

Как сообщает ряд исследователей, Беренил и Азидин стерилизуют организм животного от возбудителя, т.е. обеспечивают полное исчезновение паразитов из крови через 48 часов после введения лекарственных средств, а также профилактируют заболевание при введении за 5-17 дней до заражения (Д.В. Князевский, 1956; А.Д. Рыбкина, 1965; Д.А. Страшнов, 1975; В.П.Лебедева, 1992; В.О. Новгородцева, 1999 и др.). По сведениям других авторов, введение названных препаратов не обеспечивает стерилизацию организм собак от B.canis (Б.В.Шумилов,1971).

За рубежом при кровепаразитарных болезнях животных с положительными результатами применяют препараты на основе имидокарба (Eureby J., Moreau U., Chauve et.al., 1980; Ogunkova A.B., Adeyanjn J.B., Aliu Y.O., 1981; Uilenberg G. et.al., 1981). Однако сведения об использовании имидокарба для терапии бабезиоза собак весьма малочисленны, а данных в отношение его профилактического действия практически нет.

Это и определило выбор темы, суть которой заключается в разработке нового лекарственного средства на основе имидокарба для лечения и профилактики бабезиоза собак.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось разработка,

изучение и внедрение в практику ветеринарии для лечения и профилактики бабезиоза собак нового лекарственного средства в форме раствора для инъекций на основе имидокарба.

В задачи исследований входило:

- обосновать состав лекарственного средства на основе имидокарба, разработать показатели качества и методы контроля; изучить стабильность Имидокарба 5% в процессе хранения;

- изучить острую и субхроническую токсичность, иммунотоксические, аллергезирующие, местно - раздражающие и эмбриотропные свойства лекарственного средства в опытах на лабораторных животных и собаках;

- исследовать фармакокинетику имидокарба в организме собак после применения Имидокарба 5%;

- определить лечебно-профилактическую дозу и схему применения Имидокарба 5% при бабезиозе собак ;

- изучить терапевтическую эффективность Имидокарба 5% при спонтанном бабезиозе собак в период сезонных вспышек заболевания;

- изучить профилактические свойства Имидокарба 5% при экспериментальном бабезиозе щенков собак;

- разработать и представить для согласования и утверждения в установленном порядке проект инструкции по применению при бабезиозе собак лекарственного средства на основе имидокарба.

Научная новизна. Впервые разработано новое лекарственное средство на основе имидокарба дипропионата, обладающее высокой терапевтической эффективностью при бабезиозе собак и менее выраженной гепатонефротоксичностью, чем применяемые в ветеринарных клиниках противобабезиозные препараты. Определены показатели качества и методы контроля Имидокарба 5%, изучены его физико-химические, фармако-токсикологические свойства и лечебно-профилактическая эффективность при бабезиозе собак.

Практическая значимость работы. Для применения в клинической практике лечения бабезиоза собак предложено лекарственное средство на основе имидокарба дипропионата в форме раствора для инъекций под рабочим названием - Имидокарб 5%. Определены показатели качества лекарственного средства, разработаны методы их контроля, установлена оптимальная лечебно-профилактическая доза и схема применения лекарственного средства при бабезиозе собак.

На основании результатов исследований и обобщения полученных данных разработан проект инструкции по применению лекарственного средства на основе имидокарба (торговое название Фортикарб) при бабезиозе собак. (Утверждена Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору Минсельхоза РФ 22.05.2008 г).

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены

на:

- заседаниях Ученого совета ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (г. Москва; 2004, 2005,2006, 2007 гг.);

научно-практической конференции: «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС, г. Москва, 2006.

Положения, выносимые на защиту:

- состав, показатели качества и методы контроля, результаты изучения

стабильности в процессе хранения лекарственного средства в форме раствора для инъекций на основе имидокарба;

- характеристика фармако-токсикологических свойств Имидокарба 5% по результатам опытов на лабораторных животных и собаках;

- результаты изучения фармакокинетики имидокарба в плазме крови собак после применения Имидокарба 5%;

- результаты изучения лечебно-профилактической эффективности Имидокарба 5% при спонтанном и экспериментальном бабезиозе собак;

- практические предложения по стандартизации, контролю качества и применению Имидокарба 5% при бабезиозе собак.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 126 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования и обсуждение их результатов, выводы, практические предложения, список литературы.

Работа иллюстрирована 35 таблицами и 1 рисунком. Список использованной литературы включает 179 источников, в том числе 92 зарубежных. Приложение на 8 листах.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Работа выполнена в 2003-2008 гг. в отделе качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств для животных и биологически активных препаратов ФГУ «ВГНКИ», в Благотворительном Фонде Защиты животных «БИМ», на базе ветеринарных клиник города Москвы и Московской области

Материалом для проведения научно-исследовательских работ по указанной теме служил препарат на основе имидокарба, разработанный совместно с сотрудниками лаборатории качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств для животных ФГУ «ВГНКИ».

Имидокарб 5% раствор для инъекций представляет собой стерильную прозрачную жидкость светло-желтого цвета, содержащую в 1 мл в качестве действующего вещества 50 мг имидокарба в виде дипропионата, а в качестве вспомогательных веществ - поливинилпирролидон, бензиловый спирт, пропионовую кислоту и воду для инъекций.

Для стандартизации и контроля качества Имидокарба 5%, а также определения гарантированного срока годности были использованы стандартные методы определения качества лекарственных средств, предъявляемые Государственной фармакопеей (XI издание, 1987г) к растворам для инъекций, включая внешний вид, окраску, прозрачность, рН, наличие механических включений, подлинность и содержание действующего вещества, основного вспомогательного компонента, стерильность и пирогенность. Для количественного определения действующего вещества препарата и его подлинности, а также количественного определения бензилового спирта был предложен метод с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Изучение стабильности препарата проводили в условиях естественного хранения препарата при комнатной температуре в течение 3 лет. Оценку

качества Имидокарба 5% в процессе хранения проводили по всем установленным для предлагаемого препарата показателям качества.

Острую токсичность лекарственного средства изучали на 42 белых крысах обоего пола, массой 200-220 г. и 42 белых мышах-самцах массой 18-20 г. Крысам опытных групп препарат в форме 10% раствора имидокарба вводили в желудок при помощи иглы-зонда в дозах 500; 1000; 2000; 2500; 3000 и 4000 мг/кг (по действующему веществу - ДВ) дробно с интервалом 30 минут в 2-3 приема.

Мышам испытуемый препарат при разведении водой для инъекций вводили подкожно в дозах 25; 50; 100; 150; 175 и 200 мг/кг массы животного (по ДВ).

Животным контрольных групп вводили воду для инъекций соответственно перорально или подкожно в сравнимых объемах.

Каждую дозу препарата испытывали на 6 особях. Наблюдение за клиническим состоянием крыс и мышей проводили в течение 14 суток после введения препарата; при этом отмечали их общее состояние и поведение, отправление естественных функций, учитывали остроту течения токсикоза и время гибели. Токсикологические параметры рассчитывали графическим методом Миллера, Тейтнера (M.JI. Беленький, 1963; A.A. Ступников, 1975), степень опасности лекарственного средства оценивали согласно ГОСТ 12.1.007 -76.

Для оценки субхронической токсичности Имидокарба 5% использовали 60 мышей-самцов массой 18,9-23,1 г.

Препарат вводили подкожно в течение 15 суток в нативном виде и в разведении водой для инъекций (поочередно с одной и другой стороны туловища) по следующей схеме:

Таблица 1.

Группа животных Доза ДВ, мг/кг (часть ЬО50, установленной в остром опыте) Количество животных в группе

I 55,5 (0,4) 10

11 22,2 (0,15) 10

III 11,1 (0,08) 10

IV 5,55 (0,04) 10

V 2,22 (0,015) 10

VI контроль (вода для инъекций) 10

Контрольным животным подкожно вводили воду для инъекций в объеме 0,5

мл.

В течение опыта мышей взвешивали, оценивали поведение, учитывали время гибели. Павших животных подвергали патологоанатомическому вскрытию.

В конце опыта у декапитированных мышей отбирали пробы крови для определения морфологических и биохимических показателей. Взвешивали основные внутренние органы и рассчитывали массовые коэффициенты.

Морфологические показатели периферической крови определяли общепринятыми методами, биохимические - с помощью полуавтоматического анализатора «ВюСЬепт БА».

Эмбриотоксические и тератогенные свойства Имидокарба 5% изучали в опытах на 60 белых крысах-самках, с точно установленным сроком беременности, которых разделили на 6 групп по 10 животных в каждой. Препарат разводили

водой для инъекций и вводили крысам внутримышечно с 1 по 6; с 7 по 14 и с 15 по 19 дни беременности в дозе 12 мг/кг массы животного (по ДВ).

Оценку эмбриотропных свойств препарата проводили согласно «Методическим указаниям по тестированию тератогенной активности химических веществ» (А.П.Дыбан с соавт., 1970) и «Методическим рекомендациям по доклиническому изучению репродуктивной токсичности фармакологических средств» (1997).

Иммунотоксические свойства Имидокарба 5% изучали на мышах линии СВА массой 18-20 г. В каждой опытной группе использовали по 10 мышей. Препарат вводили внутримышечно в дозе 4 мг/кг массы животного (по ДВ), растворителем служил 0,9%-ный раствор хлорида натрия.

Влияние препарата на антителообразование определяли методом локального гемолиза в геле. Мышей иммунизировали внутрибрюшинно 2% взвесью эритроцитов барана (тимусзависимый антиген) в объеме 0,5 мл, затем внутримышечно вводили Имидокарб 5%. На 4-е сутки извлекали селезенку и вычисляли индекс стимуляции (ИС), как отношение числа АОК (антителообразующие клетки) в опыте к числу АОК в контроле (введение только ЭБ).

Титры агглютининов в сыворотке крови определяли на 7 день после иммунизации мышей ЭБ и введения препарата в микроварианте прямой реакции гемагглютинации (в 96-луночных плоскодонных планшетах). Супрессивный индекс (СИ) вычисляли как соотношение результатов в опытной и контрольной группах.

Оценка действия лекарственных средств на клеточное звено иммунного ответа предполагает использование модельных систем, дающих представление о функциональной активности лимфоцитов Т-ряда. К таким тестам относится реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и определение количества ауторозеткообразующих клеток (ауто-РОК). В качестве эритроцитарного маркера в этом тесте применяли 1,5%-ную взвесь аутологичных эритроцитов.

Сенсибилизирующие свойства Имидокарба 5% изучали на белобоких морских свинках-самцах массой 300-350 г (в каждом тесте использовали по 6 животных). Сенсибилизацию морских свинок проводили путем однократного внутрикожного введения препарата в объеме 0,05 мл (150 мкг) в ухо за 12 дней до тестирования. Контрольным животным вводили в том же объеме растворитель (0,9% раствор №С1).

Для выявления сенсибилизации у морских свинок использовали конъюнктивальную, внутрикожную и эпикутанную пробы.

При конъюнктивальном тестировании сенсибилизированным и контрольным морским свинкам закапывали в правый глаз под веко каплю испытуемого препарата, а в левый глаз (контроль) вводили тем же способом растворитель. Реакцию учитывали через 15 минут (реакция немедленного типа) и через 24 часа (реакция замедленного типа). Оценку реакции проводили визуально под лупой при двукратном увеличении по балльной шкале: 0 - видимой реакции нет; 1 - легкое покраснение слезного протока; 2 - покраснение слезного протока и склеры в направлении к роговице; 3 - покраснение всей конъюнктивы и склеры.

При эпикутанном тестировании сенсибилизированным и контрольным животным на выстриженный участок боковой поверхности тела размером 2x2 Имидокарб 5% наносили ежедневно. Тестирование проводили после 10 и 20

аппликаций. Реакцию кожи оценивали через 15, 30 минут и через 24, 48, 72 часа в баллах по следующей шкале:

0 - видимой реакции нет; 1 -бледно-розовая эритема по всему участку или по его периферии; 2 - ярко-розовая эритема по всему участку или по его периферии; 3 -красная эритема по всему участку; 4 - инфильтрация и отек кожи; 5 -выраженная инфильтрация, очаговые изъязвления.

При внутрикожном тестировании подопытным и контрольным животным раствор изучаемого препарата вводили в объеме 0,1 мл внутрикожно, а растворитель в том же объеме на расстоянии 2 см.

Реакцию учитывали через 20-30 мин (немедленного типа), через 4-6 часов (немедленно-замедленного типа) и через 24-48 часов (замедленного типа) по следующим показателям: эритема, инфильтрат или отек, толщина кожной складки, некроз.

Кроме того, у декапитированных животных брали кровь и проводили непрямую реакцию дегрануляции тучных клеток и подсчет абсолютного количества эозинофилов в крови. Реакцию дегрануляции тучных клеток оценивали как отрицательную, если процент дегранулированных тучных клеток не превышал 10.

Переносимость и субхроническую токсичность Имидокарба 5% изучали в виварии клиники «Шанс» (Москва) на 8 беспородных, собаках обоего пола в возрасте от 4 до 6 лет.

Подопытных животных разделили на 2 группы по 4 головы в каждой. Препарат вводили собакам внутримышечно 1 раз в сутки, в течение 7 дней. Первой группе в дозе 8 мг/кг массы животного (двукратная терапевтическая); второй группе - в дозе 10 мг/кг массы животного (2,5-кратная терапевтическая). В процессе опыта учитывали клиническое состояние собак, болезненность в месте введения препарата, аппетит, отправление физиологических функций, определяли морфологические и биохимические показатели крови.

Клиническое и биохимическое исследование крови проводили на биохимическом и гематологическом анализаторах «HUMALYZER JUNIOR» и «1ВХ MICROS» (Германия ) до введения препарата, на 4 и 8 сутки опыта.

Влияние лекарственного средства на функции печени оценивали по изменению активности гепатоспецифических ферментов: аланинаминотрасферазы (AJIT), аспартатаминострасферазы (ACT), щелочной фосфатазы (ЩФ), гаммаглутамилтранспептидазы (ГГТ), а также концентрации глюкозы в сыворотке крови; на функции почек - по изменению сывороточных концентраций мочевины и креатинина, а также активности амилазы.

Изучение фармакокинетики имидокарба проводили на 4 беспородных собаках массой 14-17 кг. Препарат животным вводили однократно, внутримышечно в дозе 4 мг/кг. Кровь брали из периферических вен через 15, 30, 45 минут и далее через 1, 3, 6, 9,12, 15,18, 21,24,48, 72, 96 и 120 часов после введения.

Для определения имидокарба в плазме крови собак использовали: жидкостной хроматограф высокого давления Bischoff с УФ-детектором Lambda 1000. Принцип метода заключается в экстрагировании действующего вещества из проб плазмы крови соляной кислотой с метанолом, переэкстракции в диэтиловый эфир, выщелачивании, упаривании экстракта и хроматографировании на жидкостном хроматографе высокого давления с использованием обращеннофазовой колонки и компьютерной программы обработки данных Мультихром (версия 1.52).

Изучение профилактических свойств Имидокарба 5% при экспериментальном

заражении щенков собак В саше проводили на 10 спленэктомированных беспородных щенках в возрасте 2-3,5 месяца, массой от 3,5 до 4,7 кг в ОПХ «Манихино» ФГУ «ВГНКИ». Животных разделили на 4 группы (две опытные и две контрольные) по 2 особи в опытных и по 3 в контрольных группах. За 15 и 30 суток до экспериментального заражения бабезиозом щенкам опытных групп ввели внутримышечно Имидокарб 5% в дозе 4 мг/кг массы животного. Двух щенков контрольной группы (по одному на каждый срок опыта) оставили для контрольного заражения, а на четырех оставшихся контрольных щенках (по два на каждый срок опыта) на 5 сутки ставили биопробу (вводили кровь от щенков опытной группы, после введения им Имидокарба 5%).

Заражение одного щенка контрольной группы и двух животных опытной группы на каждый срок исследования (15 и 30 день) проводили внутривенным введением крови, полученной от больных животных со степенью поражения эритроцитов 30 на 1000 и 57 на 1000 соответственно, в дозе 3 мл на животное.

Через 2-3 суток после каждого заражения делали мазки периферической крови из уха подопытных и контрольных животных для обнаружения бабезий. На 5 сутки после заражения у щенков опытной группы брали кровь для биопробы в количестве 3 мл, которую вводили животным контрольной группы. Далее на 3, 5, 10, 20 и 30 сутки после постановки биопробы проводили микроскопию мазков крови на предмет обнаружения бабезий.

Клинические испытания лечебно-профилактической эффективности Имидокарба 5% проводились с мая 2004 по октябрь 2008 года на базе ветеринарных клиник г. Москвы и Московской области.

Бабезиоз диагностировали путем микроскопических исследований мазков периферической крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе.

По результатам данных анамнеза и клиническому состоянию животных на момент обращения в клинику собак условно разделили на 3 группы, для каждой группы подобрали схему лечения.

1. Первая группа животных (299 голов - в начальной стадии болезни) без проявления специфической картины бабезиоза, на 1-2 день повышения температуры. После обнаружения в периферической крови паразитов животным вводили внутримышечно Имидокарб 5% в дозах 2 мг/кг (135 голов) и 4 мг/кг (164 головы) массы животного, а за 15 мин до применения Имидокарба 5% - Димедрол. Через сутки у собак повторно исследовали кровь и при наличии паразитов препарат вводили повторно в тех же дозах. Первые 2-3 дня лечения собакам вводили комплексные препараты витаминов и железа.

2. Вторая группа собак (343 головы с клиническими признаками бабезиоза)- время от начала заболевания до обращения в клинику составляло от 2 до 5 дней. Животным одновременно с постановкой диагноза проводили симптоматическую терапию. После подтверждения диагноза в лаборатории Имидокарб 5% вводили собакам внутримышечно в дозе 4 мг/кг массы животного. При обнаружении бабезий в мазках крови препарат применяли повторно в той же дозе. Дальнейшее симптоматическое лечение проводили в зависимости от клинического состояния животных.

3. Третья группа собак (99 голов с тяжелой формой полиорганной недостаточности) - время от начала заболевания до обращения в клинику составляло 57 дней. Для выведения животного из интоксикационного шока немедленно начинали проведение комплексной интенсивной терапии, включающей применение инфузиопных растворов, кортикостероидов, анальгетиков, спазмолитиков, диуретиков,

аналептиков и гормональных препаратов.

Имидокарб 5% применяли только после восстановления у собак стойкого положительного диуреза, внутримышечно в дозе 4 мг/кг массы животного.

Дальнейшая терапия животных после переболевания бабезиозом зависела от клинического состояния, вида осложнений, и включала применение витаминных препаратов, спазмолитиков, стимуляторов эритропоэза, гепатопротекторов и диуретиков.

С целью профилактики бабезиоза на базе БВЗЖ «Бим» в июне 2006 г. провели испытание Имидокарба 5% на 30 собаках, которых ежедневно выгуливали в парковой зоне (месте обитания переносчиков заболевания - иксодовых клещей). Препарат вводили внутримышечно в дозе 4 мг/кг (по ДВ). Наблюдение за животными вели ежедневно в течение 30 суток после применения препарата.

Результаты исследования

Для стандартизациии и контроля качества Имидокарба 5% были определены стандартные показатели, предъявляемые к инъекционным растворам (Государственная фармакопея XI, 1987).

Для идентификации и количественного определения имидокарба в Имидокарбе 5% методом ВЭЖХ были подобраны следующие оптимальные условия хроматографирования: подвижная фаза - смесь 0,02 М раствора калия фосфорнокислого однозамещенного и ацетонитрил в соотношении 180/850; температура термостатирования колонки - комнатная; скорость протекания элюента -0,6 мл/мин; длина УФ (ультрофиолетовой) - волны анализа - 240нм. Установлено, что при данных условиях время выхода пика имидокарба составляет 7,5 минут. Подлинность имидокарба подтверждалась по соответствию времени выхода пиков стандартного образца.

Для определения бензилового спирта в препарате были подобраны следующие оптимальные условия хроматографирования: подвижная фаза - смесь 0,02 М раствора калия фосфорнокислого однозамещенного и метанола в соотношении 1/1; температура термостатирования колонки - комнатная; скорость протекания элюента - 0,8 мл/мин; длина УФ - волны анализа - 258 нм. Установлено, что при данных условиях время выхода пика бензилового спирта составляет 5 - 7 минут.

Качественные и количественные характеристики и нормы Имидокарба 5% представлены в таблице 2.

Изучение стабильности Имидокарба 5% при естественном хранении в течение 3 лет изменений показателей качества лекарственного средства не происходило. Продуктов распада имидокарба в период установленного срока годности методом ВЭЖХ не обнаружено.

Таим образом, при соблюдении регламентированных условий хранения гарантированный срок годности Имидокарба 5%, в течение которого не происходит изменений заявленных показателей качества лекарственного средства, составляет 3 года со дня изготовления.

Таблица 2.

Показатели качества и стабильность Имидокарба 5% при хранении (комнатная температура, серия 01)

Наименование показателя Норма Исходный 6 мес. 12 мес. 18 мес. 24 мес. 30 мес. 36 мес.

Внешний вид Прозрачный раствор светло-желтого цвета Прозрачный раствор светло-желтого цвета

Прозрачность раствора Должен выдерживать сравнение с эталоном № I Выдерживает сравнение с эталоном № 1

Окраска Не должна по интенсивности превышать эталон № 46 Не превышает по интенсивности эталон № 46

Наличие механических включений Должно соответствовать требованиям инструкции Не обнаружены

Подлинность имидокарба дипропионата Время выхода пика образца должно соответствовать времени выхода пика стандарта Время выхода пика образца соответствует времени выхода пика стандарта

Подлинность бензилового спирта Время выхода пика образца должно соответствовать времени выхода пика стандарта Время выхода пика образца соответствует времени выхода пика стандарта

РН 4,5-5,5 4,79 4,88 4,89 4,87 4,88 4,86 4,87

Содержание имидокарба 4,5-5,5 г/100 мл 4,88 4,61 4,73 4,85 4,57 4,71 4,76

Содержание бензилового спирта 0,9-1,1% 0,97 0,99 0,95 0,98 0,94 0,99 0,93

Пирогенносгь Должен быть апирогенным Апирогенный

Стерильность Должен быть стерильным Стерильный

Острая токсичность Имидокарба при введении в желудок белым крысам и подкожном введении белым мышам.

Введение препарата внутрижелудочно в дозах 500 и 1000 мг/кг гибели крыс не вызывало. Повышение дозы до 2000-2500 мг/кг приводило через 20-30 минут к возникновению у части животных признаков острого отравления, проявляющихся атаксией, клоническими судорогами, отсутствием двигательной активности и резко выраженным угнетением, заканчивающимся гибелью части подопытных животных в течение 12-15 часов. У выживших животных клиническое состояние приходило в норму через 20-24 часа. После введения препарата в дозах 3000-4000 мг/кг симптомы угнетения развивались в течение 7- 10 минут и быстро нарастали. Препарат в дозе 4000 мг/кг вызывал гибель всех подопытных крыс.

Результаты исследования острой токсичности Имидокарба 5% при подкожном введении белым мышам показали, что препарат в дозах 25 мг/кг и 50 мг/кг не вызывал клинических признаков отравления, все животные этих групп остались живыми. При введении препарата в дозах от 100 до 200 мг/кг у белых мышей отмечали клинические признаки острого отравления, приводившие к гибели части подопытных животных. Картина интоксикации после введения Имидокарба 5% характеризовалась угнетением, нарушением двигательной активности, при этом выраженность указанных симптомов зависела от величины введенной дозы, гибель мышей наступала в течение первых суток после введения препарата.

Токсикологические параметры токсичности препарата, рассчитанные графическим методом Миллера, Тейтнера (1941), приведены в таблице 3.

Таблица 3

Параметры острой токсичности Имидокарба 5% для лабораторных животных

Вид животного/ способ введения Параметры токсичности, мг/кг (по ДВ)

ЬО0 1Л)16 ЬО50 ьп84 ЬБ.оо

Мыши/ подкожно 56,9 70,0 139,0 177,5 257,1

Крысы/ внутрижелудочно 1000 1600 2500 3400 4000

Согласно общепринятой гигиенической классификации Имидокарб 5% по степени воздействия на организм при однократном введении относится к умеренно опасным веществам (3 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76).

В опытах по изучению субхронической токсичности на белых мышах при ежедневном подкожном введении в течение 15 суток Имидокарба 5% в дозе 55,5 мг/кг/день на 3 сутки пало 70% мышей, а в течение 5 суток — пали все животные опытной группы.

При введении препарата в дозе 22,2 мг/кг/день на 5 сутки пало 30% подопытных мышей.

В процессе эксперимента было отмечено явное замедление динамики прироста массы тела у мышей, получавших препарат в дозах 22,2 и 11,1 мг/кг/день. В тоже время

показатель относительного изменения массы тела мало отличался от контрольного значения у мышей, получавших препарат в дозе 5,55 мг/кг/день, и он был, сравним с контролем и мышами, которым вводили Имидокарб в самой низкой дозе 2,22 мг/кг.

При введении Имидокарба 5% в дозах 22,2 и 11,1 мг/кг/день достоверному изменению подверглись значения массовых коэффициентов ряда органов. Имело место статистически достоверное повышение относительной массы печени и селезенки: соответственно для доз 22,2 и 11,1 мг/кг/день 61,90+2,78; 62,36+3,15 и 20,54±2,37; 13,60±1,33 против 50,99±0,63; 9,55+0,76 в контроле.

Введение препарата в дозах 5,55 и 2,22 мг/кг/ день не привело к изменению значений массовых коэффициентов всех исследованных органов.

Гематологическими исследованиями показано достоверное снижение количества эритроцитов и лейкоцитов, а также уровня гемоглобина при введении имидокарба животным в дозах 22,2; 11,1 и 5,55 мг/кг/день. Количество эритроцитов и содержание гемоглобина у мышей при введении препарата в указанных дозах составили соответственно 3,86+0,10 • 109/л; 3,83±0,15 • 109/л; 3,96±0,14 • 10?/л и 104,00+2,65 г/л; 103,40+5,61 г/л; 127,20±5,19 г/л против 4,53+0,18 • 10% и 127,20±2,60 г/л в контроле.

Препарат в дозе 2,22 мг/кг/день не вызвал у мышей достоверных изменений тестируемых показателей периферической крови.

Изменений лейкоцитарной формулы крови белых мышей при введении препарата во всех тестируемых дозах не наблюдалось.

Исследованиями биохимических показателей установлено, что препарат в дозе 22,2 мг/кг/день вызывал достоверное повышение активности ACT до 195,30±10,36 против 155,30±7,61 Е/л в контроле, а при введении в дозе 11,1 мг/кг/день отмечалась тенденция к повышению активности фермента по сравнению с контролем, но выявленное изменение не носило статистически значимого характера.

Более низкие дозы лекарственного средства - 5,55 и 2,22 мг/кг/день не оказали влияния на активность двух указанных ферментов печени.

Из приведенных данных следует, что препарат в дозах 22,2 и 11,1 мг/кг/день не вызывал нарушений функций печени, повышая активность печеночных трансаминаз.

Результаты изучения иммунотоксическиех свойств Имидокарба 5% показали, что введение препарата мышам в терапевтической дозе практически не повлияло на процесс антителообразования в селезенке: число АОК (зон гемолиза) в пробе опытных животных составило 26,6, а в контроле 28,4, т.е. наблюдалось незначительное снижение индекса стимуляции до 0,93. Препарат не вызывал подавление гуморального иммунного ответа: на 7-й день после введения установлено, что титры агглютининов в сыворотке крови мышей находились на уровне 4,68±0,29 Iog2. У контрольных животных этот показатель составил 4,57+0,41 log2 и ИС был равен 1,02.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что внутримышечное введение Имидокарба 5% не сопровождается угнетением иммунного ответа на тимусзависимый антиген (ЭБ). По-видимому, в данном случае отсутствует подавление Т-супрессорами активности В-лимфоцитов в отношении Т-зависимого антигена.

Препарат не вызывал угнетения клеточного иммунитета у подопытных животных и ИВ составил 15,72 +3,15%, что достоверно не отличалось от показателей контроля - 16,58+2,32%.

Опытами установлено, что Имидокарб 5% в терапевтической дозе вызывает индукцию ГЗТ у мышей, т.е. местную воспалительную реакцию, аналогичную

введению ЭБ. Это свидетельсвует о том, что препарат не угнетает продукцию лимфокинов - медиаторов клеточного иммунитета.

Интенсивность синтеза и секреции лимфоцитами факторов клеточного иммунитета соответствует степени выраженности воспалительной реакции в месте введения разрешающей дозы антигена (ЭБ).

При изучении динамики ауто-РОК у мышей было установлено (таблица 4), что относительное и абсолютное количество ауто-РОК, зарегистрированное у животных опытной группы, было таким же, как и у интактных (контрольных) животных, которым препарат не вводили. Значения показателей соответственно колебались в пределах 1,2±0,19 - 1,6±0,17% (49,2±3,8 - 68,6±5,8 кл/мкл) и 1,2±0,09 - 1,5±0,15% (39,8±2,9 - 54,1 ±5,3 кл/мкл).

Таблица 4.

Динамика ауто-РОК в периферической крови мышей (Р>0,05)

Препарат Фон 5-й день 10-й день 15-й день 20-й день

Имидокарб 5% * 1,4+0,11 **57,2+5,0 1,4+0,32 59,6+7,4 1,2+0,19 49,2+3,8 1,6+0,17 68,5 ±5,8 1,5+0,35 56,2+6,4

Контроль 1,3+0,12 44,8+5,7 1,2+0,09 39,8+2,9 1,4+0,27 45,4+7,5 1,5+0,15 54,1+5,3 1,4+0,09 41,9+3,7

* * относительное количество (%)

* абсолютное количество (клеток в 1 мкл крови)

Таким образом, экспериментально установлено, что Имидокарб 5% в терапевтической дозе - 4 мг/кг массы животного (по ДВ) не проявляет иммунотоксической активности в отношении гуморального и клеточного иммунного ответа.

Изучение аллергизирующих свойств показало, что конъюнктивальные пробы у подопытных морских свинок на 12-й день после внутрикожной сенсибилизации Имидокарбом 5% не отличались от аналогичных показателей контрольных животных. Не было отмечено каких-либо изменений сосудистого рисунка конъюнктивы глаз через 15 минут и 24 часа.

При внутрикожном тестировании реакции на месте введения препарата как у сенсибилизированных, так и у контрольных морских свинок не было отмечено.

При исследовании сыворотки крови сенсибилизированных и контрольных морских свинок в реакции непрямой дегрануляции тучных клеток установлено, что процент дегранулированных тучных клеток у подопытных животных находился в пределах 5,06+0,34 - 6,03+0,25 %, у контрольных - 4,96+0,38 5,86+0,71 %, что соответствует отрицательной оценке теста.

Результаты проведенных исследований показали, что внутримышечное введение препарата в терапевтической дозе - 4 мг/кг не приводит к сенсибилизации организма животных.

Исследование эмбриотоксических и тератогенных свойств Имидокарба 5% в опытах на крысах показало, что внутримышечное введение Имидокарба 5% в дозе 12 мг/кг в критические сроки беременности не отразилось отрицательно на общем

состоянии и поведении крыс-самок. Животные были подвижны, активны, адекватно реагировали на внешние раздражители.

Общая эмбриональная смертность плодов при воздействии препарата на 1-6; 714 и 15-19 дни эмбриогенеза соответственно составила 10,00±2,72 против 10,02±2,56% в контроле; 8,76±2,17 против 7,72±2,15% в контроле и 6,10±2,47 против 7,42±2,78% в контроле. Не отмечали достоверных различий в гибели плодов в пред- и постимплантационный период.

При сравнении массы и размеров плодов было установлено, что указанные показатели достоверно не отличались от контрольных значений, что дает основание заключить об отсутствии у Имидокарба 5% эмбриотоксических свойств.

Результаты исследования эмбрионов на наличие внешних и внутренних аномалий развития показали, что тератогенного эффекта препарат не оказал.

Таким образом, внутримышечное введение Имидокарба 5% в дозе 12 мг/кг на 1-6; 7-14 и 15-19 дни беременности крысам-самкам не приводит к повышенной гибели плодов, снижению массы и размеров эмбрионов; не индуцирует развитие внешних и внутренних аномалий.

Анализ полученных результатов позволяет заключить, что препарат в трехкратной терапевтической дозе не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия при введении крысам в критические сроки эмбриогенеза.

Изучение переносимости и субхроннческой токсичности Имидокарба 5% на собаках при однократном 7-кратном внутримышечном введении в дозах 8,0 и 10,0 мг/кг не вызывало видимых клинических изменений в организме. Животные были активны, охотно поедали корм, болезненности в месте инъекции отмечено не было.

Основные клинические (эритроциты, гемоглобин, гематокрит, лейкоциты, тромбоциты, лейкограмма) и биохимические (мочевина, креатинан, амилаза, аспартатаминотрансфераза, аланинаминотрансфераза, щелочная фосфотаза, ГГТ, альбумин, глюкоза) показатели крови собак обеих групп на 4 и 8 сутки введения и через сутки после отмены препарата находились в пределах физиологической нормы и достоверно (Р > 0,05) не отличались от фоновых показателей.

Лейкограмма животных после 7-дневного введения Имидокарба 5% достоверно (р>0,05) не отличалась от лейкограммы крови собак до введения препарата.

Таким образом, результаты изучения токсичности Имидокарба 5% показало, что его одно- и семикратное применение в дозах, превышающих терапевтическую в 2 и 2,5 раза, хорошо переносится животными и не вызывает клинических и биохимических изменений в крови животных.

Результаты изучения фармакокинетики имидокарба в организме собак свидетельствуют, о том, что препарат быстро всасывается из места инъекции и уже через 15 минут после введения имидокарб обнаруживается в крови в высоких концентрациях (0,718 мкг/мл), достигая максимума (1,224 мкг/мл) через 1 час. К 6 часу концентрация имидокарба в крови снижалась до 0,108-0,186 мкг/мл и сохранялась на этом уровне в течение суток. В последующие 4 суток содержание имидокарба сохранялось на минимальном уровне (таблица 5).

С целью изучения профилактической эффективности Имидокарба 5% опыты проведены на спленэктомированных щенках собак, экспериментально зараженных В. Canis.

Содержание имидокарба в плазме крови собак после однократного внутримышечного введения Имидокарба 5%

Таблица 5

Сроки исследования Концентрация имидокарба, мкг/мл

1 2 3 4 Среднее

15 мин 0,849 0,948 0,517 0,560 0,718+0,21

30 мин 0,794 1,145 0,791 0,995 0,931+0,17

45 мин 0,623 1,332 1,020 0,861 0,959+0,29

1 ч 0,876 1,361 1,045 1,613 1,224+0,33

Зч 0,506 0,341 0,387 0,304 0,384+0,09

6 ч 0,106 0,184 0,120 0,158 0,142+0,04

9ч 0,204 0,122 0,088 0,198 0,153+0,06

12ч 0,156 0,104 0,188 0,237 0,171+0,06

15ч 0,216 0,182 0,194 0,154 0,186+0,03

18 ч 0,076 0 0,226 0,132 0,108+0,09

21 ч 0,244 0,091 0,058 0,070 0,116+0,08

24 ч 0 0,068 0,086 0,138 0,073+0,05

48 ч 0,072 0 0 0 0,018+0,01

72 ч 0 0 0 0,062 0,015+0,01

96 ч 0 0,061 0 0 0,015+0,01

120 ч 0,060 0 0 0 0,015+0,01

Первое заражение одного щенка контрольной группы и двух животных 1-ой опытной группы проводили на 15 сутки после введения Имидокарба. На третьи сутки после заражения у щенка контрольной группы отмечалось повышение температуры до 39,8° С, вялость, отказ от корма, но жажда при этом была сохранена. При микроскопии мазков периферической крови паразитемия (поражение эритроцитов) составляла 9 на 1000.

У двух подопытных животных на 3 и 5 сутки после заражения паразитов в крови не обнаружили. Клиническое состояние щенков находилось в пределах физиологической нормы.

На пятые сутки после заражения у этих двух подопытных животных была взята кровь и введена внутривенно двум незараженным животным 1-ой контрольной группы по 3 мл/животное (биопроба).

На 3, 5, 10, 20 и 30 сутки после биопробы в мазках крови щенков контрольной группы бабезий не обнаружили. Температура тела животных находилась в пределах физиологической нормы, отклонений в клиническом состоянии не отмечалось. У одного щенка контрольной группы (до заражения имидокарб не вводили) с нарастанием паразитемии развивались клинические признаки заболевания, в целях предотвращения гибели животного провели курс интенсивной терапии с внутримышечным введением Имидокарба 5% в дозе 4 мг/кг массы.

Заражение контрольного щенка и двух животных 2-ой опытной группы проводили на 30 день после введения Имидокарба 5%. У щенка контрольной группы первые бабезии в мазках периферической крови были обнаружены на вторые сутки, температура тела колебалась в пределах 40°С - 40,3°С. В период нарастания паразитемии у животного отмечали сильно выраженное угнетение, отказ от корма. На 3

сутки поражение эритроцитов составляло 16 на 1000.

У щенков 2-ой опытной группы отклонений в физиологическом состоянии не выявлено, при микроскопии мазков периферической крови на 3 и 5 день после заражения бабезий не обнаружено.

На 5 сутки у этих щенков были взяты пробы крови, которую ввели по 3 мл двум пезараженным щепкам 2 контрольной группы. На 3, 5, 10, 20 и 30 сутки при микроскопии мазков кровепаразитов обнаружено не было.

У одного щенка контрольной группы, которому перед заражением имидокарб не вводили, на 4 сутки отмечалось крайне тяжелое клиническое состояние, с выраженными признаками бабезиоза. Для предотвращения гибели животному ввели внутримышечно Имидокарб 5% в дозе 4 мг/кг и параллельно провели комплексную симптоматическую терапию.

Полученные результаты исследований показали, что Имидокарб 5% при однократном внутримышечном введении собакам в дозе 4 мг/кг за 30 суток до заражения профилактирует бабезиоз и стерилизует организм животного от кровепаразита Babesia canis.

Клинические испытания Имидокарба 5% при бабезиозе проведены в 2004 - 2005 г.г. на базе ветеринарной клиники «Бэмби» (г. Москва) на 237 собаках разных пород и возраста. В качестве препарата сравнения использовали широко применяемый в клинической практике Верибен (ДВ - диазомино-дибензамидина диацетурат), производства фирмы «Сева» (Франция).

С лечебной целью Имидокарб 5% вводили собакам однократно внутримышечно в дозах 2 и 4 мг/кг массы животного, Верибен - согласно наставлению по применению в дозе 7,8 мг/кг массы животного.

Собак, проходивших лечение Имидокарбом, условно делили на три группы: 1 группа - начальная стадия заболевания (79 голов), 2 группа - заболевание средней тяжести с клиническими признаками бабезиоза (91 голова) и 3 группа - тяжелая форма заболевания (67 голов). Животным 1 группы препарат применяли в дозе 2 мг/кг, животным 2 и 3 групп - в дозе 4 мг/кг массы животного. В результате испытания было установлено, что эффективность лечения собак Имидокарбом 5% по группам соответственно составила 100, 95,6 и 92,5%, а эффективность лечения Верибеном -87,5%.

В ветеринарной клинике «СМАВЗ» (г. Москва) в период с апреля 2004 по октябрь 2005 года клинические испытания провели на 367 больных бабезиозом собаках. Животных, которым в качестве противобабезиозного средства применяли Имидокарб 5% (273 головы) условно делили на три группы: 1 группа - начальная стадия заболевания (164 собаки), 2 группа - заболевание средней тяжести (77 собак) и 3 группа - тяжелая форма течения болезни (32 собаки). Имидокарб 5% применяли однократно в дозе 4 мг/кг массы животного, Верибен применяли на 94 собаках на разных стадиях заболевания согласно наставлению по применению. Испытания показали, что терапевтическая эффективность Имидокарба 5% была выше, чем эффективность Верибена, и составила в 1 опытной группе - 100%, во 2 опытной группе - 96,1% и в 3 опытной группе - 93,7%. Эффективность Верибена составила 87,2%.

При наблюдении за животными после применения Имидокарба 5% в дозе 4 мг/кг массы гепатонефротоксический эффект отсутствовал, что благоприятно влияло на процесс выздоровления животных и сокращало курс лечения. При применении Верибена у 53 собак наблюдался гепатонефротоксический синдром.

На базе Благотворительного Фонда Защиты животных «Бим» в 2004-2006 гг. провели испытания Имидокарба 5% и Верибена на 279 собаках больных бабезиозом.

Животных, которым в качестве противобабезиозного средства применяли Имидокарб 5% (227 голов), условно делили на 2 группы: 1 группа - начальная стадия заболевания (52 собаки), 2 группа - заболевание средней тяжести (175 собак). Животных относящихся к 3 группе - с тяжелой формой течения болезни не было. Имидокарб 5% применяли однократно в первой группе в дозе 2 мг/кг, во второй группе в дозе 4 мг/кг массы животного, Верибен применяли в 52 случаях на разных стадиях заболевания согласно наставлению по применению.

Испытания показали, что терапевтическая эффективность Имидокарба 5% в первой группе состовляла 100%, во второй группе - 95,4%. Терапевтическая эффективность Верибена составила 88,4%.

Таким образом, в результате проведенных клинических испытаний было установлено, что терапевтическая эффективность Имидокарба 5% при бабезиозе собак в зависимости от тяжести заболевания составляет 92-100% и превышает терапевтическую эффективность препарата - сравнения Верибена.

Профилактическую эффективность Имидокарба 5% испытывали в период с 1 мая по 15 июня 2006 года на 30 животных, которых ежедневно выводили на прогулки в парковую зону (места обитания иксодовых клещей - переносчиков кровепаразитарных болезней). У 4 собак были выявлены клинические признаки бабезиоза и в мазках крови обнаружены бабезии. Паразитемия у собак соответственно составила: 17 на 1000; 3 на 1000; 11 на 1000 и 41 на 1000 эритроцитов. После применения Имидокарба в дозе 2 мг/кг и препаратов симптоматической терапии все животные выздоровели.

В целях профилактики заболевания бабезиозом 26 собакам, которых выводили на прогулку в ту же парковую зону, препарат ввели внутримышечно в дозе 4 мг/кг массы животного. При наблюдении за животными в течение месяца признаков заболевания бабезиоза зарегистрировано не было.

Обобщенные результаты клинических испытаний терапевтической и

профилактической эффективности Имидокарба 5% представлены в таблице 6.

Полученные результаты исследований обработаны статистически, достоверность различий оценивали по Стьюденту.

Таблица 6

Группы животных

Без клинических признаков бабезиоза

Место Количество Препарат, доза Кратность

испытаний животных в мг/кг ДВ введения

опыте по группе

52 Имидокарб 2,0 1,02

Приют Бим

Клиника СМАВЗ

Клиника Бемби

164 94 79

Имидокарб 4,0 Верибен 7,8 Имидокарб 2,0

1,0 1,5 1,24

Количество выздоровевших животных/ % 56/100

164/100 94/100 79/100

Количество

павших животных/% нет

Срок выздоровления

ДНИ

3-5 5-6 5-7 3-4

С клиническими признаками бабезиоза

Приют Бим

Клиника Бемби

Клиника СМАВЗ

С тяжелой полиор- Клиника ганной недоста- СМАВЗ точностью

175

56 77

Имидокарб 4,0

Верибен 7,8

Имидокарб 4,0

Верибен 7,8 Имидокарб 4,0

Имидокарб 4,0

1.05

1,66

1,09

1,66 1,08

1.06

167/95,4

46/88,4

87/95,6

49/87,5 72/93,5

28/87,5

5-7 8-10

5-7

8-11

6-9

6- 10

Клиника Бемби

Имидокарб 4,0

1,12

62/92,5

6- 12

Результаты клинических испытаний терапевтической эффективности Имидокарба 5% и Верибена

ВЫВОДЫ

1. Разработан новый лекарственный препарат на основе имидокарба для лечения и профилактики бабезиоза собак, определены показатели качества и методы их контроля. Экспериментально обоснованный срок годности препарата при хранении составляет 3 года.

2. Имидокарб 5% по параметрам острой токсичности согласно ГОСТ 12.1.007-76 относится к умеренно опасным веществам (3 класс опасности): ЬО50 при введение белым крысам в желудок составляет 2500 мг/кг, при подкожном введение белым мышам -139 мг/кг животного (по ДВ).

3. В субхроническом эксперименте на белых мышах при ежедневном в течение 15 дней подкожном введении имидокарба установлено, что дозы 0,4 и 0,15 1ЛЭ5о являются токсическими; 0,04 ЬО50 - пороговой, а 0,015 ЬО50 -недействующей.

4. Имидокарб 5% в дозе 12 мг/кг массы животного (3-кратная терапевтической доза для собак) не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия при ежедневном введении беременным крысам в критические периоды эмбриогенеза.

5. Имидокарб 5% в терапевтической дозе не проявляет иммунотоксической активности в отношение гуморального и клеточного иммунного ответа, не приводит к сенсибилизации организма животных.

6. Имидокарб 5% при однократном и 7-кратном парентеральном введении собакам в превышающей 2,5 раза терапевтическую дозу, хорошо переносится животными и не вызывает изменений в клиническом состоянии, гематологических и биохимических показателях.

7. Имидокарб в разовой дозе 4 мг/кг массы животного при экспериментальном заражении щенков собак бабезиозом оказывает выраженный профилактический эффект в течение 30 суток.

8. Клиническими испытаниями на собаках, спонтанно зараженных бабезиозом, установлено, что Имидокарб 5% при однократном внутримышечном введении в дозе 4 мг/кг массы животного (по ДВ) обеспечивает 93-100% терапевтическую эффективность и не оказывает гепатонефротоксических эффектов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 1. В результате проведенных исследований Разработано, изучено и предложено для применения в клинической практике лечения и профилактики бабезиоза собак лекарственное средство в форме 5% раствора для инъекций на основе имидокарба под торговым названием Фортикарб.

2. Определены показатели качества, методы их контроля, гарантированный срок годности лекарственного средства на основе имидокарба и разработана Инструкция по его применению для лечения и профилактики бабезиоза собак (Утверждена Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору Минсельхоза РФ 22.05.2008 г., регистрационный номер: ПВИ 23.8/02419).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зверев A.A. Острая токсичность 5%-ной инъекционной формы Фортикарба // Материалы докладов научной конференции РАСХН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Москва,2006. - № 7. - С. 156157.

2. Зверев A.A., Русаков C.B. Изучение фармакокинетики 5%-ной инъекционной формы Фортикарба на собаках // Материалы докладов научной конференции РАСХН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». -Москва,2006. - № 7. - С. 157-159.

3. Зверев A.A. Применение лекарственного средства Фортикарб в комплексном лечении собак, больных бабезиозом // Ветеринарная практика. -2007.-№ 1.-С. 33-36.

4. Зверев A.A. Изучение фармакокинетики имидокарба в организме собак// Ветеринарная Патология. - М., 2008 - № 3. - С. 112-113.

Для заметок

Заказ № 109/11/08 Подписано в печать 13.11.2008 Тираж 100 экз. Усл. пл. 1,25

;;;г:ч\ ООО "Цифровичок", тел. (495) 797-75-76; (495) 778-22-20 '^Л mvw.cfr.ru; е-таИ:info@cfr.ru

Оглавление диссертации Зверев, Артем Александрович :: 2008 :: Москва

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9 1.1. Бабезиоз плотоядных и меры борьбы с ним

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Разработка лекарственной формы, показателей качества, методов контроля и изучение стабильности Имидокарба 5%

2.2.2. Изучение токсических свойств Имидокарба 5% в опытах на лабораторных животных и собаках

2.2.2.1. Остря токсичность Имидокарба 5% при введении в желудок белым крысам

2.2.2.2. Острая токсичность Имидокарба 5% при подкожном введении белым мышам

2.2.2.3. Субхроническая токсичность Имидокарба 5% при подкожном введение белым мышам '

2.2.2.4. Иммунотоксические свойства Имидокарба 5%

2.2.2.5. Аллергизирующие свойства Имидокарба 5% в опытах на лабораторных животных

2.2.2.6. Эмбриотоксические и тератогенные свойства Имидокарба 5% в опытах на белых крысах

2.2.2.7. Переносимость и субхроническая токсичность Имидокарба 5% в опытах на собаках

2.2.3. Изучение фармакокинетики имидокарба в плазме крови собак

2.2.4. Изучение профилактической эффективности Имидокарба 5% при экспериментальном бабезиозе собак

2.2.5. Изучение терапевтической и профилактической эффективности Имидокарба 5% при спонтанном бабезиозе собак

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации по теме "Ветеринарная фармакология с токсикологией", Зверев, Артем Александрович, автореферат

Актуальность проблемы. Среди сезонных паразитарных болезней собак особое место занимает бабезиоз - специфическое • трансмиссивное заболевание, вызываемое паразитированием в эритроцитах одноклеточных паразитов - Babesia canis. Возбудитель и продукты его жизнедеятельности являются первым патогенетическим фактором, оказывающим аллергическое воздействие на организм животного.

Бабезиоз собак широко распространен во многих странах Европы, Азии, Африки и Америки.

Возбудитель бабезиоза собак - Babesia canis, впервые был обнаружен в Италии Pianom и Galli-Valerio (Neitz WO and Steyn HP, 1947) в 1892 году, а в России В.JI. Якимовым и В.Л. Любинецким в 1909 г (А.В. Князевский, 1956).

Переносчиками заболевания являются иксодовые клещи Dermacentor pictus, Dermacentor marginatus, Rhipicephalus sanguineus, Rhipicephalus turanicus.

Химиотерапевтические препараты при бабезиозе собак стали применяться вскоре после установления этиологии и раскрытия сущности самого заболевания. С этой целью отечественными и зарубежными исследователями против В. canis испытано значительное количество лекарственных препаратов различного химического состава. (Б.В. Шумилов, 1971; L.S. Jacobson, 1994; Г.И. Дейнеко, 1997 и др.)

Однако большинство из апробированных препаратов оказалось малоэффективными или высокотоксичными. До настоящего времени не найдено лекарственных средств, обладающих длительным профилактическим, действием.

Проанализировав мировой опыт лечения- бабазиоза собак, Б.А. Тимофеев и И.Г. Карпенко (1977) рекомендовали для применения при бабезиозе плотоядных Азидин (Беренил, Верибен), Трипафлавин, Гемоспоридин, Диамидин, Акаприн, Пироплазмин.

Как сообщает ряд исследователей; Беренил и Азидин стерилизуют организм животного от возбудителя, т.е. обеспечивают полное исчезновение паразитов из крови через 48 часов после введения лекарственных средств, а также профилактируют заболевание при введении за 5-17 дней до заражения (Д.В. Князевский, 1956; А.Д. Рыбкина, 1965; Д.А. Страшнов, 1975; В.П. Лебедева, 1992; В.О. Новгородцева, 1999 и др.). По сведениям) других авторов, введение названных препаратов не обеспечивает стерилизацию организма собак от B.canis (Б.В.Шумилов, 1971) .

За рубежом при кровепаразитарных болезнях животных с положительными результатами'применяют препараты, на основе имидокарба (Eureby J., Moreau U., Chauve et.al., 1980; Ogunkova A.B., AdeyanjnJ.B., Y.O. Aliu; 1981; G. Uilenberg et.al., 1981). Однако сведения! об» использовании! имидокарба для терапии бабезиоза собак весьма малочисленны, а данных о его профилактическом действии и токсичности практически нет.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось разработка, изучение и внедрение в практику ветеринарии для лечения, и профилактики бабезиоза собак нового лекарственного средства* в форме раствора для инъекций на основе имидокарба.

В задачи исследований входило:

- обосновать состав лекарственного средства- на основе имидокарба, разработать показатели качества и методы контроля; изучить стабильность Имидокарба 5% в процессе хранения;

- изучить острую и субхроническую токсичность, иммунотоксические, аллергезирующие, местно-раздражающие и эмбриотоксические свойства лекарственного средства в опытах на лабораторных животных и собаках;

- исследовать фармакокинетику имидокарба в организме собак после применения Имидокарба 5%;

- определить лечебно-профилактическую дозу и схему применения Имидокарба 5% при бабезиозе собак;

- изучить профилактические свойства Имидокарба 5% при экспериментальном бабезиозе щенков собак;

Научная новизна; Впервые разработано новое лекарственное средство на основе имидокарба- дипропионата, обладающее высокой терапевтической эффективностью при бабезиозе собак и менее выраженной гепатонефротоксичностью, чем применяемые в ветеринарных клиниках противобабезиозные препараты. Определены показатели качества и методы контроля Имидокарба. 5%, изучены его физико-химические, фармако-токсикологические свойства и лечебно-профилактическая эффективность при бабезиозе собак.

Практическая значимость работы: Для применения в клинической практике лечения бабезиоза собак предложено лекарственное средство на основе имидокарба дипропионата в форме раствора для инъекций под рабочим названием - Имидокарб 5%. Определены показатели качества лекарственного средства, разработаны методы их контроля, установлена оптимальная • лечебно-профилактическая доза и схема применения лекарственного средства при бабезиозе собак.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на:

- научно-практической конференции: «Теория и практика: борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС, г. Москва, 2006.

Положения, выносимые на защиту:

- состав, показатели качества и методы контроля, результаты изучения стабильности в процессе хранения лекарственного средства в форме раствора для инъекций на основе имидокарба;

- результаты изучения фармакокинетики. имидокарба в плазме крови собак после применения Имидокарба 5%;

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 121 странице компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования и обсуждение их результатов, выводы, практические предложения, список литературы.

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармако-токсикологическая характеристика и терапевтическая эффективность имидокарба 5% при бабезиозе собак"

ВЫВОДЫ

2. Имидокарб 5% по параметрам острой токсичности согласно ГОСТ 12.1.007-76 относится к умеренно опасным веществам (3 класс опасности): LD5o при введение белым крысам в желудок составляет 2500 мг/кг, при подкожном введение белым мышам - 139 мг/кг животного (по ДВ).

3. В субхроническом эксперименте на белых мышах при ежедневном в течение 15 дней подкожном введении имидокарба установлено, что дозы 0,4 и 0,15 LD50 являются токсическими; 0,04 LD50 — пороговой, а 0,015 LD5o - недействующей.

6. Имидокарб 5% при однократном и 7-кратном парентеральном введении собакам превышающей в 2,5 раза терапевтическую дозу, хорошо переносится животными и не вызывает изменений в клиническом состоянии, гематологических и биохимических показателях.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработано, изучено и предложено для применения в клинической практике лечения и профилактики бабезиоза собак лекарственное средство в форме 5% раствора для инъекций на основе имидокарба под торговым названием Фортикарб.

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2008 года, Зверев, Артем Александрович

1. Абрамов И.В., Дьяконов Л.П. Современные данные по систематике пироплазмид // Арахнозы и протозойные болезни е.- х. животных: Науч. тр. / ВАСХНИЛ М.:Колос, 1977.-С.87-96.

2. Акбаев М.Ш., Водянов А.А., Косминков Н.Е., Ятусевич А.И., Пашкин П.И., Василевич Ф.И. Паразитология и инвазионные болезни животных. // М. 1998. С. 744.

3. Аскеров А. А., Годжаев Э.К. Влияние естественной резистентности на течение пироплазмидозов. / Доклад 5 Всесоюзный съезд протозоологов. Витебск, 1992. -М 4 - С. 21 - 22.

4. Балагула Т.В. Автореф. дис. канд. вет. наук/ МГАВМиБ им. К.И. Скрябина 2000г.- С. 24.

5. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта/ Ленинград: Госмедиздат, 1963. С. 43-45.

6. Белозеров В. Н., Богданов В. Е., Квитко Н. В. Сезонные изменения температурных реакций насосавшихея самок клещей Ixodes ricinus L. (Ixodidae)./ Вестник Ленинградского университета. 1966. - №3. С. 37 - 44.

7. Белов А.Д., Данилов Е.П., Дукур И.И. Болезни собак: справочник./Москва; Агропромиздат, 1990. 320 с.

8. Бойко В.Д. Болезни плотоядных. / Справочник ветврача, 1990. -С. 143.

9. Бурмистров Е.Н. Шанс био: лабораторная диагностика. // М. 2006. С. 32-41.

10. Вершинина Т. А. Эпидемиологически значимые виды иксодовых клещей в Западной Сибири. / / Материалы 2 семинара -конференции Обь Иртыш. / Энц. вып. №1. - Иркутск. - 1970. - С. 72 -76.

11. Вечеркин С.С. Пироплазмидозы КРС в Киргизии и меры борьбы с ними: Автореф. дис . докт. биол. наук/ ВАСХНИЛ. М. 1971. С. 35.

12. Воробьев В.В. Эпизоотология и некоторые вопросы профилактики бабезиоза КРС в Ленинградской области: Автореферат диссертации доктора биологических наук ЛВИ. Ленинград. 1970. - С. 15.

13. Гаджиева И.А. Новгородцева С.В. Этиопатогенетические основы терапии бабезиоза собак. // Паразиты и паразитарные болезни в Западной Сибири Новосибирск, 1996. - С. 32-33.

14. Гайдуков А.Х. Изучение вирулентных свойств возбудителя пироплазмоза собак при пассажировании: // Автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук. Л., 1957. - С. 17.

15. Годжаев Э. К., Ахундов С. М. Влияние факторов внешней среды и организма хозяина на паразит. Реакцию.//Доклад 5 Всес. съезда протозоологов, Витебск - 1992. - № 4. - С. 94.

16. Государственная фармакопея XI, 1987.

17. Губайдуллин Л.С. Лечебные свойства пиральдина и иммунитет при пироплазмозе собак. // Труды ВИЭВ. 1957г. - Т. XXI. - С. 296-313.

18. Гуревич Д.И., Колабский Н.А., Шумилов Б.В. Концентрация глютатиона и вакат-кислорода в крови собак при пироплазмозе //Ленинградский ветеринарный институт: Сборник научных работ. 1971. — Выпуск 31.-С. 30-32.

19. Гусейнов Мирсалех Гусейнара Огль. Эпизоотология пироплазмидозов и анаплазмоза овец и усовершенствование мер борьбы с ними на Апшеронском полуострове АзССР: Автореф. дис . докт. биол. наук/Среднеазиатское отделение ВАСХНИЛ. Самарканд - 1986. - 18 с.

20. Деева Е.А. Хроническая форма бабезиоза собак / / II Научная конференция Новосибирского отделения паразитологического общества РАН-Н. 1997. -С.43-44.

21. Дейнеко Г.И. Сравнительная оценка данных об антипротозойных свойствах диминазеновых и фенантридиновых ветеринарных препаратов// Научно-практическая конференция посвященная 65-летию Иркутской НИВС Н. - 1997. - С. 192-194.

22. Дылько Н.И. Кровепаразитозы и их возбудители у животных / Минск, 1977.- 49 с.

23. Дыбан А.П., Баранов B.C., Акимова И.М. Основные методические подходы к тестированию тератогенной активности химических веществ//Арх. Анатом. Гистол. Эмбрилл. — 1970. —Т. 59. — № 10. —С. 89-100.

24. Дьяконов JI. П. Роль неспецифических хозяев в поддержании пироплазмидозных очагов./Бюлл. Всес. инст. экспер. ветер. 1974. №18 - С. 15-18.

25. Дьяконов JI. П., Засухин Д. Н., Красильников Е. Н. Гемоспоридиозы и пироплазмидозы животных и человека./ Итоги науки и техники ВИНИТИ, зоопараз." 1983. №8. - С. 1 - 56.

26. Ефремов Н.А. Пероральное заражение собак B.canis. // Современные проблемы протозоологии: Тезисы доклада IV съезда ВСПР. -Л., 1987.-С. 200.

27. Ефремова Е.А. и др. Терапевтическая эффективность этидия бромистого при пироплазмозе собак. // Паразиты и паразитарные болезни в Западной Сибири Новосибирск, 1996. - С. 44-45.

28. Золотарева В. М. Гемоспоридозы КРС и овец в Дагестане: Автореф. дис . докт. биол. наук/ Ставрополь. - 1968 . - 19с.

29. Золотарев Н.А., Золотарева В.М., Елагин В.И. О природной очаговости пироплазмоза собак и енотов в Дагестане. // Дагестанский СХИ. Труды. 1971.- Т. 21, выпуск 2. - С. 30-31.

30. Иванова Н. И. Бабезиоз овец: Автореф. дис. . . докт. биол. наук/ Ветеринарная академия им. К.И. Скрябина. М. 1976. - 15 с.

31. Иванюшин Б.И. О пироплазмозе собак разного возраста.// Материалы 2-го съезда ВОПР. Киев, 1976. - Ч.З.-С. 42-43.

32. Иванюшин Б. И. Изучение некоторых вопросов иммунитета при экспериментальном пироплазмозе собак: Автореф. дис . докт. биол. наук/ Лен. ветер, инст. Ленинград. 1971. - 14 с.

33. Иргашев X. Н. Лечебные и профилактические свойства азидина при пироплазмозе и франсаиеллезе КРС в Узбекистане: Автореф. дис . докт. биол. наук/ Туркмен, с/х инст. Душанбе. 1966. 15 с.

34. Иргашев Х.Н. Лечебные и профилактические свойства азидина при пироплазмозе и франсаиллёзе КРС в Узбекистане: Автореф. дис. докт. биол. наук / Туркмен, с/х инст. Душанбе. 1966. -18 с.

35. Капустин В.Ф. Атлас паразитов крови животных и клещей -иксод/Москва: Сельхозгиз, 1955. 29 с.

36. Кербабаев Э.Б. Экологическая и трансономическая характеристики иксодовых клещей // Ветеринария. 1986. №9. С. 52-56.

37. Кербабаев Э.Б., Василевич Ф.И., Катаева Т.С., Розовенко М.В. Арахноэнтомозы сельскохозяйственных животных. Учебное пособие для вузов. М.: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 2000. С. 17-22.

38. Кирк Р., Бонагура Д. Современный курс ветеринарной медицины Кирка / Переводж с англ. М.: Аквариум 2005. — С. — 359-361.

39. Кисленко Г. С., Коротков Ю. С., Шмаков Л. В. Луговой клещ Dermacentor reticulatus в природных очагах клещевого энцефалита Удмуртии: Автореф. дис . докт. биол. наук/ Паразитология. М. 1987. № 6. - 735 с.

40. Кленова И.Ф., Илюхина И.Н., Написанова Л.А. Зарубежные ветеринарные препараты В России. 1999-2000. Справочник. М., 1999. -С. 320.

41. Князевский А.В. Инфекционные и инвазионные болезни собак. /Москва: Агропромиздат, 1956. С. 9-14.

42. Колабский Н.А. Изучение иммунитета и вопроса иммунизации при некоторых гемоспоридиозах: Автореф. дис . докт. биол. наук / Ле-нингр. ветер, инст. Л. -1961. -27 с.

43. Кост Е.А. Справочник по клиническим и лабораторным методам исследования/ Москва: Медицина, 1975. 217 с.

44. Крылов М.В. Пироплазмиды / Ленинград: Наука, 1981. С 62 -63, С. 146-148.

45. Кудрявцев А.А. Исследования крови в ветеринарной диагностике / Москва: Сельхозгиз, 1948. -С. 16 160.

46. Кудряшов Б.А. Проблемы физиологической регуляции гемостаз. // Успехи совр. биол., 1967. №5 - С. 268.

47. Кузник Б.И., Скипетров В.П. Форменные элементы крови (сосудистая стенка, гемостаз и тромбоз)/ Москва: Медицина, 1974. 37 с.

48. Лебедева В. Л. Морфологические и цитохимические показатели иммунной реакции при пироплазмозе собак / Ставрополь: Ставр. с/х институт, 1991. С. 19 22.

49. Лебедева В. Л. Морфологические особенности сверхострого течения пироплазмоза собак // Диагностика, лечение, профилактика инвазионных и инфекционных заболеваний с\х животных, Ставрополь. 1991. С. 23 - 27.

50. Лебедева В. Л. Патоморфология пироплазм при различных течениях спонтанного пироплазмоза собак // Диагностика, лечение, профилактика инвазионных и инфекционных заболеваний с\х животных. / Ставр. с\х инст. С., 1994. - С. 31-36.

51. Лебедева В. Л. Пироплазмоз собак. // Докл. 5 Всес. съезд протозоологов / Витебск, 1992. 4. С .85.

52. Лебедева В. Л. Морфология проявления пироплазмоза новорожденных щенков собак / Ставрополь: Ставр. с/х институт, 1991. С. 23 -26.

53. Ли П. Н. Методы профилактики и терапии пироплазмоза и франсанеллеза (бабезиелоза) КРС: Автореф. дис . докт. биол. наук/ Всес.инст. экспер. ветер. М. 1967. - 27 с.

54. Лукьяновский В.А., Самошкин И.Б., Стекольников А.А., Тимофеев С.В. Местное и общее обезболивание животных: Учебное пособие. СПб.: Издательство «Лань», 2004. - С. 119-123.

55. Малышев В. Д. Интенсивная терапия острых водно эликтролитных нарушений / Москва: Медицина, 1985. С. 72 92.

56. Манько В.М. и др. //Иммунология. 1989. -№ 1. - С. 38-41.

57. Машковский М.Д. Лекарственные средства / Вильнюс: Гамта, 1993 .ч. 1,2.

58. Меньшиков В.Г., Балагула Т.В. Лечение пироплазмоза собак при паразитоценозах // VI Междун. конф. по проблемам вет. медицины мелких домашних животных. М. - 1998. -С. 27.

59. Новгородцева С. В. Эпизоотология, патогенез и терапия бабезиоза собак. Автореф. дис. Канд. вет. наук. // Сибирское отделение РАСХН. Иваново.- 1999. С-15-17.

60. Ниманд Х.Г. Болезни собак. Аквариум. 2001 г.

61. Оганджанян П.П. Пироплазмидозы и анаплазмоз КРС в Нагорно -Карабахской автономной области и меры борьбы с ними: Автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук. // Аз. Науч. исслед. Веет. инст. Баку. - 1972. -26 с.

62. Олсуфьев Н. Г. Клещ Dermacentor pictus Herm. и антропогенное действие на его популяцию, а также связанный с ним лугополевой очаг туляремии // Мед. паразитол. болезни. 1987. - №3. - С. 16 - 20.

63. Петунии Ф.А. Роль разных видов иксодовых клещей в эпизоотологии пироплазмидозов // II акарологическое совещание. Киев, 1970. С. 77-78.

64. Пиралишвили И.С. К методике подсчета эозинофилов в периферической крови // Лаб.дело. 1962. - № 3.- С.20-22.

65. Поляков В.А., Узаков У.Я., Веселкин Г.А. Справочник ветеринарной энтомологии и арахнологии. М. - 1990. 119 с.

66. Померанцев Б.И. Иксодовые клещи (Ixodidae). // Фауна СССР. // Паукообразные. М. Издательство АН СССР. 235 с.

67. Радкевич П.Е. Оценка действия сердечных средств при пироплазмозе крупного рогатого скота и собак. // Ветеринария . 1960. - №3. - С. 25-29.

68. Радкевич П.Е. Сравнительная эффективность действия сердечных веществ при пироплазмозе собак. // ВИЭВ. Труды. 1961. - Т. XXV.- С. 152.

69. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва. — 2005.

70. Рабинович С. А., Воронина З.К., Степанова Н. И. и др. Первое обнаружение бабезиоза человека в СССР и краткий анализ случаев, описанных в литературе / / Мед. паразитология и паразитарные болезни. 1978. -№3 С. 47- 107.

71. Рыбкина А. Д. Фармакодинамика беренила и азидина, их лечебные и профилактические свойства при бабезиозе КРС: Автореф. дис . докт. биол. наук/ Воронеж, с/х инст. В. 1965. - 20 с.

72. Санин А.В., Васильев И.К. Проблема снижения токсичности антипротозойных препаратов при бабезиозе собак ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи (г. Москва).

73. Сапегина В. Ф., Доронцева В.А., Телегин В. И., Ивлева Н. Г., Добротворский А. К. Особенности распространения Ixods persulcatus в лесопарковой зоне г. Новосибирска // Паразитология. 1985. - №5 - С. 370 -373.

74. Страшнов Д. А. Изучение химиопрофилактических и стерилизующих средств беренила при экспериментальном пироплазмозе собак. // Ставропольский СХИ. Научные труды 1975. - Выпуск 38. - Т.5. -С. 9-10.

75. Степанова Н.И. Принципиально новая вакцина / Москва: Знание, 1989. 161 с.

76. Степанова Н.И. Протозойные болезни с/х животных / Москва: Колос, 1982. -С. 25-72.

77. Тимофеев Б. А. Патогенетическая терапия при кровепаразитарных болезнях // Журнал Ветеринария. 1991. - № 7. - С. 49.

78. Тимофеев Б.А. , Карпенко ИГ. Химиотерапия протозойных заболеваний с/х животных / Москва: Россельхозиздат, 1977. С.- 47.

79. Фрадкин В.А. Аллергодиагностика in vitro. М.: Медицина1975.

80. Хозгуд Ж. и др. Терапия и хирургия щенков и котят. // М.: -Аквариум 2004. С. 64-68.

81. Чернушенко Е.Ф., Когосова JI.C. Иммунология и иммунопатология заболевания легких.// Киев. 1981. 208с.

82. Шебиц X., Брасс В. Оперативная хирургия собак и кошек.// М.: -Аквариум 2001. С. 305-306.

83. Шумилов Б. В. Изменения в вирулентности полевого штамма Р. Canis и динамика некоторых биохимических показателей крови при пироплазмозе собак: Автореф. дис. . . докт. биол. Наук / Ленинград, вет. инстит. Л.-1971.-18 с.

84. A chronic infection presenting as fever of unknown origin. Clin. Infee. Diseases., 1996, У. 5, p. 809-812.

85. Abdullahi S.U., Mohammed A.A., Trimnell A.R. Clinical and hematological findings in 70 naturally occurring cases of canine babesiosis.// J. of Small Animal Practice.-1990.-Vol.31.-P. 145-147.

86. Adachi Kozo, Marirnura Susurne Иммуносупрессия у собак, естественно заражённых В. canis. J. Vet. Med. Scien., 1993, v 3, P. 504.

87. Anderson J.F., Magnarelli L.A., Sulrer A.J. Canine babesiosis: indirect fluorescent antibody test for a North American isolate of Babesia gibsoni. //Am. J. Vet. Res.-1980.-Vol.41.-P.2102.

88. Babenko L.V., Rubina M.N. Analysis ofthe relations between the density of active ticks Ixodes ricinus and Ixodes persulkatus and weather conditions. "Theor. Quest. Natural Foe. Deseases." Prague, Czechosl. Acad. Sci., 1965, P. 201-208.

89. Barbosa Ribeiro Mucio Flavio, Didino Lirno Jose, Friche Passos Lygia M., Guirnaraes Antonio Marcos. Freguencia de anticorpos fluorescentes anti Babesia canis et caes de Belo Horizonte. Arg., bras. Med. vet. Et zool.,1990, у. 6, P. 516.

90. Basson P.A. Canin babesiosis: a report on the pathology of three cases with special reference to the cerebral form. // J.S. Afr. Vet. Med. Ass.-1965.- Vol. 36. -P.333-341.

91. Bautista C.R., Kreier J.P., The action of macrophages and immune serum on growth of Babesia microti in short term cultures. // Trope med. Parasitol .-1980. - Vol. 31 .-P.313.

92. Bautista C.R., Kreier J.P., Effekt of immune serum on the growth of Babesia in hamster erythrocytes in short-term culture,// Infect. Immun.-1979.-Vol.23.-P.470.

93. Bletener D.W." Vergleicllende Untersllch ung der Feinstruktni yon Babesia gibsoni und Babes'ia canis.!/ Tropenmed Parasitol.-1968.-Vol.19.-P.330.

94. Bobade P. A., Oduye О. O., Aghorno H.O. Prevalence of antibodies against B. canis in dogs in an endemic areal., 1989, y. 4, P. 108.

95. Botha H. The cerebral form of babesiosis in dogs.// J.S. Afr. Vet. Med. Ass.-1964.-Vol.35.-P.27-28.

96. Boussarie D. Un cas de piroplasmose ayec des parasites aspect particulier. Anirn. Cornpagn. 1982, у. 6, P. 597-599.

97. Boustani Maria'R., Gelfand Jeffrey A. 1996. Babesiosis. Clin. Infec. Diseases., 1996, V. 4, P. 611-614.

98. Breinl A., Hindle E. Contributions to the morphology and life history of Piroplasma canis. Ann. Trop. Med. Parasitol., 1908, У. 2, P. 233.

99. Breitschwerdt E.B., Malone 1.В., Mac Williams P., Levy M.G. Babesiosis in the greyhound.// J.Am.Vet.Med.ASS.-1983.- Vol.182.-P.978.

100. Brocklesby D.W. Human babesiosis. J. S. Afr. Vet. Assoc., 1979, V. 4 P. 302-307.

101. Brumpt E. Transmission de la piroplasmose canme Francaise par le Dermacentor reticlllatlls. Embolies parasitaires dans les capillaires de 1" encephale./Bl. Soc. Pathol. Exot.-1919.-Vol.12.-P.651.

102. Corea W.M. Babesiose canis: transmissao transplacentaria. -Biologico. Brasil., 1974, У. 11, P. 321-322.

103. Cox F.E.G. Malaria and babesiosis. Nature., 1983, У. 5939, P. 114115.

104. Dalgliech R.J., Dimmock Lormnek, Hill M.W., Mellors L.T. Babesia argentina: disseminated intravascular coagulation in acute infections in splenoetomized elves. Exp. Parasitol., 1976, Y. 1, P. 124-131.

105. Daniel Milan, Сету Vladimir, S3ymonshi Stanislaw Wiad parasitol., 1986, V. 4-6, P. 355 361.

106. Eureby J., Moreau У., et.al., Experimentation des proprietes antipiroplasmigues de Г Imidocarb sur Babesia canis, agent de la piroplasmose canine en Europe.// Bull. Acad.Vet. France. 1980. - Vol. 53. - P.475.

107. Falagas Matthew E., Klempner Mark S. Babesiosis in patients with AIDS. 1996.Y. 13, P. 35-38.

108. Farwell G.E., Legrand E.K., et. al. Clinical observation on Babesiagibsoni and Babesia canis infections in dogs. //J. Am. Vet. Med. Ass.-1982.-Yol.180, N25.- P.507-511.

109. Gorenflot Andre, Piette Mauries. Spetieme cas mondial de babesiose humane. Aspect en microscopie-electronique a balayage des hematies parasitees. Ann. Pharm franc., 1976, У. 3-4, P. 89-94.

110. Gorenflot A., Brasseur P., et. al. Cytological and immunological responses to Babesis divergens in different hosts: ox, gerbil, man.// J. Parasittol.-1991 .-Vol.77.-P.3-12.

111. Groves M.G., Vanniasingham J.A. Treatment of Babesia gibsoni infections with phenamidine isethionate.// Vet. Rec.-1970. -Vol. 86. P.8.

112. Groves M.G., Dennis G.L. Babesia gibsoni: field and laboratory studies of canine infections.// Exp. Parasitol. 1972. - Vol. 31. - P. 153.

113. Gugliemone A. A., Mangold A. J., Agmne D. H., Gaido А. В., De Olsen A. A. The effect of infection by Babesia sp. on some biological parameters of engorged females of Boophilus micro plus., 1989, v.l, P. 16.

114. Harrion L. R., Palmer В. H. Further studies n amitras as a veterinary acaricide.// Pestic Sci.-1981.-V.12-№4.-P.467-474.

115. Healy Georg R. Speilman Andrew, Gleason Neva. 1976. Human babesiosis: reservoir of infection on Nantncket Island. Sciense., 1976, y. 4238, P. 479-480.

116. Hocard , Motas. Contribution a letude de la piroplasmose canine.-Ann.4, №3.-P.233-240.

117. Irvin P.J., Hutchinson G.H., Clinical and pathological findings of Babesia infection in dogs. // Australian Vet. I.-1991.-Vol.68, №6.-P.204-209.

118. Itoh N., Itoh S. Morphological observation of Babesia gibsoni in erythrocytes of naturally infected dogs.// J. Vet. Med. Ass.-1989.-Vol. 42, № 9.-P.645.

119. Ishibashi Т., Sunaga F., et al. Isolation of Babesia canis from a dog in the Okinawa Mainland.// J. Vet. Med. Ass.-1994.-Vol.47, №3.-P.204.

120. Itoh N., Agri M., et. al. The effect of diminazene aceturate on splenectomized dogs with Babesia gibsoni infection.// Vet. Clinical pathology.-1988.-Vol. 17, № 4.-P.94-98.

121. Jacobson L. S., Clark I. A. The pathophysiology of canine babesiosis to an old puzzle.// J. S. Afr. Vet. Assos.-1994.- Vol.65, № 3.-P.134-145.

122. Jacobson L. S. Cerebral ataxia as a possible complication of babesiosis in two dogs.//J. S. Afr. Vet. Ver.-1994.-Vol.65, № 3.-P. 130-131.

123. Just. Pube. Health Hyg., 1908, y. 16, C. 513.

124. Jolivet G., Marchand A. Le piroplasme da chien aspects taxonomigne, morfologiqne et biologiqne. Anim. Co., 1974, y. 2 P. 13, 125-126.

125. Kinoshita K. Untersuchunden uber B. Canis (Riana and Galli-Valerio). Arch. Protistenk., 1907, У. 8, P. 294.

126. Leroux J. M.,D. Halluin J., Myller G., Mallart O., Roguiet P. Recherche rapider de B.canis par micros de fluorescente. Feuil. Biol., 1992, У. 189, P.51.

127. Lewengrub S., Rudzinska M. A., Piesman J., Spielman A., Zung J.// The influence of heat on the development of Babesia micros in unfed nymphs of ixodes damming., 1989, У. 6, P. 1510 1515.

128. Lobbetti R. G., Reyers F. Mettgemoglobinuria in anturally occurring Babesia canis infection., 1996, У. 2, P. 88-90.

129. Loutan L. La babesiose, une zoonose meconnue. Schweis med. Wochenschr., 1995, y. 18, P. 886-889.

130. Malherbe W. D. The manifestations and diagnosis of Babesia infection. // Annals of the New York Academy of Sciences.-1956.-Vol. 64.-P.128-146.

131. Malherbe W. D., Parkin B. S. Atypical symptomatology in Babesia canis infection. //J. S. Afr. Vet. Med. Assoc.-1951.-Vol. 22.-P.25-61.

132. Miguelez M., Linares Feria M., Gonzales A., Mesa M.C., Armas F., Laynez P. Babesiosis humana en un paciente esplenectomizado. Med. clin., 1996, У. 11, P. 427-429.

133. Miller L. C., Tainter M.L. Estimation of the ED 50 and its error by means of logarifmic- probit graph paper. Proc. Soc. Exper. Biol. And Med., 1944,v.2,P.261-264.

134. Moreau У., Soula A. Babesia canis: la cultura in vitro du parasite et son etude ultrastructurale. ВиН. SOC. Sci. Vet. Et med. сотр. Lyon., 1979, v. 5, P. 255-261.

135. Moreau У., Vidor E., Bissuel G., Dubreuil N. Vaccination against canine babesiosis: an overview of field observations. Trans. Roy. Soc. Trop. Med. and Hyg., 1989, v. 83, P. 95-96.

136. Meeusen E., Lloyd S., Soulsby EJ.L. Antibody levels in adoptively immunized mice after infection with Babesia microti or injection with antigen fractions.// Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci.-1985.- Vol. 63.-P.261.

137. Molinar E., James M.A., Kakoma I., Holland C.J., fnd Ristic M. Antigenic and immunogenic studies on cell culture-derived Babesia canis.// Vet. Parasitol., 1982.-Vol.10.-P.29.

138. Moore D.J., WilliaTs M.C. Disseminated intravascular coagulation: a complication of Babesia canis infection in the dog.// l.S.A. Vet. Ass.-1979.-Vol. 50.-P.265-275.

139. Nott S.E., Gero A.M., et. al. Routine screening for potential babesicides using cultures of Babesia bovis. // International J. For Parasitology. -1990. Vol. 20. №6. - P. 798-802.

140. Ogitani Toshiari, Okabe Tatsugi, Jwamoto Jchizo, Sasaki Normasa. Jap. J. -1987.- Vol.43.-P.97-104.

141. Ogunkoya A.B., Adeyanju J.B., Aliu Y.O. Experiences with the use of imizol in treating canine blood parasites in Nigeria.//J.Small Anim. Pract. -1981- Vol.22. -P.775.

142. Onishi Т., Suzuki S. et. all. Serum gaemolytic activity of Babesia gibsoni-infected dogs: the difference in the activity between self and oneself Red blood cells.//J. Vet. Med. Science.-1993.-Vol. 55, № 5.-P.203-206.

143. Onishi Т., et. al. Serum hemolytic activity in dogs infected with Babesia gibsoni.// J. Parasitol.-1990.-Vol.l6,№ 4.-P.564-567.

144. Osorno B. Miguel, Vega Carlos, Ristic Miodrag, Robles Carlos, Ibana Samuel. 1976. Isolation of Babesia spp. From asymptomatic human beings. Vet. Parasitol., 1976, v. 1,P. 111-120.

145. Piercy S.E. Hyper-acute canine babesia.// The Vet. Record.-1947.-Vol. 59.-P.612-613.

146. Purchase H. S. Cerebral babesiosis in dogs. // The Vet. Record.-1947.-Vol. 59.-P.269-270.

147. Regendanz P., Reichenow E. Die entwicrlung von Babesia canis in Dermacentor reticulatus. Arch. Protistenr., 1933, v. 1, P. 50.

148. Ristic M., Kreiner J. R.// Babesiosis, Eds., Academic Press, Nem York.-1981.

149. Ristic Miodrag, Conroy J.D., Siwe Sandra, Healy G.R., Smith A.R., Huxsoll P .L. Babesia species isolated from a woman with clinical babesiosis. -Amer. J. Trop. Med. and Hyg., 1971, v. 1, P. 14-22.

150. Ristic Miodrag. The weather related ecology of the tick, J. Ricinus. - L: Who Teche. Note., 1978, v. 159, P. 97-104.

151. Roher D. P., Anderson J. F., and Nielsen S. W. Experimental babesiosis in coyotes and coy dogs.// Am. J. Vet. Res.-1985.-Vol. 46.-P.256.

152. Sanders D. A. Observations on canine babesiosis ( Piroplasmosis).// J. Am. Vet. Med. Ass.-1937.-Vol. 90.-P.27-40.

153. Schein E., Mehlhorn H., Voigt W.P. Electron microscopically studies on the development of B. canis (S.) in the salivary glands of the vector tickD. Reticulat. Act. Trap., 1979, v. 3, P. 229-241.

154. Schuberg H., Reichenow E. Uber Bau und Vermehrung von Babesia canis in Blute des Hundes. Arb. Keiser. Gesundheitamte., 1912, v. 39, P. 415.

155. Shortt H.E. Babesia canis: the life cycle and laboratory maintenance in its arthropod and mammalian hosts. Inf. Parasitic., 1973, v. 2, P. 119-148.

156. Shakespeare A. S. The incidence of canine babesiosis amongst sick dogs presented to the onderstepoort Veterinary academic hospital.// J. S. Afr. Vet. Ass.-1995.- Vol. 66, № 4.-P.247-250.

157. Schetters P.M., Kleuskens 1., Scholters N., Bos H.J. Vaccination of dogs against Babesia canis infection using parasite antigens not in vitro ceetlle. / // Parasite Immllnol.- Vol.14. P.295-305.

158. Spiclman Andreiw, Pishan Joseph, Etlcing Paul. Epizootology of human babesiosis. J. N.Y. Entomol. Soc., 1977, v. 4, P. 214-216.

159. Spiewar Gisele, Lima Jose Divino. Эпидемиологические, клинические и диагностические аспекты инвазированных В. Canis собак: Arg. Bras. Med. ret zootecn ., 1993, v. 2, P. 235.

160. Stewart C.G. A comparison of the efficacy of isometamidium, amicarbalide and diminazene against Babesia canis in dogs and the effect on subseguent immunity . // J.S. Afr. Vet. Ass. 1996. - Vol. 67. №2. - P. 47-51.

161. Sunaga Fugiko, Hamicawa Kazuhiko, Kanno Yasunori. The thermic cirdanian rhythm of dogs infected with B. Gibsoni. Jap . J. Vet. Sci., 1988, у. 1, P. 279-281.

162. Szymanski Stanislaw. Seasonal activity of Dermacentor reticulatus. Act parasitic, pol., 1987, v. 23 32, P. 247 - 255.

163. Takeda Yutaka. Relation between thrombocytopenia and splenomegaly in canine babesiosis. Jap. J. Vet. Res., 1995, v. 1, P. 33.

164. Tarahashi Toshiyuri. Delay of reticulocyte maturation in dogs with chronic anemia caused dy Babesia gibsoni infection. Jap. Vet. Rec., 1992, v. 1, P. 61.

165. Taylor J.H., Guthrie A.I., Leisewit Z.A. The effect of endogenously produced carbon monoxide on the oxygen status of dogs infected with B. canis. J. S. Afr. vet. assoc., 1991, v. 4, P. 153.

166. Taylor J.H., Guthrie A.I. et al. The effect of Babesia canis induced hemolysis on the canis hemoglobin oxygen dissociation curve. //J.S. Afr. Veter. Assoc.-1993.-Vol.64, № 4.-P.141-143.

167. Taylor J.H., et.al. Electrophoretic separation of canine haemoglobin in dogs with babesiosis.// J.S. Lfr. Vet. Ass.-1995.-Vol.66, N24.-P.219-221.

168. Uilenberg G., Verdiesen P.A., Zwart D. Imidocarb: a chemoprophylactic experiment with Babesia canis.// Vet. Q.-1981.- Vol.3 .-P.118.

169. Van Heerden J. The transmission of Babesia canis to the wild dog Lycaon pictus and black backed jackal Canis mesomelas.// J.S. Afr. Vet.Assoc. -1980.-Vol.51.-P.119.

170. Schetters P.M., Kleuskens 1., Scholters N., Bos H.J. Vaccination of dogs against Babesia canis infection using parasite antigens not in vitro ceetlle. / // Parasite Immllnol.- Vol.14. P.295-305.

171. Vflherbe W. D., et. al. The diagnosis and treatment of acid-base deranged dogs infected with Babesia canis. .// J. S. Afr. Vet. Assoc.-1976.-Vol. 47.-P.29-33.

172. Yaname Jtsuro. Norin suisansho kachiku eisei shikenjo kenkyu hokokti. Bull. Nat. Inst. Anim. Health., 1995, v. 101, P. 1-13.

173. Zaurent Catherine. Les vekteurs est le babesiose canine. Part. Med. et chir. Anim. Eie., 1986, У. 2, P. 73 -79.

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Фармако-токсикологическая характеристика и терапевтическая эффективность имидокарба 5% при бабезиозе собак

Оглавление диссертации Зверев, Артем Александрович :: 2008 :: Москва

Введение диссертации по теме "Ветеринарная фармакология с токсикологией", Зверев, Артем Александрович, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармако-токсикологическая характеристика и терапевтическая эффективность имидокарба 5% при бабезиозе собак"

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2008 года, Зверев, Артем Александрович

Похожие научные работы

Каталог диссертаций