Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Бабезиоз собак в условиях Московской области

На правах рукописи

Кошелева Марина Игоревна

Бабезиоз собак в условиях Московской области (эпизоотология, иммунитет, терапия)

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология 03.00.19 - паразитология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва-2006

Работа выполнена на кафедре ветеринарной патологии аграрного факультета Российского университета дружбы народов.

Научный руководитель:

кандидат биологических наук, доцент И.А. Молчанов

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Б.А. Тимофеев кандидат ветеринарных наук, доцент Д.Н. Шемяков

Ведущее учреждение:

НИИ пушного звероводства и кролиководства

Защита состоится 14 декабря 2006 г. в 12-00 часов на заседании диссертационного совета К 212.203.02 в Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8, корп.2, аграрный факультет.

Адрес электронной почты: у.у. makarov@agro.pfu.edu.ru

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6.

Автореферат разослан 13 ноября 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совет кандидат сельскохозяйственных наук, доцент

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Несмотря на то, что бабезиозы сельскохозяйственных животных в целом достаточно хорошо изучены, разработана диагностика, терапия и профилактика этой инвазии, остаётся ещё много слабо детализированных проблем, касающихся бабезиоза плотоядных. Слабо изучены вопросы регионального распространения бабезиоза, восприимчивость животных в зависимости от возраста, пола и породы, естественная резистентность и иммунный статус у больных и переболевших животных, недостаточно разработана специфическая и симптоматическая терапия, иммунопрофилактика, реабилитация переболевших животных.

Согласно статистическим данным (Р.М.Рыщанова, 2000; P.Conrad et al., 2001; Г.А.Послов и др., 2006) за последние 10 лет заболеваемость собак бабезиозом увеличилась в несколько раз. В определённой степени это связано с увеличением миграции населения (развитием туризма, пригородного садоводства), в результате чего увеличился ареал клещей, что привело к новым очагам инвазии. Кроме того, с тех пор как прекратились обработки лесных массивов пестицидами, размножение клещей практически не регулируется, их популяция постоянно растёт. В последнее десятилетие в населённых пунктах, особенно в городах, резко возросло количество собак, а отсутствие специальных выгульных площадок привело к тому, что увеличилась их плотность в лесопарковых зонах городов, что не могло не найти отражение в эпизоотической ситуации по бабезиозу.

Непрерывный и неконтролируемый рост численности собак, отсутствие эффективных средств профилактики болезни, антисанитарное состояние выгулов способствовало тому, что течение болезни становилось всё более тяжёлым и нередко заканчивалось гибелью животных. Все эти факторы позволяют предположить влияние городской среды на формирование урбанизированных очагов данной инвазии.

Особенно возросла актуальность исследования данной группы протозоозов в связи с участившимися сообщениями о заболевании людей бабезиозом (С.В.Новгородцева, 1999; Э.И.Коренберг, 2002).

Цели и задачи исследования. Целью исследований явилось изучение современных особенностей бабезиоза, в частности уточнение эпизоотологии, иммунитета и лечения. Исходя из этого, были поставлены следующие задачи:

• изучить особенности эпизоотологии бабезиоза в условиях Московской области (динамику заболеваемости собак бабезиозом за последние годы, сезонную, возрастную и породную особенность заражения собак Babesia canis, данные региональной иксодофауны);

• определить морфологические особенности Babesia canis (размеры, форму, интенсивность инвазии);

• изучить гематологические, биохимические показатели крови и мочи, а также факторы неспецифической резистентности при разной степени тяжести течения болезни (колебания гемоглобина, количества эритроцитов и лейкоцитов, состояние фагоцитарной активности клеток крови, уровни IgG и титры интерферона);

• провести сравнительный анализ лечебно-реабилитационной и профилактической эффективности беренила и верибена при разной степени тяжести течения бабезиоза у собак. Научная новизна. Научная новизна работы заключается в установлении эпизоотического состояния по бабезиозу собак и иксодофауне в отдельных зонах Московской области, в определении сезонных, породных и возрастных особенностей заболеваемости собак бабезиозом с учётом популяционного состава животных, а также в изучении морфометрических особенностей Babesia cams в зависимости от тяжести течения заболевания. Впервые установлена корреляция гематологических показателей, фагоцитарной активности нейтрофилов, концентрации IgG и тяжести течения заболевания.

Практическое значение. На основании полученных результатов исследования подтверждено и доказано, что эпизоотический процесс при бабезиозе в изучаемом регионе - процесс управляемый. Определены и апробированы наиболее эффективные лечебно-реабилитационные способы и средства широкого спектра действия и целесообразность применения пестицидов для борьбы с иксодовыми клещами в регионе. Положения, выносимые на защиту:

• территориальные и популяционные границы эпизоотического процесса при бабезиозе собак в изучаемом регионе;

• морфометрические особенности Babesia cartis при разной степени тяжести течения заболевания;

• изменение факторов неспецифической резистентности (фагоцитарной активности нейтрофилов, концентрации IgG и титров интерферона), гематологических и биохимических показателей в зависимости от тяжести течения бабезиоза;

• сравнительная эффективность верибена и беренила при разной степени заболевания собак бабезиозом.

Апробация работы и публикация результатов исследований.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных научных конференциях студентов, аспирантов, молодых учёных и сотрудников аграрного факультета кафедры ветеринарной патологии Российского университета дружбы народов (2001-2005г.г.), на первой международной юбилейной конференции, посвящённой 110-летию со дня открытия К.И.Виноградовым сибирской двуустки у человека (Томск, 2001), на Международной научно-практической паразитологической конференции, посвящённой 110-летию со дня рождения профессора А.А.Маркова (Москва, 2002).

По материалам диссертационной работы опубликовано 6 научных работ, в том числе статьи в журналах «Ветеринария», «Вестник РУДН», «Вестник ветеринарной медицины», «Ветеринарная патология».

Объём и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований, их

обсуждения, выводов, практических предложений. Список использованной литературы включает 193 источника, в том числе 44 иностранных. Работа иллюстрирована 13 таблицами, 2 схемами и 13 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы и методы исследования

Настоящая работа проводилась в 2000-2006 гг. на кафедре ветеринарной патологии аграрного факультета РУДН, а также в условиях клинико-диагностической лаборатории Апрелевской ветеринарной лечебницы и Наро-Фоминской станции по борьбе с болезнями животных.

Эпизоотологические исследования бабезиоза. Изучение эпизоотологии, гематологических показателей, а также лечебно-профилактические мероприятия проводили на 1942 собаках, больных бабезиозом, принадлежавших частным владельцам г. Москвы и Московской области. Возраст животных колебался от 2 месяцев до 15 лет. Постановку окончательного диагноза на бабезиоз у поступающих на приём животных проводили по результатам исследования мазков крови, окрашенных по Романовскому, а также используя Яеазгат® Квик-Диф набор.

Сбор клещей осуществляли с момента открытия дачного сезона, с апреля по октябрь-ноябрь, обследование производилось на 2198 собаках, принадлежащих частным владельцам.

Статистические данные, характеризующие эпизоотологию бабезиоза, получали в собственных исследованиях.

Изучение морфометрических признаков бабезий. Исследование проводили в мазках крови 79 собак, больных бабезиозом разной степени тяжести, возраст которых был от 6 месяцев до 14 лет. Согласно рекомендациям А.И.Ятусевича и В.Т.Заблоцкого (1995), во внимание принимали следующие морфологические признаки: величину (больше, меньше или равны радиусу эритроцита), внутриклеточное расположение (на периферии или в центре эритроцита), количество паразитов в одном эритроците, угол соединения парно-грушевидных форм, наличие типичных (диагностических) форм, процент поражения эритроцитов.

Исследования крови и мочи. Изучение количественного и качественного состава крови животных проводили общепринятыми в клинической гематологии методами у 79 больных и 10 здоровых собак (контроль) в возрасте от 6 месяцев до 14 лет.

На основании интенсивности инвазии всех больных собак разделили на 3 группы по степени тяжести заболевания:

• лёгкая - паразитемия < 1%, основные клинические симптомы: Т 39,7±0,3°С, вялость, слабость, анорексия и ослабление отправления физиологических функций;

• средняя - паразитемия 1-3% , основные клинические симптомы: Т 40,1±0,5°С, анорексия, слабость, гемоглобинурия, тахикардия, снижение отправления физиологических функций;

• тяжёлая - паразитемия >3%, основные клинические симптомы: Т 40,9±0,3°С, анорексия, затруднённое дыхание, тахикардия, гемоглобинурия, желтуха, слабость задних конечностей, снижение отправления основных физиологических функций.

Общий анализ мочи проводили с использованием диагностической тест-системы «Combur -Test®» по следующим показателям: рН, белок, глюкоза, кетоновые тела, уробилиноген, билирубин, кровь, гемоглобин.

Определение факторов неспецифической резистентности.

Фагоцитарная активность нейтрофилов. Изучение указанной способности нейтрофилов крови проводили на 20 собак разных пород на модели поглощения частиц полистирольного латекса диаметром 1,7 мкм по методу И.С.Фрейдлина и соавт. (1976) в модификации ЛЛ.Эберта и соавт. (1983). С помощью иммерсионной микроскопии активность фагоцитоза оценивали по следующим показателям: фагоцитарный индекс - количество фагоцитирующих латекс нейтрофилов в % от общего числа, фагоцитарное число - количество поглощённых за определённое время частиц латекса в расчёте на 1 нейтрофил, коэффициент фагоцитарного числа - отношение общего количества нейтрофилов к количеству фагоцитировавших клеток.

Определение количества иммуноглобулинов в сыворотке собак, больных бабезиозом. Концентрацию сывороточных иммуноглобулинов (IgG) у 79 больных и 10 здоровых (контроль) собак в возрасте от 6 месяцев до 14 лет определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле по G.Mancini et al. (1965).

Тестирование интерферона. Для определения активности сывороточного ■ интерферона использовали методику подавления цитопатического действия тест-вируса (ВВС — вирус везикулярного стоматита) в культуре диплоидных клеток CV-1. Титр интерферона учитывали по его максимальному разведению, обеспечивающему сохранение клеточного монослоя в 50% лунок.

Изучение противопротозойной активности беренила и верибена проводили на 66 собаках, спонтанно инвазированных бабезиями. Возраст собак составлял 1-5 лет, интенсивность инвазии больных собак была менее 1%, от 1 до 3% и выше 3%. 33 собакам был введён беренил в дозе 3,5 мг/кг живой массы и 33 собакам - верибен в дозе 3,5 мг/кг живой массы. Эффективность препаратов учитывали по результатам исследования мазков крови, окрашенных по Романовскому, через 12, 24 и 48 часов после введения препарата и по клиническим и гематологическим признакам, характеризующим общее состояние больного животного.

Статистическую обработку полученных цифровых данных проводили общепринятыми методами вариационной статистики (Г.Ф.Лакин, 1990; Л.В.Куликов, А.А.Никишов, 1994). Степень достоверности различия между сравнительными средними величинами оценивали с помощью критерия Стьюдента. Различие между сравнительными величинами в эксперименте считалось достоверным при уровне значимости Р<0,05.

2.2 Результаты собственных исследований 2.2.1 Эпизоотология бабезиоза собак в условиях Московской области

Структура заболеваемости собак бабезиозом в мегаполисе.

Анализ полученных данных позволил установить долю бабезиоза в структуре общей заболеваемости собак в условиях Московской области.

Рисунок 1

Структура заболеваемости собак в мегаполисе (п=3500). (ССС - сердечно-сосудистая система, МВС - мочееыделителъная система, ЖКТ-желудочно-кишечный тракт)

вирозы 7%

Прочее 27%

патология ЖКТ10%

дерматозы 8%

патология ССС 2%

,., патология патология МВС 5% |хательной

системы 1%

бабезиоз 14%

хирургическая патология 26%

Заболеваемость собак бабезиозом регистрировали достоверно чаще, чем заболевания сердечно-сосудистой системы и дыхательного аппарата (Р<0,01).

Сезонные особенности бабезиоза собак в Московской области.

За период наблюдений с животных было снято 11785 клещей. Из снятых клещей к виду Rhipicephalns sanguineus отнесено 8013 экземпляров (67,9%), к Dermacentor marginatus — 3772 экземпляров (32,0%).

Таблица 1

Показатели заклещеванности и заражённости собак бабезиозом

Годы Количество Количество Индекс Количество Заражённость

обследованных снятых обилия заражённых собак

животных клещей клещей бабезиозом бабезиозом,

собак (п=1888) %

2000 125 725 5 112 89,6

2001 240 1440 6 210 87,5

2002 359 1400 4 329 91,6

2003 480 3360 7 384 80,0

2004 534 3104 5 449 84,0

2005 460 1756 4 404 87,8

Анализ данных таблицы 1, свидетельствует об отсутствии корреляции между числом животных по индексу обилия клещей и процентом заражённых бабезиозом собак. Эпизоотический процесс при бабезиозе в период изучения характеризуется нарастающей волной и при условии отсутствия профилактических мероприятий охватывает все возрастающее количество восприимчивых животных. Массовое распространение иксодовых клещей (Rhipicephalus sanguineus и Dermacentor marginatus), являющихся переносчиками бабезиоза, постоянный контакт их с зараженными животными, наличие восприимчивых собак к заболеванию указанной болезнью и весьма благоприятные природно-климатические условия Московской области способствуют заболеванию собак бабезиозом.

Рисунок 2

Динамика заболеваемости собак бабезиозом в Московской области (1999-2005 гг.).

годы

Экстенсивность инвазии за период 1999-2005 гг. увеличилась в 6 раз. Особенно большой всплеск экстенсивности инвазии был отмечен в весенне-летний период 2004 года. В 2005 году наблюдали уменьшение числа заболевших животных по сравнению с 2004 годом (рисунок 2).

Сезон болезни (его продолжительность, начало и конец) зависел от природно-климатических условий года и в среднем составлял 220 дней (рисунок 3). Самый ранний случай бабезиоза был зарегистрирован 1 апреля, а последний - 6 ноября в 2000 году. В 2001 году первый случай заболевания зарегистрирован 18 апреля, что характерно для более позднего наступления весны, когда температура 12-14°С установилась после 15 апреля, последний 22 октября. В 2005 году первое заболевание бабезиозом зарегистрировали 4 апреля, что обычно для начала весеннего периода, а последний - 16 ноября; позднее проявление бабезиоза связано с продолжительной тёплой осенью, когда средняя температура была 13±2°С и влажность 90%, что является благоприятными фенологическими условиями для иксодофауны.

Рисунок 3

Сезонность бабезиоза собак.

60

XII.

и

X

IV

IX

VII

Таким образом, установлено, что массовое заражение животных происходило в конце апреля - мае (первый пик заболеваемости животных бабезиозом), что коррелировало с активностью клещей. В июле — начале августа заболеваемость снижалась до единичных случаев. Второй пик регистрировали в конце августа - сентябре. Весенняя вспышка сопровождалась максимальным количеством заболевших животных. Осенью число больных животных обычно было значительно меньше, чем весной.

Возрастные и породные особенности бабезиоза с учётом популяционного состава собак.

В Московской области наибольшее количество животных входит в возрастную группу от 1 года до 3 лет (34%), затем до 1 года (25%), от 3 до 5 лет ( 21%); наименьшее количество собак в возрастной группе от 11 до 13 лет

От числа принятых животных, больных бабезиозом наибольшее количество находится в группе от 1 до 3 лет (23 %), затем от 3 до 5 лет (19%), затем от 0 до 1 года и от 7 до 9 лет (по 16%) и наименьшее количество обратившихся было в возрасте от 11 до 13 лет (5%). При исследовании возрастного состава собак среди поступивших на приём животных установлено, что собаки старше 7 лет подвержены заболеванию бабезиозом в наибольшей степени. Наименьшая восприимчивость была выявлена у животных в возрасте до 1 года, что противоречит ранее известным материалам Е.А.Деевой (1997); С.В.Новгородцевой (1996), Т.В.Балагула (2000), согласно которым наибольшую заболеваемость отмечали у собак в возрасте от 1 года до 5 лет, а наименьшую у собак старше 10 лет.

Анализ результатов не выявил предрасположенности того или иного пола к заболеванию бабезиозом, которая в среднем была одинакова. Однако прослеживается некоторая тенденция к большей предрасположенности к

(1 %).

бабезиозу особей мужского пола как при расчёте на популяцию - 52 % восприимчивых самцов и 48% самок, так и по числу принятых больных бабезиозом животных - 60% самцов и 40% самок. Возможно, это связано с тем, что поголовье кобелей выше. Отношение количества самцов к количеству самок в популяции составляет приблизительно 1:1,6.

Наибольшее количество в популяции составили беспородные животные, затем немецкие овчарки, среднеазиатские и кавказские овчарки, а также ротвейлеры, наименьшее количество было зарегистрировано ньюфаундлендов, бульмастифов, русских гончих.

Из числа поступивших на приём больных животных наибольшее количество было среди беспородных, затем спаниелей, немецких овчарок и пуделей, а наименьшее среди доберманов, восточно-европейских овчарок, хаски и пекинесов.

После расчёта породной восприимчивости с учётом популяционного состава было выявлено, что наиболее чувствительны к бабезиозу собаки следующих пород: сеттеры, ньюфаундленды, колли, спаниели, шнауцеры, пудели и лайки. Наиболее устойчивыми к бабезиозу собак являются доберманы, овчарки (кавказские, восточно-европейские, немецкие и среднеазиатские) и ротвейлеры. Среднюю чувствительность к бабезиозу проявили беспородные собаки, хаски, русские гончие, болонки, лабрадоры и пекинесы.

2.2.2 Изучение морфометрических особенностей В. canis

При анализе историй болезни животных выявлена следующая интенсивность инвазии: при тяжёлой форме - более 4% (максимально 9%), при средней форме интенсивность инвазии варьировала от 1 до 4%, при лёгкой форме составила менее 1%.

Полученные данные подтверждаются материалами других авторов (B.JI. Якимова, 1930; М.В. Крылова, 1981; H.A. Казакова, 1982; ВЛ. Лебедевой, 1990).

В процессе болезни установлена связь тяжести течения заболевания собак бабезиозом с формой, размером, расположением и количеством бабезий в клетке крови (эритроците, нейтрофиле) и плазме периферической крови.

При тяжёлом течении бабезиоза в эритроцитах чаще обнаруживали несвязанные и связанные парные грушевидные формы размером 3,87±0,05*2,46±0,06мкм и 3,77±0,02х2,32±0,03мкм соответственно, а также несвязанные парные овальные бабезии со средним размером 2,3 8±0,09х 1,67±0,07мкм, в одном эритроците их количество варьировало от 2 до 6 паразитов. Бабезии обнаруживали и вне эритроцитов, в основном это были одиночные крупные грушевидные формы размером 4,11±0,03><2,53± 0,04 мкм.

При средней тяжести заболевания в эритроцитах устанавливали преимущественно паразитов овальной формы средних и мелких размеров: 2,87±0,02х2,18±0,03мкм, 5±0,07*2,11±0,05мкм, а также связанные грушевидные формы со средним размером 3,89±0,04х1,98±0,08мкм

При лёгкой форме течения заболевания чаще встречали одиночные грушевидные формы паразитов размером 4,1±0,07х2,21±0,03мкм, реже мелкие округлые формы по 2-6 паразита в одном эритроците размером 2,13±0,05 х2,16±0,01мкм.

2.2.3 Факторы неспецифической резистентности

больных бабезиозом собак

При изучении факторов неспецифической резистентности были исследованы фагоцитарная активность нейтрофилов, изменение концентрации ^О и титра интерферона при бабезиозе различной тяжести.

Фагоцитарная активность нейтрофилов. Было установлено, что количество лейкоцитов у собак, больных бабезиозом, по сравнению со здоровыми животными, увеличивается по мере роста тяжести заболевания (легкая, средняя, тяжелая) соответственно на 15%, 27% и 53%. В лейкоформуле отмечается увеличение количества эозинофилов в 3, 4.3 и 5.6 раза, увеличение количества юных нейтрофилов в 11.25, 15 и 18.75 раз, палочкоядерных - в 1.6, 2.5 и 3.1 раза, моноцитов на 1.4%, 2% и 3.4%, соответственно. В тоже время, процент содержания сегментоядерных нейтрофилов снизился на 3.6%, 7.5% и 9.4%, лимфоцитов - на 4.8%, 7.8% и 12.3%, соответственно.

В итоге исследований у здоровых животных фагоцитарный индекс составил 49,85± 4,12%, а фагоцитарное число 4,3±0,6. У собак с легкой и средней тяжестью бабезиоза активность фагоцитоза повышается, соответственно, до 55,73 ±1,78% и 63,85 ±3,14%, что объясняется влиянием бабезий на развитие клеточной реакции (.Г.Р.СиеШ е1 а1., 1984, В.Л. Лебедева, 1993). Фагоцитарное число при легкой и средней тяжести заболевания возрастает до 5,2±0,9 и 6,2±1,1 ед., что связанно с увеличением активности нейтрофилов.

При тяжёлом течении бабезиоза фагоцитарный индекс снизился до 42,2±3,1 %. Снижена и способность нейтрофилов к активному захвату частиц, что проявилось в уменьшении фагоцитарного числа до 3,1±0,5 ед. Характеристикой фагоцитарной активности является и коэффициент фагоцитарного числа, величина которого отражает активность участия нейтрофилов в реакции фагоцитоза. Увеличение коэффициента фагоцитарного числа у больных животных при тяжёлом течение бабезиоза указывает на то, что при общем увеличении количества нейтрофилов в периферической крови в реакцию фагоцитоза вступает на 8,1% нейтрофилов меньше, чем у здоровых животных. При лёгкой и средней тяжести коэффициент фагоцитарного числа уменьшается, и участие нейтрофилов в реакции фагоцитоза увеличивается соответственно на 4,8 и 11,86% по сравнению со здоровыми животными.

Таким образом, тяжесть течения болезни во многом определяет изменения фагоцитарной активности. Так, в отличие от лёгкой и средней степени течения заболевания, когда фагоцитарная активность возрастает, в ответ на внедрение бабезий при тяжёлой форме отмечается снижение фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса.

/£<? и титры интерферона при бабезиозе. Проведённые исследования показали, что у здоровых собак концентрация составляет 10,05±0,92 г/л, а у больных баб!езиозрм животных возрастает до 15,07±1,01 г/л, то есть в 1,5 раз, что свидетельствует об усилении активности В-звена иммунитета в ответ на внедрение бабезий. Применение этиотропной терапии в целом вызвало снижение уровня до 12,04±0,87 г/л в сыворотке крови за счёт элиминации паразитов (рисунок 3).

Рисунок 3

Показатели (г/л) у здоровых, больных и переболевших животных (п=89).

I I I

----,-,

Здоровые Больные Переболевшие

У здоровых собак титр интерферона составил 1:2 и 1:4. У больных бабезиозом собак титр интерферона был 1:4. Таким образом, титры интерферона в сыворотке крови здоровых и больных собак не имеют существенных различий.

2.2.4 Изменение гематологических и биохимических показателей крови и мочи при разной тяжести бабезиоза Гематологические показатели. При тяжёлой форме бабезиоза отмечено, что свёртывание крови замедлено, сыворотка красного цвета. При отстаивании крови эритроциты выпадали в осадок тёмно-фиолетового цвета, высота которого достигает 1/5-1/10 высоты уровня плазмы.

В начале заболевания количество эритроцитов составляло 3,5-4х1012/л, но в последующем изменение было более резким ( количество эритроцитов уменьшилось на 53% и составило 2,26-2,8х1012/л). Отмечали анизо- и пойкилоцитоз, а также гипохромазию эритроцитов (эритроциты бледно-розового цвета, напоминали кольца с выраженным центральным просветом), в них наблюдали внутриэритроцитарные включения (тельца Жолли). Количество гемоглобина снизилось с 130-140 г/л до 60-70 г/л. Число лейкоцитов увеличилось в 2-3 раза и составило 16-17х109/л за счёт увеличения палочкоядерных, юных и лимфоцитов, то есть имеет место сдвиг ядра влево. У больных животных отмечена эозинофилия. Количество эозинофилов в крови больных животных увеличилось до 3,75±0,5 %, число лимфоцитов до 19,0±2,5%, палочкоядерных стало больше в два раза, а количество сегментоядерных и моноцитов повысилось незначительно (рисунок 4,5).

Рисунок 4. Динамика изменения концентрации Рисунок 5. Изменение гематологических

показателей гемоглобина (г/л) при бабезиозе собак. показателей при бабезиозе собак.

При средней и лёгкой степени тяжести наблюдали те же изменения, но менее ярко выраженные. При лёгком течении выявлено незначительное снижение гемоглобина. Количество эритроцитов вначале болезни снижалось, но через 2-3 недели начинало возрастать, постепенно приближаясь к нормальным показателям. Количество лейкоцитов было увеличено до 18-19x109/л. При средней форме тяжести заболевания были ярко выражены качественные изменения форменных элементов крови: диаметр эритроцитов увеличивался в 1,5 (анизоцитоз), что свидетельствует об усилении функции красного костного мозга, как защитной функции организма. Окраска эритроцитов менее интенсивна (гипохромазия), реже отмечали гиперхромазию эритроцитов и пойкилоцитоз.

Таким образом, токсическое действие бабезий на организм собак сопровождается эритроцитопенией, снижением гемоглобина, лимфоцитозом, увеличением палочкоядерных нейтрофилов. Гипохромазия эритроцитов свидетельствует о низком содержании гемоглобина в эритроците, что типично для железодефицитной анемии.

Анализ полученных данных указывает на необходимость комплексного лечения в сочетании с дачей полноценных по содержанию витаминов, микро-и макроэлементов кормов, а также введения в корм витаминов А, Д, Е и витамины группы В. Наши данные подтверждают исследования других авторов (P.A.Basson, J.G.Pienaar, 1965, С.В.Новгородцевой, 1999, Е.А. Юровой, 2001, P.Conrad, J.Thomford et al., 2001).

Биохимические изменения крови. Анализ проведённых нами биохимических исследований позволил выявить количественные изменения некоторых биохимических показателей.

Так, при тяжёлом течении бабезиоза у 14% собак отмечено повышение холестерина до 7,6±1,1ммоль/л, у 64% собак увеличение мочевины до 27,3±1,1ммоль/л, у 85 % собак повышение креатинина до 128,5±2,2 мкмоль/л, у 92% увеличение ACT до 114±2,6 МЕ/л и у 85 % повышение АЛТ до 130±4,9 МЕ/л. Значительного увеличения общего белка не наблюдали, уровень глюкозы увеличен был незначительно. У всех собак этой группы была повышена концентрация билирубина до 37,95±2,2 мкмоль/л.

В группе с лёгким и средним течением болезни уровни холестерина, глюкозы, остаточного азота, мочевины, креатинина и АСТ были в пределах нормы. Но при средней тяжести у 16,2% собак был увеличен до 68,3±1,1 г/л общий белок, у 54% собак отмечено увеличение активности АЛТ до 65,3±1,8 МЕ/л. В обеих группах у всех собак была повышена концентрация билирубина до 17,4±1,1 и 27,25±1,1 мкмоль/л соответственно.

Таким образом, бабезиоз собак сопровождается серьёзным нарушением функций паренхиматозных органов.

Показатели мочи. При обследовании 89 животных, в моче больных, выявлены следующие изменения: при тяжёлой и средней тяжести болезни у 94% собак цвет мочи варьировал от кирпично-красного до тёмно-жёлтого, у 17,6% появилась мутность и у 21,5% рН мочи был равен 4±0,5. При бабезиозе лёгкой степени изменение цвета мочи наблюдали у 42,8% собак, появления мутности мочи у 17,8% и закисление у 50% животных.

Белок в моче обнаружили у 45% собак с тяжёлой и средней формой болезни и у 35% с лёгкой степенью. Увеличение количества уробилиногена в первом случае выявлено у 5,8%, глюкозурия у 25,4%, билирубинурия у 80,3% и гемоглобинурия у 100% собак, причём у 39,2% собак наблюдали микрогемоглобинуршо и у 60,8% макрогемоглобинурию. У животных с лёгкой степенью заболевания уробилиноген в моче не обнаружили, глюкозурия отмечена у 21,4%, кетонурия у 3,5%, билирубинурия у 67,8%, гемоглобинурия у 71%, микрогемоглобинурия у 40% и макрогемоглобипурия у 31%.

Необходимо отметить, что при быстрой и значительной потере белка с мочой уменьшается объём циркулирующей плазмы, в результате происходит задержка натрия, и как следствие развиваются отёки и артериальная гипертензия. Обнаружение в моче в большом количестве билирубина (билирубинурия) и уробилиногена (уробилиногенурия) наблюдается в результате гемолиза эритроцитов, лихорадки и нарушении функции печени. Обнаружение в моче ацетона, бета-оксимаслянной кислоты, ацетоуксусной кислоты является результатом лихорадки и почечной глюкозурии.

Таким образом, данные, полученные при исследовании мочи, подтверждают предыдущие выводы о развитии серьёзной патологии при бабезиозе собак.

2.2.5 Эффективность лечения бабезиоза беренилом и вернбсном

Для лечения собак больных бабезиозом были использованы 2 препарата.

Беренил применяли в виде водного раствора в дозе 3,5 мг/кг массы тела животного. Предварительно препарат растворяли в дистиллированной воде из расчета 25 мл дистиллированной воды на 2,36 г препарата. Раствор вводили внутримышечно из расчёта 1 мл/10кг массы тела животного.

Вернбен также предварительно растворяли в дистиллированной воде и применяли в дозе 3,5 мг/кг. Содержимое одного пакета (2,36 г) растворяли в 25 мл дистиллированной воды. Полученный раствор вводили внутримышечно из расчета 1 мл на 10 кг массы тела животного.

Таблица 2

Эффективность применения беренила и верибена при лечении бабезиоза собак.

Препарат Доза препарата Количество больных животных Эффективность, %

Через 12 часов Через 24 часа Через 48 часов

Беренил 3,5 мг/кг живой массы п=33 72,7 78,7 81,8

Верибен 3,5мг/кг живой массы п=33 87,5 90,6 98

Различия в эффективности двух изучаемых препаратов достоверны при р<0,05, то есть при первом уровне значимости.

В результате проведённых опытов отмечено, что при интенсивности инвазии менее 1% возбудитель исчезал из крови больного животного через 12 часов после применения обоих препаратов (эффективность 100%). При интенсивности инвазии от 1 до 3% через 12 часов в крови у 9,3% больных животных при инъекции верибена паразитемия составляла 0,4%, при применении беренила у 5,5% больных собак - 0,2%. При применении верибена, при интенсивности инвазии более 3%, у 18% больных собак через 12 часов паразитемия была равна 1,2% и у 7% после применения беренила -0,6%. В целом, эффективность беренила через 12 часов после введения составила 72,7%, а верибена 87,5%. Через 24 часа после применения препаратов, эффективность беренила и верибена возросла на 6% и 3,1% соответственно (таблица 2). Через 48 часов у 81,1% больных животных после введения беренила и у 98% после назначения верибена состояние стало удовлетворительным, симптомы болезни ослабевали: восстановился аппетит, температура тела снизилась до нормы, уменьшилась желтушность слизистых, исчезла макрогемоглобинурия, отмечено увеличение эритроцитов в среднем до 3,85±0,35 х1012/л и гемоглобина до 85±15 г/л.

Таким образом, эффективность верибена через 48 часов составила 98%, а беренила-81,8%.

По нашим наблюдениям, после применения верибена и беренила имеет место нарушение функций печени и почек, тяжелые поражения нервной системы, особенно у колли, бобтейлов, шелти и шарпеев. Поэтому наряду с этиотрошюй терапией возникла целесообразность включения в схему лечения препаратов патогенетической и симптоматической терапии, характер применения обуславливали развитием осложнений и степени их выраженности. С целью их профилактики осуществлялась инфузионная терапия объёмозамещающими (полиоксидин, реополиглюкин) и базисными (раствор Рингера, лактосоль) растворами с применением диуретиков в течение 2-3 суток. Для предотвращения развития инфекционно-токсического шока (падение артериального давления, резкая тахикардия, одышка, прекращение мочеотделения, развитие синдрома дессиминированного внутрисосудистого свертывания) дополнительно проводили патогенетическую терапию, которая

заключалась во внутривенном введении преднизолона в дозе 30-120 мг или дексаметазона, подкожного или внутривенного назначения антиферментных препаратов типа «Контрикал» в дозе от 10000 до 200000 Ед. С целью улучшения микроциркуляции и понижения агрегации тромбоцитов применяли трентал в дозе 30-50мг, добавляя его в инфузионный раствор. Для нормализации сердечной деятельности вводили подкожно 1-2 мл 10% сульфокамфокаина. С целью снятия спазмов гладкой мускулатуры использовали препараты баралгин, максиган, спазган. В каждом случае лечения для предупреждения аллергических осложнений проводили десенсибилизирующую терапию антигистаминными препаратами.

После снятия основных проявлений острой полифункциональной недостаточности органов назначали поливитаминную терапию. Курс витаминотерапии составлял 14-20 дней. Наряду с витаминотерапией применяли железосодержащие препараты типа ферроплекс, гемостимулин, феррум — лек.

В виду того, что бабезиоз вызывает в организме собак развитие таких патологических процессов, как анемия, нарушение сердечно-сосудистой и дыхательной деятельности, ослабление функции печени, почек и селезенки, переболевшим животным необходим реабилитационный период. Реабилитационный период заключается в ограничении физических нагрузок, изменении диеты животного за счёт уменьшения жира и белка и увеличения углеводов. Животным, переболевшим бабезиозом в тяжёлой форме, назначали эссенциале внутривенно в течении 5-10 дней с последующим переходом на пероральную дачу эссенциале в капсулах или карсила (гепатопротектора, улучшающего обменные процессы в печени и способствующего улучшению пищеварения) в течении месяца в сочетании с внутримышечными инъекциями витаминов В12, В(, Вб в течении 10 дней. Животным, переболевшим в лёгкой форме, назначали курс эссенциале в капсулах перорально в течение месяца или карсил в сочетании с витаминами группы В.

Такое комплексное лечение позволило снизить количество летальных случаев на 20% и тяжёлых осложнений на 40%.

3. Выводы

1. Бабезиоз собак занимает одну из ведущих позиций в структуре общей заболеваемости собак и имеет тенденцию к увеличению экстенсивности инвазии. Зарегистрировано 2 сезонных пика заболеваемости собак бабезиозом. Максимальный с середины апреля до середины июня и менее выраженный - с середины августа до конца сентября.

2. Иксодофауна Московской области представлена двумя видами клещей: Rhipicephalus sanguineus и Dermacentor marginatus. По данным многолетних наблюдений, индекс обилия весной и осенью составлял 4-7 клещей.

3. С возрастом восприимчивость собак к бабезиозу увеличивается. Самая высокая заболеваемость наблюдается у собак старше 7 лет, наименьшая

- в возрасте до 1 года. Наиболее чувствительны к бабезиозу собаки пород сеттеры, ньюфаундленды, колли, спаниели, шнауцеры, пудели и лайки. Наиболее устойчивы доберманы, овчарки (кавказские, восточноевропейские, немецкие и среднеазиатские) и ротвейлеры.

4. Бабезиоз у собак протекает в 3-х формах: при лёгком переболевании -паразитемия менее 1%, при среднем - 1-4%, при тяжёлом - более 4%. Размеры и формы бабезий имели свои особенности в зависимости от тяжести заболевания.

5. Выраженность показателей неспецифической резистентности (фагоцитарная активность, фагоцитарный индекс, коэффициент фагоцитарного числа) коррелирует с формой переболевания. При тяжёлой форме наблюдали снижение фагоцитарного числа и индекса и увеличение IgG и коэффициента фагоцитарного числа. При лёгком и среднем течении отмечали возрастание фагоцитарной активности и снижение коэффициента фагоцитарного числа. Уровень интерферона в зависимости от формы течения заболевания не изменялся.

6. С повышением интенсивности инвазии собак В. canis, возрастает степень патологических явлений в организме собак, что находит отражение в изменении гематологических и биохимических показателей крови и мочи.

7. Лечебная эффективность беренила и верибена при их парентеральном введении собакам больных бабезиозом соответственно составляла через 12, 24 и 48 часов 72.7-87.5%, 78.7-90.6%, 81.8-98% при лучшей переносимости верибена.

8. При проведении реабилитационной терапии у собак получены хорошие результаты от применения объёмозамещающих средств: полиоксидина и реополиглюкина, а также преднизолона, дексаметазона и трентала.

4. Рекомендации по использованию научных выводов

1. В связи с заклещеванием изучаемого региона необходимо тщательно осматривать собак на предмет обнаружения клещей после выгула их в лесопарковых зонах.

2. С целью более раннего выявления возможных осложнений бабезиоза, лечение следует проводить с обязательным контролем гематологических и биохимических показателей крови и мочи больного животного. Лабораторные исследования следует проводить как в период лечения, так и в течение последующего реабилитационного периода.

3. Лечение собак при бабезиозе должно носить комплексный характер, включая, помимо специфической противопаразитарной терапии, патогенетическую, симптоматическую и иммуностимулирующую терапию. В реабилитационный период необходимо животному назначать диетотерапию, ограничивать физические нагрузки.

5. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Кошелева М.И., Олейников С.Н., Молчанов И.А. Эпизоотическая ситуация по бабезиозу собак в г. Москве и Московской области. Вестник Российского Университета дружбы народов. Серия сельскохозяйственные науки, животноводство, 2001,6,91-93.

2. Кошелева М.И., Кудимова О.В., Молчанов И.А. и др. К эпизоотологии бабезиоза собак в Москве и Московской области. Вестник ветеринарии, 24, 3/2002, Международная паразитологическая конференция, ВИЭВ, Москва, 2002,32-33.

3. Кошелева М.И., Олейников С.Н., Молчанов И.А. и др. Новые аспекты в эпизоотологии бабезиоза собак в Московской области. Вестник ветеринарной медицины, 1 (12), 2004,21-22.

4. Кошелева М.И., Олейников С.Н., Молчанов И.А. и др. Популяционная эпизоотология бабезиоза собак в Московской области. Ветеринария, 4, 2004,51-53.

5. Кошелева М.И., Олейников С.Н., Молчанов И.А и др. Фагоцитарная активность нейтрофилов и морфометрия бабезий у собак. Ветеринария, 3,2005,33-36.

6. Кошелева М.И. Бабезиоз собак: эпизоотология заболевания, морфометрия паразита, фагоцитарная активность нейтрофилов в зависимости от тяжести течения инвазии. Ветеринарная патология, №3(18), 2006,31-37.

Кошелева Марина Игоревна (Россия) Бабезиоз собак в условиях Московской области (эпизоотология, иммунитет, терапия).

Работа посвящена изучению вопросов эпизоотологии бабезиоза собак, сезонной, возрастной и породной динамике заражения собак В. саше с учётом популяционных особенностей. Изучены морфометрические особенности В. сагш при разной степени тяжести заболевания собак бабезиозом. В результате проведённых исследований изучены гематологические й биохимические изменения крови и фагоцитарная активность нейтрофилов в зависимости от тяжести течения, а также концентрации и титра интерферона больных и переболевших животных. Проведено сравнительное изучение эффективности верибена и беренила при разной степени тяжести заболевания собак бабезиозом.

Marina I. Kosheleva (Russia) Babesiosis of dogs in the condition of Moscow region (epizootology, immunity,

therapy).

This work is dedicated to the study of the epizootological situation on babesiosis of dogs; seasonal, age and breed dynamics of the dog's contamination of B. canis, regarding the population peculiarities. Morphometric peculiarities of B. canis were studied taking into the severity of disease. As a result of the carried spent research hematology, biochemical changes and phagocytosis rate parameters were studied in blood of dog suffering from the different severity of babesiosis. The concentration of IgG and titer of interferon were determined in the serum of sick dogs. We realizated the comparative study of effectiveness of veriben and berenil in depending of the severity disease.

Отпечатано в ООО «Оргсервис—2000» Подписано в печать 10.11.06 Объем 1,00 пл. Формат 60x90/16. Тираж 100 экз. Заказ № 10/11—1т 115419, Москва, ул. Орджоникидзе, 3

Бабезиоз является распространённым во всём мире заболеванием, очаги инвазии существуют в тропиках и странах Средиземноморья, в Восточной и Западной Европе, в Америке. Бабезиоз собак является одним из наиболее опасных сезонных заболеваний, которое при отсутствии своевременной ветеринарной помощи нередко приводит к гибели животного. Это кровепаразитарное заболевание, которое характеризуется повышением температуры тела, анемией, желтухой, гемоглобинурией и учащением пульса.

Возбудителем бабезиоза собак является одноклеточные внутриэритроцитарные паразиты рода Babesia: В. canis, реже В. gibsoni или В. vogeli.

Переносчиками (векторами) В. canis являются преимущественно имаго иксодовых клещей (семейство Ixodidae) родов Dermacentor и Rhipicephalus, ареал которых в последнее время значительно расширился, в том числе, в Московской области и в Москве, что привело к более широкому распространению данного заболевания в этом регионе.

За исключением клещевой передачи инвазии в редких случаях возможно механическое перенесение посредством шприцев или при переливании крови (G.M.Urquhart et al. 1996; А.В.Будовской, 2002).

Кроме собак бабезиозом болеет крупный рогатый скот (возбудители - В. divergens, В. major, В. bigemina, В. bovis), овцы и козы (В. motasi, В. ovis), лошади (В. caballi, В. equi), свиньи {В. perroncitoi, В. trautmanni), кошки (В. felis). Возбудители бабезиоза этих животных передаются клещами таких родов, как Boophilus, Rhipicephalus, Haemaphisalis, Dermacentor, Hyalomma. Резервуаром возбудителя считают диких плотоядных (лисы, волки, енотовидные собаки); больных и переболевших бабезиозом животных; мелких млекопитающих (грызуны и насекомоядные), на которых питаются личинки, нимфы и взрослые клещи (J.W.Davis, R.C.Anderson, 1971; G.E.Farwell, E.K.LeGrand, et. al., 1982;

С.Н.Никольский, Н.А.Колабский, Г.С.Дзасохов, 1975; А.М.Нагиев, 1982, М.Е.Пономарёва, 1998).

В литературе есть сведения о заболеваемости людей бабезиозом. По данным G.M.Urquhart (1996) несколько случаев бабезиоза людей, закончившихся летально, были зарегистрированы в Югославии, СССР, Ирландии и Шотландии уже в 1957 году. Ранее было зарегистрировано около 100 случаев бабезиоза человека на востоке США. Болезнь имела симптомы сходные с малярией, сопровождалась лихорадкой, болью в мышцах, ознобом. Диагноз на бабезиоз был поставлен микроскопически. Бабезиоз человека, распространённый в Европе, протекает с летальностью 50% , возбудителем является Babesia divergens. Американский бабезиоз у людей чаще протекает латентно, возбудителем является Babesia microti. При исследовании сыворотки крови здоровых людей в Мексике и Нигерии у большинства были обнаружены антитела к бабезиям. Заражение человека происходит от укуса иксодовых и аргасовых клещей. Чаще заболевают лица, контактирующие с сельскохозяйственными животными, иногда -владельцы собак.

Актуальность проблемы. Актуальность работы заключается в изучении эпизоотологии бабезиоза собак в Московской области с учётом популяционных особенностей собак, изучении особенности морфометрии, изменений гематологических и биохимических показателей крови и мочи, а также некоторых данных неспецифической резистентности в зависимости от тяжести течения заболевания, сравнительное изучение эффективности 2-х препаратов - верибена и беренила в терапии бабезиоза собак.

Несмотря на то, что бабезиозы сельскохозяйственных животных в целом достаточно хорошо изучены, разработана диагностика, терапия и профилактика этой инвазии, остаётся ещё много слабо изученных вопросов, касающихся бабезиоза некоторых видов животных, в частности плотоядных. Слабо изучены проблемы регионального распространения бабезиоза, восприимчивость животных в зависимости от возраста, пола и породы, естественная резистентность и иммунный статус у больных и у переболевших животных, требует детализацию специфическая и симптоматическая терапия, реабилитация переболевших животных.

Согласно статистическим данным (Р.М.Рыщанова, 2000; P.Conrad et al., 2001; Г.А.Послов и др., 2006) за последние 10 лет заболеваемость собак бабезиозом увеличилась в несколько раз. В определённой степени это связано с увеличением миграции населения (развитием туризма, пригородного садоводства), в результате чего увеличился ареал клещей, что привело к новым очагам инвазии. Кроме того, с тех пор как прекратились обработки лесных массивов пестицидами, размножение клещей практически не регулируется, их популяция постоянно растёт. В последнее десятилетие в населённых пунктах, особенно в городах, резко возросло количество собак, а отсутствие специальных выгульных площадок привело к тому, что увеличилась их плотность в лесопарковых зонах городов, что не могло не найти отражение в эпизоотической ситуации по бабезиозу.

Непрерывный и неконтролируемый рост численности собак, отсутствие эффективных средств профилактики болезни, антисанитарное состояние территорий выгулов способствовало тому, что течение болезни становилось всё более тяжёлым и нередко заканчивалось гибелью животных. Все эти факторы позволяют предположить влияние городской среды на формирование урбанизированых очагов данной инвазии.

Особенно возросла актуальность исследования данной группы протозоозов в связи с участившимися сообщениями о заболевании людей бабезиозом (С.В.Новгородцева, 1999; Э.И.Коренберг, 2002).

Цели и задачи исследования. Целью исследований явилось изучение современных особенностей бабезиоза, в частности уточнение эпизоотологии, иммунитета и лечения. Исходя из этого, были поставлены следующие задачи:

• изучить особенности эпизоотологии бабезиоза в условиях Московской области (динамику заболеваемости собак бабезиозом за последние годы, сезонную, возрастную и породную особенность заражения собак Babesia canis, данные региональной иксодофауны);

• определить морфологические особенности Babesia canis (размеры, форму, интенсивность инвазии);

• изучить гематологические, биохимические показатели крови и мочи, а также факторы неспецифической резистентности при разной степени тяжести течения болезни (колебания гемоглобина, количества эритроцитов и лейкоцитов, состояние фагоцитарной активности клеток крови, уровни IgG и титры интерферона);

• провести сравнительный анализ лечебно-реабилитационной и профилактической эффективности беренила и верибена при разной степени тяжести течения бабезиоза у собак.

Научная новизна. Научная новизна работы заключается в установлении эпизоотического состояния по бабезиозу собак и иксодофауне в отдельных зонах Московской области, в определении сезонных, породных и возрастных особенностей заболеваемости собак бабезиозом с учётом популяционного состава животных, а также в изучении морфометрических особенностей Babesia canis в зависимости от тяжести течения заболевания. Впервые установлена корреляция гематологических показателей, фагоцитарной активности нейтрофилов, концентрации IgG и тяжести течения заболевания.

Практическое значение. На основании полученных результатов исследования подтверждено и доказано, что эпизоотический процесс при бабезиозе в изучаемом регионе - процесс управляемый. Определены и апробированы наиболее эффективные лечебно-реабилитационные способы и средства широкого спектра действия и целесообразность применения пестицидов для борьбы с иксодовыми клещами в изучаемом регионе.

Положения, выносимые на защиту:

• территориальные и популяционные границы эпизоотического процесса при бабезиозе собак в изучаемом регионе;

• морфометрические особенности Babesia canis при разной степени тяжести течения заболевания;

• изменение факторов неспецифической резистентности (фагоцитарной активности нейтрофилов, концентрации IgG и титров интерферона), гематологических и биохимических показателей в зависимости от тяжести течения бабезиоза;

• сравнительная эффективность верибена и беренила при разной степени заболевания собак бабезиозом.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены: на ежегодных научных конференциях студентов, аспирантов, молодых учёных и сотрудников аграрного факультета кафедры ветеринарной патологии Российского университета дружбы народов (2001-2005г.г.); на первой международной юбилейной конференции, посвященной 110-летию со дня открытия К.И.Виноградовым сибирской двуустки у человека (Томск, 2001); на Международной научно-практической паразитологической конференции, посвящённой 110-летию со дня рождения профессора А.А.Маркова (Москва, 2002).

Объём и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, собственных исследований, их обсуждения, выводов, практических предложений. Список использованной литературы включает 193 источников, в том числе 44 иностранных. Работа иллюстрирована 13 таблицами, 2 схемами и 13 рисунками.

5. ВЫВОДЫ

1. Бабезиоз собак занимает одну из ведущих позиций в структуре общей заболеваемости собак и имеет тенденцию к увеличению экстенсивности инвазии. Зарегистрировано 2 сезонных пика заболеваемости собак бабезиозом. Максимальный с середины апреля до середины июня и менее выраженный - с середины августа до конца сентября.

2. Иксодофауна Московской области представлена двумя видами клещей: Rhipicephalus sanguineus и Dermacentor marginatus. По данным многолетних наблюдений, индекс обилия весной и осенью составлял 4-7 клещей.

3. С возрастом восприимчивость собак к бабезиозу увеличивается. Самая высокая заболеваемость наблюдается у собак старше 7 лет, наименьшая - в возрасте до 1 года. Наиболее чувствительны к бабезиозу собаки пород сеттеры, ньюфаундленды, колли, спаниели, шнауцеры, пудели и лайки. Наиболее устойчивы доберманы, овчарки (кавказские, восточно-европейские, немецкие и среднеазиатские) и ротвейлеры.

4. Бабезиоз у собак протекает в 3-х формах: при лёгком переболевании - паразитемия менее 1%, при среднем - 1-4%, при тяжёлом - более 4%. Размеры и формы бабезий имели свои особенности в зависимости от тяжести заболевания.

5. Выраженность показателей неспецифической резистентности (фагоцитарная активность, фагоцитарный индекс, коэффициент фагоцитарного числа) коррелирует с формой переболевания. При тяжёлой форме наблюдали снижение фагоцитарного числа и индекса и увеличение IgG и коэффициента фагоцитарного числа. При лёгком и среднем течении отмечали возрастание фагоцитарной активности и снижение коэффициента фагоцитарного числа. Уровень интерферона в зависимости от формы течения заболевания не изменялся.

6. С повышением интенсивности инвазии собак В. canis, возрастает степень патологических явлений в организме собак, что находит отражение в изменении гематологических и биохимических показателей крови и мочи.

7. Лечебная эффективность беренила и верибена при их парентеральном введении собакам больных бабезиозом соответственно составляла через 12, 24 и 48 часов 72.7-87.5%, 78.7-90.6%, 81.8-98% при лучшей переносимости верибена.

8. При проведении реабилитационной терапии у собак получены хорошие результаты от применения объёмозамещающих средств: полиоксидина и реополиглюкина, а также преднизолона, дексаметазона и трентала.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. В связи с заклещеванием изучаемого региона необходимо тщательно осматривать собак на предмет обнаружения клещей после выгула их в лесопарковых зонах.

2. С целью более раннего выявления возможных осложнений бабезиоза, лечение следует проводить с обязательным контролем гематологических и биохимических показателей крови и мочи больного животного. Лабораторные исследования следует проводить как в период лечения, так и в течение последующего реабилитационного периода.

3. Лечение собак при бабезиозе должно носить комплексный характер, включая, помимо специфической противопаразитарной терапии, патогенетическую, симптоматическую и иммуностимулирующую терапию. В реабилитационный период необходимо животному назначать диетотерапию, ограничивать физические нагрузки.

2.8 Заключение

Бабезиозы, как следует из обзора литературы, относятся к заболеваниям, обусловленных паразитированием иксодовых клещей. Их эпизоотологическая опасность и вредоносность гораздо шире, чем сообщается в данных материалах.

Интересными являются эпидемиологические исследования, проводимые с 90-х годов в США и во многих странах Европы, в том числе и в России по изучению инфекций передаваемых иксодовыми клещами. Было обнаружено, что при укусе клещом возбудители разных заболеваний могут передаваться совместно. Существование «сочетанных» природных очагов наиболее актуально для России, так как наша страна является одним из самых обширных регионов, на территории которого практически повсеместно распространены иксодовые клещи (Э.И.Коренберг, 2001, Н.С.Пустовит, 2003).

Согласно Э.Б.Кербабаева (1998), при массовом паразитировании этой группы клещей у коров надои молока снижаются на 18-40%, масса телят снижаются до 12%.

Если коснуться этих вопросов у домашних плотоядных, то несомненно нельзя не учесть психологического состояния владельцев собак, страдающих от болезни и довольно частой гибели своих питомцев от бабезиоза. Другими словами указанное заболевание требует внимания и детального изучения экологии иксодофауны, региональных эпизоотологических особенностей болезни, патогенеза с учётом новейших данных науки: дессиминированного васкуляризационного синдрома, целесообразное применение иммунокоррегирующих средств.

С появлением разнообразных лекарственных средств для этиотропной, патогенетической и симптоматической терапии возникла необходимость сравнительного изучения эффективности наиболее часто употребляемых в лечении бабезиоза лекарственных препаратов и разных схем лечения.

Исходя из вышеизложенного поставленные перед нами задачи направлены на изучение ряда вопросов, касающихся эпизоотологического мониторинга бабезиоза собак в Московской области, иммунологического состояния организма животного при указанной болезни, в частности фагоцитарной активности нейтрофилов в зависимости от тяжести течения заболевания, изменение концентрации IgG и титров интерферона, а также ряда других вопросов, которые изложены нами в целях и задачах исследования.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1.Материалы и методы исследования

Настоящая работа по изучению эпизоотологии бабезиоза, гематологических показателей, а также лечебно-профилактических мероприятий проводилась в 2000-2006 гг. на кафедре ветеринарной патологии аграрного факультета РУДН, а также в условиях клинико-диагностической лаборатории Апрелевской ветеринарной лечебницы и Наро-Фоминской станции по борьбе с болезнями животных.

Эпизоотологические исследования бабезиоза. Сведения о заболеваемости собак бабезиозом брали из годовых отчётов и амбулаторных журналов Наро-Фоминской ветеринарной станции по борьбе с болезнями животных и районной ветеринарной лаборатории, а также ветеринарной лечебницы г.Апрелевки, Красногвардейской ветеринарной лечебницы.

Изучение эпизоотологии, гематологии, а также лечебно-профилактические мероприятия проводили на 1942 собаках (1214 кобелей и 728 сук) различных пород, больных бабезиозом, принадлежавших частным владельцам г.Москвы и Московской области. Возраст животных колебался от 2 месяцев до 15 лет.

Сбор клещей осуществляли с момента открытия дачного сезона, примерно с апреля по октябрь-ноябрь, обследование производилось на 2198 собаках, принадлежащих частным владельцам.

Постановку окончательного диагноза на бабезиоз у поступающих на приём животных проводили по результатам исследования мазков крови, окрашенных по Романовскому, а также используя Reastain® Квик-Диф набор. При этом соблюдали правила асептики и антисептики.

Статистические данные, характеризующие эпизоотологию бабезиоза, получали в собственных исследованиях.

Техника приготовления и окрашивания мазков.

Мазки готовили на предметных стеклах общепринятыми методами. Стёкла предварительно обезжиривали в смеси спирта с эфиром (в соотношении 1:1). Перед работой их вынимали и высушивали.

Кровь для изготовления мазка у взрослых собак брали из кровеносных сосудов уха, у щенков - из сосудов хвоста. Для получения мазка хорошего качества, на чистое обезжиренное спирт-эфиром предметное стекло наносили первую, выделившеюся после прокола сосуда каплю крови. Шлифовальное стекло устанавливали под углом 35-45° и, когда капля равномерно распределялась вдоль его нижнего ребра, плавно ведя шлифовальное стекло, наносили кровь на предметное стекло. Мазок высушивали.

Мазки фиксировали метиловым спиртом. Окрашивали мазки по Романовскому, краской, состоящей из азура П - 3,0, эозина В - 0,8; глицерина и метилового спирта - по 250,0 мл. Мазки крови погружали в рабочий раствор (1 мл дистиллированной воды + 1-3 капли краски) на 2040 минут, затем промывали дистиллированной водой, сушили и проводили микроскопирование. Микроскопическое исследование мазков крови проводили в иммерсионной системе микроскопа (об. х90).

Кеаз1аш®Квик-Диф набор (набор для быстрого дифференциального окрашивания) - это оптимальная композиция реагентов и фиксатора для дифференциального окрашивания клеточных элементов в мазках перифирической крови. Процедура окрашивания занимает 3 минуты и идеально подходит для экспресс-диагностики. Набор состоит из трёх 500 мл ёмкостей: Reastain®Quick-Diff Красный, Reastain®Quick-Diff Синий и Reastain®Quick-Diff Фиксатор. Для дифференциального окрашивания необходим также фосфатный буфер 67,0 ммоль/л рН 6,8.

Инструкция по окрашиванию:

Приготовление забуференной воды.

Соотношение при растворении 1:20, например, 10 мл фосфатного буфера растворить в 190 мл деионизированной или дистиллированной воды.

Окрашивание.

1. Наливаем растворы в отдельные ёмкости.

2. Погружаем высушенные на воздухе мазки в раствор Reastain® Quick-Diff Фиксатора (на 1 секунду 5-10 раз).

3. Погружаем стёкла в раствор Reastain®Quick-Diff Красного на 1 секунду с 3-15 раз.

4. Погружаем стёкла в раствор Reastain®Quick-Diff Синего на 1 секунду с 3-15 раз.

5. Промываем стёкла с препаратом в забуференной воде и даём просохнуть.

6.При необходимости сохранения образца на длительный период -накрываем стекло с препаратом покровным стеклом.

Результаты окрашивания можно варьировать, изменяя процедуру погружения. Для наших исследований подошёл следующий вариант:

1. Reastain®Quick-Diff Фиксатора - 10 раз по 1 секунде.

2. Reastain®Quick-Diff Красный - 6 раз по 1 секунде.

3. Reastain®Quick-Diff Синий - 10 раз по 1 секунде.

При окрашивании мазков следует учесть, что используемый для протирания кожи этиловый спирт может стать причиной гемолиза и появления артефактов. Нельзя допускать высыхания на какой-либо стадии процедуры, промывание препаратов следует осуществлять только в забуференной воде. Результаты окрашивания зависят от рН. Щелочное рН усиливает синий, а содержание кислоты - красный оттенок. Подробное использование и состав Reastain®Quick-Diff набора описано в «Практической гематологии» J. Dacie и S. Lewis (1995).

В правильно окрашенном мазке, бабезии должны иметь голубоватую цитоплазму, более тёмную по периферии и тёмно-красный хроматин в виде двух небольших ядер. Мазки имели розоватый цвет с незначительным фиолетовым оттенком.

Для общего клинического анализа кровь брали из периферической вены ушной раковины и центральной вены предплечья. При взятии крови соблюдали правила асептики и антисептики. Во избежание свёртывания крови в пробирку предварительно вносили 2-3 капли 1% раствора гепарина. Чтобы избежать гемолиза, кровь набирали по стенке пробирки.

Изучение морфологических признаков Babesia canis.

Исследование проводили в мазках крови 79 собак, больных бабезиозом разной тяжести течения, возраст которых был от 6 месяцев до 14 лет. При этом мы использовали рекомендации А.И.Ятусевича и В.Т.Заблоцкого (1995) и брали во внимание следующие морфологические признаки: величину (больше, меньше или равны радиусу эритроцита) расположение (на периферии или в центре эритроцита) количество паразитов в одном эритроците угол соединения парно-грушевидных форм наличие типичных (диагностических форм) процент поражения эритроцитов

Определение размеров паразита осуществляли с помощью окуляра-микрометра: круглой стеклянной пластинки со шкалой, имеющий длину 1 см и разделённую на 100 частей. Окуляр-микрометр помещали внутрь окуляра на его диафрагму, для чего предварительно отвинчивали глазную линзу окуляра. В микроскоп виден не только объект, но и деления шкалы окуляра-микрометра. Поворачивая окуляр и передвигая препарат, можно определить размеры микроскопического объекта в делениях шкалы окуляра-микрометра. Для определения размеров объекта в микрометрах следует установить цену деления окуляра-микрометра и умножить на неё соответствующие цифры, полученные при измерении объекта

Следует учесть, что цена одного деления окуляра-микрометра зависит от увеличения объектива и окуляра. Поэтому для каждой комбинации объектива и окуляра определяют свою цену деления и составляют таблицу. Последнее осуществляется при помощи объекта-микрометра, у которого на предметном стекле вместо объекта помещена шкала длиной 1 мм, разделённая на 100 частей. Каждое деление равно Юмкм. Помещаем объект-микрометр на столик микроскопа и подводим изображение его шкалы к шкале окуляра-микрометра. Совмещаем какие-либо штрихи обеих шкал и устанавливаем сколько делений объекта-микрометра приходится на известное число делений окуляра-микрометра. Цену деления определяем в микрометрах (мкм) отношением числа делений объекта-микрометра к числу делений окуляра-микрометра умноженного на 10.

Определение фагоцитарной активности нейтрофилов. Гематология, биохимия крови и мочи.

Для оценки влияния простейших на организм нами была исследована кровь больных животных с целью определения фагоцитарной активности нейтрофилов.

Для экспериментального исследования использовали 20 собак, различных пород, принадлежащих частным владельцам.

Изучение способности нейтрофилов крови к захвату частиц проводили на модели поглощения частиц полистирольного латекса диаметром 1,7 мкм по методу И.С.Фрейдлина и соавторов (1976) в модификации Л.Я.Эберта и соавторов. (1983). Для оценки фагоцитоза 0,1 мл цельной крови смешивали с 50 мкл взвеси частиц латекса в концентрации 109 частиц/мл. После тридцатиминутной инкубации при температуре 37°С из клеток готовили препараты, которые высушивали, фиксировали 96° спиртом и окрашивали по Романовскому.

С помощью иммерсионной микроскопии активность фагоцитоза оценивали по следующим показателям:

- фагоцитарный индекс - количество фагоцитирующих латекс нейтрофилов в % от общего числа;

- фагоцитарное число - количество поглощённых за определённое время частиц латекса в расчёте на 1 нейтрофил;

- коэффициент фагоцитарного числа - отношение общего количества нейтрофилов к количеству фагоцитировавших.

Для дальнейшей оценки полученных показателей фагоцитарной активности были исследованы другие изменения, происходящие в периферической крови, в частности количество эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов и изменения в лейкограмме (М.Н.Лебедева, 1973).

Изучение количественного и качественного состава крови животных проводили общепринятыми в клинической гематологии методами.

Подсчёт количества эритроцитов и лейкоцитов в периферической крови собак производили с помощью счётной камеры Горяева

Содержание гемоглобина в крови определяли гематиновым методом (метод Сали) с использованием гемометра ГС-3.

Лейкограмму выводили по окрашенным мазкам крови путём дифференциального подсчёта под иммерсионной системой микроскопа лейкоцитов по методу Филиппченко. Окрашенный мазок крови делили на части - начальную, среднюю и конечную. В каждой части дифференциальный счёт клеток вели от одного края до другого. Подсчитывали не менее 100-200 клеток. Этот метод подсчёта в трёх различных частях мазка даёт наиболее правильную дифференциальную картину лейкоцитов. Для подсчёта лейкоцитов использовали одиннадцатиклавишный счётчик.

Для определения скорости оседания эритроцитов применяли метод Панченкова. Для его проведения использовали видалевские пробирки и аппарат Панченкова: штатив с гнёздами и зажимами для пипеток с просветом 1 мм.

Общепринятые методики проведения гематологических исследований описаны рядом авторов (Б.В.Уша, И.М.Беляков, 1998; М.Д.Уиллард и другие, 2004).

Исследование гематологии, биохимии крови и мочи проводили в лаборатории общепринятыми методами у 79 собак, больных бабезиозом, возраст которых был от 6 месяцев до 14 лет и 10 здоровых собак, которые использовались в качестве контрольной группы в возрасте от 9 месяцев до 12 лет.

Всех больных бабезиозом собак мы разделили на 3 группы по тяжести заболевания:

1. Лёгкая - процент поражённых эритроцитов < 1%; основные клинические симптомы: Т 39,7±0,3°С, вялость, слабость, анорексия и ослабление физиологических отправлений организма.

2. Средняя - процент поражённых эритроцитов 1-3%, основные клинические симптомы: Т 40,1±0,5°С, анорексия, слабость, гемоглобинурия, тахикардия, снижение физиологических отправлений организма.

3. Тяжёлая- процент поражённых эритроцитов <3%, основные клинические симптомы: Т 40,9±0,3°С, анорексия, затруднённое дыхание, тахикардия, гемоглобинурия, желтуха, слабость задних конечностей, снижение физиологических отправлений организма.

Общий анализ мочи мы проводили с использованием диагностической тест-системы «Combur -Test®». Диагностическая полоска «Combur -Test®» предназначена для клинического экспресс-анализа мочи по следующим показателям: рН, белок, глюкоза, кетоновые тела, уробилиноген, билирубин, кровь, гемоглобин.

Определение количества иммуноглобулина и титра интерферона в сыворотке собак, больных бабезиозом.

В опытах по изучению иммунологических показателей были использованы 79 собак, больных бабезиозом, 25 собак, переболевших бабезиозом за 3-4 недели до исследования и 10 здоровых собак, в качестве контрольной группы. Собаки были в возрасте от 4 месяцев до 12 лет разного пола и разных пород. Помимо иммунологических показателей у данной группы животных общепринятыми в клинической гематологии методами определяли количественный и качественный состав крови животных.

Концентрацию сывороточных иммуноглобулинов (IgG) в сыворотке крови больных собак определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле по G.Mancini et al. (1965). Суть метода заключается в следующем: белки тестируемых сывороток диффундируют из лунок в агарозу, содержащую моноспецифическую сыворотку против иммуноглобулина определённого класса, в результате чего вокруг лунок образуются кольца преципитации, диаметр которых зависит от концентрации иммуноглобулина в тестируемой сыворотке.

Для определения активности сывороточного интерферона использовали методику подавления цитопатического действия тест-вируса (ВВС) в культуре диплоидных клеток CV-1. В 96-луночные микропланшеты CV-1 к 0,05 см3 среды культивирования вносили по 0,1см3 испытуемой сыворотки, в разведении с 1:2 до 1:256. Через 24 часа в лунки вносили по 100 ТЦЦ50 ВВС, шт. Индиана, в объёме 0,05см3. Учёт реакции проводили, в зависимости от результатов параллельного титрования вируса через 24-36 часов после внесения вируса. Титр интерферона учитывали по его максимальному разведению, обеспечивающему сохранение клеточного монослоя в 50% лунок.

Изучение сравнительной эффективности беренила и верибена.

Изучение противопротозойной активности беренила и верибена проводились на 66 собаках, спонтанно инвазированных бабезиями. Возраст собак составлял от 1-5 лет, интенсивность инвазии больных собак была менее 1%, от 1 до 3% и выше 3%. 33 собакам был инъецирован беренил в дозе 3,5 мг/кг живой массы и 33 собакам верибен в дозе 3,5 мг/кг живой массы. Эффективность препаратов учитывали по результатам исследования мазков крови, окрашенных по Романовскому через 12, 24 и 48 часов после введения препарата и по клиническим и гематологическим признакам, характеризующих общее состояние больного животного.

Статистическую обработку полученных цифровых данных проводили общепринятыми методами вариационной статистики (Г.Ф. Лакин, 1990; Куликов Л.В., Никишов А.А., 1994).

Степень достоверности различия между сравнительными средними величинами оценивали с помощью критерия Стьюдента.

Различие между сравнительными величинами в эксперименте считалось достоверным при уровне значимости Р<0,05.

3.2. Результаты собственных исследований 3.2.1. Эпизоотология бабезиоза собак в условиях Московской области а) Структура заболеваемости собак бабезиозом в мегаполисе. Анализ полученных данных позволил установить долю патологии бабезиоза в структуре общей заболеваемости собак в условиях Московской области (рисунок 4).

Рисунок 4.

Структура заболеваемости собак в мегаполисе. вирозы 7%

Прочее 27% патология ЖКТ

10% дерматозы 8% патология ССС 2%J ( р. л еа/ патология патология МВС 5% дыхательной системы 1% бабезиоз 14% хирургическая патология 26%

Заболевания собак бабезиозом встречались достоверно чаще, чем заболевания сердечно-сосудистой системы и дыхательного аппарата QX0.01) б) Сезонные особенности бабезиоза собак в Московской области.

Для возникновения и распространения бабезиоза в популяции собак на определенной территории необходимо взаимодействие популяции возбудителя и популяции восприимчивых животных с учётом движущих сил эпизоотического процесса, которыми является известная триада:

1. Источник инвазии - в данном случае биотическая среда - клещи семейства Ixodoidea рода Dermacentor и Rhipicephalus, являющиеся переносчиками возбудителя бабезиоза - Babesia canis с уже предопределённой возможностью трансмиссии возбудителя в восприимчивый организм.

2. Механизм передачи и распространения инвазии. При бабезиозе механизм и направление трансмиссии - горизонтальное при косвенном контакте, опосредованное одушевлённым вектором - иксодовыми клещами, содержащими возбудитель болезни. Распространение инвазии векторное.

3. Восприимчивые животные - собаки, интактный организм которых, в естественных условиях не может противостоять внедрению, размножению и жизнедеятельности патогенного возбудителя и отвечает на это комплексом защитно-патологических реакций, проявляющийся в виде трансмиссивной инвазии.

Эпизоотический процесс при бабезиозе характеризуется нарастающей волной и при условии отсутствия профилактических мероприятий охватывает все возрастающее количество восприимчивых животных.

За период наблюдений с животных было снято 11785 клещей. Из снятых клещей к виду Rhipicephalus sanguineus принадлежало 8013 (67,9%), к Dermacentor marginatus - 3772 (32,0%).