Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Антиоксидантное действие беридона в терапии пироплазмоза собак

На правах рукописи

и0305536Э

Сумецкова Елена Антоновна

АНТНОКСИДАНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ БЕРИДОНА В ТЕРАПИИ ПИРОПЛАЗМОЗА СОБАК

16 00 04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж - 2007

003055369

Работа выполнена в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им Я Р Коваленко (ВИЭВ)

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Сидоров Игорь Валерьевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Слободяник Виктор Иванович доктор биологических наук, профессор Новик Тамара Самуиловна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО Московский государственный университет прикладной биотехнологии

Защита состоится «26» апреля 2007 г в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006 004 01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (394087, г Воронеж, ул Ломоносова, 114-6)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИВИПФиТ

Автореферат разослан <<££_у> 2007г

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук Ермакова Т И

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Изучение процессов перекисного окисления лииидов является основой для решения вопроса о целесообразности применения антиоксидантов в комплексе лекарственной терапии при заболеваниях различного генеза Актуальность проблемы продиктована, прежде всего, необходимостью разработки принципов фармакокоррекции нарушений перекисного окисления липидов (ПОЛ) и системы антиоксидантной защиты (АОЗ) с помощью отечественных лекарственных препаратов, обладающих низкой токсичностью

Проблема патологии, вызванной нарушением окислительных процессов в организме животного, важнейшей характеристикой которых является накопление токсических продуктов перекисного окисления липидов, имеет исключительно важное научное и практическое значение Свободнорадикальные окислительные процессы являются значительным патогенетическим фактором многих заболеваний и патологических состояний (Белов А Д и др 1997, Давлетов Р Г, 1998; Жлоба А А, 2001; Кармолиев Р X, 2002; Журавлев А И, 2003)

Коррекция нарушений перекисного (свободнорадикального) окисления липидов может предотвратить развитие патологического процесса или облегчить его течение, именно поэтому понимание характера изменений процессов пероксидации под влиянием лекарственного средства может являться одним из показателей, который определяет выбор препарата для лечения той или иной патологии

Бесспорное значение имеет служебное собаководство, в котором задействовано большое количество собак, которые в значительной степени облегчают осуществление пограничного и таможенного контроля Кровопаразитарное заболевание - пироплазмоз протекает с выраженным поражением внутренних органов (в основном печени и мышцы сердца) с тяжелыми последствиями Также необходимо учитывать, что при отсутствии своевременного лечения в 99% случаев заболевание собак пироплазмозом приводит к гибели животных

Как показали исследования последних лет (Гаджиева И А., 1996, Новгородцева С В , 1997, Казарина Е В , 2000, Луцук С.И., 2001, Дьяченко Ю В и др , 2004), пироплазмоз собак имеет широкое распространение во многих регионах России и, особенно, в зоне Северного Кавказа

Проблема борьбы с пироплазмозом собак усугубляется еще и тем, что имеющиеся в нашей стране противопаразитарные препараты, не всегда обеспечивают достаточный эффект при лечении и имеют ряд побочных действий (Schetters TP, 1994, Vercammen F, 1996; Пожарова HH,2001,2005)

Среди наиболее известных препаратов, применяемых в терапии пироплазмоза собак, следует выделить беренил, относящегося к группе среднетоксичных препаратов При подкожном и внутримышечном введении он не оказывает местно- раздражающего действия Механизм действия беренила связан с непосредственным действием на паразитов рода Babesia и, кроме

того, он обладает антибактериальным и фунгостатическим действием (М11пег Ю , 2001, УГОАЬ, 2003/ 2004)

Одним из новых отечественных антиоксидантных лекарственных средств, который успешно применяется в клинической практике, является димефосфон Препарат способен изменять интенсивность перекисного окисления липидов и активность ферментов антиоксидантной системы организма (Гараев Р С и др, 1970, Зиганшина Л Е, 1988; Данилов В И и др, 1992, Студенцова НА и др, 1992, Кения МВ., 1992/1993, Аналиева ДЖ и др, 1996)

Учитывая, что при различных патологических процессах происходит накопление свободных радикалов в организме животных, выше отмеченное явилось объективным обоснованием целесообразности разработки комплексного препарата, включающего в себя димефосфон, обладающего антиоксидантными свойствами и беренил - препарат специфической терапии при пироплазмозе

Целью работы являлось изучение интенсивности процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты организма у здоровых и больных пироплазмозом собак и разработка комплексного препарата, обладающего антиоксидантным и специфическим противопаразитарным действиями

Основные задачи исследований:

- научно обосновать и разработать новое лекарственное средство для лечения пироплазмоза собак - беридон,

- определить токсикологические показатели беридона и беренила на белых мышах,

- определить закономерности распределения, накопления беридона и беренила в органах, тканях кроликов, и представить фармакокинетическую характеристику препаратов,

- определить антиокислительную активность (АОА) беридона в модельной системе ПОЛ,

используя метод хемилюминесцентного анализа, провести определение интенсивности процессов ПОЛ и антиоксидантной активности крови здоровых и больных пироплазмозом собак, установить возможности их коррекции при применении препаратов,

- определить влияние беридона, беренила на специфические показатели, характеризующие состояние процессов ПОЛ и АОЗ у здоровых и больных пироплазмозом собак,

- изучить влияние беридона, беренила на некоторые морфологические и биохимические показатели крови у здоровых и больных пироплазмозом собак,

- определить эффективность беридона в комплексной терапии при острой форме пироплазмоза собак

Научная новизна. Создано новое лекарственное средство для лечения пироплазмоза собак - беридон Представлена токсикологическая характеристика и определены параметры фармакокинетики беридона и беренила Впервые показана целесообразность использования метода

хемилюминесцентного анализа для установления наличия уровня процессов ПОЛ и антиоксидантной активности крови в организме животных, определены закономерности распределения и накопления беридона и беренила в органах и тканях кроликов Определены уровень перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной защиты организма и некоторые морфологические и биохимические показатели крови у здоровых и больных пироплазмозом собак, а также изменение их соотношений под влиянием беридона и беренила. Определена эффективность беридона в комплексной терапии при острой форме пироплазмоза собак.

Новизна изобретения подтверждена положительным решением на выдачу патента «Препарат для лечения пироплазмоза собак» (per № 2006118961 от 01 06 2006)

Практическая значимость. Предложен новый препарат для лечения пироплазмоза собак - беридон, обладающий более высокой терапевтической эффективностью, чем беренил Результаты исследований включены в «Методическое пособие по изучению и методам определения уровня свободно-радикального окисления липидов и антиоксидантной защиты у животных», которое рассмотрено и одобрено Ученым Советом ВНИИ экспериментальной ветеринарии им. ЯР. Коваленко (25 10.2005) и секцией «Ветеринарная биотехнология» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (14 02 2006)

Личный вклад соискателя заключается- в разработке и создании комплексного препарата беридона, установлении физиологических границ интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантной активности крови у здоровых собак разного возраста, в проведении экспериментальных исследований по определению токсичности и аллергенных свойств беридона на белых мышах и морских свинках, в изучении особенностей распределения беридона и беренила по органам и тканям организма кроликов и в определении их фармакокинетических параметров, в изучении терапевтической эффективности беридона в сравнении с беренилом при пироплазмозе собак, анализе и обобщении результатов исследований

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены На Международной научно-практической конференции. «Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных», проходившей во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии 21-22 сентября 2004, г Воронеж.

На IV Национальной научно-практической конференции, с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» 26 -30 сентября 2005, г Смоленск

На Ученом Совете Всероссийского научно - исследовательского института экспериментальной ветеринарии им Я Р Коваленко (24 01 2007г) Основные положения, выносимые на защиту:

экспериментальные данные по токсикологической и фармакокинетической характеристики и закономерности распределения и

накопления в органах тканях животных нового комплексного лекарственного средства беридона

- результаты экспериментальных исследований, наличия процессов перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты организма у клинически здоровых и больных пироплазмозом собак и влиянии беридона и беренила на их интенсивность,

- данные экспериментальных исследований по сравнительному изучению терапевтической эффективности беридона и беренила

Публикация результатов исследований По материалам диссертационной работы опубликовано 3 научные статьи

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 166 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 5-ю таблицами основного текста, 13-ю таблицами и 9-ю рисунками приложения. Работа состоит из разделов введения, обзора литературы, материалы и методы исследования, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы из 240 источников, в том числе 95 иностранных авторов и приложения

2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.Матерналы и методы исследований.

Работа выполнена в лаборатории фармакологии, токсикологии и биохимии ГНУ Всероссийский научно- исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им Я Р. Коваленко (ВИЭВ), на опытной базе Вышневолоцкого отдела ВИЭВ (Тверская область), в клиниках г Москвы (ООО «Столичный Зооцентр») и г Улан-Удэ (НПЦ «Агроветсервис»), в соответствии с утвержденными планами научно-исследовательских работ в период 2003 - 2006 гг задание 02 РНТП фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению АПК РФ

Определение интенсивности ПОЛ и антиоксидантной активности крови собак, а также установление антиокислительной активности изучаемых препаратов в модельной системе in vitro проводили с помощью метода хемилюминесценции (ХЛ), разработанного Р.Р. Фархутдиновым (2003) с использованием хемилюминометра ХЛ-003 Проверку стабильности работы установки проводили перед каждым измерением по эталону ЖС-19 (ГОСТ 9411-81), интенсивность свечения которого составляет 5,1х105 квантов в секунду. Эта величина была принята за условную единицу (у е )

Для установления состояния процесса ПОЛ и системы АОЗ организма определяли следующие показатели содержание ТБК-активных продуктов, активность каталазы и пероксидазы (И Д Стальная и др, 1977, В С Бузлама и др, 1997), содержание церулоплазмина (ЭВ Тен, 1981), уровень фосфолипидов в сыворотке крови определяли по содержанию липидного фосфора (В С Камышников, 2000), содержание p-липопротеидов в сыворотке крови определяли по методу М И Ледвина (1960)

В исследованиях использовали разработанный нами комплексный

препарат беридон, имеющий в своем составе специфический противопротозойный препарат - беренил и антиоксидант - димефосфон

Экспериментальные исследования проведены на 60 белых мышах, 28 кроликах, 80 морских свинках и 69 собаках породы восточно-европейская овчарка 41 здоровой и 28 больных пироплазмозом

Изучение острой токсичности беридона проводили на белых мышах живой массы 16-18,0 г Препарат животным вводили внутримышечно, в форме раствора, в дозе 256,0 - 798,2 мг/кг массы тела Дозы вводимого препарата были выбраны с учетом данных по степени токсичности беренила (ЮМПпег, 1997). Все исследования по изучению острой токсичности беридона проводились в сравнительном аспекте с беренилом Расчет параметров токсичности проводили методом пробит-анализа, предложенного Миллером и Тейнтером (А А.Ступников, 1975).

Исследования по выявлению аллергенных свойств препаратов, проводили с помощью метода «гистаминового шока» на морских свинках (А Д Адо, О Г Алексеева, 1968)

Изучение закономерностей распределения беридона и беренила по органам и тканям было проведено на 25 кроликах - самцах 2,5 -3,0 кг живой массы Препараты вводились однократно, внутримышечно, в форме раствора в терапевтической дозе, равной 0,25-0,3 мл в зависимости от веса животного Количественное содержание препаратов в органах, тканях организма животных определялось по основному действующему веществу -диминазена диацетурат, методом, описанным КНБсЬе! \УА (1976) Исследованию были подвергнуты следующие органы и ткани- кровь, селезенка, печень, мышца сердца, легкие, тазобедренная мышца, почки, а также моча и экскременты

При расчете фармакокинетических параметров, использовали модельно

- статистический метод В К Пиотровского (1986) и полученные нами экспериментальные данные по распределению действующего вещества -диминазена диацетурат по органам и тканям кролика

Определение влияния препаратов беридона и беренила на организм клинически здоровых и больных пироплазмозом животных проводили на 28 собаках. Определяли следующие параметры количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, общего белка (И П Кондрахин и др, 1983), билирубина (В С Камышников,2000) спектрофотометрически

Диагноз на пироплазмоз ставили на основании результатов окрашивания мазков крови, методом Романовского-Гимзы, описанного в методических рекомендациях по изучению и разработке мер борьбы с протозойными болезнями животных (М. ВАСХНИЛ, 1984).

Терапевтическую эффективность беридона и беренила оценивали на собаках разного возраста, породы восточно - европейская овчарка Животные в количестве 28 голов, были разделены на 2 группы и 2 подгруппы в зависимости от возраста Животным 1 группы вводили беридон, 2 группы

- беренил, внутримышечно, в форме 7% раствора, в дозе 1,0 мл/10 кг массы тела, что соответствует дозе равной 3,5 мг/кг массы тела

Результаты оценивали по следующим клиническим параметрам температура, пульс, дыхание, исчезновение клинических признаков заболевания, паразитемии крови, проценту выживаемости животных

Статистическую обработку результатов исследования проводили методом Б Ф Лакина (1990)

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Интенсивность хемилюминесценции крови здоровых собак разного возраста. С помощью метода хемилюминесценции установлена интенсивность процессов ПОЛ и антиоксидантная активность крови собак разного возраста, породы восточно - европейская овчарка.

Интенсивность процессов ПОЛ и антиоксидантную активность крови определяли методом ХЛ у 25 собак разного возраста В период взятия крови все животные были физиологически здоровыми, охотно поедали корм, пили воду Температура тела, пульс и дыхание были в пределах физиологических границ здоровых животных Полученные результаты исследований представлены в таблице 1

Таблица 1

Показатели интенсивности хемилюминесценции крови

здоровых собак эазного возраста

Возраст собак Светосумма, уе Вспышка, уе Спонтанна я светимост ь,уе Максимальн ая светимость, уе Тангенс угла наклона кривой

7-12 мес 23,8 ±2,5 0,72±0,03 1,18±0,4 2,83 ± 0,3 0,18±0,05

1,5-3 года 15,4 ±2,0 1,92±0,03 1,29± 0,5 1,68± 0,5 0,34±0,01

4,0-6 лет 37,7 ±5,8 3,28+0,05 0,81± 0,2 5,37 ±0,4 0,30±0,02

8-9 лет 20,2 + 8,3 1,89+0,01 1,46+0,5 1,79 ±0,5 0,19±0,03

10-12 лет 13,5+3,1 1,66+0,03 1,37 + 0,5 1,75 ±0,7 0,17±0,03

Методом хемилюминесценции установлено, что у собак в период половой зрелости организма (7 - 12 мес) интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в организме превалирует над антиоксидантной активностью крови (показатели светосуммы и максимальной светимости были наибольшими в сравнении с другими возрастными группами) В данном возрасте состояние гуморально-клеточного иммунитета не стабильно и животные являются наиболее предрасположенными к заболеваниям различного характера Такое же явление отмечено у стареющих животных в возрасте 8-9, 10и12 лет

При достижении зрелости организма (с 1,5 до 3~ лет) интенсивность процессов ПОЛ в организме животных снижается (показатели светосуммы и максимальной светимости снизились в среднем в 1,6 раза), а уровень антиоксидантной активности крови повышается (показатель тангенса угла наклона графической кривой увеличился в среднем в 1,8 раза)

У собак среднего возраста (от 4* до 6 лет) интенсивность процессов

ПОЛ в организме повышается, а уровень антиоксидантной активности крови незначительно снижается (повышение показателей светосуммы и максимальной светимости в среднем в 2,8 раза и снижение показателя тангенса угла наклона графической кривой в среднем в 1,2 раза)

Полученные данные свидетельствуют о том, по мере взросления животных установлено повышение интенсивности процессов ПОЛ и антиоксидантной активности крови Причем, у животных с 1,5 - до 6 лет отмечается определенное уравновешивание в интенсивности процессов ПОЛ и антиоксидантной активности крови.

2.2.2. Уровень ПОЛ и состояние АОЗ организма клинически здоровых собак разного возраста. В исследованиях использовали кровь от 25 здоровых собак разного возраста, породы овчарка Животные были разделены на 5 групп в зависимости от возраста.

Для оценки состояния процесса ПОЛ и АОЗ организма определяли содержание ТБК- активных продуктов, активность каталазы (К.Ф. 1.11 1 6) и пероксидазы (К Ф 11117), содержание церулоплазмина, фосфолипидов и Р-липопротеидов (общих, белковой и липидной фракции)

Установлено, что содержание ТБК-активных продуктов в крови собак 7-8-месяцев было 0,4 ± 0,01 мкм/л, к 2,5 — 3-м и 6-ти годам повысилось и варьировало в пределах от 0,8 - до 0,9 мкм/л, а к 12-ти годовалому возрасту снизилось до 0,6 ± 0,09 мкм/л

Активность каталазы и пероксидазы в крови собак 7-8 месяцев возраста была 23,5 ± 4,4_Н202/л мин и 60,5 ± 17,4 ед опт пл/л сек, к 2,5 - 3* годовалому возрасту активность каталазы снизилась до 22,5 ±5,2 Н202/л мин, а пероксидазы повысилась до 53,1 ± 3,5 едопт.пл/л сек, а к 4~годам активность каталазы и пероксидазы повысилась до 41,6 ± 8,4 Н2О2/Л мин и до 50,9 ± 3,1 ед.опт пл/л сек, соответственно.

Содержание церулоплазмина в крови собак 7-8 мес было 0,17 + 0,04 мкм бензохинона/л мин, а к 5-6 летнему возрасту повысилось до 0,23 + 0 02 04 мкм бензохинона/л мин В крови собак 10 лет отмечено самое низкое содержание церулоплазмина - 0,06 ± 0,01 мкм бензохинона/л мин в сравнении с другими возрастными группами животных

Содержание фосфолипидов в крови собак 7- 8 мес было 45,4 ± 3,1 ммоль/л, к 2,5 -3" летнему возраста понизилось до 25,9 ± 6,3 ммоль/л, а к 6 годам повысилось до 40,4 ±1,8 ммоль/л

Содержание общих липопротеидов в крови собак 7-8 мес. было 813,6 ± 33,0_мг%, к 1,5 -2-м годам повысилось до 1050,2 ± 20,1 мг%, а к 4-м годам повысилось уже до 1135,3 ± 3,9 мг% В крови собак 10 летнего возраста отмечено самое высокое содержание общих липопротеидов — 1234,3 ± 0,7 мг%.

Содержание белковой и липидной фракций в р — липопротеидах кровисобак 7 - 8 мес было 170,5 + 34 2 мг% и 642,1 ± 12,8 мг%, к 1,5 -2-м годам их содержание повысилось до 216,8 ±3,8 мг% и до 740,2 ± 9,2 мг%, а к 6-ти годам снизилось до 193,5 ± 15,1 мг% и до 404,1 + 10,7 мг%, соответственно

Установлено, что с возрастом у животных наблюдается повышение уровня процессов ПОЛ и состояния АОЗ организма, характеризующихся наибольшим содержанием в крови ПЖ-активных продуктов, и повышением активности каталазы, пероксидазы и содержания церулоплазмина, фосфолипидов и (3 - липопротеидов в крови животных Причем, у животных в возрасте от 1,5 до 6 лет отмечается определенное уравновешивание в состоянии процессов ПОЛ и АОЗ организма.

2.2.3. Динамика интенсивности хемилюминесценции крови собак больных пироплазмозом.

Методом хемилюминесценции нами была предпринята попытка установить и оценить изменения в интенсивности процессов ПОЛ и антиоксидантной активности крови у собак при пироплазмозе Уровень интенсивности ПОЛ и антиоксидантной активности крови определяли в крови собак больных пироплазмозом, в количестве 28 голов, двух возрастных групп 7-12 месяцев и 1,5-3 года

Таблица 2

Показатели интенсивности хемилюминесценции крови собак больных пироплазмозом разного возраста

Группа животных Светосум ма, уе Вспышка, уе Спонтанная светимость, у е. Максимальн ая светимость, уе Тангенс угла наклона кривой

7-12 мес

Здоровые 23,8 ± 2,5 0,72±0,03 1,18±0,4 2,83 ± 0,3 0,18±0,050

Больные 96,2±6,0* 13,1±2,25* 24,4±2,3* 48,8±5,35* 0,07±0,002 *

1,5-3 года

Здоровые 15,4 ±2,0 1,92±0,03 1,29± 0,5 1,б8± 0,5 0,34±0,010

Больные 67,0±5,1* 35,7±4,2* 26,1±1,7* 37,1±2,30* 0,12±0,002 *

*- р<0,001

Исследованиями установлено, что у собак больных пироплазмозом наблюдается интенсификация процессов ПОЛ (показатели светосуммы, спонтанной светимости, вспышки и максимальной светимости повысились в среднем в 15,5 раза) и снижение антиоксидантной активности крови (показатель тангенса угла наклона графической кривой снизился в среднем в 3,2 раза)

При анализе полученных данных в организме больного животного, установлен существенный дисбаланс в равновесии процессов ПОЛ и состоянии АОЗ организма, который сопровождающихся превалированием интенсивности процессов перекисного окисления липидов в организме больного животного над антиоксидантной активностью крови

2.2.4. Определение острой токсичности берпдона. Исследования по

определению острой токсичности беридона были проведены в 3 - кратной повторности на 60 белых мышах линии LCR, живой массой 16-18 гр (самки) Животные в зависимости от вводимой дозы были разделены на 6 групп, по 10 голов в каждой Беридон вводили внутримышечно, в форме 7 % раствора, в дозах 256,0, 303,6, 351,2, 478,0, 678,5; 798,2 мг/кг массы тела Результаты проведенных исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3

Показатели острой токсичности беридона для белых мышей

Группа животных Доза введенного Количество животных

препарата, мг/кг выживших погибших

1 , 256,0 10 0

2 303,6 7 3

3 351,2 5 5

4 478,0 4 6

5 678,5 2 8

6 798,2 0 10

В результате расчета установлено, что беридон относится к III классу опасности (по ГОСТу 12 1 007 - 76 к среднетоксичным препаратам) Средняя смертельная доза беридона составляет ЛД5о= 359,0 ± 0,125 мг/кг массы тела, в то время как ЛД50 беренила равна 256,0 мг/кг массы животного (Ritschel WA, 1976).

Доверительный интервал средней ЛД50 беридона находится в пределах от 283,3 до 434,9 мг/кг Следовательно, беридон в 1,7 раза, менее токсичен, чем беренил

2.2.5. Определение степени аллергенных свойств беридона и беренила. Исследования по определению степени аллергенных свойств беридона и беренила были проведены на клинически здоровых морских свинках, живой массой 360-550,0 г. При изучении аллергенных свойств беридона и беренила, животные были разделены на 8 групп по 10 голов в каждой Животным контрольной группы вводили 0,9% раствор натрия хлорида в дозе 0,05 мл / на 100 грамм живой массы Опытным группам -вводили беридон и беренил, внутримышечно, в форме 7 % раствора в дозе 0,005 мл/на 100 грамм живой массы Через 1, 3, 6 и 9 часов после введения препаратов и раствора натрия хлорида, морским свинкам подкожно вводили 0,1 % раствор гистамина в дозе 0,5 мл/100 гр живой массы

Время введения гистамина было выбрано в связи с тем, что основное действующее вещество - диминазена диацетурат, входящее в состав исследуемых препаратов, по результатам фармакокинетических исследований находится в нарастающих концентрациях в организме животных в течение 1, 3,6 и 9 часов после введения

Проведенными исследованиями установлено, что время наступления

«гистаминового шока» у контрольных морских свинок было следующим через 1 час после введения 0,9 % натрия хлорида - 15,4+2,0 мин, через 3 часа

- 16,5+3,2 мин, через 6 часов - 17,4+4,1 мин и через 9 часов - 14,9+2,8 мин после введения гистамина

Время наступления «гистаминового шока» через 1 час после введения беридона у животных опытных групп было через 18,5+2,7 мин, 3 часа -20,6+2,6 мин, 6 часов - 20,7 + 4,5 мин и 9 часов - 19,2 + 4,3 мин после введения гистамина.

В опыте с беринилом у контрольных морских свинок время наступления «гистаминового шока» составляло- через 1 час - 16,2+3,0 мин; через 3 часа -15,8+2,7 мин, через 6 часов - 13,3+2,5 мин и через 9 часов -15,3+1,9 мин после введения гистамина

Через 1 час после введения беренила у животных опытных групп, гистаминовый шок проявлялся в течение 13,5 + 1,8 мин, через 3 часа - 12,1 + 1,5 мин, через 6 часов - 13,6 + 2,4 мин и через 9 часов - 12,5 + 3,8 мин после введения гистамина

Полученные данные свидетельствуют о том, что беридон в дозе 0,005 мл/на 100 грамм живой массы не обладает аллергенными свойствами и способен задерживать развитие «гистаминового шока», что указывает на возможность повторного введения препарата Беренил, наоборот, обладает аллергенным действием ускоряя развитие «гистаминового шока», поэтому повторное его введение при отсутствии показаний к применению, является нежелательным

2.2.6. Закономерности распределения беридона и беренила по органам и тканям организма животных. Закономерности распределения беридона и беренила по органам и тканям было проведено на кроликах -самцах в количестве 28 голов, живой массой 2,5 - 3,0 кг Для оценки распределения препаратов животные были разделены на 2 группы по 14 голов в каждой Препараты вводились однократно, внутримышечно, в форме 7% раствора в дозе, равной 0,25 - 0,3 мл в зависимости от веса животного

Закономерности распределения беридона

Через 1 час после введения беридона максимальное его содержание было в крови - 3,81+ 0,02 мкг/мл, тазобедренной мышце - 0,369+ 0,04 мкг/г, селезенке - 0,009 + 0,0006 мкг/г и печени - 0,003 + 0,0004 мкг/г

Через 3 часа содержание беридона в крови снизилось- до 0,397+ 0,05 мкг/мл, тазобедренной мышце — до 0,306 + 0,03 мкг/г и повысилось в селезенке - до 0,035 + 0,004 мкг/г и печени - до 0,028 + 0,008 мкг/г.

Через 12 и 24 часа содержание беридона в органах и тканях организма кролика постепенно снижалась, а к 48 часу исследований снизилось в крови

- до 0,107 + 0,006 мкг/мл, тазобедренной мышце - до 0,051 + 0,003 мкг/г, почках - до 0,139 + 0,003 мкг/г, а повысилась в печени - до 0,281+ 0,005 мкг/г, легких - до 0,035+ 0,007 мкг/г, селезенке - до 0,295 ± 0,003, мышце сердца - до 0,088 + 0,007 мкг/г и экскрементах - до 0,0027+ 0,006 мкг/г

В последующие 152 часа после введения беридона наблюдали умеренное снижение его содержания в печени - до 0,096+ 0,005 мкг/г,

селезенке - до 0,051+ 0,008 мкг/г, и крови - до 0,027 + 0,004 мкг/мл, а через 176 часов в крови, селезенке и моче обнаруживались следы его содержания Закономерности распределения беренила

Через 1 час после введения беренила максимальное его содержание было в крови - 2,96 + 0,05 мкг/мл, тазобедренной мышце - 0,401 + 0,06 мкг/ г, печени - 0,004 ± 0,0005 мкг/г и селезенке - 0,003 ± 0,0009 мкг/г

Через 3 часа содержание беренила снизилось в крови до 0,116 + 0,04 мкг/мл и повысилось в селезенке - до 0,019 + 0,002 мкг/г и печени - до 0,015 ± 0,006 мкг/г.

Через 12 и 24 часа содержание беридона в органах и тканях организма кролика постепенно снижалось, а к 48 часу исследований было следующим в крови - до 0,045 + 0,002 мкг/мл, тазобедренной мышце - до 0,041 ± 0,005 мкг/г, легких - до 0,035 ± 0,004 мкг/г, мышце сердца - до 0,079 + 0,006 мкг/г, моче — до 0,111 + 0,007 мкг/мл и экскрементах - до 0,004 + 0,0005 мкг/г, а повысилось в печени - до 0,294 + 0,03 мкг/г, селезенке - до *0,231 ± 0,005 мкг/г и почках - до 0,127 + 0,008 мкг/г

Через 152 часа содержание беренила в крови снизилось - до 0,003 + 0,0003 мкг/мл, печени - до 0,015 ± 0,006 мкг/г и моче - до 0,013 + 0,002 мкг/мл, а через 176 часов в крови, печени, почках и моче обнаружены следы беренила

Из полученных данных следует, что через 24 часа после внутримышечного введения, беридон находился в кроветворных органах -селезенке, печени и в крови в более высокой концентрации, чем беренил. Это дает обоснование не вводить беридон повторно, при отсутствии показаний к повторному его применению

Необходимо отметить, что беридон накапливался в наибольшей концентрации в селезенке, а беренил - в печени Установлено, что при пироплазмозе, в печени происходят глубокие дегенеративные процессы, поэтому накопление препарата в этом органе может осложнить процесс течения данного заболевания с развитием остаточных явлений.

2.2.7. Фармакокннетические параметры беридона и беренила. На основании данных по распределению беридона и беренила по органам и тканям кроликов был проведен расчет фармакокинетических параметров

Сравнительные данные по показателю среднего времени удержания (MRT) беридона и беренила указывают на то, что беридон наибольшее время удерживался в крови -39,96 час, селезенке - 53,04 час. и печени - 43,31 час , а беренил наиболее длительное время удерживался в печени - 41,68 час и мышце сердца - 39,08 час

Наибольший показатель общего клиренса (С1) беридона отмечен в крови - 3,35 час/л, в селезенке - 2,23 час/л и легких - 2,99 час/л. Показатель общего клиренса (С1) беренила был наибольшим в тазобедренной мышце -9,02 час/л; в крови - 7,29 час/л и в селезенке - 4,28 час/л

По показателям периода полувыведения и общего клиренса установлено, что беридон и беренил выводятся, в основном, через почки с мочой - 7,13 час/л и 6,06 час/л и в меньшей степени через желудочно-

кишечный тракт с экскрементами - 3,35 час/л и 0,02 час/л, соответственно. Наибольшее среднее время удержания беридона было в селезенке - до 53,04 час, а беренила в печени - до 41,68 час.

Данные, полученные в результате расчета фармакокинетических параметров, согласуются с показателями распределения препаратов по органам и тканям. Как отмечалось выше, при пироплазмозе собак наибольшие патологические изменения претерпевает печень, поэтому накопление беренила в этом органе осложняет процесс восстановления функциональной (фильтрационной) способности печени и организма, в целом.

2.2.8. Определение наличия антиокислительной активности беридона и беренила в опытах in vitro. При определении антиокислительвой активности препаратов основными и наиболее информативными показателями хемил юм инее цен ция служили светосумма, определявшаяся по интенсивности излучения, и амплитуда максимального свечения. ХЛ модельных систем, которая характеризовалась спонтанным свечением, быстрой вспышкой, возникающей при введении солей железа, и развивающейся затем медленной вспышкой. Результаты исследований по определению антиокислительной активности препаратов представлены на рис.1.

Исследованиями установлено, что при добавлении беридона в модельную систему, в сравнении с котролем, происходит снижение интенсивности

процессов ПОЛ в 4,9 раза, определяющими показателями которых служат светосумма и вспышка ХЛ, снижающихся до 0,24 у .е. и до 0,26 у.е , соответственно. Тангенс угла наклона (tga)

хара ктер изу ю щи йантиоксида нт ную активность препарата повышается в

11,6 раза.

Полученные данные свидетельствуют о наличие у беридона достаточно высокой аптиоксидаитной активности. При добавлении беренила в модельную систему, в сравнении с контролем, не отмечается изменений в показателях светосуммы, вспышки, и в тангенсе угла наклона графической кривой, характеризующих интенсивность процессов ПОЛ и антиоксидантную активности препарата, то есть беренил в сравнении с бери дон ом не обладает антиоксидантной активностью.

2.2.9. Интенсивность хемил юмннесценцин крови здоровых собак после введения беридона и беренила. Определение интенсивности ПОЛ и

1.4

U I

0,8 0,6 0.4 0,2 0

[||

I

1ма Спонтаннл

citcittuoctt

О Контроль

Вспышка Максимальная евйтнмоеть ■ Беридон □ Беренил

Рис» Показатели хсмилюминееценции в модельной системе, генерирующей активные формы кислорода (у.е»)-

антиоксидантной активности крови после введения беридона и беренила было проведено с помощью метода хемилюминесценции (ХЛ) на здоровых собаках в количестве 16 голов, в возрасте 7-12 мес и 1,5-Зх лет Животные были разделены на 2 группы по 8 голов в каждой Животным 1 группы вводили беридон, второй группы - беренил, внутримышечно, в форме 7 %раствора в дозе 1,0 мл/10 массы тела

После введения беридона Через 3 и 6 часов после введения беридона здоровым животным отмечалось снижение интенсивности процессов ПОЛ в организме (показатели ХЛ снизились в среднем в 1,3 раза от исходных данных и варьировали в пределах светосумма от 12,56 - до 19,54 уе, спонтанная светимость от 0,92 — до 1,20 у е, вспышка от 0,37 - до 1,04 у е, максимальная светимость от 1,18 — до 1,49 у е и повышение антиоксидантной активности крови (показатель тангенса угла наклона графической кривой увеличился в среднем в 9,5 раза от исходных данных и варьировал в пределах от 1,85 — до 2,95)

Через 9 часов после введения беридона здоровым животным отмечалось снижение интенсивности процессов ПОЛ в организме ( показатели ХЛ снизились в среднем уже в 1,7 раза от исходных данных и варьировали в пределах светосумма от 11,58 - до 18,27 у е, спонтанная светимость от 0,86 -до 0,94 у е, вспышка от 0,29 - до 0,86 у е, максимальной светимость от 0,93 -до 1,30 у е и повышение уровня антиоксидантной активности крови (показатель тангенса угла наклона графической кривой увеличился в среднем в 11,5 раза от исходных данных и варьировал в пределах от 2,12 - до 3,79

После введения беренила Через 3 и 6 часов после введения беренила здоровым животным наблюдается увеличение интенсивности ПОЛ в организме (показатели ХЛ повысились в среднем в 3,5 раза от исходных данных и варьировали в следующих пределах светосумма от 36,12 - до 49,50 у е, спонтанная светимость от 4,80 — до 5,21 у е, вспышка от 4,69 — до 5,07 у е, максимальная светимость от 6,02 - до 8,15 у е. и снижение антиоксидантной активности крови (показатель тангенса угла наклона графической кривой снизился в среднем в 1,9 раза от исходных данных и варьировал в пределах от 0,12 - до 0,14)

Через 9 часов после введения беренила здоровым животным отмечалась интенсификация процессов ПОЛ в организме (показатели ХЛ повысились в среднем в 3,1 раза от исходных данных и варьировали в пределах светосумма от 32,61 - до 43,38 у е, спонтанная светимость от 3,70 -до 4,83 у е, вспышка от 3,92 — до 4,62 у е, максимальной светимость от 4,74 -до 7,84 уе и снижение антиоксидантной активности крови (показатель тангенса угла наклона графической кривой снизился в среднем в 2,8 раза от исходных данных и варьировал пределах от 0,07 - до 0,11)

В результате проведенных исследований установлено, что после введения беридона интенсивность процессов ПОЛ в организме здорового животного снижается, а антиоксидантная активности крови повышается После введения беренила наблюдается обратное явление - помимо повышения интенсивности процессов ПОЛ отмечается снижение

антиоксидантной активности крови

2.2.10. Уровень процессов ПОЛ и состояние АОЗ организма здоровых собак после введения беридона и беренила. Определение параметров состояния процессов ПОЛ и системы АОЗ организма было проведено на собаках в количестве 16 голов, в возрасте 7-12 месяцев и 1,5-3* лет Животные были разделены на 2 группы по 8 голов в каждой Животным 1 группы - вводили беридон, второй группы - беренил, внутримышечно, в форме 7 % раствора в дозе 1,0 мл/10 массы тела.

Показатели содержания ТБК — активных продуктов, активности

каталазы, пероксидазы, содержание церулоплазмина, фосфолипидов и р -

липопротеидов (общих; белковая и липидная фракции) определяли через 1,3,

6 и 9 часов после введения беридона и беренила

После введения беридона В первый час и 3 часа после введения беридона содержание ТБК - активных продуктов в крови повысилось в среднем в 1,6 раза, у собак 7-12 мес - до 0,7 ± 0,05 мкм/л, 1,5 - 3-лет - до 0,9 ± 0,02 мкм/л, а в последующие 6 и 9 часов уровень ТБК - активных продуктов, наоборот, снизился в среднем в 1,9 раза от исходных данных у собак 7-12 мес - до 0,2 + 0,04 мкм/л, 1,5 - 3х лет - до 0,6 + 0,03 мкм/л

В первый час и последующие 3, 6 часов после введения беридона уровень активности и содержания ферментов постоянно повышался, а к 9 часу он был выше исходных данных в среднем в 2,2 раза и варьировал в пределах- каталазы от 77,8 — до 87,5 мкм Н2О2/Л мин, пероксидазы от 89,4 — до 129,6 ед оптпл/сек церулоплазмина от 0,28 — до 0,30 мкм бензохинона/л мин

Содержание фосфолипидов и общих 3 - липопротеидов в первый и последующие 3, 6 и 9 часов после введения беридона у собак исследуемых групп повысилось в среднем 1,6 раза от исходного и варьировал в пределах от 50,1 - до 81,1 ммоль/л и от 955,1 - до 1163,5 мг% Содержание белковой и липидной фракции в (3 - липопротеидах у собак 7—12 мес и 1,5 - 3* лет повысилось в среднем в 1,7 раза от исходного и варьировало в пределах - от 305,01 - до 320,9 мг% и от 790,3 - до 918,7 мг%, соответственно

После введения беренила В первый час и последующие 3 и 6 часов после введения беренила показатель содержания ТБК- активных продуктов повысился в среднем в 1,9 раза от исходных данных: у собак 7-12 мес - до 1,2 + 0,01 мкм/л, 1,5 - 3х лет - до 1,1 + 0,05 мкм/л, а к 9 часу показатель повысился в 2,1 раза от исходных данных- у собак 7-12 мес - до 1,3 + 0,04 мкм/л, 1,5 - 3£лет- до 1,2 + 0,03 мкм/л

В 1 час и последующие 3 и 6 часов после введения беренила уровень активности и содержание ферментов постоянно снижался, а к 9 часу исследований они были ниже исходных данных в среднем в 2,6 раза и варьировали в пределах каталаза от 12,9 - до 17,6 мкм Н202/л мин, пероксидаза от 10,8 - до 32,1 мкм Н202/л и церулоплазмин от 0,05 - до 0,07 мкм бензохинона/л мин

1Й

В 1 час и последующие 3, 6 и 9 часов после введения беридона содержание фосфолипидов и общих Р - липопротеидов у собак исследуемых групп повысилось в среднем в 2,4 раза от исходного и варьировало в пределах от 10,7 - до 11,4 ммоль/л и от 380,6 — до 406,9 мг% Содержание белковой и липидной фракции в р - липопротеидах у собак 7-12 мес 1,5 -3х лет снизилось в среднем в 1,7 раза от исходного и варьировало в пределах - от 93,2 - до 127,0 мг% и от 203,5 - до 429,2 мг%

Полученные данные подтвердили, что беридон после введения в организм здоровых животных обладает антиоксидантными свойствами, а беренил - прооксидантными

2.2.11. Интенсивность хемилюмипесценции крови собак больных пироплазмозом после введения беридона и берепнла. Уровень интенсивности ПОЛ и антиоксидантной активности крови определяли на собаках больных пироплазмозом, в количестве 28 голов в возрасте 7-12 мес и 1,5 - 3х лет Животные были разделены на 2 группы, которые разделялись на 2 подгруппы в зависимости от возраста Животным 1 группы вводили беридон, второй группы - беренил, внутримышечно, в форме 7 % раствора, в дозе 1,0 мл/10 массы тела.

После введения беридона Через 72 часа после введения беридона наблюдалось снижение интенсивности процессов ПОЛ в организме больных животных (снижение показателя светосуммы в 2,9 раза и показателей спонтанной светимости, вспышки и максимальной светимости в среднем в 17,3 раза от исходных данных до лечения и варьировали в следующих пределах 24,59 - до 35,26 у е, от 1,17 - до 1,29 у.е, 0,70 - 2,40 и от 2,53 - до 3,68 у е, соответственно) и повышение антиоксидантной активности крови (увеличение показателя тангенса угла наклона графической кривой увеличился в среднем в 3,1 раза от исходных данных до лечения и варьировал в пределах от 0,25 - до 0,30)

Все вышеперечисленные показатели были в пределах границ здоровых животных

После введения беренила Через 72 часа после введения бсренила наблюдалось снижение интенсивности процессов ПОЛ в организме больных животных (показатели ХЛ снизились в среднем 1,6 раза от исходных данных до лечения и варьировали в следующих пределах светосумма от 30,48 — до 61,19 у е, спонтанная светимость от 19,50 — до 20,86 у е, вспышка от 10,02 -до 24,19 уе, максимальная светимость от 26,09 - 33,60 у.е) и повышение антиоксидантной активности крови (увеличение показателя тангенса угла наклона графической кривой в среднем в 1,3 раза от исходных данных до лечения и варьировал в пределах от 0,10 - до 0,16 уе), но все вышеперечисленные показатели не достигли пределов границ здоровых животных

Проведенными исследованиями установлено, что у собак больных пироплазмозом после внутримышечного введения беридона в дозе 1,0 мл/ 10 кг массы тела, интенсивность ПОЛ в организме больного животного

снижается в 2,9 раза, а антиоксидантная активность крови повышается в 3,1 раза.

После введения беренила в той же дозе, не наблюдается изменение показателей хемютоминесценции до пределов границ здоровых животных, то есть беренил в сравнении с беридоном не обладает свойствами корректировать дисбаланс в процессе ПОЛ и антиоксидантной активности крови при пироплазмозе.

2.2.12. Уровень процессов ПОЛ и состояние АОЗ организма собак больных пироплазмозом после введения беридона и беренила

Собаки больные пироплазмозом в количестве 28 голов были разделены на 2 группы по 14 голов, которые разделялись на 2 подгруппы по 7 голов в зависимости от возраста Первой группе животных - вводили беридон, второй группе — беренил Оба препарата применяли внутримышечно, в форме 7% раствора, в дозе 1,0 мл/10 кг массы тела Определяли активность каталазы, пероксидазы и содержание ТБК - активных продуктов, церулоплазмина, фосфолипидов и ß - липопротеидов (общих, белковая и липидная фракции) через 72 часа после введения беридона и беренила

При пироплазмозе содержание ТБК — активных продуктов у собак 7-12 мес и 1,5-3 лет в 7,0 раз выше границ здоровых животных в пределах от 3,81 -до 4,16 мкм/л

Активность каталазы, пероксидазы и содержание церулоплазмина в крови было в среднем в 2,8 раза выше границ здоровых животных и находилось в пределах от 10,86 до 12,83 мкм НгОг/лхмин; от 11,61 до 19,53 ед опт пл/л сек и от 0,05 до 0,07_мкм бензохинона/лхмин, соответственно

Содержание фосфолипидов в крови было в среднем в 2,6 раза ниже, чем у здоровых 7-12 мес - до 10,85+2,6 ммоль/л, 1,5 - 3* лет - до 13,25 + 2,1 ммоль/л Содержание ß - липопротеидов в крови больных собак было в среднем в 2,1 раза выше, чем у здоровых и находилось в пределах общие (суммарные) от 1019,6 - до 2030,7 мг%, белковая фракция от 350,9 - до 490,9 мг% и липидная фракция от 1258,4 до 1307,1 мг%

После введения беридона Через 72 часа после введения беридона в крови больных собак отмечалось снижение содержания ТБК- активных продуктов в среднем в 6,2 раза- у собак 7-12 мес - до 0,53+0,02 мкм/л, 1,5-3S лет - до 0,81 ± 0,05 мкм/л (до пределов нормы)

Активность каталазы пероксидазы и содержание церулоплазмина и фосфолипидов в крови у собак исследуемых возрастных групп повысилось в среднем в 2,7 раза от исходных данных до лечения и находилось в пределах от 26,18 до 27,15 мкм НгОг/л^мин, от 34,07 до 62,11 ед опт.пл/лхсек, от 0,16 до 0,19 мкм бензохинона/л мин и от 28,31 до 31,07 ммоль/л, соответственно

Содержание ß - липопротеидов в крови снизилось в среднем 2,2 раза и находилось в пределах- общие от 790,2 до 960,0 мг%, белковая фракция от 142,6 до 247,2мг%, липидная фракция - от 502,4 до 511,0 мг% Все вышеперечисленные параметры были в пределах границ здоровых животных

После введения беренила Через 72 часа после введения беренила в крови больных собак 7-12 мес и 1,5-3- лет наблюдалось снижение содержания ТБК - активных продуктов в среднем в 1,4 раза от исходных данных (до лечения) и находилось в пределах от 2,74 - до 3,09 мкм/л

Активность каталазы, пероксидазы и содержание церулоплазмина и фосфолипидов у больных собак всех исследуемых возрастных групп повысилось в среднем в 1,4 раза от исходных и находилось в следующих пределах от 15,51 до 17,90 мкм Н202/л мин, от 14,71 до 22,60 едоптпл/л сек, от 0,08 до 0,09 мкм бензохинона/л мин и от 13,10 до 18,24 ммоль/л, соответственно.

Содержание Р-липопротеидов в крови собак всех исследуемых возрастных групп понизилось в среднем в 1,4 раза и находилось в пределах общие (суммарные) от 904,7 до 1727,9 мг%, белковая фракция от 220,4 до 389,4 мг%; липидная фракция от 974,2 до 1005,1 мг%

Все вышеперечисленные параметры, не достигли пределов границ здоровых животных

Проведенными исследованиями установлено, что при заболевании пироплазмозом в организме больных собак происходит активизация процессов ПОЛ, характеризующаяся накоплением в крови наибольшего количества ТБК-активных продуктов и (3 - липопротеидов и снижение защитной функции системы АОЗ, сопровождающейся снижением активности каталазы и пероксидазы, содержаниия церулоплазмина и фосфолипидов

Введение беридона собакам больным пироплазмозом приводит к снижению содержанияв крови ТБК-активных продуктов и Р-липопротеидов и увеличению активности каталазы и пероксидазы, содержания церулоплазмина и фосфолипидов до пределов границ здоровых животных

Введение беренила не приводит изменению содержания в крови ТБК-активных продуктов, Р-липопротеидов, церулоплазмина и фосфолипидов, активности каталазы, пероксидазы до пределов границ здоровых животных

2.2.13. Влияние беридона и беренила на некоторые морфологические и биохимические показатели крови здоровых собак. В своих исследованиях использовали кровь от 16 клинически здоровых собак породы овчарка в возрасте 7-12 мес. и 1,5 - 3х лет Животные были разделены на 2 группы, которые разделялись на 2 подгруппы в зависимости от возраста Животным 1 группы вводили беридон, второй группы — беренил Оба препарата вводили внутримышечно, в форме 7% раствора, в дозе 1,0 мл/ 10 кг массы тела

После введенш беридона Через 1 час и последующие 3, 6 часов после введения беридона у всех возрастных групп животных количество эритроцитов и гемоглобина постепенно снижалось, а к 9-му часу исследований количество эритроцитов было в 1,2 раза ниже исходных данных и варьировало пределах: от 5,4 до 5,5*1012/л, а содержание гемоглобина было в пределах нормы от 75,8 до 83,6 г/л

Содержание лейкоцитов и билирубина через 1, 3 и 6 часов после введения беридона у всех возрастных групп животных было в среднем в 1,5

раза выше исходных данных, а к 9 часу исследований данные показатели были в пределах нормы здоровых животных- лейкоциты от 7,1 - до 8,2+1,17х109 /л, билирубин общий от 4,9 до 6,2 мкмоль/л; прямой от 2,1 до 2,6 мкмоль/л, непрямой от 2,8 до 3,6 мкмоль/л

Выраженное снижение количества эритроцитов, гемоглобина и повышение количества лейкоцитов после введения беридона объясняется умеренно токсичным действием беренила, входящего в состав препарата, который после введения обладает свойством проникать в эритроциты, соединяться с ее ДНК и разрушать последние и, наоборот, вызывать повышение фагоцитарной активности лейкоцитов, которое дополняется воздействием димефосфона.

После введения беренила Через 1 час и последующие 3, 6 часов после введения беренила у всех возрастных групп животных количество эритроцитов и гемоглобина снижалось, а к 9 часу исследований количество эритроцитов и содержание гемоглобина было в 2,2 раза ниже исходных данных и варьировало пределах от 2,7 до 3,6 х 10|2/мкл, и от 85,2 до 96,0 г/л, соответственно

Через 1, 3 и 6 часов после введения беренила содержание лейкоцитов и билирубина у всех возрастных групп животных повышалось, а к 9-му часу исследований данные показатели были в среднем в 2,5 раза выше исходных данных, которые варьировали в следующих пределах лейкоциты - от 16,2 до 19,1x10%, билирубин общий - от 10,5 до 12,5 мкмоль/л, прямой - от 2,7 до 3,2 мкмоль/л, непрямой - от 7,3 до 9,8 мкмоль/л, соответственно

Снижение эритроцитов (эритроцитопения) и гемоглобина после введения беренила, указывает на нарушение образования красных кровяных телец, которое может предрасполагать к развитию анемических процессов, а повышение количества лейкоцитов (лейкоцитоз) и билирубина предполагает наличие воспалительного и развитие гепатотоксического процессов в организме животных. К тому же нарушение образования и выведения билирубина из организма может привести к развитию острого токсического отравления организма и снижению фильтрационной способности главного депо крови -печени.

2.2.14. Влияние беридона и беренила на некоторые морфологические и биохимические показатели крови собак больных пироплазмозом. При

проведении исследований использовали собак с клиническими признаками пироплазмоза, в количестве 28 голов, которые были разделены на 2 группы по 14 голов Первой группе животных - вводили беридон, второй группе -вводили беренил в форме 7% раствора, в дозе 1,0 мл/ 10 кг массы тела

При пироплазмозе Установлено, что у собак больных пироплазмозом происходит снижение содержания эритроцитов в крови в среднем в 2,3 раза у собак 7-12 мес - до 2,7±0,48х1012/л, 1,5-3 лет - до 3,5±0,27х1012/л Количество лейкоцитов было повышено в среднем 2,2 раза в сравнении с нормой у собак 7-12 мес - до 18,9±1,6хЮ9/л, 1,5-3 лет - до 21,5±2,7хЮ% Отмечено снижение в сравнении с нормой уровня гемоглобина в среднем в 2,9 раза у собак 7-12 мес - до 41,6±16,2 г/л; 1,5-3 лет - до 62,5±10,7 г/л Причем, наибольшее снижение показателя отмечалось у собак 7-12 мес возраста

Наблюдалось снижение содержания общего белка в сыворотке крови у всех исследуемых возрастных групп животных и варьировало в пределах от 34,7 — до 42,1 г/л Содержание общего, прямого и непрямого билирубина повысилось в среднем в 3,3 раза и варьировало в пределах общего от 25,8 - до 30,7, прямого от 9,1 - до 11,4 мкмоль/л, непрямого от 16,7 - до 19,3 мкмоль/л. Наибольшее повышение общего, прямого и непрямого билирубина отмечалось у собак в возрасте 7 мес -1 года

После введения беридона Через 72 часа после введения беридона у собак больных пироплазмозом морфологические и биохимические показатели крови были в пределах границ здоровых животных Количество эритроцитов варьировало в пределах от 7,2- до 7,6х1012/л, количество лейкоцитов от 12,7-до 14,3><109/л; уровень гемоглобина от 133,8 - до 154,9 г/л; содержание общего белка в сыворотке крови от 58,1- до 63,9 г/л, содержание билирубина общего от 5,9 - до 6,2 мкмоль/л, прямого от 2,4 - до 2,7 мкмоль/л и непрямого — от 3,5 - до 4,1 мкмоль/л

После введения беренила Через 72 часа после введения беренила у собак больных пироплазмозом содержание эритроцитов, гемоглобина и общего белка было ниже, чем у здоровых животных, а содержание лейкоцитов и билирубина было выше нормы Количество эритроцитов варьировало в пределах от 4,1 - до 4,9х10,2/л, количество лейкоцитов от 12,5 - до 14,0x10%, уровень гемоглобина от 75,8 - до 83,6 г/л, содержание общего белка в сыворотке крови от 39,2 — до 45,7 г/л, содержание билирубина общего от 12,5 — до 13,2 мкмоль/л, прямого от 4,3 - до 4,7 мкмоль/л, непрямого от 8,2 - до 8,5 мкмоль/л

Таким образом, внутримышечное введение беридона в дозе 3,5 мг/кг массы тела собака больным пироплазмозом, способствует нормализации показателей общего и биохимического анализа крови до пределов физиологических границ здоровых животных. При введении беренила через 72 часа у больных собак не наблюдается нормализация гематологических показателей до пределов физиологических границ здоровых животных

2.2.15. Эффективность использования беридона и беренила в комплексной терапии при острой форме пироплазмоза собак. Эффективность использования препаратов при острой форме пироплазмоза была изучена на 28 собаках, больных пироплазмозом Беридон и беренил вводили внутримышечно в форме 7% раствора в дозе 1,0мл/10 кг массы тела

Собакам больным пироплазмозом при применении беридона и беренила проводили симптоматическую терапию, включающую внутривенное введение физиологических растворов (капельница) — Раствор Рингера - Локка, 0,9 % раствор натрия хлорида - 100,0-400,0 мл, гамавит -2,0-4,0 мл, фоспренил - 2,0-4,0 мл, анальгин - 0,5-1,5 мл, димедрол - 0,51,0 мл, эссенциале форте - 1,5-3,0 мл, викасол (дицинон) - 0,5-1,2 мл, клизма и введение травяных отваров внутрь

За 15-20 минут до введения препаратов вводили сульфокамфокаин, внутримышечно в дозе 0,5 - 1 мл в зависимости от веса животного

После лечения беридоном После введения беридона присутствовала

незначительная одышка, которая исчезала через 15 минут после введения препарата Через 24 часа после введения беридона все изучаемые физиологические параметры были в пределах нормы температура — 38,238,6 °С, пульс - 203-209 ударов/в мин, дыхание - 23-25 дыхательных движений/в мин. Наличие паразитов в крови не обнаружено (паразитемия 0,00%) Через 24 часа происходила нормализация клинических показателей до физиологических границ здоровых животных, паразитемия отсутствовала Из 14 собак больных пироплазмозом, подвергшихся лечению с применением Беридона, одна собака в возрасте 7-12 месяцев погибла, 13 животных полностью выздоровели на 3-4 сутки лечения Эффективность терапии составила 92,8 %.

После лечения беренилом После введения беренила наблюдалась выраженная одышка (толчкообразное, прерывистое дыхание), которая исчезала через 15 минут после применения Через 24 часа после введения препарата физиологические параметры были следующими температура — 39,4-39,6°С, пульс - 228-235 ударов/в мин, дыхание - 46-48 дыхательных движений/в мин, присутствовала паразитемия - 0,1- 0,2 %. Была необходимость в повторном введении беренила в терапевтической дозе 3,5 мг/кг массы тела была обусловлена наличием клинических признаков заболевания и паразитемией

Через 12 часов после повторного введения температура и пульс снизилась до нормы - до 38,5-38,7°С и 130-148 ударов/в мин, соответственно, а дыхание было выше нормы - 36- 39 дыхательных движений/ в мин В мазках периферической крови отмечалось наличие пироплазм (паразитемия - 0,05-0,1) Из 14 собак больных пироплазмозом, подвергшихся лечению с применением беренила, 4 собаки погибло, а 10 собак полностью выздоровели на 5-7 сутки лечения Эффективность терапии при двукратном введении беренила в дозе 1,0 мл/10 кг массы тела с интервалом 12 часов составила 71,4 %,

ВЫВОДЫ

1 Разработан и изучен комплексный препарат беридон для лечения пироплазмоза у собак, сочетающий в себя специфическое противопаразитарное действие беренила и антиоксидантное действие димефосфона. Представлена его фармако-токсиколо-гическая, фармакокинетическая характеристика и установлена его способность, повышать эффективность лечения в терапии пироплазмоза собак

2 Беридон относиться к III классу опасности (по ГОСТ 12.1 007-76 к среднетоксичным препаратам) ДД50 беридона для белых мышей, при внутримышечном введении в форме 7% раствора, составляет 359,0 мг/кг массы тела, а беренила ЛД50 равна 256,0 мг/кг массы тела Доверительный интервал средней ЛД5о беридона находится в пределах от 283,315 — до 434,935 мг/кг Следовательно, беридон в 1,7 раза менее токсичен, чем беренил

Установлено, что беридон в 7% концентрации, в дозе 1,0 мл/10 кг

массы тела (3,5 мг/кг массы тела), не обладает аллергенным действием и способен задерживать развитие «гистаминового шока», что указывает на возможность повторного введение препарата Беренил, наоборот, обладает аллергенным действием, ускоряя развитие «гистаминового шока», поэтому повторное его введение при отсутствии показаний к применению, является нежелательным

3 Беридон и беренил после внутримышечного введения в 7% концентрации, в дозе 1,0 мл/10 массы тела быстро всасываются и равномерно распределяются по всем органам и тканям кроликов Однако через 1 час после введения максимальная концентрация беридона в крови и в селезенке была выше, чем беренила, в 1,3 и 3 раза, соответственно. Установлено, что беридон в наибольшей концентрации накапливался в селезенке, а беренил - в печени

4 Наибольшее среднее время удержания (MRT) у беридона было в селезенке — 53,04 ч и в крови —39,96 ч, ч, а у беренила в печени - 41,68 ч и мышце сердца — 39,08 ч Препараты преимущественно выводятся с мочой (клиренс беридона - 7,13 ч/л, беренила — 6,06 ч/л) и в меньшей степени через желудочно-кишечный тракт с экскрементами (беридон - 3,35 ч/л, беренил - 0,02 ч/л)

5 Методом хемилюминесценции (XJI) определено изменение интенсивности процессов ПОЛ в организме и антиоксидантной активности крови у здоровых собак в зависимости от возраста У собак больных пироплазмозом установлена активизация процессов ПОЛ в организме в среднем в 15,5 раза и снижение антиоксидантной активности крови в среднем в 3,2 раза

6 С возрастом у собак породы восточно - европейская овчарка отмечается повышение уровня процессов ПОЛ и состояния АОЗ организма, характеризующихся наибольшим содержанием в крови ТБК-активных продуктов, и повышением активности каталазы, пероксидазы и содержания церулоплазмина, фосфолипидов и ß - липопротеидов в крови животных Причем, у животных в возрасте от 1,5 до 6 лет отмечается определенное уравновешивание в состоянии процессов ПОЛ и АОЗ организма.

В крови, у собак больных пироплазмозом, отмечено повышение содержания ТБК-активных продуктов в среднем в 7,0 раз и ß-липопротеидов в 2,1раза и снижение активности каталазы, пероксидазы и содержания церулоплазмина и фосфолипидов в среднем в 2,7 раза

7 При добавлении беридона в модельную систему ПОЛ, в сравнении с контролем, происходит снижение показателей ХЛ, определяющих интенсивность процессов ПОЛ в 4,9 раза и повышение антиоксидантной активности препарата в 11,6 раза Полученные данные свидетельствуют о наличие у беридона достаточно высокой антиоксидантной активности При добавлении беренила в модельную систему, в сравнении с контролем, не отмечается изменений показателей ХЛ, характеризующих интенсивность процессов ПОЛ и антиоксидантную активность препарата, то есть беренил в сравнении с беридоном не обладает антиоксидантной активностью

8 Методом хемилюминесценции (ХЛ) установлено, что через 9 часов

после внутримышечного введения беридона здоровым собакам, в форме 7 % раствора, в дозе 1,0 мл,/ 10 кг массы тела наблюдается снижение интенсивности процессов ПОЛ в организме в 1,7 раза и повышение антиоксидантной активности крови в 11,5 раза После введения беренила наблюдается обратное явление - помимо повышения интенсивности процессов ПОЛ в среднем в 3,1 раза, отмечается снижение антиоксидантной активности крови в среднем в 2,8 раза

У собак больных пироплазмозом после внутримышечного введения беридона в дозе 1,0 мл/ 10 кг массы тела, интенсивность ПОЛ в организме больных животных снижается в 2,9 раза, а антиоксидантная активность крови повышается в 3,1 раза

После введения беренила в той же дозе, не наблюдается изменение показателей хемилюминесценции крови до пределов границ здоровых животных, то есть беренил в сравнении с беридоном не обладает свойствами корректировать дисбаланс в процессе ПОЛ и антиоксидантной активности крови при пироплазмозе

9 В крови у здоровых собак через 1 час и последующие 9 часов после введения беридона, отмечено повышение содержания ТБК — активных продуктов в крови в 1,6 раза и повышение активности каталазы, пероксидазы и содержание церулоплазмина, фосфолипидов и Р-липопротеидов среднем в 1,9 раза в сравнении с исходными данными

После введения беренила здоровым собакам в той же дозе, в первый и последующие 3, 6 и 9 часов отмечено повышение содержания ТБК- активных продуктов в крови в среднем в 1,9 раза и снижение активности каталазы, пероксидазы, содержание церулоплазмина, фосфолипидов и Р-липопротеидов в среднем в 2,2 раза в сравнении с исходными данными

После внутримышечного введения беридона собакам больным пироплазмозом, отмечается изменение содержания в крови ТБК- активных продуктов, Р-липопротеидов, церулоплазмина, фосфолипидов и активности каталазы, пероксидазы до пределов границ здоровых животных После внутримышечного введения беренила в той же дозе в организме собак больных пироплазмозом, не отмечается изменение вышеперечисленных показателей до пределов показателей здоровых животных

10. После внутримышечного введения беридона в форме 7% раствора, в дозе 1,0 мл/10 кг массы тела, через 9 часов в крови здоровых собак наблюдается умеренное снижение количества эритроцитов в среднем в 1,2 раза (эритроцитопения) при содержании гемоглобина, лейкоцитов и билирубина в пределах нормы, а после введения беренила в той же дозе отмечено выраженное снижение количества эритроцитов и гемоглобина в крови в среднем в 2,0 раза и повышение количества лейкоцитов и билирубина в 2,5 раза

После внутримышечного введения беридона собакам, больным пироплазмозом, в форме 7% раствора, в дозе 1 мл/10 кг массы тела наблюдается нормализация морфологических и биохимических показателей крови до пределов физиологических границ здоровых животных, а после

применения беренила, в той же дозе, таких изменений не наблюдается

11 Терапевтическая эффективность при применении беридона составила 92,8%, а беренила (при двукратном введение в той же дозе, с интервалом в 24 часа, обусловленное наличием клинических признаков заболевания и паразитемией) - 71,4% Курс лечения с применением беридона составил 3 -4 дня, а беренила - 5 - 7 дней

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 При проведении терапии пироплазмоза собак рекомендуется вводить беридон в дозе 1 мл/10 кг массы тела, однократно, внутримышечно При тяжелом течение пироплазмоза допускается повторное введение препарата в той же дозе В качестве симптоматической терапии перед введением беридона рекомендуем вводить 10 % раствор сульфокамфокаина внутримышечно, в дозе 0,5 -1,5 мл в зависимости от веса животного

2 С целью определения общего состояния организма как здоровых, так и больных пироплазмозом собак в клинической практике и оценки состояния процессов ПОЛ и системы АОЗ организма предложено использовать «Методическое пособие по изучению и методам определения уровня свободнорадикального окисления липидов и антиоксидантной защиты у животных»

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Сидоров И.В Состояние свободно - радикального окисления липидов у собак разных пород и возраста / И.В Сидоров, Н А. Костромитинов, ЕАСуменкова // Материалы международной научно -практической конференции Свободные радикалы в патогенезе заболеваний животных - Воронеж - 2004 - С 72-77

2 Костромитинов НА Состояние свободно-радикального окисления липидов у собак и кошек /НА Костромитинов, Е А Суменкова // Ветеринария - 2005 -№ 6.- С 54-55

3. Суменкова Е А Фармакокинетика беренила и беридона / Суменкова Е А // Ветеринария -2006 - № 7 - С.48-49

ООО "Тильзит - Полиграф" тел 234-60-61 тираж 100 экз объем 25 леч листов заказ от 19 03 2007 г

Радикальные окислительные процессы являются одним из основных патогенетических факторов многих заболеваний и патологических состояний (7,11,30,31,32,36,39,55,77,95,110,131,152,165,211,212).

Все клетки живого организма обладают способностью к генерации активных форм кислорода, и поэтому развитие окислительного стресса любых органах и тканях.

Функционирование живых систем осуществляется только при наличие про - и антиоксидантного равновесия, которое является важнейшим механизмом гомеостаза. Любое повреждение структур живой системы сопровождается нарушением этого равновесия в сторону развития окислительного стресса. Система антиоксидантной защиты ограничивает развитие радикальных окислительных процессов, стабилизируя про - и антиоксидантное равновесие в пределах нормальной реакции. При исчерпании буферной мощности защитных систем, к примеру, при тяжелых и продолжительных заболеваниях, когда расход антиоксидантов превышает их биосинтез, происходит окислительная деструкция биомембран, клеток, тканей, заканчивающейся менее или более серьезной патологией (7,11,31,32,39,55,95,131,152,165,212).

В связи с этим одним из важных аспектов изучения патогенеза различных заболеваний является исследование состояния перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты организма. Нарушение стационарного состояния свободнорадикального окисления считается одним из универсальных, неспецифических показателей наличия повреждения, которое имеет место при развитии самых различных заболеваний: атеросклероз, стресс, неврозы, сахарный диабет, воспалительные процессы, аутоиммунные заболевания, в том числе паразитарные (7,18,26,30,31,32,36,39,54, 109,110,151,152,221).

Коррекция нарушений (свободнорадикального) перекисного окисления липидов может предотвратить развитие патологического процесса или облегчить его течение. Именно поэтому понимание характера изменений процессов пероксидации под влиянием лекарственного средства может являться одним из показателей, который определяет выбор препарата для лечения той или иной патологии.

Пироплазмоз, как и многие заболевания собак, имеет также и социально - психологическое значение, так как животные находятся в тесном контакте с владельцами и членами их семей. Заболевания домашних животных, которые имеют тяжелую картину течения, изменяют статус семьи в отрицательную сторону. Пироплазмоз собак наносит ощутимый ущерб домашнему бюджету и в том числе служебному собакововству, так как требуются немалые затраты на лечение больных животных (6, 21, 34, 40, 41, 51, 71, 73, 86, 90, 137, 159, 164, 175, 188, 203, 214, 226, 234).

Остаются нерешенными некоторые вопросы лечения данного заболевания, так как, несмотря на довольно широкий выбор противопаразитарных препаратов, способы и рациональные дозы их применения для лечения собак, пока не разработаны (34, 97, 98, 137, 172, 177, 179,190,204,215,232,237,238).

6.Выводы

1. Разработан и изучен комплексный препарат беридон для лечения пироплазмоза собак, сочетающий в себя специфическое противопаразитарное действие беренила и антиоксидантное действие димефосфона. Представлена его фармако-токсиколо-гическая, фармакокинетическая характеристика и установлена его способность, повышать эффективность лечения в терапии пироплазмоза собак.

2. Беридон относиться к III классу опасности (по ГОСТ 12.1.007-76 к среднетоксичным препаратам). ЛД50 беридона для белых мышей, при внутримышечном введении в форме 7% раствора, составляет 359,0 мг/кг массы тела, а беренила ЛД50 равна 256,0 мг/кг массы тела. Доверительный интервал средней ЛД50 беридона находится в пределах от 283,315 - до 434,935 мг/кг. Следовательно, беридон в 1,7 раза менее токсичен, чем беренил.

Установлено, что беридон в 7% концентрации, в дозе 1,0 мл/10 кг массы тела (3,5 мг/кг массы тела), не обладает аллергенным действием и способен задерживать развитие «гистаминового шока», что указывает на возможность повторного введение препарата. Беренил, наоборот, обладает аллергенным действием, ускоряя развитие «гистаминового шока», поэтому повторное его введение при отсутствии показаний к применению, является нежелательным.

3. Беридон и беренил после внутримышечного введения в 7% концентрации, в дозе 1,0 мл/10 массы тела быстро всасываются и равномерно распределяются по всем органам и тканям кроликов. Однако через 1 час после введения содержание беридона в крови и в селезенке было выше, чем беренила, в 1,3 и 3,0 раза, соответственно. Установлено, что беридон в наибольшей концентрации накапливался в селезенке, а беренил - в печени.

4. Наибольшее среднее время удержания (MRT) беридона было в селезенке - 53,04 ч и в крови -39,96 ч, ч, а у беренила в печени - 41,68 ч и мышце сердца -39,08 ч. Препараты преимущественно выводятся с мочой (клиренс беридона - 7,13 ч/л, беренила - 6,06 ч/л) и в меньшей степени через желудочно-кишечный тракт с экскрементами (беридон - 3,35 ч/л, беренил - 0,02 ч/л).

5. Методом хемилюминесценции (ХЛ) определено изменение интенсивности процессов ПОЛ в организме и антиоксидантной активности крови у здоровых собак в зависимости от возраста. У собак больных пироплазмозом установлена активизация процессов ПОЛ в организме в среднем в 15,5 раза и снижение антиоксидантной активности крови в среднем в 3,2 раза.

6. С возрастом у собак породы восточно - европейская овчарка отмечается повышение уровня процессов ПОЛ и состояния АОЗ организма, характеризующихся наибольшим содержанием в крови ТБК-активных продуктов, и повышением активности каталазы, пероксидазы и содержания церулоплазмина, фосфолипидов и (3 - липопротеидов. Причем, у животных в возрасте от 1,5 до 6 лет отмечается определенное уравновешивание в состоянии процессов ПОЛ и АОЗ организма.

В крови, у собак больных пироплазмозом, отмечено повышение содержания ТБК-активных продуктов в среднем в 7,0 раз и (3-липопротеидов в 2,1 раза и снижение активности каталазы, пероксидазы и содержания церулоплазмина и фосфолипидов в среднем в 2,7 раза.

7. При добавлении беридона в модельную систему ПОЛ, в сравнении с контролем, происходит снижение показателей ХЛ, определяющих интенсивность процессов ПОЛ в 4,9 раза и повышение антиоксидантной активности препарата в 11,6 раза. Полученные данные свидетельствуют о наличие у беридона достаточно высокой антиоксидантной активности. При добавлении беренила в модельную систему, в сравнении с контролем, не отмечается изменений показателей ХЛ, характеризующих интенсивность процессов ПОЛ и антиоксидантную активность препарата, то есть беренил в сравнении с беридоном не обладает антиоксидантной активностью.

8. Методом хемилюминесценции (ХЛ) установлено, что через 9 часов после внутримышечного введения беридона здоровым собакам, в форме 7 % раствора, в дозе 1,0 мл,/10 кг массы тела наблюдается снижение интенсивности процессов ПОЛ в организме в 1,7 раза и повышение антиоксидантной активности крови в 11,5 раза. После введения беренила наблюдается обратное явление - помимо повышения интенсивности процессов ПОЛ в среднем в 3,1 раза, отмечается снижение антиоксидантной активности крови в среднем в 2,8 раза.

У собак больных пироплазмозом после внутримышечного введения беридона в дозе 1,0 мл/ 10 кг массы тела, интенсивность ПОЛ в организме больных животных снижается в 2,9 раза, а антиоксидантная активность крови повышается в 3,1 раза. Показатели ХЛ, характеризующие интенсивность ПОЛ и антиоксидантную активность крови достигают пределы границ здоровых животных. После введения беренила в той же дозе, не наблюдается изменение показателей хемилюминесценции крови до пределов границ здоровых животных, то есть беренил в сравнении с беридоном не обладает свойствами корректировать дисбаланс в процессе ПОЛ и антиоксидантной активности крови при пироплазмозе.

9. В крови у здоровых собак через 1 час и последующие 9 часов после введения беридона, отмечено повышение содержания ТБК - активных продуктов в крови в 1,6 раза и повышение активности каталазы, пероксидазы и содержание церулоплазмина, фосфолипидов и Р-липопротеидов среднем в 1,9 раза в сравнении с исходными данными. После введения беренила здоровым собакам в той же дозе, в первый и последующие 3, 6 и 9 часов отмечено повышение содержания ТБК- активных продуктов в крови в среднем в 1,9 раза и снижение активности каталазы, пероксидазы и содержания церулоплазмина, фосфолипидов и Р-липопротеидов в среднем в 2,2 раза в сравнении с исходными данными.

После внутримышечного введения беридона собакам больным пироплазмозом, отмечается изменение содержания в крови ТБК- активных продуктов, Р-липопротеидов, церулоплазмина, фосфолипидов и активности каталазы, пероксидазы до пределов границ здоровых животных. После внутримышечного введения беренила в той же дозе в организме собак больных пироплазмозом, не отмечается изменение вышеперечисленных показателей до пределов показателей здоровых животных.

10.11осле внутримышечного введения беридона в форме 7% раствора, в дозе 1,0 мл/10 кг массы тела, через 9 часов в крови здоровых собак наблюдается умеренное снижение количества эритроцитов в среднем в 1,2 раза (эритроцитопения) при содержании гемоглобина, лейкоцитов и билирубина в пределах нормы, а после введения беренила в той же дозе отмечено выраженное снижение количества эритроцитов и гемоглобина в крови в среднем в 2,0 раза и повышение количества лейкоцитов и билирубина в 2,5 раза.

После внутримышечного введения беридона собакам, больным пироплазмозом, в форме 7% раствора, в дозе 1 мл/10 кг массы тела наблюдается нормализация морфологических и биохимических показателей крови до пределов физиологических границ здоровых животных, а после применения беренила, в той же дозе, таких изменений не наблюдается.

И. Терапевтическая эффективность при однократном введении составила 92,8%, а при двукратном введении беренила в той же дозе, с интервалом в 24 часа, обусловленное наличием клинических признаков заболевания и паразитемией - 71,4%. Курс лечения с применением беридона составил 3 -4 дня, а беренила -5-7 дней.

7. Практические предложения

1. При проведении терапии пироплазмоза собак рекомендуется вводить беридон в дозе 1 мл/10 кг массы тела, однократно, внутримышечно. При тяжелом течение пироплазмоза допускается повторное введение препарата в той же дозе. В качестве симптоматической терапии перед введением беридона рекомендуем вводить 10 % раствор сульфокамфокаина внутримышечно, в дозе 0,5 -1,5 мл в зависимости от веса животного.

2. С целью определения общего состояния организма как здоровых, так и больных пироплазмозом собак в клинической практике и оценки состояния процессов ПОЛ и системы АОЗ организма предложено использовать «Методическое пособие по изучению и методам определения уровня свободнорадикального окисления липидов и антиоксидантной защиты у животных».