Факторы персистенции микрофлоры при маститах коров

Бала, Сергей Сергеевич

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Факторы персистенции микрофлоры при маститах коров

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Бала, Сергей Сергеевич Оренбург 2007 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 16.00.03

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Факторы персистенции микрофлоры при маститах коров

На правах рукописи

БАЛА Сергей Сергеевич

ФАКТОРЫ ПЕРСИСТЕНЦИИ МИКРОФЛОРЫ ПРИ МАСТИТАХ КОРОВ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа-2007

003054307

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет» и Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор Карташова Ольга Львовна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Маннапова Рамзия Тимергалеевна;

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Ульяновская

государственная сельскохозяйственная академия»

Защита состоится «9» февраля 2007 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 220. 003. 03. ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» (450001, г. Уфа, ул. 50 лет Октября, 34, ауд. 341/2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»

Автореферат разослан «_»_2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор сельскохозяйственных наук, профессор

кандидат биологических наук, доцент Хазипов Рустем Барисович

М.Г. Гиниятуллин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Мастит следует рассматривать как одну из наиболее существенных и серьезных проблем в молочном скотоводстве. Заболевание широко распространено по всей территории России среди коров разных пород. Те или иные его формы охватывают значительное поголовье - 15-25 % от общего стада, а по отдельным данным и до 50 % (Сидоркин В.А., Староверов С.А., 2004).

Воспаление молочной железы приводит к снижению продуктивности, ухудшению качества молока и преждевременной выбраковке коров, поэтому необходимо проводить эффективные диагностические и лечебные мероприятия по ликвидации мастита.

Особое значение в возникновении заболевания имеет микробный фактор. Известно, что течение воспалительного процесса почти всегда сопровождается инфекцией, причем большая часть воспалений вызывается попадающими извне специфическими возбудителями, которые проникают через сосковый канал в вымя и выявляются в секрете больных его четвертей. Особую опасность при этом представляют стрептококки и стафилококки. Микроорганизмы могут быть непосредственной причиной возникновения мастита и осложнять развивающиеся процессы в вымени, возникающие в результате воздействия на молочную железу неблагоприятных факторов внешней среды (Гулина В.М., 1997).

Выживание возбудителей в организме хозяина возможно при соответствующей их адаптации к механизмам антимикробной защиты. В настоящее время широко изучается группа биологических свойств микроорганизмов, направленных на деградацию механизмов естественной резистентности хозяина (лизоцим, лактоферрин и другие) - факторов персистенции - и создающих предпосылки для развития инфекционного процесса (Бухарин О.В., 1999).

признаков (Чернова O.JL, Комарова Н.К., Матюшина С.Б., 1997); построена математическая диагностическая модель, позволяющая диагностировать субклиническую форму мастита стафилококковой и стрептококковой этиологии (Исайкина Е.Ю., 2004).

К настоящему времени накопилось достаточно экспериментальных данных, которые дают основание сделать вывод о нарастающем распространении резистентных к антибиотикам микроорганизмов, возбудителей мастита, в результате чего большинство давно применяемых антибиотических препаратов не дают должного терапевтического эффекта. В связи с этим необходим поиск новых препаратов для лечения больных животных.

В ветеринарии и животноводстве широко применяют пробио-тики - стабилизированные культуры симбионтных микроорганизмов или продукты их ферментации. Это обусловлено преимуществами перед антибиотиками и химиотерапевтическими препаратами (широкий диапазон лечебно-профилактического действия, безвредность для организма, экологическая безопасность, относительная дешевизна) (Андреева A.B., Михайлова H.A., Ямалиев И.Ш., 2000; Буканов A.M., Маннапова Р.Т., 2003; Деблик А.Г., Деблик К.Е., Ижбулатова Д.А., 2006).

В связи с этим, известный интерес представляет с одной стороны, изучение биологических признаков, в том числе персис-тентных характеристик у микроорганизмов, выделенных от больных животных при разных формах мастита у коров, с другой - оценка влияния нетрадиционных методов терапии на биологические свойства микроорганизмов - возбудителей мастита.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось изучение биологических свойств возбудителей с их последующей коррекцией для разработки новых способов прогнозирования развития, диагностики и лечения маститов у коров.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить видовой состав и биологические свойства микроорганизмов, выделенных от здоровых животных и больных разными формами мастита коров.

2. Определить информативные биологические свойства микроорганизмов для построения диагностической модели прогнозирования развития болезни.

3. На основе комплекса информативных биологических свойств микроорганизмов разработать микробиологические критерии прогнозирования развития мастита.

4. Изучить антагонистическую активность широко применяемых спорообразующих культур пробиотиков в отношении наиболее часто встречаемых возбудителей мастита и изменения их пер-систентных свойств под действием пробиотиков.

5. Разработать способ местного лечения разных форм мастита у коров с использованием экспериментально отобранного эффективного пробиотика.

Научная новизна. Выявлена способность микроорганизмов, выделенных от здоровых и больных маститом животных, к инактивации факторов естественной резистентности хозяина и представлена сравнительная оценка диагностической значимости биологических свойств микроорганизмов. Полученные данные использованы при разработке математической диагностической модели прогнозирования развития мастита и способа диагностики субклинической формы мастита у коров (Патент РФ на изобретение № 2264171 от 20 ноября 2005 года).

В эксперименте in vitro изучены: антагонистическая активность широко применяемых спорообразующих пробиотиков в отношении наиболее часто выделяемых возбудителей мастита, изменения пер-систентных свойств микроорганизмов под их влиянием и отобран наиболее эффективный пробиотик Споробактерин. Впервые проведена регуляция персистентных свойств микроорганизмов Споробак-терином в экспериментальных и клинических условиях, что послужило основой для разработки качественно нового способа терапии больных животных. Обоснованы преимущества локального применения Споробактерина по сравнению с традиционной терапией антибиотиками через снижение персистентных свойств возбудителей, быстрой его элиминацией из очага нагноения и значительного сокращения сроков лечения.

Теоретическое и практическое значение работы. Полученные результаты расширяют представление о роли факторов персистенции микроорганизмов в течении мастита у коров и являются основой для разработки новых практических решений по диагностике, прогнозированию и терапии заболевания.

Практическое значение работы подтверждено разработкой способа диагностики субклинической формы мастита у коров (Патент РФ на изобретение № 2264171 от 20 ноября 2005 года), математической диагностической модели прогнозирования развития мастита и способа лечения маститов у коров, который апробирован и внедрен в работу СПК «За мир» Илекского района и ЗАО «Шевченко» Ташлинского района Оренбургской области.

Положения, выносимые на защиту:

1. Факторы персистенции микроорганизмов, вызывающих мастит, определяют характер течения заболевания.

2. Факторы персистенции микроорганизмов и их последующая коррекция - основа разработки новых методов прогнозирования развития и лечения маститов у коров.

Апробация работы. Результаты проведенных исследований доложены и обсуждены на международной научной конференции «Актуальные вопросы морфологии и хирургии XXI века» (Оренбург, 2001); конференции, посвященной 150 - летию Оренбургской государственной ветеринарной службы (Оренбург,

2002); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии» (Оренбург,

2003); конференции «Успехи современного естествознания (медико-биологические науки)» (Сочи, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе патент РФ на изобретение № 2264171 от 20 ноября 2005 года.

Объем и структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 133 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, главу по материалам и методам исследований, три главы собственных исследований, заключение, выводы. Указатель литературы содержит 220 источников литературы, из которых 159 отечественных и 61 иностранный. Текст иллюстрирован 8 рисунками и 20 таблицами.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследования. Материалом для исследования служили микроорганизмы, выделенные из проб молока 340

животных СПК сельхозартели «За мир» Илекского района и ЗАО «Шевченко» Ташлинского района Оренбургской области. Было изучено 485 штаммов разных видов стафилококков и стрептококков, выделенных из молока 177 коров с субклинической формой мастита, 109 с клинической формой мастита и от 70 здоровых животных. Выделение и идентификацию штаммов проводили общепринятыми методами по морфологическим, тинкториальным и культуральным свойствам (Биргер М.О., 1982). Биохимические свойства микроорганизмов выявляли с использованием тест-систем MikroLaTest (Lachema, Чехия). У выделенных штаммов изучали биологические свойства: способность коагулировать плазму, проявлять лецитовителазную, гемолитическую и лизоцимную активности (Биргер М.О., 1982). Способность стафилококков к инактивации факторов естественной резистентности (лизоцима, интерферона, лактоферрина) изучали по методикам, описанным О.В.Бухариным с сотрудниками (1982), В.Ю.Соколовым (1990), И.В.Валышевой с соавт. (2003). Определение антагонистической активности пробиотиков проводили методом отсроченного антагонизма (М.О.Биргер, 1982). Изучение влияния стерильных фильтратов споровых пробиотиков на антилизоцимную, антиинтерфероно-вую и антилактоферриновую активности микроорганизмов проводили с использованием планшетного фотометрического метода (О.В. Бухарин с соавт., 1997).

Работа по созданию модели для прогнозирования развития мастита выполнена на 340 штаммах микроорганизмов, выделенных от здоровых и больных животных. Статистическая и математическая обработка результатов проводилась общепринятым параметрическим методом вариационной статистики с использованием критерия Фишера - Стьюдента (И.П.Ашмарин, A.A. Воробьёв, 1962); непараметрическим методом критерия знаков (Е.В.Гублер, А.А.Генкин, 1973) и с применением автоматизированной системы программ: «Распределение», «Информативность», «Корреляционный анализ», «Дискриминантный анализ».

Обследованные больные животные были разделены на группы с клинической и субклинической формами мастита, сформированные по принципу аналогов (с учётом возраста, массы тела и периода лактации). Каждая из этих групп, в свою очередь, была разбита на 4-е

подгруппы (споробактерин вводили в количестве - 5, 10 и15 мл), в контрольной группе применяли традиционные методы лечения. Споробактерин вводили интрацистернально (в подогретом до 38-40°С состоянии) каждые 24 часа до получения положительных клинических результатов. Оценка эффективности лечения больных животных проводилась в ближайшие и отдаленные сроки после лечения по данным общеклинического обследования и бактериологических методов исследования.

Результаты исследования и их обсуждение

Проведение данной работы мы начали с расшифровки этиологической структуры заболевания. Проведенные исследования показали, что при клинической форме мастита стафилококки (S. aureus, S. epidermidis, S. haemolyticus, S. auricularis) были выделены в 75,1 %, энтеробактерии (Е. coli) - в 8,2 %, стрептококки - в 16,7 % случаев. При субклинической форме заболевания существенных изменений частоты выделения бактерий не обнаружено: стафилококки (S. aureus, S. epidermidis, S. hominis, S. warneri) - регистрировали у 76,7 %, стрептококки - у 23,3 % обследованных животных. Анализ видового спектра выделенной микрофлоры представлен на рис. 1. Установлено, что лидирующим видом являлся S.aureus, который наиболее часто выделяли в монокультуре (в 52,8 и 50,0 % случаев соответственно). Меньшая доля приходилась на S.epidermidis (13,9 % при клинической и 20,0 % - субклинической форме заболевания), а стрептококки составляли соответственно 16,7 % и 23,3 %. Среди выделенных стрептококков преобладал Str. agalactiae - 80,1 %; другие стрептококки были представлены следующими видами: Str. pyogenes ( 7,7 %), Str. lactis (5,0 %), Str. uberus (4,4 %) и Str. faecium (2,8 %).

Микроорганизмы, выделенные из молока здоровых животных, были представлены, в основном, следующими видами: КОС - S. epidermidis, S. auricularis, S. hominis, S. haemolyticus (28,8 % случаев); Streptococcus (19,2 %); а также ассоциациями E. coli и S. epidermidis в 5,8 % и E. coli - в 3,9 % случаев.

В настоящее время ведется поиск информативных биологических характеристик микроорганизмов, определяющих их длительное пер-систирование в организме. В этом плане перспективным представляется подход, основанный на регистрации и анализе у изолирован-

Здоровые животные Клиническая форма мастита Субклиническая форма мастита

Рис. 1. Видовая характеристика микрофлоры молока у здоровых и больных маститом коров

ных штаммов комплекса биологических свойств, направленных на инактивацию факторов естественной противоинфекционной защиты макроорганизма и обозначенных как маркеры бактериальной персис-тенции (О.В. Бухарин, Б.Я.Усвяцов, 1996).

В связи с этим, мы изучили связь биологических свойств стафилококков и стрептококков, инициирующих развитие воспалительного процесса, с особенностями течения мастита (табл.1).

Таблица 1

Распространенность и выраженность биологических свойств микроорганизмов, выделенных от здоровых и больных маститом животных

Состояние животного Микроорганизмы Биологические свойства

Гемолиз АЛА (мкг/мл) АИА (услед.) АЛфА (мкг/мл)

I!-1 Стафилококки 100% 1,62±0,02 13&Я),04 2£6Ш,08

80,ШД 8% 75,0*0,87% 100%

Стрептококки 100% 1,22±Д04 1,7±0,06 3,0*0,09

86,7±Д67% 9332,49% 100%

И- Стафилококки 86,(Ш),45 % 3,Ы),11 2,6*0,09 2,63*0,09

100% 100% 100%

Стрептококки 94,3*0,45 % 2,6±0,07 2<Ш),1 2,68±0.08

100% 100% 100%

Здоровые животные 3 группа Стафилококки 40,0±Д97 % 1,16±0,04 1,1 ±0,03 1,59±0,05

60,№$7% 66,7±0,94% 100%

Стрептококки ЗЗД±2£8 % 1,0±Д03 1,(Ж),04 1,64=Ю,05

77,7±1,0% 60ДШ,97% 100%

В числителе - выраженность, в знаменателе - распространенность.

При изучении АЛА у стафилококков, выявлено, что признак встречался в 100% случаев среди микроорганизмов, выделенных от 2 группы животных со средним показателем -3,1 ±0,11 мкг/мл. Штаммы стафилококков от животных 1 и 3 группы обладали данным признаком лишь в 80,0±0,8 % и 60,0±0,97 % случаев, со средним показателем 1,62±0,02 и 1,16±0,04 мкг/мл, соответственно. У стрептококков антилизоцимная активность регистрировалась в 100% случаев только у микроорганизмов, выделенных от животных 2 группы (среднее значение - 2,6±0,07 мкг/мл). Штаммы 1 и 3 групп данный признак проявляли реже (86,7±0,67 % и 77,7±1,0 % случаев, соответственно) и средние показатели характеризовались более низкими значениями (1,22±0,04 и 1,0±0,03 мкг/мл).

Антиинтерфероновой активностью обладали в 100 % случаев только штаммы, выделенные от животных 2 группы (со средним показателем у стафилококков - 2,6±0,09 усл. ед. и у стрептококков -2,9±0,1 усл.ед.). Среди штаммов стафилококков, выделенных от животных 1 и 3 групп, признак обнаруживался в 75,0±0,87 % и 66,7±0,94% случаев соответственно, причем у стафилококков, выделенных от животных 1 группы среднее значение данного показателя было выше чем у стафилококков, выделенных от животных 3 группы (1,38±0,04 усл.ед. и 1,1±0,03 усл.ед. соответственно). Результаты исследования АИА стрептококков, выделенных от животных 1 и 3 групп, показали, что данное свойство регистрировалось в 75,0±0,87 % и 60,0±0,97 % случаев, средняя величина признака равнялась соответственно 1,7±0,06 усл.ед и 1,0±0,04 усл.ед.

Антилактоферриновая активность обнаруживалась у всех штаммов микроорганизмов, выделенных из молока как здоровых так и больных животных, признак обнаруживался в 100 % случаев, но с разным уровнем выраженности. Так, у стафилококков и стрептококков, выделенных из молока животных 1 группы, АЛфА имела самые высокие показатели: 2,96±0,08 мкг/мл и 3,0±0,09 мкг/мл соответственно. Изученные культуры стафилококков и стрептококков от животных 2 группы обладали уровнем АЛфА, равным 2,63±0,09 мкг/мл и 2,68±0,08 мкг/мл. Самые низкие показатели данного признака были зафиксированы у штаммов стафилококков и стрептококков, выделенных из молока здоровых

животных, величина признака соответственно составила 1,59±0,05 мкг/мл и 1,64±0,05 мкг/мл.

Наиболее часто (в 100 % и в 86,0±0,45 %-94,3±0,45 % случаев) (р <0,05) гемолизин обнаруживался у стафилококков и стрептококков, выделенных из молока коров с клинической и субклинической формой мастита. Тогда как у микроорганизмов, выделенных из молока здоровых животных, способность продуцировать гемолизин была отмечена только в 40,0±0,97 % у стафилококков и в 33,3±2,98 % случаев у стрептококков.

Вместе с тем, среди изученных штаммов не наблюдалось существенных отличий по лизоцимной активности и способности коагулировать плазму.

Таким образом, анализ полученных данных показал зависимость формы течения мастита от спектра исходных биологических характеристик возбудителя. Для микрофлоры, выделенной из молока коров с клинической формой мастита, было характерно выделение штаммов с гемолитической активностью и более высоким уровнем антилактоферриновой активности. При субклинической форме заболевания микрофлора была, как правило, представлена микроорганизмами, обладающими факторами персистенции в 100 % случаев и с более высокими средними значениями антилизоцимной и антиинтерфероновой активностей. Из молока здоровых коров выделялись микроорганизмы достаточно редко обладающие факторами персистенции с низким уровнем экспрессии.

Проанализированная связь биологических характеристик возбудителей маститов, в частности, их способности к инактивации факторов естественной резистентности, с различными формами заболевания, позволила в процессе выполнения работы рассчитать математическую модель и разработать способ прогнозирования развития мастита.

В результате проведенной работы - оценки степени информативности изученных свойств, было выявлено четыре наиболее информативных показателя: гемолитическая активность, антилизоцимная активность, антиинтерфероновая активность, антилактоферриновая активность, которые составили главную информативную комбинацию. Конечным этапом математической

обработки материала явилось построение с помощью линейных дискриминантных функций модели прогнозирования развития мастита стрептококковой и стафилококковой этиологии у крупного рогатого скота:

Д = Xiai+X2a2 +... х„ап + С,

где Д - дискриминантная функция, характеризующая вероятность развития мастита; х - значение показателя в баллах; а -коэффициент показателя; С - поправочная константа.

В таблице 2 даны коэффициенты для каждого показателя и поправочные константы. Они рассчитаны на основании машинного анализа динамики их многомерных средних значений применительно к штаммам стафилококков и стрептококков, выделенным из молока здоровых и больных животных.

Для прогнозирования вероятности развития мастита, полученные у данного штамма стафилококка или стрептококка количественные значения по показателям, переводят в баллы и используют для расчета дискриминантной функции по приведенной формуле. Расчет проводится по всем строкам соответствующей таблицы.

Наибольшая величина дискриминантной функции из всех полученных будет в 95 % случаев соответствовать обозначенной на данной строке вероятности развития мастита. Примеры расчета по диагностическим моделям:

Пример 1. Исследуемый штамм Str. agalactiae, выделенный из молока животного, характеризовался следующими признаками: наличием гемолиза (1 балл), АЛА - 2 мкг/мл (2 балла), АИА - 2 усл.ед. (3 балла), АЛфА - 2,3 мкг/мл (2 балла). Расчет математической модели прогнозирования вероятности развития мастита по строкам таблицы следующий:

Дг = 51,3x1 + 45,1x2 + 28,46x2 + 55,33x2+ - 62,26 - 246,82.

Дг=93,83х1 +139,13x2 + 112,69x2 + 97,37x2+ -384,63 = 407,58

Дз=123,37x1+65,25x2 + 33,71x2 + 165,79x2 + -337,02 = 315,85

В результате проведенного расчета максимальная величина дискриминантной функции установлена на второй строке (До), что позволяет прогнозировать высокую вероятность развития субклинической формы мастита у данного животного.

Таблица 2

Коэффициенты показателей и поправочные константы для модели прогнозирования развития мастита стрептококковой и стафилококковой этиологии

Стрептококки

Вероятность развития мастита Свойства микроорганизмов С

Гемолиз АЛА АИА АЛфА

Низкая вероятность развития 513 45,1 28,46 5533 -6X26

Высокая вероятность Развития мастита субклинической формы 93,83 139,13 112,69 9737 -384,63

Высокая вероятность развития мастита клинической формы 12337 65,25 33,71 165,79 -337,02

Стафилококки

Вероятность развития мастита Свойства микроорганизмов С

Гемолиз АЛА АИА АЛфА

Низкая вероятность развития 131,7 25,5 36,16 61,88 -81,74

Высокая вероятность развития мастита субклинической формы 37037 71,66 117,79 122,69 -54737

Высокая вероятность развития мастита клинической формы 360,83 26,5 86,8 159,59 -465,87

Пример 2. Исследуемый штамм Б.аигеш, выделенный из молока животного характеризовался следующими признаками: наличие гемолиза (1 балл), АЛА -1 мкг/мл (1 балл), АИА - 1 усл. ед. (1 балл), АЛфА -3,1 мкг/мл (3 балла). Расчет математической

модели прогнозирования вероятности развития мастита по строкам таблицы следующий:

Д1=131,7х1 + 25,5x1 + 36,16x1 + 61,88x3+ - 81,74 = 297,26

Д2=370,37x1+71,66x1+117,79x1 + 122,69x3+ - 547,37 = 380,52

Дз=360,83х1 + 26,5x1 + 86,8x1 + 159,59x3 + -465,87 = 487,03

В результате проведенного расчета максимальная величина дискриминантной функции установлена на третьей строке (Дз), что позволяет с высокой вероятностью прогнозировать развитие клинической формы мастита у данного животного.

Таким образом, с помощью созданных диагностических математических моделей, основанных на биологических свойствах возбудителя, возможно своевременно прогнозировать развитие заболевания у животных.

Следующим этапом работы явилась разработка способа диагностики субклинической формы мастита микробной этиологии у коров. Проведенными нами исследованиями было установлено, что антилактоферриновая активность определялась у всех микроорганизмов, выделенных из молока здоровых и больных субклинической формой мастита коров, однако у возбудителей, выделенных от больных животных, уровень выраженности данного признака был в 1,9 выше (от 2,6 до 2,9 мкг/мл и от 1,1 до 1,8 мкг/мл). Таким образом, было выявлено, что все виды стафилококков и стрептококков, выделенные из молока животных с субклинической формой мастита, обладают антилактоферриновой активностью с уровнем выраженности данного признака больше 2 мкг/мл. Обнаружение у исследуемого штамма-возбудителя мастита антилактоферриновой активности с указанными выше количественными характеристиками позволяет повысить эффективность диагностики субклинических форм мастита микробной этиологии у коров, подобрать оптимальные схемы лечения и сократить экономический ущерб, наносимый животноводству.

В условиях прогрессирующей антибиотикоустойчивости микрофлоры, нетрадиционным и перспективным для борьбы с местной инфекцией представляется использование живых микробов-антагонистов, способных подавлять рост патогенных и условно-пато-

генных бактерий и грибов. Пробиотические препараты обладают комплексным действием при отсутствии токсичности и побочных эффектов, они не вызывают привыкания микрофлоры, не оказывают негативного воздействия на качество молока. В современных экономических условиях пробиотики привлекают внимание также сравнительно невысокой стоимостью, все это открывает возможности для их широкого применения. Среди про-биотиков наиболее перспективными являются препараты на основе бактерий рода Bacillus, которые наряду с антагонистической активностью, обладают также выраженной иммуномодулирующей способностью. Широкое распространение в России получили бактерийные препараты Бактисубтил (Bacillus cereus IP 5832), Споробактерин (В. subtilis 534), Биоспорин (В. subtilis 3 и В. liche-neformis 31Б), Ветом 1.1 (В. subtilis ВКПМ 7092) , в состав которых входят аэробные спорообразующие бактерии, обитающие в почве и окружающей среде. В связи с вышеизложенным, нами были изучены антагонистическая активность указанных пробио-тиков в отношении наиболее распространенных возбудителей мастита, а также влияние пробиотиков на факторы персистенции этих микроорганизмов.

Для изучения антагонистической активности споровых микроорганизмов в отношении условно-патогенных бактерий с помощью проведенных экспериментальных исследований выбрана плотная питательная среда Гаузе № 2 и найден временной интервал (72-96 часов), характеризующийся максимальным образованием зрелых спор. Наибольшей антагонистической активностью в отношении грамотрицательных микроорганизмов (кишечная палочка и сальмонеллы) обладал Бактисубтил, зоны задержки роста тест-культур составили в среднем 22,5± 1,91 и 21,5±2,07 мм соответственно. Биоспорин, Ветом 1.1 и Споробактерин угнетали рост, в основном, грамположительных бактерий (стафилококки, стрептококки).

Изучение регуляции факторов персистенции грамположительных микроорганизмов под действием спорообразующих пробиотиков выявило их разнонаправленное влияние: установлено снижение, повышение и индифферентное действие на антилизо-цимную и антиинтерфероновую активности изученных микроорга-

низмов; снижение и повышение антилактоферриновой активности. При этом, на антилизоцимную активность S. aureus, S. epidermidis, грибов рода Candida, Str. agalactiae наибольшее влияние оказывал Споробактерин, снижая признак у 28 штаммов соответственно; под действием Биоспорина, Споробактерина и Ветома 1.1. антиинтерфероновая активность снижалась у 100 % исследованных золотистых стафилококков, Биоспорин наиболее эффективно снижал АИА у S. capitis, а Споробактерин - у S. epidermidis, грибов рода Candida, Str. agalactiae. Все изученные пробиотики оказывали одинаковое действие на антилактоферриновую активность золотистых стафилококков, снижая признак у 50 % и повышая у 50 % штаммов; установлено, что наиболее эффективное действие на АЛфА S. epidermidis, S. capitis, грибов рода Candida, Str. agalactiae оказывал Споробактерин, снижая признак у 70, 68, 66,6 и 75 % изученных штаммов соответственно.

Изучение влияния пробиотиков на выраженность факторов персистенции условно-патогенных микроорганизмов позволило заключить, что все пробиотики в той или иной степени снижали АИА, AJIA и АЛфА стафилококков, стрептококков и кандид. При этом, максимальное подавление изученных факторов персистенции у золотистых стафилококков и агалактийных стрептококков, являющихся основными возбудителями мастита, оказывал Споробактерин.

Таким образом, полученные результаты показали, что к числу наиболее биологически активных пробиотиков относится Споробактерин, который помимо выраженного антагонистического действия, снижения персистентных свойств микроорганизмов, также обладает противовоспалительным эффектом (Жданов П.И., 1998), оказывает иммуномодулирующее действие (Никитенко В.И., 1991,1999). Данные свойства Споробактерина и явились побудительным мотивом к его использованию для лечения животных с разными формами мастита.

Клинические наблюдения по действию традиционного (мастисан А) и разработанного методов лечения были проведены под контролем бактериологического исследования. Анализируя полученные результаты, следует отметить, что под действием пробиотика достоверно снижалась микробная обсемененность мо-

лока, быстрее наступало улучшение состояния больных животных и их выздоровление в сравнении с группой животных, у которых лечение проводилось традиционным методом (табл. 3.)

Таблица 3.

Сравнительная оценка эффективности епоробактерина и мастисана А при различных формах мастита у коров

1трупиа 2группа Згруппа

Контроль (сгоро- (споро- (споро-

Форма Показатели (масти* \ бак- бак- бак-

мастита сан А) терин терин ТфИН

в дозе вдове в дозе

5мл) 10мп) 15мл)

Число животных 44 44 45 44

1 Число введений 2,7 15 2,1 2,0

I Продолжитель-

1 ность лечения, дни 3 2,4 2,2 2,0

1 Клиническое

& выздоровление, дни 6±0,5 6,2±0,5 5,1±0,4 4+0,5

Число животных 10 10 10 11

Число введений 4,1 3,6 2,8 2,6

1 Цродолжигель-

ность лечения, дни 3,8 3,6 3,1 2,8

о Клиническое

выздоровление, дни 7,2±0,6 7,(^0,5 5,6Ь03 4,5+0,5

Чжло животных 9 8 8 8

ж § Число введений 5,9 5,5 4,3 3,8

5 Продолжитель-

о. ность лечения, дни 6 6Д 5,2 4Д

Клиническое

выздоровление, дни 8,1±0,4 7,5± 0,8 6,2±0,4 5,6±:03

Чжло животных 7 8 8 8

& >3 Число введений 7,4 6,7 5,9 5,2

Продолжитель-

В '1 ность лечения, дни 7,8 7,4 6,8 5,1

Клиническое

выздоровление, дай 11±0,5 10,5+0,9 8,5+0,5 7,4+0,6

Согласно полученным данным высокая терапевтическая эффективность споробактерина выявлена при назначении пробио-тика в дозе 10 мл в сутки, интрацистернально при субклинической и серозной формах мастита. При катаральной и гнойно-катаральной формах мастита наиболее выраженным терапевтическим действием споробактерин обладал при введении в количестве 15 мл в сутки, интрацистернально при одновременном введении новокаина по методике Логвинова.

Таким образом, проведенные исследования показали, что использование споробактерина является наиболее эффективным методом лечения клинического и субклинического мастита в сравнении с традиционным. Применение споробактерина, кроме того, способствовало подавлению биологических свойств стафилококков и стрептококков in vivo и позволило достигнуть выздоровления в ближайшие сроки после лечения у 100 % с субклинической формой мастита и у 80-100 % животных с клинически выраженной формой мастита.

Выявление совпадения результатов направленности воздействия регулирующего фактора на персистентные свойства микроорганизмов-возбудителей мастита в условиях in vitro и in vivo имеет большое практическое значение, так как позволяет в лабораторных условиях подобрать эффективные оптимальные терапевтические воздействия (независимо от их природы), направленные на снижение персистентного потенциала возбудителя и, следовательно, способствующие выведению патогена из организма.

Подводя общий итог проделанной работе, следует выделить два основных момента. Во-первых, длительность и характер течения мастита определяются наличием комплекса биологических свойств, ответственных за инактивацию эффекторных механизмов естественного иммунитета. Совокупность информативных биологических признаков послужила основой для создания математической модели прогнозирования развития заболевания. Во-вторых, на основе полученных результатов разработаны способ диагностики субклинической формы мастита и новый метод лечения заболевания, основанный на коррекции пробиотиками биологических свойств возбудителей мастита у животных.

ВЫВОДЫ

1. Изучение бактериальной флоры при маститах у коров выявило ведущее значение микроорганизмов родов Staphylococcus и Streptococcus, которые при клинической форме заболевания выделялись в 75 % и 16,7 % случаев, а при субклинической - в 76,7 % и 23,3 % случаев соответственно. Доминирующее положение занимали штаммы S. aureus и Str. agalactiae.

2. Клинико-бактериологический анализ микроорганизмов, выделенных от больных животных, выявил зависимость характера течения заболевания от биологических свойств возбудителя. Микроорганизмы с гемолитической активностью и высоким уровнем антилактоферриновой активности выделялись при клинической форме мастита, тогда как штаммы с персистентными характеристиками - при субклинической форме заболевания, что позволило разработать способ прогнозирования развития заболевания.

3. Выявлены отличия по распространенности и выраженности антилактоферриновой активности у микроорганизмов, выделенных у здоровых и больных субклинической формой мастита коров. Высокие значения признака характерны для культур, выделенных при субклинической форме и на этой основе разработан способ диагностики субклинической формы заболевания.

4. Изучено антагонистическое действие пробиотиков на патогенные и условно-патогенные микроорганизмы. Установлено, что максимальным ингибирующим эффектом в отношении грамотри-цательных микроорганизмов (кишечная палочка и сальмонеллы) обладает Бактисубтил, а Биоспорин, Ветом 1.1 и Споробактерин угнетают рост, в основном, грамположительных бактерий (стафилококки, стрептококки).

5. В эксперименте установлена возможность модификации способности микроорганизмов к инактивации факторов естественной резистентности под воздействием споровых пробиотиков: снижение, повышение и индифферентное действие. Полученные данные позволили отобрать препарат Споробактерин, наиболее эффективно снижающий персистентные свойства стафилококков и стрептококков.

6. Разработан способ лечения маститов у коров с использо-

ванием Споробактерина. Установлено, что Споробактерин при местном лечении снижает микробную обсемененность и уменьшает выраженность персистентных свойств стафилококков и стрептококков.

7. Терапия больных маститом животных с использованием Споробактерина позволяет сократить сроки лечения (на 1 - 2,7 и 1,2 дня) и достигнуть положительного результата в ближайшие (2,8-5,1 и 3 дня) и отдаленные (6-10 месяцев) сроки наблюдения у коров с клинической и субклинической формами мастита соответственно.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Уровень выраженности факторов персистенции микроорганизмов рекомендуется использовать в практике лабораторной диагностики субклинической формы мастита у коров и прогнозировании возможности развития заболевания.

2. Для терапии маститов у коров целесообразно применение Споробактерина: при субклинической форме заболевания в дозе 10 мл (интрацистернально, один раз в сутки, в течении 1-3 дней), при клинической - в дозе 10-15 мл (интрацистернально, один раз в сутки, в течении 3-6 дней).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бала С.С. Пробиотики и антибиотикорезистентность микроорганизмов / С.С. Бала // Актуальные вопросы морфологии и хирургии 21 века: материалы международной научной конференции, т. II хирургия. - Оренбург, 2001. - С. 11-13.

2. Бала С.С. Влияние некоторых факторов на рост и спорообразование штамма В. зиЫШэ 534. / С.С. Бала //Вестник ветеринарии - Оренбург: Издат. центр ОГАУ, 2002. -№5- С. 27-29.

3. Савина И.В. Чувствительность маститной микрофлоры к пробиотику Споробактерин /И.В.Савина, С.С. Бала, Ю.А. Гонохов// Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии: материалы международной научно-практической конференции. -Оренбург, 2003.-С.128-131.

4. Бала С.С. Влияние споробактерина и бактисубтила на

рост и антилизоцимную активность патогенных и условно-патогенных микроорганизмов /С.С. Бала // Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии: материалы международной научно-практической конференции. - Оренбург: Изд-во «Оренбургская губерния», 2003. - С.25-27.

5. Бала С.С. Антагонистическая активность пробиотиков на основе аэробных спорообразующих бактерий / С.С. Бала // Успехи современного естествознания. - 2004. - №12. - С. 84.

6. Карташова O.JI. Биологические свойства микрофлоры, выделенной из молока, и возможность их использования в прогнозировании развития мастита у коров /O.JI. Карташова, С.Б. Киргизова, С.С. Бала // Вестник ОГУ. Приложение Биология и медицина. - 2005. -№5. - С. 28-30.

7. Бала С.С. Диагностика и лечение маститов у коров/ С.С. Бала, И.В. Савина // Успехи современного естествознания. -2005. -№12.- С.36.

8. Карташова O.J1. Способ диагностики субклинической формы мастита /O.J1. Карташова, С.Б. Киргизова, С.С. Бала и др. // Патент РФ № 2264171 от 20.11.05 г.

Подписано в печать 25.12.06. Печ. листов 1. Тираж 100 экз. Заказ 161. Формат 60x90/16. Издат. Центр ВНИИМС. 460000, г. Оренбург, ул. 9 Января, 29.

Оглавление диссертации Бала, Сергей Сергеевич :: 2007 :: Оренбург

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Факторы персистенции условно-патогенных микроорганизмов и их роль при маститах у коров.

1.2. Препараты-пробиотики и свойства входящих в их состав бацилл.

1.3. Регуляция персистентных свойств микроорганизмов пробиотиками.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика материала и методы определения биологических свойств микрофлоры, выделенной из молока.

2.2. Методики изучения патогенных и персистентных свойств выделенных микроорганизмов.

2.3. Методики определения антагонистической активности пробиотиков и влияния пробиотиков на факторы персистенции микроорганизмов.

2.4. Методика клинического испытания эффективности споробактерина при разных формах мастита коров.

2.5. Методы статистической обработки материала.

Глава 3. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИКРОФЛОРЫ, ВЫДЕЛЕННОЙ ИЗ МОЛОКА И ВОЗМОЖНОСТЬ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ДЛЯ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ И ДИАГНОСТИКИ МАСТИТА У КОРОВ.

3.1. Характеристика видового состава и биологических характеристик микроорганизмов, выделенных из молока здоровых и больных маститом коров.

3.2. Использование факторов персистенции стафилококков для прогнозирования возникновения мастита.

3.3. Способ диагностики субклинической формы мастита микробной этиологии у коров.

Глава 4. РЕГУЛЯЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МИКРОФЛОРЫ ПРОБИОТИКАМИ НА ОСНОВЕ СПОРООБРАЗУЮЩИХ МИКРООРГА-ГАНИЗМОВ IN VITRO.

4.1. Изучение антагонистической активности производственных штаммов, входящих в состав пробиотиков в отношении основных возбудителей мастита коров.

4.2. Динамика персистентных свойств микроорганизмов под влиянием пробиотиков на основе спорообразующих микроорганизмов.

Глава 5. РАЗРАБОТКА НОВЫХ ПОДХОДОВ К ЛЕЧЕНИЮ МАСТИТОВ

У КОРОВ.

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Бала, Сергей Сергеевич, автореферат

Актуальность проблемы. Мастит следует рассматривать как одну из наиболее существенных и серьезных проблем в молочном скотоводстве. Заболевание широко распространено по всей территории России среди коров разных пород. Те или иные его формы охватывают значительное поголовье - 1525% от общего стада, а по отдельным данным и до 50% [Сидоркин В.А., Староверов С.А., 2004].

Имеются единичные работы по изучению факторов персистенции у микроорганизмов, вызывающих разные формы мастита. Так, установлено значение биологических характеристик стафилококков в формировании скрытой формы мастита [Чернова О.Л., 2001]; показано, что микроорганизмы, выделенные при хроническом течении субклинической формы мастита, обладали набором факторов персистенции (AJIA и АИА) с высоким уровнем выраженности признаков [Чернова О.Л., Комарова Н.К., Матюшина С.Б., 1997]; построена математическая диагностическая модель, позволяющая диагностировать субклиническую форму мастита стафилококковой и стрептококковой этиологии [Исайкина Е.Ю., 2004].

В ветеринарии и животноводстве широко применяют пробиотики - стабилизированные культуры симбионтных микроорганизмов или продукты их ферментации. Это обусловлено преимуществами перед антибиотиками и хи-миотерапевтическими препаратами (широкий диапазон лечебно-профилактического действия, безвредность для организма, экологическая безопасность, относительная дешевизна) [Подберезный В.В., Полянцев Н.И., Ропаева Л.В., 1996; Андреева А.В., Михайлова Н.А., Ямалиев И.Ш., 2000; Бу-канов A.M., Маннапова Р.Т., 2003; Деблик А.Г., Деблик К.Е., Ижбулатова Д.А., 2006].

В связи с этим, известный интерес представляет, с одной стороны, изучение биологических признаков, в том числе персистентных характеристик у микроорганизмов, выделенных от больных животных при разных формах маетита у коров, с другой - оценка влияния нетрадиционных методов терапии на биологические свойства микроорганизмов - возбудителей мастита.

Целью настоящего исследования явилось изучение биологических свойств возбудителей с их последующей коррекцией для разработки новых способов прогнозирования развития, диагностики и лечения маститов у коров.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

4.Изучить антагонистическую активность широко применяемых споро-образующих пробиотиков в отношении наиболее часто встречающихся возбудителей мастита и изменения их персистентных свойств под действием пробиотиков.

5.Разработать способ местного лечения разных форм мастита у коров с использованием экспериментально отобранного эффективного пробиотика.

В эксперименте in vitro изучена антагонистическая активность широко применяемых спорообразующих пробиотиков в отношении наиболее часто выделяемых возбудителей мастита, изменения персистентных свойств микроорганизмов под их влиянием и отобран наиболее эффективный пробиотик Спо-робактерин. Впервые проведена регуляция персистентных свойств микроорганизмов Споробактерином в экспериментальных и клинических условиях, что послужило основой для разработки качественно нового способа терапии больных животных. Обоснованы преимущества локального применения Споробак-терина по сравнению с традиционной терапией антибиотиками через снижение персистентных свойств возбудителей, быстрой его элиминацией из очага воспаления и значительного сокращения сроков лечения.

Теоретическое и практическое значение. Полученные результаты расширяют представление о роли факторов персистенции микроорганизмов в течении мастита у коров и являются основой для разработки новых практических решений по диагностике, прогнозированию и терапии заболевания.

Практическое значение работы подтверждено разработкой способа диагностики субклинической формы мастита у коров (Патент РФ на изобретение № 2264171 от 20 ноября 2005 года), математической диагностической модели прогнозирования развития мастита и способа лечения маститов у коров, который апробирован и внедрен в работу СПК сельхозартели «За мир» Илекского района и ЗАО «Шевченко», Ташлинского района Оренбургской области.

Положения, выносимые на защиту;

1. Персистентные свойства микроорганизмов вызывающих мастит, определяют характер течения заболевания;

2. Персистентные свойства микроорганизмов и их последующая коррекция -основа разработки новых методов прогнозирования развития и лечения маститов у коров.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, получен патент РФ на изобретение №2264171 от 20 ноября 2005 года.

Заключение диссертационного исследования на тему "Факторы персистенции микрофлоры при маститах коров"

ВЫВОДЫ

1. Изучение бактериальной флоры при маститах у коров выявило ведущее значение микроорганизмов родов Staphylococcus и Streptococcus, которые при клинической форме заболевания выделялись в 75% и 16,7% случаев, а при субклинической - в 76,7% и 23,3% случаев соответственно. Доминирующие положение занимали штаммы S. aureus и Str. agalactiae,

3. Выявлены отличия по распространенности и выраженности антилактоферриновой активности у микроорганизмов, выделенных у здоровых и больных субклинической формой мастита коров. Установлено что, высокие значения признака характерны для культур, выделенных при субклинической форме и на этой основе разработан способ диагностики субклинической формы заболевания.

4. Изучено антагонистическое действие пробиотиков на патогенные и условно-патогенные микроорганизмы. Установлено что, максимальным ингиби-рующим эффектом в отношении грамотрицательных микроорганизмов (кишечная палочка и сальмонелллы) обладал бактисубтил, а биоспорин, ветом и споробактерин угнетали рост, в основном, грамположительных бактерий (стафилококки, стрептококки).

5. В эксперименте установлена возможность модификации способности микроорганизмов к инактивации факторов естественной резистентности под воздействием споровых пробиотиков: снижение, повышение и индифферентное действие. Полученные данные позволили отобрать препарат споробактерин, наиболее эффективно снижающий персистентные свойства стафилококков и стрептококков.

6. Разработан способ лечения маститов у коров с использованием споро-бактерина. Установлено, что споробактерин при местном лечении снижает микробную обсемененность и уменьшает выраженность персистентных свойств стафилококков и стрептококков.

7. Терапия больных маститом животных с использованием споробакте-рина позволяет сократить сроки лечения (на 1 - 2,7 и 1,2 дня) и достигнуть положительного результата в ближайшие (2,8-5,1 и 3 дня) и отдаленные (6-10 месяцев) сроки наблюдения у коров с клинической и субклинической формами мастита соответственно.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ

2. Для терапии маститов у коров целесообразно применение споробактерина: при субклинической форме заболевания в дозе 10 мл (интрацистерналь-но, один раз в сутки, в течении 1-3 дней), при клинической - в дозе 10-15 мл (интрацистернально, один раз в сутки, в течении 3-6 дней).

110

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В патологии коров особое место занимает мастит, наносящий значительный экономический ущерб животноводству. В силу ряда объективных и субъективных причин, в том числе вследствие недостаточной результативности осуществляемых лечебно-профилактических мероприятий, отмечают увеличение числа больных (по данным отдельных хозяйств с 5-12 до 21-45% и более) при соотношении клинически выраженных форм и скрытого воспаления вымени 1:2-4 [Ильинский Е.В. с соавт., 1999]. Все вышеизложенное свидетельствует о необходимости создания комплексной программы по оздоровлению крупного рогатого скота от мастита [Сидоркин В.А., Староверов С.А., 2004]. Основными компонентами данной программы являются своевременная диагностика и терапия воспалений вымени.

Одной из ведущих причин воспаления молочной железы у коров остается бактериальный фактор. Выживание возбудителей в организме животных возможно при соответствующей их адаптации к механизмам антимикробной защиты. В настоящее время широко изучается новая группа биологических свойств микроорганизмов, направленных на деградацию механизмов естественной резистентности хозяина (лизоцим, лактоферрин и другие) - факторов персистенции - и создающих предпосылки для развития инфекционного процесса [ Бухарин О.В., 1999].

В связи с вышеизложенным, целью настоящего исследования явилось изучение биологических свойств возбудителей маститов у коров с их последующей коррекцией для разработки новых способов прогнозирования возникновения, диагностики и лечения заболевания.

Для реализации этой цели был изучен видовой состав и биологические свойства микроорганизмов, выделенных от здоровых животных и больных разными видами мастита коров; определены информативные биологические свойства микроорганизмов для построения диагностической модели прогнозирования развития болезни; на основе комплекса информативных биологических свойств микроорганизмов разработаны микробиологические критерии прогнозирования развития мастита; изучены антагонистическая активность спорообразующих пробиотиков и изменения персистентных свойств микроорганизмов под их влиянием; разработан способ местного лечения разных форм мастита у коров с использованием экспериментально отобранного эффективного спорообразующего пробиотика.

При проведении исследования изучено 340 штаммов микроорганизмов, выделенных из секрета вымени 100 здоровых животных и 120 больных разными формами мастита коров. Выделение и идентификацию микроорганизмов осуществляли общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и антигенных свойств. Изучение биологических свойств микроорганизмов проводили общепринятыми методами. Полученные результаты обработаны с помощью статистических методов.

Основным этиологическим агентом в развитии маститов у коров считают условно-патогенную и патогенную микрофлору, попадающую в молочную железу из внешней среды, а также гематогенным и лимфогенным путями [Валковой И.И., Самоделкин А.Г., Лопарев В.И., 1994; Копытин В.К., Новиков О.Г., 1999; Chanda A. et al., 1989]. В связи с тем, что в литературе недостаточно полно отражены данные по частоте встречаемости отдельных возбудителей при различных состояниях вымени, мы провели анализ своих данных по этому показателю. Было установлено, что наиболее часто при клиническом мастите выделяются стафилококки - S.aureus, S.epidermidis, S.haemolyticus, S.auricularis (в 75,1% случаев), энтеробактерии (E.coli) - в 8,2%, стрептококки - в 16,7% случаев. Основными возбудителями субклинического мастита были стафилококки (S.aureus, S.epidermidis, S.hominis, S.warneri), которые регистрировали у 76,7% и стрептококки, выделенные у 23,3% обследованных животных. В секрете клинически здоровых животных чаще выявляли КОС - S.epidermidis, S.auricularis,

S.hominis, S.haemolyticus (28,8% случаев); Streptococcus (19,2%); а также ассоциации E.coli и S.epidermidis в 5,8% и E.coli - в 3,9% случаев.

Таким образом, при изучении видового состава выделенной микрофлоры установлено, что наиболее частыми микробными агентами, осложняющими течение заболевания, являются стафилококки и стрептококки. Полученные результаты согласуются с результатами А.Н. Головко с соавт. (2005), которые, изучая этиопатогенез клинического мастита в 68,6% выделили бактерии рода Streptococcus, в 29,1% - Staphylococcus, в 18,6% - E.coli; Ю.Г. Попов и М.Н. Шадрина (2001), стрептококки выделяли в 45,5% случаев, стафилококки - в 27,2%, кишечную палочку - в 18,2%, других возбудителей в 9,0% и в 9 % случаев потенциальные возбудители не были выделены; О.П. Татарчук (2004) установил, что основную роль в возникновении мастита играют такие возбудители как S.aureus, Str.uberis, Actinomyces pyogenes, Mycoplasma spp.

Оценка результатов бактериологического исследования секрета вымени коров при различных состояниях четвертей показывает, что с каждым годом изменяется структура возбудителей мастита. Так, если в 70-е годы частота выделения золотистых стафилококков и агалактийного стрептококка была примерно одинаковой - в пределах 26,0 и 23,4%, то уже в 90-е годы отмечается изменение их соотношения - 44,2 и 10,6% соответственно. Все это свидетельствует об усилении тяжести воспалительного процесса, ухудшении терапевтической эффективности лекарственных препаратов. Объяснить это можно выработкой у стафилококков устойчивости к противомаститным препаратам [Демидова Л.Д., 1997].

В настоящее время ведется поиск информативных биологических характеристик микроорганизмов, определяющих их длительное персистирование в организме животного. В этом плане перспективным представляется подход, основанный на регистрации и анализе у изолируемых штаммов комплекса биологических признаков, включающих группу свойств, направленных на инактивацию факторов естественной противоинфекционной защиты макроорганизма и обозначаемых как маркеры бактериальной персистенции.

Анализ полученных данных по распространенности и выраженности факторов персистенции у выделенных микроорганизмов показал зависимость формы течения мастита от спектра исходных биологических характеристик возбудителя. Для микрофлоры, выделенной из молока коров с клинической формой мастита, было характерно наличие гемолитической активности и высокого уровня антилактоферриновой активности. При субклинической форме заболевания выделенная микрофлора в 100% случаев обладала факторами персистенции с высокими значениями антилизоцимной и антиинтерфероновой активностей. Из молока здоровых коров выделялись микроорганизмы, крайне редко обладающие факторами персистенции с низким уровнем экспрессии признаков. Ранее, O.JI. Черновой (2001) было установлено, что микроорганизмы (E.coli, S.epidermidis, S.aureus), способные инактивировать лизоцим, преобладали при скрытой форме мастита, а при клинической форме заболевания выделялись штаммы, обладающие лизоцимной активностью. Установлено также, что микроорганизмы, выделенные при хроническом течении субклинической формы мастита, обладали набором факторов персистенции (AJTA и АИА) с высоким уровнем выраженности признаков [Чернова O.JL, Комарова Н.К., Матюшина С.Б., 1997].

Способность представителей рода Staphylococcus к инактивации факторов естественной резистентности, определяющая длительность их переживания в организме хозяина, способствовала хронизации и затяжному течению процесса, что находит подтверждение в работах других авторов по оценке диагностической значимости персистентных характеристик при хронических воспалительных процессах в условиях инфекционной патологии [Первушина Л.А., 1987; Вялкова А.А.с соавт.,1994; Фадеев С.Б., 1998].

Перспективным направлением является использование факторов персистенции микроорганизмов для создания моделей диагностики штаммов микроорганизмов [Матюшина С.Б., 1996], прогнозирования (ранней диагностики) хронического и затяжного течения гнойно-воспалительных заболеваний человека, в частности, при гнойных воспалениях мягких тканей [Курлаев П.П., 2001], легких и плевры [Абрамзон О.М., 2004 ], синуситах [Райцелис И.В., 2000 ], прогнозирования развития болезни. Иллюстрацией этому являются наши материалы по созданию математической диагностической модели прогнозирования развития мастита, основанной на оценке информативности ряда изученных биологических, в том числе персистентных свойств микроорганизмов, выделенных из молока здоровых и больных животных и позволяющую с достоверностью 95% прогнозировать развитие гнойно-воспалительного процесса.

Полученные данные о возможности использования факторов персистенции микроорганизмов для прогнозирования развития течения заболевания согласуются с результатами работ по использованию персистентного потенциала микроорганизмов для создания модели диагностики скрытой формы мастита крупного рогатого скота [Карташова O.JL, Киргизова С.Б., Исайкина Е.Ю., 2004].

Математическое моделирование для прогнозирования возникновения мастита у коров использовано и в работе В.М. Карташовой, В.В. Касячук, Ю.М. Скороходова (1992), показавших возможность с помощью уравнения множественной линейной регрессии прогнозировать распространение мастита среди коров конкретного стада, опираясь на данные зоотехнического учета (молочная продуктивность, возраст коров, индекс вымени).

Экспериментальные материалы по распространению антилактоферриновой активности у микроорганизмов, выделенных от здоровых и больных животных, полученные в нашей работе, были положены в качестве обоснования в основу разработанного «Способа диагностики субклинической формы мастита микробной этиологии у коров » (Патент РФ на изобретение № 2264171 от 20 ноября 2005 года).

Выявление персиетентных свойств микроорганизмов способствовало направленному поиску путей управления этими информативными признаками (свойствами) патогенов через их регуляцию при помощи пробиотиков. Подавление персистирующих свойств возбудителя затрудняет его паразитирование внутри клеток и тем самым повышает эффективность лекарственных воздействий.

В этом убеждает нас имеющийся фактический материал по отбору эффективных лекарственных средств для борьбы с внутриклеточно паразитирующими возбудителями [Зыкова JI.C., 1986; Первушина JI.A.,1990; Федосеева К.Е., 1985; Михайлов С.П.,1986; Тарасевич А.В., 2005]. В связи с этим, при отборе эффективного терапевтического средства мы исходили из его возможностей повышать уровень защитных сил организма и снижать персистентные характеристики микроорганизмов.

Использование пробиотиков в животноводстве становится сегодня одним из перспективных направлений в решении проблемы производства полноценных экологически чистых продуктов питания [Филоненко В. с соавт., 2004]. Поэтому в качестве предполагаемых лекарственных средств для терапии мастита мы испытывали пробиотики, которые в настоящее время применяются не только для профилактики и лечения дисбиозов и желудочно-кишечных заболеваний перорально, но и внутриматочно при послеродовом эндометрите [Маннапова Р.Т., Шагивалеев А.Д., 2000; Таранова Л.А., 2003; Глушков В.В., Теш А.И., 2004] и интрамаммарно при маститах у коров [Подберезный В.В., Париков В.А., 1994; Ивановский А.А., 1995]. При этом особый интерес представляют пробиотики, содержащие аэробные спорообразующие бактерии, которые по праву считаются одним из наиболее богатых источников получения антибиотических веществ. Применение препаратов-пробиотиков из бацилл обусловлено их преимуществами перед антибиотиками: широкий диапазон лечебно-профилактического действия, безвредность для организма, экологичеекая безопасность, относительная дешевизна [Нахабин И.М., Перелыгин В.В., 1996].

На первом этапе работы нами была изучена антагонистическая активность в отношении ряда микроорганизмов, в том числе основных возбудителей мастита. Предварительно, с помощью проведенных экспериментальных исследований выбрана плотная питательная среда Гаузе № 2, найден временной интервал (72-96 часов), в течение которого образуется большое количество зрелых спор и установлено, что наибольшей антагонистической активностью в отношении грамотрицательных микроорганизмов (кишечная палочка и сальмо-нелллы) обладал бактисубтил, а биоспорин, ветом и споробактерин угнетали рост, в основном, грамположительных бактерий (стафилококки, стрептококки).

На более выраженный антагонизм Bacillus subtillus 534 к группе патогенных кокков по сравнению с патогенными энтеробактериями, указывает в своих исследованиях О.О. Федорова (1990); в механизме избирательного антагонистического действия бактерий из рода Bacillus значительная роль, по ее мнению, отводится способности бацилл снижать антилизоцимную и адгезивную активности патогенных энтеробактерий, определяющих персисти-рующие свойства этих микроорганизмов и их возможность к внутриклеточному паразитированию.

Изучение нами регуляции факторов персистенции грамположительных микроорганизмов под действием спорообразующих пробиотиков выявило их разнонаправленное влияние: установлено снижение, повышение и индифферентное действие на антилизоцимную и антиинтерфероновую активности изученных микроорганизмов; снижение и повышение антилактоферриновой активности. Изучение влияния пробиотиков на выраженность факторов персистенции условно-патогенных микроорганизмов позволило заключить, что все пробиотики в той или иной степени снижали АИА, AJIA и АЛфА стафилококков, стрептококков и кандид. Исследование действия пробиотиков выявило, что максимальное подавление изученных факторов персистенции у золотистых стафилококков и агалактийных стрептококков, являющихся основными возбудителями мастита, оказывал споробактерин.

Полученные экспериментальные данные явились побудительным мотивом к использованию споробактерина для лечения животных с разными формами мастита.

Известно, что наружное применение споробактерина для лечения послеоперационных ран ослабляет интенсивность выраженности раневого процесса, профилактирует возникновение гнойных инфекций, стимулирует регенерацию и эпителизацию, ускоряет, в среднем на 4 дня, их заживление и способствует дополнительному приросту массы тела, кроме того, препарат профилактирует развитие послеродовых эндометритов, сокращает время выделения лохий и ускоряет восстановление полового цикла. Местное использование споробактерина при гнойных баланопоститах приводило к выздоровление всех быков опытной группы через пять суток, а контрольной - лишь у 80% животных на седьмые сутки [Жданов П.И., 1998].

Клинические наблюдения по действию традиционного и разработанного методов лечения были проведены под контролем бактериологического исследования. Анализируя полученные результаты, следует отметить, что под действием пробиотика достоверно снижалась микробная обсемененность молока, быстрее наступало улучшение состояния больных животных и их выздоровление в сравнении с группой животных, у которых лечение проводилось традиционным методом.

Согласно полученным данным, высокая терапевтическая эффективность споробактерина выявлена при назначении пробиотика в дозе 10 мл в сутки, ин-трацистернально при субклиническом и серозном маститах. При катаральном и гнойно-катаральном маститах наиболее выраженным терапевтическим действием споробактерин обладал при введении в количестве 15 мл в сутки, ин-трацистернально при одновременном введении новокаина по методике Логвинова.

Таким образом, проведенные исследования показали, что использование споробактерина является наиболее эффективным методом лечения клинического и субклинического мастита в сравнении с традиционным. Применение споробактерина, кроме того, способствовало подавлению биологических свойств стафилококков и стрептококков in vivo и позволило достигнуть выздоровления в ближайшие сроки лечения у 100% при субклиническом мастите и у 80-100% животных с клинически выраженным маститом.

Выявление совпадения результатов направленности воздействия регулирующего фактора на персистентные свойства стафилококков в условиях in vitro и in vivo имеет большое практическое значение, так как позволяет в лабораторных условиях подобрать оптимальные терапевтические воздействия (независимо от их природы), направленные на снижение персистентного потенциала возбудителя и, следовательно, способствующие выведению возбудителя из организма.

Подтверждением этому является работа, выполненная O.J1. Черновой, Н.К. Комаровой, С.Б. Матюшиной (1997), которые показали совпадение результатов направленности воздействия регулирующего фактора (лазерное излучение) в условиях in vivo и in vitro в отношении персистентных характеристик S.aureus и E.coli. Кроме того, под воздействием лазерного излучения наблюдалось не только снижение микробной обсемененности молока микроорганизмами, но и частоты встречаемости штаммов с высокими показателями персистентных свойств.

Подводя общий итог проделанной работы, следует выделить два основных момента. Во-первых, длительность и характер течения мастита определяются наличием комплекса биологических свойств, ответственных за инактивацию эффекторных механизмов естественного иммунитета. Совокупность информативных биологических признаков послужила основой для создания математической модели прогнозирования развития заболевания. Во-вторых, на основе полученных экспериментальных данных разработаны способ диагностики субклинической формы мастита и новый метод лечения заболевания, основанный на коррекции пробиотиками биологических свойств возбудителей мастита у животных.

107

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2007 года, Бала, Сергей Сергеевич

1. Андреева А.В. Комплексный метод лечения телят, больных диспепсией, с применением бактиспорина / А.В. Андреева, Н.А. Михайлова, И.Ш. Ямалиев // Современные вопросы ветеринарной медицины и биологии. Сб. научн. трудов. Уфа, 2000. - С. 7-8.

2. Антилактоферриновая активность микроорганизмов / О.В. Бухарин, О.Л. Карташова, С.Б. Киргизова и др. // Журн. микробиол., эпидемиол. и имуно-биол.- 2005. -№6.-С.7-10.

3. Антимикробный препарат для лечения субклинического мастита коров / А.Ф. Исмагилова, А.П. Шарипов, А.Е. Белов и др. // Вестник РАСХН. -2004. №2.-С.65-67.

4. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев. Л.: 1962. - 43 с.

5. Бабаянц А.А. Антитоксическое действие лейкоцитарного интерферона в опытах in vitro / Бабаянц А.А., Кагранова Г.Г. // Антибиотики и мед. биотехнология.-1984.-№ 11.-С.834-836.

6. Багманов М.А. Этиологические факторы мастита у коров / М.А. Багма-нов, Ю.Б. Никульшина // Вестник РАСХН. 2003. - №2.-С.75-76.

7. Байгузина С. Н. Разработка нового препарата-пробиотика «Витаспо-рин» и изучение его биологических свойств: Автореф. дис. . канд.мед. наук- Оренбург, 2004.-15с.

8. Балковой И.И. Влияние электромагнитного излучения ультравысокой частоты на микрофлору молока коров / И.И. Балковой, А.Г. Само-делкин, В.И. Лопарев // Ветеринария. 2004.- №11.- С.6-8.

9. Биолюминесцентный метод диагностики мастита у коров / В.Г. Фрунджян, О.С. Дорошина, О.В. Лебедева и др. // Ветеринария. -2005.- №6.-С.40-44.

10. Бойко А.В. Маститы-комплексный подход к лечению и профилактике / А.В. Бойко, М.Н. Волкова // Ветеринария. -1994.- №9.- С.37-38.

11. Болгов А.Е. Отбор скота по технологическим признакам /А.Е. Болгов, Е.П. Карманова, А.О. Дубровский. М.: Россельхозиздат, 1980. - 74-104 с.

12. Брудастов Ю.А. Антикомплементарная активность бактерий / Ю.А. Брудастов // Персистенция бактерий. Сб. научн. трудов под ред. О.В. Бухарина. Куйбышев, 1990.-С. 100-107.

13. Брудастов Ю.А. Антикомплементарная активность бактерий: Авто-реф.дис. канд.мед.наук. -Челябинск, 1992. -20 с.

14. Брудастов Ю.А Биологическое значение антикомплементарной активности бактерий / Ю.А. Брудастов, Д.Г. Дерябин // Журн. микробиол, эпиде-миол. и иммунобиол.-1994.-Приложение. С.27-32.

15. Брылин А.П. Комплексная программа по борьбе с маститами у коров / А.П. Брылин // Практик. -2002. №1. - С.28-31.

16. Бухарин О.В. Механизмы бактериальной персистенции / О.В. Бухарин // Персистенция бактерий. Сб. научн. трудов под ред. О.В. Бухарина-Куйбышев, 1990.-С. 5-14.

17. Бухарин О.В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий / О.В. Бухарин // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол.-1994. Приложение. -С.4-13.

18. Бухарин О.В. Персистенция бактериальных патогенов как результат отношений системы паразит хозяин / О.В.Бухарин // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол. - 1997. - №4. - С. 3-9.

19. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий / О.В. Бухарин.- М.: Медицина, Екатеринбург: УрО РАН.- 1999.-366 с.

20. Бухарин О.В. Антиопсоническое действие внеклеточных продуктов стафилококков / О.В. Бухарин, Ю.А. Брудастов, Д.Г. Дерябин // Бюлл. экспер. биологии и медицины.-1994.-№6.-С.639-641.

21. Бухарин О.В. Изучение антикомплементарной активности стафилококков / О.В. Бухарин, Ю.А. Брудастов, Д.Г. Дерябин // Клин. лаб. диагности-ка.-1992.-№ 11-12.-С.68-71.

22. Бухарин О.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине / О.В. Бухарин, Н.В. Васильев. Томск: ТГУ, 1974.-208 с.

23. Бухарин О.В. Роль тромбоцитарного катионного белка (ТКБ) бета-лизина в противоинфекционной защите / О.В. Бухарин, К.Г. Сулейманов // Микробиология. - 1997.- № 1.- С.З .

24. Бухарин О.В. Свойства и функции тромбоцитарного катионного белка / О.В. Бухарин, К.Г. Сулейманов // Успехи современной биологии.-1998,-Т.118.-Вып. 2.-С. 194-203.

25. Бухарин О.В. Антилизоцимный тест как маркер персистенции микроорганизмов / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов // Теоретическая и прикладная иммунология: Тез. докл.1 Всесоюз.конф.-М., 1982.-С.87-88.

26. Валышев А.В. Факторы персистенции энтеробактерий и влияние на них пробиотиков при дисбиозе кишечника: Автореф. дисс. . канд.мед.наук. -Оренбург, 1997.-21 с.

27. Валышева И.В. Антилактоферриновая активность микроорганизмов: Автореф. дисс. канд. биол.наук. Оренбург, 2005.-15 с.

28. Васильев А.Н. Сравнительная характеристика эубиотиков на основе аэробных спорообразующих бактерий: Автореф. . дисс. канд. биол. наук-М., 2000.-23 с.

29. Васильев В.В. Профилактика мастита у коров / В.В. Васильев // Ветеринария. -2004. №12 .- С.37-38.

30. Васильев В.Г. Шприц для лечения коров с маститом / В.Г. Васильев, Т.Н. Васильева, В.В. Васильев // Ветеринария. -2005. -№4.-С.34-36.

31. Васильева Т.Н. Устройство для доения коров с маститом / Т.Н. Васильева, В.Г. Васильев, В.В. Васильев // Ветеринария. -2005. -№8.-С.39.

32. Влияние бифидобактерий на антилизоцимную активность энтеробактерий / А.В. Валышев, Н.Н. Елагина, В.А. Кириллов и др. // Журн. мик-робиол., эпидемиол., иммунобиол.-2000.-№ 4.-С.77-79.

33. Гарбуз В.И. Терапия маститов патогенетическим методом / В.И. Гар-буз // Ветеринарный консультант. 2002. - №16-17. - С.26-27.

34. Гейдрих Г. Маститы сельскохозяйственных животных и борьба с ними / Г. Гейдрих, В. Рейн.- М.: Колос, 1968. -375 с.

35. Герасимов В.Е. Роль антилизоцимной активности во внутриклеточном паразитировании шигелл: Автореф.дис. . канд.мед.наук.-Челябинск, 1989.-22с.

36. Глушков В.В. Метромуцин и лактобрил при послеродовом эндомет-метрите у коров/В.В. Глушков// Ветеринария.-2004.-№4.-С.З 8-40.

37. Гублер Е.В. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях / Е.В. Гублер, А.А. Генкин. JL: "Медицина", 1973.-С.18-19, 70-86.

38. Деблик А.Г. Морфология печени цыплят при применении лакто и бифидобактерийных пробиотиков / А.Г. Деблик, К.Е. Деблик, Д.А. Ижбула-това // Молодые ученые в решении актуальных проблем современной науки. Сб. научн. трудов. - Чебоксары, 2006.- С. 84-85.

39. Денисенко В.Н. Активность лизоцима в биологических жидкостях крупного рогатого скота в норме и при патологии / В.Н. Денисенко // Сельскохозяйственная биология.-1995.-№ 6.-С.129-135.

40. Дерябин Д.Г. Роль персистентных характеристик возбудителя в определении зятяжного течения гнойно-воспалительного процесса / Д.Г. Дерябин, П.П. Курлаев, Ю.А. Брудастов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммуно-биол. 1996. - № 3. - С.74-77.

41. Дроздов В.В., Руденко В.Н., Макарова С.С. Аннотация к алгоритму

42. Дискриминантный анализ"/ В.В. Дроздов, В.Н. Руденко, С.С. Макарова // Информация программ для ЭВМ, разработанных в странах членах СЭВ с целью решения геологических задач: Сб. науч.трудов. - ГДР, Берлин, 1975. -С.143-145.

43. Дроздов В.В. Аннотация алгоритма и программы "Распределение" /

44. B.В. Дроздов, В.Н. Руденко, В.М. Пригодич // Информация программ для ЭВМ, разработанных в странах членах СЭВ с целью решения геологических задач: Сб. науч.трудов. - ГДР, Берлин, 1975. - С. 137-138.

45. Елагина Н.Н. Факторы персистенции неспорообразующей анаэробной микрофлоры кишечника человека: Автореф. . канд.мед.наук. Оренбург, 2000.-18с.

46. Загаевский И.С. Экспресс-диагностика скрытого мастита у коров / И.С. Загаевский, О.Н. Якубчак // Ветеринария. -1992. № 2.- С.43-44.

47. Звенигородский В.И. Влияние аминокислот на синтез пептидного антибиотика бацитрацина и получение аналогорезистентных мутантов / В.И. Звенигородский, JI.K. Емельянова, Т.А. Воейкова // Биотехнология. 2000. -№2.-С. 7-13.

48. Зыкова JI.C. Этиологическая характеристика пиелонефрита и ее значение для экспериментально-клинического обоснования антибактериальной терапии: Автореф. дис. канд. мед. наук -Челябинск, 1986.-20 с.

49. Ивановский А.А. Новый пробиотик Бактоцеллолактин при различных патологиях у животных / А.А. Ивановский // Ветеринария. -1995. № 11.1. C.34-35.

50. Ивашура А.И. Гигиена производства молока / А.И. Ивашура. -М.: Россельхозиздат, 1984.-240 с.

51. Ивашура А.И. Система мероприятий по борьбе с маститами коров / А.И. Ивашура. -М: Росагропромиздат, 1991.- С. 140-166.

52. ИсайкинаЕ.Ю. Морфофункциональные изменения в организме коров под действием лазерного излучения при субклиническом мастите: Автореф. дис. канд. биол. наук. Оренбург, 2004.- 20 с.

53. Исследование влияния медикаментов на биологические свойства Clostridium difficile /А.В. Валышев, В.А. Кириллов, А.С. Панков и др.// Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-2003.-№ 4.-С.64-67.

54. Калмыкова А.И. Пробиотики: терапия и профилактика заболеваний. Укрепление здоровья / А.И Калмыкова. Новосибирск: НПФ «Био-Веста»; СибНИПТИП СО РАСХН, 2001.-208с.

55. Карташова В.М. Маститы коров /В.М. Карташова, А.И. Ивашура. М.: Агропромиздат, 1988.-256 с.

56. Карташова В.М. Метод контроля молочных стад на заболеваемость маститом / В.М. Карташова, О.Р. Иванова // Ветеринария. -1993- № 8.- С.39-41.

57. Карташова В.М. Прогнозирование возникновения мастита у коров с помощью математического моделирования / В.М. Карташова, В.В. Касенчук, Ю.М. Скороходов // Ветеринария. -1992.-№ 3.- С.43-44.

58. Карташова O.JI. Диагностика скрытых форм мастита у коров / O.JI. Карташова, С.Б. Киргизова, Е.Ю. Исайкина // Ветеринария.- 2004.-№10.-С.33-35.

59. Кириллов Д.А. Лекарственная регуляция персистентных свойств микроорганизмов: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Оренбург, 2004.-15с.

60. Козлов Г.Г. Определение факторов местной защиты матки и влияние на них препаратов, применяемых внутриматочно при лечении эндометритов у коров / Г.Г. Козлов, Б.К. Акназаров. М.: 1989.-25с.

61. Копытин В.К. Мастит у коров / В.К. Копытин, О.Г. Новиков // Ветеринария. -1999.- № 2.- С.34-35.

62. Кузин А.И. Пробиотик спорметрин для профилактики и лечения эндометрита у коров / А.И. Кузин, Г.В. Борисова, Д.В. Губанов // Ветеринария сельскохозяйственных животных.-2005.-№8.-С.43.

63. Лактобифадол для стимуляции продуктивности дойных коров / Н.В. Данилевская, В.В. Субботин, О.А. Вашурин, Ю.В. Пятышева // Ветеринария сельскохозяйственных животных.-2005.-№10.-С.67.

64. Лейквешвили Н.В. Изменение некоторых иммунобиологических показателей в зависимости от естественной резистентности организма: Автореф. дис.канд. вет. наук. Ереван, 1973.-21с.

65. Лясковский T.M. Оценка пробиотиков, согласно рекомендациям международных организаций (FAO/WHO) / Т.М. Лясковский, B.C. Подгорский // Mikrobiologichny Zhurnal. -2005. -№6.-Т.67. -С.104-112.

66. Малик Н.И. Ветеринарные пробиотические препарты / Н.И. Малик, А.Н. Панин // Ветеринария сельскохозяйственных животных.-2005.-№2.-С.43.

67. Манылов Г.А. Профилактика и лечение маститов лекарственными средствами, приготовленными на ферме / Г.А. Манылов, А.Е. Нефедьев, О.Н. Преображенский // Ветеринарный консультант. 2002. - №20. - С. 12.

68. Мастоцин новый противомаститный препарат на гелевой основе / С.А. Староверов, А.С. Воробьев, А.В. Каннский и др. // Ветеринария. -2005. -№7.-С.34.

69. Матюшина С.Б. Роль факторов персистенции стафилококков при бактерионосительстве: Автореф. дисс. . канд. биол. наук.- Оренбург, 1996.-20 с.

70. Маслов М. Лечение мастита у коров аппаратом ЛПДА- 2УВЧ / М. Маслов // Главный зоотехник.-2004. №7. - С.49.

71. Мастит у коров: профилактика и терапия / В.А. Париков, Т.Н. Климов,

72. А.И. Романенко и др. // Ветеринария.-2000.-№11.-С.34-37.

73. Маянский А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский.- Новосибирск: Наука, Сиб.отд-ние, 1989.-344с.

74. Метаболические изменения у коров при заболевании маститом / Г. Родионов, А. Солдатов, В. Остроухова и др. // Ветеринария сельскохозяйственных животных.-2005.-№8.-С.45.

75. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, А.П. Малышкин и др. // Журн. микробиол.-1984.-№2.-С.27-28.

76. Михайлов С.П. Патогенетическое значение антилизоцимной активности возбудителя при сальмонеллезной инфекции: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Челябинск, 1986.-22с.

77. Могиленко А.Ф. Уровень лизоцима у телят при острой бронхопневмонии и в норме / А.Ф. Могиленко // Ветеринария.-1972.-№6.-С.88-89.

78. Модифицирующее действие Saccharomyces boulardii на биологические свойства энтеробактерий / Д.А. Кириллов, Н.Б. Перунова, О.Е. Челпаченко и др. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-2002.-№ 4.-С.57-59.

79. Мутовин В.И. Борьба с маститами коров / В.И. Мутовин.-М.: Колос, 1974.-254с.

80. Никульшина Ю.Б. Новый тест для диагностики субклинического мастита / Ю.Б. Никульшина, МЛ. Багманов, Е.В. Горбунова // Ветеринария сельскохозяйственных животных.-2005.-№3.-С.54.

81. Новоскольцева Т.М. Антибактериальная активность ветосубалина /

82. Т.М. Новоскольцева, И.П. Иренков, М.Н. Борисова // Ветеринария.- 1996.-№1.-С.29-31.

83. Новый метод определения антилактоферриновой активности микроорганизмов / И.В. Валышева, А.В. Валышев, О.В. Бухарин и др. // Журн. микробиол., эпидемиол. и имунобиол.- 2003. № 4. - С. 64-67.

84. Новый противомаститный препарат уберсан / Е.В. Ильинский, А.Н. Трошин, М.В. Назаров, Н.А. Трошин // Ветеринария. -1999.- № 3.- С.34-35.

85. Обгольц А.А. Механизмы персистирования бактерий / А.А. Обгольц // Журн.микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1992. - № 4. - С. 70-72.

86. Оксамитный Н.К. Профилактика и лечение мастита коров / Н.К. Окса-митный. Киев: Урожай, 1988. - С. 85-87.

87. Первушина JI.A. Антилизоцимный признак микроорганизмов в бактериологической диагностике и лечении воспалительных заболеваний внутренних женских половых органов: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Челябинск, 1990.-20 с.

88. Первушина J1.A. Лечение эндометрита и сальпингоофорита под контролем антилизоцимной активности возбудителя / Л.А. Первушина, О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов // Акушерство и гинекология.-1991.-№ 6.-С.48-50.

89. Петровская В.Г. Ранние этапы инфекционного процесса: достижения и проблемы / В.Г. Петровская, Б.И. Маракуша // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-1987.-№ 10.-С.107-116.

90. Печеркина С.А. О влиянии интерферона на стафилококки / С.А. Пе-черкина, Л.И. Малеева, И.В. Щицина // Журн.микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1982.-№ 2.-С.54-56.

91. Печеркина С.А. Методика титрования интерферона по тест-бактериальной культуре / С.А. Печеркина, Г.В. Яхлакова, Ф.М. Патрушева // Лаб. де-ло.-1979.- № 5.-С.272-274.

92. Пигаревский В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства /В.Е. Пигарев-ский.-М.: Медицина, 1978.-144с.

93. Плахотин М.В. Показатели активности лизоцима слезной жидкости у коров и телят в норме и при заболевании глаз / М.В. Плахотин, К.А. Фомин, Е.П. Копенкин // Сб.науч.тр. Московской акад.- М., 1973.-Вып.68.-С.23-24.

94. Подберезный В.В. Культивирование производственных штаммов Вас. subtillis в подсырной сыворотке / В.В. Подберезный, Н.И. Полянцев, Л.В. Ропаева // Ветеринария.- 1996,- №1.-С.21-24.

95. Подберезный В.В. К изучению механизма лечебного действия эндо-бактерина при мастите / В.В. Подберезный, Л.В. Ропаева // Матер. Всерос. науч. и учеб.-метод. конф. по акушерству, гинекол. и биотехн. размножения животных. Воронеж, 1994. - С. 231-233.

96. Подгородский B.C. Лектины бактерий / B.C. Подгородский, Э.А. Коваленко, И.А. Симоненко. Киев: Наук, думка, 1992.-203с.

97. Попов Ю.Г. Перкутан в лечении маститов у коров / Ю.Г. Попов, М.Н. Шадрина // Практик. 2001.- №3. - С. 18-20.

98. Применение иммобилизованных бактериальных протеаз для пролонгированной энзимотерапии гнойных хирургических заболеваний / А.С. Коган, Р.И. Салганик, Ю.М. Ефимов и др. // Вестник хирургии.-1982.- №4. -С. 60-63.

99. Пробиотик «Субтилис» полезен для цыплят-бройлеров / В. Филонен-ко, И. Салеева, Г. Кулаков, В. Михайлов // Птицеводство.-2004. №2.-С.21-23.

100. Пробиотики на основе живых культур микроорганизмов / В.В.

101. Смирнов, Н.К. Коваленко, B.C. Подгорский, И.Б. Сорокулова // Мжробюл. журн. -2002.-64, № 4.-С.62-80.

102. Рищук С.В. Факторы персистенции сальмонелл при их внутриклеточном паразитировании: Автореф. дис. канд.мед.наук. Челябинск, 1993.- 20 с.

103. Родионов Д.А. Статистические методы разграничения геологических объектов по комплексу признаков / Д.А. Родионов -М.: "Недра", 1968158 с.

104. Романова Е.Ю. Исследование устойчивости к маститу у коров / Е.Ю. Романова // Главный зоотехник. 2004. - №5. - С.35-37.

105. Рубцов В.И. Лечение коров при серозном и катаральном мастите / В.И. Рубцов // Ветеринария.- 2001. №4. - С.36-38.

106. Сафронов, А.А. Антилизоцимная активность и биологические свойства стафилококков при гнойно-септических заболеваниях / А.А. Сафронов, В.И. Желтова // Персистенция бактерий. Сб. научн. под ред. О.В. Бухарина. Куйбышев, 1987.-С.19-22.

107. Сафронов А.А. Значение антилизоцимной активности микроорганизмов в диагностике осложнений открытых переломов / А.А. Сафронов,

108. В.И. Желтова // Персистенция бактерий. Сб. научн. под ред. О.В. Бухарина.-Куйбыщев, 1987.-С.58-61.

109. Свириденко Г.М. Маститы крупного рогатого скота / Г.М. Свириден-ко, Е.Г. Семова // Молочная промышленность. 2003. - №10. - С. 18-20.

110. Связь длительности течения постинъекционных абсцессов с биологическими особенностями, вызывающих их микроорганиззмов / П.П. Курлаев, Д.Г. Дерябин, Ю.А. Брудастов, О.В. Бухарин // Вестник хирургии.-1996.-№6. С.54-56.

111. Септогель для лечения коров при мастите / В.Г. Гавриш, А.В. Егу-нова, С.В. Семенов, С.В. Новикова // Ветеринария. -2000. №6 .- С.33-36.

112. Серебряков Е.В. Борьба с маститами при машинном доении коров / Е.В. Серебряков, И.Г. Вилиток. Киев: Изд-во «Урожай», 1969. - С.87 - 89.

113. Серопян Г.Б. Диагностика и лечение скрытого мастита у коров / Г.Б. Серопян, В.А. Хачатрян // Ветеринария. -2005. -№4.-С.36.

114. Сидоркин В.А. Эффективность мастомицина при мастите у коров /

115. B.А. Сидоркин, С.А. Староверов // Ветеринария.-2004.-№ 8.-С.11-13.

116. Слободяник В.И. Мастит и акушерская патология у коров / В.И. Слободяник, А.Г. Нежданов, В.Г. Зинькевич // Ветеринария. -1999.№ 9.1. C.36-39.

117. Смирнова A.M. Микробиология и профилактика стафилококковых инфекций / A.M. Смирнова, А.А. Трояшкин, Е.М. Падерина.- JL: Медицина, 1977.-216с.

118. Соколова Н.А. Пробиотик ромакол и его использование в ветеринарии / Н.А. Соколова, Н.А. Хмель // Ветеринария сельскохозяйственных жи-вотных.-2005.-№2.-С.24.

119. Стрептоэколат для лечения коров при мастите в период лактации / В.М. Карташова, Ю.Н. Проскурин, В.В. Касянчук, Г.Н. Кузьмин // Ветери-нария.-2002.-№12.-С.40-41.

120. Соколов В.Ю. Антигистоновая активность бактерий / В.Ю. Соколов // Бюлл.экспер. биологии и медицины.-1993.-№2.-С. 180-183.

121. Соколов В.Ю. Антиинтерфероновая активность микроорганизмов / В.Ю. Соколов // Персистенция бактерий. Сб. научн. под ред. О.В. Бухарина.-Куйбышев, 1990.-С.83-93.

122. Сорокулова И.Б. Сравнительное изучение биологических свойств биоспорина и других коммерческих препаратов на основе бацилл / И. Б. Сорокулова // Мжробюл. журн.- 1997. Т. 59. - №6. - С.43-48.

123. Способность микроорганизмов к инактивации бактерицидного действия тромбоцитарного катионного белка ((3-лизина) / О.В Бухарин, К.Г. Сулейманов, O.JI. Чернова и др. // Бюллетень экспер. биологии и медицины.-1998.-№ 7.- С.66-67.

124. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования./Под ред. М.О.Биргера. -М., 1982.-С.251-254.

125. Стафилококк (биологически активные субстанции, иммунный ответ на антигены) / Под ред. В.В.Смирнова и А.Е. Вершигоры.- Киев: Наук.думка, 1988. 248 с.

126. Сулейманов К.Г. Роль бактерицидного тромбоцитарного катионного белка (ТКБ) в инфекционной патологии и гомеостазе.: Автореф.дис. . докт. мед. наук.- Челябинск, 1998. 20 с.

127. Сурикова Е.В. Факторы персистенции клебсиелл.:Автореф. дис. . канд. мед.наук,- Челябинск, 1992.- 20 с.

128. Тарасевич А.В. Регуляция антилизоцимной активности энтеробактерий эндогенными факторами желудочно-кишечного тракта и разработка рациональных подходов к диагностике и коррекции дисбиоза кишечника: Автореф. дисс. канд.мед.наук. Оренбург, 2005.-18 с.

129. Татарчук О.П. Новые подходы к лечению коров при мастите / О.П. Татарчук // Ветеринария. 2004.- №11 .-С.8-9.

130. Усвяцов Б.Я. Лизоцимная и антилизоцимная активность патогенных кокков.: Дис. докт.мед.наук-Оренбург, 1986.-328 с.

131. Усвяцов Б.Я. Роль лизоцимной и антилизоцимной активности в экологии и патогенности гонококков / Б.Я. Усвяцов, Л.Г. Воронина, Н.Г. Лен-дерман // Персистенция бактерий. Сб. науч.тр. под ред. О.В.Бухарина.-Куйбышев, 1990.- С.14-18.

132. Фадеев С.Б. Видовой состав и персистентные характеристики возбудителей хирургической инфекции мягких тканей: Автореф. дисс. . канд.мед. наук. Оренбург, 1998. - 20 с.

133. Федорова О.О. Антагонистическая активность спорообразующих аэробных микроорганизмов в отношении патогенных энтеробактерий: Авто-реф. канд.мед.наук.- Оренбург, 1990.-22с.

134. Федосеева К.Е. Антилизоцимная активность шигелл и ее значение в патогенезе и лечении острой дизентерии.: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. -Челябинск, 1985.-21 с.

135. Фотометрическое определение антилизоцимной активности микроорганизмов / О.В. Бухарин, А.В. Валышев, Н.Н. Елагина и др. // Журн. микро-биол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1997.-№ 4.-С.117-120.

136. Фугасова Н.П. Диагностика и лечение высокопродуктивных коров, больных скрытым эндометритом: Автореф. дис.канд.вет.наук. -Москва, 1990.-21с.

137. Челпаченко О.Е. Патогенетическое значение микробиоценоза кишечника у детей с синдромом дисплазии соединительной ткани и возможные пути коррекции: Автореф. дисс. .докт.мед.наук.- Оренбург, 2003. -20 с.

138. Чернова, О Л. Роль факторов персистенции микроорганизмов при хроническом течении мастита / O.JI. Чернова, Н.К. Комарова, С.Б. Матюшина // Тез.докладов IX международного симпозиума по машинному доению с/х жив-ых.-Оренбург, 1997.- С.219-220.

139. Чернова, O.JI. Воздействие лазерного излучения на микрофлору вымени / O.JI. Чернова, Н.К. Комарова // Ветеринария.-1998.-№10.-С.35-37.

140. Чернова, O.JI. Особенности микрофлоры и содержание лизоцима в молоке при мастите коров / O.JI. Чернова // Ветеринария.-2001.-№ 4.- С.32-34.

141. Шагивалеев А.Д. Фагоцитоз лошадей под влиянием прополиса, цеолитов, биотрина и бифидобактерина / А.Д. Шагивалеев, Р.Т. Маннапова // Современные вопросы ветеринарной медицины и биологии. Сб. научн. трудов. Уфа, 2000. - С. 327-328.

142. Шакиров, О.Ф. Контроль за состоянием вымени коров в период лактации / О.Ф. Шакиров // Практик. 2005. - №1-2. -С.62-65.

143. Шендеров, Б.А. Пробиотики и функциональное питание, их зачение для сохранения и восстановления здоровья человека /Б.А. Шендеров. М.: 2002.-294 с.

144. Этиология и патогенез мастита у коров / А.Н. Головко, В.Я. Вечто-мов, С.А. Гужвинская и др. // Ветеринария.- 2005.-№5. С.56-58.

145. Akihiro Ohno. Production of a lipopeptide antibiotic, surfactin, by recombinant Bacillus subtilis in solid state fermentation/ Ohno Akihiro, Ano Tarashi, Shoda Makota // Biotechnol. and Biogen.-1995.-47,N2.-P.209-214.

146. Bacillus sp. Produtores de proteases: isolamento, caracterizacao e melhora mento de Bacillus cereus (CI24) / Mendonca Analucia Longman, Mariano Rosa de Lima Ramos, de Araujo Janete Magali et al. // Agr. biol. e tecnol.-1996.-39,N2.-P.359-372.

147. Bacillus subtilis selectively stimulates the sinthesis of membrane bound and secreted IgA / G. Fiorini, C. Cimminello, R. Chianese et al. // Chimiotherapia. -1985.- №4.-P.310-315.

148. Baselga R. Staphylococcus aureus capsule and slime as virulence factors in ruminant mastitis / R. Baselga, I. Albizu, B. Amorena // Vet.Microbiol.-1994.-V.39.-N3-4.-P. 195-204.

149. Baum B. Saccharomyces boulardii and bacillus cerevus var. Toyoi influence the morphology and the mucins of the intestine of pigs / B. Baum, E.M. Lie-bler-Tenorio // Z. Gastroenterol.-2002.-№ 40 (5).-P.277-284.

150. Beliavskaia V.A. Adjuvant properties of subalin, a recombinant interferon-producing probiotic / V.A. Beliavskaia, G.G. Ignat'ev // Zh. microbial, epidemiol immunobiol.-2001 .-№ 6.-P.77-82.

151. Besson F. Characterization of the surfactin syntetase isolated from Bacillus subtilis strain producing iturin / F. Besson // Biotechnol. Lett.-1994.-16, №12.-P. 1269-1274.

152. Brawn E.J. Interaction of gram-positive microorganisms with complement / E.J. Brown // Curr.Top.Microbiol.Immunol.-1985.-V. 121 .-P. 159-187.

153. Britigan B.E. The role of lactoferrin as an anti-inflammatory molecule / B.E. Britigan, J. S. Serody, M.S. Cohen // Adv. Exp.Med. Biol.-1994. № 357.-P. 143-156.

154. Caldini, G. Inhibition of 4-nitroquinolin-l-oxide genetoxicity by Bacillus strains / Caldini G., Troffa F. // Res Microbiol.-2002.-№153 (3). -P. 165-71.

155. Cloning, sequencing and producting of the antibiotic mersacidin / G. Bier-baum, H. Brotz, K.P. Koller, H.G. Sahl // FEMS Microbiol. Lett.-1995.-127№l/2.-P.121-126.

156. Czirok, E. In vitro and in vivo (LD50) effects of human lactoferrin on bacteria / E. Czirok, H. Milch, K. Nemeth et al. // Acta. Microbiol. Hung. -1990, №37 (l).-P. 55-71.

157. Effect of peptidolipids produced by Bacillus on the enzymatic lysis of gram-negative bacterial cells / Y. Tarahara, Y. Hirose, N. Yasuda et al. // Agr. Boil. Chem.-l976.-40,N9.-P. 1901 -1903.

158. Effects of Staphylococcus aureus toxins onthe growth of bovine mammary epithelial cells (MAC-T) in culture / B. Zavizion, A.J. Bramley, I. Politis et al. // J.Dairy. Sci.-1995.-V.78.-N 2.-P.277-284.

159. Endo T. Effects of a probiotic on the lipid metabolism of cocks on a cholesterol-enriched diet / T. Endo, M. Nakano // Biosci Biotechnol Biochem.-1999.-№63 (9).-P. 15, 69-75.

160. Fais S. Lymphocyte activation by Bacillus subtilis spores / S. Fais // Boll. 1st. Sieroter.Milan.-l 987.-66,N5.-P.391-394.

161. Feignier C. Studies on Iipopeptide biosynthesis by Bacillus subtilis: Isolation and characterization of iturin", surfacin+ mutants / C. Feignier, P.Besson, G. Michel//FEMS Microbiol. Lett.-1995.-127,Nl/2.-P.ll-15.

162. Foaming properties of surfactin, a Iipopeptide biosurfactant from Bacillus subtilis / H. Razafindralambo, M. Paquot, A. Baniel et al. // JAOCS.-1996.-№73.-P.149-151.

163. Fursicova T.M. The effect of the cultivation conditions on the properties of bacilli comprising the basis of probiotics / T.M. Fursicova, M.G. Sergeichuk // Microbios Z.-1999.-№61 (5). -P.19-27.

164. Gupta M. Lytic effect of Bacillus subtilis elastase on gram-positive and negative bacteria / M. Gupta, M. Kaur, K.C. Gupta // Indian J. Exp. Biol.-1992,-30,N5.-P.380-383.

165. Hasseff D.J. Bacterial adaptation to oxidative stress: implications for pathogenesis and interaction with phagocytic cells / D.J. Hasseff, M.S. Cohen // Faseb J.-1989.-V.3.-N 14.- P.2514-2582.

166. Hosoi Т. Improved grow and viability of lactobacilli in the presence of Bacillus subtilis (natto), catalase, or subtilisin / T. Hosoi, A. Ametani // Can. J. Microbiol.-2000. -№46 (10).-P.892-7.

167. Jadamus A Growth behaviour of a spore forming probiotic strain in the gastrointestinal tract of broiler chicken and piglets / A. Jadamus, W. Vahjen // Arch Tierernahr.-2001 .-№54 (1). -P. 1-17.

168. Johnson G.M. Interference with granulocyte function by Staphylococcus epidermidis slime / G.M. Johnson, D.A. Lee, W.E. Regelmann // Infect. Immun.-1986.-V.54.-N 1 .-P. 13-20.

169. Johnson G.M. Accumulative growth of Staphylococcus epidermidis (Se) in resistance of neutrophil (PMN) opsonophagocytic killing, mechanisms and pathways / G.M. Johnson, F. Schumacher-Perdreau, G. Peters // Clin. Infec. Diseases.-1994.-19, N3.-C.567.

170. Jolles P. What's new lysozyme research / P. Jolles, J. Jolles // Mol.Cell.Biol.-1984.-V.65. -P. 165-189.

171. Immunomodulation by Bacillus subtilis spores / G. Benedettini, G. Ke-libero, R. Pierotti et al. // Boll. Ist.Sieroter.Milan.-1983.-62, №6.-P.509-516.

172. Influence of Bacillus subtilis sp. lectin on functionak activity of phagocytes / Ya. G. Kishko, M.I. Vasilenko, E.A. Kovalenko, V.S. Podgorski // Microbiol. Zhurn.-l 998.-60,N1.-P.20-26.

173. Lactoferrin: a multifunctional glycoprotein involved in the modulation of the inflammatory process / S. Baveye, E. Elass, J. Mazurier et al // Clin.Chem. Lab. Med. -1999. -№37 (3). P. 281-286.

174. Lawrence C. Production of interleukin-12 by murine macrophages in response to bacterial peptidoglycan / C. Lawrence, C. Nauciel // Infect. And Immun.-1998.-66,N10.-P.4947-4949.

175. Lectin of Bacillus subtilis sp. as overinducer of y-interferonogenesis / Ya. G. Kishko, M.I. Vasilenko, E.A. Kovalenko, V.S. Podgorski // Microbiol.

176. Zhurn. -1997.-59, N6.-P.36-42.

177. L'effetto immunostimolatore dell spore di Bacillus subtilis: aspetti speri-mentali / F. Spreafico, N. Polentarutti, A. Vecchi et al. // Chemioter. Antimicrob.-1980.-№4.-P.259-261.

178. Lipopeptides with improved propeties: structure by NMR, purification by HPLC and structure-activity relationships of new isoleucyl-rich surfactins / I. Grandemard, F. Peypoux , J. Wallach et al. // J. Peptide Science.-1997.-№3.-P. 145154.

179. Mamo W. Staphylococcus aureus to bovine mammary epithelial cells induced by growth in milk whey / W. Mamo, G. Froman // Microbiol. Immunol.-1994.-V.38.-N 4.-P.305-308.

180. Mode of action of the antibiotic mersacidin: inhibition of peptidoglycan biosyntesis via novel mechanism? / H. Brotz, G. Bierbaum, A. Marcus et al. // An-timicrob. Agents and Chemother.-1995.-39№3.-P.714-719.

181. Mutai M. Factors influencing Bacterial Colonization / M. Mutai, Y. Kawai // Recent Advaces in Germfree Research , Tokai Univer. Press, 1981.

182. Nozari-Renard, J. Induction d'interferon par Bacillus subtilis / J. Nozari-Renard // Ann. Microbiol.-1978.-129,N4.-P.525-543.

183. Patent 5290695 USA, MKI5 CI2N 9/99; CI2N 1/00. Heparinase, process for producing the same and bacteria producing the same / Morikawa Kiyooshi, Miyanamo Hirefumi, Maruyama Hirechi et al. Publ. 01.03.94.

184. Patent 5296223 USA, МКИ5 A61K 37/547. Subtilisin as'an oral thrombolytic agent / Nakanashi Koichiro, Hiratani Hajime, Kato Kazuo.-Publ. 22.03.94.

185. Patent 5374545 USA, МКИ5 C12N 9/00, N12N 1/20. Cell wall lytic enzymes from Bacillus pabuli / Chi-Li Liu, Janet M. Kverholt. -Publ. 20.12.94.

186. Patent 4296101 USA, CI3 A61K 35/00. Antibiotic Kristenin / F.L. Weisenborn, W.E. Brown, E. Meyers.- Publ. 20.10.81.

187. Pelug W. Vitamin В Biosynthese in Bacillus subtikis / W. Pelug, F.1.ngens I I Hoppe-Seyler's Z.Phisiol.Chem.-l 978.-359, N5.-P.559-570.

188. Plasma interferon-like activity in rabbits after oral administration of Bacillus subtilis spores / M. Muscettola, G. Grasso, P. Migliaccio, V.C. Gallo // J. Chemother.-1991.-№3,Suppl.3.-P. 130-132.

189. Prokesova L. Effect of Bacillus firmus and other sporulating aerobic microorganisms on in vitro stimultion of human lymphocetis / L. Prokesova, M. No-varova, M. Mara // Folia Microbiol.-1994.-№39.-P.501-504.

190. Prokesova L. Immunostimulatory effect of Baccilus firmus on mouse lymphocytes / L. Prokesova, P. Mickova // Folia Microbiol (Praha).-2002.-№47 (2).-P.193-197.

191. Purification and characterization of a fibrinolytic enzyme produced from Bacillus sp. strain CK 11-4 screened from Chungkook-Jang / Kim Wonkeuk, Choi Keehyun, Kim Yongtaek et al. // Appl. And Environ. Microbiol.-1996.-62, N7.-P.2482-2488.

192. Qiu J. Human milk lactoferrin inactivates two putative colonization factors expressed by Haemophilus influenzae / J. Qiu, D.R. Hendrixson, E.N. Baker et al. // Microbiology. -1998. -№95 (10). -P. 12641-12646.

193. Rupp M.E. Hemagglutination by Staphylococcus aureus strains responsible for human bacteremia or bovine mastitis / M.E. Rupp, J. Han, S. Gatermann // Med.Microbiol.Immunol.Berl.-1995.-V.184.-N 1.-P.33-36.

194. Soos J.M. Type I interferon inhibition of superantigen stimulation: implications for treatment of superantigen-associated disease / J.M. Soos, H.M. Jonson //J.Interferon.Cytokine.Res.-1995.-V.15.-Nl.-P.39-45.

195. Spinosa M.R. On the fat in ingested Bacillus spores / M.R. Spinosa, T. Braccini // Res Microbiol.-2000.-№151 (5). -P.361-368.

196. Stimolazione seletiva dell'espressione di antigeni HLA-DR su limfociti T in vivo in seguito a somministrazione di "vaccini" orali / R. Gonzales, F. Pirali, G. Ravizzola et al. // Boll. Microbiol. Indag. Lab.-1989.-№9. P.5-9.

197. Structure of iturin A, a peptidolipid antibiotic from Bacillus Subtilis / F. Peypoux, M. Guinand, G. Michel et al. // Biochemistry.-1978. N6. - P.3992-3997.

198. Structures of bacillomycinD and bacillomycinL peptidolipid antibiotics from Bacillus subtilis / F. Peypoux, M.T. Pommier, B.C. Das et al.// J. Antibiotics.-1984.-N12.- P.1600-1603.

199. Studies on incidence of bovine mastitis, its diagnosis, etiology and in vitro sensitivity of the isolated pathogens / A. Chanda, C.R. Roy, P.K. Banerjee, C. Guha // Indian. Veter. J.-1989.-Vol.66.-N4.-P.277-282.

200. The effect of antibiotic perparations and their combinations withprobio-tics on the intestinal microflora of mice /Taras Shechenko yiv National University, Biological Faculty, Ukraine // Microbiol Z.-2000.-№62 (3). P.26-35.

201. Sutra, L. Virulence factors involved in the pathogenesis of bovine in-tramammary infections due to Staphylococcus aureus / L. Sutra, B. Poutrel // J.Med.Microbiol.-1994.-V.40.-N 2.-P.79-89.

202. Towe, J., NeumayerE., Stark K.H, Rach G.//"Zbl. Gynak". 1976.-Bd. 98, №.21.-P. 1287-1295.

203. Yoshio Kajimura. New cyclic lipopeptide antibiotics from Bacillus subtilis FR-2 / Kajimura Yoshio, Sugiyama Masanori, Kaneda Miyuki // J.Antibiotics.-1995. -48, N10. -P. 1095-1099.