Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.07) на тему:Применение пробиотика "Ветом-3" для лечения коров при субклиническом мастите

На правах рукописи

ПАВЛЕНКО Ольга Борисовна

ПРИМЕНЕНИЕ ПРОБИОТИКА «ВЕТОМ-3» ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КОРОВ ПРИ СУБКЛИНИЧЕСКОМ МАСТИТЕ

16.00.07 - ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж-2005

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и патанатомии ФГОУ ВПО « Донской государственный аграрный университет»

Научный руководитель:

кандидат ветеринарных наук, доцент

Миронова Людмила Павловна

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Слободяник Виктор Иванович

кандидат ветеринарных наук,

Климов Николай Тимофеевич

Ведущая организация: ГНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт»

Защита диссертации состоится « 29 » марта 2005г. в 13.00 час. на заседании диссертационного совета Д.220.010.05 при ФГОУ ВПО « Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д.Глинки »(394087, г. Воронеж, ул. Мичурина, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д.Глинки»

Автореферат разослан

2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Субклинический мастит имеет широкое распространение в молочном скотоводстве (Карташова В.М. с соавт., 1981; Иноземцев В.П. с соевт., 1999; Зверева Г.В. с соавт., 1999; Париков В.А. с соавт., 2000; Копытин В.К. с соавт., 2002 и многие другие), а у коров переболевших субклиническим маститом, не только снижается их молочная продуктивность, но и ухудшается санитарное качество молока (Солдатов А.П. с соавт., 1986; Загаевский И.С., 1986; П1юхоренко П.Н. с соавт., 1990; Савостин А.Н., 1990; Слободяник В.И., 2000 и др.).

Длительное повсеместное, а порой и бессистемное применение химио-терапевтических средств привело к снижению эффективности лечения данного заболевания из-за образования лекарственно устойчивых штаммов микроорганизмов (Слободяник В.И. с соавт., 1994; Ивашура А.И. с соавт., 1998; Ивченко В.М., 1988; Копытин В.К. с соавт., 1997; Ходаков А.В., 2000; Юрков В .Л. с соавт., 2001; Коптев В.Ю. с соавт., 2002), а наличие в молоке остаточных количеств химиотерапевтических средств могут вызывать в организме человека дисбактериозы, аллергические реакции, нарушение обмена веществ (Логвинов Д.Д., 1971; Ивашура А.И. с соавт., 1998; Гаврилин А.С., 2001; Белоусов В.И. с соавт., 2002).

Однако до настоящего времени при терапии субклинического мастита у коров недостаточно разработаны эффективные экологически безопасные проти-вомаститные лечебные препараты, не содержащие химиотерапевтических средств.

Цель работы. Целью настоящего исследования явилась разработка безмедикаментозного способа лечения лактирующих коров, больных субклиническим маститом.

С этой целью были поставлены следующие задачи:

- установить степень распространения субклинического мастита у лак-тирующих коров в учхозе «Донское»;

- изучить возможность применения для лечения коров с субклиническим маститом препаратов, содержащих споровую культуру Bac.subfflis;

- изучить влияние Bac.subtilis на ткани, микрофлору и некоторые факторы местной защиты здоровых и пораженных субклиническим маститом долей вымени при интрацистернальном применении;

- выявить лечебную и экономическую эффективность при субклиническом мастите биологического препарата по сравнению с мастисаном-А;

- апробировать безмедикаментозный способ лечения лактирующих коров, больных субклиническим маститом.

Научная новизна. Дано научное обоснование применению безмедикаментозного способа лечения лактирующих коров при субклиническом мастите, получен патент на изобретение № 2239445 (10.11.2004г.). Изучено влияние Ве-тома-3 на ткани, микрофлору, некоторые биохимические показатели секрета здоровых и пораженных долей вымени, определены сроки выделения препарата с секретом леченых долей, проведена оценка терапевтической и экономической эффектикности препарата.

Практическая значимость работы. Разработан экологически безопасный, эффективный способ лечения лактирующих коров при субклиническом мастите, исключающий медикаментозную нагрузку на организм животного, необходимость браковки молока в процессе лечения, повышающий факторы неспецифической защиты молочной железы.

Апробация работы. Результаты работы доложены и обсуждены на научных конференциях ДонГАУ (2002, 2003) и Международных научно-практических конференциях (Ставрополь, Ульяновск, 2003), расширенном заседании кафедр микробиологии и патанатомии, акушерства и хирургии ДонГАУ (2004).

Реализация результатов исследований. Результаты исследований используются в учебном процессе на факультете ветеринарной медицины ФГОУ

ВПО «Донской государственный аграрный университет», на МТФ учхоза «Донское» и на семинарах ветеринарных специалистов.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 статей и получен один патент на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 160 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения. Список использованной литературы включаег 252 источника, в том числе 32 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 14 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту:

- влияние Ветома-3 на ткани молочной железы, микрофлору секрета, некоторые биохимические показатели секрета вымени здоровых и больных субклиническим маститом лактирующих коров при интрацистернальном применении;

- терапевтическая и экономическая эффективность применения Ветома-3 при суб клиническом мастите у лактирующих коров.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 2002-2004 годы в лабораториях кафедр акушерства и хирургии, микробиологии, вирусологии и патанатомии Донского ГАУ и МТФ учхоза «Донское».

Материалом для исследований служили лактирующие здоровые и больные субклиническим маститом коровы красной степной и черно-пестрой пород в возрасте от 3 до 9 лет с различным уровнем продуктивности, периода лактации.

С целью выяснения распространения субклинического мастита среди лактирующих коров с 2001 по 2004 г. в учхозе «Донское» исследовали 592 про-

бы паренхимного (альвеолярного) молока от 148 коров с помощью мастидино-вого теста.

Коров на субклинический мастит обследовали в различные сезоны года на разных стадиях лактации. Для постановки реакции выдаивали в конце доения из каждой доли молочной железы по 1,0 мл молока в соответствующие луночки молочно-контрольной пластины и при помощи пипетки-автомата добавляли 1,0 мл 2%-ного водного раствора мастидина.

В первой серии поисковых опытов выяснили возможность применения пробиотических препаратов для лечения субклинического мастита у лактирую-щих коров. Для этого мы отобрали 20 коров, больных субклиническим маститом, из которых сформировали две группы по принципу пар-аналогов численностью по 10 голов каждая.

Определив оптимальную лечебную дозу препарата, в следующем опыте изучили действие Ветома-3 на ткани здоровой и пораженной субклиническим маститом молочной железы при интрацистернальном применении препарата в дозе 0,5 г сухого вещества в смеси с 5,0 мл теплого изотонического раствора натрия хлорида.

Во второй серии опытов изучили микрофлору секрета долей вымени, пораженных субклиническим маститом, ее чувствительность к наиболее часто применяемым антибиотикам, влияние на микрофлору секрета и содержание в нем соматических клеток после интрацистернального назначения лечебного препарата, контролировали сроки выделения Bac.subfflis с секретом. Было проведено 2 опыта с использованием 20 коров, больных субклиническим маститом.

В третьей серии опытов изучили влияние однократного интрацистер-нального введения Ветома-3 в лечебной дозе на уровень рН секрета, лизоцима-М, содержание белков в молоке здоровых и пораженных субклиническим маститом долей молочной железы.

В заключительном опыте изучили терапевтическую эффективность Ве-тома-3 в сравнении с мастисаном-А. Для опыта из числа коров, больных суб-

клиническим маститом, сформировали по принципу пар-аналогов две группы по 10 голов каждая.

При изучении терапевтической эффективности препаратов, содержащих Bac.subtilis, использовали цитологические, бактериологические, биохимические, физические методы исследований. Количественное содержание соматических клеток в 1,0 мл секрета определяли по методу Прескотта-Брида (Ивашура А.И., 1991), морфологический состав молока - по методике А.А. Сысоева, М.П. Рязанского (1971), рН молока - с помощью рН-метра-340. Общую бактериальную обсемененность молока определяли путем высева 1,0 мл молока в разведении 1:1000 в три бактериологические чашки на поверхность мясопептонного агара (МПА). Чашки с разлитым МПА предварительно проверяли в течение суток на стерильность. Видовую принадлежность микроорганизмов определяли по характеру роста их на поверхности мясопептонного агара, по пигментообразова-нию, микроскопии мазков, окрашенных по Граму. Сроки выделения Bac.subtilis с секретом доли молочной железы после его введения контролировали путём обнаружения роста культуры на поверхности питательной среды. Чувствительность штаммов микроорганизмов, выделенных из секрета долей, пораженных субклиническим маститом, определяли методом дисков, для чего использовали стандартные диски с антибиотиками промышленного изготовления. Титр лизо-цима-М определяли по методике, утвержденной Главным Управлением ветеринарии МСХ СССР 5 сентября 1972 г. В качестве газонной культуры использовали суточную бульонную культуру золотистого стафилококка штамма ВМ.

Расчет экономической эффективности проводили по методике МСХ СССР, отделения ВАСХНИЛ (Семенова К.П., 1982). Цифровой материал обрабатывали методом вариационной статистики (Лакин Г.Ф., 1980) на ПК IBM PENTI-UM166MMX с использованием программы STADIA в единицах СИ, рекомендованных Всемирной организацией здравоохранения и стандартами СЭВ 1062-78.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Распространение субклиническогомастита, влияние Bacsubtilis нанекоторые показателинеспецифическойустойчивости тканеймолоч-

нойжелезы

В учхозе «Донское» субклинический мастит был диагностирован у 69 коров, что составило 45,5% к обследованному поголовью. У них установлено поражение 107 долей (38,8%).

Исходя из предпосылок безвредности Ветома-3, провели поисковые исследования с целью изучения возможности применения пробиотиков, состоящих из биомассы споровой культуры ВаевиЫШв, для лечения субклинического мастита у коров, путем интрацистернального введения.

Ветом-3 оказывал более выраженный лечебный эффект при субклиническом мастите, а его лучший терапевтический эффект был получен после однократного интрацистернального введения в дозе 0,5 г.

Уменьшение дозы вводимого препарата до 0,3 г привело к снижению на 20,0% числа выздоровевших животных и на 23,0% - количества излеченных долей. Увеличение дозы Ветома-3 до 0,7 г не привело к увеличению числа излеченных животных и пораженных долей по сравнению со второй группой. Таким образом, для интрацистернального введения Ветома-3 оптимальной оказалась дозой 0,5 г.

Интрацистернальное введение испытуемого препарата ни в одном случае не ВЕазывало местной воспалительной реакции и изменения органолептиче-ских сво 1ств секрета. На протяжении опыта количество соматических клеток в секрете здоровых опытных и контрольных долей вымени оставалось в пределах нормы (р>0,05), хотя абсолютное их содержание снизилось по отношению к исходному уровню. В секрете опытных долей их содержание снизилось в 2,7 раза, а в контрольных - в 1,3 раза. Эти данные свидетельствуют о том, что Ветом-3 оказывает действие на ткани молочной железы не только опытных, но и контрольных долей вымени. Интрацистернальное введение препарата в доли выме-

ни, пораженные субклиническим маститом (II опытная группа), привело к пятикратному снижению количества соматических клеток в секрете в первые трое суток. В последующие дни содержание соматических клеток в секрете стабилизировалось и не отличалось от такового показателя здоровых долей вымени (р<0,001) (табл.1).

Таблица 1. - Динамика соматических клеток в молоке здоровых и больных ко-

ров после интрацистернального введения Ветома-3

Состоя- Количе- Содержание соматических клеток (млн./.ул)

ние доли вымени ство долей

до вве-де-ния после введения препарата спустя, ч

препа-

рата •24 48 72 96 240

Здоровая 6 0,293± 0,264± 0,207± 0,171± 0,134± 0,104±

(I опыт. 0,076* 0,095 0,101 0,043 0,058 0,057*

гр.)

Пораженная суб- 6 1,770± 1,327± 0,765± 0,324± 0,282± 0,240±

клиниче- 0,238" 0,178 0,195 0,092 0,105 0,019**

ским мас-

титом

(II опыт, гр'

Здоровая 12 0,236± 0,130± 0,142± 0,300+ 0,226+ 0,184+

[контроль) 0,103* 0,044 0,084 0,064 0,028 0,047*

*р> 0,05; "р< 0,001

Исследования по лечению коров, больных субклиническим маститом, начали с изучения микрофлоры пораженных долей вымени и определения ее чувствительности к антибиотикам (стрептомицину, пенициллину, тетрациклину, гентамицину) и нитрофурановым препаратам.

Штаммы стафилококков, стрептококков, выделенные из секрета пораженных долей вымени, оказались наиболее чувствительными к фуразолидону, гентамицину, тетрациклину.

Наибольшей устойчивостью к испытуемым антибиотикам обладали штаммы стафилококков. Из 18 испытанных штаммов, 6 (33,3%) оказались нечувствительными к пенициллину и стрептомицину, а 17 (95,0%)- малочувствительными к этим антибиотикам. Особенно низкая чувствительность у стафилококков была к пенициллину.

Среди испытанных штаммов стрептококков только 1 (19,5%) был нечувствителен к пенициллину. Остальные штаммы стрептококков были чувствительны, малочувствительны к пенициллину, стрептомицину, тетрациклину.

3.2 Сроки выделения Bac.subtШs с секретом

Изучение действия Ветома-3 на сапрофитную микрофлору вымени здоровых лактирующих коров показало, что из 20 проб секрета, взятых из долей вымени здоровых лактирующих коров перед введением препарата, штаммы стафилококков и стрептококков изолировались из 17 (85,0%) проб, с содержанием в 1,0 мл секрета 264,9±59,05 тыс. микробных клеток. В 6 (35,3%) случаях секрет был контаминирован только штаммами стафилококков, в 4 (23,5%)-стрептококками и в 7 (41,2%)- ассоциацией стафилококков и стрептококков.

Интрацистернальное введение препарата привело к снижению содержания микрофлоры в секрете опытных долей уже спустя 12 ч. Это произошло за счет угнетения роста как стафилококков (р>0,05), так и стрептококков (р<0,001). Микробная обсемененность секрета контрольных долей оставалась на прежнем уровне, варьируя в статистически недостоверных пределах (р>0,05).

Следовательно, Ветом-3 при интрацистернальном применении угнетал рост как стафилококков, так и стрептококков. Причем последние угнетались достоверно в большей степени (р<0,001).

Из результатов бактериологических исследований 50 проб секрета, выдоенного из опытных долей молочной железы после введения препарата, следует, что культуру Bac.subfflis удавалось изолировать в течение первых 72 ч после интрацистернального введения. При бактериологическом исследовании проб

молока через 96 ч после назначения препарата ни в одном случае не удалось выделить Bacsubtilis.

Установлено, что молочная железа коров на интрацистернальное введение многих веществ реагировала раздражением ее тканей, которое характеризовалось изменением рН секрета, повышением количества клеток в молоке, снижением уровня лизоцима-М, а иногда и изменением органолептических свойств секрета.

В первые трое суток после введения препарата рН незначительно сместилась из слабокислой в щелочную сторону, достигнув нейтрального значения. Однако сдвиг рН секрета, полученного из подопытных и контрольных долей, недостоверен (р>0,05). По завершении опыта рН секрета как из подопытных, так и контрольных долей вымени была практически одинаковая.

До введения препарата в секрете из здоровых контрольных и опытных долей вымени содержание клеток варьировало соответственно от 286 до 598 тыс. Среди клеток секрета превалировали малые клетки (42,0%), средние эпителиальные клетки (13,0%), нейтрофилы (40,0%). После введения препарата цитологическая картина секрета из опытных долей изменилась, хотя и несущественно. Спустя одни сутки общее количество клеток в 1,0 мл секрета из опытных долей вымени повысилось в 1,3 раза (статистически недостоверно, р>0,05). В первые трое суток относительное содержание средних и больших эпителиальных клеток, лейкоцитов оставалось практически на исходном уровне, хотя количественно и уменьшалось. В секрете появились фагоцитирующие лейкоциты. На 10-е сутки после введения препарата зарегистрировано снижение в 6 раз содержания клеток в 1,0 мл секрета из опытных долей молочной железы по сравнению с исходным уровнем. В мазках секрета превалировали малые эпителиальные клетки (52,0%), нейтрофилы (17,0%) и лимфоциты (17,0%).

Клеточный состав из контрольных долей вымени молочной железы не претерпел за период опыта существенных ни количественных, ни качественных

изменений. Общее содержание клеток в 1,0 мл секрета варьировало от 199 до 420 тыс. (р>0,05).

Отсутствие достоверных изменений в содержании клеток в 1,0 мл секрета, их морфологического состава, вызванных однократным внутрицистерналь-ным введением Ветома-3, свидетельствовало, во-первых, о том, что в первые трое суток в молочной железе активизировались дегенеративные процессы. В эти сроки на 5,0-13,0% возрастало содержание эпителиальных клеток (малых, средних). Во-вторых, процесс раздражения тканей молочной железы носил кратковременный характер и сопровождался увеличением на 6,0-8,0% содержания в секрете нейтрофилов, лимфоцитов, фагоцитов, т.е. носил защитный характер.

3.3. Лечебные свойства Bac.subtilis

В аналогичном опыте изучали действие препарата на ткани молочной железы, пораженной субклиническим маститом, и ее микрофлору.

Из 11 проб секрета опытных долей вымени были изолированы штаммы стафилококков и стрептококков. Из 4 проб секрета здоровых долей - только стрептококки. В одной пробе секрета здоровой доли вымени рост на поверхности мясопептонного агара отсутствовал. Следует отметить, что в 1,0 мл секрета из пораженных долей вымени содержалось стрептококков в 1,8 раза больше, чем в секрете из здоровых долей вымени.

Сгустя 12 часов после интрацистернального введения препарата содержание микробных тел в 1,0 мл секрета уменьшилось, о чем свидетельствует снижение с семи до одного случая сливного роста культур на поверхности питательной среды. Из секрета пораженных долей вымени был изолирован штамм Bac.subtilis. Среднее количество микробных тел в секрете пораженных долей вымени было в 2,1 раза выше, чем в секрете здоровых долей.

В последующие дни в секрете опытных долей молочной железы была выражена, хотя и недостоверно (р>0,05), тенденция к снижению содержания как

стрептококков, так и стафилококков. Причем к концу опыта содержание стрептококков достоверно (р<0,05) снизилось по сравнению с исходным уровнем. Культуру Вас^иЬШи изолировали из проб секрета, взятых из опытных долей, в первые 48 часов после введения препарата.

Среди клеток молока, полученного из пораженных долей вымени, превалировали малые, средние эпителиальные клетки и нейтрофилы. На их долю приходилось соответственно 42,0, 13,2 и 22,5%. Среди лейкоцитов секрета 3,6% проявляли фагоцитарную активность.

В секрете из здоровых долей вымени преобладали малые эпителиальные клетки (57,0%) и лимфоциты (38,9%). Фагоциты отсутствовали.

На протяжении опыта содержание лимфоцитов в секрете пораженных долей вымени увеличилось в первые трое суток, а к концу опыта их содержание превышало исходной уровень на 22,2%. В секрете из здоровых симметричных долей молочной железы наблюдалась такая же динамика в содержании клеток, изменении их видового состава, как и в секрете из пораженных долей, однако эти изменения были недостоверны(р>0,05).

Изменение содержания клеток в 1,0 мл секрета, полученного из долей молочной железы, пораженных субклиническим маститом, свидетельствовало о том, что к концу опыта (на 10-е сутки) произошло излечение долей вымени. Сдвиги в клеточном составе секрета указывали на то, что после интрацистер-нального введения препарата активизировались клеточные факторы защиты молочной железы.

Важным фактором защиты молочной железы, сдерживающим размножение патогенной микрофлоры, являлся лизоцим-М. Между уровнем содержания лизоцима-М в молоке, его бактериальной обсемененностью и частотой обнаружения субклинического мастита имелась обратная коррелятивная связь (Карташова В.М. с соавт., 1981) (табл.2).

Таблица 2. - Титр лизоцима-М в секрете долей молочной железы до и после введения Ветома-3

Инди- Доля Титр лизоцима-М (мм)

№ вид .№ вымени,

пгг. коровы физ. до введе- через через через

сост. ния 12 ч 48 ч 120 ч

ППб ОСЛ 18 24 26

1 1786 ГШ зд 15 3УР 20 21 28

ППзд 24 33Р 25 25 25

2 1278 ПЛ б 20 33Р 22 24 24

ППб 18 3УР 20 25 25

3 3214 ПЗ зд 16 3УР 18 24 25

ПЗб 23 33Р 23 21 28

4 4000 ЛЗ зд 2633Р 25 25 30

ЛЗб 24 33Р 22 24 24

5 1216 ПЗ зд 28 33Р 28 28 28

ППб 15 3УР 18 20 25

6 102 ПЛ зд 25 33Р 25 30 30

ППб 10 СЛ 18 22 25

7 2170 ПЗб 15 3УР 18 20 25

ППзд 23 33Р 25 28 30

8 124 ПЛб 15 3УР 20 23 23

ППб ОСЛ 15 20 18

9 3346 ПЛ зд 20 33Р 20 25 25

М±т Больн 13,89± 19,56± 22,56±0,63 24,22± 0,91

р<0,()1 2,99 0,85

р<0,01 Здор. 21,33+ 22,67+ 25,11±1,09 27,33± 0,78

1,67 1,22

До введения Ветома-3 титр лизоцима-М в секрете долей, пораженных

субклиническим маститом, был в 1,5 раза ниже, чем в секрете симметричных здоровых долей, и варьировал от 0 до 23 мм.

Титр лизоцима-М в секрете контрольных долей колебался в пределах 15-28 мм.

Спустя 5 суток после интрацистернального введения препарата титр ли-зоцима-М превысил исходный уровень в секрете как опытных, так и контрольных долей молочной железы при высокой степени достоверности (р<0,001).

Через сутки после интрацистернального введения Ветома-3 содержание контролируемых белков в секрете из опытных и контрольных долей вымени практичес ки выравнялось (р>0,05). В последующие дни процентное содержание

белков-маркеров в секрете контролируемых долей вымени колебалось в незначительных границах (р>0,05).

Из контролируемых сывороточных белков молока за период опыта достоверно (р<0,001) снизилось содержание в секрете леченых долей Р-глобулина, а в молоке из здоровых долей - содержание альбуминов. Молоко как из леченых, так и из здоровых долей молочной железы по содержанию белков-маркеров соответствовало нормальному составу (табл.3).

Таблица 3. - Динамика сывороточных белков молока при применении Ветома-3

(п=5)

Доли вымени Белки молока Содержание белков, %

до введения после введения Ветома-3 спустя:

сутки 3 сут. 5 сут. 7 сут.

Оытные (пораженные) Альбумин а-глоб. Р-глоб. у-глоб. 22,08 ±7,57 9,74 ±3,85 *"9,20± 1,81 60,42± 10,26 13,95 ±4,03 11,88± 5,36 15,28± 4,43 61,60 ±7,69 11,93 ±4,47 15,05± 5,00 19,90± 6,50 62,50± 5,90 9,90 ±1,74 16,50± 5,60 20,74± 3,71 51,06± 6,70 8,54 ±1,09 15,00 ±3,40 ** 18,92 ± 4,25 52,66± 5,07

Кон- Альбу- **14,10± 11,14± 7,37± 13,58± ";,70±

троль- мин 3,61 2,90 0,83 5,20 1,30

ные а-глоб. 9,14± 15,16± 15,50± 12,18± 20,70±

(здоро- 3,11 5,48 6,90 4,14 5,00

вые) Р-глоб. 19,10± 15,00± 17,08+ 13,40± 1(5,95+

5,02 3,30 3,80 4,30 (5,59

■у-глоб. 57,20± 56,58± 63,92± 61,00± 52,88±

6,18 5,58 10,51 5,82 8,97

Примечание: р<0,001, у здоровых и больных животных до и после введения препарата.

Из контролируемых сывороточных белков молока за период опыта достоверно (р<0,001) снизилось содержание в секрете леченых долей Р-глсбулина, а

в молоке из здоровых долей — содержание альбуминов. Молоко как из леченных, так и из здоровых долей молочной железы по содержанию белков-маркеров соответствовало нормальному составу.

Э.4. Сравнительная лечебная эффективность Ветома-3 и мастисана-А

Однократное интрацистернальное применение Ветома-3 позволило излечить на 10,0% больше коров и на 17,0% больше пораженных субклиническим маститом долей вымени по сравнению с базовым препаратом при одинаковой продолжительности курса лечения и существенном снижении трудовых затрат.

4. ВЫВОДЫ

1. Заболеваемость лактирующих коров субклиническим маститом в обследованном хозяйстве составила 45,5% при средней интенсивности поражения 1,55 долей.

2. Возраст животных, период лактации не оказывали существенного влияния на частоту заболевания коров субклиническим маститом. Заболеваемость по этим показателям варьировала в пределах соответственно 45,5-48,9% и 43,8-66,0%. Решающее влияние на частоту заболевания коров оказывали нарушения технологии машинного доения, санитарное состояние помещений и доильного оборудования.

3. Микрофлора, изолированная из секрета долей вымени коров, больных субклиническим маститом, в 75,0% случаев была представлена штаммами стафилококков и в 25,0% - стрептококками.

4. Трехкратное интрацистернальное введение мастисана-А обеспечивало излечение 60,0% больных животных и 56,3% пораженных долей. Причиной низкой терапевтической эффективности комплексного противомаститного препарата являлась то, что 94,4% изолированных штаммов стафилококков и 100,0%

штаммов стрептококков были резистентны или малочувствительны к пенициллину, 66,6% и 66,6% (соответственно) - к стрептомицину.

5. Препараты (Ветом-1.1, Ветом-3), содержащие споровые культуры Вас^иЪШк, при однократном интрацистернальном введении лактирующим коровам, больным субклиническим маститом, обладали выраженным лечебным эффектом. Ветом-3 по лечебной эффективности на 20,0% превосходил Ветом-1.1.

6. Споровые культуры Вас^иЪШв, входящие в состав Ветома-3, обладали выраженным противомикробным действием. Спустя 7 суток после интраци-стернального введения препарата содержание стрептококков в 1,0 мл секрета пораженных долей вымени снизилось в 1,5 раза (р<0,001), стафилококков - 2,2 раза.

7. Интрацистернальное введение Ветома-3 не раздражало ткани здоровой молочной железы, о чем свидетельствовало отсутствие достоверных изменений в содержании и морфологии соматических клеток, рН секрета, титра ли-зоцима-М спустя 48 ч после назначения препарата при одновременном снижении микробной контаминации секрета стрептококками и стафилококками.

8. Через 7 суток после однократного интрацистернального введения Ве-тома-3 больным животным в секрете снижалось содержание микробных тел (р<0,001), количество лейкоцитов, титр лизоцима-М возрастал с 13,84±2,44 до 24,22±0,91 мм (р<0,001), в 2 раза (р<0,001) снижалось содержание Р-глобулина.

9. Однократное интрацистернальное введение Ветома-3 на изотоническом растворе натрия хлорида в лечебной дозе (0,5 г) в пораженные доли вымени лактирующим коровам обеспечивало излечение 70,0-75,0% больных животных и 73,3-76,3% пораженных долей.

10. Через 72 ч после однократного интрацистернального введения препарата из молока леченых долей вымени не удавалось изолировать культуру Вас. виЫШв, что позволяло ограничить сроки браковки молока тремя сутками вместо 5-7 и более суток при применении антибиотиков, сульфаниламидов.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты проведенных исследований позволяют ветспециалистам хозяйств при организации мероприятий по борьбе с субклиническим маститом лактирующих коров рекомендовать:

1.Для лечения коров, больных субклиническим маститом в период лактации, использовать препарат Ветом-3 (споровую культуру Вас^иЬШи) путем однократного интрацистернального введения в пораженные доли вымени.

2. Молоко из долей, подвергавшихся лечению споровой культурой Вас^иЪШв (Ветом-3), в течение первых трех суток не браковать и не подвергать термической обработке, а использовать для выпойки молодняку сельскохозяйственных животных.

6. Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Павленко О.Б. Лечебная эффективность биологического препарата при субклиническом мастите у коров / О.Б. Павленко, Б.А. Булычева //Экологические проблемы в сельскохозяйственном производстве. - пос. Пер-сиановский, 2002. - С. 92-93.

2. Павленко О.Б. Микробиологический контроль лечения коров, больных суб клиническим маститом / О.Б. Павленко //Экологические проблемы в сельскохозяйственном производстве. - пос. Персиановский, 2002. - С. 104-105.

3. Павленко О.Б. Влияние Ветома-3 на ткани молочной железы здоровых лавирующих коров / О.Б. Павленко, А.Н. Пономаренко //Экологические аспекты агропромышленного комплекса. - пос. Персиановский, 2003. - С. 94-95.

4. Павленко ОБ. Эффективность лечения субклинического мастита у лактирующих коров / О.Б. Павленко //Актуальные проблемы ветеринарной медицины. - Ульяновск, 2003. - Т.2. - С. 381-382.

5. Павленко О.Б. Реакция тканей молочной железы на интрацистерналь-ное введение препарата / О.Б. Павленко //Актуальные вопросы зоотехнической

науки и практики как основа улучшения продуктивных качеств и здоровья сельскохозяйственных животных. - Ставрополь, 2003. - С. 41-42.

6. Патент на изобретение № 2239445. Способ лечения субклинического мастита у лактирующих коров. /О.Б.Павленко, Л.П.Миронова, Б.А.Калашник; Опубл. 10.11.2004г.

Тип. ВГАУ. 3. № 724 - 2005 г. Усл. п. л. 1,0. Т. 100.

\

V,

i

У

'•л m

Актуальность темы. Основной продукцией молочного скотоводства является молоко, представляющее собой уникальный по составу и вкусовым качествам продукт питания. Молоко занимает одно из ведущих мест в рационах детей, людей преклонного возраста, а также лиц, нуждающихся в диетическом питании, поэтому молоко должно отвечать высоким требованиям не только по содержанию питательных веществ, но и соответствовать определенным санитарно-гигиеническим нормам. Важнейшим требованием, предъявляемым к молоку, является его безвредность (Беленький Н.Г., 1982).

Получению высококачественного молока препятствует целый ряд факторов, среди которых важную роль играет как клинический, так и субклинический мастит. Последний имеет широкое распространение в молочном скотоводстве (Карташова В.М. с соавт., 1981; Брейтерман С.Б., 1983; Загаевский И.С., 1985; Гасанов А.И. с соавт., 1985; Гу-димова Т.Е. с соавт., 1990; Крюков Н.Н., 1998; Иноземцев В.П. с соавт., 1999; Зверева Г.В. с соавт., 1999; Париков В.А. с соавт., 2000; Анюлис Э.с соавт., 2000; Варганов А.И. с соавт., 2000; Трошин А.Н., 2001; Кузьмин О.Г. с соавт., 2002; Копытин В.К. с соавт., 2002; Липатова О.А. с соавт., 2003). Переболевание лактирующих коров субклиническим маститом сопровождается не только снижением их молочной продуктивности, но и ухудшением санитарного качества молока, потерей питательных свойств, что делает его непригодным для пищевых целей, технологической переработки (Абзалова А.Г., 1975; Петерсон К.А. с соавт., 1977; Тогов И. с соавт., 1984; Солдатов А.П. с соавт., 1986; Загаевский И.С., 1986; Хрипунова JI.B., 1986; Ивченко В.М., 1986; Прохоренко П.Н. с соавт., 1990; Савостин А.Н., 1990; Слободяник В.И., 2000).

Для лечения коров, больных субклиническим маститом, наиболее широко применяют химиотерапевтические средства, в состав которых входят антибиотики, сульфаниламиды, как в чистом виде, так и в виде различных сочетаний путем интрацистернального ведения в пораженные доли молочной железы.

Длительное повсеместное, а порой и бессистемное применение химиотерапевтических средств привело к снижению эффективности лечения данного заболевания из-за образования лекарственно устойчивых штаммов микроорганизмов (Слободяник В. И. с соавт., 1994; Ивашура А.И. с соавт., 1998; Ивченко В.М., 1988; Копытин В.К. с соавт., 1997; Ходаков А.В., 2000; Юрков B.JI. с соавт., 2001; Коптев В.Ю. с соавт., 2002). Антибиотики, введенные интрадистернально, подавляют факторы местной резистентности молочной железы (Шакарян Г.А. с соавт., 1979; Ивченко В.М., 1989) и длительное время выделяются с секретом. Наличие в молоке остаточных количеств химиотерапевтических средств создает опасность для потребителей. Попадая с пищей в организм человека эти вещества способны вызывать дисбактериозы, аллергические реакции, нарушение обмена веществ (Логвинов Д.Д., 1971; Ивашура А.И. с соавт., 1998; Гаврилин А.С., 2001; Белоусов В.И. с соавт., 2002).

Одним из путей преодоления негативных последствий применения антибиотиков, сульфаниламидов при субклиническом мастите коров, является разработка эффективных экологически безопасных противомаститных лечебных средств, не содержащих химиотерапевтических средств.

Цель работы. Целью настоящего исследования явилась разработка безмедикаментозного способа лечения лакти-рующих коров, больных субклиническим маститом.

С этой цели были поставлены следующие задачи:

- установить степень распространения субклинического мастита у лактирующих коров хозяйства;

- изучить возможность применения для лечения коров с субклиническим маститом препаратов, содержащих споровую культуру Вас.subtilis,

- изучить влияние Бас.subtilis на ткани, микрофлору, некоторые факторы местной защиты здоровых и пораженных субклиническим маститом долей вымени при ин-трацистернальном применении;

- выявить лечебную и экономическую эффективность при субклиническом мастите биологического препарата и мастисана-А;

- апробировать безмедикаментозный способ лечения л актирующих коров, больных субклиническим маститом.

Научная новизна. Дано научное обоснование применению безмедикаментозного способа лечения лактируящих коров при субклиническом мастите, получен патент на изобретение № 2239445 (10.11.2004г.). Изучено влияние Ве-тома-3 на ткани, микрофлору, некоторые биохимические показатели секрета здоровых и пораженных долей вымени, определены сроки выделения препарата с секретом леченых долей, проведена оценка терапевтической и экономической эффективности препарата.

Практическая значимость работах. Разработан экологически безопасный, эффективный способ лечения лакти-рующих коров при субклиническом мастите, исключающий медикаментозную нагрузку на организм животного, необходимость браковки молока в процессе лечения, повышающий факторы неспецифической защиты молочной железы.

Апробация работы. Результаты работы изложены и обсуждены на:

- научных конференциях ДонГАУ (2002, 2003);

- Международной научно-практической конференции (г. Ставрополь, 2003);

- Международной научно-практической конференции (г. Ульяновск, 2003);

- расширенном заседании кафедр микробиологии и патана томии, акушерства и хирургии ДонГАУ (протокол № 2 от 9 декабря 2004 года).

Реализация результатов исследований. Результаты исследований используются в учебном процессе на факультете ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», на молочно-товарной ферме учхоза «Донское», а также при проведении тематических семинаров-совещаний с ветеринарными специалистами сельскохозяйственных предприятий Ростовской области.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 статей в материалах Международных, Всероссийских конференций, один патент на изобретение, в которых изложены основные положения диссертации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 160 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения. Список использованной литературы включает 252 источника, в том числе 32 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 14 рисунками.

4.ВЫВОДЫ

1. Заболеваемость лактирующих коров субклиническим маститом в обследованном хозяйстве составляет 45,5% при средней интенсивности поражения 1,55 долей.

2. Возраст животных, период лактации не оказывают существенного влияния на частоту заболевания коров субклиническим маститом. Заболеваемость по этим показателям варьирует в пределах соответственно 45,5-48,9% и 43,8-66,0%. Решающее влияние на частоту заболевания коров оказывают нарушения технологии машинного доения, санитарное состояние помещений и доильного оборудования.

3. Микрофлора, изолированная из секрета долей вымени коров, больных субклиническим маститом, в 75, 0% случаев представлена штаммами стафилококков и в 25,0% — стрептококками.

4. Трехкратное интрацистернальное введение масти-сана-А обеспечивает излечение 60,0% больных животных и 56,3% пораженных долей. Причиной низкой терапевтической эффективности комплексного противомаститного препарата является то, что 94,4% изолированных штаммов стафилококков и 100,0% штаммов стрептококков резистентны или малочувствительны к пенициллину, 66,6% и 66,6% (соответственно) - к стрептомицину.

5. Препараты (Ветом-1.1, Ветом-3), содержащие споровые культуры Вас.subtilis, при однократном интраци-стернальном введении лактирующим коровам, больным субклиническим маститом, обладают выраженным лечебным эффектом. Ветом-3 по лечебной эффективности на 20,0% превосходит Ветом-1.1.

6. Споровые культуры Вас.subtilis, входящие в состав Ветома-3, обладают выраженным противомикробным действием. Спустя 7 суток после интрацистернального введения препарата содержание стрептококков в 1,0 мл секрета пораженных долей вымени снизилось в 1,5 раза (р<0,001), стафилококков - 2,2 раза.

7. Интрацистернальное введение Ветома-3 не раздражает ткани здоровой молочной железы, о чем свидетельствует отсутствие достоверных изменений в содержании и морфологии соматических клеток, рН секрета, титра лизо-цима-М спустя 48 ч после назначения препарата при одновременном снижении микробной контаминации секрета стрептококками и стафилококками.

8. Через 7 суток после однократного интрацистернального введения Ветома-3 больным животным в секрете снижается содержание микробных тел (р<0,001), количество лейкоцитов, титр лизоцима-М возрастает с 13,84±2,44 до 24,22±0,91 мм (р<0,001), в 2 раза (р<0,001) снижается содержание (3-глобулина.

9. Однократное интрацистернальное введение Ветома-3 на изотоническом растворе натрия хлорида в лечебной дозе (0,5 г) в пораженные доли вымени лактирующим коровам обеспечивает излечение 70,0-75,0% больных животных и 73,3-76,3%пораженных долей.

10. Через 72 ч после однократного интрацистернального введения препарата из молока леченых долей вымени не удается изолировать культуру Вас. subtilis, что позволяет ограничить сроки браковки молока тремя сутками вместо 5-7 и более суток при применении антибиотиков, сульфаниламидов.

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Результаты проведенных исследований позволяют вет-специалистам хозяйств при организации мероприятий по борьбе с субклиническим маститом лактирующих коров рекомендовать :

1. Для лечения коров, больных субклиническим маститом в период лактации, использовать препарат Ветом-3 (споровую культуру Вас.subtilis) путем однократного интрацистернального введения в пораженные доли вымени.

2. Молоко из долей, подвергавшихся лечению споровой культурой Вас.subtilis (Ветом-3), в течение первых трех суток не браковать и не подвергать термической обработке, а использовать для выпойки молодняку сельскохозяйственных животных.

1.6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ

На основании данных обзора литературы можно сделать заключение о том, что заболеваемость коров субклиническим маститом регистрируется во всех странах с развитым молочным скотоводством. В Российской Федерации субклинический мастит регистрируется у 10,0-62,5% лак-тирующих коров.

На частоту заболевания коров субклиническим маститом оказывают влияние различные внешние и внутренние факторы. Степень распространения заболевания находится в прямой зависимости от условий кормления, содержания, эксплуатации животных, санитарного состояния окружающей среды, доильного оборудования, сезона года, морфофунк-циональных особенностей вымени, генетических факторов, состояния защитных сил организма, квалификации обслуживающего персонала.

Ущерб, причиняемый субклиническим маститом молочному скотоводству, огромен. Он складывается, прежде всего, из снижения молочной продуктивности коров, изменения качества секрета. В секрете из пораженных долей молочной железы нередко содержатся энтеротоксигенные штаммы микроорганизмов (стафилококки, кишечная палочка) , способные вызывать пищевые токсикозы.

Из-за отсутствия клинических признаков субклинический мастит своевременно не диагностируют. Длительное течение болезни приводит к атрофии пораженных долей вымени. Животные теряют хозяйственную ценность и их преждевременно приходится выбраковывать. Это нарушает селекционно-племенную работу и работу по воспроизводству стада.

Многочисленные публикации отечественных и зарубежных авторов по вопросам этиологии субклинического мастита позволяют сделать заключение, что основной причиной субклинического мастита является разнообразная ус-ловнопатогенная, патогенная микрофлора. Из секрета пораженных долей вымени выделено более 90 видов различных микроорганизмов. Многообразие видового состава микрофлоры при субклиническом мастите подтверждают данные ученых о том, что нет специфического возбудителя, и патогенная микрофлора не всегда играет ведущую роль в возникновении болезни. Об этом, в частности, свидетельствует наличие одной и той же патогенной микрофлоры, как в секрете из пораженных, так и из здоровых долей молочной железы.

Возникновение и развитие субклинического мастита у лактирующих коров во многом определяется состоянием неспецифической резистентности организма животного и его молочной железы, наличием во внешней среде патогенной микрофлоры, факторов передачи инфекта.

Таким образом, субклинический мастит является полиэтиологическим заболеванием, в возникновении которого важную роль играют состояние организма животного и его молочной железы, условнопатогенная, патогенная микрофлора и факторы внешней среды. Молочная железа обладает совершенной, так называемой неспецифической системой защиты от действия патогенной микрофлоры. Эта система включает анатомические, клеточные, гуморальные барьеры.

Исходя из этиопатогенеза субклинического мастита, лечение больных животных сводится к местному (интраци-стернальному) применению этиотропных средств. В качестве этиотропных средств в настоящее время применяют про-тивомаститные средства, в состав которых входят антибиотики, сульфаниламиды, нитрофурановые препараты. Данные литературы, о применении противомаститных препаратов, свидетельствуют о том, что такое лечение имеет ряд недостатков.

Применение антибиотиков, особенно без учета чувствительности к ним микроорганизмов, привело к появлению антибиотикоустойчивых штаммов микроорганизмов и снижению их терапевтической эффективности, развитию дисбак-териозов.

Антибиотики, сульфаниламиды, применяемые для лечения л а кт ирующи х коров с субклиническим маститом, раздражают ткани молочной железы, длительное время выделяются с секретом как из леченных, так и из здоровых смежных долей молочной железы. Они, следовательно, могут попадать с молоком в организм человека и животных, оказывая отрицательное действие на состояние их здоровья.

В последние годы большинство исследователей предлагают ограничить применение антибиотиков, сульфаниламидов при лечении мастита у коров и активизировать работу по изысканию новых против им а с т и т ных препаратов, не содержащих химиотерапевтических средств.

Поиск противомаститных средств ведется в нескольких направлениях. Одни авторы рекомендуют применять при лечении больных животных фитосредства, другие - физиотерапию (лазерное излучение, ультразвук, электромагнитные поля).

Перспективным направлением поиска противомаститных средств является разработка и применение биологических препаратов, которые бы подавляли развитие в молочной железе патогенной микрофлоры, не оказывая отрицательного действия на ткани молочной железы, качество ее секрета и обладали высоким лечебным эффектом.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась в течение 2002-2004 годов в лабораториях кафедр акушерства и хирургии, микробиологии, вирусологии и патанатомии Донского ГАУ и на молочной ферме учебно-опытного хозяйства «Донское» в соответствии с планом научных исследований по теме «Применение пробиотика Ветом-3 для лечения субклинического мастита у лактирующих коров».

Материалом для исследований служили лактирующие здоровые и больные субклиническим маститом коровы красной степной и черно-пестрой пород в возрасте от 3 до 9 лет с различным уровнем продуктивности, периода лактации. Исследования проводились несколькими этапами в различные сезоны.

На молочной ферме учхоза «Донское» лактирующих коров в зимне-стойловый период содержали в типовом двухрядном коровнике на привязи. Ежедневно (кроме дней с ненастной погодой) коров выпускали на 2-3 ч для прогулки в баз, расположенный рядом с коровником. Летом животных содержали в летнем лагере на привязи под теневым навесом, им ежедневно предоставлялся активный моцион (на пастбище) продолжительностью 3-4 ч.

Зимние рационы коров включали кукурузный силос, сено бобовых культур (люцерновое) и концентраты. В рационах коров в летнее время преобладали зеленая масса зернобобовых культур и концентрированные корма.

На ферме принято трехразовое машинное доение коров. За каждой дояркой закреплено 40-45 коров и три доильных аппарата. При доении вымя обмывали теплой водой из общего ведра и вытирали общим полотенцем. В процессе доения по мере загрязнения и охлаждения воды ее сменяли, а полотенце прополаскивали. Для мытья и дезинфекции доильной аппаратуры, молочной посуды применяли растворы кальцинированной соды и хлорной извести.

Молочная ферма учхоза «Донское» благополучна по инфекционным и инвазионным заболеваниям. Ежегодно поголовье коров исследовали на туберкулёз, бруцеллез, лейкоз. Один-два раза в год коров обследовали на наличие субклинического мастита и больных подвергали лечению.

Диагностику субклинического мастита у лактирующих коров проводили в следующей последовательности: наружный осмотр и пальпация молочной железы, пробное сдаивание с органолептической оценкой секрета, лабораторное исследование секрета.

При осмотре молочной железы определяли состояние кожных покровов, форму вымени, степень развития долей, величину и форму симметричных долей вымени, величину и расположение сосков.

Пальпацией определяли наличие болезненности, местную температуру на симметричных участках молочной железы, консистенцию органа до и после доения. При пальпации надвыменных лимфоузлов учитывали их величину, подвижность, консистенцию, болевую чувствительность.

Суклинический мастит у лактирующих коров диагностировали с помощью 2%-ного водного раствора мастидина и молочно-контрольной пластины (ПМК-2). Пробы секрета брали в конце доения. С целью исключения диагностических ошибок не исследовали молоко коров в первые 15 дней лактации и в период запуска. Раздражение вымени исключали путём повторного исследования секрета через 3 дня после предыдущего исследования.

При изучении терапевтической эффективности препаратов, содержащих Вас.subtilis, использовали цитологические, бактериологические, биохимические, физические методы исследований.

Раздражающее действие препарата на ткани молочной железы изучали по изменению количества, морфологии клеток молока и изменению рН секрета. Количественное содержание соматических клеток в 1,0 мл секрета определяли по методу Прескотта-Брида (Ивашура А.И., 1991), морфологический состав молока - по методике А.А. Сысоева, М.П. Рязанского (1971), рН молока - с помощью рН-метра-340.

Для бактериологического исследования брали пробы паренхимного молока из здоровых и пораженных долей молочной железы с соблюдением стерильности. Сразу после взятия пробы молока помещали в термос со льдом и доставляли в лабораторию, где подвергали бактериологическому исследованию не позже 40-60 минут после получения.

При проведении бактериологических исследований ставили к разрешению следующие задачи:

1) определить общую микробную контаминацию молока из пораженных субклиническим маститом долей молочной железы, видовой состав микрофлоры, изолировать штаммы стафилококков, стрептококков и определить их чувствительность к антибиотикам, нитрофурановым;

2) изучить влияние Ветома-3 на микрофлору секрета здоровых и пораженных долей;

3) проконтролировать сроки выделения Вас.subtilis с молоком после интрацистернального применения;

4) определить лизоцимную активность молока (лизоцим-М) .

Общую бактериальную обсемененность молока определяли путем высева 1,0 мл молока в разведении 1:1000 в три бактериологические чашки на поверхность мясопептон-ного агара (МПА). Чашки с разлитым МПА предварительно проверяли в течение суток на стерильность.

Учет выросших колоний проводили после 48-часовой инкубации в термостате при 37#0°С. Количество микробных тел находили путем умножения среднего количества выросших колоний в трех чашках Петри на степень разбавления .

Видовую принадлежность микроорганизмов определяли по характеру роста их на поверхности мясопептонного агара, по пигментообразованию, микроскопии мазков, окрашенных по Граму.

Сроки выделения Вас.subtilis с секретом доли молочной железы после его введения контролировали путём обнаружения роста культуры на поверхности питательной среды.

Чувствительность штаммов микроорганизмов, выделенных из секрета долей пораженных субклиническим маститом, определяли методом дисков, для чего использовали стандартные диски с антибиотиками промышленного изготовления.

Титр лизоцима-М определяли по методике, утвержденной Главным Управлением ветеринарии МСХ СССР 5 сентября 1972 г. В качестве газонной культуры использовали суточную бульонную культуру золотистого стафилококка штамма ВМ.

Суточную бульонную культуру штамма ВМ, разведенную стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:10000, высевали по 0,25 мл на подсушенный стерильный МПА (рН=7,2), тщательно распределяли по всей поверхности и оставляли на 30-40 минут при комнатной температуре. Затем в агаре каждой чашки Петри делали по 4 луночки диаметром 10 мм. В каждую луночку вносили стерильной пипеткой по две капли (0,1 мл) испытуемого молока. Чашки выдерживали при комнатной температуре 18 ч, затем переносили в термостат на 5-6 ч. Результаты учитывали по величине зоны задержки роста (мм) газонной культуры.

Реакцию рН свежевыдоенного молока определяли при помощи рН-метра-340.

При разработке и испытании нового способа лечения коров, больных субклиническим маститом, проведено несколько серий опытов.

В первом рекогносцировочном опыте изучили терапевтическую эффективность Beтом-1.1 и Ветом-3. С этой целью обследовали на наличие субклинического мастита 45 лактирующих коров клинически и с помощью мастидино-вого теста. У каждого обследованного животного учитывали инвентарный номер, возраст, дату отела, пораженные доли. Из числа коров, больных субклиническим маститом, сформировали по принципу пар-аналогов две группы численностью 10 голов каждая. Препараты вводили однократно интерцистернально в дозе 0,5 г сухого вещества на теплом, стерильном изотоническом растворе натрия хлорида с соблюдением правил асептики- Результаты лечения учитывали через 8 суток после введения препаратов клинически и с применением мастидинового теста.

В следующем поисковом опыте определили оптимальную дозу более эффективного испытуемого препарата (Ветом-3) . В опыт включили 30 коров, больных субклиническим маститом, из которых сформировали по принципу пар-аналогов три опытных группы по 10 голов каждая.

Для лечения коров опытных групп применяли Ветом-3 в дозах (0,3г; 0,5г; 0,7г). При определении дозы исходили из того, что в 1,0 г сухого прапарата содержится до 1 миллиона спор Bacillus subtilis. Дозу препарата смешивали с 5,0 мл теплого стерильного изотонического раствора натрия хлорида. Препарат вводили однократно после вечернего доения интрацистернально с соблюдением правил асептики с помощью одноразового шприца. Результаты учитывали через восемь суток после назначения препарата .

Для изучения действия Ветома-3 на ткани молочной железы здоровых и больных субклиническим маститом коров провели опыты на здоровых и больных животных. Здоровым животным в правые передние доли, а больным в пораженные доли однократно интрацистернально ввели испытуемый препарат в оптимальной дозе. Левые передние доли у здоровых коров и симметричные здоровые доли больных животных служили контролем. В них препарат не вводили. Действие препарата на ткани молочной железы контролировали на протяжении опыта клинически с помощью мастидинового теста и путем прямого подсчета соматических клеток в секрете опытных и контрольных долей по способу Прескот-та-Брида.

В серии опытов изучали влияние препарата на микрофлору и рН секрета, содержание в нем соматических клеток у здоровых коров, сроки выделения Bac.subtilis после интрацистернального применения.

В первом опыте изучили действие препарата на микрофлору молочной железы здоровых коров, сроки выделения Bac.subtilis с секретом. Для опыта отобрали 10 здоровых коров, у которых правые передние доли были опытными, а левые передние - контрольными. В правые передние доли (опытные) с соблюдением правил асептики ввели однократно препарат в лечебной дозе. В контрольные доли препарат не вводили. Из опытных и контрольных долей молочной железы до введения и спустя 12, 24, 48, 72, 96 ч после введения препарата брали пробы секрета с соблюдением правил асептики. Пробы доставляли на кафедру в термосе со льдом, где сразу же проводили бактериологическое исследование. Сроки выделения Bac.subtilis с секретом опытных долей контролировали путем учета роста культуры на поверхности мясопептонного агара.

Во второй серии опытов изучали микрофлору секрета долей вымени, пораженных субклиническим маститом, ее чувствительность к наиболее часто применяемым антибиотикам, влияние на микрофлору секрета и содержание в нем соматических клеток после интрацистернального назначения лечебного препарата, контролировали сроки выделения Bac.subtilis с секретом. Было проведено 2 опыта с использованием 20 коров, больных субклиническим маститом.

В третьей серии опытов изучили влияние однократного интрацистернального введения Ветома-3 в лечебной дозе на уровень рН секрета, лизоцима-М, содержание белков в молоке здоровых и пораженных субклиническим маститом долей молочной железы. Белковый состав секрета молочной железы определяли турбодиметрическим экспресс-методом по Г. Колб с соавт. (1976).

На заключительном этапе исследований сопоставляли терапевтическую эффективность Ветома-3 в сравнении с мастисаном-А при субклинических маститах ла ктирующих коров, провели производственную апробацию способа лечения лактирующих коров при субклиническом мастите с применением Ветома-3.

Расчет экономической эффективности применения Ветома-3 при субклиническом мастите у коров проводили по методике МСХ СССР, отделения ВАСХНИЛ (К.П. Семенова, 1982).

Цифровой материал обработан с использованием методов вариационной статистики (Лакин Г.Ф., 1980), на ПК IBM PENT I-UM16 6MMX с использованием программы STADIA. Цифровой материал представлен в единицах СИ, рекомендованных Всемирной организацией здравоохранения и стандартами СЭВ 1062-78.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2.1. Распростра геяие с убклижиче с кого мастита, у лактиружщих коров

С целью выяснения распространения субклинического мастита среди лактирующих коров с 2001 по 2004 г. мы исследовали 592 пробы паренхимного (альвеолярного) молока от 148 коров с помощью мастидинового теста.

Коров на субклинический мастит обследовали в различные сезоны года на разных стадиях лактации. Для постановки реакции выдаивали в конце доения из каждой доли молочной железы по 1,0 мл молока в соответствующие луночки молочно-контрольной пластины и при помощи пипетки-автомата добавляли 1,0 мл 2%-ного водного раствора мастидина. Смесь в луночках пластины тщательно перемешивали вращательными движениями в течение 10-15 минут, затем учитывали результаты реакции. Положительной считали реакцию, при которой в луночке образовывался желеобразный сгусток, а реактивная смесь окрашивалась в темно-сиреневый, фиолетовый цвет.

В результате проведенного исследования субклинический мастит диагностировали у 69 коров, что составляет 45,5% к обследованному поголовью. У них установлено поражение 107 долей (38,8%). Таким образом, интенсивность поражения составила 1,55 доли (табл. 1).