Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эпизоотология бруцеллеза северных оленей в тундровой зоне Якутии и оптимизация средств, методов диагностики и иммунопрофилактики

На правах рукописи

РГ

<- о

ВАСИЛЬЕВА АВГУСТА АЛЕКСЕЕВНА

ЭПИЗООТОЛОГИЯ БРУЦЕЛЛЁЗА СЕВЕРНЫХ ОЛЕНЕЙ В ТУНДРОВОЙ ЗОНЕ ЯКУТИИ И ОПТИМИЗАЦИЯ СРЕДСТВ, МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ И ИММУНОПРОФИЛАКТИКИ

Б ОД

ш ш

Специальность 16.00.03 - ветеринарная микробиология,

вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

ЯКУТСК - 2000

На правах рукописи

ВАСИЛЬЕВА АВГУСТА АЛЕКСЕЕВНА

ЭПИЗООТОЛОГИЯ БРУЦЕЛЛЁЗА СЕВЕРНЫХ ОЛЕНЕЙ В ТУНДРОВОЙ ЗОНЕ ЯКУТИИ И ОПТИМИЗАЦИЯ СРЕДСТВ, МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ И ИММУНОПРОФИЛАКТИКИ

Специальность 16.00.03 - ветеринарная микробиология,

вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискаиие учёной степени кандидата ветеринарных наук

ЯКУТСК-2000

Работа выполнена в лаборатории инфекционных и инвазионных болезней животных Якутского научно-исследовательского института сельского хозяйства, лаборатории биотехнологии института экспериментальной ветер инарии Сибири и Дальнего Востока и в оленеводческих хозяйствах Республики Саха (Якутия).

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук

Слепцов Евгений Семенович

Научный консультант-доктор ветеринарных наук, профессор

Чекишев Валерий Михайлович

Официальные оппоненты:

- доктор ветеринарных наук Неустроев Михаил Петрович

- член-корреспондент РАСХН, доктор ветеринарных наук,

Ведущая организация - Новосибирский Государственный Аграрный

Защита диссертации состоится 16 марта 2000 года на заседании диссертационного Совета К. 120. 29. 02. по защите кандидатских диссертаций при Якутской государственной сельскохозяйственной академии (677002, г.Якутск, Красильникова , 15).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Якутской государственной сельскохозяйственной академии.

Автореферат разослан « » 2000 года.

профессор Макаров Юрий Анатольевич

университет ( г. Новосибирск )

Учёный секретарь диссертационного Совета, кандидат ветеринарных наук

В.Ф.Бутковский

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Бруцеллез сельскохозяйственных животных является одной из основных проблем ветеринарной науки и практики, актуальность которой определяется, прежде всего, опасностью его для здоровья человека и широкой распространенностью заболевания.

По данным Комитета Экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ (6-й доклад, 1986) инфекция регистрируется среди крупного рогатого скота, овец, коз в 155 странах мира всех континентов.

Бруцеллез северных оленей на Крайнем Севере Российской Федерации имеет широкое распространение, является значительным сдерживающим фактором дальнейшего развития оленеводства и продолжает представлять серьезную социальную опасность.

Многолетний опыт борьбы с бруцеллезом северных оленей путем проведения общих организационно - хозяйственных и ветеринарно-санитарных мероприятий показал на их недостаточную эффективность.

Борьба с болезнью осложняется наличием природных очагов бруцеллеза диких северных оленей.

Рядом исследователей Якутии, Таймыра, Ямала и Магаданской области (В.А.Забродин, 1956, 1959, 1983; М.И. Рудаков, 1956 ; И.М.Голосов, 1956,1963; А.Ф.Пинигин с соавт., 1960; H.H. Давыдов, 1961,1963,1967; A.B.Лысков,1976, 1981; Р.Б. Вашкевич, 1969, 1989; R.Dieterich, 1987; P.M. Искахов, 1988; К.А. Лайшев, 1990, 1998; А.А.Хоч, 1996; Е.С. Слепцов, 1999 и др.) было проведено изучение степени распространения, способов диагностики, средств и методов специфической профилактики бруцеллеза северных оленей.

Опыт применения в оленеводстве вакцин из штаммов Br. abortus 19 и 82 показал, что эти вакцины являются безвредными и высокоиммуногенными.

Вместе с тем, по ряду известных причин (повышенная реактогенность, длительная персистенция антител в крови, трудоемкая технология и др.) их ис-

пользование до настоящего времени не вышло из рамок производственных испытаний в масштабах отдельных стад и хозяйств, несмотря на то, что эти вакцины создают предпосылки к оздоровлению неблагополучных стад в течение 4-5 лет.

Для диагностики бруцеллеза у животных используют бактериологический, серологический и аллергический методы исследований с учетом клинических признаков болезни и эпизоотологических данных.

Серологический метод является основным, а иногда и единственным критерием оценки благополучия животных по бруцеллезу, так как при проведении бактериологического исследования больных не всегда удается выделить культуру возбудителя.

В условиях оленеводства особое внимание должно придаваться поствакцинальной диагностике. Прежде всего важно, чтобы она была своевременной (обеспечивающей максимальное использование провоцирующих свойств вакцин) и достаточно простой.

В последние годы значительное количество исследований посвящено изысканию новых методов диагностики, позволяющих отличать поствакцинальные бруцеллезные антитела от антител, образованных в результате спонтанной инфекции.

В качестве дифференциального теста при бруцеллёзе крупного рогатого скота положительно зарекомендовала себя РИД с О-ПС антигеном (В.М. Че-кишев с соав. 1993) , однако пригодность его для этих целей при бруцеллёзе северных оленей оставалась невыясненной.

Необходимость изыскания рациональных схем и методов поствакцинальной диагностики и иммунопрофилактики для повышения эффективности системы противобруцеллезных мероприятий определила цель и задачи наших исследований.

Цель работы. Оптимизировать систему мер борьбы с бруцеллёзом северных оленей, применительно к тундровой зоне Якутии.

При этом были поставлены следующие задачи исследований:

- изучить особенности эпизоотического процесса бруцеллёза северных оленей в тундровой зоне;

- испытать и апробировать на северных оленях различные схемы применения вакцин из штаммов Вг.аЬогШз 19, 82 и Вг.бшз 61;

- изучить в экспериментах и производственных опытах специфичность О-ПС антигена;

- дать сравнительную оценку чувствительности О-ПС антигена при диагностике бруцеллеза северных оленей;

- апробировать рациональные схемы поствакцинальной диагностики в производственных условиях.

Научная новизна. Выявлены особенности эпизоотического процесса бруцеллёза северных оленей в тундровой зоне Якутии. Изучена на северных оленях в сравнительном аспекте противоэпизоотическая эффективность подкожного, перорального и конъюнктивального методов применения (в пониженных дозах) вакцин из штаммов Вг.аЬоЛиэ 19, 82 и Вг.бшз 61. В настоящей работе впервые установлена возможность использования РИД с О-ПС антигеном для дифференциальной диагностики бруцеллеза северных оленей.

На основе результатов комплексного изучения эффективности РИД с О-ПС антигеном в сравнении с ранее известными диагностическими методами разработана оптимальная схема дифференциальной диагностики бруцеллеза северных оленей, а на ее основе объективные критерии эпизоотической оценки стад северных оленей, привитых вакцинами из штаммов 19 и 82 с высокой противоэпизоотической эффективностью.

При этом установлена ведущая роль РИД с О-ПС антигеном, усовершенствована методика ее постановки и учета.

Практическая цен носи,. Предложено, утверждено Департаментом ветеринарии МСХ и II РФ и рекомендовано для широкого производственного испытания временное наставление но применению реакции иммунодиффу-зии с О-полисахаридным антигеном при диагностике бруцеллеза северных оленей.

Усовершенствованы методы серологической диагностики при бруцеллезе северных оленей.

Разработаны н утверждены Ученым советом ЯНИИСХ рекомендации по профилактике и борьбе с бруцеллезом северных оленей в Республике Саха (Якутия).

Основные положения, выносимые на защиту:

- эпизоотология бруцеллеза северных оленей в тундровой зоне Республики Саха (Якутия);

- сравнительное испытание на северных оленях различных методов применения вакцин из штаммов Br.abortus 19, 82 и Br.suis 61 в пониженных дозах;

- метод дифференциальной диагностики бруцеллеза северных оленей, привитых вакцинами из штаммов Br. abortus 19 и 82 с использованием РИД с О-ПС антигеном;

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены

на:

- заседаниях Ученых Советов Якутского научно-исследовательского института сельского хозяйства и Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (1995-1999 );

- научно-практической конференции, посвященной году Арктики (Якутск, 1998 );

- научно-практической конференции по туберкулезу и бруцеллезу животных в регионе Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1999 );

- научно-практической конференции, посвященной 60-тию Государственной селекционной и животноводческой опытных станций (Якутск, 1999 ).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи и 2 находятся в печати.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.

Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста, иллюстрирована 7 рисунками и 18 таблицами.

Список использованной литературы включает 239 источников, в том числе 95 иностранных авторов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Работа выполнялась в период с 1990 по 1999 гг. в лаборатории инфекционных и инвазионных болезней Якутского НИИ сельского хозяйства, лаборатории биотехнологии ИЭВС и ДВ, в отделе серологии ЯРВИЛ Департамента ветеринарии МСХ и 3, а также в оленеводческих хозяйствах Крайнего Севера (Якутии).

Ретроспективную оценку эпизоотической ситуации по бруцеллёзу оленей, а также изучение эффективности выполняемых противобруцеллёзных мероприятий проводили на основании статистических данных за период с 1988 по 1998 гг.

Источником информации по основным показателям эпизоотического процесса (динамика неблагополучных пунктов, заболеваемость, иммунизация вакцинами из штаммов Вг.аЬоПиэ 19 и 82), служили данные Департамента ветеринарии МСХ и 3 Республики Саха (Якутия), а дополнительными (методы, способы, схемы иммунизации, структура неблагополучных очагов, аборты, ре-

зультаты бактериологического исследования и др.) - первичные документы ветеринарного учёта и отчётности, а также собственные материалы эпизоотоло-гического обследования оленеводческих хозяйств улусов.

Ряд исследований проведены совместно с Е.С.Слепцовым, А.А.Хоч и В.М.Чекишевым.

Изучение культуралыю-морфологических, тинкториальных, агглютина-бельных и других свойств культур проводили по методикам, рекомендованным Комитетом экспертов по бруцеллёзу ФАО/ВОЗ (6-й доклад, 1986).

В опыте проведённом в благополучном по бруцеллёзу опытно-производственном хозяйство «Ючюгейское» ЯНИИСХ были определены им-муногенные свойства вакцины из штамма Вг.бшб 61 в сравнении с штаммами Вг.аЬогШз 19 и 82, при разных методах и дозах их введения.

В опыте использовали 27 северных оленей. Подопытных животных распределили на 9 групп по 3 животных в каждой и иммунизировали вышеуказанными вакцинами.

Гуморальный иммунный ответ организма северных оленей изучали в динамике через 7, 15, 30, 60, 90 и 150 дней после введения вакцины путём определения специфических антител в розбенгал пробе (РБП), реакции агглютинации (РА) и реакции длительного связывания комплемента (РДСК).

С целью изучения состояния иммунитета через 5 месяцев после иммунизации у 27 животных, в.т.ч. важенок, находящихся во второй половине стельности, провели контрольное заражение культурой референтного штамма Вг.бшб 1330 в дозе 25 млн.м.к. по оптическому стандарту мутности ГИСК им.Л.А.Тарасевича, что составляет 10 максимальных инфицирующих доз.

Заражение проводили дозирующим устройством «Эппендорф» по 0,05 па конъюнктиву каждого глаза. В качестве контроля при проверке иммунитета были заражены 3 непривитые важенки аналогичного возраста.

Иммунологические исследования на бруцеллёз проводили через 15 и 30 дней, а убой вакцинированных и контрольных животных для бактериологического исследования провели через 30 дней после заражения.

Высевы из лимфатических узлов и паренхиматозных органов (15-18 объектов от каждого животного) были проведены на одну пробирку с мясо-пептонным печеночным бульоном (МППБ) и две пробирки с мясо-пептонно-печеночным глюкозо-глицериновым агаром (МППГГА).

Высевы проводили стерильной пастеровской пипеткой после предварительного прижигания места укола патологического материала разогретым на пламени спиртовки шпателем.

Пробирки с засеянным материалом инкубировали в термостате при 37°С до 30 суток с периодическим просмотром характера роста культур. Выделенные культуры идентифицировали по общепринятым методам и дифференцировали от вакцинных штаммом Вг.аЬогШэ 19, 104 М и 82, а также от Вг.бшб 61.

РИД с О-ПС антигеном ставили по общепринятой методике в чашках Петри или на стеклянных пластинах различных размеров в зависимости от количества проб. При исследовании 5 проб использовали чашки Петри: до 11 проб - предметные стекла; до 36 проб - пластинки размером 6 х 9 см.

В центральную лунку вносили 20 мкл О-полисахаридного антигена, а в периферические - до 40 мкл исследуемых сывороток крови. На каждой пластинке (стекле) или чашке Петри ставили контроль с положительной сывороткой. Стела (чашки Петри) после внесения компонентов помещали во влажную камеру (эксикатор) при температуре не менее 18° С.

Учёт результатов вели визуально в косом проходящем свете с помощью осветителя ОИ-19, дважды - через 24 и 48 часов после постановки реакции. Линия преципитации между лунками антигена и исследуемой сывороткой, сформировавшаяся через 24-48 часов, свидетельствовала о положительной реакции.

С цслыо проверки диагностической эффективности РИД провели три эксперимента на северных оленях разных возрастов, привитых по различным схемам вакцинами из штаммов Br.abortus 19 и 82 Br.suis 61.

В первом опыте на 18 северных оленях благополучного по бруцеллёзу хозяйства ГУП «Кировское» Горного района провели изучение специфичности РИД с О-ПС антигеном при разных схемах иммунизации вакцинами из штаммов Br.abortus 19 и 82 Br.suis 61.

Для контроля взяли 6 непривитых северных оленей аналогичного возраста. Кровь для исследования в РБП, РА, РСК и РИД брали до и через 30, 60, 90, 150 и 210 дней после вакцинации.

Во втором опыте по изучению чувствительности данного метода использовали 12 голов взрослых северных оленей, которых распределили на 4 группы (по 3 животных).

Заражение подопытных животных вирулентным штаммом Br.suis 1330 проводили конъюнктивально, в дозах: 1 группа - 2,5 тыс.м.к.; 2 группа - 25 тыс.м.к.; 3 группа - 250 тыс.м.к.; 4 группа - 2,5 млн.м.к.

Сыворотку крови исследовали в РБП, РА, РДСК и РИД с О-ПС антигеном на 7 и 50 дни после инокуляции вирулентного штамма Br.suis 1330.

Животных убили через 52 дня после заражения. Материал от всех животных подвергали бактериологическому исследованию.

В третьем опыте, проведенном в опытно-производственном хозяйстве «Ючю-гейское» Оймяконского района, была изучена специфичность РИД с О-ПС антигеном у северных оленей привитых разными вакцинами из штаммов Br.abortus 19 и 82 Br.suis 61 и экспериментально зараженных через 5 месяцев после иммунизации.

Заражение провели референтным штаммом Br.suis 1330 в дозе 25 млн.м.к. (10 ИД юо) конъюнктивальным методом.

Убой и бактериологическое исследование животных производили через 30 суток после заражения.

Схемы экспериментов, методики производственных опытов и наблюдений изложены в соответствующих разделах диссертации.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Эпизоотология бруцеллёза северных оленей в Якутии

В Якутии бруцеллёз северных оленей впервые был установлен в 1955 году в Оймяконском районе. В последующие годы он получил значительное распространение, что в условиях рынка является серьезным препятствием на пути повышения уровня экономического развития многих неблагополучных по бруцеллёзу оленеводческих хозяйств.

На начало 1999 года в Республике Саха (Якутия) имелось более 190 тысяч голов домашних северных оленей, где было зарегистрировано 20 неблагополучных пунктов, с охватом 85 оленеводческих стад. Ежегодно исследованиям на бруцеллёз подвергается в среднем только около одной трети поголовья оленей, содержащегося в хозяйствах, вследствие этого, приведённые показатели не отражают истинного состояния хозяйств республики по этой болезни.

Однако даже по ним можно заключить, что количество неблагополучных пунктов, несмотря на проведение ряда профилактических и оздоровительных мероприятий, не сокращается, а наоборот увеличивается.

Наибольшее распространение бруцеллёз северных оленей получил в хозяйствах Усть-Янского, Томпонского, Оленекского, Эвено-Бытантайского, Бу-лунского, Момского и Нижнеколымского районов республики.

В настоящее время это заболевание регистрируется в 10 оленеводческих районах из 14.

По нашим данным эпизоотическая ситуация по территориально- климатическим зонам республики является неравномерной. Наиболее высокие случаи нарастания экстенсивных показателей бруцеллёза наблюдались в тундровой зоне до 1992 года. Это объясняется тем, что инфекция получила наибольшее распространение в тех районах, на территории которых пролегают мигра-

циониые пути северных оленей Яно-Инднгирской, Лено-Оленекской и Сунд-рунской популяций.

В лесо-тундровой и горно-таёжной зонах наблюдается устойчивое равновесие экстенсивных показателей по этой инфекции. В то же время в течение последних 11 лет в таёжной зоне не были отмечены случаи выявления положительно реагирующих животных.

Вместе с тем следует отметить, что в последние годы снизилось общее поголовье домашних северных оленей, которое охвачено плановыми серологическими исследованиями. Среди диких северных оленей, которых на территории республики насчитывается более 260 тысяч голов, бруцеллёз впервые был установлен в 1971 году в Булунском районе. В последующие годы инфекция среди них была установлена в большинстве оленеводческих районов.

Таким образом, несмотря на довольно большой обьём противобруцел-лёзных мероприятий, проводимых ветеринарной службой республики и научными подразделениями, эпизоотическая обстановка по бруцеллёзу северных оленей остается все ещё чрезвычайно сложной.

Некоторые особенности формирования и течения бруцеллёзного эпизоотического процесса в тундровой зоне Якутии

Значительная территория Якутии, площадью 3 млн. 102 тыс.кв.км, находится за полярным кругом. Зона тундры расположена в самой северной материковой части, занимающей прибрежную полосу, протяжённостью 2,5 тыс км. В тундровой зоне сосредоточено более 41 % всего поголовья оленей республики.

Географическая обособленность территории Заполярья, своеобразные климатические условия, наличие диких и домашних северных оленей, единственных носителей бруцеллёзной инфекции на Крайнем Севере - способствовали образованию самостоятельных очагов бруцеллёза северных оленей. При этом возбудитель инфекции циркулирует среди оленей совершенно самостоя-

телыю, независимо от основных носителей бруцеллёзной инфекции - мелкого, крупного рогатого скота и свиней.

На Крайнем Севере, в частности, в тундровой зоне Якутии образовались условия, при котором резервуаром бруцеллёза являются северные олени.

Результаты эпизоотологического мониторинга неблагополучных по бруцеллёзу стад совхоза «Олеринский» и ГУП «Приморское» показывают, что в отличие от лесо-тундровой зоны наибольшее количество реагирующих на бруцеллёз оленей выделяют осенними исследованиями (до 70 %) и меньше весенне-летними.

Наличие такой закономерности в распространении бруцеллёза в хозяйствах зоны можно объяснить тем, что исследования, как правило, проводятся после отёлочной компании и гона, во время которых происходит перезаражение животных за счёт больных бруцеллёзом оленей.

Это связано, главным образом, с тем, что стандартными методами диагностики не всегда удается обнаружить и изолировать всех больных бруцеллёзом животных, часть из них попадает в гон и участвует в отёлочной компании. Следует отметить, что в отличие от лесо-тундровой и горно-таёжной зон, в тундровой зоне в эпизоотическом процессе вовлекаются и дикие северные олени, которые выполняют роль природных очагов и значительно осложняют меры борьбы.

Проведенными наблюдениями и исследованиями было установлено, что другим фактором, поддерживающим напряжённость эпизоотической ситуации в неблагополучных по бруцеллёзу маточных стадах оленей является, ежегодное пополнение молодыми важенками.

Кроме этого, для хозяйств тундровой зоны являются характерными ограниченные возможности смены маршрутов выпаса оленей, перегонов к местам летнего и зимнего содержания, и использование стационарных коралей. В этих условиях нарушение ветеринарно-санитарных правил, предусмотренных вете-

ринарным законодательством, как правило, создает благоприятные предпосылки для интенсивного распространения бруцеллёза в стадах оленей.

Другим, немаловажным фактором распространения бруцеллёза, является бесконтрольный обмен быками-производителями и транспортными оленями внутри хозяйства или за его пределами, когда животных завозят или перегоняют из районов неблагополучных по бруцеллёзу.

Роль диких оленей при бруцеллёзе домашних оленей имеет решающее значение, так как наличие природного очага инфекции резко осложняет эпизоотическую ситуацию.

Таким образом, в результате проведённых исследований были выявлены основные звенья эпизоотической цепи бруцеллеза северных оленей и их роль в формировании и развитии эпизоотического процесса в условиях Нижнеколымского района, расположенного в тундровой зоне республики.

Сходность природно-климатических условий, в которых расположены ГУП «Приморское» и совхоз «Олеринский» и практикуемых в них схем разведения, технология содержания и кормления северных оленей, позволяет использовать результаты проведённых исследований для разработки мер борьбы с бруцеллёзом и в других неблагополучных хозяйствах тундровой зоны.

Исключительно высокая роль автохтонных природных очагов бруцеллёза в тундровой зоне Якутии в формировании эпизоотического процесса, предусматривает разработку зональных противобруцеллёзных мероприятий, имеющих целью создание перманентного иммунитета в оздоравливаемых стадах путём широкого применения средств специфической профилактики (вакцин).

Роль РИД с О-ПС антигеном в комплексной поствакциналыюй диагностике бруцеллёза северных оленей

При разработке рациональной схемы поствакцинальной диагностики бруцеллёза северных оленей в условиях широкого применения вакцин ориен-

тировались прежде всего на необходимость использования наиболее информативных и эффективных диагностических реакций в ранние сроки после вакцинации и ревакцинации. При этом их постановка должна быть максимально простой и быстрой, и эти реакции должны обладать дифференцирующими возможностями.

Вследствие чего, для дальнейшего изучения, в сравнении с традиционными и официально утвержденными РБП, РА и РСК, использовали РИД с 0-ПС антигеном.

При этом были получены положительные результаты, свидетельствующие о возможности использования в комплексной поствакцинальной диагностике бруцеллёза северных оленей в качестве дифференциального метода РИД с О-ПС антигеном.

Специфичность показаний РИД была проверена на привитом, так и на непривитом поголовье благополучного по бруцеллёзу оленей ГУЛ «Кировское» Горного района. Установлено их отсутствие у животных через 2 и более месяцев после иммунизации и реиммунизации при наличии РА и РСК даже в очень высоких титрах.

Далее, специфичность РИД с О-ПС антигеном была проверена при экспериментальном заражении здоровых северных оленей референтным штаммом Вг.бшб 1330. Данные, полученные в этом опыте, свидетельствуют о том, что северные олени, зараженные штаммом 1330 в дозах 2,5, 25 и 250 тыс.м.к., оставались не инфицированными. Результаты бактериологического исследования показали, что доза в 2,5 млн.м.к. вызывает генерализованную инфекцию у животных этой группы, где заразились все животные, т.е. 100 %, а индекс инфицированное™ составил 28,5 %.

Проведённый опыт показал, что у инфицированных животных в конце срока наблюдения (52 дня), устанавливаются высокие титры в серологических реакциях, которые затем были подтверждены бактериологическими исследова-

ниями. При этом РИД была положительной в тех пробах, где титры РА не ниже 100, а РСК 1:10, что свидетельствует о высокой специфичности этой реакции.

У животных 1, 2 и 3 групп агглютинирующие и комплементсвязываю-щие антитела не были выявлены, в этих же группах, при контрольном убое, не были выделены культуры бруцелл.

В следующем опыте нами была изучена специфичность РИД с О-ПС антигеном у северных оленей привитых разными методами и дозами вакцин из штаммов Br.abortus 19 и 82 и Br.suis 61. Результаты проверки иммунитета через 5 месяцев после иммунизации показали, что наименее устойчивыми к заражению оказались животные, привитые вакциной из штамма 82 в дозе 25 млрд.м.к. подкожным, и в дозе 2 млрд.м.к. конъюнктивальным методами. В этих группах иммунных было 66,7 %.

В то же время северные олени, привитые вакциной из штамма 19 конъюнктивальным, подкожным и пероральными методами в дозах соответственно 2, 10 и 50 млрд.м.к., оказались наиболее устойчивыми.

Такие же результаты были получены в группах животных привитых вакциной из штамма Br.suis 61 (иммунных 100 %). Контрольные животные заразились все.

Все животные, от которых была выделена культура референтного штамма, в конце срока наблюдения (30 дней) реагировали в РИД за исключением одного животного с инв. №1698/1697.

Таким образом, данные проведённых опытов по изучению специфичности РИД с О-ПС антигеном показали, что реакция является высокоспецифичной и выявляет животных у которых инфекция была подтверждена бактериологическими исследованиями.

Испытание чувствительности РИД в неблагополучном по бруцеллёзу хозяйствах на иммунизированном поголовье северных оленей показывает, что РИД с О-ПС антигеном, являясь специфической реакцией, по своей чувстви-

тельности уступает диагностическому комплексу РА + РСК. Несмотря на это это она вполне может быть использована в целях дифференциации поствакцинальных реакций.

Изучение эффективности РИД при оценке эпизоотической ситуации иммунизированных разными вакцинами поголовья оленеводческих стад Нижнеколымского и Булунского районов показало, что РИД с О-ПС антигеном позволяет проводить эпизоотологический контроль по бруцеллёзу северных оленей, привитых вакцинами из штаммов Вг.аЬогШБ 19 и 82 по истечению 2-х месяцев после иммунизации, независимо от кратности прививки, метода введения и дозы вакцины.

Наличие положительной РИД к указанному сроку свидетельствует о неблагополучии стада северных оленей по бруцеллёзу. Вместе с тем РИД не может быть рекомендована в качестве метода индивидуальной дифференциации реагирующих животных на вакцину или инфекцию при оздоровлении оленеводческих стад.

Несмотря на то, что РИД не выявляет 100 % инфицированных животных, это ни в коей мере не принижает её достоинств, так как основное предназначение этого теста, как выяснилось и подтвердилось в процессе нашей работы, связано с тем, что РИД может быть использована:

- для ранней диагностики бруцеллёза через 2 месяца после иммунизации противобруцеллёзными вакцинами из штаммов Вг.аЬогШБ 19 и 82, что ускоряет сроки оздоровления;

- для контроля за ходом оздоровления неблагополучных по бруцеллёзу хозяйств с применением вакцин из штаммов Вг.аЬогШз 19 и 82;

- при оценке эпизоотической ситуации благополучных по бруцеллёзу северных оленей хозяйствах, в которых имеет место выявление реагирующих на бруцеллёз в РА и РСК с сывороткой крови(при этом РИД с О-ПС антигеном может заменить бактериологический метод).

Изучение нммуногенных свойств вакцины из штамма Br.suis 61 в производственном опыте

Апробирование вакцины из штамма Br.suis 61 в неблагополучном по бруцеллёзу стаде северных оленей (производственный опыт) показало, что при подкожном методе введения она вызывает местную и общую реакцию организма северных оленей, аналогичную таковой при иммунизации животных вакцинами из штаммов 19 и 82.

В то же время использование перорального метода иммунизации позволяет устранить все побочные явления (угнетение общего состояния, температура тела остаётся в пределах нормы, олени не хромают, у них не развиваются тендовагиниты и артриты и т.д.).

Сроки появления персистенции и тиры специфических антител в сыворотке крови привитых оленей находятся в прямой зависимости от дозы и метода введения вакцины. Более раннее появление, высокий уровень и длительное сохранение поствакцинальных антител наблюдали при подкожном методе введения вакцины (310 дней), а при пероральном методе вакцинации антитела выявляли в низких титрах до 75 дня.

Вышеизложенное, подтверждает данные полученные в экспериментальных условиях.

В опыте определения состояния иммунитета у северных оленей привитых разными дозами и методами вакцин из штаммов Br.suis 61 и Br.abortus 19, 82 при контактном методе заражения были получены данные, указывающие на то, что через 10 месяцев после иммунизации, привитые животные противостояли заражению 100 %.

Следовательно, можно сделать вывод о том, что применение вакцины из штамма Br.suis 61 позволяет улучшить эпизоотическую ситуацию в иммунизированных стадах северных оленей.

Разработка оптимальной схемы иммунизации (рсиммунизации) северных оленей в условиях Якутии

Работами отечественных исследователей установлено, что подкожная иммунизация северных оленей вакцинами из штаммов Вг.аЬоПиБ 19 и 82 вызывает у них длительную серопозитивность, а в некоторых случаях осложнения в виде абсцессов на месте введения, хромоту и угнетение общего состояния организма.

Всё это затрудняет эпизоотическую оценку иммунизированных стад в отдалённые сроки, вызывая недовольство у оленеводов, что в известной мере снижает практическое значение этих препаратов.

Таких недостатков лишены конъюнктивальный и пероральный методы вакцинации через неповреждённые слизистые оболочки.

Проведенное в общинах «Чайла» и «Алазея» Нижнеколымского района изучение иммунологической реактивности и состояния иммунитета у северных оленей при конъюнктивальном методе введения вакцины из штамма 19, а также пероральном методе введения вакцины из штамма 82 показало, что у привитых животных формируется напряженный иммунитет при слабо выраженной и непродолжительной серопозитивности.

Применение вакцины указанными методами снижает проявление её ре-актогенных (отсутствие общих и местных реакций) и агглютиногенных свойств, вследствие чего диагностические исследования с целью оздоровления неблагополучных стад, становятся возможными проводить в значительно ранние сроки, чем после подкожной вакцинации (через 6 месяцев).

Аллергическая настроенность у животных, привитых конъюнктивальным и пероральным методами, менее выражена и полностью угасает через 3 месяца после однократной вакцинации.

Кроме того, при использовании этих методов введения достигается значительная экономия используемых препаратов. Преимущества конъюнкти-

вального и перорального методой введения вышеуказанных вакцин позволяет рекомендовать их для испытания в более широком масштабе в производственных условиях.

Эффективность иммунизации находится в прямой зависимости от эпизоотического состояния оздоравливаемых стад. Более целесообразной является вакцинация в хозяйствах с умеренным распространением бруцецеллёза.

На основании полученных результатов мы рекомендуем следующие методы и схемы применения вакцин из штаммов 19 и 82:

- схема 1. Молодняк 6-8 месячного возраста иммунизируют конъюнкти-вальным методом вакциной из штамма 19 в уменьшенной дозе (3 млрд.м.к.);

- схема 2. Животных всех половозрастных групп стада иммунизируют вакциной из штамма 82 пероральным методом в дозе 50 млрд.м.к.

Применение указанных схем вакцинации создает у привитых северных оленей достаточно продолжительный и напряжённый иммунитет и позволяет избежать длительного сохранения поствакцинальных антител в сыворотке крови.

ВЫВОДЫ

1. Эпизоотический процесс бруцеллёза домашних оленей в тундровой зоне формируется и развивается под влиянием естественно-географических, организационно-хозяйственных и других факторов, из которых превалирующее значение имеют природные очаги бруцеллёза (дикие северные олени). При этом инфекция имеет широкое распространение, носит природно-очаговый характер и за счёт этого постоянно поддерживается напряжённость эпизоотического процесса.

2. В тундровой зоне Якутии оздоровление неблагополучных по бруцеллёзу стад оленей возможно при широком применении средств специфической профилактики (вакцины из штаммов Вг.аЬоШиз 19, 82 и Вг.Б1ш 61), особенно, в

стадах контактирующих с дикими северными оленями, пораженность которых бруцеллёзом достигает до 25 и более процентов.

3. Вакцина из штамма Br. suis 61 при разных методах её применения вызывает у северных оленей иммунитет, не уступающий по напряженности иммунитету создаваемому вакциной из штамма Br. abortus 19.

4. Экспериментальные исследования по испытанию специфичности РИД с О-ПС антигеном показали, что эта реакция является высокоспецифичной и выявляет животных с высокими показателями РА и РСК. Появившись через 1-3 недели РИД остается стабильно положительной до конца срока наблюдения (60 дней) у всех однажды среагировавших северных оленей.

5. Изучение РИД с О-ПС антигеном в неблагополучных по бруцеллёзу хозяйствах на вакцинированном поголовье северных оленей показало, что РИД является специфической реакцией, но по своей чувствительности она уступает диагностическому комплексу РА + РСК.

6. РИД с О-ПС антигеном следует применять в целях ранней (2 мес.) поствакцинальной дифференциальной диагностики серологических реакций и контроля за эпизоотическим состоянием стад оленей, оздоравливаемых с помощью вакцин из штаммов Br.abortus 19, 82 и Br.suisöl.

7. Использование РИД с О-ПС антигеном в комплексе РА + РСК и специфической профилактики с применением вакцин из штаммов Br.abortus 19 ,82 и Br. suis 61 в стационарно неблагополучных по бруцеллёзу стадах позволяет ослабить напряженность эпизоотического процесса и в течение 20-24 месяцев создать реальные предпосылки для их оздоровления.

ПРАКТИЧЕСКИЕ^ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты проведенных исследований нашли отражение в следующих нормативно-технических документах, утвержденных на российском и республиканском уровнях:

- Методические рекомендации « Модифицированные методы серологической диагностики при бруцеллёзе северных оленей и крупного рогатого скота » (Утверждены Учёным Советом ЯНИИСХ 10. 10. 96 г.);

- «Временное наставление по применению реакции иммунодиффузии (РИД) с О-полисахаридным антигеном при диагностике бруцеллёза северных оленей (в порядке широкого производственного испытания)» (Утверждено Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ № 13-7 -2/1305 от 03. 04. 98 г.);

- Методические рекоменации « Мероприятия по профилактике и борьбе с бруцеллезом северных оленей в Республике Саха (Якутия).» (Утверждены Ученым советом ЯНИИСХ от 28 декабря 1999 года.)

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Слепцов Е.С., Васильева A.A. Специфическая профилактика - основное направление борьбы с бруцеллёзом оленей //Сб.тез.докл. науч.-практ.конф. поев. Году Арктики - Якутск. 1998. - С.23.

2. Слепцов Е.С., Васильева A.A. Вопросы о природной очаговости бруцеллёза северных оленей //Научная обеспеченность ветеринарных проблем в животноводстве: Сб.научных трудов - Новосибирск, 1999. - С.236-239.

3. Слепцов Е.С., Васильева A.A. Проблемы бруцеллёза северных оленей и пути их рационального решения //Сб.научных трудов - Новосибирск, 1999. -С.236-239.

4. Слепцов Е.С., Васильева A.A., Хоч A.A. Изучение специфичности РИД с О-ПС антигеном при бруцеллёзе северных оленей // Сб. тез. докл. науч. практ. конф.: Региональные проблемы сельскохозяйственного производства Республики Саха (Якутия) - Якутск, 1999. - С.68.

Р .

Актуальность темы. Бруцеллез сельскохозяйственных животных является одной из основных проблем ветеринарной науки и практики, актуальность которой определяется, прежде всего, опасностью его для здоровья человека, а также широкой распространенностью заболевания.

По данным комитета экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ (6-й доклад, 1986) инфекция регистрируется среди крупного рогатого скота, овец, коз в 155 странах мира всех континентов.

Бруцеллез северных оленей на Крайнем Севере Российской Федерации также имеет широкое распространение и является значительным сдерживающим фактором дальнейшего развития оленеводства и продолжает представлять серьезную социальную опасность.

Многолетний опыт борьбы с бруцеллезом северных оленей путем проведения общих организационно - хозяйственных и ветеринарно-санитарных мероприятий показал на их недостаточную эффективность.

Борьба с болезнью осложняется наличием природных очагов бруцеллеза диких северных оленей.

Рядом исследователей Якутии, Таймыра, Ямала и Магаданской области (В.А.Забродин, 1956, 1959, 1983; М.И. Рудаков, 1956 ; И.МГолосов, 1956, 1963; А.Ф.Пинигин с соавт., 1960; H.H. Давыдов, 1961,1963,1967; A.B.Лысков, 1976, 1981; Р.Б. Вашкевич, 1969, 1989; R.Dieterich, 1987; P.M. Искахов, 1988; К.А. Лайшев, 1990, 1998; А.А.Хоч, 1996; Е С. Слепцов, 1999 и др.) было проведено изучение степени распространения, способов диагностики, средств и методов специфической профилактики бруцеллеза северных оленей.

Опыт применения в оленеводстве вакцин из штаммов Br. abortus 19 и 82 показал, что эти вакцины являются безвредными и высокоиммуногенными.

Вместе с тем, по ряду известных причин (повышенная реактогенность, длительная персистенция антител в крови, трудоемкая технология и др.) их использование до настоящего времени не вышло из рамок производственных испытаний в масштабах отдельных стад и хозяйств, несмотря на то, что эти вакцины создают предпосылки к оздоровлению неблагополучных стад в течение 4-5 лет.

Для диагностики бруцеллеза у животных используют бактериологический, серологический и аллергический методы исследований с учетом клинических признаков болезни и эпизоотологических данных.

Серологический метод является основным, а иногда и единственным критерием оценки благополучия животных по бруцеллезу, так как при проведении бактериологического исследования больных не всегда удается выделить культуру возбудителя.

В условиях оленеводства особое внимание должно придаваться поствакцинальной диагностике. Прежде всего важно, чтобы она была своевременной (обеспечивающей максимальное использование провоцирующих свойств вакцин ) и достаточно простой.

В последние годы значительное количество исследований посвящено изысканию новых методов диагностики, которые позволили бы отличить поствакцинальные бруцеллезные антитела от антител, образованных в результате спонтанной инфекции.

В качестве дифференциального теста положительно зарекомендовала себя РИД с О-ПС антигеном (В.М. Чекишев с соав. 1993) .

Таким образом, на основании вышеизложенного, очевидна необходимость изыскания рациональных схем поствакцинальной диагностики в целях повышения эффективности системы противобруцеллезных мероприятий при бруцеллезе северных оленей.

Однако к началу наших исследований их не было достаточно, что и определило цель и задачи исследований.

Цель работы. Оптимизировать систему мер борьбы с бруцеллёзом северных оленей, применительно к тундровой зоне Якутии.

При этом были поставлены следующие задачи исследований:

- изучить особенности эпизоотического процесса бруцеллёза северных оленей в тундровой зоне;

- испытать и апробировать на северных оленях различные схемы применения вакцин из штаммов Вг.аЬогШБ 19, 82 и Вг^гш 61;

- изучить в экспериментах и производственных опытах специфичность О-ПС антигена;

- дать сравнительную оценку чувствительности О-ПС антигена при диагностике бруцеллеза северных оленей;

- апробировать рациональные схемы поствакцинальной диагностики в производственных условиях.

Научная новизна. Выявлены особенности эпизоотического процесса бруцеллёза северных оленей в тундровой зоне Якутии. Изучена на северных оленях в сравнительном аспекте противоэпизоотическая эффективность подкожного, перорального и конъюнктивального методов применения (в пониженных дозах) вакцин из штаммов Вг.аЬойш 19, 82 и Вг.бшб 61. В настоящей работе впервые установлена возможность использования РИД с О-ПС антигеном для дифференциальной диагностики бруцеллеза северных оленей.

На основе результатов комплексного изучения эффективности РИД с О-ПС антигеном в сравнении с ранее известными диагностическими методами разработана оптимальная схема дифференциальной диагностики бруцеллеза северных оленей, а на ее основе объективные критерии эпизоотической оценки стад северных оленей, привитых вакцинами из штаммов 19 и 82 с высокой противоэпизоотической эффективностью.

При этом установлена ведущая роль РИД с О-ПС антигеном, усовершенствована методика ее постановки и учета.

Практическая ценность. Предложено, утверждено Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ и рекомендовано для широкого производственного испытания временное наставление по применению реакции иммунодиффузии с О-полисахаридным антигеном при диагностике бруцеллеза северных оленей.

Усовершенствованы методы серологической диагностики при бруцеллезе северных оленей.

Разработаны и утверждены Ученым советом ЯНИИСХ рекомендации по профилактике и борьбе с бруцеллезом северных оленей в Республике Саха (Якутия).

Основные положения, выносимые на защиту;

- эпизоотология бруцеллеза северных оленей в тундровой зоне Республики Саха (Якутия);

- сравнительное испытание на северных оленях различных методов применения вакцин из штаммов Br.abortus 19, 82 и Br.suis 61 в пониженных дозах;

- метод дифференциальной диагностики бруцеллеза северных оленей, привитых вакцинами из штаммов Br. abortus 19 и 82 с использованием РИД с О-ПС антигеном;

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: ежегодных отчетах Ученых Советов Якутского научно-исследовательского института сельского хозяйства и Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (1995-1999 гг.);

- научно-практической конференции, посвященной году Арктики (Якутск,1998 г.);

- научно-практической конференции по туберкулезу и бруцеллезу животных в регионе Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1999 г.);

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

6. ВЫВОДЫ

1. Эпизоотический процесс бруцеллёза домашних оленей в тундровой зоне формируется и развивается под влиянием естественно-географических, организационно-хозяйственных и других факторов, из которых превалирующее значение имеют природные очаги бруцеллёза (дикие северные олени). При этом инфекция имеет широкое распространение, носит природно-очаговый характер и за счет этого постоянно поддерживается напряженность эпизоотического процесса.

2. В тундровой зоне Якутии оздоровление неблагополучных по бруцеллёзу стад оленей возможно только при применении средств специфической профилактики (вакцины из штаммов 19 и 82), особенно, в стадах контактирующих с дикими северными оленями, пораженность которых бруцеллёзом иногда достает до 25 и более процентов.

3. Вакцина из штамма Br. suis 61 при разных методах её применения вызывает у северных оленей иммунитет, не уступающий по напряженности иммунитету создаваемому вакциной из штамма Br. abortus 19.

4. Экспериментальные исследования по испытанию РИД с О-ПС антигеном показали, что эта реакция является высокоспецифичной и выявляет животных с высокими показателями РА и РСК. Появившись через 1-3 недели РИД остается стабильно положительной до конца срока наблюдения (60 дней) у всех однажды среагировавших северных оленей.

5. Изучение РИД с О-ПС антигеном в неблагополучном по бруцеллёзу хозяйствах на вакцинированном поголовье северных оленей показало, что РИД является специфической реакцией, но по своей чувствительности она уступает диагностическому комплексу РА + РСК.

6. РИД с О-ПС антигеном следует применять в целях ранней (2 мес.) поствакцинальной дифференциальной диагностики серологических реакций и контроля за эпизоотическим состоянием стад оленей, оздоравливаемых с помощью вакцин из штаммов Br. abortus 19 и 82.

7. Использование РИД с О-ПС антигеном в комплексе РА = РСК и специфической профилактики с применением вакцин из штаммов Br. abortus 19, 82 и Br. Suis 61 в стационарно неблагополучных по бруцеллёзу стадах позволяет ослабить напряженность эпизоотического процесса и в течение 20-24 месяцев создать реальные предпосылки для их оздоровления.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты проведенных исследований нашли отражение в следующих нормативно-технических документах, утвержденных на российском и республиканском уровнях:

- Методические рекомендации « Модифицированные методы серологической диагностики при бруцеллёзе северных оленей и крупного рогатого скота » (Утверждены Учёным Советом ЯНИИСХ 10. 10. 96 г.) ;

- «Временное наставление по применению реакции иммунодиффузии (РИД) с О-полисахаридным антигеном при диагностике бруцеллёза северных оленей (в порядке широкого производственного испытания)» (Утверждено Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ № 13-7 -2/1305 от 03. 04. 98 г.);

- Методические рекомендации «Мероприятия по профилактике и борьбе с бруцеллёзом северных оленей в Республике Саха (Якутия).» (Утверждены Ученым советом ЯНИИСХ от 28 декабря 1999 г.)