Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эпизоотологический и микробиологический скрининг болезней репродуктивных органов коров в условиях Среднего Поволжья

На правах рукописи

Гордеева Ирина Викторовна

Эпизоотологический и микробиологический скрининг болезней репродуктивных органов коров в условиях Среднего Поволжья (микробиоценозы и их коррекция)

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Н. Новгород - 2005 г.

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и биотехнологии ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия», в хозяйствах и госветучреждениях Нижегородской области.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Григорьева Г.И.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Ким P.E.

доктор ветеринарных наук Еремин C.IL

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана»

Защита состоится «25» ноября 2005 г. в 10 часов на заседании Диссертационного совета Д 220.047.02 при ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» (603107, г. Н. Новгород, пр. Гагарина, 97)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НГСХА (603107, г. Н. Новгород, пр. Гагарина, 97)

Автореферат разослан «14» октября 2005 года

Ученый секретарь диссертационного совета, /Г\

доктор биологических наук, профессор __^ Н.Г. Горчакова

ДОЙ-Ч ZW ¿00*

------3

<SO*\~^Актуальность темы На современном этапе повсеместное вмешательство людей в окружающую природу стало носить особенно интенсивный и, как правило, негативный характер. Массированное загрязнение окружающей среды под действием техногенного прессинга привело к очень серьезным изменениям естественных биоценозов на всех уровнях, в том числе микробиоценозов как человека, так и животных [Григорьева Г.И. и др., 2003]. В этих условиях одной из важнейших задач животноводства является обеспечение населения страны безопасными и качественными продуктами питания, а следовательно все большее значение приобретают проблемы поддержания здоровья продуктивных животных с применением альтернативных, экологических методов физиологической коррекции [Сидоров М.А., Субботин В.В., Данилевская Н.В., 2000].

Известно, что значительную роль в недополучении продукции в молочном скотоводстве занимает бесплодие в результате высокой заболеваемости коров акушерско-гинекологическими болезнями. Доминирующую роль в струк!уре болезней репродуктивных органов играют эндометриты и маститы коров. Отсутствие, в условиях хозяйств, анализа этиологических факторов данных патологий обуславливает их неадекватное лечение антибиотиками, что в 50-70% случаев означает переход болезни в хронические и субклинические формы [Полянцев Н.И., Синявин А.Н., 1985, Порфирьев И.А., 2002].

Несмотря на множество сопутствующих и предрасполагающих факторов, основным этиологический агентом в развитии маститов и эндометритов крупного рогатого скота большинство современных отечественных и зарубежных ученых считают патогенную и условно -патогенную микрофлору [Михайлов H.H., 1983, Аминов С.А. и др., 1991, Попов Л.К., Смаган H.H., Попов Ю.Л.,1998 и др.]. При этом, в большинстве случаев заболевания вызывают не монокультуры, а ассоциации микроорганизмов, что рассматривается как следствие бескош рольного применения антибиотиков.

Необходимость раскрытия этиологической значимости бактериальных агентов в этиопатогенезе воспалительных заболеваний репродуктивных органов коров, а также поиск эффективных и безвредных меюдов коррекции микробиоценозов как способов лечения, способствующих при этом продовольственной безопасности продукции животноводства, определило актуальность направлений наших исследований. Цель работы: Изучить роль и место болезней репродуктивных органов (эндометритов и маститов) в нозологическом профиле патологии крупного рогатого скота в условиях Среднего Поволжья, а также определить этиологическое значение микробиоценозов в их формировании и на этой основе научно обосновать и разработать подходы к лечению больных животных с учетом получения от них экологически безопасной продукции более высокого качества.

mf-v

UTFKA

'weebypr

к

АЛЬИАЛ

Задачи исследования:

- Изучить роль и место болезней репродуктивных органов коров в нозологическом профиле суммарной патологии крупного рогатого скота в условиях пригородной зоны конкретного субъекта Федерации;

- В сравнительном аспекте и динамике изучить качественный и количественный состав маточно-цервикальных микробиоценозов при острых, хронических и субклинических формах эндометритов;

- Изучить микробный пейзаж секрета молочной железы при остром течении воспалительного процесса;

- Изучить терапевтическую эффективность мероприятий с применением пробиотических бактерийных и бакгериофаговых препаратов при лечении коров с острыми гнойно-катаральными эндометритами и электромагнитного излучения мм-диапазона при острых гнойно-катаральных маститах Научная новизна исследований. Впервые в сравнительном аспекте с прменением современных методов изучен качественный и количественный состав маточно-цервикальных микробиоценозов коров в норме и при различном течении эндометрита. Получены данные о связи между микробиоценозами, обуславливающими формирование патологичекого процесса в генитальном тракте коров и возникновением мастита. Обоснована неогьемлемая роль определенных видов бактерий в этиопатогенезе данных заболеваний. Впервые определено положительное влияние пробиотических и бактериофаговых препаратов на структуру микробиоценоза генитального тракта коров и установлена их высокая терапевтическая эффективность при остром гнойно-катаральном эндометрите. Впервые проведены исследования влияния действия электромагнитного излучения мм-диапазона на молочную железу коров при остром гнойно-катаральном мастите.

Практическая значимость работы. Установленная этиоло1 ическая роль патогенной и условно-патогенной микрофлоры в возникновении эндометритов и мастита коров диктует необходимость широкого внедрения в ветеринарную практику микробиологических исследований по выделению и идентификации бактериальных агентов при данных болезнях Показана терапевтическая эффективность альтернативных методов лечения эндометрита и мастита коров с включением бактерийных препаратов, способствующих повышению экологической чистоты и безопасности животноводческой продукции. Положения выносимые на защиту:

1. Эндомегриты и маститы - главная составляющая акушерско-гинекологической патологии коров в хозяйствах Среднего Поволжья.

2. Микробиоценозы репродуктивных органов коров являются одним из определяющих этиологических факторов развития эндометритов и маститов.

3. Применение пробиотических бактерийных и бактериофаговых препаратов служит эффективным методом альтернативного лечения коров с воспалительными заболеваниями репродуктивных органов.

Апробация работы: Результаты исследований доложены и обсуждены на международном симпозиуме «Стратегия развития сельского и лесного хозяйства, сферы услуг в РФ и мире» (Н.Новгород, 2003 г.), на научной конференции по итогам НИР за 2001-2003 гг. (Н.Новгород, 2004 г.), на Первой международной науч.-пр. конференции «Медбиотек-2005. Биологические и медицинские технологии: от научных результатов к инновационным разработкам» (Москва, 2005), на региональной науч.-пр. конференции «Научные основы повышения продуктивности животных и качества животноводческой продукции» (Н.Новгород, 2005) на заседании методической комиссии и Совета ветеринарного факультета НГСХА (2003,2004,2005 гг.), на межкафедральном заседании НГСХА (2005г.). Материалы диссертации опубликованы в 7 научных статьях. Пути реализации: Результаты исследований могут быть использованы при разработке научно-обоснованных систем управления здоровьем маточного поголовья крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах с различной технологией и формой собственности.

Внедрение: Результаты исследований под авторским надзором с положительным эффектом внедрены в хозяйствах и госветучреждениях Нижегородской области, а также в учебный процесс НГСХА. Структура диссертации: Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения их результатов, выводов, практических предложений. Диссертация изложена на 193 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 33 таблицами и 42 рисунками. Список использованной литературы включает 221 наименование, в том числе 56 иностранных авторов.

Собственные исследования Материалы, методы и объемы исследований Работа проводилась на кафедре микробиологии, вирусологии и биотехнологии ФГОУ ВПО Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии, а также на базе опытного хозяйства на территории Нижегородской области.

Для проведения эпизоотологического скрининга и составления нозологических профилей акушерско-гинекологической патологии крупного рогатого скота в изучаемом регионе, проанализировали и статистически обработали:

-статистические ветеринарные обзоры и отчеты Управления ветеринарии Богородского района Нижегородской области за 2001-2005 гг;

-результаты лабораторных (бактериологических, серологических, молекулярно-биологических) и клинико-эпизоотологических исследований при диагностике урогеиитальных инфекций крупного рогатого скота в опытном хозяйстве за 2001-2005 гг.

Установление роли микробного фактора в этиологии воспалительных заболеваний эндометрия и маститов у коров проводили путем микробиологического скрининга микробиоценозов генитального тракта и молочной железы. Микробиологическому исследованию подверглись пробы

маточно-цервикальной слизи от коров с острыми, хроническими и субклиническими формами эндометритов, а также молоко от животных с острой формой течения маститов.

Предварительный диагноз на острый гнойно-катаральный эндометрит базировался на данных анамнеза, общего клинического исследования, вагинального и ректального исследований [Полянцев Н.И., Синявин А.Н., 1985], субклинический и хронический эндометрит диагностировали с помощью ложки Б.Г. Панкова [Панков Б.Г., Жаров А.В., Соколова Н.А., 2001]. Предварительный диагноз на мастит ставили согласно «Наставлению по диагностике, терапии и профилактике мастита у коров» [Минсельхозпрод России № 13-5-2/1948 от 30.03.2000].

Состояние микробиоценозов репродуктивных органов коров оценивали по качественному и количественному составу микрофлоры, выделенной из образцов маточно-цервикальной слизи и секрета молочной железы.

Микробиологические исследования проводили по методике И.Н. Блохиной и К.Я. Соколовой (1990,1999,2004) в собственной модификации, а также с использованием «Методических указаний по применению унифицированных микробиологических (бактериологических) методов исследования в клинико-диагностических лабораториях: Приложение 1 к приказу Минздрава СССР № 535».

Для исследования на аэробную и факультативно-анаэробную микрофлору, а также для идентификации бифидобактерий и лактобацилл готовили серию десятикратных разведений (конечное разведение 10'9). Полученные разведения засевали на следующие плотные питательные среды: 5% кровяной мясо - пептонный агар, среду Сабуро, среду Эндо, желточно-солевой агар, среду Блаурока (для бифидобакгреий), среду МРС-2 (для лактобацилл). Посевы инкубировали в термостате при 37°С. Для количественной характеристики микрофлоры проводили подсчет выросших колоний (КОЕ) каждого типа с пересчетом на 1 мл исследуемого секрета.

Культуры грамотрицательных бактерий идентифицировали с использованием тест-систем СИБ (системы индикаторные бумажные для идентификации энтеробактерий, филиал ФГУП НПО «Микроген» фирма «ИмБио», г. Нижний Новгород) или ПБДЭ (пластина биохимическая дифференцирующая энтеробактерий, НПО «Диагностические системы», г.Нижний Новгород).

Бактерии рода Staphylococcus идентифицировали с помощью тест-системы ПБДС (пластина биохимическая дифференцирующая стафилококки, НПО «Диагностические системы», г. Нижний Новюрод), также ставили тест на наличие фермента плазмокоагулазы. При дифференциации патогенных стафилококков от сапрофитных видов учитывали: образование пигмента, гемолитическую активность, продуцирование коагулазы.

Видовую идентификацию бактерий рода Streptococcus проводили с помощью тест-системы СТРЕПТОтест-16 (фирма Lachema, Чехия).

Для микробиологического исследования на анаэробную микрофлору использовали комбинированный метод, основанный на сочетании химического метода и биологического методов (методы

микробиологического анализа неспорообразующих анаэробных бактерий. -М.: Лабинформ, 1996).

Для выявления бактерий рода Mycoplasma и Chlamydia в пробах маточно-цервикальной слизи использовали метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), которую проводили на базе лаборатории генетики Нижегородского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. И.Н. Блохиной МЗ РФ (зав.лаб. к.б.н. В.Н. Мазепа).

Чувствительность выделенных микроорганизмов к антибиотикам определяли качественным методом диффузии в агар (метод стандартных бумажных дисков). В качестве питательной среды использовали мясо-пептонный агар, рП 7,2 - 7,4. В работе были использованы диски со следующими антибиотиками: пенициллин, стрептомицин, тетрациклин, неомицин, канамицин, полимиксин, эритромицин.

Влияние электромагнитного излучения крайне высоких частот (ЭМИ КВЧ) на культуры оценивали по ингибированию или стимуляции роста клеток, с использованием прибора «IIOPT ЭЛМ/НН». Определение интенсивности роста проводили по принятому в бактериологии нефелометрическому методу, основанному на измерении свеюрассеяния бактериальной суспензии [Герхардт Ф., 1983].

Для сравнительной оценки способов лечения острых форм эндометритов с использованием препаратов пробиотиков и бактериофагов было сформировано 3 опытных группы (№1-№3) по 4 головы в каждой. В группах 1 и 2 противомикробные препараты - пробиотики и бактериофаги,-использовали в виде монотерании. В группе 3 лечение коров проводили сочетая пробиотические и фаговые препараты. В работе использовали пробиотические препараты бифидум- и лактобактерин и ассоциированный бактериофаг, который гоювили из коммерческих препаратов стафилококкового, колипротейного, синегнойного и интесги бактериофагов (филиал ФГУП НПО «Микроген» фирма «ИмБио», г. Нижний Новгород). В контрольной группе животных лечили традиционным для данного хозяйства методом с применением антибиотических средств (фуразолидоновые маточные суппозитории, стрептомицина су.тьфа! и др.антибиотики). При оценке терапевтической эффективности учитывали микробиолот ический эффект, сроки изчечения, кратность последующего осеменения и продолжи I ельность сервис - периода.

Для оценки эффективности лечения острых форм маститов с использованием ЭМИ КВЧ было сформировано 2 опытные и 1 контрольная группы.В опытных группах ЭМИ КВЧ (прибор ПОРТ-ЭЛМ/НН) применяли в качестве монотерапии и в сочетании с традиционной ашибиогикотерпией, Животные контрольной группы подвергались традиционному лечению (мастисан А, рифациклин). Эффективность оценивали по срокам излечения и количеству выздоровевших животных.

Статистическую обработку данных проводили с использованием алгоритмов статистического анализа, реализованных в Microsoft Exel 2000 с учетом рекомендаций по статистической обработке результатов биологических и медицинских исследований [Лшмарин И.П., Воробьев A.A., 1962,Мерков A.M., Поляков Л.Е., 1974].

Результаты исследований Эпизоотологический скрининг акушерско-гинекологической патологии крупного рогатого скота в изучаемом районе Отсутствие в условиях производства квалифицированной и своевременной диагностики заболеваний репродуктивных органов коров и соответственно их адекватного лечения, порождает широкое распространение этих патологий среди маючного поголовья хозяйств, и, как следствие, - увеличение доли болезней репродуктивных органов в общей заболеваемости скота.

Согласно принятой на сегодняшний день градации, болезни репродуктивных органов относятся к незаразной патологи. Для определения удельного веса паюлогии органов размножения в нозологическом профиле незаразных болезней крупного рогатого скота репродуктивного возраста изучили характер и структуру заболеваемости крупного рогатого скота на территории обследованного района. Нозоло1 ический профиль неинфекционной патологии КРС в изучаемом районе формируется из болезней органов дыхания, пищеварения, размножения, а также алиментарных отравлений и травм. Установили, что доля болезней органов размножения в нозологическом профиле незаразных болезней КРС составляет в среднем 45±1,3%. При этом, по данным ветеринарной отчетности опытного хозяйства, акушсрско-гинекологические патологии имеют 48,7-U,32% растелившихся коров, срсди которых 35,0±0,67% приходиться на острые воспалительные заболевания эндометрия, в 8,8+0,23% случаев переходящие в хронические и субклинические формы течения. Доминирующее положение в акушерско-гинекологической патологии коров занимают и воспаления молочной железы - маститы. Распространенность маститов среди маточною поголовья составила в клинической форме - 39,3+1,6%, а в субклинической (по данным отчетности) - от 4,6-8,6%.

Установили шкже, что в хозяйствах обследованного района от 2 до 20% акушерско-гинекологической патологии составляют аборты или рождение нежизнеспособных плодов. В опытном хозяйстве аборшрует до 16,5±1,8% всех стельных животных При этом, в результате традиционно проводимых исследований сыворотки крови абортирующих коров на бруцеллез, положительных результатов выявлено не было. Вместе с тем, единичные молекулярно-биологические исследования методом ПТ1Р (24 пробы в период с 2001-2004 гг) патологического материала (абортированных и мертворожденных плодов, а также маточно-цевикальной слизи от абортирующих коров) в 14,2% образцов подтверждали наличие в них бактерий родов Chlamydia и Mycoplasma. Результаты наших

исследований, проведенные методом ПЦР, также выявили бактерии родов Chlamydia и Mycoplasma в составе маточно-цервикальных микробиоценозов коров с хроническим и субклиническим течением эндометрита. Очевидно, что в опытном хозяйстве имеет место циркуляция этих высоко вирулентных и резистентных к факторам окружающей среды (антибиотикорезистентность) микроорганизмов. Данное обстоятельство, по нашему мнению, может обуславливать как длительное и безуспешное лечение острых эндометритов и маститов и их переход в хронические и субклинические формы, так и высокую инцидентность абортов среди маточного поголовья в опытном хозяйстве.

Микробиологический скрининг при воспалительных заболеваниях эндометрия и молочной железы у коров Для установления роли отдельных инфекционных возбудителей в этиологической структуре и развитии акушерско-гинекологических патологий у коров в послеродовом периоде провели исследование мат очно-цервикальных микробиоценозов животных следующих групп: с острым течением эндометрита (п=14); с хроническим течением эндометрита (п=10); с субклиническим течением эндометрита (п=6); клинически здоровых животных (п=10).

По данным литературы, микрофлора, обуславливающая развитие патологических процессов в эндометрии и молочной железе коров, представлена широким спектром микроорганизмов. При этом, в её составе преобладают полимикробные ассоциации со значительным удельным весом условно-патогенной микрофлоры. Это подтверждается и нашими исследованиями. В таблице 1 представлены основные показатели микробиоценозов внутренних половых органов клинически здоровых коров и при различных формах сечения эндометритов.

Таблица 1

Основные показатели микрпйиоп<-чоюв внутренних половых органов коров при __различных формах течения эндометритов

'реднее количество видов шкроор! анизмов. выделенных ич |дной пробы_____

показатель

)бщая микробная обсемененность. абс знач (КОЕ/мл), lg КОЕ/мл

Соотношение в микробиоценотах рам+/грам- бактерии

Соотношение в микробиоценозах эробные/анаэробные бактерии

Форма течения эндометрита

острый п' 14

фонический п=10

6,3±0,4

9,9x10' 9,99±0,59

1,9 1

7,3 1

•убклинич п=6

5,3+0,4

5,7x107 7,75±0,45

1,4 1

4,2 1

здоровые животные п=10

5,1 ±0,5

1,2x107 7,07±0,57

2,5 1

5,1:1

2,7-1-0,5

9,9x105

5,99±0,91

2,6-1

1,3 1

п-количество исследованных образцов маточно-цервикального содержимого

Как следует из табл. 1, воспалительные процессы в эндометрии во всех случаях сопровождаются нарушением качественного и количественного состава нормального маточно-цервикального биоценоза,

т.е. характеризуются состоянием выраженного дисбиоза. При этом, с развитием воспалшсльного процесса, маточно-цервикальные микробиоценозы характеризовались изменением соошошения аэробных и анаэробных бактерий. Так, в патологических биоценозах преобладали ajpoGHbie микроорганизмы, в то время как нормофлора содержала больше анаэробных бактерий (в основном за счет лакто- и бифидобактерий). По сравнению с образцами от здоровых коров, патологические микробиоценозы характеризовались и изменением соотношения 1рам «+» грам «-» бактерий. Образцы патологического маточно-цервикального содержимого, за счет обильного видового разнообразия микроорганизмов, характеризовались более высоким удельным весом грамотрица1ельных бактерий, в то время как грам «+» бактерий было меньше, по сравнению с образцами от клинически здоровых коров, в 1,2-1,9 раза.

Характеризуя качественный cocian маточно-цервикальных микробоценозов ири эндометритах, следует отметить, чго индигенную (собственную) микрофлору маточно-цервикального пространства у клинически здоровых животных составили молочно-кислые бактерии родов Bifidobacterium (73,5%) и Lactobacillus (4,2%), коагулазонегативным S xylosus (14,6%), а также 1рибы рода Candida (2,1%). Очевидно, чю данная ассоциация бактерий является нормофлорой для клинически здоровых коров в опытном хозяйстве. Представители семейства Enterobacteriaceae (Е coli, К. pneumoniae), а также Fusobacterium spp. и Bacillus spp. по своим количественным характеристикам были отнесены нами к группе транзиторной (остаточной) микрофлоры. Доля каждых из этих бактерий в общем микробном пейзаже маточного биоценоза составила в среднем менее 1% (Е coli - 0,51%, К. pneumoniae- 0,71%, Fusobacterium spp - 0,63% и Bacillus spp. - 0,14%).

Все исследованные нами патологические микробиоценозы характеризовались преобладанием в их составе грамположительных аэробных или факультативно-анаэробных бактерий, преимущественно родов Streptococcus и Staphylococcus.

Так, ocipyro форму течения эндометрита обуславливало наличие в маточном биоценозе патогенных St pyogenes (40,2%) и S aureus (18,3%). При этом значительной оказалась и доля коагулазонегативных условно-патогенных S epidermidis (11,9%), 5 xylosus (28,0%) и S hyicus (1,28%) Генигальные микробиоценозы при острой форме 1ечения характеризовались также прису1ствием 1ранзиторной флоры в количестве 0,12%. В её составе были иденшфицированы Р aeruginosa, Р vulgaris, Bacteroides spp., Е coli, К. pneumoniae, 1рибы рода Candida, Bacillus spp, Fusobacterium spp

Хронические и субклинические формы эндометритов возникают, как правило, на фоне неадекватно проведенного лечения острых эндометритов Данное обстоятельство означает дальнейшее персистирование в генитальном тракте патогенных и условно-патогенных бактерий, которые обуславливают эндогенную инфекцию и постоянную токсигенизацито

организма. Причиной этого является интенсивное распространение антибиотикоустойчивости бактерий.

Результаты наших исследований по изучению маточно-цервикальных микробиоценозов коров, имеющих хроническое и субклиническое течение эндометрита и леченых ранее традиционным в данном хозяйстве методом терпии, с применением антибиотических средств, также доказали наличие в их составе патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Так, хроническую форму течения эндометрита обуславливало присутствие в составе маточно-цервикального биоценоза патогенных, S. aureus (2,3%) и Р. aeruginosa (11,0%). Возросла также роль условно-патогенной микрофлоры - S. epidermidis (28,3%), S. xylosus (31,9%), Е. coli (12,7%) и К. pneumoniae (2,9%). Генитальные микробиоценозы коров с субклиническим течением эндометрита были также представлены совокупностью патогенных и условно-патогенных бактерий. Также как и в случае хронических эндометритов, в группе патогенных оказались S. aureus (18,2%) и Р aeruginosa (2,5%). В состав условно-патогенной микрофлоры вошли грибы рода Candida (21,2%), 5. xylosus (18,2%), Е. coli (14,3%) Bacillus spp., S. hyicus (7,5%), а также анаэробные Bacteroides spp. (7,5%).

Согласно некоторым исследователям, патогенная и условно-патогенная микрофлора генитального тракта коров, может обуславливать и развитие воспалительного процесса в молочной железе [Гудимова Т.Е. 1986, Распутина О.В., Шадрина М.Н. 2002 и др.]. Результаты наших исследований показали, что в структуре микрофлоры маститного молока 66,5% принадлежит патогенному St. dysgalactiae, а плазмокоагулирующий S. aureus имеет удельный вес в 2,2%. Условно-патогенная микрофлора (в порядке уменьшения их значимости в структуре микрофлоры) была представлена следующими видами: S. xylosus (9,7%), P. putrifaciens (9,6%), St uberis (4,67%), грибы рода Candida (4,65%). Остаточную или транзиторную флору представляли S. epidermidis (1,5%) и Е. coli (0,63%).

Сравнивая маточный микробиоценоз больных острым эндометритом коров и микрофлору маститного молока от животных с острым течением мастита, установили, что в обоих случаях структура микрофлоры представлена полибактериальными ассоциациями с преобладанием условно-патогенных микроорганизмов.

Таблицы 2 и 3 представляют основные показатели и качественный и количественный состав микробиоценозов генитального тракта и молочной железы коров при остро протекающих воспалительных заболеваниях -эндометрите и мастите.

Установили, что доминирующее положение в структуре микрофлоры соответствующих секретов как при эндометритах, так и при маститах, занимали бактерии рода Streptococcus. Так, при острых эндометритах преобладали St. pyogenes (40,2%), а при острых маститах - St dysgalactiae (66,8%). Род Staphylococcus оказался вторым по значимости в исследованных образцах. Необходимо отметить, что в обоих случаях нами

были обнаружены плазмокоагулирующий S aureus, S epidermidis и S. xylosus.

Таблица 2

Основнькпмотетмикртбиоценоодгеята

показатель Заболевание репродуктивных органов

Эндометрит' (п-!4) Маыит' (п=10)

Среднее количество видов микроорганизмов, выделенных из одной пробы 6,3±0,4 3,5±0,27

Суммарная микробная обсемененность" - абс.знач (КОЕ/мл); - КОЕ/мл 9,9x10* 9,99±2,59 7,6x107 7,88±2,54

Соотношение в микробиоценозах грам+/грам- бактерии 1,9:1 3 1

Соотношение в микробиоценозах аэробные/анаэробные бактерии 7,3-1 только аэробные

1-пробы маточною содержимого; 2-пробы секрета молочной железы

ТаблицаЗ

Качественный и количественный состав микрофлоры маточного содержимого и секрета молочной железы коров, при остропротекающем эндометрите и мастите_

! Структура микрофлоры % от суммарного ПМО )

Доминирующие виды (>5%)

Факультативная микрофлора (1 -5%)

Транзиторная микрофлора (<1%)

Вид патологии репродуктивных органов

эндометрит (п-14)

St. pyogenes (40,2%) S. xylosus (28,03%) S. aureus (18,3%) S. epidermidis (11,9%)

S. hyicus

E.coli, P. aeruginosa, P. vulgaris, K. pneumoniae, Bacillus spp., грибы рода Candida, Bifidobacterium spp., Bacteroides spp., Fusobacterium spp

мастит (n-10)

St dysgalactiae (66,9%) S. xylosus (9,7%) P. aeruginosa (9,7%)

St. uberis Грибы рода Candida S. aureus S epidermidis

E coli

ПМО -показатель суммарной обсемененности образцов

1-пробы маточного содержимого

2-пробы секрета молочной железы

Суммарное количество данных видов стафилококков было больше в образцах маточного содержимого, однако, ху1о$ш в обоих случаях являлся доминирующим видом в составе всей выделенной из образцов микрофлоры. Мы, считаем, что вышеприведенные данные указывают на существование взаимосвязи между патологическим процессом в I енитальном тракте коров и его определяющей роли в развитии мастита Данное предположение подтверждает и рассчитанный нами коэффициент

корреляции (г=0,94), который указывает на тесную прямую корреляцию между присутствием в составе микрофлоры S. aureus, S. epidermidis и S. xylosus, и наличием патологического процесса в эндометрии и молочной железе.

Применение бактерийных препаратов в терапии острых эндометритов и ЭМИ КВЧ при маститах у коров

В контексте актуальности поиска новых подходов лечения бактериальных инфекций, обеспечивающих в первую очередь продовольственную безопасность и экологическую чистоту продукции животноводства, провели изучение действия ряда биологических препаратов - бактериофагов и пробиотиков при острых эндометритах, а также метода воздействия ЭМИ КВЧ при острых маститах у коров. Применение данных видов лечения обосновали рядом опытов in vitro.

Так, выделенные нами патогенные St pyogenes, St. dysgalactiae, S. aureus, S. epidermidis и P.aeruginosa, при испытании их на чувствшельность к антибиотикам 7-ми различных классов, в большинстве случаев были восприимчивы лишь к препаратам пенициллинового ряда. В тоже время выделенные культуры S. aureus, S epidermidis, Р aeruginosa и Р vulgaris полностью лизировались коммерческими препаратами соответствующих бактериофагов - стафилококковым, синегнойным, колипротейным, интести Данное обстоятельство обусловило включение фаготерапии в производственные опыты по лечению острых эндометритов коров. Установили также и чувствительность патогенных культур S. aureus и P.aeruginosa к ЭМИ КВЧ. Под однократным воздействием данного вида облучения происходило ингибирование роста испытуемых культур в срсднсм на 1,7-2,2%. Результаты данного опьпа позволили предположить, что одним из механизмов многофакторного действия низкоинтенсивного излучения миллиметрового диапазона в животном организме может являться бактериостатический эффект.

Эффективность биологических методов терапии бактериальных инфекций репродуктивных органов коров изучили также в производственных опытах по лечению острых форм эндометритов и маститов. Испытали возможности пробиотических и фаговых препаратов в виде монотерпии и как сочетанное лечение при острых эндометритах коров. Микробиологические и хозяйственно-технологические показатели эффективности применения комплекса биологических препаратов при остром послеродовом эндометрите представлены в таблице 4.

Установили, что применение биологических препаратов как в виде монотерапии, так и при их комбинировании, способствует полной элиминации патогенных возбудителей в среднем к 11 дню с начала аппликации препаратов. Не зависимо от вида лечения, к 20-му дню с начала применения био-препаратов регистрировали восстановление и, в случае сочетанной терапии, улучшение показателей нормофлоры При этом, традиционно проводимая в хозяйстве терапия, с применением

Таблица 4

Характеристика микробиологических и хозяйственно-технологических показателей эффективности применения комплекса биологических препаратов при остром послеродовом эндометрите коров

Показатель Группы животных по видам лечения Клинически здоровые животные (n=10)

Традиционная терапия (п=4) Пробиотикн (n=4) Фаги (И) фаги+пробиотики (n=2)

Суммарная микробная обсемененность* (КОЕ/мл) 1,5x10" 2,2x10" 1,4x10" 1,08x10' 1,1x10"

Микробиологическое исслеледование маточьо-церникального содержимого Структура микробиоценоза - доминирующие виды (>5% от ПМО*) - факультативная микрофлора (1-5% от ПМО) - транзиторная микрофлора (<".% от ПМО) Fusobacterium spp S. hyicus St pyogenes S aureus S xylosus Bifidobacterium spp Lactobacillus spp Bifidobacterium spp Lactobacillus spp Bifidobacterium spp Lactobacillus spp Bacteroides spp Bifidobacterium spp S xylosus

Bacteioides spp P aeruginosa S. xylosus Bacteroides spp S xylosus Грибы рода Candida S xylosus Bacteroides spp Lactobacillus spp. Грибы рода Candida

Грибы рода Candida Bacilljs spp E. col Bacillus spp Грибы рода Candida Bacteroides spp Fusobacteium spp S. hyicus E coli Bacillus spp S hyicus Bacillus spp. E coli K. pneumoniae Fusobacteium spp

Сроки элиминации патогенных возбудителей (дни с начала лечения) - 7 20 7

Восстановление нормофлоры или улучшение ее показателей -кол-во ЪааоЬааНиз эрр. (% от ПМО) -кол-во Вфс1оЬас1егшт ¡рр (% от ПМО) ; + 79,1 16,8 + 55« 33,5 + 44,7 36,5 73,5 4,2

Хозяйствен-техноло!ич. показатели Сроки излечения, дни 16,5±1,55 7,5±0,40 7,0±0,25 6,5±0,35

Оплодотворяемость от первого осеменения - - - - -

Кратность последующих осеменений 4,2-t0,47 3,5±0,28 3,5±0,50 2,5±0,35 3,4±0,37

Продолжительность сервис-периода, дчи 112,0±5,56 59,2±12,70 68,0± 10,09 47,5±8,50 74,5±5,31

* - показатель суммарной микробной обсемененности

антибиотических средств, способствовала лишь снижению количества отдельных патогенных и условно-патогенных видов, но не полной их элиминации из генитального тракта. Так, в структуре маточно-цервикальной микрофлоры, после проведенной антибиотикотерапии, обнаруживали такие виды как Fusobacterium spp. (24,9%), S xylosus (18,8%), S hyicus (14,9%), St pyogenes (11,6%) и S. aureus (9,4%).

Согласно большому количеству публикаций, физиологически ценным компонентом микробиоценозов, считаются молочно-кислые бифидо- и лактобактерии. С этих позиций коррегирующее действие биологических препаратов на микробиоценозы оценивали также по преобладанию в их составах, после курса лечения, представителей родов Bifidobacterium и Lactobacillus.

Установили, что среднее количество лактобацилл (независимо от вида лечения) на 20-й день с начала аппликации био-препаратов составило 59,9±10,1%), а бифидобактерий - 28,9±6,1%, при этом в контрольной группе, предположительно в результате дисбиотического действия антибиотических средств, ни в одном случае не было обнаружено присутствия данных представителей нормальной флоры. Наиболее сбалансированное соотношение молочно-кислых лакто- и бифидобактерий (1,2:1) было зарегистрировано в группе, получавшей сочетанное лечение пробиотическими и фаговыми препаратами. В образцах от данной группы животных не выявляли также и условно-патогенной транзиторной микрофлоры, которая обнаруживалась в составе маточно-цервикальных микробиоценозов клинически здоровых животных, а также в группах, получавших пробиотические и фаговые препараты в виде монотерапии. Факультативную и транзиторную микрофлору маточно-цервикальных биоценозов в группах с монотерапией пробиотиками и фагами наиболее часто образовывали Bacillus spp, грибы рода Candida, Bacteroides spp, Fusobacteium spp. и 5 hyicus. Доля этих условно-патогенных микроорганизмов в составе исследованных маточно-цервикальных микробиоценозов составляла от 0,11% до 4,47%.

Для оценки эффективности проведенной терапии регистрировали также такие объективные показатели, как сроки выздоровления и восстановление воспроизводительной функции: кратность осеменения и продолжительность дней бесплодия (сервис-период). По сравнению с группой, где была проведена традиционная терапия, излечение происходило в среднем на 16,5±1,55 день, сроки излечения в опытных группах были достоверно редуцированы в 2,3 раза и составили от 6,5*0,35 до 7,5±0,40 дней. Наиболее короткие сроки излечения регистрировали в ipynne сочетанного лечения (6,5±0,35дня), а более продолжительные (7,5±0,25) - у животных, которым применяли пробиотические препараты в виде монотерапии.

Продолжительность дней бесплодия в опытных группах составила в среднем 55,5±6,4 суток, что превышает нормативные показатели (21 день),

однако меньше таковой в контрольных группах животных (традиционная терапия и клинически здоровые). Продолжительность сервис-периода у этих животных составила соответственно 74,5±5,31 и 112,0±5,56 дней.

Характеризуя восстановление воспроизводительной функции после проведенной терапии по показателю кратности осеменения отметили, что ни в одной из опытных и контрольных групп однократное покрытие не оказалось плодотворным. Однако, в опытных группах данный показатель составил в среднем 3,1±0,36, что ниже, чем в контрольных: 4,2+0,47 (традиционное лечение) и 3,4±0,37 (клинически здоровые).

Микробиологические и отдельные хозяйственно-технологические показатели, представленные выше, позволили сделать вывод о положительном терапевтическом эффекте биологических препаратов, проявляющемся в восстановлении, и, в отдельных случаях, улучшении воспроизводительной функции коров. Комбинированное применение препаратов пробиотиков и бактериофагов оказалось наиболее действенным среди испытанных методов

Основываясь на результатах опытов in vitro по изучению бактериостатического эффекта мм-излучения, провели серию экспериментов по определению возможности использования ЭМИ-КВЧ в системе терапевтических мероприятий при мастите коров. При лечении коров, больных острым гнойно-катаральным маститом, ЭМИ-КВЧ в виде монотерпии ни в одном случае желаемого терапевтического эффекта достугнуто не было. Несмотря на это, при ежедневном обследовании вымени было отмечено, что на 3-й сутки значительно уменьшились внешние проявления воспалительной реакции молочной железы - снизились отечность вымени и гиперемия кожи пораженных четвертей, уменьшилась болезненная реакция коров на прикосновении к коже и соскам. В связи с отсутствием положительного терапевтического эффекта лечение коров было продолжено средствами традиционной терапии. Сроки излечения коров во 2-й группе, где сочетали традиционную антибиотикотерпию и мм-излучение, составили 6,4-t0,35 суток, что в 1,2 раза меньше данного показателя в контрольной группе (7,8±0,64 дня). При этом, эффективность лечения в группе сочетанного применения ЭМИ-КВЧ и антибиотиков составила 90%, что на 4% выше, чем в контрольной группе.

Таким образом, наиболее эффективным оказалось сочетанное применение миллиметрового излучения и средств традиционной терапии мастита. Данное обстоятельство позволяет говорить об определенной целесообразности применения ЭМИ-КВЧ в комплексном лечении и в перспективе - в профилактике воспалительных процессов в молочной железе. Однако это требует дальнейшего изучения.

Адекватно результатам проведенной работы разработали схему-модель эпизоотологического надзора при болезнях репродуктивных органов крупного рогатого скота, и в частности при эндометритах и маститах коров

и схему-модель микробиологической коррекции организма коров с

использованием бактерийных препаратов.

Выводы

1. Послеродовая акушерско-гинекологическия патология маточного поголовья крупного рогатого скота в условиях Среднего Поволжья имеет широкое распространение, а неадекватное лечение, в том числе и антибиотическими средствами, способствует хронизации патологического процесса, снижению продуктивных возможностей, качества и безопасности животноводческой продукции.

2. В структуре акушерско-гинекологической патологии коров в условиях Среднего Поволжья доминируют эндометриты и маститы. Острыми эндометритами переболевает 50,68±1,34% всех растелившихся животных, а хронические и субклинические формы регистрируются у 1 1,55а0,57% маточного поголовья.

3. Магочно-цервикальный микробиоценоз клинически здоровых коров в основном сформирован бифидобактериями (73,5%), коагулазоотрицательным стафилококком S xylosus (14,6%), лактобактериями (4,2%), анаэробными микроорганизмами Racteroides spp. (2,9%) и грибами рода Candida (2,1%).

4. Эндометриты коров, как правило, развиваются на фоне нарушения микроэкологии генитального тракта и формирования полимикробных ассоциациаций из патогенных и условно-патогенных бактерий при резком уменьшении (до полного отсутствия) количества лакто- и бифидобактерий.

4.1 При эндометритах в машчно-цервикальиой микрофлоре доминируют полимикробные ассоциации патогенных и условно-патогенных бактерий В состав патогенной флоры вошли- при острой форме течения - St pyogenes (40,2%), S аигеич (18,3%) и Р vulgaris (0,01%), при хронической - P. aeruginosa (11,0%) и S aureus (2,3%), при субклинической - Р aeruginosa (2,5%) и S aureus (18,2%). Условно-патогенную микрофлору независимо от формы течения эндометрита формировали S. epidermidis, S. xylosus, грибы рода Candida, а также анаэробные Bacteroides spp и Fusobacterium spp. С течением воспалительного процесса наблюдалось увеличение количества условно-патогенной микрофлоры и доли в её составе грамотрицательных бактерий.

4.2 Установлена множественная антибиотикорезистснтность патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, выделенных при различных формах течения эндометритов, что является одним из факторов перехода острых форм в хронические и субклинические.

4 3 У коров при хроническом и субклиническом течении эндометритов методом молскулярно-генетических исследований (ПЦР) установлено присутствие бактерий родов Mycoplasma и Chlamydia, имеющих этиологическое значение в формировании данной патологии.

5. Важным этиологическим фактором маститов коров являются полимикробные ассоциации, формирующиеся в молочной железе: острые формы маститов коров сопровождаются появлением и развитием в тканях молочной железы патогенной (St. dysgalactiae (60,6%), S aureus (2,2%)) и условно-патогенной (S aureus, S epidermidis. S. xylosus, Candida spp.) микрофлоры.

6. Между присутствием в составе микрофлоры генитального тракта и молочной железы отдельных видов микроорганизмов (S aureus, S epidermidis и S xylosus) и развитием в них воспалительного процесса установлена тесная прямая корреляция (коэффициент корреляции г=+0,94).

7. Установлена высокая терапевтическая эффективность пробиотических бактерийных и бактериофаговых препаратов при лечении коров с острыми гнойно-катаральными эндометритами, обусловленная улучшением и нормализацией микробиоценозов генитального тракта.

6.1 Применение пробиотических препаратов сокращает срок лечения до 7,5+0,4 дня (в контроле 16,5-1-1,5), сервис-периода до 59,7+12,7 дней (в контроле-112,0+5,5), кратность осеменения составила 3,5+0,3 (в контроле 4,2±0,4).

6.2 Бактериофаготерапия сокращает срок лечения до 7,0+0,2 дня (в контроле 16,5+1,5), сервис-периода до 68,7+10,0 дней (в контроле-112,0+5,5), кратность осеменения составила 3,5+0,5 (в контроле 4,2±0,4).

6.3 Комплексное лечение больных животных с применением пробиотических и бактериофаговых препаратов укорачивает срок лечения до 6,5+0,3 дня (в контроле 16,5+1,5), сервис-периода до 47,5+8,5 дней (в контроле 112,0+5,5), кратность осеменения составила 2,5+0,3 (в контроле 4,2+0,4).

8. Включение ЭМИ-КВЧ миллиметрового диапазона (в тестовом режиме) в комплексное лечение коров при маститах способствует сокращению сроков лечения (в 1,2 раза) и повышает эффективность лечения (на 4%).

Практические рекомендации производству

1. Схема-модель основных компонентов эпизоотологического надзора при болезнях репродуктивных органов коров, и в частности, при эндометритах и маститах.

2. Комплексная система по профилактике и лечению болезней репродуктивных органов коров в сухостойный и послеродовой период в условиях специализированных животноводческих хозяйств.

3. Схема-модель микробиологической коррекции организма коров с использованием бактерийных препаратов.

4. Система контроля за качеством противоэпизоотических мероприятий лечебно-профилактических мероприятий при эндометритах и маститах коров.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Гордеева, И.В Роль микрофлоры в возникновении маститов коров и возможности КВЧ и фаготерапии при воспалительных заболеваниях вымени / И.В. Гордеева, О.В.Андронов, Г.И. Григорьева // Инфекционные и инвазионные болезни животных в современных условиях. Материалы н.-пр. конференции по итогам НИР НГСХА за 2001-2004 п. 18-19 марта 2004 г. Нижний Новгород. - Н. Новгород: Изд. Ю.А. Николаев, 2005. -С. 271-274

2. Гордеева, И.В. Физиологическая коррекция микроэкологии организма животного как путь обеспечения продовольственной безопасности / Г.И Григорьева, И.В. Гордеева, О.В. Андронов и др. // Актуальные вопросы экологической безопасности сельского и лесного хозяйства. Материалы междунар. симпоз.: Стратегия развития лесного и сельского хозяйства, сферы услуг в РФ и мире 3-5 ноября 2003г., Нижний Новгород-М.: ООО «Ветеринарный консультант». Н. Новгород, Изд. Ю А Николаев, 2004. -С. 112-121.

3 Гордеева, И.В. Мастит ассоциированные стрептококки в патогенезе мастита крупного рогатого скота в условиях промышленного скотоводства / О.В Андронов, И.В. Гордеева, Н.М. Ботникова и др. // Инфекционные и инвазионные болезни животных в современных условиях: Материалы н.-пр. конференции по итогам НИР НГСХА за 2001-2004 гг. 18-19 марта 2004 г. Нижний Новгород. - Н. Новгород: Изд. Ю.А. Николаев, 2005. -С. 105-109.

4. Гордеева, И.В. Перспективы применения бактериофагов в ветеринарной практике / И.В. Гордеева, О.В. Андронов, Н.М. Ботникова, Г.И. Григорьева // Инфекционные и инвазионные болезни животных в современных условиях Материалы н.-пр. конференции но итогам НИР НГСХА за 2001-2004 гг. 18-19 марта 2004 г. Нижний Новгород. - Н. Новгород: Изд Ю.А. Николаев, 2005. -С. 130-133.

5. Гордеева, И.В. Использование обработки вымени коров низко интенсивным электромагнитным излучением в лечебно-профилактических мероприятиях при маститах коров и повышении качества молока / О.В. Андронов, Е.В. Андронов, И.В. Гордеева и др. // Научные основы повышения продуктивности животных и качества животноводческой продукции. Материалы региональной н -пр. конференции, Н.Новгород НГСХА, 2005 г- С. 180-184.

6. Гордеева, И.В. Коррекция микроэкологии организма животного - реальный путь повышения ветеринарного и хозяйственного благополучия / Г.И. Григорьева, В.В. Семьяшов, ИВ. Гордеева и лр. // Вестник РАЕН Нижегородское отделение -М,-ННоигарод-2005 - №.-С. 75-80.

7. Гордеева, И.В Электромагнитное излучение крайне высоких частот (ЭМИ-КВЧ) низкой интенсивности как метод нормализации гомеостаза вымени коров / М.А Кревский., О.В. Андронов, И.В. Гордеева и др. // Биологические и медицинские технологии: от научных результатов к инновационным разработкам» (Москва, 2005). Материалы Первой междунар. н.-пр. конференции «Медбиотек-2005», 3-4 марта 2005 г.-М., 2005 .

Гордеева Ирина Викторовна

Эпизоотологический и микробиологический скрининг болезней репродуктивных органов коров в условиях Среднего Поволжья (микробиоценозы и их коррекция)

А втореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Компьютерный набор и верстка Пашкина Ю.В. *

Корректор О.Ф. Костина Лицензия ЛР №040284 от 06.05.98 г.

Подписано в печать «29» сентября 2005 г. Формат 60/84 1/16. Печать офсетная. Бумага офсетная. Усл.печ.л. - 1,0. Тираж - 100 экз. Заказ №299

Типография НГСХА, 603107, Н.Новгород, пр.Гагарина, 97

1

г

i

It

î !

I i

*

s

Í

i í

с i

i

/ I i

A

)

S

I

!

»

i

f (

РНБ Русский фонд

2007-4 8075

чл

4>J

31 ЯНВ 2006

На современном этапе повсеместное вмешательство людей в окружающую природу стало носить особенно интенсивный и, как правило, негативный характер. Массированное загрязнение окружающей среды под действием техногенного прессинга привело к очень серьезным изменениям естественных биоценозов на всех уровнях, в том числе микробиоценозов как человека, так и животных. Как показано многочисленными исследованиями, это привело к истощению адаптационных и компенсаторных механизмов живого организма, возникновению иммунодефицитных состояний, широкому распространению множественной лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных заболеваний, неадекватным реакциям на внедрение чужеродной информации, как внешней, так и внутренней, и как следствие, - несостоятельности живого организма поддерживать гомеостаз естественным путем, т.е. - болезням [12,35,36].

В этих условиях одной из важнейших задач животноводства является обеспечение населения страны безопасными и качественными продуктами питания, а следовательно, все большее значение приобретают проблемы поддержания здоровья продуктивных животных с применением альтернативных, экологических методов физиологической коррекции [138]. Вместе с тем, качество и безопасность животноводческой продукции определяет, в конечном итоге, рентабельность и конкурентоспособность сельскохозяйственных предприятий.

Учитывая актуальность проблемы, в последние годы ведется активный поиск новых препаратов, схем и способов лечения бактериальных инфекций продуктивных животных. Особое внимание уделяется изучению микробиоценозов животного организма и установлению их роли в поддержании здоровья. Многочисленные результаты исследований микробиоценозов различных органов и полостей организма (преимущественно желудочно-кишечного тракта человека) показали многофункциональность нормальной микрофлоры и ее немаловажное значение в поддержании гомеостаза [45,141,146].

Известно, что значительную роль в недополучении продукции в молочном скотоводстве занимает бесплодие в результате высокой заболеваемости коров акушерско-гинекологическими болезнями. Доминирующую роль в структуре болезней репродуктивных органов играют эндометриты и маститы коров. Отсутствие, в условиях хозяйств, анализа этиологических факторов данных патологий обуславливает их неадекватное лечение, что в 50-70% случаев означает переход болезни в хронические и субклинические формы [122,125,130]. Несмотря на множество сопутствующих и предрасполагающих факторов, основным этиологическим агентом в развитии маститов и эндометритов крупного рогатого скота большинство современных отечественных и зарубежных ученых считают патогенную и условно - патогенную микрофлору. При этом, в большинстве случаев заболевания вызывают не монокультуры, а ассоциации микроорганизмов, что также рассматривается как следствие бесконтрольного применения антибиотиков [31,34,117, 173,185].

Установлено, что антибиотикотерпия действуя не только на патогенную, но и на полезную микрофлору, является для животного мощным дисбиозным и стимулирующим селекцию антибиотико-резистентных штаммов, а для потребителя снижающим качество продукции фактором. В связи с этим в клиническую практику все чаще стали внедряться бактерийные препараты, в частности пробиотики и бактериофаги, - обладающие не только антагонистическим действием по отношению к патогенным бактериям, но и оздоравливающих аутомикрофлору животного организма [35,36,45,138,141,146].

Необходимость раскрытия этиологической значимости бактериальных агентов в этиопатогенезе воспалительных заболеваний репродуктивных органов коров, а также поиск эффективных и безвредных методов коррекции микробиоценозов как способов лечения, способствующих при этом продовольственной безопасности продукции животноводства, определило актуальность направлений наших исследований.

Цель работы: Изучить роль и место болезней репродуктивных органов (эндометритов и маститов) в нозологическом профиле патологии крупного рогатого скота в условиях Среднего Поволжья, а также определить этиологическое значение микробиоценозов в их формировании и на этой основе научно обосновать и разработать подходы к лечению больных животных с учетом получения от них экологически безопасной продукции более высокого качества.

Задачи исследования:

- Изучить роль и место болезней репродуктивных органов коров в нозологическом профиле суммарной патологии крупного рогатого скота в условиях пригородной зоны конкретного субъекта Федерации;

- В сравнительном аспекте и динамике изучить качественный и количественный состав маточно-цервикальных микробиоценозов при острых, хронических и субклинических формах эндометритов;

- Изучить микробный пейзаж секрета молочной железы при остром течении воспалительного процесса;

- Изучить терапевтическую эффективность мероприятий с применением пробиотических бактерийных и бактериофаговых препаратов при лечении коров с острыми гнойно-катаральными эндометритами и электромагнитного излучения мм-диапазона при острых гнойно-катаральных маститах.

Научная новизна исследований. Впервые в сравнительном аспекте с применением современных методов изучен качественный и количественный состав маточно-цервикальных микробиоценозов коров в норме и при различном течении эндометрита. Получены данные о связи между микробиоценозами, обуславливающими формирование патологичекого процесса в генитальном тракте коров, и возникновением мастита. Обоснована неотъемлемая роль определенных видов бактерий в этиопатогенезе данных заболеваний. Впервые определено положительное влияние пробиотических и бактериофаговых препаратов на структуру микробиоценоза генитального тракта коров и установлена их высокая терапевтическая эффективность при остром гнойно-катаральном эндометрите. Впервые проведены исследования действия электромагнитного излучения мм-диапазона на молочную железу коров при остром гнойно-катаральных мастите.

Практическая значимость работы. Установленная этиологическая роль патогенной и условно-патогенной микрофлоры в возникновении эндометритов и мастита коров диктует необходимость широкого внедрения в ветеринарную практику микробиологических исследований по выделению и идентификации бактериальных агентов при данных болезнях. Показана терапевтическая эффективность альтернативных методов лечения эндометрита и мастита коров с включением бактерийных препаратов, способствующих повышению экологической чистоты и безопасности животноводческой продукции.

Апробация работы: Результаты исследований доложены и обсуждены на международном симпозиуме «Стратегия развития сельского и лесного хозяйства, сферы услуг в РФ и мире» (Н.Новгород, 2003 г.), на научной конференции по итогам НИР за 2001-2003 гг. (Н.Новгород, 2004 г.), на Первой международной науч.-пр. конференции «Медбиотек-2005. Биологические и медицинские технологии: от научных результатов к инновационным разработкам» (Москва, 2005), на региональной науч.-пр. конференции «Научные основы повышения продуктивности животных и качества животноводческой продукции» (Н.Новгород, 2005) на заседании методической комиссии и Совета ветеринарного факультета НГСХА (2003,2004,2005 гг.), на межкафедральном заседании НГСХА (2005г.). Материалы диссертации опубликованы в 7 научных статьях.

Положения выносимые на защиту:

1. Эндометриты и маститы — главная составляющая акушерско-гинекологической патологии коров в хозяйствах Среднего Поволжья.

2. Микробиоценозы репродуктивных органов коров являются одним из определяющих этиологических факторов развития эндометритов и маститов.

3. Применение пробиотических бактерийных и бактериофаговых препаратов служит эффективным методом альтернативного лечения коров с воспалительными заболеваниями репродуктивных органов.

Пути реализации: Результаты исследований могут быть использованы при разработке научно-обоснованных систем управления здоровьем маточного поголовья крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах с различной технологией и формой собственности. Внедрение: Результаты исследований под авторским надзором с положительным эффектом внедрены в хозяйствах и госветучреждениях Нижегородской области, а также в учебный процесс НГСХА. Структура диссертации: Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения их результатов, выводов, практических предложений. Диссертация изложена на 193 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 33 таблицами и 42 рисунками. Список использованной литературы включает 221 наименование, в том числе 56 иностранных авторов.

Выводы

1. Послеродовая акушерско-гинекологическая патология маточного поголовья крупного рогатого скота в условиях Среднего Поволжья имеет широкое распространение, а неадекватное лечение, в том числе и антибиотическими средствами, способствует хронизации патологического процесса, снижению продуктивных возможностей, качества и безопасности животноводческой продукции.

2. В структуре акушерско-гинекологической патологии коров в условиях Среднего Поволжья доминируют эндометриты и маститы. Острыми эндометритами переболевает 50,68±1,34% всех растелившихся животных, а хронические и субклинические формы регистрируются у 11,55±0,57% маточного поголовья.

3. Маточно-цервикальный микробиоценоз клинически здоровых коров в основном сформирован бифидобактериями (73,5%), коагулазоотрицательным стафилококком S. xylosus (14,6%), лактобактериями (4,2%), анаэробными микроорганизмами Bacteroides spp. (2,9%) и грибами рода Candida (2,1%).

4. Эндометриты коров, как правило, развиваются на фоне нарушения микроэкологии генитального тракта и формирования полимикробных ассоциаций из патогенных и условно-патогенных бактерий при резком уменьшении (до полного отсутствия) количества лакто- и бифидобактерий.

4.1 При эндометритах в маточно-цервикальной микрофлоре доминируют полимикробные ассоциации патогенных и условно-патогенных бактерий. В состав патогенной флоры вошли: при острой форме течения - St. pyogenes (40,2%), S. aureus (18,3%) и P. vulgaris (0,01%), при хронической - P. aeruginosa (11,0%) и S. aureus (2,3%), при субклинической - P. aeruginosa (2,5%) и S. aureus (18,2%). Условно-патогенную микрофлору независимо от формы течения эндометрита формировали S. epidermidis, S. xylosus, грибы рода Candida, а также анаэробные Bacteroides spp. и Fusobacterium spp. С течением воспалительного процесса наблюдалось увеличение количества условно-патогенной микрофлоры и доли в её составе грамотрицательных бактерий.

4.2 Установлена множественная антибиотикорезистентность патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, выделенных при различных формах течения эндометритов, что является одним из факторов перехода острых форм в хронические и субклинические.

4.3 У коров при хроническом и субклиническом течении эндометритов методом молекулярно-генетических исследований (ПЦР) установлено присутствие бактерий родов Mycoplasma и Chlamidia, имеющие этиологическое значение в формировании данной патологии.

5. Важным этиологическим фактором маститов коров являются полимикробные ассоциации, формирующиеся в молочной железе: острые формы маститов коров сопровождаются появлением и развитием в тканях молочной железы патогенной (St. dysgalactiae (60,6%), S. aureus (2,2%)) и условно-патогенной (S. aureus, S. epidermidis. S. xylosus, Candida spp.) микрофлоры.

6. Между присутствием в составе микрофлоры генитального тракта и молочной железы отдельных видов микроорганизмов (S. aureus, S. epidermidis и S. xylosus) и развитием в них воспалительного процесса установлена тесная прямая корреляция (коэффициент корреляции г=+0,94).

7. Установлена высокая терапевтическая эффективность пробиотических бактерийных и бактериофаговых препаратов при лечении коров с острыми гнойно-катаральными эндометритами, обусловленная улучшением и нормализацией микробиоценозов генитального тракта.

7.1 Применение пробиотических препаратов сокращает срок лечения до 7,5±0,4 дня (в контроле 16,5±1,5), сервис-периода до 59,7±12,7 дней (в контроле-112,0±5,5), кратность осеменения составила 3,5±0,3 (в контроле 4,2±0,4).

7.2Бактериофаготерапия сокращает срок лечения до 7,0±0,2 дня (в контроле 16,5±1,5), сервис-периода до 68,7±10,0 дней (в контроле-112,0±5,5), кратность осеменения составила 3,5±0,5 (в контроле 4,2±0,4).

7.3Комплексное лечение больных животных с применением пробиотических и бактериофаговых препаратов укорачивает срок лечения до 6,5±0,3 дня (в контроле 16,5±1,5), сервис-периода до

47,5±8,5 дней (в контроле-112,0±5,5), кратность осеменения составила 2,5±0,3 (в контроле 4,2±0,4).

8. ЭМИ-КВЧ миллиметрового диапазона (в тестовом режиме) в комплексное лечение коров при маститах способствует сокращению сроков лечения (в

1,2 раза) и повышает эффективность лечения (на 4%).

Практические рекомендации производству

1. Схема-модель основных компонентов эпизоотологического надзора при болезнях репродуктивных органов коров, и в частности при эндометритах и маститах.

2. Комплексная система по профилактике и лечению болезней репродуктивных органов коров в сухостойный и послеродовой период в условиях базового хозяйства.

3. Схема-модель микробиологической коррекции организма коров с использованием бактерийных препаратов.

4. Система контроля за качеством противоэпизоотических мероприятий лечебно-профилактических мероприятий при эндометритах и маститах коров.