Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эколого-эпизоотологическая характеристика и микробиологический мониторинг водоемов и рыб Еравно-Хоргинской системы Республики Бурятия

□03486926

На правах рукописи

Цыбиков Мунко-Жаргал Цыренович

Эколого-эпизоотологическая характеристика и микробиологический мониторинг водоемов и рыб Еравно-Хоргинской системы Республики Бурятия

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

- з ДЕК 2009

Барнаул 2009

003486926

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» на кафедре микробиологии, вирусологии и ветеринарно-санитарной экспертизы.

Научный руководитель: заслуженный работник высшей школы РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор Цыдыпов Виктор Цыбанович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук профессор

Понамарев Николай Митрофанович

Ведущая организация: ГНУ НИИ ветеринарии Восточной Сибири СО Россельхозакадемии (г.Чита)

Защита состоится 18 декабря 2009г. в 10 ч. 00 мин. на заседании диссертационного совета Д 220.002.02. при Алтайском государственном аграрном университете по адресу: 656022, Алтайский край, г. Барнаул, ул. Попова 276, тел./факс 8-3852-31-06-36

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИВМ АГАУ

Автореферат разослан «2009 г.

Кандидат ветеринарных наук Соколов Максим Юрьевич

Ученый секретарь диссертационного совета

П.И. Барышников

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Роль рыболовства как поставщика пищевой рыбы в настоящее время возросло. В 90-х годах XX века 57% мирового улова пресноводных рыб составили рыбы, выращенные в хозяйствах, в уловах карповых им принадлежало 94%, лососевых -40%. Одним из факторов, тормозящих дальнейшее развитие прудового рыбоводства, являются паразитарные и инфекционные болезни рыб, наносящие существенный экономический ущерб, (И.М. Беретарь, A.A. Лысенко 2009). На сегодня все рыбные промысловые зоны Бурятии подверглись антропогенной нагрузке, в связи с этим появилась угроза появления инфекционных заболеваний рыб, в частности аэромоноза, и выявление ботулизма у байкальского омуля. Все это говорит об ухудшении экологических условий, которое сказалось на состоянии здоровья, в частности байкальского омуля, повышением чувствительности к инфекционным заболеваниям, выявлением ботулоносительства, что сопровождалось групповыми отравлениями людей со смертельным исходом (Родионов Д., 2002).

Небезынтересен факт появления инфекции рыб в Бурятии, носящий черты эмерджентности таких, как аэромоноз (1993 - 1994, 2002, 2007), морбилливирусная чума плотоядных байкальской нерпы (1987 - 1988) (Зверева O.A., 2002). Поэтому возникает необходимость разработки и внедрения, экстренных мер по предупреждению возникновения заразных заболеваний у рыб, одним из которых является проведение микробиологического и иммунологического мониторинга по оценке эпизоотологического благополучия.

В настоящее время отсутствуют данные по оценке эпизоотического состояния и уровня циркуляции патогенных микробов в водной среде, кормовых угодьях и в организме рыб озер Еравно-Хоргинской системы.

1.2. Цель исследований. Целью данной работы явилось проведение эпизоотологического, бактериологического и иммунологического мониторинга водной среды обитания кормовых угодий и выявление циркуляции патогенных микроорганизмов в организме соровой рыбы озер Еравно-Хоргинской системы.

1.3. Задачи исследований.

1. Изучение экологических характеристик водной среды в местах промысла рыбы.

2. Оценка санитарно-бактериологического состояния воды и микробного пейзажа.

3. Изучение биологических характеристик микробных изолятов, выделенных из исследуемых рыб.

4. Выделение аегошопаэ Ыс1горЫ1а и изучение его биологических характеристик.

5.Разработка иммунологического метода оценки эпизоотологичес-кого благополучия по аэромонозу рыб в озерах Еравно-Хоргинской системы Республики Бурятия.

1.4. Научная новизна. Впервые в полевых экспедиционных условиях проведен комплексный анализ эпизоотологического и микробиологического мониторинга с учетом экологических ситуаций в озерах Еравно-Хоргинской системы о состоянии благополучия по инфекционным заболеваниям промысловых рыб. Разработан иммунологический метод определения уровня циркуляции патогенных аэромонад в организме рыб и в водной среде.

1.5. Теоретическая и практическая значимость работы. Заложены теоретические основы эпизоотологического и микробиологического мониторинга водоемов и рыб. Материалы диссертации использовались в практической деятельности заседаний Рыбохозяйствен-ного совета РБ, составлена справка о результатах бактериологических исследований рыб, обитающих в воде Еравно-Хоргинских озер в Межрайонный специализированный участок по борьбе с болезнями рыб. Материалы диссертации использовались при разработке технологической карты по профилактике инфекционных заболеваний рыб и проведению ВСЭ.

1.6. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию ФВМ ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» (Улан-Удэ, 2005); на международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы экологической, сравнительной, возрастной и экспериментальной морфологии», посвященной 100-летию профессора Ивана Андреевича Спирюхова (Улан-Удэ, 2007); на международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию профессора Юрия Абогоевича Тарнуева (Улан-Удэ, 2009).

1.7. Публикации результатов исследований. Основные результаты научных исследований отражены в 3 печатных работах, из них 1 - в рецензируемом журнале.

1.8. Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 144 страницах компьютерного текста и состоит из следу-

ющих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Список литературы включают 194 источника, в т.ч. 75 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 5 рисунками.

1.9. Основные положения диссертационной работы, выносимой на защиту

1. Изучение экологических характеристик водной среды в местах промысла рыбы.

2. Оценка санитарно-бактериологического состояния воды и микробного пейзажа.

3. Изучение биологических характеристик микробных изолятов, выделенных из исследуемых рыб.

4.Выделение Асготопаз Иус1горЫ1а и изучение его биологических характеристик.

5.Разработка иммунологического метода оценки эпизоотологичес-кого благополучия по аэромонозу рыб в озерах Еравно-Хоргинской системы Республики Бурятия.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Исследования проводили с 2005 по 2009 год на кафедре микробиологии, вирусологии и ВСЭ БГСХА им. В.Р. Филиппова, в Еравнинс-кой межрайонной ветеринарной лаборатории и в бактериологическом отделе Республиканской научно-производственной ветеринарной лаборатории Республики Бурятия.

Материал для исследования взят в Еравнинском районе Республики Бурятия.

Было отобрано 65 проб воды и 650 проб материала от 154 экземпляров соровой рыбы (кровь из сердца, печень, селезенка, жабры, почки, содержимое кишечника). Отбор проб воды проводили согласно календарному плану исследований совместно с ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Бурятия в Еравнинском районе». Пробы воды брали на расстоянии 3-4 м от берега и на глубине 10-15 см от поверхности водоема. Пробы воды для бактериологического анализа отбирали в количестве 1 л в стеклянные бутылки с притертой резиновой пробкой с соблюдением правил асептики, для химического - 3 литров. Для отбора проб использовали водоемный батометр. Посуду стерилизовали завернутой в бумагу и разворачивали ее непос-

редственно перед взятием проб воды. В течение 2 часов после отбора проб воды проводили посев проб.

Санитарно-бактериологическую оценку воды проводили по следующим показателям: общее микробное число - ОМЧ, или сапрофитные микроорганизмы; коли-титр (определение титра бактерий группы кишечных палочек) показатель фекального загрязнения; наличие аэромонад (показатель возможного неблагополучия водоемов по аэромонозу).

Химический анализ воды, в основном, выполнен в стационарных условиях. Непосредстветвенно на объекте в свежеотобранных пробах определяли температуру воды и ориентировочно величину рН. Для измерения температуры применялись калибровочные ртутные термометры (цена деления 0,1С). Водородный показатель определяли в свежеотобранных пробах на приборе рН-150М (милливольтметр рН-150). Ориентировочно рН определяли универсальной индикаторной бумажкой. Содержание кислорода определял иодометрическим методом Винклера. Кислород фиксировался в кислородных склянках не посредственно у места отбора проб. После отстаивания осадка (не менее через 10 мин и не более суток) и растворения его в Н2804 (1:4) йод оттитровывали рабочим раствором 0,02 N раствором тиосульфата по крахмалу, прибавляемому в конце титрования. Биохимическое потребление кислорода (БПК5) определяли согласно Методическим указаниям по определению биохимического потребления кислорода при санитарной оценке воды в рыбохозяйственных водоемах (1999).

Азот аммонийный, азот нитратный, азот нитритный, фосфаты, сульфаты. Общую жесткость определяли по инструкции по химическому анализу вод прудов (1984).

На питательные среды, приготовленные заранее, проводили посевы из органов рыб.

Бактериологическое исследование воды проводили согласно Методическим указаниям по санитарно-бактериологической оценке рыбохозяйственных водоемов (1999).

Изучение морфологических, культуральных, тинкториальных, биохимических, гемолитических и патогенных свойств выделенных микроорганизмов проводили методами общей микробиологии (Бир-гер М.О., 1983; Герхард Ф., 1983; Антонов Б.И., 1986).

В целях идентификации и дифференциации микробных культур изучали биохимические свойства. При этом применяли систему индикаторных бумажек (СИБ) для идентификации микроорганизмов семейства ЕЫеюЬаМепасеае Горьковского НИИ эпидемиологии Мин-

здрава РФ. Также для определения ферментативной активности микроорганизмов применяли пластины ММТ Е1 и ММТ Е2 (система муль-тимикротестов) для биохимической идентификации энтеробактерий Ставропольского научно-производственного объединения «Аллерген».

Чувствительность микроорганизмов к различным антибиотикам определяли методом диффузии в агар с применением стандартных дисков, содержащих антибиотики. Оценку результатов проводили с учетом наличия или отсутствия зоны задержки роста микроорганизмов согласно «Методическим указаниям по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков» (Чайковская С. М., Гивенталь Н.И., Резван С. П., ] 984).

При изучении патогенных свойств микроорганизмов, кроме постановки биопробы, выявляли гемолитические способности.

Постановку биопробы проводили на белых мышах. Заражение животных производили взвесью суточной испытуемой культуры (на физиологическом растворе) внутрибрюшинно или подкожно в дозе 0,5 мл в концентрации 500 млн. бактериальных клеток на 1 мл. Контрольным животным внутрибрюшинно подкожно вводили стерильный физиологический раствор. За опытными животными вели наблюдение в течение 15 суток.

Идентификацию выделенных культур микробов проводили по определителю бактерий Берджи (1997).

Экспериментальный материал обрабатывали методом вариационной статистики по Стьюденту. Высчитывали среднюю арифметическую ошибку. Для определения достоверности разницы средних высчитывали критерий (Т). Затем по таблице определяли уровень вероятности (Р), соответствующий данному критерию. Номер государственной регистрации диссертационной работы 01200-407177.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Экологические аспекты водной среды в местах промысла в озерах Еравно-Хоргинской системы

Еравно-Хоргинские озера расположены в юго-восточной части Республики Бурятия на водоразделе между бассейном рек Витим и Уда (приток Селенги), в межгорной мезозойской впадине Забайкальского типа /Флоренсов, 1954/, на высоте около 1000 м над ур. м. В этом районе рассеяны многочисленные мелкие озера и свыше десяти крупных (рис. 12). Некоторые мелкие озера бессточные и соленые, но большинство пресные. Общая площадь озер всей системы более 400 км2.

лиг ¿^учм

Рис. 1. Еравно-Хоргинские озера

Основные крупные озера Еравно-Хоргинской системы (оз. Соснов-ское, Б. Еравнинское, М. Еравнинское, Б. Харгинское, Исинга) расположены в степной равнинной местности и вытянуты с юго-запада на северо-восток. Соединяясь между собой временными или постоянными протоками (холоями), озера этой основной группы имеют при большом уровне их вод направленный сток в р. Витим.

Температурный режим вод и ледовая обстановка на озерах Ерав-но-Харгинской системы определяется резко континентальным климатом района. Так, температура воды озер в условиях ветреной весны и осоки, с частыми ночными заморозками обычно невысокая. В мае она составляла 3,5-4,0°, в июне - 10,0-10,5° и только в июле достигала максимума (20,0-22,0°). В августе она снижалась до 1 6,2-16,8 , а в сентябре резко падала до 1,5-5,2 . В отдельные годы температура поверхностных вод в июле бывает выше: в 1946 г. в оз. Б. Еравнинское доходила до 23,8°, в оз. Б. Харгинское - до 26,8°, а в озерах Гунда и Исинга - до 27,8° /Вотинцев, 1961/. Более высокая температура поверхностных вод отмечалась и в 1970 г.: в Б. Харгинском, М. Еравнинс-ком она составляла 25,0°, в Исинге - 24,9, в Б. Еравнинском - 24,2°.

Вследствие мелководности озер и частого ветрового перемеши-

вания водных масс резкого различия в температуре от поверхности до дна не наблюдается. Только при штилевой погоде оно достигает 1 °-3°. В горизонтальном направлении воды озер обычно прогреваются равномерно.

Газовый режим воды озер Еравно-Харгинской системы изменяется по сезонам.

Концентрация растворенного в водах озер кислорода увеличивается еще до вскрытия льда, что связано с развитием фитопланктона. Так, в апреле количество кислорода в водах оз. Б. Еравнинское возрастало до 7,40 мг/л (64% насыщ.), оз. Исинга - до 9,80 мг/л (86% на-сыщ.), оз. Б. Харгинское - до 6,10 мг/л (49% насыщ.). После вскрытия льда, в период весенней гомотермии, воды насыщаются кислородом до 72,85, а в оз. Гунда - до 110%.

Летний максимум концентрации растворенного кислорода приходится на май. В конце месяца (при температуре воды 5,8-7,5°) он характерен для более глубоких озер (Б. Еравнинское, Гунда, Исинга) и составляет 9,20-12,40 мг/л (85-110% насыщ.). В июне максимум содержания кислорода (9,30-10,40 мг/л, 92-99% насыщ.) отмечается в водах мелких водоемов (Б. Харгинское, М. Еравнинское, Сосновское).

Что касается содержания свободной двуокиси углерода, то оно также изменяется по сезонам года. Летом в период активного фотосинтеза воды большинства исследуемых озер свободной двуокиси углерода не содержат. Кратковременно (ранним утром) в участках с мощными зарослями прибрежных макрофитов она появляется в водах только некоторых озер (в Б. Еравнинском до 3,32, в Исинге 1,52-1,73 мг/л). Двуокись углерода в водах исследованных озер (кроме оз. Гунда) отмечается в сентябре, чаше в октябре (1,70-3,12 мг/л) и достигает максимума в марте - апреле. В водах оз. Б. Харгинское этот максимум составляет 68,00, в оз. М. Еравнинское - 45,30 мг/л.

Реакция среды в водах Еравно-Хоргинских озер в течение всего годичного цикла сдвинута в щелочную область (рН):

Б. Еравнинское 7,2-8,5 М. Еравнинское. . 7,2-9,2 Исинга 7,3-8,4 Сосновское.. . . 7,5-8,5

Гунда 7,6-8,7 Б. Харгинское.. .7,2-8,6

Общая жесткость воды Еравно-Хоргинских озер изменяется от 1,23 до 2,46 мг-экв./л летом и от 1,74 до 4,20 мг-экв./л зимой. И только в водах озер М. Еравнинское и Б. Харгинское в период зимней меже-

ни она значительно выше (8,65-9,92 мг-экв./л).

Соленые озера Еравно-Хоргинекой системы представляют собой карбонатно-хлоридно-сульфатные водоемы с преобладанием карбонатов и бикарбонатов щелочных металлов.

Таким образом, физико-химическая характеристика воды озер Еравно-Хоргинской системы, где проводится интенсивный промысел рыбы, в основном, соответствовало по нашим данным благоприятным условиям для его размножения. Хотя в весенние периоды наблюдали превышение нормы азота нитратного, это связано со сбросом сточных вод населенных пунктов.

3.2.Количественная характеристика добычи рыбы в озерах Еравно-Хоргинской системы за 20 лет

В озерах Еравно-Харгинской системы промысел производится по следующим видам рыб: щука, лещ, пелядь, окунь и плотва. Данные добычи рыбы представлены в таблице. Из данных таблицы видно, что за первое десятилетие (1986 - 1996) добыто 896238 ц, а за второе десятилетие (1997 - 2008) добыто 51472 ц, что было заметным уменьшением объема добычи, связанным с ухудшением экологической ситуации водной среды озер. По видам добыча рыбы составила:

Добыча щуки за первое десятилетие исследуемого периода составила 2460 ц, что всего 2,98 % от общего объема промысла, а за второе десятилетие исследуемого периода было выловлено 422 ц, (0,85%) уменьшение в 5,8 раз.

Леща было добыто за первый анализируемый период 4008 ц, что составило 4,8 % общего количества добытой рыбы, за второй анализируемый период добыто 12286 ц, что составило 24,9 %, при этом было трехкратное увеличение добычи.

В первый период пеляди было добыто 11557 ц, что составило 14%, во втором анализируемом периоде этого вида рыбы было добыто лишь 1067 ц (2,1 %),.уменьшение составило 10,8 раза %.

Окуня в первый период было добыто 4634 ц (5,6 %), а во втором анализируемом периоде 5719 ц (11,6 %). Отмечено увеличение в 1,2 раза.

Плотва - 40330 ц (48,9 %), во втором периоде добыто 24468 ц (49,7 %) уменьшение в 1,6 раз.

Карася было добыто 19476 ц (23,6 %), во втором периоде было добыто 5273 ц (10,7 %) уменьшение в 3,7 раза.

В целом, за анализируемые периоды было сокращение объема добычи на 3329 ц, что составило уменьшение на 59,7 % или в 1,67 раз. Таким образом, исходя из вышеизложенных данных следует, что в озерах Еравно-Хоргинской системы основными промысловыми рыбами по количеству добытой рыбы являются плотва, окунь, карась и лещ, следует также отметить исчезновение добычи пеляди, что связано с ухудшением условий обитания данной рыбы. Одной из причин снижения добычи является снижение уровня воды в озерах, связанное с ухудшением экологических условий в данной местности.

3.3. Санитарно-бактериологическое состояние воды в озерах Еравно-Хоргинской системы

Исследования, проведенные совместно с ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Бурятия в Еравнинском районе» по оценке санитарно-бакгериологического состояния воды озера Соснов-ское с 2005 - 2008г., показали, что недопустимые нормы общих коли-морфных бактерий (ОКБ) и термотолерантных колиморфных бактерий (ОТБ) выявлены из 11 проб воды. В последующие годы эти сани-тарно- показательные микроорганизмы не были обнаружены. В пробах воды Большая Еравна не допустимые по ГОСТу микроорганизмы не обнаружены (2005-2008гг.) Подобный результат получен при исследовании воды озера Гунда. В последующих исследованиях других озер системы выявлены недопустимые количества колиморфных бактерий в озере Малая Еравна в 2007г. и 2008г. в озере Хорга.

При проведении микробиологического мониторинга воды озер Еравнинского района выявлено в микробном пейзаже следующее. Состав микрофлоры воды озер представлены следующими видами и не имели существенных различий от микрофлоры воды озера Байкал (Зверева O.A., 2002) E.coli, Enterobacter Aglomerans, Proteus vulgaris, Bac.cereus, St.aureus, Aeromonas salmonocida и другие неопределенные виды микроорганизмов. Из болезнетворных микроорганизмов были выделены возбудитель дизентерии (Shygella boydi), Salmonella ParatyphyA, что указывает о прямой зависимости распространений как источников инфекции в водной среде, рыбы и проживающего в прибрежной зоне населения.

3.4. Заболеваемость населения кишечной инфекцией в Еравнинском районе за 5 лет

У населения поселков, расположенных на берегу озер Еравно-

Хоргинской системы, заболеваемость кишечными инфекциями (таблица 1) в Еравнинском районе за 5 лет выглядит следующим образом:

Таблица 1 - Заболеваемость кишечными инфекциями в Еравнинском районе за 5 лет

№ Наименование 2004 2005 2006 2007 2008

нозологии

1 Всего случаев 79 99 97,2 62 334,3 70 379,7 54 293,2

2 дизентерия 12 64,17 44 237,6 5 27,1 18 97,6 2 10,86

3 Диз.бак.подтв. 9 48,13 43 232,2 4 27,1 18 97,6 2 10,86

4 Диз.Зонне 1 5,35 20 108,0 2 10,8 4 21,6 0 0

5 Диз.Флекснера 8 42,78 23 124,2 2 10,8 14 75,9 2 10,86

6 ОКИ устан. Этиолог. 3 16,04 0 0 1 5,4 3 16,2 0 0

7 ОКИ неуст.этиолог 55 294,1 51 275,4 43 231,8 43 233,2 48 260,6

8 сальмонеллез 1 5,35 0 0 - - 2 10,8 3 16,2

9 Вирусные гепатиты 8 42,78 4 21,6 13 70,1 4 21,6 1 5,43

10 Вир.геп.А 5 26,74 3 16,2 11 59,3 3 16,2 0 0

Вир.геп.В 3 16,04 1 5,4 2 10,8 1 5,4 1 5,43

Всего зарегистрировано 9 нозоформ, из которых 2 относились к вирусному гепатиту и вирусу герпеса групп А и В.

Остальные относились к бактериальным инфекциям кишечной патологии. Это дизентерия, дизентерия Зонне, дизентерия Флекснера, дизентерия бактериальная, а также острые кишечные инфекции установленной и неустановленной этиологии, и был выявлен сальмонеллез.

В динамике регистрируемости кишечных инфекций у населения сел прибрежных озер отмечаются скачкообразные подъемы с 2005 -2007 гг. и спад, что связано с источниками заражения, загрязнения сточными водами озер Еравно-Хоргинской системы.

3.5. Опасные для здоровья людей инфекционные болезни рыб, регистрируемые в Бурятии

Ботулизм. Это инфекционно-токсическое заболевание людей в Бурятии передается алиментарно, при употреблении в пищу омуля, пораженного ботулизмом.

Основная реализация омуля неучтенного лова осуществляется в г.Улан-Удэ, поэтому эпидемиологическая ситуация по неблагополучию ботулизма в городе является сложной.

При анализе динамики заболеваемости ботулизмом населения Республики Бурятия установлено: в 1999 г. зарегистрировано 137 слу-

чаев со 189 пострадавшими, из них летальных исходов - 20. В 2000 году зарегистрировано 52 случая - 70 пострадавших, летальных исходов не было. В 2001 году -107 случаев, 158 пострадавших, летальных исходов - 13. В 2002 году - 69 случаев - 79 пострадавших, летальных исходов - 8; в 2003 году зарегистрировано 68 случаев - 82 пострадавших, летальных исходов - 4, заболеваемость на 100000 населения - 8,1%; 2004 год - 34 случая, пострадавших - 35; летальный исход - 2, заболеваемость - 3,35; в 2005 - 19 случаев, пострадавших, летальных исходов не было, показатель заболеваемости - 1,9; 2006 год - 7 случаев, 8 пострадавших, летальный исход - 1, заболеваемость - 0,82%; 2007 год - 15 случаев, 15 - пострадавших, летальный исход -нет, заболеваемость - 1,5%; 2008 год - 5 случаев, 5 пострадавших, летальный исход - нет, заболеваемость - 0,52.

Аэромоноз. Регион озера Байкал длительное время оставался благополучным по инфекционным болезням рыб, в том числе и по аэромо-нозу. Это было обусловлено, в первую очередь, природными и географическими причинами: большинство водоемов региона холодноводные, а аэромонады тепловодные микроорганизмы (оптимальная температура для размножения +28°С); значительная удаленность от основных очагов аэромоноза; малая интенсивность рыбоводной деятельности.

1992 год - в Чивыркуйском заливе зарегистрирована гибель окуня. Бактериологическим исследованием выделен возбудитель аэромоноза.

Первые случаи болезни в 1987 году в Братском водохранилище произошли, как вспышка аэромоноза, которая привела к гибели окуня. Бактериологическим исследованием (Цыдыпов В.Ц.,1987) была выделена A. hydrophila.

Июль 1996 года - в озере Иркана Северобайкальского района отмечалась гибель окуня и поверхностные язвы в области хвоста, боковой линии, живота. По результатам обследования установлен предположительный диагноз - псевдомоноз.

В 2002 году в водоемах Еравно-Харгинской озерной системы (в озерах Большая Еравна и Сосновское) произошла массовая гибель окуня и сазана, причем у погибших особей отмечались некоторые признаки аэромоноза. Бактериологическим исследованием был установлен возбудитель заболевания - бактерия Aeromonas hydrophila. Патогенность микроорганизма подтверждена биопробой на сазанах (О. А. Зверева, 2002). На водоемы был наложен карантин, а погибшая

рыба утилизирована. В водоемах вылавливалась рыба (окунь, лещ) с признаками кожной формы заболевания - язвами на поверхности тела, покраснением у основания плавников!. В 2003 и 2004 годах гибель окуня и сазана продолжалась в несколько меньших количествах.

Бактериологическое исследование проб воды, грунта и гидробион-тов (рыб) 12 водоемов в 2004 году (июнь-июль) выявило очень широкую распространенность А. 1)у(1горЫ1а в воде и организме рыб. Аэро-моноз рыб проявил себя и в 2007году в этих же озерах. Экономический ущерб составил в 2002 году - 3,5 млн. руб., 2007 году - 5,0 млн.руб.

Гаффская болезнь. Первый случай регистрации Гаффской болезни в Бурятии произошел в июне 2008 года на озере Котокель, расположенным в 2км от восточного берега Байкала и имеет с ним связь через систему речек. Озеро имеет интересную особенность - во время весеннего полноводья вода через речку Исток поступает в озеро, а в остальное время года вытекает из него, попадая через систему речек в оз. Байкал.

Первая информация о гибели кошек и собак в с. Исток поступила еще в 07.02.2008 г. от главы сельского поселения МО «Гремячинское» Тришкиной О.Н. Госветслужбой района по данному заявлению были осуществлены выезды в с. Исток и с. Котокель, но трупы собак и кошек уже были утилизированы или просто выброшены самими хозяевами. Со слов хозяев было выяснено, что погибшие животные питались в основном рыбой из озера Котокель, у заболевших животных наблюдались парез конечностей, шаткая походка, угнетенное состояние.

В то же время поступила информация о гибели рыбы на озере. Специалисты госветслужбы выезжали на озеро, но трупы рыбы обнаружены не были.

В июле 2009 г. при поступлении информации о гибели рыбы и заболевании людей после употребления ее из озера Котокель в пищу был составлен комплексный план и в соответствии с ним проведена работа.

В результате постановки биопробы на 3 кошках выявлен положительный результат - животные заболели с клиникой, характерной для Гаффской болезни и впоследствии погибли (1-я кошка на девятые, 2-я - на тринадцатые и 3-я - на 16-е сутки). При химико-токсикологических исследованиях производные карбаминовой кислоты в пат.ма-териале от погибших кошек не обнаружены.

27.01,2009г. в Турунтаевскую районную больницу поступил больной Калачев Сергей Николаевич с признаками алиментарно-токсичес-

кой пароксизмальной миоглобинурии, употреблявший рыбу (леща), выловленную из реки Турки.

В настоящее время Бурятия становится местом крупных вспышек инфекционных заболеваний рыб, связанных с экологическими условиями в местах обитания.

3.6. Биологическая характеристика выделенных микробных

культур от рыб 3.6.1. Культурально-морфологическая характеристика Как видно из таблиц № 2 и 3, из 154 исследованных культур наибольшую часть составили палочковидные грамположительные микроорганизмы 85 культур (55,2%). Помимо этого были выделены грамположительные кокковидные 35 культур (22,7%). Спорообразование отмечено у 37 культур (24%), спор не образовывали 117 (80,5%). 90 культур имели колонии 8=формы и 64 Я=формы. По характеру морфологических свойств выделенные микробные культуры в своем спектре распределились в большинстве своем (55,2%), представляли грамположительные палочки неспорообразующие, сапрофиты, выявляющиеся в форме носительства, некоторые из них, возможно, представ-1 ляют потенциальную опасность для животных и людей (возбудители рожи и листерии) (Зверева O.A., 2002).

Спорообразующие (24%) представляли бациллы Вас. mesentericus, Вас. Subtilis, Вас. Cereus, Вас. Mycoides. Из кокковидных (22,7%), в основном, представленные стафилококками (aureus, albus).

Из грамотрицательных микроорганизмов в большинстве своем были условно патогенные и патогенные представители семейства Enterobacteriaceae. Помимо этого, выявлялись грамотрицателные энтерококки. По культуральным свойствам 58,4% соответствовали S-формам колонии, 41,6% R-формам, диссоциирующих форм колоний у выделенных культур не выявлено.

Таблица 2 - Сводные данные морфологических свойств выделенных культур

Морфология культур Количество Процент

Гр.+, кокковидные 35 22.7

Гр.+, палочковидные 85 55.2

Гр.-, кокковидные 5 0,3

Гр.-, палочковидные 29 18.8

Спорообразующие 37 24

Неспорообразующие 124 80,5

Итого:

Таблица 3 - Сводные данные культуральных свойств выделенных

микроорганизмов

Культуралъные свойства Сводные данные Процент

S-формы 90 58.4

R-формы 64 41.6

3.6.2. Биохимические свойства

По результатам постановки биохимических тестов провели анализ ферментативных свойств выделенных микробных культур.

При биохимическом исследовании лизин положителен у 73 (47,7%), отрицателен у 4 культур (5%) и в 6 культурах (7%) реакция сомнительна. Индол кумулятивного действия не оказал ни на какие культуры, отрицателен у 108 (70,1%) и в 46 (29,9%) реакция сомнительна. Мапонат натрия расщепил 52 культуры (33,8%), не расщепилось 65 (42,2%), в 37 культурах (24,0%) реакция не прошла. Реакция Фогес-Проскуауэра положительна у 14 культур (9,1%), отрицательна у 140 (90,9%). Орнитин положителен у 36 культур (23,4%), отрицателен у 113 (73,4%) и в 5 реакциях сомнителен (3,2%). ?-галоксидаза кумулятивного действия не оказала ни на какие культуры, отрицательна у 154 культур, т.е. 100%. Сорбит положителен у 78 культур (50,6%), отрицателен у 63 (40,9%) и в 13 реакциях сомнителен (8,4%). Сероводород отрицателен у 154 культур (100%). Уреаза положительна у 6 культур (3,9%), отрицательна у 147 (95,5%). Инозит положителен у 70 культур (45,5%), отрицателен у 70 (45,5%), реакция сомнительна в 14 (9,1%). Фенилаланин отрицателен у 154 культур (100%). Цитрат натрия положителен у 105 культур (68,2%), отрицателен у 47 (45,5%), реакция сомнительна в 2 культурах (1,3%).

В последующем при идентификации по биохимическим свойствам выделенных грамотрицательных микроорганизмов были определены следующие виды (таблица 4).

Гемолитическую активность определяли по образованию зоны гемолиза на агаре, содержащем 5% эритроцитов барана. В результате проведенных опытов гемолиз отмечали у 38 культур под номерами 10, 11, 18,24,27,29,31,32,38,40,41,47,48, 53,55,56,64,67, 68, 71, 77,78,80,84,87,88,93, 97,98,99, 100, 101, 105, 108, 112, 114,115, 122.

3.7. Чувствительность и устойчивость к антибиотикам

Из проведенных нами исследований видно, что все выделенные культуры обладают различной степенью чувствительности к антибиотикам. К пенициллину чувствительны 42,7%, из них 7,1% - грамот-

Таблица 4 - Идентификация выделенных микробных культур по биохимическим свойствам

№ п\п лизин индол малонат 1 u о о. Е ё орнитин и ¡Л о ? и сорбит сереводород уреаза инозит фенилал 1 н 1 а 1 гемолиз j

1 2 3 4 5 б 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

Оку сердце

1 Citrobakter amolonaticus - + - + - + - - - - - - + -

Окунь, селезенка

2 Shygella boydi -+ +

Окунь, печень

3 Shygella boydi - + - + +

Щука ,сердце

4 Shygella boydi - + - + - + - - - - - - -

5 Citrobakter amolonaticus - +- + - + - - - - - - - -

Щука, жабры

6 Salmonella Paratyphy А - + - + - + - -+ - - - - - - -

7 Serratia rubidaca + + -

Лещ, кровь

8 Citrobakter amolonaticus - + - + - + - - - - - + - + +

Окунь, селезенка

9 Citrobakter freundi + - + + +

Окунь, печень

10 Shigella boydi

Окун ь, селезенка

11 Edwardsiella jctaluri + - + - - + - - - - + - - -

Лещ, сердце

12 Serratia rubidata + - + - - + - - - - - - + -

Плотва, кровь

13 Serratia oborifera + - +- - + - + - - + + + +

Окунь, печень

14 Edwardsiella jctaluri + + +

Плотва кровь

15 Klebsiella pntumoniae subspozaenae +

Окунь, печень

16 Citrobakter freundi +- - +- - - - + - - + - + +

Окунь, селезенка

17 Citrobakter freundi - - - - - - + - - + - + +

Окунь, почки

18 Enterobacter agllomerans - +- - - - - + - - - - + -

Плотва сердце

19 Klebsiella pntumoniae subspozaenae + + +

Окунь, печень

20 Klebsiella pntumoniae subspozaenae + + +

Плотва, почки

21 Citrobakter freundi + - - - - - + - - - - + -

Плотва, кишечник

22 Klebsiella pntumoniae subspozaenae + + + + ' +

Лещ, кровь

23 Klebsiella pntumoniae subspozaenae + +

24 Shigella boydi +- - - - - - + - - + - - -

Лещ, кишечник

25 Enterobacter agllomerans +- - +- - + - + - - - - + -

26 Klebsiella pntumoniae subspozaenae + +- + + +

27 Serratia eiguefaciens + - +- - + - - - - + - + -

28 Shigella boydi + -

Щука, почки

29 Klebsiella pntumoniae subspozaenae + +- +

рицательные палочковидные бактерии, 7,7% - грамположительные кокковидные и 27,9% - грамположительные палочки. Чувствительность к левомицитину — 79,8%, из них 13,0% - грам - палочки, 16,2% -грам + кокки и 50,6% - грам + палочки. Чувствительность ктобрами-цину - 96,1%, из них 16,9% - грам - палочки, 16,2% - грам + кокки и 50,6 - грам + палочки. Чувствительность к цефазолину - 61,7%, из них 7,8% грам - палочки, 15,6% - грам + кокки и 38,3% - грам + палочки. Чувствительность к эритромицину - 57,2%, из них 13,6% - грам - палочки, 8,5% - грам + кокки и 35,1% - грам + палочки. Чувствительность к амикацину - 94,4%, из них 16,9% - грам - палочки, 18,2 - грам + кокки и 59,8% - грам + палочки. Чувствительность к линкомицину составляет- 24,1%, из них 4,6 ~ грам - палочки, 5,9% - грам + кокки и 13,6% - грам + палочки. Чувствительность к стрептомицину составляет - 97,9%, из них 16,2% - грам - палочки, 18,2% - грам + кокки и 61,7% - грам + палочки.

Из полученных данных видно, что наибольшая чувствительность отмечается к тобрамицину и амикацину, а наиболее устойчивы данные микроорганизмы к линкомицину.

3.8. Уровень циркуляции условно-патогенных и патогенных микроорганизмов в организме рыб в озерах Еравно-Хоргинской системы.

Выявление уровня циркуляции патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в форме бактерионосительства у рыб в межэпизоотические периоды имеет диагностическое значение в прогнозировании и определении эпизоотической ситуации в конкретной местности. Поэтому задачей исследований являлось изучение уровня циркуляции потенциально-патогенных микроорганизмов в организме рыб озер Еравно-Хоргинской системы. Данные представлены в таблице 6. Из 29 выделенных микробных изолятов от рыб в 11 озерах из 33 Еравно-Хоргинской системы 14 (42,4%) микробных культур были идинти-фицированы как Аеготопаэ Ыс1горЫ1а. Только одна культура изолирована из воды, 4 - от окуня (печень), 4 - от плотвы (печень - 1, кишечник - 2, чешуя - 1), 2 - от сазана (печень), 4 - от карася (чешуя - 2, жабры - 2), 1 - от леща (печень), 1 - от щуки (чешуя). Циркуляция Аегошопаз Ыс1горЫ1а имеет широкий спектр распространенности в организме всех видов рыб, обитающих в озерах Еравны, в форме но-сительства, и при снижении резистентности организма и повышения чувствительности к инфекции аэромонозу может быть повышен риск возникновения заболевания, и не менее интересным является выделе-

ние в организме рыб патогенных микробов, имеющих эпидемиологическую и эпизоотологическую значимость. Так, например, из данных таблицы № 4 видно, что из 29 выделенных микробных изолятов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов составило 7 (21,1 %), цитробактер - 7 (24,1%) сальмонелл (возбудитель брюшного тифа) -1 (3,4%), серратиа рубидака- 4 (13,8%), эдварсиелла - 2 (6,9%), энте-робактера - 2 (2,9%).

Полученные результаты и виды выделенных патогенных микробов показывают эпидемиологическую и эпизоотологическую опасность для населения и животных, находящихся в населенных пунктах, расположенных на берегу озер Еравно-Хоргинской системы. В то же время сточные воды и фекалии животных, попадающие в водный бассейн озер, ухудшают экологическую обстановку в местах промысла, и вода становится опасным резервуаром и источником распространения инфекции у животных и людей (таблица 5).

Таблица 5

№ культуры Водоем Материал

2 Харга Вода

7 Харга Окунь, печнь

10 Исинга Окунь, печнь

11 Исинга Сазан, печень

12 Грязное Плотва, печень

13 Грязное Карась, чешуя

15 Балданкино Сазан, жабры

16 Малое Еравное Карась, жабры

17 Малое Еравное Сазан, печень

18 Малое Еравное Окунь,язва

21 Большое Еравное Лещ, печень

22 Большое Еравное Окунь, язва

23 Ш иниста Карась, жабры

3.9. Моделирование экспериментального аэромоноза рыб

В целях изучения патогенности возбудителя аэромоноза (АегошпаБ Ьус1рЫ1а подвид апаеп^епез) нами в условиях акванария Межрайонного специализированного участка по борьбе с болезнями рыб и гидроби-онтов были проведены опыты по заражению рыб, в котором были использованы 6 экземпляров рыб (сазанов): опытная группа - 3, контрольная - 3, живой массой 150 г, согласно МУ по лабораторной диагностике аэромоноза карповых. Условия содержания рыб в акванарии были следующими: температура воды составляла 20?С в период опыта, вода закачана из скважины и прогрета до температуры 20?С. Для кормления сазанов использовали корм рецепта 16-80, согласно суточным нормам

кормления карпа по И.Н. Остроумовой (1979) 4 раза в день.

Опытной группе рыб вводили двухсуточную культуру, выращенную на МПБ в дозе 0,2 мл, содержащей 2 млрд. микробных клеток, внутрибрюшинно, согласно Методическим указаниям по лабораторной диагностике аэромоноза (краснухи) карпа (1986). Наблюдение за зараженными рыбами вели в течение 10 суток. В течение первых и на вторые сутки после заражения наблюдали гибель двух рыб, без проявления клинических признаков аэромоноза. На девятые сутки отмечали гибель третьей рыбы с клиническими признаками аэромоноза (появление язвы вокруг анального отверстия). Бактериологическими исследованиями из внутренних органов сазанчиков (сердце, печень, селезенка) и язвы была выделена культура, которая была идентифицирована как культура Aeromnas hydphila подвид anaerogenes, т.е. выделена исходная микробная культура.

Таким образом, выделенная от павших рыб культура Aeromnas hydphila подвид anaearogenes, вызвавшая эпизоотию аэромоноза в Еравнинских озерах, носила эмерджентный характер. Она нанесла большой экономический ущерб рыболовству Республики Бурятия (215 тыс. руб.) в июне 2002 года и является потенциальным агентом, способным вызывать аэромоноз в озере Байкал, где уже ранее была зарегистрирована крупная его вспышка в Чивыркуйском заливе, оз. Байкал и устье реки Селенги в 1994 году.

ЗЛО. Разработка и внедрение иммунологического метода оценки эпизоотологического благополучия по аэромоиозу рыб в озерах Еравно-Хоргинской системы

3.10.1. Приготовление аэромонадного антигена.

Для приготовления антигена бактериальные колонии (гладкие, прозрачные) соответствующего штамма переносили в жидкую питательную среду (МПБ, бульон Хоттингера) с глюкозой (0,1 — 1,0 %) и инкубировали при 37°С в течение 18 -20 ч. (А. Дам, 1960; В.А. Али-каев, В.Г. Зароза, 1972).

В качестве антигена наряду с бульонными бактериальными культурами можно применять агаровые бактериальные суспензии. Для этого аэромонадный антиген в S = форме высевали на твердую питательную среду (например, МПА), инкубировали в течение 12 - 16 ч. при температуре 37°С и затем готовили на 0,5%-ном растворе NaCI бактериальную суспензию, или с содержанием в 1 мл 5 - 6 млрд. микробных тел по бактерийному стандарту (М.А. Сидоров, O.A. Полякова, 1974).

Полученные бульонные культуры или их суспензии в растворе

ЫаСГ прогревали в течение 2,5 ч при температуре 100? С Прогретые бактериальные культуры консервировали добавлением до 0,5 % формалина и выдерживали при комнатной температуре в течение 12-18 ч. Если она остается гомогенной, без видимой реакции самоагглютинации (отсутствие хлопьев), использовали как антиген для иммунизации животных. Срок хранения такого антигена 1 мес., позже происходит резкая потеря агглютиногенных свойств (А. Дам, 1960;

1986; В.А. Аликаев, А.Г.Зароза, 1972).

3.10.2. Приготовление диагностической гипериммунной сыворотки

В качестве продуцентов сывороток использовали кроликов породы шиншилла массой 2,5 - 3 кг. На каждый антиген брали 2-3 кролика. Аэромонадный антиген вводили в вену, идущую вдоль края уха. Шерсть можно не сбривать, но для раздражения уха следует потереть его ватным тампоном, смоченным бензолом или ксилолом, а затем смыть спиртом. Стерильную иглу (22 или 25 калибра) вводили по направлению тока крови. Во время введения антигена кролика можно уложить на спину и привязать за лапы к примитивному станку - наклонно стоящей доске с треугольным вырезом для головы. Довольно часто кролики при проведении инъекции спокойно сидят на коленях у оператора или на столе.

Кроликов иммунизировали 5-6 раз нарастающими дозами антигена с интервалом между инъекциями 4-5 дней. В 1 мл антигена, применяемого для иммунизации кролика, должно содержаться от 5x108 до 5x10ю бактериальных клеток, в объеме 4,0 мл.

Интересные данные были получены Н.М.Ландсман (1970), которая изучала динамику нарастания титров О-агглютининов в процессе иммунизации и получила активные О-колисыворотки при однократном введении О-антигена. Ею же была показана возможность приготовления комплексных колисывороток к 14 разновидностям Е. СоН иммунизацией кроликов и баранов поливалентными антигенами. Последний способ имеет ряд преимуществ перед методом соединения типовых сывороток в поливалентные смеси.

Кровь брали на 6 - 8-й день после последней инъекции. Кроме того, интенсивность иммунного ответа у разных особей различна. Ввиду этого антиген следует вводить параллельно 2-3 животным. Кровь можно отбирать и в ходе иммунизации для наблюдения за ростом содержания иммунных антител. Когда оно становится достаточным, берут кровь для приготовления противоаэромонадных диагностических сывороток.

Сыворотку получали после свертывания крови в течение 10 - 30 минут при температуре 37?С и удаления из нее сгустка фибрина двукратным центрифугированием при 3 тыс. об/мин в течение 1 ч.

Для защиты от микрофлоры в диагностические сыворотки рабочего пользования добавляли до 0,1% азида натрия, до 0,01% мертио-лята, до 0,5% формальдегида или до 1% хлороформа. Их можно хранить в жидком состоянии (с консервантом), в лиофилизированном или замороженном виде (без консервантов). Полученная таким образом диагностическая сыворотка реагировала в РА в титрах 1:1600 и 1:3200 и служила в дальнейших исследованиях в качестве контроля.

3.10.3. Испытание антигенного аэромоиозного диагностику-ма при выявлении специфических антител

Нами проведено иммунологическое исследование сывороток крови рыб, выловленных в озерах Сосновское, Большая Еравна, Исинга и Хорга.

Исследования проводили в РА с гретыми антигенами, приготовленными из микробных культур эпизоотического штамма, выделенного из рыб, погибших от аэромоноза.

Реакцию ставили в соответствии с общепринятым классическим методом в следующих разведениях - 1:12; 1: 25; 1: 50 ; 1: 100.

При этом положительные реакции в титрах 1:12; 1: 25; относили к сомнительным результатам, а титры 1:50; 1:100 относили к заведомо положительным результатам.

Всего было исследовано 174 пробы сыворотки крови рыб.

Получены по отдельным озерам следующие результаты:

Из 84 проб сывороток крови рыб, выловленных в озере Сосновское, положительную реакцию дали 51%, отрицательные реакции -49%, при этом в диагностических титрах (1:50; 1: 100;) положительные результаты получены лишь в 12 %.

Из 57 проб сывороток крови рыб, выловленных в озере Б. Еравна, положительные реакции дали 44 %, отрицательные реакции - 56% , при этом в диагностических титрах положительные результаты - 23%.

Из 27 проб сыворотки крови рыб, выловленных в озере Исинга, положительные реакции - 26 %, отрицательные реакции - 74 %, в диагностических титрах антитела не выявлены.

Из 6 проб сыворотки крови рыб, выловленных в озере Хорга, только в 1 случае выявлена положительная реакция в диагностическом титре 1: 100.

Таким образом, в сыворотке крови рыб удалось выявить антитела против аэромонад в озерах Еравно-Хоргинской системы (озера Боль-

шая Еравна, Малая Еравна, Исинга), который имеет тенденцию распространения на другие озера Еравны. Для предотвращения этого явления можно рекомендовать зарыбление неблагополучных водоемов рыбами, наиболее устойчивыми к аэромонозу.

Используя диагностические наборы для иммунологического контроля, приготовленные из местных штаммов аэромонад, можно обнаружить антитела против аэромонад в диагностических титрах, что позволяет определить уровень инфицированности рыб аэромонозом в озерах Еравно-Хоргинской системы и может служить основой проведения иммунологического мониторинга на аэромонады для оценки эпизоотической ситуации по данному заболеванию, наряду с бактериологическим мониторингом.

3.11. Разработка мер профилактики по улучшению экологических условий в озерах Еравно-Хоргинской системы

Всякий раз, при возникновении аэромонозной и других инфекций должно быть сделано все для выявления и устранения источников возникновения (стресса) в окружающей среде. Только это зачастую не решает проблему болезни. Стрессовые факторы окружающей среды, особенно связанные с обедненным качественным составом воды, усиливают развитие болезни. Эти факторы включают высокую температуру воды, высокий уровень содержания аммиака и нитратов, нарушение рН и низкий уровень растворенного кислорода. Большая паразитарная нагрузка, перенаселенность, высокое содержание органических веществ в воде могут вести к увеличению микробной массы патогенных микроорганизмов в воде и в последующем - к вспышкам болезни.

Изменчивость микроорганизмов, увеличение транспортных потоков, глобальное изменение климата и промысел рыб сетеснастями, использовавшимися в других водоемах, привели к широкому распространению аэромоноза в Республике Бурятия.

Использованные во всем мире меры борьбы и профилактики подходят для прудовых и рыбоводных хозяйств, но никак не для природных водоемов.

В обозримом будущем не представляется возможным оздоровление водоемов от аэромоноза в связи с невозможностью использования дезинфектантов и антибиотиков в естественных водоемах.

В связи с этим Управлению ветеринарии Республики Бурятия нами рекомендуются разработанные предложения по промысловой и рыбоводной деятельности озерной системы в соответствии с разработанной нами схемой:

1. При возникновении и установлении диагноза на аэромоноз на неблагополучные водоемы накладывать карантин.

2. Разрешить основному пользователю ОАО «Нептун» лов рыбы в озерах Еравно-Хоргинской системы по особому режиму добычи с целью вылова пораженных особей, сокращения популяции восприимчивых рыб и разрыва эпизоотической цепи.

3. ОАО «Нептун» не допускать использование без дезинфекции сетеснастей, инструментов, тары, применявшихся в не благополучных по аэромонозу водоемах.

4. ОАО «Нептун» без согласования с госветнадзором не проводить перемещения и завоз рыбонасадочного материала, не допускать зарыбления малых водоемов местными жителями без всякого биологического обоснования.

5. Разработать и внедрить технологическую карту иммунного контроля за эпизоотической ситуацией по аэромонозу.

6. Для улучшения экологических условий необходимо в водоемах Еравно-Хоргинской системы разработать систему мер, позволяющую обеспечить безопасность рыб и проживающего населения от инфекционных заболеваний. Приобрести технические арсеналы, обеспечивающие экологическое благополучие.

Рекомендуем использовать аэратор воды «Ерш», камышекосилку «Медведка» Ставропольского опытно-механического завода.

ВЫВОДЫ

1. В водоемах Бурятии стали регистрироваться ранее не имевшие эпизоотологического значения инфекционные болезни рыб (аэромоноз, ботулизм, гаффская болезнь), носящие черты эмерджентности.

2.Показатель санитарно-бактериологической оценки воды в местах промысла относится к показателям третьей категории. Они считаются грязными в разные сезоны года.

3.Видовой состав микрофлоры воды преставлен следующими патогенными и условно-патогенными микроорганизмами: Е. coli, Enterobacter agglomerans, Citrobacter freundii, Edwardsieila tarba, Pr. Mirabilis, Pr. Vulgaris.

4.Из различных органов рыб (лещ, сазан, окунь, щука, плотва и др.) выявлено бактерионосительство видов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов: составило 21,1%, цитробактер - 24,1%, сальмонелла (возбудитель брюшного тифа) - 3,4%, серратиа рубида-ка - 13,8%, эдварсиелла- 6,9%, энтеробактер - 2,9%.

5.Иммунологическими методами (РА) можно определить уровень циркуляции аэромонад в водной среде и организме рыб, что может являться ценным диагностическим тестом в оценке эпизоотической ситуации по аэромонозу. Антитела против аэромонад выявлялись в сыворотке крови диагностических титрах 1: 50, 1: 200.

6.Наблюдалась крупная вспышка аэромоноза в озерах Большая Еравна, Сосновское (2002), Исинга (2007), где экономический ущерб выражался 3,5 млн. и 5,0 млн. руб.

7. Основному пользователю ООО «Нептун» по добыче рыбы в озерах Еравно-Хоргинской системы необходимо приобрести технический арсенал (аэратор «Ерш», камышекосилка «Медведка» Ставропольского завода) по улучшению экологического состояния воды озер Еравно-Хоргинской системы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1.Ha основе полученных результатов составлена методическая рекомендация «Эколого-эпизоотологическая характеристика и микробиологический мониторинг водоемов и рыб Еравно-Хоргинской системы».

2.Материалы диссертации могут служить источником информации при проведении республиканских совещаний ветеринарных работников Республики Бурятия, касающихся вопросов разработки мер профилактики по предупреждению возникновения инфекционных заболеваний рыб.

3. Результаты исследований используются в учебном процессе при подготовке специалистов ветеринарного профиля.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1 .Цыбиков М-Ж.Ц. Эпизоотологические аспекты аэромоноза рыб в системе Еравно-Хоргинских озер /Зверева O.A., Цыдыпов В.Ц., Елизов В.И.//Ж. - Вестник БГСХА - №2( 11).- апрель-июнь 2008. - С. 18-21.

2.Цыбиков М-Ж.Ц. Опыты по заражению рыб возбудителем аэромоноза, выделенного от погибших рыб//Мат. межд. конф. «Актуальные вопросы электрофизиологии и незаразной патологии животных», поев. 70-летию Ю.А. Тарнуева. - Улан-Удэ, 2009. - С. 161.

3.Цыбиков М-Ж.Ц. Эпизоотологическая и иммунологическая оценка аэромоноза рыб в системе Еравно-Хоргинских озер Республики Бурятия/ Труды Кубанского государственного аграрного университета. Серия ветеринарные науки. - № 5(20) 2009. С. 263-265

Подписано в печать 15.11.2009. Бумага офс. №1. Формат 60x84/16. Усл.печ.л. 1,5. Тираж 100. Заказ № 568. Цена договорная.

Издательство ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В. Р. Филиппова» 670034, г. Улан-Удэ, ул. Пушкина, 8 e-mail: rio_bgsha@mail.ru

Актуальность темы. Значение рыболовства как поставщика пищевой рыбы в настоящее время возросло. В 90-х годах XX века 57% мирового улова пресноводных рыб составили рыбы, выращенные в хозяйствах, в уловах карповых им принадлежало 94%, лососевых- 40%. Одним из факторов, тормозящих дальнейшее развитие прудового рыбоводства, являются паразитарные и инфекционные болезни рыб, наносящие существенный экономический ущерб. На сегодня все рыбные промысловые зоны Бурятии подверглись антропогенной нагрузке, в связи с этим появилась угроза появления инфекционных заболеваний рыб, в частности аэромоноза, и выявления ботулизма у байкальского омуля. Все это говорит об ухудшении экологических условий, которое сказалось на состоянии здоровья, в частности байкальского омуля, повышении чувствительности к инфекционным заболеваниям, выявлении ботулоносительства, что сопровождалось групповыми отравлениями людей со смертельными исходами [99].

Небезинтересен факт появления инфекции рыб Бурятии носящий черты эмерджентности, таких, как аэромоноз (1993-1994, 2002 и 2007г), морбилливирусная чума плотоядных байкальской нерпы (1987-1988гг) (Зверева О.А.,2002). Поэтому возникает необходимость разработки и внедрения экстренных мер по предупреждению возникновения заразных заболеваний у рыб, одним из которых является проведение микробиологического и иммунологического мониторинга по оценке эпизоотологического благополучия.

В настоящее время отсутствуют данные по оценке эпизоотического состояния и уровня циркуляции патогенных микробов в водной среде, кормовых угодьях и в организме рыб озер Еравно-Харгинской системы.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилось проведение эпизоотологического, бактериологического и иммунологического мониторинга водной среды обитания кормовых угодий и выявление циркуляции патогенных микроорганизмов в организме соровой рыбы озер Еравно-Харгинской системы.

Исходя из поставленной цели, задачами исследования были:

- Изучение экологических характеристик водной среды в местах промысла рыбы.

- Оценка санитарно - бактериологического состояния воды и микробного пейзажа.

- Изучение биологических характеристик микробных изолятов выделенных из исследуемых рыб.

- Выделение Аеготопаэ Ыс1горЫ1а и изучение его биологических характеристик.

- Разработка иммунологического метода оценки эпизоотологического благополучия по аэромонозу рыб в озерах Еравно-Харгинской системы Республики Бурятия.

Научная новизна. Впервые в полевых экспедиционных условиях проведен комплесный анализ эпизоотологического и микробиологического мониторинга с учетом экологических ситуаций в озерах Еравно-Харгинской системы, о состоянии благополучия по инфекционным заболеваниям промысловых рыб. Разработан иммунологический метод определения уровня циркуляции патогенных аэромонад в организме рыб и водной среде.

Теоретическая и практическая значимость работы. Заложены теоретические основы эпизоотологического и микробиологического мониторинга. Материалы диссертации использовались в практической деятельности заседаний Рыбохозяйственного совета РБ, составлена справка о результатах бактериологических исследований рыб, обитающих в воде Еравно-Харгинских озер в Межрайонный специализированный участок по борьбе с болезнями рыб. Материалы диссертации использовались при разработке технологической карты по профилактике инфекционных заболеваний рыб и проведения ВСЭ.

Основные положения, выносимые на защиту: физико-химическая и санитарно-бактериологическая характеристика воды; биологические свойства микробных изолятов, выделенных из рыб. Иммунологическая оценка уровня антител против аэромонад в организме рыб приготовленным диагностикумом, при постановке реакции агглютинации (РА).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию ФВМ ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия В.Р. Филиппова» (Улан-Удэ, 2005); на международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию профессора Ивана Андреевича Спирюхова «Актуальные вопросы экологической, сравнительной, возрастной и экспериментальной морфологии», (Улан-Удэ, 2007); на международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию профессора Юрия Абогоевича Тарнуева (Улан-Удэ, 2009).

Публикации результатов исследований. Основные результаты научных исследований отражены в 3 печатных работах, из них 1 в рецензируемом журнале.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 144 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложении. Список литературы включают 194 источника, в т.ч. 74 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 5 рисунками.

Основные положения диссертационной работы, выносимой на защиту.

1. Изучение экологических характеристик водной среды в местах промысла рыбы.

2. Оценка санитарно - бактериологического состояния воды и микробного пейзажа.

3. Изучение биологических характеристик микробных изолятов выделенных из исследуемых рыб.

4. Выделение аегошопаБ рЫс!горЫ1а и изучение его биологических характеристик.

5. Разработка иммунологического метода оценки эпизоотологического благополучия по аэромонозу рыб в озерах Еравно-Харгинской системы Республики Бурятия.

ВЫВОДЫ

1. В водоемах Бурятии стали регистрироваться ранее не имевшие эпизоотологического значения инфекционные болезни рыб (аэромоноз, ботулизм, гаффская болезнь), носящие черты эмерджентности.

2. Показатель санитарно-бактериологической оценки воды в местах промысла относится к показателям третьей категории. Они считаются грязными в разные сезоны года.

3. Видовой состав микрофлоры воды преставлен следующими патогенными и условно-патогенными микроорганизмами: Е. coli, Enterobacter agglomerans, Citrobacter freundii, Edwardsieila tarba, Pr. Mirabilis, Pr. Vulgaris.

4. Из различных органов рыб (лещ, сазан, окунь, щука, плотва и др.) выявлено бактерионосительство видов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов: составило 21,1%, цитробактер - 24,1%, сальмонелла возбудитель брюшного тифа) - 3,4%, серратиа рубидака — 13,8%, эдварсиелла — 6,9%, энтеробактер — 2,9%.

5. Иммунологическими методами (РА) можно определить уровень циркуляции аэромонад в водной среде и организме рыб, что может являться ценным диагностическим тестом в оценке эпизоотической ситуации по аэромонозу. Антитела против аэромонад выявлялись в сыворотке крови диагностических титрах 1: 50, 1: 200.

6. Наблюдалась крупная вспышка аэромоноза в озерах Большая Еравна, Сосновское (2002), Исинга (2007), где экономический ущерб выражался 3,5 млн. и 5,0 млн. руб.

7. Основному пользователю ООО «Нептун» по добыче рыбы в озерах Еравно-Хоргинской системы необходимо приобрести технический арсенал (аэратор «Ерш», камышекосилка «Медведка» Ставропольского завода) по улучшению экологического состояния воды озер Еравно-Хоргинской системы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

В связи с вышеизложенными данными нами разработаны предложения Управлению ветеринарии Республики Бурятия по промысловой и рыбоводной деятельности в соответствии с нижеприведенной схемой.

1. При возникновении и установлении диагноза на аэромоноз на неблагополучные водоемы накладовать карантин.

2. Разрешить основному пользователю ОАО «Нептун» лов рыбы в озерах Еравно-Харгинской системы по особому режиму добычи с целью вылова пораженных особей, сокращения популяции восприимчивых рыб и разрыва эпизоотической цепи.

3. ОАО «Нептун» не допускать использование без дезинфекции сетснастей, инструментов, тары применявшихся на неблагополучных по аэромонозу водоемах в благополучных. Без согласования с госветнадзором не проводить перемещение и завоз рыбонасадочного материала, не допускать зарыбление малых водоемов местными жителями без всякого биологического обоснования.

4. Разработать календарную технологическую карту иммунного контроля за эпизоотической ситуацией по аэромонозу.

5. Для улучшения экологических условий необходимо в водоемах Еравно-Харгинской системы разработать систему мер, которая позволит обеспечить безопасность рыб и проживающего населения от инфекционных заболеваний. Для этого необходимо приобретение и использование технических средств: аэратора «Ерш», камышекосилки «Медведка» Ставропольского завода.