Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эффективность применения нового комплексного антибактериального препарата "Энроген" для санации спермы хряков-производителей

На правах рукописи

БОРУНОВА Сеидфатима Мировна

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ НОВОГО КОМПЛЕКСНОГО АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА «ЭНРОГЕН» ДЛЯ САНАЦИИ СПЕРМЫ ХРЯКОВ-ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ

16.00 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

16 00 07 - ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2007

003060769

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им К И Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВ-МиБ) и Всероссийском государственном центре качества и стандартизации лекарственны средств для животных и кормов (ФГУ ВГНКИ)

Научные руководители доктор биологических наук, профессор

Советкин Станислав Васильевич доктор ветеринарных наук, профессор Петров Алексей Михайлович

Официальные оппоненты доктор ветеринарных наук, профессор

Бурлаков Валентин Александрович; доктор биологических наук, профессор Порфирьев Иван Арсентьевич.

Ведущая организация Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет им Н И Вавилова»

Защита состоится « -¿5» ОС 2007 г в «_/$_» часов на заседании диссертационного совета Д 220 042 01 в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им К И Скрябина» по адресу 109472, Москва, ул Академика Скрябина, д 23, тел (495) 377-93-83

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО МГАВМиБ

Автореферат разослан «. » _2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

ТН Грязнева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Для обеспечения потребности населения в мясе и мясных продуктах важная роль отводится свиноводству, как отрасли наиболее скороспелого животноводства (Шахов А Г , 2001, Мисайлов В Д , 2003, Макарова Ю В , 2007)

Наибольший эффект в свиноводстве достигается путем его интенсификации с максимальным использованием маточного поголовья, а репродуктивные возможности свиней во многом зависят от качества хряков-производителей, используемых в технологии искусственного осеменения (Филатов А В , 2005 и др )

Широкое применение антимикробных средств вызвало появление высокоустойчивых штаммов микроорганизмов, значительно снижающих качественные показатели спермы, что приводит к снижению оплодотворяемости, абортам и бесплодию самок, рождению мертворожденного потомства и др (Щербаченко Д Ю , 2006)

Сперма, используемая при искусственном осеменении животных, должна отвечать определенным санитарным требованиям, предусмотренными нормативными документами, а препараты, используемые для разбавления и хранения спермы должны быть безвредными для спермиев

Основными требованиями к санирующим веществам (антибиотики, сульфаниламидные и химиотерапевтические препараты) являются их высокая бактерицидная активность, способность затормаживать обменные процессы спермиев и, тем самым, повышение их способности к хранению

В связи с этим наше внимание было обращено на ряд новых антимикробных средств Так, в настоящее время в ветеринарной практике находят все более широкое применение антимикробные препараты, относящиеся к группе фторхинолонов, и антибиотики широкого спектра действия из группы аминоглюкозидов

Цель и задачи исследований. Целью исследований являлась разработка нового комплексного антимикробного препарата, малотоксичного для спермиев производителей и обладающего широким спектром действия на микрофлору, выделяемую из спермы сельскохозяйственных животных

Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи 1 Изучить уровень инфицирования спермы хряков-производителей различными

видами микроорганизмов

2 Провести сравнительную оценку антибактериальных препаратов, применяемых для санации спермы хряков-производителей сельскохозяйственных животных по ряду показателей (бактерицидная активность, выживаемость и оплодотворяющая способность спермиев)

3 Определить бактерицидное действие энрофлоксацина и гентамицина сульфата на микроорганизмы, выделяемые из спермы

4 Определить синергидное бактерицидное действие энрофлоксацина и гентамицина сульфата на штаммах и изолятах микроорганизмов

5 Установить максимально безвредную дозу для спермиев хряков и минимально бактерицидную дозу препарата ЭНРОГЕН

6 Определить эффективность применения препарата ЭНРОГЕН для санации спермы хряков - производителей

7 Изучить влияние препарата ЭНРОГЕН на оплодотворяющую способность спермиев хряков-производителей

8 Разработать нормативно-техническую документацию на препарат ЭНРОГЕН и определить его экономическую эффективность при искусственном осеменении свиней

Научная новизна. Впервые для санации спермы хряков-производителей был создан комплексный препарат ЭНРОГЕН на основе гентамицина сульфата и энрофлоксацина из группы фторхинолонов и изучены его фармакологические свойства

Установлены безопасность препарата ЭНРОГЕН для спермиев и более высокая бактерицидная активность в отношении условно - патогенной микрофлоры (псевдомонад, эшерихий, стрептококков, стафилококков, протея и др) по сравнению с применяемым в настоящее время санирующим препаратом ПОЛИГЕН

Разработана технология производства препарата ЭНРОГЕН

Практическая значимость заключается в том, что предложенный комплексный санирующий препарат ЭНРОГЕН позволяет получать сперму высокого санитарного и биологического качества, способствует снижению гинекологических заболеваний у свиноматок, а также повышению оплодотворяемости маточного поголовья при искусственном осеменении Полученные данные подтверждены актами, утвержден-

ными руководителями опытно-производственных хозяйств и свинокомплексов Московской, Белгородской и Воронежской областей

На основании результатов исследований разработана нормативно-техническая документация на препарат ЭНРОГЕН (Технические условия, инструкция по применению)

На базеЗАО «Мосагроген» г Москва организовано производство препарата ЭНРОГЕН Полученные серии по качеству соответствовали нормативным документам и прошли производственные испытания

Материалы исследований вошли в «Методические указания по диагностике, терапии и профилактике болезней органов размножения и молочной железы свиней», одобренные секцией патологии, фармакологии и терапии Российской сельскохозяйственной академии 24 марта 2005 г (протокол № 1)

Материалы исследований используются в учебном процессе в Саратовском государственном аграрном университете им Н И Вавилова, Воронежском государственном аграрном университете им. К Д Глинки, Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им К И. Скрябина студентами ветеринарных факультетов при изучении дисциплины «Ветеринарное акушерство, гинекология и биотехника размножения животных», а также на курсах повышения квалификации зооветеринарных специалистов свиноводческих хозяйств

Апробация результатов диссертации. Материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных научно-практических конференциях научных сотрудников и аспирантов ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ ВГНКИ, 2003-2006), на международных научно-производственных конференциях по проблемам лечения и профилактики акушерско-гинекологической патологии с -х животных (Ульяновск, 2007, Ставрополь, 2007), на XV Московском международном ветеринарном конгрессе (2007)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в т ч 4 статьи - в материалах Всероссийских, региональных и республиканских научных конференций и 2 статьи - в научных журналах

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на _страницах

машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждений полученных результатов, выводов, данных о практических использованиях научных результатов, рекомендаций по использованию научных выводов, списка использованной литературы (_источников, в т ч

_иностранных авторов) и приложений Работа иллюстрирована 17 таблицами

и 7 рисунками

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Уровень инфицирования спермы хряков-производителей различными видами микроорганизмов

2 Сравнительные испытания различных антибактериальных препаратов, применяемых для санации спермы животных по ряду показателей (бактерицидная активность, выживаемость и оплодотворяющая способность спермиев)

3 Технология получения нового санирующего препарата ЭНРОГЕН и его фарма-ко-токсикологические свойства,

4 Эффективность ЭНРОГЕНа при искусственном осеменении свиней

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Диссертационная работа была выполнена в период с 2003 по 2007 гг на кафедре акушерства и гинекологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ, в лаборатории отдела пробиоти-ков и биологически активных препаратов ФГУ ВГНКИ, в опытно-производственном хозяйстве «Манихино» Истринского района и свинокомплексе «Кузнецовский» Наро-Фоминского района Московской области, на базе свинокомплекса колхоза им Фрунзе Белгородской области, Межхозяйственного предприятия по производству свинины «9-я пятилетка» и «Краснодонское» Воронежской области

Объектом исследования служили 45 голов хряков-производителей крупной белой породы, ландрас, дюрок и препарат ЭНРОГЕН Предметом исследования явились сперма хряков-производителей, а также клинические, морфо-биохимичес-кие, иммунологические и статистические показатели свиней Всего было исследовано 323 пробы спермы хряков

Животных подбирали по принципу аналогов Искусственное осеменение свиней

проводили спермой от одних и тех же хряков на разделенных эякулятах спермы, разбавленной ГХЦС средой по ГОСТ 17637 - 72 в соотношении 1 3 Всего было осеменено 323 свиноматки

Санитарное качество спермы определяли в соответствии с ГОСТом 20909 2-75 и «Методическими указаниями по ветеринарно-санитарному контролю качества спермы производителей» (1999)

Для выделения и идентификации микроорганизмов из исследуемого материала использовали общепринятые методы, а также методику микологического исследования и оценки спермы, применяемой при искусственном осеменении сельскохозяйственных животных (1978)

Патогенность выделенных микроорганизмов определяли по плазмокоагулирую-щим и гемолитическим свойствам

В сравнительном аспекте была изучена эффективность таких препаратов как ПОЛИГЕН, ГАМП, гентамицин и энрофлоксацин Максимально безвредную дозу изучаемых препаратов определяли по ГОСТ 20909 4-75

В работе были использованы следующие штаммы микроорганизмов Е coh 02, Р aeruginosa (ЦСИО), Р vulgaris a, S faecahs, штамм «Константиновский».

Экономическую эффективность применения препарата ЭНРОГЕН определяли согласно «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (2002)

Экспериментальные данные обрабатывали по Ашмарину И П и Воробьеву А А (1962), а также методами корреляционного, вариационного и факторного статистического анализа с использованием компьютерной программы «Statistica 6,0»

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Определение уровня инфицирования спермы хряков-производителей различными микроорганизмами

При сравнительной оценке санитарного качества спермы, полученной от одних и

тех же хряков в разное время года, установлено, что в осенне-зимний период свеже-

полученная неразбавленная сперма хряков имела высокое микробное число и коли-

титр (табл 1)

Таблица 1 Качество спермы хряков в зависимости от периода исследования

Показатели Исследуемая сперма

В осенне-зимний период В весенне-летний период

Свежеполученная неразбавленная Разбавленная ГХЦС Свежеполученная неразбавленная Разбавленная ГХЦС

Число хряков 30 30 30 30

Исследовано эяку-лятов 120 120 120 120

Число микробных клеток в 1 см3 78428 ±19237 26166 ± 7399 122268 ±31565 28742 ± 9674

Коли-титр, число % <0,1 -/- 4/3,3 -/- -/-

0,1 4/3,3 6/5,0 -/- 5/4,2

0,01 16/13,3 37/30,8 8/6,6 23/19,1

0,001 30/25,0 42/35,0 40/33,3 38/31,6

0,0001 70/58,4 31/25,8 72/60,0 54/45,0

Грибы, число/% 80/66,7 60/50,0 90/75,0 74/61,6

Условно-патогенная микрофлора (УПМ), число/% 60/50,0 48/40,0 73/60,8 60/50,0

Так, в целом число микроорганизмов в исследуемых эякулятах от хряков в осенне-зимний период было на уровне 78428 + 19237, а в весенне-летний - в 1,5 раза выше - 122268 ± 31565 КОЕ в 1 см3 неразбавленной спермы Достаточно высокий коли-титр (0,0001) имели 58,4-60,0% образцов во все периоды исследований, что также указывает на значительный уровень микробной контаминации спермы

Разбавление спермы ГХЦС средой способствовало существенному снижению в ней количества микроорганизмов Так, среднее микробное число по 120 исследованным пробам разбавленной спермы в осенне-зимний период составило 26166 ± 7399 и в весенне-летний - 28742 ± 9674 КОЕ/см3, причем количество образцов с коли-титром 0,0001 составляло 25,7% и 45,0 % соответственно

По сравнению с результатами исследований образцов свежеполученной спермы снижение микробного числа после ее разбавления ГХЦС средой было в 3,0 (осенне-зимний период) и 4,25 (весенне-летний период) раза, а количество проб с коли-титром 0,0001 - в 2,26 и 1,33 раза соответственно Однако, несмотря на такое снижение числа микроорганизмов, микробная контаминация спермы оставалась еще достаточно высокой Аналогичные результаты получены и по уровню контаминации спермы условно-патогенными микроорганизмами и грибами Так, в ноябре-феврале 50,0% образцов свежеполученной и 40,0% разбавленной спермы были контамини-

рованы условно-патогенными микроорганизмами, а в марте-июне их количество было увеличено уже до 60,8% и 50,0% соответственно

Анализ образцов как свежеполученной, так и разбавленной ГХЦС средой спермы показал, что чаще всего выделяли бактерии группы кишечной палочки (БГКП) -100,0% и 100,0%, дрожжеподобные грибы - 75,0% и 61,6% образцов соответственно В 24,1% образцов свежеполученной и 15,0% - разбавленной спермы была обнаружена Ps aeruginosa, в 26,6% и 20,0% - сенная палочка (В subtihs) соответственно Доля других микроорганизмов (стрептококков, стафилококков, протея) была на уровне от 4,2 до 12,5% Ни в одном случае не были выделены S aureus (табл 2)

Таблица 2 Видовой состав микрофлоры, выделенной из спермы хряков

Микрофлора Выделено из образцов спермы (п=120)

Свежеполученной неразбавленной Разбавленной

количество изолятов % количество изолятов %

БГКП 120 100,0 120 100,0

Дрожжеподобные грибы 90 75,0 74 61,6

В subtilis 32 26,6 24 20,0

Р aeruginosa 29 24,1 18 15,0

Стрептококки 15 12,5 10 8,3

Стафилококки 8 6,6 5 4,2

Протей 7 5,8 5 4,2

Анализ видового состава микроорганизмов, присутствующих в сперме животных в ассоциации, позволил установить, что если БГКП чаще всего встречаются в ассоциации, то Р aeruginosa присутствовал в монокультуре у 35,7% образцов эякуля-тов

Сравнительная оценка антибактериальных препаратов, применяемых для санации спермы производителей сельскохозяйственных животных

Определение бактерицидного действия препаратов

В настоящее время для санации спермы животных предложены препараты ГАМП (гентамицин+ампициллин) и ПОЛИГЕН (полимиксин+гентамицин) С целью определения их эффективности нами были проведены исследования по оценке влияния этих препаратов на микробиологические показатели разбавленной и замороженно-

оттаянной спермы хряков Для этого данные препараты вносили в образцы спермы в концентрации 300 и 600 мкг на 1 см3 ГХЦС среды, а контролем служили образцы спермы без их внесения

Добавление к сперме хряков препаратов ГАМП и ПОЛИГЕН значительно повышало санитарное качество спермы, снижая уровень контаминации по сравнению с исходным уровнем в 29-192 раза Так, если в разбавленной ГХЦС средой (1 3) сперме до замораживания число микробных клеток было в пределах 26166±7399 КОЕ/см3, то после добавления 300 мкг/см3 ПОЛИГЕНА их число стало 581,0+59 КОЕ/см3, 600 мкг/см3 - всего 153,3±25 КОЕ/см3 В случае добавления ГАМПа снижение микробной обсемененности спермы до и после ее замораживания было несколько хуже 873,5±76, 394,0±29, 699,0+76 и 210±17 КОЕ/см3 соответственно

Анализируя полученные результаты можно заключить, что ПОЛИГЕН обладает более выраженным бактерицидным действием, чем ГАМП Так, при добавлении к разбавленной сперме ПОЛИГЕНА в дозе 300 мкг/см3 ее микробное число было снижено в 45 раз по сравнению с исходным уровнем (без внесения препарата), а при дозе 600 мкг/см3 - в 171 раз, тогда как ГАМП в тех же дозах обеспечивал снижение числа микроорганизмов в 30 и 66,4 раза Аналогичные данные получены и при санации замороженной спермы - 60,3-192,8 и 34,5-114,8 раза соответственно

Следует отметить, что исследованные препараты губительно действовали на условно-патогенную микрофлору, так как ни в одной из проб спермы с добавлением препаратов ГАМП и ПОЛИГЕН указанная микрофлора не была выделена, а коли -титр во всех пробах с препаратами был выше 0,1, тогда как в пробах спермы, необработанной санирующими препаратами, грибы и условно-патогенная микрофлора выделялась в 50-70 и 30-40 % случаев соответственно

Таким образом, добавление комплексных препаратов ГАМП и ПОЛИГЕН как в разбавленную, так и в замороженную сперму хряков, значительно улучшало ее санитарное качество, подавляло условно-патогенную микрофлору и снижало микробное число, причем бактерицидное действие препарата ПОЛИГЕН было в 1,5 раза эффективнее, чем препарата ГАМП

Определение максимально безвредной дозы препаратов

Одним из наиболее важных моментов в применении препаратов для санации спермы наряду с определением их бактерицидного действия является определение их максимально безвредной дозы для спермиев Для этого было проведено 3 опыта по изучению изменения биологического качества спермы хряков по абсолютной выживаемости и выживаемости спермиев в часах при добавлении санирующих препаратов ГАМП и ПОЛИГЕН в рекомендуемых дозах В качестве контроля использовали образцы спермы без добавления санирующих препаратов

Было установлено, что наиболее безвредным препаратом для спермиев оказался ПОЛИГЕН в дозе 300 и 600 мкг/см3 среды, в присутствии которого спермии хряков выживали в течение 317±25 и 351±32 ч (на 21-34% выше контроля), тогда как при ГАМПе - 281±19 и 286±10 ч (на 2-4% выше контроля) соответственно В контрольных образцах спермии выживали в течение 223+15 - 262+25 ч

Анализ данных по абсолютной выживаемости спермиев хряков показал, что лучшие результаты были получены при внесении в сперму ПОЛИГЕНа, хотя выживало в зависимости от дозы 111-118% спермиев по сравнению с контролем, тогда как при ГАМПе данный показатель был в пределах 103-108% Кроме того, в случае применения ГАМПа в 9-26% образцов отмечали агглютинацию спермы хря-ков Так, выживаемость спермиев повышалась в часах по сравнению с контролем на 5-18% и 18-23% соответственно Кроме того, было отмечено снижение числа выбракованных эякулятов из-за ухудшения подвижности спермиев на 6,0- 6,1%, а при ПОЛИГЕНе в дозе 600 мкг/см3 - на 100%

Таким образом, проведенные нами исследования показали, что применяемые в настоящее время для санации спермы хряков-производителей препараты ГАМП и ПОЛИГЕН обладают достаточно высокой бактерицидной активностью в отношении микроорганизмов Однако при рассмотрении их безвредности в отношении спермиев хряков можно отметить, что абсолютная выживаемость спермиев несущественно отличалась от результатов анализа контрольной (несанированной) спермы - всего на 3-8% при использовании ГАМПа и 11-18% - ПОЛИГЕНа

Разработка нового антибактериального препарата для санации спермы хряков-производителей

Определение безвредности для спермиев хряков-производителей энрофлона и гентамицина

Для определения максимально безвредной дозы выбранных антимикробных компонентов разбавленную сперму с препаратами исследовали по биологическим показателям. абсолютной выживаемости (Б) и выживаемости спермиев в часах (ч) Для этого в разбавленную сперму хряков (ГХЦС средой) вносили энрофлон в дозе от 50 до 2000 мкг/см3 (табл 3) и гентамицин - от 100 до 2000 мкг/см3 (табл 4) В качестве контроля использовали образцы спермы без добавления санирующих препаратов Всего было проведено 4 опыта

Таблица 3 Абсолютная выживаемость (Б) и выживаемость спермиев хряков в часах в зависимости от дозы энрофлона (п = 4)

Энрофлон, мкг/см3 среды Результаты анализа спермы

Заморожено-оттаяная сперма Свежеполученная сперма

Абсолютная выживаемость, S S, % к контролю Выживаемость, час Выжива-е-мость, % к контролю Абсолютная выживаемость, S S, %к контролю Выживаемость, час Зыжива-е-мость, % к контролю

50 897 108,7 213 112,7 993 120,8 210 121,4

100 981 118,9 225 119,0 1048 127,5 219 126,6

200 1035 125,4 228 120,6 1110 135,0 231 133,5

300 1041 126,2 228 120,6 1122 136,5 231 133,5

400 1041 126,2 228 120,6 1105 134,4 235 135,8

500 1065 129,1 228 120,6 1077 131,0 231 133,5

600 1065 129,1 231 122,2 1036 126,0 231 133,5

750/800 960 109,1 199 105,3 1021 124,2 211 121,9

1000 897 108,7 198 104,8 1010 122,9 204 117,9

1250/1300 894 108,4 196 103,7 952 115,8 196 113,3

1500 891 108,0 192 101,6 904 110,0 180 104,0

1750/1800 846 102,5 190 100,5 744 90,5 147 85,0

2000 837 101,5 190 100,5 580 70,6 118 68,2

Контроль 825 100,0 189 100,0 822 100,0 173 100,0

Как видно из представленных в таблице 3 данных, энрофлон оказывал незначительное токсическое действие на спермии хряков при внесении его в дозе 600 мкг/см3 и менее Так, если при внесении энрофлона в дозе от 50 до 600 мкг/см3 абсо-

лютная выживаемость и выживаемость спермиев в часах превышали значения контрольного образца спермы на 18,9-29,1% и 19,0-22,2%, то уже при концентрации 800

мкг/см3 - только на 9,1% и 5,3% соответственно При увеличении концентрации эн-рофлона происходило постепенное снижение абсолютной выживаемости и выживаемости в часах и при внесении 1800-2000 мкг/см3 значение этих показателей имело несущественную разницу с контрольным образцом - всего 0,5-1,5%

Таблица 4 Абсолютная выживаемость (8)и выживаемость спермиев хряков в часах в зависимости от дозы гентамицина (п = 4)

Гентамицин, мкг/см3 среды Результаты анализа спермы

Заморожено-оттаяная сперма Свежеполученная сперма

Абсолютная выживаемость, S 8, % к контролю Выживаемость, час Выжива-е-мость, % к контролю Абсолютная выживаемость, S 8, % к контролю Выживаемость, час Выжива-е-мость, % к контролю

100 714 112,3 153 108,5 823 111,8 202 110,4

200 723 115,1 156 110,6 880 119,6 208 113,7

400 756 118,9 156 110,6 1013 137,6 231 126,2

600 777 122,2 165 117,0 1050 142,7 237 129,5

800 708 111,3 159 112,8 1020 138,6 229 125,1

1200 708 111,3 159 112,8 996 135,3 228 124,6

1400 645 101,4 147 104,3 957 130,0 223 121,8

1600 616 96,6 135 95,7 918 124,7 207 113,1

1800 576 90,6 128 90,8 900 122,3 202 110,4

2000 513 80,7 117 83,0 876 119,0 196 107,1

Контроль 636 100,0 141 100,0 736 100,0 183 100,0

В отличие от энрофлона, гентамицин оказался более токсичным для спермиев хряков снижение абсолютной выживаемости и выживаемости спермиев в часах наблюдалось при его концентрации в среде 1600 - 2000 мкг/см3 среды При этом абсолютная выживаемость спермиев была ниже контроля на 3,4-19,3 %, а выживаемость спермиев в часах (ч) -на 4,3-17,0 % Лучшие результаты по двум показателям выживаемости отмечались при концентрации гентамицина 600 мкг/см3, которые превышали значения контроля на 22,2% и 17,0% соответственно

По сравнению со спермой хряков гентамицин для спермиев быков оказался менее токсичным, чем энрофлон Так, при дозах антибиотика в пределах 1600-2000 мкг/см3 абсолютная выживаемость спермиев по сравнению с контролем была выше на 24,7-19,0 %, а выживаемость спермиев в часах - на 13,1 - 7,1 %, тогда как при меньших концентрациях гентамицина значения этих показателей превышали таковые в контроле на 22,3-42,7% и 21,8-29,5% соответственно.

Таким образом, результаты исследований показали, что степень токсичности од-

них и тех же антибиотиков на спермин разных видов животных неодинакова Так, спермии хряков заморожено-оттаяная оказались менее чувствительными к энрофло-ну, чем сперма свежеполученная, а к гентамицину — наоборот

Изучение бактерицидного действия энрофлона и гентамицина на штаммы микроорганизмов, выделяемых из спермы

После установления безопасных концентраций энрофлона и гентамицина следующим этапом исследований являлось определение их минимальной бактерицидной дозы в отношении штаммов культур УПМ, чаще всего контаминирующих сперму производителей и взятых как по отдельности, так и в ассоциации В опытах были использованы 2-х суточные агаровые культуры Р aeruginosa, Е coli, Р vulgaris а и S faecahs Из данных микроорганизмов при помощи оптического стандарта мутности готовили одномиллиардную микробную взвесь, из которой затем путем последовательных разведений в физиологическом растворе получали взвесь, содержащую 50 тыс микробных клеток в 1 см3 Для приготовления ассоциации микроорганизмов, чаще всего встречающейся в сперме, их смешивали в соотношении 1 1 При изучении бактерицидных свойств гентамицина, его вносили в среды в концентрации от 12,5 до 600 мкг/см3

Было установлено, что минимальные бактерицидные дозы гентамицина для Ecoli находились в пределах 300 мкг/см3 (бактериостатическая - 200 мкг/см3), Р aeruginosa - 350 мкг/см3 (300 мкг/см3), S faecalis - 400 мкг/смЗ (350,0 мкг/ см3), на протей и ассоциацию микроорганизмов гентамицин оказывал только бактериостати-ческое действие в дозах 350-500 мкг/см3 среды

Аналогичные исследования были проведены с энрофлоном, который вносили в среды в концентрации 12,5-300,0 мкг/ см3 Минимальные бактерицидные дозы энрофлона для Е coli находились в пределах 200 мкг/см3 (бактериостатическая - 100150 мкг/см3), Р aeruginosa - 300 мкг/см3 (150-250 мкг/см3), стрептококка - 250 мкг/см3 (100-200 мкг/см3), протея - 250 мкг/см3 (100-200 мкг/см3), а ассоциации микроорганизмов - 300 мкг/см3 (200-250 мкг/см3)

При сравнении бактерицидной активности изучаемых антимикробных соединений установили, что минимально бактерицидная доза энрофлона для Е coli, Р aeruginosa, Р vulgaris a, S faecalis и ассоциации микроорганизмов была значитель-

но выше по сравнению с гентамицином

Таким образом, проведенные исследования показали, что среды, используемые для разбавления и хранения спермы хряков, не оказывали существенного влияния на бактерицидную активность санирующих препаратов по сравнению с физиологическим раствором

Изучение синергидного бактерицидного действия энрофлоксацина и гентамицина сульфата на штаммах и изолятах микроорганизмов

Учитывая бактерицидные концентрации энрофлона и гентамицина, нами была изучено синергидное действие данных антимикробных средств с целью снижения их суммарной концентрации в препарате и повышения бактерицидного действия в отношении микроорганизмов, контаминирующих сперму хряков Для этого нами были испытаны бактерицидные и бактериостатические свойства различных соотношений энрофлона и гентамицина для выбора наиболее оптимального Данные вещества в концентрациях от 12,5 до 150 мкг/см3 смешивали в соотношениях 1 1, 3 1, 1 3, 1 б Данные определения оптимального соотношения гентамицина и энрофлоксацина в препарате ЭНРОГЕН, показали, что оптимальными их соотношениями являются 1 1 и 1 3 Важно также отметить, что подбор оптимальных соотношений антибиотиков в комбинированном препарате целесообразно проводить при низких концентрациях на уровне бактериостатических, т к при более высоких концентрациях можно не уловить их сочетанное бактерицидное действие на микрофлору Так, при соотношении гентамицина и энрофлоксацина в препарате ЭНРОГЕН в общей дозе 12,5 мкг/см3 среды он уже проявляет бактериостатическое действие на кишечную папочку, а в дозе 25,0 мкг/см' при том же соотношении гентамицина и энрофлоксацина бактерицидную, что не наблюдается при соотношении гентамицина и энрофлоксацина 3.1 и 1 6 в той же дозе

Определение максимально безвредной дозы для спермиев хряков и минимально бактерицидной дозы препарата ЭНРОГЕН

После отработки состава комплексного антимикробного препарата для санации спермы хряков были проведены исследования по определению его максимально безвредной дозы для спермиев Для этого в разбавленные ГХЦС средой сперму хряков

вносили различные концентрации разработанного препарата ЭНРОГЕН и изучали абсолютную выживаемость и выживаемость спермиев в часах (табл 5)

Таблица 5 Абсолютная выживаемость (в) и выживаемость спермиев хряков в часах в зависимости от дозы ЭНРОГЕНА

ЭНРОГЕН, мкг/см3 среды Результаты анализа спермы

Заморожено-оттаяная сперма Свежеполученая сперма

Абсолютная выживаемость, Э 8,% к контролю Выживаемость, час Выжива-е-мость, % к контролю Абсолютная выживаемость, S S, % к контролю Выживаемость, час Выжива-е-мость, % к контролю

50 687,0 103,2 144,0 102,1 1110,0 118,4 240,0 119,4

100 711,0 106,8 162,0 114,9 1036,0 110,6 234,0 116,4

200 798,0 119,8 172,5 122,3 1081,5 115,4 238,5 118,6

400 813,0 122,1 174,0 123,4 1105,5 117,9 244,5 121,6

800 846,0 127,0 184,5 130,8 1098,2 117,1 241,5 120,1

1200 849,0 127,5 184,5 130,8 1069,5 114,1 241,5 120,1

1600 810,0 121,6 184,5 130,8 985,0 105,1 214,5 106,7

2000 762,0 114,4 181,5 128,7 945,0 100,8 211,5 105,2

2400 730,5 109,7. 172,5 122,3 790,5 84,3 183,0 91,0

2800 661,5 99,3 157,5 111,7 729,0 77,8 169,5 84,3

3200 625,5 93,9 156,0 110,6 694,5 74,1 157,5 78,3

Контроль 666,0 100,0 141 100,0 937,5 100,0 201,0 100,0

Изучение безвредности ЭНРОГЕНА для спермиев хряков показало, что их абсолютная выживаемость снижалась соответственно на 0,7-6,1 % по сравнению с контролем при концентрации препарата в ГХЦС среде в количестве 2800-3200 мкг/см3, тогда как выживаемость спермиев в часах была при этих же концентрациях препарата на 10,6-11,7% выше значений контрольного образца

Наилучшие результаты по безвредности ЭНРОГЕНА для спермы хряков отмечены в интервале его концентраций от 200 до 2000 мкг/см3, тогда как для спермы свежеполученной - от 200 до 1200 мкг/см3 Это показывает, что сперма хряков оказалась менее чувствительной к ЭНРОГЕНУ, чем сперма замороженно-оттаянная

После изучения безвредности ЭНРОГЕНа для спермиев хряков важным являлось выяснение минимальной бактерицидной дозы препарата в отношении микроорганизмов, выделяемых из спермы этих производителей Для этого различные дозы препарата вносили в среды, применяемые для разбавления и хранения спермы (физиологический раствор, среды ЛГЖ, ГХЦС) Были использованы концентрации ЭНРОГЕНА в пределах 12,5 - 300 мкг/ см3, т к использование более высоких кон-

центраций, на наш взгляд, было нецелесообразно по причине большого расхода препарата (табл 6)

Таблица 6 Миниальные бактерицидные концентрации гентамицина, энрофлона и ЭНРОГЕНА в отношении ряда микроорганимов

Культуры микроорганизмов

Доза, мкг/см3 Препарат Е coli Р aerugi- Р vulgaris S faecahs Ассоциация мик-

nosa а роорганизмов

Гентамицин + + + + +

12,5 Энрофлон + + + + +

ЭНРОГЕН ± + + + +

Гентамицин + ± + + +

25,0 Энрофлон + + + + +

ЭНРОГЕН - + + + +

Гентамицин + + + + +

50,0 Энрофлон + + + + +

ЭНРОГЕН - - ± + +

Гентамицин + + + + +

100,0 Энрофлон ± + ± ± +

ЭНРОГЕН - - ± + ±

Гентамицин + + + + +

150,0 Энрофлон + + ± +

ЭНРОГЕН - - - - -

Гентамицин + + + +

200,0 Энрофлон - ± - ± +

ЭНРОГЕН - - - - -

Гентамицин ± + + + +

250,0 Энрофлон - + - - ±

ЭНРОГЕН - - - - -

Гентамицин - + + +

300,0 Энрофлон - - - - -

ЭНРОГЕН - - - - -

"+"- рост микроорганизмов, "- "- рост отсутствует, "+"- задержка роста микроорганизмов

Проведенные исследования показали, что препарат ЭНРОГЕН обладал более высокой бактерицидной активностью в отношении ряда микроорганизмов, чаще всего присутствующих в сперме животных, по сравнению с гентамицином и энрофлоном

Из полученных данных следует, что комплексный препарат ЭНРОГЕН в дозе 25 мкг/см3 среды оказывал бактерицидное действие на Е coli и бактериостатическое - на Р aeruginosa, тогда как отдельно гентамицин и энрофлон не подавляли рост вышеуказанных микроорганизмов В дозе 50 мкг/см3 среды ЭНРОГЕН проявлял бактерицидное действие на кишечную и синегнойную палочки и бактериостатическое действие на стрептококки и протей, что не наблюдалось при применении отдельно ген-

тамицина и энрофлона В дозе 200 мкг/см3 ЭНРОГЕН оказывал бактерицидное действие на все использованные в опытах микроорганизмы

Таким образом, результаты экспериментальных исследований позволяют сделать вывод о синергидном бактерицидном действии энрофлоксацина и гентамицина при их комплексном применении, что позволяет существенно снизить их суммарную концентрацию в препарате ЭНРОГЕН

Эффективность применения нового комплексного антимикробного препарата ЭНРОГЕН для санации спермы хряков-производителей

Следующим этапом исследований являлось изучение бактерицидного действия ЭНРОГЕНА непосредственно на сперме животных Для определения эффективности препарата были проведены исследования по оценке его влияния на микробиологические показатели разбавленной спермы хряков Для этого в образцы спермы препарат добавляли в концентрациях 50, 100 и 150 мкг на 1 см3 ГХЦС среды, а контролем служили образцы спермы без его внесения (табл 7)

Таблица 7 Бактерицидное действие препарата ЭНРОГЕН на микрофлору

спермы хряков

Неразбавленная Сперма, разбавленная ГХЦС средой

Показатель без препа-ра-та с 50 мкг/см3 с 100 мкг/см3 с 150 мкг/см3

сперма ЭНРОГЕНа ЭНРОГЕНа ЭНРОГЕНа

Количество проб 150 150 57 140 36

Среднее число мик- 574941,95 96207,5±1004 87,57± 32,6± 13,5±

роб клеток ±51732,0 ,9 18,7 9,5 2,9

в 1 см3 спермы

Число проб без - - 35 91 25

микрофлоры / % 61,4 65,0 69,4

Коли-титр 0,00001 30/32,3

0,0001 24/25,8 - - - -

0,001 57/38,0 25/16,7 - - -

0,01 17/11,3 29/19,3 - - -

0,1 4/2,6 24/16,0 2/3,1 - -

выше 0,1 18/12,0 72/48,0 57/100,0 140/100,0 36/100,0

Анализ полученных данных показывает, что свежеполученная неразбавленная и

разбавленная 1 2 ГХЦС средой сперма хряков до внесения препарата ЭНРОГЕН имела высокую микробную контаминацию, которая составляла соответственно

574941,9±51732,0 и 96207,5±1004,9 КОЕ/см3 При санации разбавленной спермы хряков препаратом ЭНРОГЕН в дозе 50 мкг/см3 среды количество микроорганизмов в ней было а пределах 87,57±18,7 КОЕ/см3, 100 мкг/см3 - 32,6+9,5 , а 150 мкг/см3 -13,5+2,9 КОЕ/см3, причем число проб спермы без микрофлоры было 61,4%, 65,0 и 69,4% соответственно

Коли-титр во всех исследованных пробах при использовании препарата ЭНРОГЕН был выше 0,1 200 мкг/см3

После получения результатов о положительном влиянии препарата ЭНРОГЕН на уровень снижения микробной контаминации спермы хряков нами были проведены исследования по санации замороженной спермы быков Для этого препарат ЭНРОГЕН был использован в дозе 200 мкг/см3 среды ЛГЖ Проведенные испытания показали, что количество микроорганизмов в 1 см3 спермы было в пределах 11,0±0,09, при этом 95,5% образцов спермы были свободными от микрофлоры, а коли-титр во всех случаях был выше 0,1 По санитарному показателю было выбраковано только 1,3% образцов спермы

Полученные данные свидетельствуют о выраженном бактерицидном действии комплекса гентамицина и энрофлона в препарате ЭНРОГЕН

Таким образом, проведенные исследования подтвердили эффективность применения нового комплексного антибактериального препарата ЭНРОГЕН для санации спермы хряков и быков-производителей

Влияние препарата ЭНРОГЕН на оплодотворяющую способность спермиев хряков - производителей

Определение эффективности применения изучаемых препаратов для санации спермы хряков-производителей проводили на двух свинокомплексах Для этого на свинокомплексе «Кузнецовский» с препаратом ЭНРОГЕН в сперме было осеменено 856 и с препаратом ПОЛИГЕН - 630 свиноматок, на свинокомплексе «Краснодонское» - 59 и 134 свиноматки, соответственно В контрольных группах осеменение свиноматок проводили разбавленной не санированной спермой

Оценку эффективности препаратов проводили по числу опоросившихся свиноматок и пришедших повторно в охоту, а также по количеству полученных поросят на 1 свиноматку (табл 8)

Таблица 8 Результаты осеменения свиноматок спермой хряков-производителей, санированной ЭНРОГЕНОМ и ПОЛИГЕНОМ

Наименование Доза, мкг/ Осеменено свиноматок Опоросилось Получено поросят

препарата см3 среды всего повторно пришедших в охоту число % всего На одну матку

кол-во %

Свинокомплекс «Кузнецовский»

ЭНРОГЕН 150 856 122 14,3 734 85,7 7707 10,5

ПОЛИГЕН 600 630 102 16,2 528 83,8 5333 10,1

КОНТРОЛЬ — 140 32 22,9 108 77,1 1026 9,5

Свинокомплекс «Краснодонское»

ЭНРОГЕН 150 59 9 15.3 47 80.0 484 10.3

ПОЛИГЕН 300 63 12 19,0 49 78,0 456 9,3

600 71 12 17,0 57 80,0 547 9,5

КОНТРОЛЬ — 52 11 21,0 40 77,0 364 9,1

Аналогичные исследования на свинокомплексе «Краснодонское» также выявили некоторое преимущество препарата ЭНРОГЕН в дозе 150 мкг/см3, который обеспечил плодотворное осеменение 80% свиноматок, в то время как при применении ПОЛИГЕНа в дозах 300 и 600 мкг/см3 ГХЦС среды соответственно было осеменено 78% и 80% и в контроле - 76 %, получено поросят соответственно - 10,3, 9,3 и 9,6 на одну матку, в группе без санирующих препаратов (40 свиноматок), получено поросят на одну матку - 9,1

Таким образом, проведенные исследования выявили более высокую эффективность разработанного препарата ЭНРОГЕН по сравнению с ПОЛИГЕНОМ по влиянию на оплодотворение свиноматок

В результате повышения оплодотворяемости было получено дополнительно 866 поросят, что превышает показатели контрольных свиноматок в 1,4 раза

Стоимость приплода определяли из расчета количества полученного молодняка, живой массы приплода и цены реализации 1 кг живой массы (61 руб)

- до применения препарата - 647 61 1,2 = 4736,4 руб,

- через 2 месяца после применения препарата - 866 61 1,2 = 63391,2 руб Стоимость дополнительной продукции составила

63391,2 - 4736,4 = 16030,8 руб

Материальные затраты складывались из стоимости препарата ЭНРОГЕН, которые составили 1200 руб за 1 кг Учитывали количество израсходованного ЭНРОГЕНа -

40 мг на 105 кг продукции

Таким образом, экономический эффект применения препарата ЭНРОГЕН составил 143800,9 руб , а экономический эффект на рубль затрат - 80,72 руб

ВЫВОДЫ

1 Установлена высокая микробная контаминация свежеполученной неразбавленной спермы хряков-производителей, которая в среднем составляет 78428 ± 19237 м т в 1 см3, а коли-титр - от 0,001 до 0,0001 (у 60% исследованных проб) Микрофлора спермы состоит из ассоциации микроорганизмов, которая представлена си-негнойной, кишечной, сенной палочками, грибами, стрептококками Наиболее часто из спермы выделяют синегнойную палочку и протей

2 Выявлена определенная закономерность, что сперма хряков, полученная в весенне-летний период, содержит значительно большее количество микробных клеток и высокий коли-титр, чем сперма, полученная в зимнее время года

3 Введение в искусственные среды новых комплексных санирующих препаратов ГАМП и ПОЛИГЕН в разбавленную и замороженную сперму хряков в дозах 300-600 мкг/см3 среды подавляет рост условнопатогенной микрофлоры, снижает микробное число в 29-192 раза в разбавленной и замороженной сперме

4 На фоне применения препарата ПОЛИГЕН происходит увеличение качества спермы в среднем на 10,2%, концентрации спермиев в 1 мл объема эякулята на 0,033 млрд, активность на 0,3 балла, а резистентность - на 388,25 ед , сочетанное применение санирующих препаратов спермы у хряков-производителей оказывает положительное воздействие на соотношение живых и мертвых спермиев У 75% хряков-производителей произошло увеличение среднего показателя живых спермиев на 18,6%, а активность спермиев у 85% превышала фоновый показатель на 19,1% Санирующее действие препарата ПОЛИГЕН в разбавленной и замороженной сперме хряков в 1,5 раза эффективнее, чем препарата ГАМП

5 При санации как разбавленной, так и замороженной спермы хряков препаратами ГАМП и ПОЛИГЕН в дозах 300 и 600 мкг/см3 среды улучшались биологические

показатели качества спермы сохранность акросом - на 7-12 %, а выживаемость спермиев, по сравнению с не санированной спермой - на 22-29 % Микробная контаминация спермы хряков-производителей была выше, чем обсемененность эякулятов без применения препарата ЭНРОГЕН

6 Комплексный препарат ЭНРОГЕН более эффективен по сравнению с входящими в его состав препаратами ЭНРОФЛОКСАЦИНОМ и ГЕНТАМИЦИНОМ СУЛЬФАТОМ в дозе 25 мкг/см3 и 50 мкг/см3 он оказывает бактерицидное действие на кишечную и синегнойную палочки, в дозе 150 мкг/см3 среды - на стрептококки, протей и ассоциацию исследованных микроорганизмов

7 Добавление в сперму хряков комплексного санирующего препарата ЭНРОГЕН в дозе 150 мкг/см3 значительно улучшило санитарное качество спермы Среднее число микробных тел в 1 см3 разбавленной спермы составляло 13,5±2,9 В 69% спермы рост микроорганизмов не установлен, а коли-титр был отрицателен во всех образцах исследованной спермы

8. Сочетание ГЕНТАМИЦИНА СУЛЬФАТА и ЭНРОФЛОКСАЦИНА в соотношении IIb препарате ЭНРОГЕН близко к оптимальным величинам, а их бактерицидное действие на микрофлору связано с их синергидным действием

9 Применение для искусственного осеменения свиноматок спермы хряков, сохраненной при температуре 16-20°С, санированной препаратами ГАМП и ПОЛИГЕН повышает оплодотворяемость свиноматок при 1-ом осеменении на 8-13 % , а также повышают выход поросят на I свиноматку в 1,8-1,9 раз, по сравнению с не санированной спермой животных контрольной группы

10 Оплодотворяемость свиноматок после первого осеменения при применении спермы хряков, санированной препаратом ЭНРОГЕН в дозе 150 мкг/см3 среды, составила 85,7%-80% и получение поросят в среднем 10,5-10,3 на одну свиноматку

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ

РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Для санирования спермы хряков-производителей разработан новый эффективный комплексный препарат ЭНРОГЕН

2 Разработан проект технических условий на препарат ЭНРОГЕН (ТУ)

3 Разработана временная инструкция по применению санирующего препарата

ЭНРОГЕН в ветеринарии

4 На базе временной инструкции на препарат ЭНРОГЕН организовано серийное производство препарата Показатели качества препарата соответствуют требованиям ТУ

5 По результатам исследований разработаны и одобрены 24 марта 2005 г (протокол № 1) секцией патологии, фармакологии и терапии Российской сельскохозяйственной академии «Методические указания по диагностике, терапии и профилактике болезней органов размножения и молочной железы свиней»

6 Материалы исследований используются в учебном процессе в ВУЗах РФ при изучении студентами и слушателями курсов повышения квалификации зооветеринарных специалистов свиноводческих хозяйств дисциплины «Ветеринарное акушерство, гинекология и биотехника размножения животных»

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1 Для повышения эффективности воспроизводства свиноматок рекомендуется вводить в искусственные среды - разбавители спермы новые комплексные санирующие препараты ЭНРОГЕН в дозе 150 мкг/см3, ГАМП и ПОЛИГЕН в дозах 300-600 мкг/см3 среды

2 Для искусственного осеменения свиноматок рекомендуется применять сперму хряков сохраненную при 16-20°С и санированную препаратами ГАМП и ПОЛИГЕН, что повышает оплодотворяемость при 1-ом осеменении на 8-13 %, а выход поросят на 1 свиноматку в 1,8-1,9 раз, по сравнению с не санированной спермой животных контрольной группы, а при использовании нового санирующего препарата ЭНРОГЕН увеличивается оплодотворяющая способность свиноматок на 4-8% по отношению к контролю

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Санирующие препараты для повышения качества спермы хряков-производи-

телей /С В Советкин, В Н Родина, М Е Евсюков, В Т Смирнов, С М Саидова

//Ветеринария - 2000 - № 6 - С 48-50

2 Советкин С В Чувствительность микроорганизмов, выделенных из спермы быков-производителей к полимиксину Е и энрофлону /С В Советкин, В H Родина, С M Саидова // Сборник научных трудов ВГНКИ Том №63 M Техполиграфцентр-2001-С 176-177

3 Борунова С M Разработка нового комплексного препрата, применяемого для санации спермы производителей /С M Борунова //Матер междунар науч-практ конф по профилактике, диагностике и лечению инфекционных болезней, общих для человека и животных - Ульяновск ГСХА - 2006 - С 440-442

4 Борунова С M Определение максимальной безвредной дозы для спермиев хряков и минимальной бактерицидной дозы комплексного препарата для санации спермы - «Энроген» /С.М Борунова //Матер междунар науч -произв конф по проблемам лечения и профилактики акушерско-гинекологической патологии с -х животных - Ставрополь ГСХА -2007-С

5. Борунова С.М Полимиксин-М, применяемый для санации спермы /С M Борунова //Матер XV Московского международного ветеринарного конгресса - M ЗАО «Издательский Дом» - 2007 - С 155

Типография ордена «Знак Почета» издательства МГУ 119992, Москва, Ленинские горы Заказ № 235 Тираж 100 экз

Актуальность темы. Для обеспечения потребности населения в мясе и мясных продуктах важная роль отводится свиноводству, как отрасли наиболее скороспелого животноводства (Шахов А.Г., 2001; Мисайлов В.Д., 2003; Макарова Ю.В., 2007).

В Российской Федерации разведение свиней является традиционной отраслью сельскохозяйственного производства. Этому способствуют благоприятные почвенно-климатические условия для выращивания фуражного зерна, картофеля, тыквы, сахарной свеклы, а также высокая плодовитость свиней, их скороспелость, хорошая оплата корма продукцией и высокий убойный (Авдеенко B.C., 2000).

Однако наибольший эффект в свиноводстве достигается путем его интенсификации с максимальным использованием маточного поголовья (Шумский Н.И., 2002). Репродуктивные возможности свиней во многом зависят от качества хряков-производителей, используемых в технологии искусственного осеменения (Филатов A.B., 2005).

Широкое распространение применения антимикробных средств вызвало появление высокоустойчивых штаммов микроорганизмов, значительно снижающих качественные показатели спермы, что приводит к снижению оплодо-творяемости, абортам и бесплодию самок, рождению гипотрофного и мертворожденного потомства (Щербаченко Д. Ю. ,2006).

В настоящее время сложилась ситуация, когда резкое ухудшение кормления и условий содержания животных при их индустриальном разведении, явилось следствием многолетнего подрыва экономической базы отечественного животноводства, что привело к резкому возрастанию потерь продукции, почти катастрофическому проценту ослабленных животных, особенно молодняка. Большое значение придается получению здорового потомства, что будет обеспечивать хорошее состояние их здоровья на протяжении последующей жизни и сохранение продуктивности, соответствующей их генетическому потенциалу. Однако в результате сложившихся условий содержания, кормления и эксплуатации это не во всех случаях достигается, что обусловлено возникновением у них патологических состояний, обусловленных присутствием большого числа микроорганизмов, в том числе условно - патогенных, как в сперме производителей так и в половых путях самок. Диагностические мероприятия при этих патологических процессах крайне затруднены, т.к. практически невозможно установить - какой из большого набора микробов вызвал нарушения воспроизводительной функции маток, рождение слабого или мертворожденного приплода. В этом случае необходимо применение комплексных профилактических обработок животных, улучшение их содержания и кормления проведения внеплановой дезинфекции и др.

В новых экономических условиях особую важность приобретает деятельность ветеринарного врача, направленная на предупреждение и ликвидацию различных заболеваний, снижая таким образом, экономический ущерб, причиняемый падежом, либо, выбраковкой животных, а также не дополучением качественной продукции животноводства.

Перед ветеринарными специалистами страны стоит сложная и ответственная задача повышения конкурентно способности отечественной продукции, увеличения ее поставок на внутренний рынок и экспорт. Нельзя ожидать серьезных успехов (высокие привесы, надои молока) без надежной кормовой базы и научно - поставленной племенной работы. Особая роль в выполнении задач (по улучшению процесса воспроизводства с.-х. животных, увеличение приплода), стоящих перед животноводами отводятся массовому применению искусственного осеменения. Искусственное осеменение позволяет за счет максимального использования производителей - улучшателей быстро и массово заменять малопродуктивных особей в стаде на более ценных, с высоким потенциалом продуктивности. Так, например, спермой одного хряка можно осеменить искусственным методом за год более 700 - 1000 свиноматок и получить от них более 7 - 8 тысяч поросят (П.И.Корнеев с соавт.,1985).

Кроме того, в последние годы методы - хранения, замораживания, транспортировка спермы производителей получило в искусственном осеменении широкое применение в практике, как у нас в России, так и за рубежом. Метод -замораживания спермы производителей дает возможность транспортировать сперму в любую точку страны и осуществлять международный обмен

Успех искусственного осеменения во многом зависит от санитарного качества спермы с/х производителей, от сред и химических веществ, применяемых при ее разбавлении, т.к. использование инфицированной спермы может быть опасным источником распространения инфекционных болезней, ведущих к бесплодию, яловости, болезням половых органов, что в свою очередь приводит к недополучению приплода, снижению продуктивности, наносящей большой экономический ущерб сельскому хозяйству РФ (Филатов A.B., 2005).

Сперма, полученная от производителей животных и используемая при искусственном осеменении маточного поголовья, должна отвечать определенным санитарным требованиям, предусмотренными нормативными документами, а препараты, используемые для разбавления и хранения спермы должны быть безвредными, для спермиев производителей сельскохозяйственных животных.

Изучение этого вопроса шло в разных направлениях : определение степени обсемененности и видовой принадлежности выделенных микробов при контаминации ими спермы, влияния микробов на выживаемость и оплодотворяющую способность спермиев, оплодотворяемость самок, частоту заболевания полового аппарата маточного поголовья, осемененного спермой с различной степенью контаминации микробами, влияние микробов на течение беременности, рост и развитие зародышей, плодов новорожденных.

Исследования по микробной обсемененности спермы в нашей стране проводились В.К. Миловановым и И.И.Соколовской (1950), И.В.Смирновым

1967), А.П. Мтуденцовым (1948-1967) Д. Д. Логвиновым (1976); Г.В.Зверевой(1978), Н.Н. Михайловым (1978); Н. И. Полянцевым (1983), Н.И. Родиным (1980-1986), В.П. Гончаровым, З.И. Гришиной (1960-2005).

Проведенные исследования показали, что в сперме животных присутствует более 400 видов сапрофитных, условнопатогенных микроорганизмов и более 50 видов патогенных и токсичных грибов, а количество микробов и их видовой состав возрастает в процессе обработки и хранения спермы. При этом наиболее чаще из спермы, например хряков, выделяли различные виды стрептококков, стафилококков, микрококков, кишечной, синегнойной, сенной палочек и протея.

Наличие в сперме различных микроорганизмов приводит к понижению выживаемости и оплодотворяющей способности спермиев и, как следствие, к по-лучанию нежизнеспособного потомства. Поэтому подавление нежелательного действия микробов-контаминантов в сперме производителей является обязательным условием при искусственном осеменении маточного поголовья.

Во всех странах мира с развитым животноводством, в основе которого лежит искусственное осеменение, для предотвращения микробной контаминации спермы производителей используют санирующие препараты, включающие различный набор антибиотиков широкого спектра действия.

Следует указать, что эффективность санирующего действия любого антимикробного препарата зависит, как от видового состава, так и от количества микроорганизмов, а также от состава спермы (с содержанием желтка, глицерина, хелатона и др.) времени экспозиции разбавленной спермы при различных температурах и т.д.

Основными требованиями к санирующим веществам (антибиотики, сульфаниламидные и химиотерапевтические препараты) являются их высокая бактерицидная активность в подавлении роста микроорганизмов, в какой - то степени затормаживание обменных процессов спермиев и тем, самым, повышение их выживаемости.

Сложность в решении проблемы санации спермы состоит еще и в том, что наряду с созданием в средах бактерицидных условий, должна сохраняться оплодотворяющая способность спермиев. Кроме того, в связи с возрастающим количеством антибиотикоустойчивых рас микроорганизмов, резистентных ко многим санирующим веществам, с каждым годом усложняется выбор методов лечения животных - бактерионосителей и санации спермы.

В нашей стране на основании многочисленных исследований проведенных сотрудниками лаборатории ВГНКИ ветпрепаратов, на Красноярском заводе медпрепаратов специально для санации спермы производителей в 1967 -1969 гг. был разработан и организован выпуск комплексного препарата сперма-сан - 3 с достаточно большим спектром антимикробного действия, в состав которого входили проверенные на безвредность для спермиев пенициллин, стрептомицин и белый растворимый стрептоцид. Данный препарат широко применялся на станциях искусственного осеменения для санации спермы животных в течение более 25 лет. Однако, как было выяснено, спермасан - 3 не оказывал бактерицидного или бактериостатического действия на микоплазмы, трихома-нады, синегнойную палочку, протей, которые могут контаминировать получаемую сперму. Основным недостатком, применявшегося в нашей стране препарата спермосан - 3, является сравнительная высокая его токсичность для спермиев хряков и недостаточная бактерицидность по отношению к ряду условно-патогенных микроорганизмов :синегнойной палочке, протею, стрептококкам и др. Более эффективный препарат спермосан - ППК в России не выпускается из-за отсуствия полимиксина - М. Для снижения микробной контаминации спермы производителей был предложен препарат ГАМП на основе гентамицина и ампициллина, который обладает более выраженной бактерицидной активностью по отношению к микроорганизмам по сравнению с вышеуказанным препаратами, но вызывает плазмокоагуляцию спермы у отдельных быков, что делает ее непригодной для криоконсервации.

В последние годы для санации спермы производителей сельскохозяйственных животных эффективно применяется комплексный препарат Полиген (полимексин Е или М +гентамицин).

Однако учитывая недостаточную высокую бактерицидность спермосана - 3 в отношении ряда микроорганизмов, весьма актуальной является разработка новых комплексных антимикробных препаратов из доступных компонентов и обладающих широким спектром антимикробного действия на микрофлору, присутствующую в сперме.

В связи с этим наше внимание было обращено на ряд новых антимикробных средств. Так, в настоящее время в медицинской и ветеринарной практике находят все более широкое применение антимикробные препараты, относящиеся к группе фторхинолонов.

Положительная особенность фторхинолонов проявляется в их эффективности при бактериальных и некоторых других инфекциях, вызванных микроорганизмами, устойчивыми к антимикробным препаратам других фармакологических групп. Фторхинолоны обладают высокой активностью в отношении большинства грамотрицательных бактерий, сальмонелл, эшрихий, коли, протея, стафилококков, стрептококков, синегнойной палочки, что является особенно важным с учетом контаминации спермы такими микроорганизмами. На основе фторхинолона разработан препарат энрофлоксацин для лечения послеродового эндометрита крупного рагатого скота, вызванного патогенной и условно - патогенной микрофлорой.

Другим высокоэффективным средством в отношении штаммов стафилококков, устойчивых к пенициллинам и другим антибиотикам; некоторым штаммам стрептококков, синегнойной палочки, энтеробактерий, сальмонелл, протея является гентамицин сульфат - антибиотик широкого спектра действия из группы аминоглюкозидов.

Цель и задачи исследования. Целью исследований являлась разработка нового комплексного антимикробного препарата, малотоксичого для спермиев производителей и обладающего широким спектром действия на микрофлору, выделяемую из спермы сельскохозяйственных животных.

Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи:

- Изучить уровень инфицирования спермы хряков-производителей различными видами микроорганизмов.

- Провести сравнительную оценку антибактериальных препаратов, применяемых для санации спермы производителей сельскохозяйственных животных по ряду показателей (бактерицидная активность, выживаемость и оплодотворяющая способность спермиев).

- Определить бактерицидное действие энрофлоксацина и гентамицина сульфата на микроорганизмы, выделяемые из спермы.

- Определить синергидное бактерицидное действие энрофлоксацина и гентамицина сульфата на штаммах и изолятах микроорганизмов.

- Установить максимально безвредную дозу для спермиев хряков и минимально бактерицидную дозу препарата ЭНРОГЕН.

- Определить эффективность применения препарата ЭНРОГЕН для санации спермы хряков - производителей.

- Изучить влияние препарата ЭНРОГЕН на оплодотворяющую способность спермиев хряков-производителей.

- Разработать НТД на препарат ЭНРОГЕН и определить его экономическую эффективность при искусственном осеменении свиней.

Научная новизна. Впервые для санации спермы хряков и быков-производителей был создан комплексный препарат ЭНРОГЕН на основе гентамицина сульфата и энрофлоксацина из группы фторхинолонов, разработана технология его получения, изучены фармакологические свойства. Установлены его безопасность для спермиев и более высокая бактерицидная активность в отношении условно - патогенной микрофлоры (синегнойной и кишечной палочек, стрептококков, стафилококков, протея и других бактерий) по сравнению с применяемым в настоящее время санирующим препаратом ПОЛИГЕН.

На основании результатов исследований разработана нормативно-техническая документация на препарат ЭНРОГЕН (Технические условия, инструкция по применению).

На базеЗАО «Мосагроген» г.Москва организовано производство препарата ЭНРОГЕН. Полученные серии по качеству соответствовали нормативным документам и прошли производственные испытания.

Практическая значимость заключается в том, что предложенный комплексный санирующий препарат ЭНРОГЕН позволяет получать сперму высокого санитарного и биологического качества, способствует снижению гинекологических заболеваний у свиноматок, а также повышению оплодотворяемости маточного поголовья при искусственном осеменении. Полученные данные подтверждены актами, утвержденными руководителями опытно-производственных хозяйств и свинокомплексов Московской, Белгородской и Воронежской областей.

На основании результатов исследований разработана нормативно-техническая документация на препарат ЭНРОГЕН (Технические условия, инструкция по применению).

На базеЗАО «Мосагроген» г.Москва организовано производство препарата ЭНРОГЕН. Полученные серии по качеству соответствовали нормативным документам и прошли производственные испытания.

Материалы исследований вошли в «Методические указания по диагностике, терапии и профилактике болезней органов размножения и молочной железы свиней», одобренные секцией патологии, фармакологии и терапии Российской сельскохозяйственной академии 24 марта 2005 г. (протокол № 1).

Материалы исследований используются в учебном процессе в Саратовском государственном аграрном университете им. Н.И. Вавилова, Воронежском государственном аграрном университете им. К.Д. Глинки, Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина студентами ветеринарных факультетов при изучении дисциплины «Ветеринарное акушерство, гинекология и биотехника размножения животных», а также на курсах повышения квалификации зооветеринарных специалистов свиноводческих хозяйств.

Материалы исследований вошли в «Методические указания по диагностике, терапии и профилактике болезней органов размножения и молочной железы свиней», одобренные секцией патологии, фармакологии и терапии Российской сельскохозяйственной академии 24 марта 2005 г., протокол № 1.

Апробация результатов диссертации. Материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных научно-практических конференциях научных сотрудников и аспирантов ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ ВГНКИ, 2003-2006); на международных научно-производственных конференциях по проблемам лечения и профилактики аку-шерско-гинекологической патологии с.-х. животных (Ульяновск, 2007; Ставрополь, 2007); на XV Московском международном ветеринарном конгрессе (2007).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в т.ч. 4 статьи - в материалах Всероссийских, региональных и республиканских научных конференций и 2 статьи - в научных журналах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждений полученных результатов, выводов, данных о практических использованиях научных результатов, рекомендаций по использованию научных выводов, списка использованной литературы (118 источников, в т.ч. 15 иностранных авторов) и 1 приложения. Работа иллюстрирована 17 таблицами и 7 рисунками.

4. ВЫВОДЫ

1 .Установлена высокая микробная контаминация свежеполученной неразбавленной спермы хряков-доноров, которая в среднем составляет 78428 ± 19237 м.т. в I см3, а коли-титр - от 0,001 до 0,0001 (у 60% исследованных проб).

Микрофлора спермы состоит из ассоциации микроорганизмов, которая, в основном, представлена синегнойной, кишечной, сенной палочками, грибами, стрептококками. Наиболее часто из спермы выделяют синегнойную палочку и протей.

2. Выявлена определенная закономерность, что сперма хряков, полученная в весенне-летний период, содержит значительно большее количество микробных клеток и высокий коли-титр, чем сперма, полученная в зимнее время года.

3. Введение в искусственные среды новых комплексных санирующих препаратов ГАМП и ПОЛИГЕН в разбавленную и замороженную сперму хряков в дозах 300-600 мкг/см3 среды:

• подавляет рост условнопатогенной микрофлоры;

• снижает микробное число в 29-192 раза в разбавленной и замороженной сперме.

4. На фоне применения препарата ПОЛИГЕН происходит увеличение качества спермы в среднем на 10,2%, концентрации спермиев в 1 мл объема эякулята на 0,033 млр., активность на 0,3 балла, а резистентность - на 388,25 ед., сочетанное применение санирующих препаратов спермы у хряков-производителей оказывает положительное воздействие на соотношение живых и мертвых спермиев. У 75% хряков произошло увеличение среднего показателя живых спермиев на 18,6%, а активность спермиев у 85% превышала фоновый показатель на 19,1%;Санирующее действие препарата ПОЛИГЕН в разбавленной и замороженной сперме хряков в 1,5 раза эффективнее, чем препарата ГАМП.

5. При санации разбавленной и замороженной спермы хряков препаратами ГАМП и ПОЛИГЕН в дозах 300 и 600 мкг/см3 среды улучшаются биологические показатели качества спермы: сохранность акросом - на 7-12 %, а выживаемость спермиев, по сравнению с не санированной спермой - на 22-29 %. Микробная контаминация спермы хряков-производителей выше об-семененности эякулятов без препарата ЭНРОГЕН. По сравнению с молодыми хряками микробное число повышается как в контрольной, так и в опытной группах, но данное увеличение во все возрастные периоды ниже в 1,85 раза в опытной группе;

6. Применение для искусственного осеменения свиноматок спермы хряков, как сохраненной при 16-20° С, санированной препаратами ГАМП и ПОЛИГЕН повышает оплодотворяемость от 1-го осеменения на 8-13 % (соответственно), а также выход поросят на I свиноматку в 1,8-1,9 раз, по сравнению с не санированной спермой.

7. Экономический эффект при применении препарата ПОЛИГЕН составила на 1 рубль затрат 80,72 рубля прибыли. При этом увеличивается эффективность осеменения свиноматок на 10,0%, а количество полученного приплода на 219 поросят в новом варианте при увеличении стоимости полученной продукции на 143800,9 рубля.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ

РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Для санирования спермы хряков-производителей разработан новый эффективный комплексный препарат ЭНРОГЕН

2. Разработан проект технических условий на препарат ЭНРОГЕН (ТУ).

3. Разработана временная инструкция по применению санирующего препарата ЭНРОГЕН в ветеринарии.

4. На базе временной инструкции на препарат ЭНРОГЕН организовано серийное производство препарата. Показатели качества препарата соответствуют требованиям ТУ.

5. По результатам исследований разработаны и одобрены 24 марта 2005 г. (протокол №1) секцией патологии, фармакологии и терапии Российской сельскохозяйственной академии «Методические указания по диагностике, терапии и профилактике болезней органов размножения и молочной железы свиней».

6. Материалы исследований используются в учебном процессе в ВУЗах РФ при изучении студентами и слушателями курсов повышения квалификации зооветеринарных специалистов свиноводческих хозяйств дисциплины «Ветеринарное акушерство, гинекология и биотехника размножения животных».

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Для повышения эффективности воспроизводства свиноматок рекомендуется вводить в искусственные среды - разбавители спермы новые комплексные санирующие препараты ЭНРОГЕН в дозе 150 мкг/см3, ГАМП и ПОЛИГЕН в дозах 300-600 мкг/см3 среды.

2. Для искусственного осеменения свиноматок рекомендуется применять сперму хряков сохраненную при 16-20°С и санированную препаратами ГАМП и ПОЛИГЕН, что повышает оплодотворяемость при 1-ом осеменении на 8-13 %, а выход поросят на 1 свиноматку в 1,8-1,9 раз, по сравнению с не санированной спермой животных контрольной группы, а при использовании нового санирующего препарата ЭНРОГЕН увеличивается оплодотворяющая способность свиноматок на 4-8% по отношению к контролю