Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.07) на тему:Эффективность применения биосана при лечении и профилактике мастита у коров

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ ПАТОЛОГИИ, ФАРМАКОЛОГИИ И ТЕРАПИИ

ргв од

На правах рукописи

КОНСОЕЛЬЦЕВ Игорь Геннадьевич

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПИШЕНШИЯ БИОСАНА ПРИ ЛЕЧЕНИИ И ПРОФИЛАКТИКЕ МАСТИТА У КОРОВ

16.00.07 - акушерство и искусственное осеменение

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

ВОРОНЕЕ - 1994

Работа выполнена в Кировском сельскохозяйственном институте, Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии, Всероссийском научно-исследовательском институте охотничьего хозяйствах и звероводства им. проз Б.МДиткова. н

Научные руководители: доктор ветеринарных наук, профессор

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор Мисайлов В.Д.

2. Кандидат ветеринарных наук, с.н.с. Сотников A.B.

Ведущая организация - Саратовский государственный зоотехки-ческо-ветеринарный институт.

Защита состоится "8 " 1994 г. в //"час,

на заседании специализированного совета Д 020.65.01 при Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патоло- , гии, фармакологии и терапии по адресу: 394043, г.Воронеж, ул.Ло-ионосова, II4-d.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

А.И.Варганов,

кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник В.И.Слободяник.

Автореферат разослан

Учёный секретарь специализированного совета

В.И.Слободяник

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Важную роль в решении проблемы снабжения населения нашей страны наиболее ценными для здоровья продуктами питания играет одна из ведущих отраслей агропромышленного комплекса - молочное скотоводство, на доле которого приходится 99% производимого молока и 40% валовой продукции мяса (В.М.Стародубцев с соавт.,1989; ВЛ.Шишков с соавт.,1989; Е.А.Антонович с соавт., 1990).

Одной из главных причин, сдерживающих повышение эффективности животноводческой отрасли, считается заболевание коров маститом. Современная интенсификация молочного скотоводства сопровождается высокой концентрацией поголовья на ограниченных площадях, применением в процессах обслуживания животных различных средств механизации и автоматизации, гиподинамией, неудовлетворительным санитарно-гигиеническим состоянием помещений, повышением вирулентных свойств микрофлоры, дефицитом запасных частей к доильному оборудовании, недостатком мощих и дезинфицирующих средств. В связи с этим мастит у коров имеет широкое распространение во многих странах мира (В.И.Мутовин,1974; Н.К.0ксамитный,1982; В.И.Беляев с соавт. ,1988; М.Г.Миролвбов,Х988; В.АЛариков,1990;А.Я.Батраков,1991; Р.Р.Батькаев о

1990елш/ 1990; Р.Л. Щсмлн*^ 1990; ¿¿¡¿ВясМои, 1991 и другие).

Многие методы диагностики субклинического мастита у коров предусматривают использование сложной аппаратуры и оборудования, дефицитных питательных сред, значительных затрат труда и времени, что создаёт определённые трудности их применения в условиях производства (Г.А.Немчинов с соавт.,1982; И.Н.Гринько,1984; Г.Ф.Коган с соавт.,1987; Ю.С.Клос с соавт.,1989; Н.И.Полянцев,1990).

Широко применяемые в ветеринарной практике препараты для

лечения больных маститом животных, в основной, содержат различные антибиотики и сульфаниламиды, использование которых не всегда при водит к выздоровлении организма. Установлено, что антибиотики угнетают естественные защитные механизмы молочной железы и организма животного, и тем самым способствуют возникновении рецедивов и бактерионосительства. Длительное, бессистемное применение антибио тикосодеряащих средств привело к появление в природе высокоустойчивых к ним рас микроорганизмов и мастита микозной этиологии (Е.В.Ильинский,1977; В.И.Слободяник с соавт.,1991; Д.Д.Логвинов, 1992)у а присутствие в молоке остаточных количеств антибиотиков задерживает развитие молочнокислых бактерий, негативно влияет на технологические процессы изготовления сыров и кисломолочных продуктов (Е.В.Себряков,1973; И.И.Архангельский,1974; Е.В.Ильинский, 1977; В.А.Париков,1977; О.А.Симецкий, Г979; В.М.Карташова с соавт 1988; В.И.ХомвнкоД990; В.И.Слободяник с соавт.,1991).

Попадая в организм человека, антибиотики и сульфаниламиды могут вызывать аллергии, анафилаксии, изменения количественного и качественного состава банальной микрофлоры и другие нежелательные явления (В.И.Аксёнов с соавт.,1977; В.А.Париков,1987; В.В.Сыеянов с соавт. ,19921989; М.ЗмЛАябк г. 1990; е~Л., 1991).

Приведённые сведения показывают, что дальнейшее совершенствование методов диагностики, разработка экологически чистых и высокоэффективных средств профилактики и лечения мастита у коров являются одной из главных задач ветеринарного акушерства.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью работы явилось усовершенствование пробы отстаивания молока для ускоренной диагностики субклинического мастита и изучение лечебно-профилактической эффективности препарата "Биосан" при различных формах воспаления мо-

лочной железы у коров. Для достижения намеченной цели были постав- . лены следующие задачи:

1. Изучить степень распространения и причины мастита у коров в хозяйствах Кировской области.

2. Усовершенствовать пробу отстаивания молока для ускоренной диагностики субклинического мастита у коров.

3. Изучить кульгурально-биохимические свойства лактобацилл биосана и их влияние на организм коров при инграцистернальном введении.

4. Изучить тералевтическуо эффективность биосана при субклиническом, катаральном и гнойно-катаральном мастите у коров в лактационный период.

5. Установить профилактическую эффективность биосана при мастите у коров в период сухостоя.

6. Определить экономическую эффективность применения биосана при профилактике и терапии мастита у коров.

1.3. Научная новизна. Впервые на основании установленных антагонистических свойств лактобацилл к основным возбудителям мастита, иммуностимулирующего влияния их на локальные факторы защиты молочной железы и всего организма предложен новый эффективный способ лечения и профилактики мастита у коров путём интрацистер-чального введения биосана, что является существенным вкладом в теорию ветеринарного акушерства.

1.4. Практическая значимость работы. С целью сокращения сроков постановки окончательного диагноза на субклиническиа мастит у соров предложена проба центрифугирования молока вместо пробы отста-[вания.

Разработка нового способа лечения и профилактики мастита у :оров с помощью лактобацилл биосана расширяет показания к приме-1ению препарата, что обогащает ветеринарную практику оригинальны-

ни средствами для борьбы с акушерскими болезнями.

1.5. Внедрение результатов исследований. Метод центрифугирования проб молока при диагностике субклинического мастита, а также способ лечения и профилактики воспаления вымени у коров с помощью биосана в течение ряда лет с успехом применяются ветеринарными специалистами в совхозах "Подгорный", "Красногорский" и "Северный" Кировской области. Полученные материалы исследований используются в учебном процессе пр чтении курса "Акушерство, гинекология и искусственное осеменение" студентам ветеринарного и зоо инженерного факультетов Кировского сельскохозяйственного института.

1.6. Апробация результатов исследований. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на научно-практических конференциях (1990-1992г.г.) и ыежкафедральном заседании профессорско-преподавательского состава ветеринарного факультета (I994) Кировского СХИ; на научно-технической конференции "Экологические проблемы ветеринарной санитарии" , Москва (1593 г.).

1.7. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 работ.

1.8. Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 184 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, собственных исследований, выводов, практических предложений и списка литературы, включающего 465 источников, 183 из которых иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 35 таблицами, I рисунком и 2 фотографиями .

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Клинико-экспериментальные опыты проводились на коровах чёрно-пёстрой породы совхозов "Подгорный", "Красногорский" и "Се-

верный" Кировской области в период с 1989 по 1993 годы. Лабораторные исследования образцов крови и молока выполнялись в Кировском сельскохозяйственном институте, Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии, Всероссийском научно-исследовательском институте охотничьего хозяйства и звероводства имени профессора Б.М.Еиткова.

При изучении степени распространения мастита у коров использовали материал статистической отчётности по ветеринарному отделу Кировской области, а также проводили ежемесячные исследования 526 коров на мастит в совхозе "Подгорный" в течение 1990-1992 годов согласно "Рекомендаций по борьбе с маститом коров " (1985).

Для диагностики субклинического мастита применяли молочно-контрольные пластинки (МКП-2) и диагностические реактивы: 5^-ный раствор димастина и 2^-ный раствор мастидина. Из положительно реагирующих долей вымени отбирали пробы секрета для постановки пробы отстаивания по В.И.Мутовину (1974), бактериологического исследования в соответствии с "Методическими указаниями по бактериологическому исследованию молока и секрета вымени коров" (1983) и подсчёта количества соматических клеток на приборе "Пикоскель".

■ Выявленные культуры микроорганизмов из секрета вымени дифференцировали до вида и определяли их чувствительность к пенициллину, стрептомицину, тетрациклину, левомицетину, эритромицину, неомицину, мономицину и полимиксину.

Степень распространения мастита у коров оценивали в зависимости от их возраста, анатомических особенностей вымени и сосков, способа содержания животных и сезона года, а также от уровня профессиональной подготовки операторов машинного доения.

Для совершенствования пробы отстаивания молока с целью ускоренной диагностики субклинического мастита провели параллельные исследования 7020 проб молока от 1755 корор с с% мастидином, про-

бой отстаивания и центрифугированием на электроцентрифуге марки ЦЛМП-24 при 1500 оборотах в минуту.

При изучении бактериального препарата биосана провели 3 лабораторных опыта и б - клинических на здоровых и больных маститом коровах.

Препарат биосан для выполнения научной работы получали из Кк ровской производственной ветеринарной лаборатории.

Культурально-биохимические свойства лактобацилл биосана изучали на различных питательных средах, а безвредность-на белых мышах по общепринятым методам.

Оценку антагонистического действия лактобацилл по отношению к стафилококкам, стрептококкам и кишечной палочке проводили по следусщей методике. В пробирку с МПБ одновременно засевали по 1,С

4

мл двухсуточной бульонной кутуры лактобацилл в концентрации 10 м.т./мл и иследуемых культур микробов в той же концентрации. Смесь ин.кубировали в термостате в течение 24 часов при температуре 37°С. Через Ч,2Ч,Ч8 часов из пробирок отбирали по 0,1 мл смеси и вносили на ША в чашках Петри. Жидкость равномерно распределяли по агару и ставили в термостат при температуре 37°С на 24 часа. Количество выросших колоний на агаре исследуемых микроорганизмов выражали в колонеобразущих единицах (КОЕ) и использовали как показатель жизнеспособности клеток.

Раздражающее действие биосана на молочную железу изучали на 5 клинически здоровых коровах, которым в правые передние доли вымени интрацистернально однократно ввели препарат в дозе 5,0 мл (6,0-7,5 млрд лактобацилл), подогретый до 38°-40°С. За животными вели клинические наблюдения и через 24,48,60 и 72 часа после ин-фузии исследовали молоко с % димастином и 2% мастидином, пробой отстаивания.

Изучение влияния биосана при интрацистернальном введении на

морфологические, биохимические и иммунологические показатели молока и крови провели на 7 клинически здоровых лактирующих коровах. Препарат вводили в правую переднюю долю вымени однократно в дозе 5,0 мл (6,0-7,5 млрд лактобактерий), подогретым до 38°-40°С. Через 2,7,15 и 25 суток от всех' коров взяли кровь из подкожной брюшной вены и.молоко из правых передних долей вымени для лабораторного исследования.

В крови определяли количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, каротина, общего кальция, неорганического фосфора, магния, глюкозы, общих липидов, неэстерифицированных жирных кислот (НЭ1К), общего белка и его фракций, щелочной резерв, лизоцимную и пероксидазную активность, фагоцитарную активность лейкоцитов, циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) и иммуноглобулины классов 0 и М. В молоке определяли только содержание иммуноглобулинов классов й и!

Гемоглобин определяли по Сали,глюкозу - по цветной реакции с орто-толуидином, общий белок - рефрактометрически, фракции белка - методом Олла и Маккорда в модификации С.А.Карпюка (1962), общие липиды - с сульфофосфованилиновым реактивом, НЭ1К - спектрофото-метрически с диэтиддитиокарбонатом натрия, общий кальций - коып-лексомегрическим методом с использованием индикатора флуорексона, фосфор неорганический - по Полсу в модификации В.М.Коромыслова и др. (1972) , магний - по цветной реакции с титановым жёлтым, классы иммуноглобулинов - методом радиальной иммунодиффузии по Иаил** в модификации Б.Е.Караваевой (1983), ЦИКи - по методу ^¡и^^^ (П.В.Стручков и др.,1985), лизоцимную активность - по О.В.Бухарину и др. (1974), пероксидазную активность - бензидиновым методом по БЛ.Плешкову (1976), щелочной резерв - по И.П.Кондрахину (1978), фагоцитарную активность лейкоцитов - по Кост и Стенко, эритроциты и лейкоциты подсчитывали в камере Горяева.

Изучение влияния биосана на показатели секрета вымени больных долей и крови коров провели на 10 животных с субклиническим маститом, которым интрацистернально вводили препарат один раз в сутки в дозе 5,0 мл (6,0-7,5 млрд лактобацилл), подогретым до 38°-40°С до выздоровления. До лечения, через 48 часов от начала курса лечения и через 7 суток после выздоровления от коров брали кровь из подкохной брюшной вены и секрет из поражённых четвертей для лабораторного исследования. В крови определяли количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, общий белок и его фракции, лизоцимиую активность и выводили лейкоцитарную формулу. В секрете вымени определяли количество соматических клеток, лизоцим Ы и фагоцитарную активность нейтрофилов по методу А.А.Гинзбург и др. (1979).

Сроки приживаемости лактобацилл биосана в вымени изучали на 3 клинически здоровых лактирующих коровах. Препарат вводили интрацистернально в правые передние доли вымени однократно в дозе 5,0 мл (6,0-7,5 млрд лактобацилл), подогретым до Э8°-40°С. До введения биосана, через 6,24,48 и 72 часа после введения из правых передних долей подопытных коров брали пробы цистернального и альвеолярного молока, разводили в физиологическом растворе 1:64 и 0,2 мл высевали на ША с добавлением глюкозы и витамина B^g» Делали контроль - посев биосана. Учёт роста микрофлоры проводили через 12,24,48 и 72 часа. Из типичных для лактобактерий колоний делали мазки и изучали тинкториальные и морфологические свойства,

При отработке оптимальных доз биосана для терапии различных форы мастита использовали по 15 коров с субклиническим, катаральным и гнойно-катаральным воспалением молочной железы. Стандартный биосан содержит 3,0-3,5 илрд лактобацилл в I мл. Перед непосредственным введением во внутрь соска его разводили дистил-

лированной водой. Дозу разведённого препарата для больных скрытым маститом определили 5,0 мл, а катаральным и гнойно-катаральным -10,0 мл.

Больных животных различными формами мастита разделили на 3 группы по 5 коров в каждой. Пяти коровам со скрытым маститом био-сан вводили разведённый в следующем соотношении - I мл стандартного препарата и 4 мл дистиллированной воды, то есть вводили 3,03,5 млрд лактобактерий (разведение 1:4). Другим пяти коровам вводили дозу 5,0 мл, в которой стандартного биосана было 2,0 мл и 3,0 мл дистиллированной воды, содержалось 6,0-7,5 млрд лактоба-цилл (разведение 1:1,5). Оставшимся пяти коровам вводили дозу препарата, содержащую 3 мл стандартного биосана и 2 мл дистиллированной воды, то есть инстилировали 9,0-10,5 млрд лактобактерий (разведение 1:0,67). При катаральном и гнойно-катаральном мастите биосан испытали в разведении 1:4, 1:1,5 и 1:1, то есть в первом случае в 10 мл разведённого препарата содержалось 2,0 мл стандартного биосана (6,0-7,5 млрд лактобацилл), во втором - 4,0 мл (12,0-14,0 млрд лактобацилл) и в третьем - 5,0 мл (15,0-17,5 млрд лактобактерий).

Изучение терапевтической эффективности биосана при различных формах мастита провели на 147 больных лактирувдих коровах, из которых у 82 - было субклиническое воспаление, у 30 - катаральное и у 35 - гнойно-катаральное. В качестве контроля использовали 1%~ ный раствор диоксидина. При субклиническом мастите биосан вводили в 53 поражённые доли вымени 49 коровам в дозе 5,0 мл, содержащей 6,0-7,5 млрд лактобацилл, подогретым до 38°-40°С, один раз в сутки до выздоровления. Диоксидином лечили 33 коровы (33 доли вымени) согласно наставления по применению.

При катаральном мастите биосан вводили 16 больным коровам в 20 долей вымени в дозе 10,0 мл, содержащей 15,0-17,5 млрд лакто-

бацилл, два раза в сутки, подогретым до 38°-40°С до выздоровления. Диоксидином лечили 14 коров (I? долей вымени), препарат ин-фузировали по 20,0 мл2раза в сутки через 12 часов.

С гнойно-катаральным маститом лечили биосаном 19 коров (23 доли вимени) и диоксидином 16 животных (20 долей вымени). Препараты вводили в тех же дозах и по схеме как и при катаральном мастите.

Для изучения качественных показателей молока выздоровевших коров, больных субклиническим маститом, после лечения их биосаном и диоксидином провели две серии опытов в осенний и весенний периоды стойлового содержания. В каждой серии опытов формировали две опытные и одну контрольную группы животных аналогов по 5-14 коров. Одну опытную группу коров лечили биосаном (6,0-7,5 млрд лактобацилл), другую - 1^-ным водным раствором диоксидина. В качестве контроля использовали молоко клинически здоровых ла-ктирующих коров. При отборе проб молока вымени первые 3-4 струйки секрета сдаивали в отдельную посуду, а последующие 100 мл надаивали в стерильные стеклянные флаконы, охлаждали до 6°-8°С и доставляли в лабораторию для проведения исследований. Анализ молока проводили не позднее 3-4 часов от момента выдаивания.

Органолептическую оценку секрета, определение класса, плотности, жира, белка, лактозы, сухих веществ, бактериальной обсе-менённости, кислотности, ингибирущих веществ в молоке проводили по гостированным методам, используемым для оценки качества молока в.молокоперерабатывающей промышленности.

Профилактическую эффективность биосана при мастите у коров в период сухостоя изучали в двух сериях опытов в сравнении с препаратом мастицид-2.

В первой серии опытов препараты животным вводили однократно, во второй - двукратно.

На первой этапе биосан вводили в каждую долю вымени 36 коровам по 5,0 мл (6,0-7,5 млрд лактобацилл) однократно на 2-3 день сухостойного периода. Мастицидои-2 обработали 21 корову, который прапарат вводили в каждую четверть вымени по 10,0 мл, тоже однократно и в теже сроки.

Во второй серии опытов препараты вводили дважды 15 коровам каждый раз в тех же дозах и первый раз, как в предыдущем опыте. Повторное введение биосана и ыастицида-2 осуществляли за 10-12 дней до предполагаемого отёла в тех же дозах. Учёт профилактической эффективности препаратов проводили в течение первых 10 дней после отёла по числу незаболевших маститом коров.

Расчёт экономической эффективности применения биосана для лечения и профилактики мастита у коров делали по методикам предложенными В.В.Винокуровым в соавторстве (1977,1979).

Статистическую обработку полученных результатов проводили по общепринятым методам с использованием вычислительной техники (Е.А.Маринин,1980).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Степень распространения мастита у коров в хозяйствах Кировской области

В отечественной литературе мы не встретили данных о том, как часто регистрируется воспаление молочной железы у крупного рогатого скота в Северо-Восточном регионе Российской Федерации. Поэтому в одну из наших задач входило изучение вопроса о степени распространения мастита у коров в хозяйствах Кировской области, которая находится на территории этого региона.

Анализ статистических данных показал, что средний показатель заболеваемости коров маститом по области в 1590 году составил 16,в 1991 -15,7%, в 1992 - 21,5^. В среднем же за 1990-1992 г.г. переболело маститом 18% крупного рогатого скота.

Высокий процент заболеваемости коров маститом в хозяйствах Кировской области можно объяснить её географический положением, при которой длительная зима служит причиной того, что в течение восьми месяцев в календарном году продуктивные животные находятся на стойловом содержании. Наряду с неблагоприятными климатическими условиями, недоброкачественным кормлением к причинам широкого распространения мастита у коров в Кировской области следует отнести: отсутствие контроля за подбором животных, пригодных к машинному доению, гиподинамию, антисанитарные условия содержания, отсутствие надлежащей санитарной обработки и технического обслуживания доильного оборудования, отсутствие контроля за состоянием вымени у коров в период сухостоя, дефицит противомастит-ных препаратов.

3.1.1. Распространение и этиология мастита у коров в совхозе "Подгорный" Юрьянского района Кировской области

С целью выяснения степени распространения и причин мастита у дойных коров провели исследования в одном из типичных для данного региона хозяйств. Один раз в месяц проводили диагностические клинические обследования животных и лабораторные исследования проб молока. В среднем, ежемесячно за стойловые и пастбищные периоды 1990-1592 г.г. исследованию подвергались 526 коров, среди которых клиническую форму мастита отмечали у 8,2$ животных, а субклиническую - у 21,1%. Из клинических маститов у коров чаще наблюдали катаральную и серозную формы. При этом было отмечено, что наибольшее количество маститов было зарегистрировано в группах коров, обслуживаемых доярками, не имеющих большого опыта работы^ тогда как в группах животных, с которыми работали доярки I класса и большим трудовым стажем, воспалений

вымени у коров оказалось в 2 - 7 раз меньше.

В своих наблюдениях мы установили, что существует взаимосвязь между наличием аномалий вымени и сосков и степенью распространения мастита у коров. По результатам наших исследований 15,7% животных, имеющих различные селекционные дефекты со стороны вымени или сосков, переболели маститом в период лактации или сухостоя.

Определённое влияние на степень распространения мастита у коров оказывает и способ их содержания. Наши исследования показали, что коровы совхоза "Подгорный" в стойловый период болели маститом в 88,1$ случаев, а при пастбищном - в 11,9% случаев или в 7,2 раза больше. При чём при стойловом содержании наибольший процент больных маститом животных диагностировали в мае (31,2^), а меньше всего в январе (18,8^).

Данные наших наблюдений показали, что с возрастом риск заболевания коров маститом повышается. Результаты исследования приведены в таблице I.

Таблица I.

Количество больных маститом коров в зависимости от их возроста при однократном исследовании

Возраст животных (лет) Число коров [ Из в группе Г них больных ""коров Г" маститом %

от 3 — 4 219 II 5,0

от 5 - 7 196 37 18,9

7 и более 48 16 33,3

Из таблицы I видно, что при однократном исследовании воспаление вымени у коров 3-4 летнего возраста диагностируется в 3-6 раз реже, чем у старших животных. По-видимому, эта тенденция связана с тем, что у старых коров понижается уровень резистентно-

сти, а также с переходом у более молодых животных острой формы мастита в хронический процесс, который затем периодически выявляется у коров более зрелого возраста.

Проведённые нами бактериологические исследования проб секрета от больных маститом коров показали, что 64,0$ из них явились инфицированными микроорганизмами. Выделенные микроорганизмы в 41,6% случаев были представлены стрептококками, в 42,8$ -стафилококками, а в 9,6% ~ кишечной палочкой. Патогенными свойства ми из них обладали 30,стрептококков, 22,7% ~ стафилококков и 50,0$ кишечных палочек.

В результате проведённого опыта по определении чувствительности выделенной микрофлоры к некоторым лекарственным веществам установили, что 90,0$ испытуемых культур стрептококков обладали слабой чувствительностью или вообще были нечувствительны к поли-миксину, 80,0$ - неоыицину, 70,0$ - к стрептомицину и 60,0$- мо-номицину. Все изучаемые культуры стафилококков проявляли свою способность к росту в присутствии пенициллина и полимиксина, 88,9$ - в присутствии стрептомицина и 77,8$ - в присутствии эритромицина. Кишечная палочка мало реагировала или не проявляла реакции на присутствие пенициллина, тетрациклина, эритромицина и полимик-сина.

3.2. Усовершенствование пробы отстаивания молока для ускоренной диагностики субклинического мастита у коров

Учитывая мнения В.К.Мутовина (1974), В.В.Горбунова (1984), Н.И.Полянцева (1990) и других о том, что проба отстаивания молока при диагностике субклинического мастита имеет существенный недостаток, заключающийся в её громоздкости, мы поставили перед собой задачу усовершенствовать данную пробу и предложить легко и быстро выполнимую в условиях молочного комплекса пробу цент^.и-

фугирования молока. При этом использовали электрическую центрифугу марки Ш1Ш-24, применяемую зооинженерной службой хозяйства для определения жира в молоке, и бактериологические пробирки.

Опытным путём определили оптимальный режим вращения бараба-*а центрифуги, который равнялся 1500 об/мин с экспозицией 3 минуты.

Перед центрифугированием молоко из каждой четверти вымени исследовали с 2$-ным раствором мастидина. Затем из каждой положительно реагирующей на диагностикум доли молочной железы надаивали ю 10-12 мл секрета в две пробирки. Одну партию пробирок помещали в холодильник на 16-18 часов (проба отстаивания), другую - переносили в молочный блок для непосредственного центрифугирования. Полученные результаты исследований представлены в таблице 2.

Таблица 2

Сравнительная оценка чувствительности пробы отстаивания и центрифугирования молока при диагностике скрытого мастита у коров

[подвергнуто [ Из них реагировали

Название теста'; __S.________*____°ШШ§2ё2ьно___

______________[к220в_!_долея[ко]ЮвГ_/|__[д 25 § й| !_ к оров!_ _!_д 2 л е й!_

1% мастидин 1755 7020 508 28,9 519 7,4 1247 71,1 650192,6 1роба отстаивания 1755 7020 101 5,7 103 1,5 1654 94,3 6917 S85 1роба центрифугирования 1755 7020 101 5,7 103 1,5 1654 94,3 6917 9§5

Из таблицы 2 видно, что при оценке пробы отстаивания и цен-грифугирования их результаты полностью совпали мегду собой. В про-lecce эксперимента также установили, что на центрифугирование 100 фоб молока, полученного от подозрительных на заболеваемость скрытым маститом коров, затрачивается не более 40-45 минут времени,

что в 21-24 раза меньше расхода времени, необходимого на проведе^ ние пробы отстаивания.

3.3. Изучение культурально-биохимических свойств лакто-бацилл биосана и их влияние на организм коров при интрацистернадьном введении.

3.3.1. Культурально-биохимические свойства лактобацилл биосана

Биосан содержит два вида лактобацилл: Jjxctc&cx,ccl¿u& рЕа-пЬхти (Киров-I) и obxcto&icii&i luúJuwii (Киров-4), имеющие характера морфологические и культурально-биохимические свойства для данного рода микроорганизмов. Это грамполомительные прямые палочки, средней длины и толщины, располагаются в мазках беспорядочно. На питг тельных средах растут в виде мелких выпуклых, непрозрачных колон; первый вид имеет бежевый цвет, второй - беловатый. Лактобациллвс плантарум расщепляет глюкозу без образования газа, расщепляет со] бит, целлюлозу, галагтозу, мальтозу, сахарозу, маннозу, лактозу, салицин, манкит, гликоген, не ферментирует рамнозу и тагатозу, nj цент кислоты в молоке 1,2. Лактобациллюс бухнери расщепляет глюке зу с образованием газа, расщепляет мелецитозу, лактозу, галактоз! мальтозу, салицин, тагатозу и гликоген, процент кислоты в молоке 0,8.

При введении 5 ылрд/ыл микробных тел лактобацилл внутрибрюшин но белым мышам не наблюдалось их гибели в течение I месяца, а при убое лабораторных грызунов из внутренних органов лактобактерии не высевались.

3.3.2. Антагонистические свойства лактобацилл биосан по отношению к основным возбудителям мастита у коров

Результаты изучения антагонистического действия лактобацилл биосана по отношению к стафилококкам, стрептококкам и кишечной

- 17 -

палочке представлена в таблице 3.

Таблица 3

Антагонистическое действие лактобацилл в отношении микроорганизмов, выделенных от больных маститом коров

'.Количество КОЕ через различное время Название микроорганизма »инкубации

О часов ! 4 часа! 24 часаГ 48 часа

Стафилококки

контроль I ' Ю4 3 ' 10^ 4 ' Ю9 Сплошной рост

опыт

I • 10^ б * Ю3 5 ' Ю2 Единич. колон.

Стрептококки

контроль I ' 10^ 2 ' 106 8 ' Ю9 Сплошной рост

опыт I • 10^ 2 * Ю3 8 ' Ю2 Единич. колон.

Кишечная палочка

контроль I ' 10^ б ' Юб 7 • Ю9 Сплошной рост

опыт I • Ю4 I ' 103 3 ' Ю2 Рост отсутств.

КЗ таблицы 3 видно, что уже через 4 часа совместного инкубирования лактобактерий с бактериальной суспензией различных микроорганизмов, способных вызвать мастит, количество КОЕ уменьшалось в 20 раз, а через 24 часа в 100 раз, в то время,как в контроле (без присутствия лактобацилл) количество КОЕ увеличилось соответственно в 100 и 100000 раз. Через 48 часов молочнокислые бактерии полностью подавляли рост кишечной палочки (штамм 306), а рост стрептококков и стафилококков наблюдался в виде единичных колоний.

3.4. Изучение влияния интрацистерна,чьного введения биосана на организм, молочную железу и некоторые показатели крови и молока клинически здоровых лактирующих коров

После однократного внутривыменного введения биосана в дозе 5,0 мл (6,0 - 7,5 млрд лактобацилл) лактирующим коровам клинических

изменений со стороны общего состояния организма установлено не было. В результате внутрицистернальной инфузии жидкого биосана наблюдалось незначительное раздражение паренхимы вымени, которое самопроизвольно исчезало через 48 часов.

Через 2 суток после введения биосана в крови опытных животных отмечали снижение количества лейкоцитов на 13,7$ (Р >0,05), повышение лизоцимной и пероксидазной активности соответственно на 25$ и в 4,1 раза (Р^ 0,001), количество циркулирующих иммунных комплексов увеличилось на 8,0 - 11,5$ (Р> 0,05), фагоцитарная активность нейтрофилов и их фагоцитарный индекс повысились соответсвен-но на 21,3$ (Р-£ 0,001)и 2,1$ (Р> 0,05). Изменения связанные с количеством общего белка, каротина, неорганического фосфора, общего кальция, щелочного резерва, магния и глюкозы в пробах крови на про> тяжении всего эксперимента были незначительны и незакономерны. Через 7 суток лизоцимная активность возросла на 62,5$ (Р>0,05) по сравнению с исходным уровнем, показатель пероксидазной активности несколько снизился, но всё ещё в 2,2 раза оставался выше первоначального (Р40,05), наблюдалось снижение количества ЦИКов на 7,78,0$ (Р>0,05), на высоком уровне сохранялись фагоцитарная активность и фагоцитарный индекс нейтрофилов. Во все сроки исследования отмечали постепенное повышение гемоглобина и увеличение количества эритроцитов, а через 25 суток эти показатели достоверно возросли соответственно на 12,5$.и 22,8$.

Динамика содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови и моло ка лактиругадих коров представлена в таблице 4.

Проведённые исследования (таблица 4) показали, что первой на интрацистернальное введение жидкого биосана интенсификацией синтеза антител реагирует молочная железа, а затем в этот процесс включается и весь организм животного. Так, через 2 суток от начала экс перимента концентрация иммуноглобулинов (л и М в сыворотке молока .

Таблица 4

Изменение количества иммуноглобулинов в крови и молоке клинически здоровых лактирующих коров в различные сроки после интрацистернального введения биосана (мг/мл)

П оказ атели

I

Через 15 суток | Через 25 суток

I

Иммуноглобулины

а

и

Иммуноглобулины

в м

1,63 - 0,09 0,08 2 0,01

2,64 - 0,34

Молоко *

0

3,83 ± 0,32 3,48 £ 0,49

0,13 ¿ 0,0^ 0,23 £ 0,03 Кровь

0,30 ¿ 0,08

1,86 £ 0,03 0,28 ± 0,15

19,05 ¿1,59 19,77 ^ 1,34 20,85 - 1,57 24,82 - 1,33 28,40 £ 1,55

м

\о

1,53±0ДСГ 1,63 ^ 0,14

2,10 - 0,29

+

2,45 I 0,11

2,67 I 0,05

& Р / 0,05; Ц Р^ 0,01; Р ^ 0,001 по отношению к исходному уровню

одинаково увеличилась в 1,6 раза (Р^0,05). Через 7 суток количество иммуноглобулина й возросло в 2,3 раза (Р-£ 0,01), а иммуноглобулина Ц в 2,8 раза (Р^ 0,001). Через 15 суток от момента введения препарата наблюдали максимальное значение иммуноглобулина М в молоке, полученного из опытных долей вымени. Уровень его был в 3,7 раза {¡2 0,05) выше исходного значения. Начиная с 7-х суток отмечали су щественное наростание иммуноглобулинов & и Я в сыворотке крови. К этому сроку исследования количество иммуноглобулина 0 увеличилось в 1,1 раза (Р > 0,05) , а иммуноглобулина М в 1,3 раза (Р> 0,05). Через 15 суток концентрация иммуноглобулинов классов (л и М возросла соответственно в 1,3 раза (Р<0,05) и 1,6 раза (Р^0,001). Через 25 суток количество иммуноглобулина М повысилось в 1,7 раза (Р^О,С а иммуноглобулина й - в 1,5 раза (Р^. 0,05).

Таким образом, при интрацистернальном введении лактобацилл бис сана, благодаря слабому раздражающему действию на ткани вымени, в течение первой недели активизируются локальные механизмы иммунного ответа и факторы неспецифической резистентности всего организма. После этого срока в процесс активного антителообразования включаются другие органы иммунной системы, функция которых обеспечивает высокий уровень гуморального иммунитета во всём организме вплоть до 25 дня с моментаинфузиипрепарата.

3.5. Изучение влияния биосана на некоторые показатели крови и секрета молочной железы коров, больных субклинической формой мастита

Через 48 часов после применения биосана с лечебной целью произошло достоверное снижение гемоглобина на 13,5% (Р.£ 0,05), общего белка на 1,8$ (Р< 0,05), альбуминов на 7,3$ (Р«< 0,001). Количество сегментоядерных нейтрофилов повысилось на 11,8$ 0,05), глобулинов на 4,6$ (Р¿1 0,001). Лизоцимная активность крови воз-

росла на 43,7$ (Р<0,01). Через 7 суток после клинического выздоровления коров в их крови снизилось количество лейкоцитов на 18,0$ (Р ¿10,05), общего белка на 3,0$ (Р^ 0 ,001) , глобулинов на 7,9$ (Р^. 0,001). По сравнению с исходным уровнем увеличилось число лимфоцитов на 15,4$ (Р-^ 0,001), альбуминов на 10,8$ (Р-^1 О,С01).

В секрете вымени у выздоровевших коров достоверно в 5,2 раза снизилось количество соматических клеток, произошло снижение фагоцитарной активности и интенсивности фагоцитоза лейкоцитов соответственно в 1,8 и 2,7 раза, в то же время увеличился титр лизоцима 11 в I,5 раза.

Таким образом, под влиянием биосана у выздоровевших коров нормализуются показатели как локальной резистентности молочной железы так и гематологические и биохимические показатели всего организма.

3.6. Изучение сроков приживаемости лактобактерий в вымени лактирующих коров и отработка оптимальных доз биосана для терапии различных форм мастита у животных

Экспериментально установлено, что лактобациллы после однократного интрацистернального введения биосана обнаруживаются в молоке клинически здоровых лактирующих коров в течение 24 часов, что позволило обосновать кратность его применения.

Опытным путём доказано, что оптимальной дозой для интрацистернального введения биосана при субклиническом мастите у лактирующих коров является 5,0 мл с содержанием 6,0-7,5 клрд лактобацилл, а при катаральном и гнойно-катаральном - 10 мл с содержанием 15-17,5 млрд лактобактерий.

3.7. Изучение терапевтической эффективности биосана при субклиническом, катаральной и гнойно-катаральноы мастите у лактирующих коров

Результаты изучения терапевтической эффективности биосана в сравнении с 1^-ным раствором диоксидина представлены в таблице 5.

Таблица 5

Эффективность биосана и диоксидина при лечении различных форм мастита у коров

Препарат

| Подвергнуто В ы 3 д о р О вело;

! лечению к О р 0 в ! д ___1___ о л е й ;

; коров|.долей к- —г--во; 1 к- -во[ % |

К - во дней лечения

1% диок-сидин

Субклиничес. 49 53 42 85,7 46 86,8 3,2 + 0,1

Катаральная 16 20 13 81,2 17 85,0 5,5 + 0,1

Гн.-катарал. 19 23 13 68,4 16 69,6 7,5 + 0,2

Субклиничес. 33 33 27 81,1 27 81,8 3,3 + 0,1

Катаральная 14 17 II 78,6 14 82,4 6,4 + 0,2

Гн.-катарал. 16 20 ' 10 62,5 14 70,0 7,8 + о.?

Из таблицы 5 видно, что более выраженным лечебным эффектом в сравнении-с диоксидином обладает биосан, внутривыменное введение которого способствовало выздоровлению 85,7$ коров больных субклиническим маститом, 81,2^ - катаральным и 68,4$ - гнойно-катаральным.

3.7.1. Изучение влияния биосана на некоторые органолеп-тические, санитарно-гигиенические показатели, хк ыический состав и физико-химические свойства молока коров, болевших субклиническим маститом

При проведении органолептических исследований молока от клинически здоровых лактирующих коров и больных субклиническим маститом

животных каких-либо различий установлено не было.

В первой серии опыта на день клинического выздоровления молоко от коров, которым в процессе лечения назначали биосан в 71,4$ случаев при исследовании на бактериальную обсеыенённость относили к I и II классу, а при лечении диоксидином- в 57,1$.

Во второй серии опыта было установлено, что молоко взятое на четвёртый день после клинического выздоровления от коров лечившихся биосаном в 53,случаев принадлежало к I классу, а в контрольной группе животных, лечившихся диоксидином к этому сроку только ■14,2$ проб молока соответствовало идентичному показателю.

Данные исследований секрета вымени на наличие ингибирующих веществ показали, что на день клинического выздоровления у 71,4$ животных, которые подвергались лечению биосаном, в молоке установили отсутствие ингибирующих веществ, тогда как только 14,3$ коров, лечившихся диоксидином, дали молоко без ингибиторов.

В обеих сериях опыта при лечении коров биосаном и диоксидином не было отмечено значительных различий в скорости восстановления химического состава и физико-химических свойств молока на протяжении всех сроков исследования.

Внедрённый нами метод лечения и профилактики мастита у коров препаратом биосан на молочном комплексе совхоза "Подгорный" позволил в 1590 году хозяйству произвести молока I сорта 80,7$ от валового надоя, в 1991 году - 88,2$, в 1992 году - 92,2$.

3.8. Профилактическая эффективность биосана при мастите у коров в период сухостоя

3 результате проведённых исследований установили, что однократное введение биосана и мастицида-2 клинически здоровым коровам в начале сухостойного периода профилактирует заболеваемость маститом в этот период у 80,5 и 76,1$ животных соответственно.

Данные о профилактической эффективности этих препаратов при двукратном введении в начале и конце сухостойного периода представлены в таблице 6.

Таблица 6

Эффективность двукратного применения биосана и мастицида-2 с целыэ профилактики мастита у коров

Группа коров

Г-------Г"

Кол-во i

После

отела

кивот- |-----------------------------------------

„.„ „ ; Не заболело маститом 1 Заболело маститом

НЫЛ Л | ___________|_____________ _

группе | коров,' долей ! к о р о в|д о л е

j к-во[ % | к-во[ $ | к-во[ $ [к-

во

Опыт Биосан 15 13 86,6 57 95,0 2 13,3 3 5, Контроль Ыастицид

- 2

15 12 80,0 57 9 5,0 3 20,0 3 5,

Из таблицы 6 видно* что метод двукратного применения биосана в период сухостойного периода явился более эффективным при профилак тике мастита у коров в сравнении с мастицидом-2 и однократным введе нием лактобацилл в начале сухостойного периода.

Экономический эффект применения биосана при лечении мастита у коров в период лактации в сравнении с диоксидином составил 1152,8 руб. на одно животное из расчёта отпускных цен на 5 января 1993 г.

Зкономическая эффективность биосана при профилактике мастита у коров в период сухостоя по сравнению с мастицидом-2 составляет 11,3 руб. на одну корову (на 5 января 1993 года).

4. В Ы В О Д Ы

I. В хозяйствах Кировской области ежегодно, в среднем, перебо-левают маститом 18$ коров. При ежемесячном исследовании коров в coi

хозе "Подгорный" Кировской области, в среднем, выявляется 8,2$

животных с клиническими формами маотита и 21,1$ - с субклинической формой.

2. Заболеваемость коров маститом в стойловый период наибольшая и составляет 88,1$, при пастбищном содержании - 11,9$. С возрастом животных увеличивается заболеваемость их маститом: у 3-4 летних коров она составляет 5,0$, у 5-7 летних - 18,9$, у 7 лет-летних и старше - 33,3$.

3. Частота заболевания коров маститом зависит от мастерства и опыта мастеров машинного доения. В группах животных, обслуживаемых операторами машинного доения I класса и большим трудовым стажем, воспаление молочной железы у коров встречается в 2-7 раз реже, чем в .группах животных, обслуживаемых молодыми и малоопытными доярками. Коровы, имеющие аномалии формы вымени и сосков в 75,7$ случаев переболевают маститом в различные функциональные периоды молочной железы.

4. При бактериологическом исследовании в 84,0$ проб секрета вымени от больных маститом коров, выделяется микрофлора, которая в 47,6$ случаев представлена стрептококками, в 42,8$ - стафилококками и в 9,6$ - кишечной палочкой. Патогенными свойствами обладали 30,0$ культур стрептококков, 22,2$ - стафилококков и 50,0$ 'кишечных палочек. Выделенные культуры микробов были устойчивы к пенициллину, стрептомицину, тетрациклину и полимиксину.

5. Центрифугирование молока позволяет в 21-24 раза сократить время длд подтверждения диагноза на субклинический мастит по сравнению с пробой отстаивания.

6. Лактобациллы биосана обладают выраженным антагонистическим действием в отношении кишечной палочки, стрептококков и стафилококков. После интрацистернального введения препарата лактобациллы способны задерживаться в полости молочной железы у клинически здоровых лактирующих коров в течение 24 часов.

7. При интрацистернальном введении биосана местная иммунная реакция проявляется поступлением в молочную железу из крови свежих фагоцитов и усилением синтеза в течение 15 суток иммуноглобулинов класса Ми/}. Общий иммунный ответ характеризуется повышением в первые 7 суток лизоциыной, пероксидазной активности крови, фагоцитарной активности лейкоцитов и активизацией выработки иммуноглобулинов классов Ы и $ , начиная с 15 дня.

8. Терапевтическая эффективность лечения биосаном субкли-ческого мастита составила 85,7$, катарального - 81,2$ и гнойно-катарального - 68,4$. В процессе лечения биосаном коров, больных субклиническим маститом, и после их выздоровления в молоке быстрее снижалась бактериальная обсеыенённость и в более сжатые сроки исчезали ингибирующие вещества, чем после лечения животных 1$—ным раствором диоксидина.

9. Двукратное интрацистернальное введение биосана в начале и в конце сухостойного периода предупреждало возникновение мастита после родов у 86,6$ коров, в то время, как мастицид-2 был эффективен лишь в 80,0$.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛ01ЕШЯ

I. При массовых исследованиях коров на субклинический мастит на фермах и молочных комплексах, в целях экономии времени, более оперативного назначения и проведения курса лечения больных животных, необходимо использовать пробу центрифугирования молока при 1500 об/мин в течение 3-х минут.

2. Для лечения больных субклиническим маститом лактирующих коров применять биосан интрацистернально в дозе 5,0 мл (6,0-7,5 млрд лактобацилл) в течение 3-4 суток, при клинически выраженной форме мастита - в дозе 10,0 мл (15-17,5 млрд лактобактерий) в течение 5-8 суток.

3. Для профилактики мастита у коров вводить препарат биосан во все доли вымени дважды - в начале сухостойного периода (2-3-й день) и за 8-10 дней до предполагаемого отёла в дозе 5,0 мл (6,07,5 млрд лактобактерий).

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1. Варганов А.И., Видякин A.C., Конопельцев И.Г. Диагностика субклинических маститов у коров //Информ. листок/ Кировский ЦНТИ. -Н30-87 .-1987 .-4с.

2. Варганов А.И., Бояринцев Л.В., Конопельцев И.Г. Диагностика мастита у коров //Ветеринария.-1991.-HI.-С.44-45.

3. Варганов А.И., Конопельцев И.Г., Филатов A.B. Новый метод лечения маститов у коров //Ьнфоры. листок/ Кировский ЦНТИ.-Л95-92.-1992.-4с.

4. Конопельцев И.Г. Эффективность биосана при лечении мастита у коров //Информ. листок/ Кировский ЦНТИ.-Й4 5-93.-199 3.-4 с.

5. Слободяник В.И., Саложникова H.A., Смирнова Л.3., Сергеев Г.И., Варганов А.И., Конопельцев И.Г. Экологически безопасные пути борьбы с маститом коров //Экологические проблемы ветеринарной санитарии: Тез. докл. науч.-техн. конф-- Ч.2.- Москва, I993.-C.5X.