Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Диагностика чумы плотоядных в реакции иммунодиффузии в агаровом геле

рте ^

УКРАИНСКАЯ АКАДЕМИЯ АГРАРНЫХ НАУК

ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ И КЛИНИЧЕСКОЙ

(Л

2 \ ''.''л ВВ'^ЕТЕРШРНОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи

ТАРНАГДА ЗакиОа

УДК 619:616.3-002.44:615.2

ДИАГНОСТИКА ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ В РЕАКЦИИ ИММУНОДИФФУЗИИ Б АГАРОВ СМ ГЕЛЕ

16.00.03 -Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Харьков - I994 г.

Работа выполнена в Буркииа Фасо, в Кишиневе и б Полтавской ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственном института.

Научней руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Карышева А.ф.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Апатенко В.М.;

доктор ветеринарных наук,

старший надчвыЯ сотрудник

Чечеткина Н.П.

Ведущая организация: Украинский Государственный аграрный университет

Защита состоится марта. 1994 г. в ^ ? часов

на заседании специализированного, совета Д.020.68.01 при Институте экспериментальной и клинической ветеринарной медицины УЛАН по адресу: г.Харьков-23, ул.Пушкинская, 33 ИЭКЗИ УААН.

Отзывы просим направлять по выкауказанному адресу. .'

С диссертацией ыоено ознакомиться в библиотеке Института экспериментальной к клинической ветеринарной ивдицины УААН.

Автореферат разослан »»£1 *» 4>е С/т^-Д^. 1994 г.

Ученый секретарь специализированного

совета доктор ветеринарных

наук К.Е.Кона ржевский

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теык. Среди ин&екшонких болезней мелких животные значительное кесто занимает чуыа, к вирусу которой воспрот.«-чивы многие плотоядннэ, используемые человеком для получения дорогостоящих ккур, а гагосе служебные собаки.

В тропических странах, в том числе в Буркина Фасо,' чу:ла плотоядных тлеет повсеместное распространение. Одной из причин такого положения является слабая постановка вопроса учета собак, а такзе трудности диагностики этого заболевания. Б настоящее время диагностика чумы плотоядных основывается на комплексном анализе клинико-эгшзоотвческих данных, патояогоаяатошческнх изменениях и некоторое лабораторных исследованиях (Е.СЛеркасскнй, 1971; ¡.'Л*, 1>.в. КсЬЬспг , А. . Однако проблема диаг-

ностики обусловлена тем, что клинические признаки чут.и и патолого-анатомаческие вакененпя в органах павших хивотных, особенно з начале эпизоотии, бивазт не характерам н нодостато'згама для постаноэ-1си диагноза. Доступные кетода лабораторных исследования не разработали. В связи с этим дайгноз часто ставится озайочныЕ или с запозданием, а прививка проводятся несвоевременно. Поэтов разработка эффективных экспресс-методов лабораторной диагностики чуга плотоядных, на сегодняаний день, для Африканского контингента является одной нэ заянейпнх задач в системо общих кер по ликвидации зто:^ болезни среди пупных зверей и собак.

Создание надезных методов диагностика, лечения и профилактики чуш плотоядных позволит не только снизить потери, напосята звероводству, но а ликвидировать психозкотхиснальные стрессы кногех лкдей, другом которых стала собака.

Цела, и .задачи исследований. Цажь нагих геследоваяй сее/аага

э рагфчботхе нового экспресс-метода серологической диагностики чумы плотоядных. 3 связи с чем перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Проанализировать эпизоотическую ситуацию по чуме плотоядных в Бурккна Фасо.

2. Изучить клиническую картину, патогкстологкческиз изменения при различных формах проявления чу»£Ы плотоядных. .

3. Зыделить полевой штамм в "/руса чумы собак и изучить его биологические свойства в сравнении с вакцинным ытачмо»« "ЗПМИ вкг руса чумы плотоядных.

4. Разработать способ инактивации вируса чумы плотоядных, о6гспечквак:цкй потер» его кнф:-кию иных свойств и сохранение антигенной активности.

5. Приготовить активную антисыворотку против вируса чукы плотоядных для диагностических серологических реакций.

6. Разработать к предиокить для практического применения окспрзсс-метод лабораторной диагностики чучы собак с использованием для зтого изготовленные нами спешфмзский ивактизированшЕ антиген и антисыворотку.

Научная новизна. Исследование« ьпизоотической особенности проявления чумы плотоядных в Буркина Фасо: установлено широкое распространение, сезонность и высокая заболеваемость щенков в возрасте 3-6 месяцев, сопровождающаяся высокой летальностью.

Выделен и идентифицирован полевой штамм вируса чумы собак, биологические свойства которого изучались в культуре клеток почки щенка и в развивающихся эмбрионах кур (РЗК).

Изучены, в сравнительном аспекте, различные формы заболевания чумой плотоядных в условиях тропиков и на Украине (с умеренным климатом).

Разработан новый способ инактивации вируса чумы плотоядных лазерным излучением, обеспечивающий полную инактивацию вакцинного штамма "ЭШ", но при этом сохраняются его даамуногегкке свойства.

Предложен оптимальный режим инактивации вируса чумы плотоядных лазерным излучением и приготовлен активный антиген, позволяющий получать высокоактивную специфическую гипериммунную снг.орпт-ку при иммуттзации кроликов.

Предлагается методика приготовления активных и специфических антасывороток в РИД, РН с гомологичным антигеном.

Приготовлены экспериментальные образцы вирусных антигенов к анотсыворотон, позволяющих эффективно осуществлять экспресе-серп-логичэскую диагностику чумм плотоядных у больных и павших тавотных.

Практическая ценность работа. Установлена закономерность между климатическими условиями и фермами проявления чумы плотоядных.

На основании результатов исследований разработан оптамальний режим инактивации эталонного штамма "ЭШ" вируса чуш плотоядных и получен антиген, который был использован для приготовления высокоактивной и специфической в Р!Щ антисьгворотки.

Приготовленные нами"даагяостикумн (вирусный антиген и гомологичная гипериммунная сыворотка), били использованы для постановки серологической диагностики чумы у собак, лисиц и норок.

Применение этих дкагностикулов в КЩ позволило выявить 94,547$ сэропоэитивнь'х пр^б у животных, подозреваемых я заболевании чумой плотоядных.

Доказана необходимость использования серологического зк-спресс-метода (ГИД) для ыодтяерэдсния диагноза,установленного на

основании эпизоотических данных, клинических признаков, паголого-анатомических и патсгистеологических исследований.

Апробация рабо.ты. Материалы диссертации доложены на заседании сотрудников ветеринарной клиники (Уагадугу, 1990 г.), на заседании кафедры микробиологии и вирусологии Полтавского сельскохозяйственного института (1992, 1993 гг.), на научно-производственной конференции преподавательского и студенческого коллектива Полтавского сельскохозяйственного института (г. Полтава, 1993 г.).

По материалам диссертации опубликовано две научные работы.

Объем и структура Диссертации. Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста, включая 33 рисунка, 22 таблицы и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, рекомендаций, предложений и списка литературы, включающего 204 источника, из которых 96 - иностранных.

Материал*, и методы исследований. Работа по теме диссертации выполнялись в клинике мелких животных я ветеринарной лаборатории в столице Буркина Фасо - Уагадугу, на кафедре эпизоотологии Кишиневского СХИ, на кафедре микробиологии и вирусологии Полтавсхогс СХЙ, в областной ветеринарной лаборзтеряя я в ветеринарной лечебница Киевского района г. Полтавы. .

С целью изучения эпизоотической ситуации в Буркина Фазо провели анализ данных отдела ветеринарии Республики. Были обработаны данные компьютера в период с. 1981 по 1991 года, где учитывали количзстзо заб'-леших жязотикх (по наиболее распространенна инфакцаонк:-з< болезням, отдельно по годам).

На основании подученных:•даянкх устанавливали данами/у распространили!, сезонность, летальность. '

Дг.я изготовления вирусного антигена пслояьзсваяк культурзль-нкй штши вирус вакцины против чукы плотоядных:аттсь-уированшЕ птаьк "ой'", предо'Чгенякй Московским НИН вирусных препаратов Министерства. здравоохранения СССР (ВД1.Дерофеев). совместно с НИШЗ (О.А.Кетелкии).

Культуру клеток готовили из почек тонка (КПЩ) по кето-у;^— сини составленным сотрудкпкгки лаборатории куль-

тур тк&кеР. питательн-лх ерзд ЕЗЭВ (1976), a tuicks по ютсдап» А.Ф.Карзсевой, В.Н.Сприка (I960), В.Е.Лнтонпза (IS3I), М.О.Бир-ггра С1932), 3.А.Сергеева, Ю.А.Собпо (1930) с катам т/ид^фикзцнг— ir.i.

Куяьсуралыгый гарус чугяа плотоядных гаразЕиваяи а кул*-".-урах клеток со методике списанной Сергее^км З.А., Собко D.A. (1990).

Цнтспатсгеккод дейотакв (ЦЦД) вируса учитывали при с.-сдкз«-ноц просмотри заргженких культур ххгтс: под »пироскопов.

Наш бь*л ьыделен полевой etc. »к гируса чуш плотоядно: кс органов паваао: от tjyKH собак. Идентификация гяруса ссгезстглеттась в реакции нейтрализации согласно нзтодкко описанной Соритэти 3,Н. (1953) с ионоваленткыи сдецифическ'Ли сцворотезка против чук;, парвовируснсго онтерита, инфекционного гепатита, бе'пенетта ссбспт производства (Франция").

Изучение биологических свойств наделенного полевого штамма вируса чумы собак проводилось на культура клеток и на 400 разбивающихся вибрионах кур.

Методика приготовления вирусных антигенов лазерггы; излучением и их контроль изложены в соответствующем разделе собственных исследования.

Для изучения клинической картины различных фор! vyua плотоядных было обследовано 267 больных собак, у которых ст^пехч го-

ражения дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта и нервной системы.

Гиперимуунизапия с цель» получения спепифических сывороток к вирусу чумы проводилась на 20 взрослых кроликах породы пен-шилла.

Патологоанатомкческие к патогистологические изменения были изучены на 20 трупах собак, 30 трупах черно-бурых лисип к норок.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Эпизоотическая, ситуация по чуме плотоядных в Бурктаа Фасо.

По данник статистической документапия ветеринарных клиник мелких животных крупных городов страны, чума собак регистрируется в различных зонах всех 30 провинций и постепенно приобретает тендетдао к дальнейшему распространении. Это становится зачетным с 1984 года, когда количество заболевших собак чумой в сравнении с 1981 годом воэраело в 4 раза.

Наибольшее количество случаев больных чумой собак за исследуемый период (с 1981 по 1991 годы) выявлено в I990-I99I гг. и составляло соответственно 17,5$ и 14,.6$.

При анализе эпизоотической ситуации по чуме собак в Цуркина Saco четко видна существенная разница в степени распространения этой болезни в различных провинциях. Поэтому нами было определено три эпизоотические зоны:

Первая зона относится к области.Дори. Здесь зарегистрировано 63 случая чумы собак (9% от общего количества больных собак по стране).

Вторая зона расположена в регионе столицы Уагадугу, где отметено 510 случаев.чумы (т.е. 61% всех случаев за 1990 г.).

Третья зона находится в области Бобо-Диулассо. В этой зоне зарегистрировались 253 больных чумой собак (30 %).

За исследуемый период заболеваемость, также, постоянно возрастала: если количество заболевших собак в 1981 г. сое .гл.тле 66 случаев (.1,77% от обцего количества больных собак за исследуемый пегаод), то в 1989-1590 гг. оно достигало соответственно 709849 случаев (14,62-17,5%).

Нами установлена прямая зависимость иеяду летальность® к заболеваемостью по месяцам года: наибольший процент гибели собак от чумы отмечается в декабре месяце и составляет 39% от числа заболевших, в марте из 20 заболевших пало 4, т.е. погибло каждое пятое животное и в апреле из 15 заболевших пало 5,т.е. каждое третье дявотнез. Однако, из 30 заболэвиих в мае месяце ни одна собака не погибла. 3 последующие месяцы с илня по октябрь летальность парьирует в значительных пределах и составляет,в среднем, 9% от числа заболевших.

йнтерсные данные были получены при изучении возрастного аспекта заболеваемости собак чумой. Было установлено, что наиболее подверженными данному заболевания являются собаки в возрасте 3-6 месяцев. Процентное соотношение количества заболевших в возраста 3-6 месяцев к общему, числу больных за 1990 год составило 802 (табл. I).

Клиническая картина пои различных формах чумы собак В городской ветеринарной клинике столицы Буряина Фасо (Уагадугу), в городской ветеринарной лечебнице города Полтавы и в учебной ветзринарцой клинике Полтавского сельскохозяйственного института нам была предоставлена возможность наблюдать за больными животными с 1930 по 1993 годы.

Было зш.'й'-енс, что клинические сиштогял при заболевании со-

Ьблица I

Сезонность заболеваемости и летальности собак при чума (по месяцам) в Б.Фасо (1990 г.)

Месяцы года

•Количество : заболевших .собак

'"Количество :павших со-.баз

:в чяс-.лах

%

:в числах

%

'Количество :больных собак .в возрасте -•3-6 месяцев

"в чис-:лах

%

Январь 150 17,5 49 • 32,5 126 84,0

'Зе враль 120 14,5 35 29,0 99 82,5

Март 20 2,5 4 20,0 15 75,0

Апрель 15 1,7 5 16,5 20 66,5

Май 30 3,5 0 0 12 70,0

Июнь 17 1.0 2 13,5 II 73,5

Июль 23 .2,7 3 13,0 17 74,0

Август 25 . 3,6 I 4,0 19 76,0

Сентябрь 33 4,0 3 9,0 26 78,5

Октябрь 50 ' 5,8 - 2 4,0 40 80,0

Ноябрь 160 .19,0 50 31,0 133 83,0

Декабрь 206 24,0 80 39,0 175 .85,0

чумой имеют весьма разнообразную каришу. Б одних случаях

заболевание чумой проявлялось ярко выраженными, характерными для данной болезни симптомами, в других оно имело неполную, "стертую" клиническую картину. '

В типичных случаях чума собак начинается с повышения температуры тела от нескольких.десятых долей Градуса до 1-3°С. Это всегда наблюдалось у щенков, достигших 3-х месяцев и старше. У больных животных отмечали угнетение, озноб, снижение или исчезновение аппетита, гиперемию, конъюнктивы, катаральное воспаление слизистых оболочек.

Среди поступавших в клинику больных собак выявили следующие формы болезни: каднуо (экзантема), легочную, кишечную, нервную и

смешанную.

Используя подученные данные, ш провели сравнительную сценку частота случаев разных форм клинического проявления чумы в тропических странах и на Украине (г.Полтава) (табл. 2).

Таблица 2

Сравнительные данные спотношения разных фош клинического проявления чуш собак в условиях тропического и умеренного климата

Зорма клинического Уагадугу : (Б.Фасо) Полтава (Украина)

проявления чумы : количество ' . больных ' собак % ¡количеств« .больных ' собак : % »

I. Ксгная 30 ' 2.6,03 2 1,31

2. Кишечная 60 52.17 70 46,05

3. Легочная 12 10,43 50 32,89

ПэрБНаЯ о и 2,60 Ю 6,57

5. О.'^Га'ГН?" ю 8,69 20 13.15

Итого: 115 100 152 100

Из даШ'.тг табглз;у 2 пкдно, что ксияая форгва ястрпча-лась у 26Й забедети*; е.тей болерньа собак в Уагадугу, что в 13 раз больше, чей з г.Полтаге (1,31%). Количество больных ккнечной формой собак било почта тетинакопум в обогх породах: в Уагадугу 52$ от обнего количества больных, л Полтаве - 46?.

Шесте с тем. процент бодътох легочной формой чуда я Поптате было в 3 рапа больше, чем аналогичный показатель в Уагадугу (оп-ответственно 33? и 10£),

Наиболее редко регистрировалась нервная форма чумк - 2,601 в Уагадугу и 6,5*7% - в Полтаве.

Смешанная форма чуыы составила соответственно 8,69 н 13,15% случаев.

-12-

Патологсанатоиичаские и патогистологичвские изменения органов и тканей при чуме плотоядных

Для патологсанатсмяческих исследований были взята 5 трупов собак, погибших от чумы, протекавшей в легочной, кишечной, нервней и смешанной формах инфекции, для патогистологических - 4 трупа собак, убитых в период высаженных клинических явлений и 2 трупа - при нервной форме чумы, приведшей к полному параличу жизнен-иоважных функциональных органов животного, а также трупы лисиц, поступивших для исследований в Полтавскую областную, ветеринарную лаборатория. Вскрытие трупов животных, отбор патологического материала и гистологические исследования проводили по общепринятой методике совместно с кандидатом ветеринарных наук Павленко В.Ф, я ветеринарным врачом отдела гистологии Полтавской областной лаборатории Равниной Л.Г., которым ш приносим глубокую благодарность.

По результатам наших исследований, в случае гибели собак при легочной форма, наиболее четаие изменения отмечались в органах дакания.- Слизистая оболочка верхних дыхательных путей была отечной, обильно покрыта елиэистиц экссудатом, гилеремирована, на ней об-наруамз«лась мелкие точечные кровоизлияния. В легких шявлялись сорогатс-краеныв, красно-бурые, уплотнение очаги, характерные катаральному воспалению.

При кишечной форме чумы слизистая ободочка желудка и яилеч-ника была в состоянии катарального воспаления с кровоизлияниями, эрозиями и изъязвлениями. Печень и корковое веществ" почек в состояния жирового перерождения. На гиперимированной слизистой оболочке мочевого пузыря обнаруживали точечные кровоизлияния. Селезенка, была; без заметных изменений.

При керзчой ферме чумы сосуда мозговых оболочек и тзга инъецированы, вещество голозного мезга отечно.

При патомгрфологичасном изучении изменений в органах и тканях животных павших от чумы плотоядных установлено: при чуме собак хорошо выражены некротическое процессы эпителиальных структур. Наблюдается склероз прослоек соединительной ткани между паренхим-нши структура:.»! и в стенке кровеносных сосудов. Выявлены глубокие сосудистые изменения, отечность прослоек соединительной ткани я разрыхление соедкнительно-тканных структур.

Выявлены точечные и диффузные кровоизлияния в паренхиме исследованных органов.

При чуме лисиц, все патогистологичгские изменения в тканях органов более глубокие, чем у собак. При атом у лисиц наблюдается усиление процесса некроза и резкие сосудистые изменения.

Взделение эпизоотического итзмла вируса чумы плотоядных

Для выделения вируса чумы плотоядных использовали паренхиматозные оргзнн, которые бши отобраны от павших собак с диагнезом-чума плотоядных. Для этого, мелко нарозаккио кусочки селезенки, печени, почки растирали з ступке со стерильным песком, добавляли стерильный растпор ХЭНКСа.ДгЮ и подвергали двукратному зеыоражи-занто и оттаивзвжэ при - 20°С. Вируесодердащуз суспензия центрифугировали при 5 тыс. об./зяш. в течение 30 мин. К надосадечной жидкости добавляли 500 ЕД/мл пен1!циллина и 500 мг/мл стрепт^мици-на и выдерживали з течение 48 часов при + 4°С. После контроля на стерильность, вирусной суспензией заражали культуру клеток почек щенка и развигаязшеся эмбрионы кур. Цитопатогенное дейстзие (ЦПД) таруса учитывали ежедневным просмотром зараженных культур клеток под микроскопом. На 4-6 сутки в культуре клеток наблмдалесь ЩЗД

вируса. Выделенный нами полевой вирус чумы плотоядных вызывал

также морфологические изменения 8-9-дневных эмбрионов кур. В

сравнительном аспекте инфекционный татр эпизоотического штамма

—Р

вируса чумы плотоядных равен Ю' ЩД50ДЦ; ?огда как титр вакцинного штамма "ЭШ" - ^^ВДоО/т

Разработка оптимальных режимов инактивации вируса чумь: плотоядных лазерные излучением

Для инактивации полевого штамма и штамма "ЭПМ" вируса чумы плотоядшгх былй использованы инфракрасные лучи лазерного излучения. Контроль осуществляли заражением облученными образцами тканей культуру клеток и 8-9-цнеЕнке вибрионы кур. Подученные результаты показали, что инфракрасные лучи лазерного излучения, при длине 3,33 ЫКМ, диаметре пучка 4 мл, мощности 2 КВт продолжительностью от I до 22 часов воздействие ке приводят к инактивации ипфэз-цконаой к анткгешой аксскгосв». гаруса цу«ы шгозоедных: '".блучзкные образцы вируса вызывели 11ДД культуры клеток и морфологические изменения РЭК. Везете с тем, о&гусение ультрафиолетовыми лучами лазера не приводит к инактиьации полевого атамка вируса чумл плотоядных-'. лря экспозиции 10 часов.'

Однако, при лазерном излучении ультрафиолетовыми думами прк длине волны 0,63 МКМ,диаметре пука 4 мл,мощность» воздействия Ю МВт происходит постепенное снижение инфекционных свойств штамма "ЗИМ": внесение в культуру клеток образцов культурального ьиру- . са (штамма "ЭИМ"), облученных ультрафиолетовыми лучами в течение 2-6 часов, приводило к появлению цитояатического зффакта (ЦПЭ) с титром (в десятикратных логарифмах) от 7 до 4,16. Облучение штамме "ЗПМ" в течение 8 часов вызывало такой ке ЦПЭ, но титр снизился здесь до 2,25. В РЭК логарифмические татры облученных образцов вируса постепенно снижаются в зависимости от продолжительности" ультрафиолетового воздействия в течение 2-8 часов от 4,16 до 1,33.

Контроль облучения ультрафиолетовыми лучами образцов вируса чумы'плотоядных (штамм ЗПМ") по ЦПЭ в культуральных пробирках и по степени морфологических изменений РЭК

Контроль облученных образцов вируса

Продолжительность ультрафиолетового воздействия на вирус чумы шшых "ЭПТ (чае)

_ плото-

ядных

2~: 4 : 6 : 8 : 10 :12 : 14 : 16 :Г8 :20 :0 часов • часа . часа.часов.Часов .часов.часов.часов.часов,часов.часов.(контроль)

Титры облучзн- в культу-

ных образцов ; ре кле- $ а л7 4 тл ?

вируса, ток '

(В Лп) '-----

" : в РЭК 4,16 3,81 3,20 1,33

сл 1

4,16

Обозначения: ( - ) отсутствие ЦПЭ в культуре клеток или морфологических изменений в РЭК

- 16 -

Полное отсутствие ЦПЭ в культуре клеток и морфологических изменений в РЭК, куда вносили вирус после облучения, наблюдзлось I в течаназ 10 часов (табл. 3).

При испытании в реактга гемагглютинации (по общепринятой методике) зшзого и инактивированных образцов вируса чумы плотоядных, нэ наблюдалась агглютинация эритроцитов крови крысы, морской свинки, барана, свиньи и курипы.

Нолупение и испытание гиперим^нных сыгрроток для диагностики чумы плотоядных.

2 цель» получения гипериммунных сывороток против чумы плотоядных использовали 20 взрослых кроликов породы гсенкилла, массой 4-5 кг. Гипериммунизапта кроликов 1-4 подопытных групп проводили по разработанным нами схемам, которые приведены в таблице 4. Пятая группа кроликов служила контролем. Каждая группа состояла из 4 животных.

Кроликам первой подопытной группы вводили внутримышечно инак-тивировакныЯ и депонированный вирусный антиген чумы на I и 7 день по 5 мл, на 14,21,28 и 35 - й дни - по ТО мл. Кроликам зторой подопытной группы вводился живой депонированный культуральный вирус чумы плотоядных по вышеописанной схеме. Кроликам третьей подопытной группы - внутривенно и внутримышечно на 1,2,3 дни по 3 мл, на 5,6,7,10 дни по 5 мл, на II и 20 день - по ТО мл. Кроликам четвертой подопытной группы вводился живой кулыуральиый вирус чумы плотоядных по той же схеме, что и кроликам третьей группы. Кроликам пятой (контрольной) группы вводилась суспензия нгла-раданных клеток. В качестве депонента использовали ланолин - вазелиновый атасвант, приготовленный по нашей мете дико.

Согласно разработанного графика, от подопытных и контрольных животных проводился 6-кратный отбор крови для определения времеяг

Схемы гипериммунизации кроликов различными вирус-антигенями из вакцинного штамма "ЭШ"

Таблип 4

а рп__ 'поличе-'

пи ёпп гство : Вверенный антя-.: График введения антигена я доза

л^ков .плов . ген .

I 4 инактивированннЙ депонированный день введения I 7 14 21 28 35

культуральный вирус доза.(мл) 5 б 10 10 10 10

2 4 живой депонированный культу- день введения I 7 14 21 28 35

ральный вирус доза (мл) 5 5 10 10 10 10

3 4 инактивированный культуральный дань введения I 2 3 Б 6 7 9 10 II 20

вирус доза (мл) 3 3 3 5 Б 5 5 5 10 10

4 4 живой кулыураль- день 10 И 20

ный вирус введения I 2 3 б 6 7 9

доза (мл) 3 3 3 . 5 б Б б Б 10 10

, 6 суспензия куль- день ■ I 10 II 20

(контроль) 1 тур клеток введения 2 3 5 6 7 9

доза (ил) 3 3 3 5 5 5 5 5 10 10

появления специфических антител и динамики нзрастанвя титров гтре-икпиткрущих антител в сыворотках крови (табл. 4).

Дальнейшее исследование показало, что наибольшую активность в РИД проявляет сыворотка крови кроликов, который ввозили вкрус-акткген из икактизЕровангаго и депонированного культуралького вируса чумы плотоядных. Средкзгеометрический тгтр сггзпфгчэспкх преакаиткруемс: антител на введение ©того вкрус-аиткгзш составил '»нзкээ активна в РКД была екзорэтка кров" пролзлог. 2-й и 3-й подопытных групп. Среднегеометрический т и та раппядсп 7 ¿о^ 2, т.е. в 2 раза мэкэе активна сыворотка кроликов перпоГ" подопытной группы. У кроликов четвертой подопытной группы, которые вводили вирус-антиген из ейвого культуралького ьпруса суча плотоядных, средшзгеомзтрическкй тктр специфически прет-г.т-руп-щих антител составил только 5^00-2. Одновременно, сыворотка кро-

ви, полученная от ¡каютных, получавших депонированные антигена, дольше сохраняла свою активность (до 45-го дня ггаертафт-глзапик), а сыворотка, полученная на введение, натеввого антигена, сохраняла сво» активность всего лишь до 30-го дня гкперкжуккзапия.'---**

Подученные результаты в РИД подтверждались аналогичными показателями в реакции нейтрализации {табл. 5).

Таблица 5

Тит^ы антител сывороток крови кроликов в

Сыворотки

РН : РИД

Кроликов первой группы / ■

(первая схема гипершмунизации) 9¡-002 9£-00 2

Кроликов второй группы . I

(вторая схема г иле р имчу низ апии) 2 2

X ¿о

Кратилов третьей грушш Третья схема гипериммунизации/

Кроликов четвертой грушш /четвертая схема гиперамглуЕизации/

Перспективы зяспресс-сеоадогическо^ диагностики

чумы готетоядннт: з РИД с использованием пняготовлеш-нх н.чта жпагростшдаюз

Применяя наши диагностпкуш /жнактиЕировашшй концентрированный вирус-антиген и гипераммунную сыворотку крови крогакоз/ мы происследовали 55 проб сывороток кроЕИ клинически больных собак в ИЩ з агаровом геле. Исследования проводились в городской ветлечебнице города Полтавы.

По результатам исследований, 52 пробы сказались положительными, т.е. 94,54$ от общего количества клинически бальных собак. Три пробы /Ь,А<э%/ дала отрицательный результат. После патогнсто-логаческих исследований их трупов установлено, что они болели гепатитом, а не чумой.

Приготовленные наш даагносхижуш были использованы,такяе, для постановки диагноза на чуму у павпгих лисиц и норок зверохо-зяйства Кобелякского района. Приготовленная вирусная суспензия из патологического материала, взятого из паренхиматозных органов трупов паяют яизотшсс, дала положзтельный результат в РЯД;

ВЫВОДЫ

I. Чума плотоядных широко распространена на всей территории Бурккна Фасо. За последние 10 лет /1981-1991 гг/ происходило увеличение количества забатввсш: чумой плотоядных /в 1981 г. заре-

5 и

т

572

гистрировано 1,77$ от общего количества бальных за исследуеглый период, в ISS0 г. - 17,5£.

Наиболее неблагополучной зоной по данному заболеванию является центральная часть Уагадугу, на долю которой приходится 61% от количества больных чумой собак.

Во время холодного сезона количество заболевших животных составляло 84$, а в каркий период - снизалось до 1,8$, прячем наиболее чувствительна® оказались собаки 3-6 мес. возраста.

2. В условиях тропического климата, а Буркина Фасо, чаще регистрировалась котлая форма чуш собак /26,085»/, а на Украине с умеренным климатом, названная форма встречается реяе /1,81%/. Однако, легочная форма течения болезни встречалась в Полтавской области у большинства заболевпшх собак 32,89^.

3. На оснований патологоанатоглическзх и патогастслогичэскзх исследований при чума собак установлены вцра-енные некротические изменения эпмзлналшвс структур. Наблкдглся склероз соединительнотканных прослоек мгкду паренхшлшми структурами и в стоике кровеносных сосудов, точечкыэ и дп^йузкые кровоизлияния ь паренхике органов.

4. ВвдоленшЗ эпизоотический штамм вируса чуш{ плотоядных более активен, че:,: эталонный штамм "2Ш" в куль тур о глеток почки щенка собак и на развнвалцижся амйоионгх кур. Инфекционный титр эпизоотического штадиа равен 8,25 TmiggAm, титр штажа "SIE."" -

□ . силаиотичесий атата вируса чуш плотоядных не инактиви-роэался инсЕракрасазэ лучала лазерного излучения зиззщостью 2-10 МВт, длиной водны 0,63 LKЛ, диаметров пучг.а 4 ;лм, в течение 22 часов. .

В. Для изготовлены специфически антигенов разработан оптимальный режа инактивация эталонного игаша "ЗПМ" вируса чуш плотоядных УФ-лазерпым излучением. Преимущества этого способа инактивации вируса состоят в том, что происходи? полная инактивация инфекционных свойств вируса, но сохраняются антигенные свойства.'

7. Вирус чум плотоядных не вызывает гекагглгякнациз эритроцитов крови крнсн, морской свянет, барана, сизньн з курыщ.

8. Разработана и апробирована методика пшарикмуЕЛзацин кроликов прэготозлекшига антигенами из эталонного штадна "ЗПМ" вируса чуш плотоядных. Среднегеометрический татр специфических антител в снвороткях крогз кроликов, пшунизироваяяых аппгрпои из инактиЕЯрозакного и депонированного кудьтурального впруса чу-:1> плотоядшгс составил 7 кроликов, пкмунизлройсшплс рптг-генамз аз етэктаглровгнного кудьтурального варуса чута плотоядных, татр спеагй'лесют азтвтея баи в 2 раза вкх® /¡[со*/, а

яря гзеденнд антитела яз .чнрого вульзурадьягого впруаа титр ыттг-тел достигал лишь б/г • -

9. Предаиен конкд экспресо-метод лабораторной диагностики

ленвя гомслоглтннх антител в скворотках крови щотатесхи бсгьнЕх собак в качестве диагяостикумов в РИД использовали инактавивовап-вкй антиген из вируса чума плотоядных и спапрфпческуп гзлерилггтн-нуа СЕВоротку, это подтвердило на 94,54^ диагноз за чуму.

10. Использование разработанных дзагЕОстзкумов в РИДТ позволило осуществить постановку лабораторного диагноза на чуь;у плотоядных у павшх лисиц и норок. При постановке реакции кэ тр&- ' буется использование специального оборудования и представляется возможность получения результатов пря ее применении в услоЕ.'.^.

чуш плотоядчнх в КЗД б агаровом геле для практики, с целью впяэ-

хозяйства /в течение 24 часов/.'

РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Предлагается еоеый способ ннактиЕации вакцинного пташа вируса чуш плотоядных посредством ¿5-лазеряого излучения, обеспечивающий полную потерю инфекционных свойств вируса, но сохра-нящий его антигенную активность.

2. Б целях получения активных специфических сывороток для постановки реакции игеднодаФЗзузки рекомендуется использование

в качестве вируо-антигена для ищершамунизацгш кроликов по разработанным каш схемам, инактпвярованный и депонированный культуральный вирус из Еакцинного штамма "ЭПМ".

3. Предлагается новый экспресс-метод серологической диагностики чуш плотоядна: /прашз иепао к после изб ели/ в реакции им-

№ ,

мунодайузии с использованием приготовленных диагностиков /лвак-тивированккй антиген из вакцинного штамма'"ЗЛИ" вируса чуш • плотоядных и специфическая прецшмирунщая сыворотка/«

- ' ■ СПИСОК ОПУШКОВАШШ. РАБОТ

1. Онтсука Барталеми, Т.Зевиба. Эпизоотология, клиническая и патодогоанаасшческая картина болезни Гамборо // Диагностика и специфическая профилактика инфекционных болезней ееботекх и птиц: Меявуз, сборник научн. тр./ Кмшневскдй с.-х. пн-т ил. М.В.Фрунзе.-1989.-С.55-69.

2. Тарнагда Зекиба. Получение гипершмукных сывороток против чуш плотоядных. Работа находится в печати с января 1993 г. в Днепропетровском с.-х. ин-те /факультет ветеринарной медицины/.