Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Дерматофитозы собак в городах Сибири

На правах рукописи

ВАЖБНИНА ЕВГЕНИЯ ГЕННАДЬЕВНА ии^и гиоо2

ДЕРМАТОФИТОЗЫ СОБАК В ГОРОДАХ СИБИРИ

(ЭПИЗООТОЛОГИЯ, ИММУНОЛОГИЯ)

Специальность 16 00 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Барнаул - 2007

003070002

Работа выполнена на кафедре инфекционных и инвазионных болезней, в ветеринарной клинике института биотехнологии и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Тюменская государственная сельскохозяйственная академия», в лабораториях мелких домашних животных и иммунологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных» Сибирского отделения Россельхозакадемии

Научный руководитель- кандидат ветеринарных наук

Гордиенко Л Н

Официальные оппоненты доктор ветеринарных наук,

профессор Кашин А С

доктор ветеринарных наук Разумовская В В

Ведущая организация ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный

университет»

Защита диссертации состоится 30 мая 2007 г в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220 002 02 при Алтайском государственном аграрном университете в институте ветеринарной медицины по адресу. 656922, г Барнаул, ул Попова, д 276.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет»

Автореферат разослан 20 апреля 2007 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор ветеринарных наук, профессор

П И. Барышников

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. В настоящее время дерматофитозы собак (микроспория, трихофития) широко распространены в Российской Федерации и других странах мира Они занимают одно из ведущих мест (от 7 до 61%) в патологии кожи и ее производных (Головина и др, 1999, Грязин, 2001, Постников и др, 2001, Зубарева и др, 2003, Овчеренко и др, 2003, 2004, Бибина, 2005, Новикова, 2005, Muller, 1970, Hariramma et al ,1973, Jolivet, 1974, Abou-Gabal et al, 1976, Stenwig, 1985, Larry et al, 1997) Это связано с ростом численности бездомных животных, служащих основным источником возбудителя инфекции, высокой восприимчивостью собак к заражению, со способностью патогенных дерматофитов длительное время выдерживать неблагоприятные воздействия внешней среды, с отсутствием или несвоевременным проведением диагностических, лечебных и профилактических мероприятий

В каждом регионе эти заболевания имеют свои особенности проявления эпизоотического процесса, зависящие от климатических условий, факторов внешней среды и системы ветеринарных мероприятий В последние годы (1997-2005 гг) отмечается широкое распространение дерматофитозов собак и на урбанизированных территориях городов Сибири, что вызывает необходимость изучения факторов, влияющих на эпизоотический и инфекционный процессы

Отсутствие статистических данных о численности популяции собак (cams farm] jar is) в России не дает возможности иметь достоверные сведения об основных показателях эпизоотического процесса при дерматофитозах, так как около 75% собак являются бродячими, имеющие большое эпизоотологическое и эпидемиологическое значение как потенциальный источник инфекции (Спесивцева, 1964, Колодиев, 1999) Эпизоотологический анализ по дерматофитозам собак в большинстве случаев основан на материалах отчетности ветеринарных клиник, что позволяет на модели фиксированного поголовья определить факторы, влияющие на характер, проявление и течение заболевания

Согласно данным исследователей, 50-70% грибковых кожных болезней собак, вызываются возбудителем Microsporum earns Остальные дерматофитозы вызываются возбудителями Trichophyton mentagrophytes и Microsporum gypseum (Лукьяновский, 1988, Гаскелл и др, 2000, Зубарева и др , 2003)

Результаты клинических наблюдений и экспериментальных исследований многих авторов свидетельствуют о том, что в патогенезе грибковых

заболеваний важную роль играют все звенья иммунной системы (Родионов, 2000, Грязин, 2001, Горячкина, 2003) Открытие ведущей роли Т- и В-лимфоцитов в иммунитете, их клеточной кооперации с макрофагами, разработка методов идентификации иммунокомпетентных клеток дает возможность более объективной оценки иммунного статуса животных

Таким образом, изучение эпизоотической ситуации по дерматофитозам собак в крупных городах Сибири, иммунологических реакций в организме больных и переболевших животных до сих пор является актуальной задачей, что и явилось обоснованием для выбора темы исследований

Цель и задачи исследований. Цель работы - выяснить эпизоотическую ситуацию по дерматофитозам собак на территории Сибири (на примере городов Тюмени и Омска), изучить иммунный статус животных, экспериментально зараженных возбудителем трихофитии и выявить влияние разных схем терапии на иммунологические реакции собак

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи

- Изучить распространение и клиническое проявление дерматофитозов у собак на территории городов Сибири (на примере городов Тюмени и Омска)

- Установить выживаемость возбудителя трихофитии в различных объектах и разных температурных условиях внешней среды

- Определить иммунный статус у собак при экспериментальном заражении возбудителем трихофитии, в период и после терапии

Научная новизна работы. Впервые в условиях городов Тюмени и Омска установлено распространение дерматофитозов среди собак, определена сезонность и выявлена возрастная динамика заболеваний

Изучена устойчивость возбудителя трихофитии Trichophyton mentagrophytes в разных объектах к колебаниям температуры воздуха и установлено, что дерматофит наиболее длительное время сохраняется во влажной среде при среднесуточной температуре от +34,0±0,7 (в летнее время) до -30,5±1,3°С (в зимнее время) - 360-560 суток (срок наблюдения)

Определен уровень розеткообразующих лимфоцитов в периферической крови экспериментально зараженных возбудителем трихофитии собак Выявлено, что в организме экспериментально зараженных собак возбудитель трихофитии вызывает клеточные реакции, проявляющиеся в увеличении числа Т- и B-лимфоцитов и уменьшении антигенсвязывающих лимфоцитов

Установлено, что применение вакцины «Вакдерм» в терапии трихофитии вызывает иммунологические реакции, характеризующиеся повышенным содержанием иммунокомпетентных клеток

Практическая значимость работы В результате проведенных исследований были получены данные о распространении дерматофитозов среди собак в крупных городах Сибири (Тюмень, Омск) Определены сроки выживаемости возбудителя трихофитии в разных условиях внешней среды на различных объектах (почва, вода, комбикорм, опил)

Иммунологически и клинически обоснована схема терапии дерматофитозов собак с использованием инактивированной вакцины «Вакдерм»

Разработаны рекомендации «Эпизоотология, диагностика, профилактика и лечение дерматомикозов мелких домашних животных», рассмотрены и утверждены на заседании подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол №1 от 17 01 2006 г, Новосибирск)

Результаты комплексных эпизоотологических, клинических и лабораторных исследований предложены для применения в практической работе специалистами ветеринарных клиник лаборатории мелких домашних животных ГНУ ВНИИБТЖ СО Россельхозакадемии (протокол №8 от 24 08 2006 г ), «ДокторВет» (г Новосибирск), лаборатории экспериментальной вертебрологии и нейрохирургии ФГУН «РНЦ «ВТО» имени академика Г А Илизарова Росздрава» (протокол №2 от 11 09 2006 г ), кинологических подразделений УВД Омской области (протокол №27 от 07 09 2006 г ), а также в учебном процессе и в научных исследованиях на кафедрах инфекционных и инвазионных болезней ИБиВМ ФГОУ ВПО «Тюменская ГСХА», микробиологии, вирусологии и ВСЭ ФГОУ ВПО «Бурятская ГСХА им В Р Филиппова» (протокол №1 от 01 09 2006 г), эпизоотологии, паразитологии и микробиологии Дальневосточного ГАУ (протокол №1 от 18 09 2006 г), микробиологии, эпизоотологии и ВСЭ ФГОУ ВПО «Алтайский ГАУ» (протокол №1 от 31 08 2006 г )

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Материалы по изучению эпизоотической ситуации по дерматофитозам собак на урбанизированной территории городов Сибири Результаты по изучению сохранения жизнеспособности возбудителя трихофитии на различных объектах при разных температурных режимах внешней среды

2 Оценка иммунного статуса у собак при экспериментальном заражении возбудителем трихофитии

Апробация работы. Основные результаты научно-исследовательской работы доложены на 3-5-й межрегиональных научно-практических конференциях по проблемам ветеринарной медицины (Омск, 2004-2006 гг ), на

Сибирском международном ветеринарном конгрессе (Новосибирск, 2005г), на ХШ-Х1У международных Московских конгрессах по болезням мелких домашних животных (Москва, 2005-2006 гг), на Ученых советах ГНУ ВНИИБТЖ СО РАСХН, на подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (Новосибирск, 200бг), на межлабораторном совещании ГНУ ВНИИБТЖ СО РАСХН (Омск, 2006г ) и на межкафедральном заседании ФГОУ ВПО ТГСХА (Тюмень, 2006г)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 научных статей и одни методические рекомендации

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 123 страницах компьютерного набора, включает введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и приложения Список использованной литературы включает 251 источник, в том числе 213 отечественных и 38 зарубежных авторов Диссертация иллюстрирована 15 таблицами и 24 рисунками

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в период с 2002 по 2005 гг на кафедре инфекционных и инвазионных болезней, ветеринарной клинике института биотехнологии и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Тюменская государственная сельскохозяйственная академия», в лабораториях мелких домашних животных и иммунологии государственного научного учреждения «Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных» Сибирского отделения Россельхозакадемии

При проведении исследований применяли эпизоотологические, клинические, гематологические, иммунологические, микроскопические и культуральные методы (Бажин и др , 1989, Костенко и др , 1989, Бакулов и др , 1997, Урбан и др , 2002)

Анализ эпизоотической ситуации по дерматофитозам собак проводили на основании первичной ветеринарной документации и непосредственного наблюдения за животными с учетом клинико-анамнестических данных и результатов лабораторных исследований Для определения эпизоотического процесса дерматофитозов у собак в условиях городов Сибири изучали ряд факторов породный и половозрастной состав больных животных, сезонность проявления заболеваний, способность возбудителя трихофитии к выживанию в

различных объектах внешней среды, их роль и место в инфекционной патологии

Изучение клинических признаков дерматофитозов собак в городах Тюмени и Омске проводили по анализу материалов диагностических исследований и методом клинического обследования животных, поступавших в ветеринарные клиники

В момент поступления на каждого животного была заведена карта индивидуального учета, в которой были зафиксированы данные о породе, возрасте, половой принадлежности, условиях кормления и содержания, подробный анамнез обо всех случаях каких-либо болезненных проявлений у животного, результаты клинического обследования и лабораторных исследований

Биоматериалом для микроскопических и культуральных (микологических) исследований служили волосы и чешуйки кожи с пораженных участков животных, не подвергавшихся лечению

Биоматериал для микроскопического исследования отбирали с периферии очага путем глубокого соскоба скальпелем Для более четкого выявления элементов гриба проводили просветление материала с помощью добавления 1-3 капли 10%-ного водного раствора гидроксида натрия Исследуемый материал покрывали покровным стеклом, осторожно подогревали над пламенем спиртовки до появления белого ободка из кристаллов щелочи по периферии капли и подвергали микроскопии с использованием светового микроскопа «Биолам» сначала под малым увеличением объектива (объектив х8, окуляр х15), а потом под средним (объектив х40, окуляр х15)

Пораженные волосы для культурального исследования аккуратно выщипывали по краю очага и помещали в стерильные пакеты из пергаментной бумаги В боксе стригли корневые части волос на мелкие кусочки (1-2 мм), 2-3 из них наносили на поверхность скошенного агара Сабуро и располагали на расстоянии 1-2 см друг от друга Материалом одной пробы засевали не менее 34 пробирок, одновременно осуществляли контроль воздуха Посевы проводили над пламенем спиртовой горелки по общепринятой методике (Костенко и др, 1989) Затем посевы инкубировали в двух термостатах при температурах +27 и +30°С в течение 30 суток Состояние роста культур контролировали с интервалом 3-4 суток

У изолированных культур изучали морфологические и культуральные свойства Грибы исследовали в неокрашенном состоянии по общей методике

(Костенко и др, 1989) с использованием светового микроскопа «Биолам» под средним увеличением объектива (объектив х40, окуляр х15)

Для определения жизнеспособности дерматофитов был использован эпизоотический штамм Trichophyton mentagrophytes var gypseum С этой целью исследовали 112 тест-объектов с биоматериалом в разные сроки через 30, 60, 90, 120, 180, 360 и 560 суток после закладки

В течение всего периода опыта вели учет температуры воздуха окружающей среды Измерение температуры проводили с помощью спиртового термометра Среднесуточную температуру высчитывали по методу Н В Садовского (1975)

Сравнительную оценку методов диагностики дерматофитозов проводили на 48 клинически больных дерматофитозами собаках разных пород и половозрастных групп

Экспериментальное заражение собак эпизоотическим штаммом Trichophyton mentagrophytes и исследования по изучению клинических признаков и иммунологических реакций экспериментальных животных проводили на базе лабораторий мелких домашних животных и иммунологии ГНУ ВНИИБТЖ СО Россельхозакадемии

Для проведения опытов по принципу аналогов были подобраны 11 щенков четырехмесячного возраста, средней массой 3-5 кг, из которых сформировали 3 группы, в 1-ой и 2-ой группах было по 4 щенков, в 3-й - 3 щенков Группы содержались в аналогичных условиях, отвечающих зооветеринарным и санитарно-гигиеническим требованиям, в вольерах, в отдельных будках, снабженных подстилкой из соломы Собаки получали полноценный рацион, содержащий мясные продукты (до 30% от общего объема) в отварном и сыром виде, каши на мясном бульоне, овощи В качестве минеральной добавки получали кальций фосфат в дозе 0,8 г/кг массы тела

Все животные были одновременно экстрадермально заражены культурой эпизоотического штамма Trichophyton mentagrophytes var gypseum, выделенной от больного трихофитией животного Для этого культуру вместе с агаром растирали между двумя стерильными листочками наждачной бумаги и осторожно (без крови) втирали в предварительно выбритый участок кожи (диаметром около 6 см) в области правой лопатки (месте недоступном для облизывания)

Через 30 суток после экспериментального заражения было проведено лечение каждой группы собак разными методами 1-я группа - с кормом получали витаминизированную добавку «дрожжи кормовые», содержащую натуральный комплекс витаминов группы В, в дозе, согласно инструкции по

применению (10-20 г/кг корма), индивидуально, 2-я группа - подвергались терапии с применением инактивированной вакцины «Вакдерм» в дозе 1 мл, трехкратно с интервалом 14 суток, 3-я группа щенков - получали «дрожжи кормовые» (аналогично первой группе) и подвергались трехкратной терапии вакциной «Вакдерм» (аналогично второй группе)

Для изучения иммунного статуса собак проводили исследования по определению розеткообразующих лимфоцитов крови, соответственно рекомендаций М А Бажина и др (1989) и лейкограммы до заражения (контроль) и после заражения возбудителем трихофитии (на 26-е, 46-е и 75-е сутки)

Материалом для иммунологических исследований являлась свежая периферическая кровь, полученная из подкожной вены предплечья собак

Количество Т-лимфоцитов в крови определяли в реакции спонтанного розеткообразования (Е-рок), лимфоцитов-киллеров - в реакции непрямого глобулинового розеткообразования (ЕА-рок), В-лимфоцитов - в реакции комплементарного розеткообразования (ЕАС-рок), антигенсвязывающих лимфоцитов - с помощью розеткообразования с эритроцитами собаки (ЕАГ-рок), адсорбировавшими антиген возбудителя трихофитии, полученный методом автоклавирования экстрактов

Для выведения лейкограммы брали капиллярную кровь из краевых вен ушных раковин собак Лейкограмму выводили по окрашенным мазкам в иммерсионной системе микроскопа (объектив хЮО, окуляр х10) путем дифференциального подсчета 100 лейкоцитов трехпольным методом с использованием клавишного счетчика (по Филиппченко)

Цифровой материал обрабатывали методами вариационной статистики с определением ^критерия достоверности по Стьюденту и уровня значимости Р Вероятность различий осуществляли при Р<0,05 (Урбах, 1964, Усович и др, 1970)

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Распространение дерматофитозов собак на территории городов Тюмени и Омска

На основании анализа материалов ветеринарной отчетности ветеринарных клиник ФГОУ ВПО ТГСХА и ГНУ ВНИИБТЖ СО Россельхозакадемии, установлено, что за период с 1997 по 2005 гг поступило на обследование 24550 собак с различной патологией, - из них 12381 (50,4%) животных с заболеваниями кожи Дерматофитоз выявлен в 1011 (8,2%) случаях от числа

животных с кожными заболеваниями, из них у 169 (16,7%) собак в момент поступления диагностировали сочетанное течение дерматофитоза и демодекоза

В результате микологических исследований биоматериала от собак выделяли и идентифицировали культуры грибов Microsporum canis и Trichophyton mentagrophytes

Изучая анамнез, мы отметили, что заражение часто происходит при контакте собак с бродячими животными в местах общего их выгула, за городом, на дачах во время летних отпусков, а также при вязках собак, при использовании в качестве подстилки соломы, изъеденной грызунами и т п Собаки заражались при непосредственном контакте с больными животными или через предметы ухода Факторами передачи возбудителя служили инфицированные помещения, корма, подстилка и т д

В результате статистического анализа установлено, что дерматофитозы собак в городах Тюмени и Омске регистрируются в течение всего года Однако можно отметить общую тенденцию увеличения количества больных собак в летне-осенний период зимой (декабрь, январь, февраль) - 127 (12,5%) из 1011 собак, весной (март, апрель, май) - 208 (20,6%), летом (июнь, июль, август) -389 (38,5%), осенью (сентябрь, октябрь, ноябрь) - 287 (28,4%)

Дерматофитозы встречаются у собак всех возрастов, но наиболее часто у животных в возрасте до I года - 28,1 % и в возрасте от 1 до 2-х лет - 23,6%

В заболеваемости и клинических признаках дерматофитозов у животных обоих полов не было установлено различий Дерматофитозы регистрируются в городах Сибири у самцов в 530 (52,4%) и у самок в 481 (47,6%) случаях Соотношение самцов и самок составило 1,1, что свидетельствует о независимости распределения инфекции по половой принадлежности

Результаты анализа также показали, что дерматофитозы регистрируются чаще у породистых собак (у 54,0% короткошерстных американских стаффордширских терьеров, боксеров, ротвейлеров, питбулей, такс, французских бульдогов, шарпеев и др и у 46,0% длинношерстных немецких, кавказских и среднеазиатских овчарок, спаниелей, пуделей, пекинесов, чау-чау и др ), чем у беспородных

2.2. Клинические признаки дерматофитозов собак Анализируя данные диагностических исследований ветеринарных клиник ФГОУ ВПО ТГСХА и ГНУ ВНИИБТЖ СО Россельхозакадемии за 1997-2005 гг и результаты собственных исследований, мы выявили многообразие форм клинического проявления дерматофитозов у собак.

Инкубационный период колебался в пределах от 6 до 30 суток

По тяжести поражений различали следующие формы дерматофитозов

1 Глубокая (фолликулярная или экссудативная) форма наблюдалась у 243 (24,0%) собак При этой форме воспалительный процесс и экссудативные явления были резко выражены, в результате осмотра обнаруживали ограниченные безволосые возвышения, покрытые корочками При надавливании на них животное ощущало болезненность, из фолликулов вытекал гной У собак поражалась кожа головы (в области носа, надбровья, ушных раковин), шеи, спины и конечностей (в области бедра и межпальцевой складки) У большинства больных животных отмечался зуд с разной степенью выраженности У собак с резко выраженным зудом, от расчесывания образовывались ссадины, которые покрывались темными корками, пропитанными кровью При отсутствии зуда животные не расчесывали пораженные места У некоторых животных после выздоровления, в результате глубоких поражений с разрушением волосяных фолликулов, на месте очагов прекращался рост волос

2 Поверхностная форма (чешуйчатая) отмечалась у 520 собак (51,5%) Она характеризовалась появлением зудящих ограниченных бляшек шелушения диаметром от 1,5 до 15 см и образованием серовато-белых корочек на коже головы (вокруг рта и носа, на наружных поверхностях ушных раковин), туловища, хвоста, лап Волосы в местах поражения были редкие, секлись, легко обламывались, кожа утолщалась Воспалительная реакция была выражена слабо

3 Стертая (атипичная) форма встречалась у 79 (7,8%) собак При внимательном осмотре животных, на коже были заметны округлые безволосые участки с шелушащейся поверхностью без характерных признаков воспаления

4 Пустулезно-чешуйчатая форма наблюдалась у 169 (16,7%) собак при сочетанном течении дерматофитоза и демодекоза Она характеризовалась наличием пустул размером 2-5 мм в диаметре, покрытых чешуйками и корочками Кожа в основном была поражена в области головы (около рта, над глазами) и конечностей (часто межпальцевое пространство) У животных отмечался сильный зуд

Животные, пораженные грибом рода Microsporum, в основном проявляли клинические признаки в поверхностной и пустулезно-чешуйчатой форме, реже в глубокой и стертой

При поражении собак грибом рода Trichophyton воспалительная реакция на коже была резко выражена, клинически болезнь чаще протекала в глубокой, реже в поверхностной, стертой и пустулезно-чешуйчатой формах

По степени поражения кожи выделяли

1 Локализованную форму, которая встречалась у 651 (64,4%) собак и характеризовалась образованием очагов поражения на отдельных частях тела

2 Генерализованную (диссеминированную) форму диагностировали у 360 (35,6%) животных Кожные поражения охватывали обширные поверхности тела (головы, шеи, лап, спины и других частей тела) Иногда одиночные очаги сливались и образовывали сплошную поверхность поражения

Длительность переболевания составляла от 20 до 90 суток

2.3. Устойчивость возбудителя трихофитии к различным условиям внешней среды

Для изучения выживаемости возбудителя трихофитии на различных объектах внешней среды и в разных температурных режимах в качестве биоматериала использовали пораженные волосы от экспериментально зараженных собак

Тест-объектами служили объекты внешней среды, наиболее часто подвергающиеся контаминации больными животными - почва, непроточная вода, опил (используемый в качестве подстилки) и комбикорм

Пробирки с тест-объектами и биоматериалом размещали в условия с разными температурными режимами в помещение, на открытый грунт, в собачью будку, в почву на глубину - 20-40 см

В течение всего периода опыта вели учет температуры воздуха окружающей среды В результате измерения температуры воздуха в самые теплые (июнь, июль, август 2004-2005 гг) и холодные (декабрь, январь, февраль 2005 г) месяцы года, была выведена самая высокая (+34,0±0,7)°С и самая низкая (-30,5±1,3)°С среднесуточная температура воздуха в г Тюмени за период с 5 марта 2004 г по 14 сентября 2005 г

Через 30, 60, 90, 120, 180, 360 и 560 суток после закладки контаминированных тест-объектов проводили посев волосков на среду Сабуро (из одной пробирки с тест-объектом в четыре пробирки со средой) по общепринятой методике

Наличие роста культуры Trichophyton mentagrophytes, который наблюдался на 3-10-е сутки, оценивали как сохранение ее жизнеспособности Выросшие колонии этого дерматофита были правильной округлой формы, белого цвета, мучнистые, будто посыпанные гипсом В центре колоний имелось пуговчатое возвышение

При микроскопировании культуры наблюдали тонкий, разветвленный мицелий с обильными спиральными и кольцевидными окончаниями гиф и многочисленными гроздевидно расположенными округлыми спорами

В результате проведенных исследований было выявлено, что в условиях жилого помещения (при среднесуточной температуре воздуха от +20,0±0,0 до +25,0±0,0°С) возбудитель трихофитии, находясь в почве, сохранял жизнеспособность в течение 30 суток, в воде - 560 суток (срок наблюдения), в комбикорме - 120 суток Сроки выживаемости трихофитона в пробирках с опилом установить не удалось

В условиях улицы на открытом грунте (при ср t воздуха от +34,0±0,7 до -30,5±1,3°С в зависимости от времени года) возбудитель трихофитии оставался жизнеспособным в почве - 120 суток, в воде - 360 суток, в комбикорме - 120 суток, в опиле - 60 суток

В условиях собачей будки (при cpt воздуха от +28,2±1,7 до -16,5±1,4°С) трихофитон сохранялся в почве в течение 180 суток, в воде - 360 суток, в комбикорме - 90 суток, в опиле - 60 суток

В почве на глубине 20-40 см (при cpt от +22,0±1,1 до -10,7±0,5°С) возбудитель трихофитии оставался жизнеспособным наиболее длительное время в тест-объектах с почвой и опилом - 180 суток, с водой - 560 суток (срок наблюдения) и с комбикормом - 360 суток

Проведенный нами эксперимент показал, что влажная среда наиболее благоприятна для сохранения жизнеспособности дерматофита Так возбудитель трихофитии жизнеспособен и сохраняет свои основные свойства в воде от 360-ти до 560-ти суток (срок наблюдения) при температурных колебаниях от +34,0±0,7 (в летнее время) до -30,5±1,3°С (в зимнее время) Поэтому для профилактики дерматофитозов необходимо следить за чистотой и сухостью собачей будки и кожно-волосяного покрова питомца, а для достижения полноценного терапевтического эффекта нежелательно во время лечения проводить водные процедуры (купания)

Наиболее оптимальным температурным условием внешней среды для сохранения жизнеспособности трихофитона является температура почвы на глубине 20-40 см от +22,0±1,1 до -10,7±0,5°С

2.4. Сравнительная оценка методов диагностики дерматофитозов

В результате анамнеза и первичного осмотра животного определяли породу, пол, возраст, его физиологическое состояние, выясняли условия содержания, тип кормления, рацион, наличие системных патологий, аллергии, а

также наличие «свободного моциона», контактов с подозреваемыми в заболевании животными и длительность болезни

Клиническая картина дерматофитозов была весьма многообразна, поэтому диагноз подтверждали лабораторными методами исследований Для лабораторной диагностики во всех случаях использовали микроскопический метод и выделяли чистую культуру

Посевы проводили по общепринятой методике Всего было выполнено 167 посевов на агар Сабуро от 48 собак (от 35 собак по 4 посева и от 9 собак по 3 посева), из которых было получено 138 положительных проб Выделенные культуры идентифицировали по морфологии колоний и микроскопически

Microsporum canis на 2-4-е сутки после посева образовывал круглые с концентрическими кругами серовато-белые колонии При микроскопировании культуры был виден септированный, разветвленный в виде гребешковых органов мицелий

Trichophyton mentagrophytes давал рост на среде Сабуро на 4-10-е сутки При осмотре колонии были правильной округлой формы, белого цвета, мучнистые с пуговчатым возвышением в центре При микроскопировании культуры был виден тонкий, разветвленный мицелий гриба с обильными спиральными и кольцевидными окончаниями гиф и многочисленными округлыми спорами

В результате проведенных исследований установлено, что у животных на кожно-волосяном покрове персистировала патогенная микрофлора, среди которой Microsporum canis выделен от 38 собак (79,2%) и Trichophyton mentagrophytes от 10 собак (20,8%) Эффективность микологического метода диагностики дерматофитозов составила 100% Срок исследования составил до 10 суток

Люминесцентный метод исследования при помощи ультрафиолетового прибора «Сапфир» с рабочей длиной волны излучения - 365 нм применялся для проведения первичной диагностики микроспории Однако из 38 собак, от которых был выделен возбудитель микроспории при микологическом исследовании, положительный результат в виде ярко-зеленого специфического свечения отмечался только у 28 животных (73,7%), а у 10 собак (26,3%) -характерного свечения не наблюдалось, было лишь отмечено голубоватое свечение чешуек кожи

При микроскопическом исследовании волос, пораженных грибом Microsporum canis, обнаруживали тесные пласты спор в мозаичном порядке на поверхности и внутри волоса При микроскопическом исследовании волос,

пораженных грибом Trichophyton mentagrophytes, были обнаружены мелкие, круглые споры, располагающиеся цепочками на волосе и образующие чехол из спор вокруг фолликулярной части волоса Эффективность метода составила 100% Кроме того, в глубоких соскобах кожи у 13 собак (в 27,1% случаях) наряду с дерматофитами обнаруживали яйца, преимагинальные и половозрелые формы клещей Demodex canis

Микроскопический метод диагностики дерматофитозов являлся наиболее доступным и позволял в течение короткого промежутка времени (около 10-20 мин) поставить окончательный диагноз

Для рационального выбора схемы лечения дерматофитозы дифференцировали от дерматитов, вызванных клещами, бактериальной микрофлорой, вирусами, а также от дерматитов неинфекционной этиологии

2.5. Результаты клинических и лабораторных исследований экспериментально зараженных животных

Клиническое обследование собак, зараженных культурой эпизоотического штамма Trichophyton mentagrophytes var gypseum, осуществляли ежедневно

Клинические признаки заболевания оценивали по интенсивности проявления воспалительной реакции на месте заражения, по размеру очага поражения кожи и по наличию гиперемии, экссудата, шелушения и зуда. Наиболее яркое проявление клинических признаков болезни наблюдали на 26-ые сутки после заражения Кожа на месте заражения оставалась без волос, становилась плотной или была покрыта редкими, ломкими, легко выдергивающимися волосами, измененными в цвете и структуре Здоровые участки кожи отличались более бледным цветом

Установлено, что 5 собак из 11 экспериментальных животных (45,4%) имели ярко выраженные клинические признаки болезни (характерная воспалительная реакция на коже, размеры очага поражения превышали 3 см в диаметре) Трое животных (27,3%) проявляли клинические признаки трихофитии в незначительной степени (воспалительная реакция выражена слабее, размеры очага составляли - 2-3 см) и 3 (27,3%) животных имели слабовыраженные признаки болезни (незначительное воспаление кожи, размеры очага - 1-2 см)

Через 30 суток после экспериментального заражения было проведено лечение трех групп собак разными методами

Терапевтическую эффективность оценивали по длительности проявления клинических признаков степень выраженности воспалительной реакции,

проблемы ветеринарной медицины Материалы 5-ой межрегиональной научно-практической конференции - Омск, 2006 - С 252-256

9 Важенина Е Г Лечение собак при дерматомикозах и демодекозе, осложненном дерматомикозом / Е Г Важенина // Актуальные проблемы ветеринарной медицины Материалы 5-ой межрегиональной научно-практической конференции - Омск, 2006 - С 256-259

10 Важенина Е Г Выживаемость возбудителя трихофитии в различных условиях внешней среды / Е Г Важенина // Актуальные проблемы ветеринарной медицины Материалы 5-ой межрегиональной научно-практической конференции - Омск, 2006 - С 259-262

11 Важенина Е Г Использование иммунологических методов исследования крови для оценки иммунного статуса собак и повышения лечебной эффективности вакцинотерапии при дерматомикозах собак / Соавт Л Н Гордиенко // Актуальные проблемы ветеринарной медицины Материалы 5-ой межрегиональной научно-практической конференции - Омск, 2006 - С 274-279

12 Важенина Е Г Стимулирующее влияние водорастворимых витаминов группы В на рост и жизнеспособность дерматофитов in vivo и in vitro / Соавт Л Н Гордиенко, Н А Никитушкина, Е В Куликова // Материалы XIV международного Московского конгресса по болезням мелких домашних животных - Москва, 2006 - С 73-74

13 Важенина Е Г Иммунологические реакции собак при специфической терапии экспериментального дерматофитоза / Соавт Л Н Гордиенко, Н А Никитушкина // Вестник Тюменского государственного университета -Тюмень, 2006 - № 6 - С 213-216

Подписано в печать 23 03 2007 г Бумага Гознак Печать оперативная Тираж 100 экз Заказ №1060 Отпечатано в ИПК ТГСХА 625003, г Тюмень, ул Республики, 7

Актуальность проблемы. В настоящее время дерматофитозы собак (микроспория, трихофития) широко распространены в Российской Федерации и других странах мира. Они занимают одно из ведущих мест (от 7 до 61%) в патологии кожи и ее производных (Головина и др., 1999; Грязин, 2001; Постников и др., 2001; Зубарева и др., 2003; Овчеренко и др., 2003, 2004; Бибина, 2005; Новикова, 2005; Muller, 1970; Hariramma et al., 1973; Jolivet, 1974; Abou-Gabal et al., 1976; Stenwig, 1985; Larry et al., 1997). Это связано с ростом численности бездомных животных, служащих основным источником возбудителя инфекции, высокой восприимчивостью собак к заражению, со способностью патогенных дерматофитов длительное время выдерживать неблагоприятные воздействия внешней среды, с отсутствием или несвоевременным проведением диагностических, лечебных и профилактических мероприятий.

В каждом регионе эти заболевания имеют свои особенности проявления эпизоотического процесса, зависящие от климатических условий, факторов внешней среды и системы ветеринарных мероприятий. В последние годы (1997-2005 гг.) отмечается широкое распространение дерматофитозов собак и на урбанизированных территориях городов Сибири, что вызывает необходимость изучения факторов, влияющих на эпизоотический и инфекционный процессы.

Отсутствие статистических данных о численности популяции собак (canis familiaris) в России не дает возможности иметь достоверные сведения об основных показателях эпизоотического процесса при дерматофитозах, так как около 75% собак являются бродячими, имеющие большое эпизоотологическое и эпидемиологическое значение как потенциальный источник инфекции (Спесивцева, 1964; Колодиев, 1999). Эпизоотологический анализ по дерматофитозам собак в большинстве случаев основан на материалах отчетности ветеринарных клиник, что позволяет на модели фиксированного поголовья определить факторы, влияющие на характер, проявление и течение заболевания.

Согласно данным исследователей, 50-70% грибковых кожных болезней собак, вызываются возбудителем Microsporum canis. Остальные дерматофитозы вызываются возбудителями Trichophyton mentagrophytes и Microsporum gypseum (Лукьяновский, 1988; Гаскелл и др., 2000; Зубарева и др., 2003).

Результаты клинических наблюдений и экспериментальных исследований многих авторов свидетельствуют о том, что в патогенезе грибковых заболеваний важную роль играют все звенья иммунной системы (Родионов, 2000; Грязин, 2001; Горячкина, 2003). Открытие ведущей роли Т- и В-лимфоцитов в иммунитете, их клеточной кооперации с макрофагами, разработка методов идентификации иммунокомпетентных клеток дает возможность более объективной оценки иммунного статуса животных.

Таким образом, изучение эпизоотической ситуации по дерматофитозам собак в крупных городах Сибири, иммунологических реакций в организме больных и переболевших животных до сих пор является актуальной задачей, что и явилось обоснованием для выбора темы исследований.

Цель и задачи исследований. Цель работы - выяснить эпизоотическую ситуацию по дерматофитозам собак на территории Сибири (на примере городов Тюмени и Омска), изучить иммунный статус животных, экспериментально зараженных возбудителем трихофитии и выявить влияние разных схем терапии на иммунологические реакции собак.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

- Изучить распространение и клиническое проявление дерматофитозов у собак на территории городов Сибири (на примере городов Тюмени и Омска).

- Установить выживаемость возбудителя трихофитии в различных объектах и разных температурных условиях внешней среды.

- Определить иммунный статус у собак при экспериментальном заражении возбудителем трихофитии, в период и после терапии.

Научная новизна работы. Впервые в условиях городов Тюмени и Омска установлено распространение дерматофитозов среди собак, определена сезонность и выявлена возрастная динамика заболеваний.

Изучена устойчивость возбудителя трихофитии Trichophyton mentagrophytes в разных объектах к колебаниям температуры воздуха и установлено, что дерматофит наиболее длительное время сохраняется во влажной среде при среднесуточной температуре от +34,0±0,7 (в летнее время) до -30,5±1,3°С (в зимнее время) - 360-560 суток (срок наблюдения).

Определен уровень розеткообразующих лимфоцитов в периферической крови экспериментально зараженных возбудителем трихофитии собак. Выявлено, что в организме экспериментально зараженных собак возбудитель трихофитии вызывает клеточные реакции, проявляющиеся в увеличении числа Т- и В-лимфоцитов и уменьшении антигенсвязывающих лимфоцитов.

Установлено, что применение вакцины «Вакдерм» в терапии трихофитии вызывает иммунологические реакции, характеризующиеся повышенным содержанием иммунокомпетентных клеток.

Практическая значимость работы. В результате проведенных исследований были получены данные о распространении дерматофитозов среди собак в крупных городах Сибири (Тюмень, Омск). Определены сроки выживаемости возбудителя трихофитии в разных условиях внешней среды на различных объектах (почва, вода, комбикорм, опил).

Иммунологически и клинически обоснована схема терапии дерматофитозов собак с использованием инактивированной вакцины «Вакдерм».

Разработаны рекомендации «Эпизоотология, диагностика, профилактика и лечение дерматомикозов мелких домашних животных», рассмотрены и утверждены на заседании подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол №1 от 17.01.2006 г., Новосибирск).

Результаты комплексных эпизоотологических, клинических и лабораторных исследований предложены для применения в практической работе специалистами ветеринарных клиник: лаборатории мелких домашних животных ГНУ ВНИИБТЖ СО Россельхозакадемии (протокол №8 от 24.08.2006 г.); «ДокторВет» (г. Новосибирск); лаборатории экспериментальной вертебрологии и нейрохирургии ФГУН «РНЦ «ВТО» имени академика Г.А. Илизарова Росздрава» (протокол №2 от 11.09.2006 г.); кинологических подразделений УВД Омской области (протокол №27 от 07.09.2006 г.); а также в учебном процессе и в научных исследованиях на кафедрах: инфекционных и инвазионных болезней ИБиВМ ФГОУ ВПО «Тюменская ГСХА»; микробиологии, вирусологии и ВСЭ ФГОУ ВПО «Бурятская ГСХА им. В.Р. Филиппова» (протокол №1 от 01.09.2006 г.); эпизоотологии, паразитологии и микробиологии Дальневосточного ГАУ (протокол №1 от 18.09.2006 г.); микробиологии, эпизоотологии и ВСЭ ФГОУ ВПО «Алтайский ГАУ» (протокол №1 от 31.08.2006 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Материалы по изучению эпизоотической ситуации по дерматофитозам собак на урбанизированной территории городов Сибири. Результаты по изучению сохранения жизнеспособности возбудителя трихофитии на различных объектах при разных температурных режимах внешней среды.

2. Оценка иммунного статуса у собак при экспериментальном заражении возбудителем трихофитии.

Апробация работы. Основные результаты научно-исследовательской работы доложены: на 3-5-й межрегиональных научно-практических конференциях по проблемам ветеринарной медицины (Омск, 2004-2006 гг.); на Сибирском международном ветеринарном конгрессе (Новосибирск, 2005г.); на

XIII-XIV международных Московских конгрессах по болезням мелких домашних животных (Москва, 2005-2006 гг.), на Ученых советах ГНУ ВНИИБТЖ СО РАСХН; на подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (Новосибирск, 2006г.); на межлабораторном совещании ГНУ ВНИИБТЖ СО РАСХН (Омск, 2006г.) и на межкафедральном заседании ФГОУ ВПО ТГСХА (Тюмень, 2006г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 научных статей и одни методические рекомендации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 123 страницах компьютерного набора, включает введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и приложения. Список использованной литературы включает 251 источник, в том числе 213 отечественных и 38 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 15 таблицами и 24 рисунками.

выводы

1. Дерматофитозы собак имеют широкое распространение на урбанизированных территориях городов Сибири (8,2%). Болезнь протекает в ассоциации с демодекозом в 16,7% случаях. Установлена сезонность дерматофитозов в летне-осенний период (33,4%). Наиболее восприимчивы к дерматофитозам собаки в возрасте до 2-х лет (51,7%). Клинически дерматофитозы проявляются в глубокой (24,0%), поверхностной (51,5%), стертой (7,8%) и при сочетанном течении с демодекозом в пустулезно-чешуйчатой (16,7%) формах. По степени поражения кожи преобладает локализованная (64,4%), реже генерализованная форма дерматофитоза (35,6%). Основным этиологическим фактором при дерматофитозах собак является патогенная грибковая микрофлора (Trichophyton mentagrophytes - 20,8% и Microsporum canis - 79,2%).

2. Возбудитель трихофитии (Т. mentagrophytes) сохраняет свою жизнеспособность наиболее длительное время: от 360-ти до 560-ти суток (срок наблюдений) во влажной среде при температурных колебаниях от +34,0±0,7 (в летнее время) до -30,5±1,3°С (в зимнее время). Наиболее оптимальным температурным условием для сохранения жизнеспособности трихофитона в разных объектах являлась среднесуточная температура почвы на глубине 20-40 см от +22,Ш, 1 до -10,7±0,5°С.

3. Микроскопический метод является наиболее объективным диагностическим приемом и позволяет определить в 27,1% случаях смешанное течение дерматофитоза и демодекоза.

4. Экспериментальное заражение собак возбудителем трихофитии (Т. mentagrophytes) вызывает на 26-е сутки проявление клинических признаков в разной степени и клеточные реакции, сопровождающиеся увеличением в периферической крови числа Т- и В-лимфоцитов и уменьшением антигенсвязывающих лимфоцитов.

5. Терапия собак при экспериментальной трихофитии витаминным комплексом, включающим группу В на 46-ые сутки после заражения уменьшает число Т-киллеров в 1,8 раза, Т-лимфоцитов, распознающих антигены инфекта, в 1,5 раза, эозинофилов и лимфоцитов в 1,8 раза; увеличивает число В-лимфоцитов в 1,6 раза, сегментоядерных нейтрофилов в 1,4 раза, моноцитов в 1,5 раза по отношению к их количеству до заражения (до лечения). На 75-ые сутки сохраняется сниженное содержание антигенсвязывающих Т-лимфоцитов, эозинофилов, лимфоцитов и повышенное содержание сегментоядерных нейтрофилов, что сопровождается низкой терапевтической эффективностью В-витаминного комплекса и неполным выздоровлением животных.

6. Трехкратная (с интервалом 14 суток) иммунизация собак вакциной «Вакдерм» обладает высокой терапевтической эффективностью, при этом иммунный статус у животных характеризуется повышенным содержанием иммунокомпетентных клеток по отношению к их количеству до заражения (до лечения) и полным выздоровлением. Высокий уровень Т- и В-лимфоцитов (Р<0,05) при сниженном содержании антигенсвязывающих лимфоцитов и эозинофилов у собак в период лечения и после его отражает повышение защитных сил организма, благоприятный прогноз заболевания и может быть определяющим признаком в оценке эффективности терапии дерматофитозов.

7. Вакцинотерапия с применением В-витаминного комплекса сопровождается увеличением в крови экспериментальных собак числа Т- и В-лимфоцитов и Т- киллеров (соответственно: в 4,3, 2,3 и 1,9 раза), сегментоядерных нейтрофилов в 1,4 раза при уменьшении содержания антигенсвязывающих лимфоцитов, лимфоцитов (Р<0,05), палочкоядерных нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов по отношению к их количеству до заражения (до лечения). После окончания лечения у животных регистрируется также повышенное содержание иммунокомпетентных клеток, сегментоядерных нейтрофилов и уменьшенное содержание количества эозинофилов, моноцитов и лимфоцитов, что может указывать на сохранение защитных сил организма и благоприятный прогноз заболевания.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Учитывая широкое распространение дерматофитозов среди собак, для борьбы с инфекцией рекомендуем специалистам государственной ветеринарной службы и практикующим ветеринарным врачам осуществлять в крупных городах постоянный эпизоотический контроль за распространением дерматофитозов с целью своевременного выявления заболеваний, проведения лечебно-профилактических мероприятий, снижения заболеваемости животных и предотвращения заражения людей.

Для объективной и оперативной диагностики дерматофитозов и сочетанного течения дерматофитоза и демодекоза собак следует использовать микроскопический метод.

При профилактике дерматофитозов особое внимание следует уделять специфической иммунизации и состоянию кожно-волосяного покрова питомца. Для достижения полноценного терапевтического эффекта нежелательно во время лечения дерматофитозов проводить водные процедуры (купания), так как влажная среда благоприятна для сохранения жизнеспособности патогенной грибковой микрофлоры.

Использовать в клинической практике выявленные изменения иммунологических показателей крови собак при дерматофитозе для оценки степени тяжести патологического процесса, контроля и своевременной корректировки терапии животных, а также для обоснования выбора средств профилактики.

Материалы диссертации представлены в рекомендациях «Эпизоотология, диагностика, профилактика и лечение дерматомикозов мелких домашних животных», утвержденных на заседании подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии 17.01.2006г. и предназначенных для практикующих ветеринарных врачей, специалистов диагностических и научноисследовательских лабораторий и использования в учебном процессе при обучении студентов высших и средних специальных образовательных учреждений.