Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Биологический и эпизоотологический аспекты производства и применения нового пробиотика из бактерий рода BACILLUS в свиноводстве

РГ6

V •">

ол

На правах рукописи

ЖДАНОВ Петр Иванович

БИОЛОГИЧЕСКИЙ И ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЙ АСПЕКТЫ ПРОИЗВОДСТВА И ПРИМЕНЕНИЯ НОВОГО ПРОБИОТИКА ИЗ БАКТЕРИЙ РОДА ВАаЬШЭ В СВИНОВОДСТВЕ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Санкт-Петербург - 1997

Работа выполнена в кафедре эпизоотологии и микробиологии Оренбургского государственного аграрного университета

Научные консультанты: доктор ветеринарных наук, профессор, академик РАСХН В.П.Урбан доктор медицинских наук, профессор, заслуженный изобретатель РФ В.И.Никитенко

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

A. Н.Борисенкова

доктор ветеринарных наук, профессор

П.Н.Сиеягин

доктор ветеринарных наук, профессор

B.И.Зеленский

Ведущая организация - Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока

Защита состоится (МН5Н.Я 1997 г. в ¿/часов на заседании диссертационного совета Д 120.20.02 при Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (196084, г. Санкт-Петербург, ул. Черниговская, д. 5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медецины.

Автореферат разослан 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук, доцент О.В.Узюмова

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Широкое распространение факторно-инфекционных желудочно-кишечных и респираторных болезней, которыми в отдельных хозяйствах переболевает до 60-80 % молодняка животных, выдвигает перед наукой и практикой ряд неотложных мер, направленных на изучение и разработку новых способов профилактики и борьбы с ними (А.Г.Шахов и соавт., 1980, 1988, 1991; В.П.Урбан и со-авт., 1984, 1992; С.И.Джулина, 1988; В.И.Филиппов, 1993; ЛВ.Жаров, 1995; С.И.Прудников, 1995 и др.)

Борьба с факторно-инфекционными болезнями сельскохозяйственных животных известными приемами из-за сложности диагностики, а порой и невозможности разрыва эпизоотической цепи, представляет большие трудности. Вот почему в течение последних 20 лет в мире резко возрос интерес к симбионтным микроорганизмам и пробиотическим препаратам на их основе, включая аэробные спорообразующие бактерии из рода Bacillus.

Полная безвредность и безопасность используемых для изготовления пробиотиков апатогенных штаммов аэробных бацилл при высокой антагонистической и биологической активности явились основанием для их широкого изучения в качестве профилактических и лечебных препаратов при многих патологических процессах у человека и животных (В.С.Сиверс и сбавт., 1978; В.В.Смирнов и соавт., 1980,1982, 19851990, 1992-1993; С. Р. Резник и соавт., 1989,1991; ThachPhamNgok, 1968; J.Rocchietta, 1969; H.Haenel and J.Bending, 1975; U.Guida, R.Guida, 1978; S.Jnooka, M.Kimura, 1983; Coppi et ai„ 1985; S.Jnooka et al., 1986 и др.).

Одним из новых отечественных пробиотиков из Bac.subtilis 534 является споробактерин. Он показал высокую лечебно-профилактическую эффективность при острых желудочно-кишечных болезнях инфекционной этиологии у людей, свежих и гнойных раневых процессах, воспалительных явлениях различной локализации и рекомендован для широкого применения в медицинской практике (В.И.Никитенко 1986, 1990, 1991; И.К.Никитенко и соавт., 1994; Н.М.Грачева и соавт., 1994).

Вместе с тем работ, которые были бы направлены на всестороннее изучение действия пробиотиков из аэробных бацилл на организм продуктивных животных, мало. Что же касается споробактерина, приготовляемого на основе Bac.subtilis 534, то его роль в ветеринарии вообще не рассматривалась, что и предопределило выбор настоящего исследования.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось всестороннее изучение свойств, технологий производства и применения нового пробиотика споробактерина жидкого в животноводстве и ветеринарной практике.

Реализация поставленной цели достигалась посредством решени; следующих задач:

- изучить свойства Bac.subtilis шт.534 как основы пробиотика "Спо-робактерин жидкий", определяющих качество препарата и механизм ere действия;

- разработать оптимальную технологию изготовления и контрол* препарата применительно к потребностям ветеринарии и предложить ее производству;

- апробировать действие споробактерина на организм животных npi< различных физиологических и патологических состояниях, включая массовые желудочно-кишечные и легочные болезни поросят, в экспериментальных и производственных условиях;

- установить иммуномодулирующию роль пробиотика на естественную устойчивость и иммунологическую реактивность организма животных, а также его влияние на микробоценоз кишечника и обменные процессы у здоровых животных;

- определить оптимальные дозы и схемы применения споробактерина для свиней. Разработать методику использования и дать производству наставление по его применению.

1.3. Научная нонпзиа. Научная новизна исследований заключается в успешном пионерском испытании нового пробиотика - споробактерина в ветеринарной практике для повышения устойчивости организма к заболеваниям и их продуктивности.

При этом впервые:

- предложены высокоурожайные и доступные плотные питательные среды для наращивания бактериальной массы штамма 534 Bac.subtilis;

- изучен аминокислотный состав бактерий Bac.subtilis 534;

- разработана и утверждена технология производства споробактерина жидкого;

- определены оптимальные дозы и схемы применения препарата для свиней, в зависимости от их возраста и физиологического состояния;

- изучено влияние споробактерина на факторы естественной защиты и иммунологической реактивности организма, видовой состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта, переваримость питательных веществ рациона, показатели мясной продуктивности и пищевые качества мяса свиней;

- доказана положительная роль споробактерина в управлении эпизоотическим процессом при массовых желудочно-кишечных и респираторных болезнях свиней, а также в лечении операционных ран и профилактике гнойно-хирургических инфекций.

1.4. Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенных исследований дополняют и углубляют теорию эпизооти-

ческого процесса при массовых болезнях молодняка. Они свидетельствуют о безвредности и высокой эффективности применения нового про-биотика споробактерина в животноводстве и ветеринарной практике, что открывает возможности для его широкого использования в оптимизации системы управления эпизоотическим процессом при массовых желудочно-кишечных и респираторных заболеваниях свиней, снижения в 2-2,5 раза отхода молодняка и повышения мясной продуктивности животных на 15-30% без дополнительных затрат на корма и содержание.

1.5. Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на: 2-ой межвузовской научно-практической конференции - "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (Ленинград, 1990); Всесоюзной научной конференции, посвященной 140-летию Харьковского зооветинститута (Харьков, 1991); 5-ой и 6-ой межгосударственных и межвузовских научно-практических конференциях - 'Новые фармакологические средства в ветеринарии* (Санкт-Петербург, 1993,1994); Международном симпозиуме - "Проблема моделирования патологических процессов у человека и животных, "Иммуноде-фициты, их диагностика и коррекция" (Санкт-Петербург, 1994); Международной конференции - "Актуальные проблемы ветеринарии" (Барнаул, 1995); Итоговых научных конференциях факультета ветеринарной медицины Оренбургского государственного аграрного университета (Оренбург, 1989-1995); ХП иХШ межвузовских научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов (Оренбург, 1993, 1994).

I.G. Публикация результатов исследований. Основные научные положения по теме диссертации изложены в 23 опубликованных научных материалах, включая два авторских свидетельства.

1.7. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 332 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических предложений, библиографии и приложения. Работа иллюстрирована 60 таблицами и 44 рисунками. Список литературы включает 530 источников, из них 188 - иностранных авторов.

1.8. Внедрение результатов исследований. Система мероприятий по профилактике и ликвидации массовых желудочно-кишечных и легочных болезней поросят полифакторной этиологии, основным элементом которой является применение споробактерина, внедрена с положительным эффектом в масштабах свинокомплексов и свиноводческих хозяйств Оренбургской области.

Результаты исследований учтены при разработке нормативных документов, утвержденных на российском уровне (ТУ 10-07-042-92 на производство и Временное наставление по применению споробактерина жидкого №22-4/70), и двух авторских свидетельств.

1.9. Основные положения, выносимые на защиту:

1.9.1. Научно-экспериментальное и практическое обоснование технологии производства споробактерина жидкого на основе Bac.subtilis 534 с использованием новых высокоурожайных питательных сред и перспектив его применения в животноводстве и ветеринарной практике.

1.9.2. Свойства и иммуномодулирующая роль споробактерина в системе естественной устойчивости и иммунологической реактивности организма животных обеспечивающих:

- оптимизацию контроля за эпизоотическим процессом массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят;

- ускорение на 3-4 дня заживления операционных ран и профилактику гнойно-хирургических инфекций; . .

- снижение отхода молодняка свиней в 2-2,5 раза и увеличение на 15-30% прироста массы тела.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследовании

Работа выполнялась с 1986 по 1995 гг. в кафедрах эпизоотологии и микробиологии Оренбургского государственного аграрного университета (ОГАУ) и травматологии, ортопедии и военно-полевой хирургии Оренбургской государственной медицинской академии (ОГМА), хозяйствах (им. Фурманова, "ПрЪгресс") Бугурусланского района, Бугурусланской межрайонной и Оренбургской областной научно-производственной ветеринарных лабораториях.

Споробактерин (жидкая и сухая формы) готовится на основе Bacillus subtilis шт.534 (спорообразующая аэробная бактерия из рода Ва-, cillus). Штамм 534 Bac.subtilis депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов ИБФМ АН СССР 28.03.1988 г.. Регистрационный номер-В-1666Д.

Споробактерин жидкий, изготовляемый по разработанной нами технологии (ТУ 10-07-042-92), представляет собой взвесь 48-72-часовой культуры Bac.subtilis 534 в 1-7 %-ом растворе натрия хлорида после смыва с плотных питательных сред с содержанием в 1 мл препарата 10,0±2,0 млрд. микробных тел (споры и палочки).

Изучение свойств Bac.subtilis 534, как основы споробактерина, проводилось по методам общей микробиологии (Н.И.Розанов, 1952; Ф.М.Орлов и соавт., 1963; К.И.Матвеев и соавт., 1973; М.О.Биргер и соавт., 1982; Ф.Герхардт и соавт., 1983, 1984).

Протеиназную активность бактериальной взвеси из Bac.subtilis 534 и экстракта из данного микроорганизма к альбумину и казеину изучали по методу Ансона (1983).

Определение аминокислотного состава Bac.subtilis 534 проводили методом распределительной одномерной восходящей хроматографии по Т.С.Пасхиной (1964).

Технологию производства и методы контроля споробактерина жидкого разрабатывали на базе кафедры эпизоотологии и микробиологии ОГАУ. Одним из важных моментов этой работы явилось конструирование и апробация новых плотных питательных сред для культивирования Bac.subtilis 534.

Антагонистическая активность споробактерина в опытах in vitro изучалась методом отсроченного антагонизма (М.О.Биргер и соавт., 1982). В качестве тест-штаммов использовали 63 музейных и свежевыделен-ных культуры разных видов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов из ГИСК им Л.А-Тарасевича, ОГМА, Оренбургской областной инфекционной больницы и областной научно-производственной ветеринарной лаборатории.

Изучение антагонистической активности in vivo проводили на моделях стафилококковой, сальмонеллезной, колибактериозной и синегной-ной экспериментальных инфекций в трех сериях опытов с использованием 336 белых мышей живой массой 19,2±1,2 г..

В процессе решения поставленных задач и проведения хозяйственных опытов было использовано 19846 (68 групп) опытных и 10648 (48 групп) контрольных свиней различных половозрастных групп.

Исследования по определению иммуномодулирующей роли споробактерина в системе специфической профилактики болезней крупного рогатого скота при некробактериозе и бруцеллезе проведены совместно с С.К.Димовым, А.А.Самолововым и С.В.Лопатиным.

Методики отдельных экспериментов, научно-производственных опытов и наблюдений изложены в соответствующих разделах диссертации.

Количество эритроцитов определяли по А И. Воробьеву (1989), а содержание гемоглобина на КФМЦ-2 по методу Г.В.Дервиза и АИ.Воробьева (1959) применительно к крови животных в нашей модификации (ПИ.Жцанов, 1983).

Окрашивание мазков крови для выведения лейкограммы и определения фагоцитарной активности лейкоцитов проводили поПаппенгейму в нашей модификации (П.И.Жданов, В.М.Мешков, 1972).

Уровень общего белка в сыворотке крови определяли рефрактометрически на ИРФ-22, а белковые фракции - турбидиметрическим (не-фелометрическим) методом (И.П.Кондрахин и соавт., 1985).

Бактерицидную активность сыворотки (БАС) крови устанавливали по методике О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой (1965) с использованием тест культуры E.coli (штамм 0111 ОГМА).

Активность бета-лизинов сыворотки крови по отношению к Bac.subtilis (шт. 83 ГИСК им. Л.А.Тарасевича), определяли ускоренным фотонефелометрическим методом по О.В.Бухарину и соавт. (1972).

Активность сывороточного лизоцима устанавливалась по методу О.В.Бухарина (1971). В качестве тест-микроба использовали суточную культуру с МПА Micrococcus lysodeicticus (шт. 2665 ГИСК ЛАТарасевича).

Уровень комплементарной активности сыворотки крови определяли по методу Г.Ф.Вагнера (1963) с расчетом процента гемолиза.

Фагоцитарная активность нейтрофилов определялась с установлением завершенности фагоцитоза по отношению к E.coli (штамм 0111 ОГМА) по методике АИ.Иванова и Б.АЧухловина (1967).

Изучение микробоценоза кишечника у 4-месячных клинически здоровых поросят (по 10 голов из опытных и контрольных групп) проводили в две серии опытов в лаборатории Оренбургской городской инфекционной больницы по методике Р.В.Эпштейн-Литвак (1982).

Для изучения переваримости питательных веществ рационов и усвоения азота под влиянием споробактерина проведены два балансовых опыта по методу ВИЖа (М.Ф.Томмэ, 1961). Исследования проб корма, кала и мочи на необходимые для опытов показатели проводились в биохимической лаборатории ВНИИМСа (г.Оренбург, 1989, 1991) по общепринятым методамДЕ.АПетухова и соавт., 1989). Там же в 1991 г. общепринятыми методами в двух сериях опытов определялись физические свойства и химический состав длиннейших мышц спины, сала и средних проб мяса (фарш) от животных, неполучавших и получавших длительное время (6 мес.) споробактерин (Методические рекомендации ВАСХНИЛ по оценке мясной продуктивности, качества мяса и подкожного жира свиней, 1987).

Противсхэпизоотическую эффективность споробактерина при массовых желудочно-кишечных и легочных болезнях поросят полифакторной этиологии устанавливали приемами и способами, приведенными в 'Методических указаниях по эпизоотологическому исследованию" (И.АБакулов и соавт., 1982). Ретроспективную оценку эпизоотической ситуации осуществляли на основе анализа материалов учета и отчетности Бугурусланских районного управления ветеринарии, межрайонной ветеринарной лаборатории ихозяйств (им. <£урманова, "Прогресс"), а также личных наблюдений, исследований и постановки экспериментальных и производственных опытов.

Расчет экономической эффективности проводили по 'Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий", утвержденной ГУВ МСХ СССР (1982), а математическую обработку экспериментальных данных - константным методом, в отдельных случаях и методом прямой разности по Н.В.Садовскому (1975).

2.2. Изучение свойств Bac.sublilis 534

Применение современных методов исследований и традиционных подходов в изучении морфологических, тинкториальных, биохимических, культуральных и антибактериальных свойств, а также процессов споро-

образования, изменчивости и устойчивости штамма Bac.subtilis 534 позволило получить ряд интересных и практически важных сведений для создания из него бактерийного препарата пробиотика - "Споробактерин жидкий" и определения его роли среди микроорганизмов рода Bacillus. Морфология Bac.subtilis 534 в зависимости от возраста культуры, состава и характера питательных сред, условий культивирования отличается непостоянством и разнообразием форм клеток (споры, стройные короткие и длинные палочки, нити - формы незавершенного деления, кокки).

В старых (10 суток и более) культурах, на плотных агаровых питательных средах Bac.subtilis 534 представлена в основном спорами. Зрелые споры имеют овальную форму размерами 0,8-1,0x0,7-0,9 мкм. Они не окрашиваются по Граму, слабо воспринимают окраску по Цилю-Ниль-сену и хорошо обнаруживаются в мазках лишь при окраске карболовым фуксином Циля с нагреванием. Для них характерны светопреломляющая способность и выраженная устойчивость к действию дезинфицирующих средств. Из изученных семи самых доступных и чаще применяемых средств, наиболее бактерицидными по отношению к спорам Bacxsubtilis 534 оказались - натрия гидроокись, но, к сожалению, в неприемлемых для практики концентрациях (10-20%), а также 3-20% растворы кислоты хлористоводородной (тест "проверки налопанье"), 3% раствор формальдегида и 3% щелочной раствор формальдегида, что совпадает с данными Л В. Николаевой (1972) и свидетельствует о том, что многие химические агенты не оказывают губительного действия на споры Bac.subtilis.

Стерилизация паром под давлением 0,1-0,15 МПа (121-127°С) в течение 30 минут надежно убивает споры Bac.subtilis 534.

Bac.subtilis 534 хорошо растет на многих плотных и жидких питательных средах при температуре от 15до50°С, оптимум роста 36-37°С. Прорастание спор на питательных средах происходит в течение первых 2-6 часов после посева.

При обильном посеве на плотные питательные среды Bac.subtilis 534 дает сплошной, пленочный морщинистый рост. В первые сутки пленка серо-белого цвета, а затем по мере перехода к спорообразованию культура приобретает розовый оттенок. Отдельные колонии на плотных средах чаще шероховатые с неровными изрезанными краями (R-форма) размером от 2 до 10 мм. Однако среди них могут быть и гладкие варианты (S-формы).

В молодых 15-24-часовых культурах на мясо-пептонном агаре (МПА), эритрит-агаре (ЭА) и др. плотных питательных средах вегетативные клетки Bac.subtilis 534 представляются стройными папочками размерами 2-6x0,7-0,9 мкм, и как правило, с хорошо выраженной подвижностью. Они легко положительно воспринимают окраску по Граму.

Образование спор в культурах на ЭА начинается через 20-25 часов роста микроорганизма и приобретает массовый характер через 48-72

часа. В процессе спорообразования протоплазма бактериальной клетки претерпевает глубокие изменения физико-химического характера и теряет способность окрашивания. Такие клетки просматриваются под микроскопом в виде теней с различными включениями. Одновременно морфология вегетативных клеток характеризуется полиморфизмом - появлением длинных палочек и даже нитей, порой превышающих в десятки раз размеры молодых клеток (формы незавершенного деления). В последующем на их основе образуется большое количество спор, равное числу неразделенных клеток.

Молодые споры Bac.subtilis 534 в 24-96-часовых культурах окрашиваются карболовым фуксином с нагреванием в виде точек без хорошей выраженности оболочек. Эта способность начинает проявляться у них только через пять суток.

На мясо-пептонном бульоне (МПБ) Bac.subtilis 534 в первые 1-2 суток образует на поверхности среды плотную, трудно разбивающуюся даже при сильном встряхивании пленку белого цвета. Образование пленки не было связано с процессом спорообразования, хотя на эту связь и указывают В.В.Смирнов и соавт. (1982). Этот процесс, в наших исследованиях, при наличии поверхностной пленки уже через одни сутки, начинал проявляться только через 40-48 часов с хорошей выраженностью через 72-96 часов и совпадал по времени с началом образования хлопьевидного осадка и легким разрушением поверхностной пленки при встряхивании.

У штамма установлена трансформация в кокковидную форму без выраженных свойств к спорообразованию, при культивировании его на жидких питательных средах в больших объемах в условиях дефицита кислорода. Подобное явление у ряда бактерий из рода Bacillus отмечают в своих исследованиях Р.С.Головачева (1967) и М.Н.Ротмистров и соавт. (1973).

У ревертантов из кокковидных форм на плотных питательных средах имели место колонии трех вариантов: слизистые (М-форма), напоминающие гроздья винограда, шероховатые с неровными краями (R-форма) и гладкие (S-форма). Ревертанты морфологически в мазках были представлены длинными, палочковидными бактериями, которые постоянно сохраняли повышенную способность к трансформации в кокковид-ные формы при посевах на МПБ в пробирках.

Учитывая данные литературы, касающиеся продуцирования бактериями рода Bacillus различных биологически активных веществ (антибиотики, ферменты, аминокислоты и др.) и оказывающих при этом положительный эффект на организм животных, мы сочли необходимым сосредоточить особое внимание на изучении этих показателей в отношении Bac.subtilis 534. В итоге, на основании известных и полученных данных, можно с уверенностью утверждать, что штамм Bac.subtilis 534 характеризуется широким спектром индуцибельных и конститутивных

как экстрацеллюпярных, так и внутриклеточных ферментов, обладающих протеолитическими, амилолитическими, целлюлозолитическими, пектолитическими, липолитическими и др. свойствами для обеспечения его существования в различных субстратах.

Мы выявили хорошо выраженную протеиназную активность изучаемого штамма по отношению к альбумину и казеину. Она обеспечивается, как минимум, двумя ферментами, один из которых активируется SH группами цистеина и глютатиона восстановленного. На возможность продуцирования одним и тем же штаммом аэробных бацилл нескольких протеаз указывают В. И.Полубинкас и соавт. (1979) и Е.М.Савицкайте и соавт. (1979). При этом протеазы готовят внеклеточный белок к усвоению бациллой.

Наличие у шт. Bac.subtilis 534 протеопитической активности подтверждено также на "пестром ряду" в отношении желатина и молока, а амипо-литической - крахмала. Для штамма характерны - образование ацетилме-тилкарбинола из глюкозы на среде Кларка, используемого ВАМирзоевой (1959) для дифференциации группы Bac.subtiiis - Bac.mesentericus от других видов бактерий рода Bacillus, и каталазообразующая способность.

Наряду с этим, у Bac.subtilis 534 отмечена ограниченная возможность в расщеплении Сахаров. Она хорошо выражена только к глюкозе и сахарозе с образованием кислоты без газа, что совпадает с данными Д.Бердже (1936), РАЦиона (1948), Дж.Хоулта (1980) и значительно уступает по количеству редуцируемых Сахаров отдельным штаммам Bac.subtilis, исследованным ВАМирзоевой (1959) и В.В.Смирновым и соавт. (1982). Свойство бациллы избирательно усваивать глюкозу и сахарозу с успехом можно использовать для усиления интенсивности роста микроба и накопления бактериальной массы, путем включения этих Сахаров в состав питательных сред.

Разнообразие у штамма Bac.subtilis 534 морфологических форм, отношения кокраске, характера роста на питательных средах свидетельствует о его диссоциации и рассматривается нами как изменчивость в пределах первоначально изолированной культуры, что согласуется сданными ВАМирзоевой (1959), изучавшей изменчивость Bac.subtilis как вида. В основе данного явления лежат прежде всего биологическая активность микроба и воздействие на него различных факторов при росте культуры.

2.3. Аминокислотный состав Bac.subtilis 534

Аминокислотный состав исследуемого штамма представлен широким набором известных аминокислот, который зависит от фазы развития популяции (табл. 2.3.1).

Доля незаменимых или частично незаменимых аминокислот для свиней (лизин, гистидин, аргинин, треонин, валин, метионин, фенилаланин, лейцин, изолейцин) составляла в среднем 49,1 % от всех выделенных ами-

Таблица 2.3.1

Относительное содержание аминокислот в бактериальных клетках Вас.эиЬШз 534 (в % к общему юличеству выделенных аминокислот)

Наименование аминокислот Возраст культур в сутках В среднем

1 3 7 10

Цистин+цистеин 29,5 16,7 16,3 4,6 16,3

Лизин+гистидин 8,8 9,3 8,8 2,3 7,6

Аргинин 2,9 2,7 2,7 2,3 2,7

Аспаргиновая кислота+серин 5,0 9,3 28,5 25,3 17,0

Треонин+глутоминовая 2,2 11,1 2,8 20,7 9,2

кислота

Алании 7,4 11,1 2,8 8,0 7,4

Тирозрн 14,7 11,1 9,2 5,8 10,2

Валин+метионин 5,9 9,3 2,4 6,9 6,1

Фениланин • .17,7 13,0 8,8 8,0 12,0

Лёйцин+изолейцин 5,9 6,4 '17,7 16,1 11,5

нокислот, входящих в состав микробной клетки Вас.эиЬШз 534. Кроме того, у штамма выявлена способность выделения лейцина и изолейцина в жидкую кулыуральную среду. Лучше всего это свойство было выражено у семи-и десятисуточных культур микроба. Однако этот очень важный для производства вопрос требует более глубокого изучения и уточнения.

Полученные данные дают основание считать, что Вас.зцМШз 534, обладая богатым набором конститутивных и адаптивных ферментов, способен синтезировать различные аминокислоты, в том числе незаменимые. На высокую активность аэробных бацилл в синтезе аминокислот, в том числе свободных, с последующей их экскрецией в окружающую среду, указывают многие авторы (ААПрозоров и соавт., 1975; Б.АМатвиенко и со-авт., 1976; М.ЕБекер, 1978; Р.Ротего е( а!., 1978 и др.).

.,, Участие Вас.зиЬШэ 534 в белковом питании организма животных в результате размножения, отмирания и переваривания в желудочно-кишечном тракте, а 'также экскреция им ферментов и части незаменимых аминокислот (лейцина и изолейцина) является, на наш взгляд, одним из основных слагаемых оптимальной обеспеченности организма хозяина пластическим материалом и улучшения его здоровья и продуктивности. Мы разделяем мнение ААКомарова и соавт. (1991) о том, что аминокислоты играют решающую роль в метаболизме белков и жиров, в синтезе гормонов, витаминов и в стимулировании иммуногенеза. Они необходимы для обеспечения нормальной деятельности всех систем организма.

2.4. Конструирование и апробация новых плотных питательных сред для культивирования Вае.яиЫШз 534.

Влияние рН среды на интенсивность ростамикроорганизма

Решение данной проблемы включало изыскание дешевых, доступных, высокоурожайных, способствующих быстрому спорообразованию, питательных сред для культивирования Вас.эиЬШэ 534, так как от этих свойств питательных сред напрямую зависит производство споробакте-рина жидкого для нужд животноводства. С этой целью испытано большое количество плотных питательных сред, лучшими из которых оказались среды, содержащие в своем составе картофель (табл. 2.4.1).

Таблица 2.4.1

Выход сырой бактериальной массы при культивировании Вас.5иЬШэ 534 на плотных питательных средах разного состава с рН 7,2, при температуре +37°С, в течение 24 часов

Номера питательных сред Количество пробирок в 2-х опытах Сырая бактериальная масса, г Процентов от контроля Р

1 6 0,298+0,007 100,0 -

2 11 0,374±0,038 125,5 < 0,95

3 11 0,432±0,033 145,0 > 0,999

4 11 0,431+0,023 144,6 > 0,999

5 11 0,421+0,008 141,3 > 0,999

6 11 0,384±0,015 128,8 > 0,999

7 11 0,568±0,076 190,6 > 0,999

8 11 0,612±0,039 205,4 > 0,999

9 11 0,703±0,049 235,9 > 0,999

10 11 0,679±0,055 227,8 > 0,999

11 11 0,572+0,020 191,9 > 0,999

12 11 0,344+0,022 115,4 < 0,95

13 11 0,388±0,027 130,2 > 0,99

14 11 0,194±0,026 65,1 -

Питательная среда 0,283+0,046 95.0 1, приготовленная из сухого ЭА, по рекомен-

дуемой прописи, использовалась в качестве контроля. Наиболее урожайными, как видно из таблицы 2, оказались среды № 7, 8, 9, 10 и 11, которые содержали в своем составе картофель - картофельный эритрит-агар (КЭА). Более низкая урожайность питательных сред № 4, 5 и 6

с крахмалом свидетельствует о том, что в картофеле помимо крахмала содержатся какие-то другие биологически активные вещества, ускоряющие рост Вас.зиЬШэ 534 в 2-2,4 раза по сравнению с контролем. Наряду с более высокой урожайностью культуры на КЭА, отмечена и ранняя споруляция. Образование спор на КЭА начиналось уже через 14-16 часов против 20-25 часов на средах без картофеля.

Кроме того, выявлена зависимость урожайности культуры Вас.эиЫШз 534 от рН КЭА при отсутствии подобной закономерности для ЭА. Так, при смещении рН среды, в кислую сторону, выход бактериальной массы увеличивался, а в щелочную - уменьшался. Показатель рН=6,0 для КЭА оказался оптимальным. Он обеспечивает повышение выхода бактериальной массы до 24% и хорошую плотность среды, что немаловажно при смыве культуры.

Экономическая эффективность от использования питательных сред, приготовленных по нашей технологии, составляет 5,7-9,6 рубля на 1 рубль затрат. Они отличаются от известных двумя основными свойствами -высокая урожайность культуры и раннее спорообразование. Первое из них дает возможность при незначительных затратах увеличить в 2 раза производство споробактерина, а второе - получить препарат с высокой устойчивостью (споровая форма) к воздействию неблагоприятных факторов и длительному сроку хранения.

2.5. Технология производства и контроль епоробшстершт жидкого

Изготовление и контроль биологического препарата "Споробакте-рин жидкий" осуществляется в соответствии с инструкцией от 15 октября 1991 г. и ТУ 10-07-042-92 от 31 июля 1992 г.

Технологическая схема производства предусматривает проведение работ в условиях строгой стерильности в три этапа: получение маточной культуры путем посева эталонного штамма на плотные питательные среды; смыв культуры и получение биомассы; разлив препарата по флаконам и его контроль.

Конечный продукт производства проходит контроль на подлинность, соответствие физическим свойствам (внешний вид, наличие и характер осадка, прозрачность и цветность), а также в обязательном порядке по четырем основным показателям: стерильность, безвредность, антагонистическая активность, в соответствии с Положением ВГНКИ ветпре-паратов, и количество живых бактерий в 1 см^ препарата.

Для контроля контаминации препарата используют следующие питательные среды: МЛА, среда Гаузе 2, Эндо, которые дают возможность контролировать отсутствие в посевах из препарата роста патогенных и условно-патогенных бактерий кишечной группы; среда Сабуро -

отсутствие роста грибов; среда с мочевиной - отсутствие роста бактерий из рода протея; солевой агар - отсутствие роста стафилококков, руководствуясь при этом характеристикой роста культур, описанной ГИСК им. Л.АТарасевича (Л.В.Григорьева, 1989). Контаминация препарата посторонними микроорганизмами не допускается.

Безвредность каждой серии споробактерина устанавливают пе-роральным его введением 5-ти мышам, массой 16-18 г, в дозе 1 млрд. микробных тел (0,1 см3/гол,). Препарат считается безвредным, если все мыши остаются живыми в течение пяти суток наблюдения.

Антагонистическую активность (специфичность) препарата определяют методом отсроченного антагонизма на подсушенной среде Гаузе №2 в отношении тест-штаммов Staureus "Никифоров", St.aureus 'Филиппов*, E.coli шт. 157, Candida albicans. Применяемые тест-штаммы должны находиться в S-формах, иметь типичные морфологические, серологические и ферментативные свойства. Bac.subtílis 534 из препарата должен давать задержку роста указанных тест-штаммов, в зонах не менее 10 мм.

Количество живых бактерий в 1 см3 препарата определяют классическим методом серийных разведений в 0,9% растворе натрия хлорида, или предложенным нами для этих целей методом центрифугирования взвеси микробов с последующим определением массы влажных бактерий с точностью до 0,001 г на аналитических весах. В 1 см3 препарата 'Споробакте-рин жидкий* должно содержаться в среднем 10,0+0 млрд. микробных тел. Уменьшение или увеличение концентрации микробных тел в препарате не снижает его качества и не может служить основанием для его выбраковки. Знание же концентрации микробных тел в отдельных сериях препарата необходимо для объективного дозирования, исходя из расчета 300-500 млн. микробных клеток на 1 кг массы тела животного.

Технология получения споробактерина жидкого является экологически чистой и безотходной. Получение препарата, при наличии необходимого оборудования, возможно как в условиях лабораторий, так и хозяйств.

2.6. Изучение свойств споробактерина

Одним из главных свойств в положительном влиянии Bac.subtílis 534 на организм является его способность к синтезу антибиотических веществ и антагонистического действия на многие виды патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Известно, что количество антибиотиков, продуцируемых спорооб-разующими аэробными бактериями рода Bacillus, приближается а настоящее время к 200, в т.ч. из различных штаммов Bac.subtilis их выделено и описано более 70 (В.В.Смирнов и соавт., 1982). Штамм Bac.subtílis 534 в этом отношении не является исключением. Из него в лаборатории культур-продуцентов антибиотиков Всесоюзного научно-исследователь-

ского института антибиотиков был выделен неидентифицированный пока антибиотик широкого спектра действия (В.И.Никитенко, 1985).

Нами, совместно с В.И.Никитенко, в опытах in vitro была выявлена антагонистическая активность споробактерина в отношении стафилококков, стрептококков, протея, кишечной палочки, сальмонелл, клебси-елл, шигелл, дрожжевых грибов и других условно-патогенных микроорганизмов, которые часто выступают в виде моно- или полиэтиологического факторов при многих патологиях, включая массовые желудочно-кишечные и респираторные болезни молодняка.

Наиболее чувствительными к препарату оказались стафилококки, стрептококки, протеи и кандидии с зонами задержки роста тест-культур 19,3-26,6 мм, при подсеве к Bac.subtilis 534 после её инкубации в течение 48 часов. В меньшей степени, но хорошо выраженный антагонизм (зоны задержки роста 9,5-15,4 мм) проявлялся в отношении эшерихий, сальмонелл, клебсиелл и шигелл. На более выраженный антагонизм Bac.subtilis 534 к группе патогенных кокков, по сравнению с патогенными энтеробак-териями, указывает также в своих исследованиях О.О.Федорова (1990).

Максимальные зоны задержки роста у большинства тест-штаммов отмечались при их подсеве к культуре Bac.subtilis 534 через 48 часов ее инкубации в термостате, что подтверждено более поздними исследованиями штамма из препарата в ГИСК им. ЛАТарасевича (Л.В.Григорьева, 1989). Подобная закономерность, на наш взгляд, связана с усиленным выделением в окружающую среду антибиотических веществ, совпадающим по времени с фазой ускоренного роста микроорганизма и относительно раннего спорообразования, что не противоречит исследованиям S.Lee et al. (1975), E.Katz, Y.Demein (1977) по этим вопросам.

Препарат "Споробактерин" при совместном культивировании с тест-штаммами в бульоне Кольбака по методике В.И.Никитенко (1986) подавлял рост 34 из 37 исследованных штаммов стафилококка, 11 из 12 штаммов стрептококка, 12 из 12 штаммов кишечной палочки, 7 из 8 штаммов дизентерийной папочки, 7 из 7 штаммов сальмонелл, 6 из 6 штаммов протея, 7 из 8 штаммов синегнойной палочки. Устойчивыми и менее чувствительными являлись, в основном, сапрофитирующие штаммы микроорганизмов.

Высокая лечебно-профилактическая эффективность споробактерина установлена в опытах на белых мышах при стафилококковой, сальмонел-лезной, колибактериозной и синегнойной экспериментальных инфекциях.

Результаты опытов показали, что внутрибрюшинное введение споробактерина в дозах 200 млн. микробных тел/гол. в течение 10 суток, предупреждало заболеваемость и гибель мышей от указанных инфекций с 89,0-100% до 22,2-30,0%, а при назначении препарата внутрь -несколько лучше: с 92,0-100,0 до 16,7-20,8%.

В механизме лечебно-профилактического действия перорального применения биологических препаратов-пробиотиков из живых бактерий рода Bacillus, включая Bac.subtilis 534, при многих инфекциях и воспалительных процессах наружной и внутренней локализации, повышения устойчивости к заболеваниям и продуктивности животных, на основании исчерпывающих и глубоко представленных данных литературы по этому вопросу (В.В.Смирнов и соавт., 1982, 1992, 1993; В.И.Никитенко и соавт. 1985, 1990, 1994), а также собственных исследований и наблюдений можно выделить два основных момента:

1. Локальное антагонистическое ингибирование бациллами при их активном размножении в желудочно-кишечном тракте патогенной и условно-патогенной микрофлоры, обеспечивающей развитие дисбактерио-за, а в отдельных случаях и возникновение инфекций, за счет продуцирования ими ряда биологически активных веществ.

Среди которых:

- антибиотики-полипептиды (у Bac.subtilis 534, как указано выше, неидентифицированной пока природы) с избирательным действием в отношении патогенной и условно-патогенной, как грампозитивной, так и грамнегативной микрофлоры, при" отсутствии антагонизма к нормальной аутофлоре, восстановление которой, в свою очередь, ведет к усилению антагонизма к возбудителям заболеваний, витаминообразования, регуляции водно-солевого обмена, иммуномодулирования и других процессов, играющих важную роль в поддержании естественной устойчивости организма на высоком уровне.

Одним из важных факторов в механизме действия споробактерина и биоспорина (пробиотик на основе Bac.subtilis и Bac.licheniformis) при лечении острых кишечных инфекций у людей (сальмонеллез, эшерихи-оз, дизентерия, пищевая токсикоинфекция, кампилобактериоз), поданным Н.М.Грачевой и соавт. (1994,1996), является их способность к нормализации микрофлоры кишечника с одновременной элиминацией сальмонелл, шигелл, протеев, стафилококков, грибов рода Candida.

В механизме избирательного антагонистического действия бактерий из рода Bacillus значительная роль, по данным О.О.Федоровой (1990), отводится способности бацилл снижать антилизоцимную и адгезивную активности патогенных энтеробактерий, определяющих перси-стирующие свойства этих микроорганизмов и их возможность к внутриклеточному паразитированию.

На стабильность количественного и качественного микробоценоза здоровых поросят при длительном (2 мес.) ежедневном назначении им споробактерина указывают и наши исследования (разд. 2.10);

- ферменты - протеазы, амилазы, липазы, целлюлазы, пектиназы и др., обогащающие своим составом желудочно-кишечный секрет и спо-

собствующие усилению процессов пищеварения,, антагонизма к патогенной микрофлоре, а также повышению эффективности использования корма за счет лучшей его переваримости и усвояемости (разд. 2.12) при положительном влиянии на состояние иммунной системы (иммуно-модуляция), сохранности и продуктивности животных;

- экзоцеллюлярные аминокислоты, в том числе незаменимые, факт наличия которых у Вас.эиЬШз 534 подтвержден нашими исследованиями в отношении лейцина и изолейцина (разд 2.3)

- антитоксические вещества, способствующие обезвреживанию микробных токсинов, определяющих степень патогенности многих болезнетворных микроорганизмов и являющихся одной из особенностей проявления инфекЦйбйного процесса. Антитоксическое действие препаратов из бацилл, по мнению авторов, связано с их способностью дезинтегрировать высокомолекулярные белки.

2. Иммуномодулирующая роль пробиотиков из бактерий рода Ва-сШиэ общего характера. Она связана прежде всего с явлением транслокации бацилл, составляющих основу препарата. Именно она выступает в роли стимулятора неспецифической устойчивости и активатора защитных реакций макроорганизма в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, а также патологических процессов, развившихся в органах и тканях при их воздействии. Процесс проникновения сапрофитных бактерий из желудочно-кишечного тракта в кровь и лимфу здоровых теплокровных определяется в настоящее время как новый, ранее неизвестный бактериальный защитный механизм макроорганизма (В.И.Никитенко, 1986; И.К.Никитенко и соавт., 1994).

Изучая влияние перорапьного применения эндобактерина (синоним и аналог споробактерина) на иммунный статус организма и паренхиматозные органы коров при маститах, В.В.Подберезный и Н.И.Пол-янцев (1994) установили активизацию в виде гиперплазии лимфоидной ткани с увеличением числа плазматических, гигантских клеток и макрофагов (явление бластной трансформации лимфоцитов) сначала локальной системы защиты в тонком кишечнике, а затем системного иммуногенеза во всех лимфоидных органах.

2.7. Технология применения споробактерина жидкого молодняку свиней

Решение поставленной задачи включало постановку в условиях хозяйств пяти серий опытов с использованием 4392 (26 групп) опытных и 2054 (15 групп) контрольных животных в возрасте 20-120 суток. При этом испытаны дозы препарата от 0,2 до 8 мл/гол. в зависимости от возраста животных по шести схемам его применения. Основными критериями оценки эффективности применения споробактерина являлись улучшение показателей сохранности и продуктивности животных.

Результаты исследований свидетельствуют о положительном влиянии споробактерина при даче с кормом на интенсивность роста и сохранность при оптимальных суточных дозах для поросят в возрасте 3060 суток - 0,3-0,5 мл; 61-90 суток - 0,7-1,5 мл; 91-120 суток - 1,5-3,0 мл/ гол., что составляет в среднем 300-500 млн. микробных тел на 1 кг массы тела. Дозы препарата 1,0 мл/гол. и более оказывают отрицательное действие на сохранность поросят в возрасте 30-60 суток, вызывая у них сильно выраженный дисбактериоз.

Эффективность применения препарата была наиболее высокой при его ежедневном и длительном назначении (2 мес. и более), что согласуется с данными Г.А.Сафонова и соавт. (1992) о важности постоянного присутствия пробиотиков в полости кишечника в значительных количествах. Ибо только тогда нивелируются вариации, связанные с кормлением и условиями содержания. Мы считаем, что этим самым создаются более благоприятные условия для перманентной и импульсивной орга-но-системной транслокации бацилл. А в этом - залог активации неспецифических факторов защиты в сроки персистенции бацилл, совпадающие по времени с максимально выраженной их биологической активностью в желудке и проксимальных участках кишечника в фазы прорастания спор и ускоренного (экспоненциального) роста.

Споробактерин уменьшает отход молодняка от желудочно-кишечных и легочных болезней полифакторной этиологии в 2-2,5 раза и повышает прирост массы тела животных в среднем на 15-30 % без дополнительных затрат на корма и содержание, а при даче поросятам-отъемы-шам обладает антистрессовым действием, сокращая период адаптации к новым условиям кормления и содержания.

2.8. Результаты применения споробактерина супоросным свиноматкам

Влияние споробактерина на качество рождаемого потомства, интенсивность его постнатального развития и сохранность изучали на двух опытных и одной контрольной группах свиноматок по 7 голов в каждой.

Исследованиями установлено, что ежедневное скармливание споробактерина в дозе 10 мл/гол. (100 млрд. микробных тел) супоросным свиноматкам за месяц до опороса, а затем до отъема от них поросят в возрасте 39 суток, способствует рождению более крупных поросят (1,33±0,05 против 1,17±0,03 кг, при Р>0,95), обладающих в последующий период жизни лучшим здоровьем и повышенной продуктивностью. Рассмотренная выше многогранность механизма действия споробактерина на организм связана, в данном случае, с положительным влиянием его на молочность свиноматок (41,7±2,55 против 32,9±1,59 кг, при Р>0,95), а также на рост и развитие потомства в эмбриональный и постэмбриональный периоды.

Особую значимость имеют опыты по изучению влияния споробак-терина на возникновение и проявление у поросят желудочно-кишечных болезней. Эти патологии, по нашему глубокому убеждению, вызываются ассоциативной кокковой и энтеробактериальной микрофлорой, без выраженной монопатогенности для лабораторных животных.

Высокие показатели заболеваемости (82,5±1,64%) и смертности (18,6±2,75%) от желудочно-кишечных болезней у поросят, полученных от свиноматок, которым споробактерин не назначали (контрольная группа), их снижение соответственно на 35,9 и 40,9% придаче споробактерина только свиноматйам (первая опытная группа) и на 71,9 и 46,8% при его назначении вначале беременным свиноматкам, а затем после отъема и поросятам в возрасте 40-120 дней по 0,5-1,5 мл/гол. (вторая опытная группа), наглядно убеждают в лечебно-профилактической эффективности препарата.

Следует отметить, что поросята опытных групп переболевали желудочно-кишечными болезнями в более легкой форме. Продолжительность болезни у них сокращалась до 3-4 суток против 5-7 у контрольных. За период опыта (120 дней) они имели, при достоверной разнице, более высокие показатели среднесуточного прироста массы тела -235,0±5,25 г у поросят первой, 253±5,44 г - второй опытных групп и 203,0±10,29 г - контрольной группы.

Наши данные о лучшей жизнеспособности более крупных поросят при рождений, позднее подтверждены исследованиями Н.Н.Шульги (1995), который установил выраженную зависимость сохранности подсосных поросят от массы их тела при рождении, без ее связи с количеством общего белка и иммуноглобулинов в сыворотке крови.

2.9. Влияние споробактерина на естественную устойчивость и иммунологическую реактивность организма животных

Перманентные исследования по изучению иммуномодулирующего действия споробактерина в отношении показателей неспецифической защиты организма свиней (количество эритроцитов и лейкоцитов, содержание гемоглобина илейкограмма, уровень общего белка и его фракций, фагоцитарная активность нейтрофилов, бактерицидная, бета-ли-тическая, комплементарная илизоцимная активности сыворотки крови) были проведены в две серии.

В первом опыте объектом исследований были поросята 2-месячного возраста в количестве 16 голов. Десять из них составили опытную группу, а шесть - контрольную. Поросята опытной группы получали ежедневно в течение последних 30 суток споробактерин жидкий в дозе 0,4 мл/гол.

Во втором эксперименте исследовали кровь и сыворотку крови от 23 голов опытной и 25 голов контрольной групп свиней (боровков) в возрасте 8-ми месяцев. Животные опытной группы длительное время (6

мес.) ежедневно получали препарат в дозах от 0,5 до 2,0 мл/гол. в зависимости от возраста. Результаты исследований показаны в таблице 2.9.1.

Иммунокоррегирующие свойства споробактерина, проявляющиеся увеличением в крови числа эритроцитов, содержания гемоглобина, общего белка, альбуминов, бета-, гамма-глобулинов, фагоцитарной активности нейтрофилов, БАС крови, комплементарной и бета-литической активностей при одновременном снижении количества лейкоцитов и лизо-цимной активности, рассматривается нами как процесс избирательного действия препарата в системе регуляции иммуноструктурного гомеостаза, направленный на нормализацию физиологических функций.

Отсутствие разницы в белковом составе сыворотки крови свиней опытной и контрольной групп в возрасте 8 месяцев, в отличие от 2-месячных поросят, свидетельствует, на наш взгляд, об иммуномодулирующей роли споробактерина в отношении слабовыраженных факторов неспецифической защиты организма. Так, у 2-месячных поросят в период становления синтеза белков это действие было максимальным, а у 8-месячных (взрослых) свиней, белковая картина которых, по данным АФ.Кузнецова (1981), МАСидорова (1987), В.М.Холода и ЛАКнязевой (1989) и др., характеризуется относительной стабильностью - минимальным.

Более высокие показатели количества лейкоцитов в крови свиней контрольных групп, а также относительного содержания всех глобулинов (57,5% против 54,7 в опыте) и лизоцима у 8-месячных свиней в контроле, очевидно, имеют адаптационно-компенсаторную направленность, так как произошло это на фоне снижения других клеточных и гуморальных защитных факторов. Наши результаты согласуются с данными О.В.Бухарина, Н.В.Васильева (1974) и Н.В.Курцева (1975) в том, что между титром лизоцима и числом лейкоцитов существует прямая зависимость, а активностью бета-лизина - обратная.

Иммуномодулирующий эффект споробактерина в отношении лей-кограммы находит свое выражение, как у 2-, так и 8-месячных свиней, в достоверном уменьшении у животных опытных групп количества мета-миелоцитоз, палочкоядерных и всех нейтрофилов при одновременном увеличении лимфоцитов за счет их малых форм.

Увеличение числа нейтрофилов со сдвигом ядра влево, с одновременной лимфопенией, как указывают В.Е.Чумаченко и В.В.Чумаченко (1991), свидетельствуют о стрессовом состоянии организма поросят.

Повышенное содержание в лейкограмме животных опытных групп малых лимфоцитов указывает на более совершенные иммуногенетиче-ские способности организма этих животных. То, что именно малым лимфоцитам принадлежит большая роль в иммуногенезе, показал в свое время Р.Вигпе1 (1959), и это стало общепризнанным.

Как положительное явление для повышения иммунобиологической защиты и сохранности поросят, рассматривают В.П.Урбан и соавт. (1992),

Таблица 2.9.1

Влияние споробактерина на показатели неспецифической защиты 2- и 8-месячных свиней

Показатели Животные 2-месячного возраста

Опыт Контроль Разница, % Р

Эритроциты, Т/л 4,64+0,08 4,14+0,14 12,1 >0,99

Гемоглобин, г/л 103,0+4,80 81,00±2,80 27,2 >0,99

Лейкоциты, Г/л 11,84±0,57 13,45±0,25 13,6 >0,95

Общий белок, г/л 60,00+0,82 45,20+0,73 32,7 >0,999

Альбумины, г/л 29,00+1,21 23,60± 1,67 22,9 >0,95

Альфа-глобулины, г/л 6,80+0,61 7,80±0,68 14,7 <0,95

Бета-глобулины, г/л 14,80+1,01 7,30+0,94 202,7 >0,99

Гамма-глобулины, г/л 9,40±0,61 6,50+0,94 44,6 >0,95

Процент фагоцитоза 55,20+1,00 47,00+1,68 17,4 >0,999

в том числе:

аттрация 24,60±1,64 22,70±1,12 8,3 <0,95

поглощение 15,80+1,27 12,00±0,75 31,7 >0,95

инактивация 14,80±0,85 12,30±0,67 20,3 >0,95

Показатели Животные 8-месячного возраста

Опыт Контроль Разница, % . Р

Эритроциты, Т/л 7,63±0,11 7,13+0,14 7,0 >0,99

Гемоглобин, г/л 107,0+3,20 90,00+3,80 18,9 >0,999

Лейкоциты, Г/л 16,90+0,80 17,40+0,70 2,9 <0,95

Общий белок, г/л 75,50±0,80 76,00+0,90 1,7 <0,95

Альбумины, г/л 34,20±0,90 3230+1,10 5,9 <0,95

Альфа-глобулины, г/л 9,40+0,80 10,90±0,70 13,8 <0,95

Бета-глобулины, г/л 10,80+0,70 11,80±0,90 8,5 <0,95

Гамма-глобулины, г/л • 21,10+1,00 21,00+0,90 0,5 <0,95

Процент фагоцитоза 57,90+0,95 54,10+0,78 7,0 >0,999

в том числе:

аттрация 15,00+0,73 16,80+0,64 10,8 <0,95

поглощение 25,50+0,81 22,50+0,39 13,3 >0,999

инактивация 17,40+0,82 14,80±0,59 17,6 >0,99

БАС крови, % 40,60+3,12 30,20+291 34,4 >0,95

Активность бета-лизинов, % 23,10+1,80 15,00+1,32 54,0 >0,999

Активность лизоцима, мкг/мл 3,70+0,28 6,60±0,67 44,0 >0,999

Комплементарная активность, % 37,30+4,63 21,80+3,06 71,1 >0,99

22

перераспределение лимфоцитов крови и коркового слоя тимуса в сторону малых форм под влиянием иммуностимулятора - хитозана.

Улучшение у поросят под влиянием споробактерина показателей красной крови имеет важное значение в профилактике алиментарной анемии, а структурные изменения лейкограммы свидетельствуют о его антистрессовом действии при их отъеме от маток.

Иммуномодулирующая роль споробактерина в схемах специфической профилактики болезней крупного рогатого скота изучалась в отношении слабоиммуногенных вакцин - гидроокисьалюминевой (ГОД) на основе экзотоксина против некробактериоза и из штамма Brucella abortus 16/4 против бруцеллеза). Для испытания ГОА вакцины использовали четыре группы коров по 6 голов в каждой, а из шт. B.abortus 16/4 - по четыре группы морских свинок и коров (многократно привитых вакциной из штамма 82) соответственно по 10 и 5 голов в каждой.

Результаты исследований показали, что иммунизация коров ГОА вакциной с одновременным парентеральным введением споробактерина (первая группа) способствовали увеличению у них через месяц показателей фагоцитарной активности, БАС крови и титра антител при статистически достоверной разнице. При введении коровам одной вакцины (вторая группа) выявлено достоверное повышение БАС крови, а инъекции одного споробактерина (третья группа) - лишь фагоцитарной активности. Показательно, что на этот раз, как и ранее у свиней, отмечено снижение лизо-цимной активности сыворотки крови под влиянием споробактерина.

Стимулирующее действие споробактерина на иммунологическую реактивность организма крупного рогатого скота подтверждено С.В.Лопатиным (1993) в условиях производства при совместном испытании препарата с ГОА вакциной против некробактериоза.

По результатам бактериологических исследований установлено, что иммунитет в первой группе морских свинок (штамм 16/4 без споробактерина) составил 80%, во второй (штамм 16/4 в сочетании с парентеральным введением споробактерина) - 100%, в третьей (штамм 82) - 75%. Контрольные животные заразились все. Также более выраженный иммунитет у 60% животных, по сравнению с другими группами 25 и 20%, был установлен в группе коров, которых иммунизировали вакциной из штамма B.abortus 16/4 совместно со споробактерином.

Проведенные экспериментальные исследования свидетельствуют о том, что споробактерин оказывает стимулирующее влияние на показатели неспецифического и специфического иммунитета и проявление иммуногенных свойств ГОА вакцины против некробактериоза и вакцины из штамма B.abortus 16/4 против бруцеллеза, что согласуется сданными многих авторов о наличии подобных свойств у других пробиотиков.

Обобщая результаты всех опытов по изучению влияния споробактерина на неспецифическую устойчивость и иммунологическую реак-

тивность животных, можно'уверено констатировать, что этот препарат обладаегярко выраженными, иммуномодулирующими свойствами, открывающими перспективы его широкого применения в животноводстве и ветеринарной практике и дальнейшего изучения в схемах специфической профилактики инфекционных болезней животных.

2.10. Влияние споробактерина на микрофлору желудочно-кишечного тракта здоровых поросят

Одним из важных этапов исследований явилось изучение влияния ; споробактерина на микрофлору кишечного тракта здоровых 4-месячных поросят. С этой целью проведено две серии опытов, в которых использовали перманентно две опытные и две контрольные группы животных по пять голов в каждой. Подсвинки опытных групп, к моменту исследований, в течение двух последних месяцев получали ежедневно с кормом споробакгерин в дозах 1,0-2,0 мл/гол. Животные контрольных групп препарат не получали. Результаты исследований по двум сериям опытов обобщены и представлены в таблице 2.10.1.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что споробакгерин при длительном пероральном применении не оказывает существенного влияния на количественный и качественный состав представителей индигенного микробоценоза здоровых поросят, за исключением аэробных бацилл, численность которых в 1 г фекалий была выше на 61,9% {Р>0,999) у животных опытных групп.

Наши исследования поэтому вопросу подтверждают данные В.И.Ни-китенко(1985), О.О.Федоровой (1990), В.В.Смирнова и соавт. (1992,1993),

Таблица 2.10.1

Численность микроорганизмов в 1 г фекалий 4-месячных поросят под влиянием споробактерина (десятичные логарифмы)

.. По данным М.АТимо-Группы микроорганизмов шко (1990) для свинеи Группы животных

опытная контрольная

Бактериоды 10,3±0,80 9,4±0,67 9,1+0,71

Бифидобактерии 9,0±0,50 8,5±0,59 8,7+0,48

Пептококки 9,8+0,30 8,5±0,56 8,1+0,54

Молочнокислые бактерии 9,9±0,40 9,0+0,55 8,8±0,42

Энтеробактерии 8,1 ±0,10 8,2±0,41 8,3±0,33

Стрептококки 7,9±1,00 7,3+0,31 8,0+0,55

Стафилококки 3,5+1,10 3,9+0,39 4,2+0,46

Аэробные бациллы 6,4±0,90 6,8±0,41 4,2+0,35

Дрожжи 4,2+0,10 4,4+0,33 4,8±0,36

24

Н.М.Грачевой и соавт. (1994), И.К.Никитенко и соавт. (1994), полученные . ими при изучении действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus, в т.ч. споробактерина, на микрофлору желудочно-кишечного тракта людей и других видов животных.

2.11. Роль споробактерина в лечении операционных ран и профилактике гнойно-хирургических инфекций

Хорошо выраженные у Bac.subtiiis 534 антибактериальная и проте-олитическая активности подвели нас к необходимости использования споробактерина для лечения операционных ран и профилактики гнойно-хирургических инфекций, профилактики послеродовых осложнений у коров, лечения быков-производителей и кобелей при баланопоститах.

Наружное применение споробактерина для лечения операционных ран, как выяснилось, ослабляет интенсивность выраженности раневого процесса, профилактирует возникновение гнойных инфекций, стимулирует регенерацию и эпителизацию, ускоряет, в среднем на 4 дня, их заживление и способствует дополнительному приросту массы тела.

Препарат профилактирует развитие послеродовых эндометритов, сокращает время выделения лохий и ускоряет восстановление полового цикла. При гнойных баланопоститах выздоровление всех быков опытной группы наступало через пять суток, а контрольной - лишь у 80% животных и то на седьмые сутки.

Экономическая эффективность при лечении споробактерином по-слекастрационных ран у хрячков, включая стоимость полученной продукции за 13 дней послекастрационного периода (в среднем 0,6 кг массы тела/гол.), составляет около 23 рублей прибыли на 1 рубль затрат.

Полученные данные по эффективности лечения споробактерином операционных ран и профилактики гнойно-хирургических инфекций, подтверждены результатами экспериментальных проверок при грыжесечениях у поросят и хирургическом Лечении овец, больных ценурозом, в условиях клиники кафедры ветёринарной хирургии Оренбургского СХИ с участием профессора П.П.Сундукова и доц. И.И.Логинова (январь-февраль 1990 г.), а также производственным опытом при кастрации 320 хрячков в возрасте 25-30 дней на свинокомплексе совхоза "Прогресс" Бугурусланского района (апрель 1991 г.).

2.12. Переваримость основных питательных веществ рациона свиней под влиянием споробактерина

Полученые данные по дополнительному приросту массы тела свиней при пероральном применении споробактерина, по сравнению с животными, не получавшими его, при одинаковом кормлении, явились основанием для изучения вопросов переваримости питательных веществ

рациона свиней под влиянием этого препарата. С этой целью проведено два балансовых опыта на трех- и двухмесячных боровках, результаты которых указывают на достоверное увеличение при назначении препарата коэффициентов переваримости в отношении сухого реществг соответственно опытам на 6,8 и 4,3%, золы - 16,9 и 43,5%, органического вещества - 7,6 и 3,8%, протеина - 9,5 и 7,7%, жира - 22,3 и 30,9% клетчатки - 62,9 и 37,7% и БЭВ на 3,7 и 2,2%. Одновременно у этих ж( животных отмечена и более высокая усвояемость азота.

Результаты по переваримости питательных веществ рационов \ балансу азота под влиянием споробактерина в наших опытах согласуются с данными КВ.Ездакова (1976), который добавлял в рацион свиней амипосубтилин и протосубтилин - микробные ферменты из Bac.subtilis Мы разделяем мнение автора о том, что ферменты микробного происхождения не являются стимуляторами. Они лишь дополняют ферменть желудочно-кишечного тракта, улучшая при этом переваримость корма ^ повышая продуктивность животных.

В основе механизма действия споробактерина, согласно нашим исследованиям, лежит высокая способность штамма Bac.subtilis 534, ка( основной составной части препарата, к продукции протеиназ при отсутствии вредного действия на нормальную микрофлору желудочно-кишечного тракта свиней. Кроме того, для Bac.subtilis, как отдельного видг микроорганизмов рода Bacillus, свойствен - конститутивный синтез кси-ланазы (H.Lyr, 1972), пектатлиазы (W.Kurowski, J.Dunleavy, 1976), а также амилаз (С. А Коновалов, 1972) при наличии в среде специфического субстрата - крахмала, декстринов, мальтозы, а они, как известно, постоянно имеются в желудочно-кишечном тракте свиней.

Проведенные исследования дают возможность судить о том, чтс применение споробактерина способствует несколько большему потреблению поросятами опытных групп корма и меньшему выделению иму кала и мочи. У них под влиянием препарата увеличивается переваримость основных питательных веществ рациона и усвоение азота, чтс находит свое выражение в положительном влиянии на интенсивность роста и сохранность животных.

2.13. Влияние споробактерина на показатели мясной продуктивности и химический состав мяса свиней

Многогранность положительного действия споробактерина на организм животных при его длительном ежедневном применении (6 мес.) и способствующего более интенсивному их росту и развитию, не оказывает, как установлено нашими исследованиями, отрицательного влияния на показатели мясной продуктивности и химический состав мяса свиней, а по некоторым из них даже превосходит контроль. Так, назна-

чение препарата достоверно увеличивает на 4,4% убойный выход и улучшает структуру туш, увеличивая содержание мышечной ткани и понижая долю сала (шпик) и костей при разнице соответственно - 9,6,10,4 и 7,2%, что совпадает с результатами исследования Н.В.Ездакова (1976) при испытании на свиньях амилосубтилина и протосубтилина.

По нашему мнению, длительное применение споробактерина, обладающего хорошо выраженными ферментативными, антагонистическими и антитоксическими свойствами к патогенной и условно-патогенной микрофлоре, обеспечивает функциональную защиту органов, имеющих прямое или косвенное отношение к системам иммунитета или пищеварения (легкие, печень, селезенка, желудок). А это ведет к достоверному снижению соответственно на 21,1,16,8,23,5 и 15,3% их относительной массы к массе тела при одновременном увеличении на 23,4% внутреннего жира.

Большинство показателей, характеризующих физические свойства и химический состав длиннейших мышц спины, сала и средних проб мяса (фарша) от свиней опытной и контрольной групп не имеют существенной разницы. И все же у особей опытной группы было больше жира в мышцах и фарше, но меньше в последнем влаги и золы.

Следовательно, повышение продуктивности животных (свиней) под влиянием споробактерина не сопровождается ухудшением качественных показателей мяса, а по убойному выходу, структуре туш (соотношение мышечной ткани и шпика), калорийности (более высокое содержание жира в мышцах и фарше) даже превосходит контроль.

2.14. Споробактерил как фактор управления эпизоотическим процессом при массовых желудочно-кишечных н респираторных болезнях свиней, повышения

их сохранности н продуктивности В свете современных взглядов и представлений нами рассмотрены вопросы этиологии массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят. Проверено лечебно-профилактическое действие при них, а также отработаны рациональные схемы использования препарата в системе оптимизации противоэпизоотических мероприятий.

Трудности диагностики и борьбы, массовость и большой экономический ущерб дают основание для пересмотра взгляда на природу этих эндогенных болезней, чаще признающихся специалистами как инфекционные, и возникающих под влиянием полиэтиологических факторов. В частности, при снижении естественной устойчивости организма молодняка под воздействием неблагоприятных факторов внешней среды, в нем формируются и проявляют патогенное действие различные ассоциации микроорганизмов из условно-патогенных и даже сапрофитных видов.

Наши лабораторные и эпизоотологические данные в полной мере согласуются с концепцией многих авторов по этому вопросу (В.П.Урбан и совт., 1984,1992; С.И.Джупина, 1988,1994; С.И.Прудников, 1995 и др.).

Широкое распространение факторно-инфекционных болезней молодняка, возбудители которых переживают в организме животных и проявляют свою патогенность только при определенных условиях, требует от ветеринарных специалистов особого понимания данных процессов и грамотных действий, направленных в основном не на борьбу с уже возникшими болезнями, а на их предупреждение. Такой методологический подход к вопросу оптимизации контроля за эпизоотическим процессом инфекционных болезней этой группы, заключается в ежедневном и длительном пероральном использовании нового пробиотика - споробактерина. Выявленная при этом биологическая активность препарата в отношении возбудителей массовых болезней поросят соответствует ранее установленной в эксперименте его специфической активности in vitro и in vivo ко многим видам патогенной и условно-патогенной микрофлоры.

■ Эффективность применения споробактерина жидкого в условиях производства на 11968 головах 30-120-дневных поросят в 1989-1992 годах показана в таблице 2.14.1.

Ежедневное назначение споробактерина с кормом в дозах 300-500 млн. м.к./кг значительно снижало интенсивность выраженности эпизоотического процесса массовых желудочно-кишечных и легочных болезней поросят. При этом уменьшались падеж, вынужденный убой и выбраковка животных соответственно в 2, 1,4 и 1,7 раза, а заболеваемость ими в 2-6 раз по сравнению с контролем. Поросята опытных групп активнее поедали корм, лучше росли и развивались. Они имели более высокие показатели среднесуточного прироста массы тела и сохранности. Весьма примечательно,,чтодоложительный эффект, который выразился в более интенсивном росте и лучшей устойчивости к легочным болезням, проявлялся не только во время назначения препарата, но и в отдаленные сроки.

. У свиней на откорме (4-8 мес.) применение споробактерина способствует снижению падежа в среднем на 14,7%, вынужденного убоя - на 17,5% и увеличению суточного прироста массы тела на 17,1%, при достоверной разнице для последнего случая (Р>0,95).

Искусственная регуляция споробактерином паразито-хозяинных отношений при массовых желудочно-кишечных и респираторных болезнях поросят полифакторной этиологии лежит, по нашему мнению, в основе оптимизации управления (контроля) эпизоотипическим процессом путем воздействия на популяцию возбудителя - первое звено эпизоотической цепи (биологическая инактивация источника возбудителя инфекции за счет хорошо выраженной антибактериальной активности препарата in vivo ко многим видам патогенных и условно-патогенных микроорганизмов) и по-

Таблица 2.14.1

Влияние споробакгерина на сохранность и прирост массы тела поросят в возрасте 30-120 суток

Показатели Годы В среднем за 1 год Разница с контро- Р

1989 1990 1991 1992 лем, %

Контро ль

Число животных 1033 1612 2343 392 1345 - -

Падеж, % 3,7 5,2 7,3 8,2 6,1 - -

Вынужденный убой, % 2,6 1,7 2,9 8,2 3,9 - -

Выбраковка, % 10,8 10,2 25,0 31,9 19,4 - -

Сохранность, % 82,9 82,9 64,8 51,7 70,6 - -

Среднесуточный прирост массы гела, г 173 200 149 126 162 - -

Опыт

Число животных 2928 4127 3595 1318 2992 - -

Падеж, % 2,1 2,6 2,1 5,5 3,1 -49,2 >0,98

Вынужденный убой, % 1,4 0,6 2,6 6,8 2,8 -28,2 >0,98

Выбраковка, % 4,2 9,2 16,1 16,9 11,6 -40,5 >0,95

Сохранность, % 92,3 87,6 79,2 70,8 82,5 16,9 >0,95

Среднесуточный при- 223 240 226 176 216 33,3 >0,99

рост массы тела, г

пуляцию хозяина - третье звено (повышение устойчивости восприимчивого организма к заболеваниям, и прежде всего путем иммуномодулиро-вания и активации факторов неспецифичесмой защиты).

Выявленные закономерности действия споробактерина на организма животных, экологическая чистота производства и применения препарата, высокая экономическая эффективность - 4-7, а при лечении ран - 23 рубля прибыли на 1 рубль затрат, открывают широкие перспективы его использования в животноводстве и ветеринарной практике.

З.ВЫВОД ы

1. Штамм 534 Bacillus subtilis по своим морфологическим, тинкто-риальным, культуральным, биохимическим и антибактериальным свойствам является типичным представителем аэробных спорообразую-щих бактерий этого вида из рода Bacillus. Для него характерны: полиморфизм, грампозитивность, спорообразование при доступе кислорода, изменчивость, неприхотливость к питательным средам, рост на

плотных средах в виде пленки или отдельных колоний (R-,S- и М-форм), ограниченная возможность в расщеплении углеводов (глюкоза и сахароза) и высокая способность к продукции биологически активных веществ (неидентифицированной антибиотик широкого спектра действия, разные ферменты, аминокислоты и др.) как in vitro, так и in vivo. Вместе с тем, все подмеченные варианты лежат в пределах изменчивости первоначально изолированной культуры.

2. Использование плотных питательных сред с добавлением картофеля для выращивания Bacillus subtilis 534 в процессе изготовления споробактерина, согласно ТУ 10-07-042-92, обладающих высокой урожайностью культуры и ее ранним спорообразованием, позволяет при незначительных затратах увеличить почти в два раза объем его производства.

3. Споробактерин в опытах in vitro обладает антагонистической активностью в отношении стафилококков, стрептококков, протея, синегнойной, дизентерийной, кишечной палочек, сальмонелл, клебсиелл, шигелл, дрожжевых грибов и других условно-патогенных микроорганизмов при отсутствии этого действия к сапрофитной микрофлоре организма. Он проявляет хорошую лечебно-профилактическую эффективность при стафилококковой, сальмонеллезной, колибактериозной и синегнойной экспериментальных инфекциях у белых мышей. При этом пероральное назначение препарата является более предпочтительным, чем внутрибрюшинное.

4. Механизм лечебно-профилактического действия споробактери-на при его назначении с кормом включает два основных момента: локальное антагонистическое ингибирование бациллой, при её размножении в желудочно-кишечном тракте, патогенной и условно-патогенной микрофлоры и иммуномодуляция общего характера, связанная прежде всего с явлением транслокации.

Иммуномодулирующая роль споробактерина находит свое выражение в увеличении в крови числа эритроцитов, содержания гемоглобина, общего белка, альбуминов, бета-, гамма-глобулинов, фагоцитарной активности нейтрофипов, БАС крови, комплементарной и бета-литиче-ской активностей, количества лимфоцитов, при одновременном снижении количества лейкоцитов, метамиелоцитов, палочкоядерных нейтрофипов и лизоцимной активности сыворотки крови.

5. Размножение Bacillus subtilis 534 в желудочно-кишечном тракте создает предпосылки для улучшения переваримости корма и обеспеченности организма пластическими материалами.

Улучшение переваримости под влиянием споробактерина касается сухого вещества, золы, органического вещества, протеина, жира, клетчатки и БЭВ.

6. Оптимальные пероральные суточные дозы споробактерина жидкого для свиней составляют в среднем 300-500 млн.микробных тел на 1 кг

массы тела. Препарат в дозе 1 млрд. микробных тел/кг и выше оказывает отрицательное действие на сохранность поросят в возрасте 30-60 суток. Наиболее высокая эффективность споробактерина проявляется при его ежедневном и длительном назначении (2 мес. и более).

7. Положительное действие споробактерина на организм свиней при его длительном внутреннем применении выражается: увеличением массы тела животных в среднем на 15-30%; уменьшением в 2-6 раз заболеваемости и в 2-2.5 раза отхода молодняка от массовых желудочно-кишечных и легочных болезней полифакторной этиологии; повышением молочности свиноматок и получением от них более крупных поросят при рождении, обладающих лучшим здоровьем и продуктивностью. Он проявляет у поросят-сосунов антианемическое, а поросят-отъемышей -антистрессовое действия. Повышенные интенсивность роста и устойчивость животных к легочным болезням отмечаются не только в период назначения препарата, но и в отдаленные сроки.

8. Парентеральное (подкожное) введение споробактерина оказывает стимулирующее влияние на показатели неспецифического и специфического иммунитета, а таюке проявление иммуногенных свойств ГОА вакцины против некробактерйоза и вакцины из штамма Brucella abortus 16/4 против бруцеллеза крупного рогатого скота.

Наружное применение препарата сокращает на 2-4 дня сроки заживления операционных ран и дефектов при баланопоститах, профи-лактируя при этом возникновение гнойных инфекций.

9. Длительное (6 мес.) ежедневное применение споробактерина не изменяет качественные показатели мясной продуктивности и химический состав мяса свиней, а по убойному выходу и калорийности даже превосходит контроль.

Препарат обеспечивает функциональную защиту органов, имеющих прямое или косвенное отношение к системам иммунитета и пищеварения.

10. Массовые желудочно-кишечные илегочные болезни поросят воб-следованных хозяйствах носят инфекционный характер полифакторной этиологии с проявлением инфекционного и эпизоотического процессов.

Искусственная регуляция споробактерином паразито-хозяинных отношений при этих болезнях лежит в основе оптимизации управления (контроля) эпизоотическим процессом, путем комплексного воздействия на первое и третье звенья эпизоотической цепи (популяции возбудителя и хозяина).

11. Широкие производственные испытания споробактерина жидкого в 1989-1992 годах показали его положительную роль в снижении интенсивности выраженности эпизоотического процесса массовых болезней свиней полифакторной этиологии и в повышении продуктивности животных.

Экономическая эффективность от применения препарата составляет 4-7, а при лечении ран 23 рубля прибыли на 1 рубль затрат.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Научные разработки вошли в следующие утвержденные нормативно-технические документы:

1. Инструкция по изготовлению и контролю биологического препарата "Споробактерин жидкий" (протокол №1 Ученого совета Оренбургского СХИ от 15.10.1991 г.).

2. ТУ 10-07-042-92 -//- "Споробактерин жидкий". Утв. ГУВ МСХ РФ 31.08.92 г.

3. Временное наставление по применению споробактерина жидкого № 22-4/70. Утв. ГУВ МСХ РФ 31.08.1992 г.

4. Временное наставление по применению споробактерина сухого для лечения собак № 19-4-2/78. Утв. ДВ МСХ РФ 27.04.1994 г.

5. Способ заживления операционных ран и профилактики гнойно-хирургических инфекций у свиней. Авторское свид. СССР № 1824193 от 12.10.1992.

6. Способ повышения продуктивности и сохранности поросят в возрасте 30-120 дней. Авторское свид. СССР № 1824194 от 12.10.1992.

Экологическая чистота и простота производства споробактерина жидкого, высокая экономическая эффективность его применения позволяют рекомендовать препарат для: оптимизации системы противоэпизоотиче-ских мероприятий при массовых желудочно-кишечных и легочных болезнях поросят полифакторной этиологии," снижения отхода молодняка и повышения его продуктивности; сокращения затрат и сроков лечения операционных ран, баланопоститов и других воспалительных процессов наружной и внутренней локализации; профилактики гнойно-хирургической инфекции, послеродовых осложнений у самок и массовых болезней молодняка, включая алиментарную анемию и стрессовые состояния; получения от свиноматок более крупного приплода и увеличения их молочности.

Желаемый результат достигается длительным (2 мес. и более) ежедневным пероральным назначением препарата в дозах для поросят в возрасте 30-60 суток - 0,3-0,5 мл, 61-90 суток - 0,7-1,5 мл, 91-120 суток-1,5-3,0 мл/гол. Дозы споробактерина для взрослых животных определяются из расчета 300-500 млн. микробных тел на 1 кг массы тела.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Жданов П.И., Лепский А.И. Опыт применения медицинского препарата "Споробактерин" в свиноводстве // Новые фармакологические средства в ветеринарии: Тез. докл. к 2-ой межвузовской науч.-практ. конф. - Ленинград, 1990. - С. 48-49.

2. Кленов В А, Жданов П. И., Авдеев АН. Применение биологического препарата в профилактике эндометритов у коров // Повышение продуктивности сельскохозяйственных животных и совершенствование

мер борьбы с болезнями в условиях интенсивного ведения животноводства и создания фермерских хозяйств: Тез. докл. на Всесоюзной науч. конф., посвященной 140-летию Харьковского зооветеринарного ин-та им. Н.М.Борисенко. - Харьков, 1991. - С. 88.

3. Жданов П.И. Влияние споробактерина на интенсивность проявления эпизоотического процесса при массовых желудочно-кишечных и респираторных болезнях поросят // Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями животных: Сб. науч. тр. / РАСХН. Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 1992. - С. 135-144.

4. Жданов П.И., Никитенко В.И. Лечебно-профилактическая активность споробактерина жидкого при экспериментальных бактериальных инфекциях // Новые фармакологические средства в ветеринарии: Тез. докл. к 5-ой межгосударственной межвузовской научно-практической конф. - Санкт-Петербург, 1993. - С. 13-14.

5. Жданов П.И. Антибактериальная активность споробактерина жидкого// Там же. - С.71.

6. Жданов П.И. Изучение морфологических и культуральных свойств шт. Бациллюс субтилис 534 // Пути увеличения производства и резервы повышения качества сельскохозяйственной продукции: Тез. докл. XII науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов (экономика, механизация, агрономия, ветеринария). - Оренбург, 1993. -С. 134-135.

7. Жданов П.И., Лариончев В.М. Изучение биохимических свойств шт. Бациллюс субтилис 534 // Там же. - С. 136-137.

8. Использование споробактерина в качестве иммуномодулятора в схемах специфической профилактики инфекционных болезней / Димов С.К., Самоловов А.А, Лопатин C.B., Жданов П.И. //Эпизоотология, профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями животных: Сб. науч. тр. / РАСХН. Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 1993. - С. 86-90.

9. Жданов П.И. Аминокислотный состав шт. Бациллюс субтилис 534 //Пути увеличения производства и резервы повышения качества сельскохозяйственной продукции: Тез. докл. ХП науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов (животноводство). - Оренбург, 1993. - С. 163-164.

Ю.Применение споробактерина для лечения гнойного бапанопостита / Незнаев И.Н., Кленов В.А., Жданов П.И., Стребулаев Г.Н. // Резервы увеличения производства и повышения качества сельскохозяйственной продукции: Тез. докл. ХШ региональной науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов, посвященной 60-летию Оренбургской области и 250-летию Оренбургской губернии .- Оренбург, 1994.- С. 294-296.

11.Кажаев Н.М., Жданов П.И. Опыт применения споробактерина на супоросных свиноматках // Там же. - С. 296-298.

12. Избасов Е.Б. Жданов П.И. Споробактерин как средство лечения операционных ран и профилактики гнойно-хирургических инфекций у свиней II Там же. - С. 298-300.

13.Жданов П.И., Сечин В.А Влияние споробактерина на показатели мясной продуктивности свиней // Там же. - С. 301-302.

14.Жданов П.И. Применеие нового пробиотика из рода Бациллгас в ветеринарной практике Н Новые фармакологические средства в ветеринарии: Тез. докл. к 6-й межгосударственной межвузовской науч,-лракт. конф. - Санкт-Петербург, 1994. - С. 111.

15.Жданов П.И., Сечин В.А. Влияние споробактерина на биохимический состав мяса свиней // Там же. - С. 112.

16.Жданов П.И. Коррекция споробактерином постотьемных стрессовых состояний и интенсивности проявления эпизоотического процесса при массовых желудочно-кишечных и респираторных болезнях поросят полифакторной этиологии//Проблемы моделирования патологических процессов у человека и животных; иммунодефициты их диагностика и коррекция / Международный симпозиум (12-16 сентября 1994 г.)-Санкт-Петербург. - С. 18.

17.Жданов П.И. Применение споробактерина жидкого поросятам // Ветеринария. - 1994. - № 7. - С. 41-43.

18.Жданов П.И. Применение споробактерина для повышения сохранности и продуктивности свиней // Ветеринария. 1994. -№11.- С.36-40.

1 Э.Жданов П.И. Показатели естественной резистентности свиней при длительном применении споробактерина // Актуальные проблемы ветеринарии / Мат: Междунар. конф. (26-30 июня 1995 г.). - Барнаул. -С. 137-138.

20.Жданов П.И., Никитенко В.И. Влияние споробактерина жидкбго на развитие бактериальных экспериментальных инфекций у белых мышей // Методология мероприятий по профилактике и ликвидации болезней сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. / РАСХН. Сиб. отд-ние ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 1995. - С.264-266.

21.Жданов П.И. Протеиназная активность штамма Бациллюс субтилис 534 // Там же. - С. 267-268.

22. Ас. 1824193 СССР, МКИ А61 К 35/74. Способ заживления операционных ран и профилактики гнойно-хирургических инфекций у свиней / Жданов П.И., Никитенко В.И., Храмов Ю.В., Лепский АИ. Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР 12.10.1992 г.

23.Ас. 1824194 СССР, МКИ А61 К 35/74. Способ повышения продуктивности и сохранности поросят в возрасте 30-120 дней / Жданов П.И., Никитенко В.И., Лепский АИ. Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР 12.10.1992 г.