Биологические свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О и Азия-1

Жильцова, Милена Владимировна

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Биологические свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О и Азия-1

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Жильцова, Милена Владимировна Владимир 2008 г.

Ученая степень: кандидата ветеринарных наук

ВАК РФ: 16.00.03

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Биологические свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О и Азия-1

■"" На правах рукописи

□□345 1825 ЖИЛЬЦОВА Милена Владимировна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЭПИЗООТИЧЕСКИХ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА ЯЩУРА ТИПОВ А, О И АЗИЯ-1

16.00.03 «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология»

АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени

Владимир - 2008

003451825

Работа выполнена в федеральном государственном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных», г. Владимир

Научный руководитель:

кандидат ветеринарных наук, КРЕМЕНЧУГСКАЯ Светлана Ревдитовна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор

ЕРЕМЕЦ Владимир Иванович

доктор ветеринарных наук, профессор БАЙБИКОВ Тауфик Закарьевич

Ведущая организация

ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ», г. Москва)

Защита диссертации состоится «18» ноября 2008 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 220.015.01 при ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» по адресу: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец, ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных».

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных».

Автореферат разослан «15» октября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук,

старший научный сотрудник

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Ящур относится к числу наиболее опасных инфекционных болезней, способных быстро распространяться на огромные территории, наносящих животноводству значительный экономический ущерб. При ящуре в молочном и мясном животноводстве доходы могут снижаться на 35-40%. Кроме того, значительный урон наносит гибель молодняка животных (A.A. Бойко, Б.А. Крутиков 1994; A.A. Гусев и др., 2001; В.М. Захаров и др., 2002). Высокая контагиозность болезни, широкий спектр восприимчивых животных, множество иммунологических типов и подтипов возбудителя, разнообразие путей его выделения и распространения, способность длительное время сохраняться как во внешней среде, так и в организме животных, создают трудности в ликвидации этой болезни и требуют больших финансовых затрат. Карантинные меры по ликвидации ящура нарушают нормальную хозяйственно-экономическую деятельность сельскохозяйственных и перерабатывающих предприятий, затрагивают общественные, экономические и межгосударственные связи (В.М. Авилов, 1997; В.М. Захаров и др., 2003).

Широкое распространение ящура, равно как и сложности, возникающие при диагностике и подборе вакцинных штаммов, обусловлено высокой мутационной изменчивостью генома и антигенным разнообразием вируса ящура (В. Л. Узюмов, 1970; Е. Domingo et al., 2003).

Определенные участки капсидных белков вириона, образующих антигенные детерминанты, отличаются значительной вариабельностью. Это свойство позволяет вирусу связываться с рецепторами новых типов клеток. Такой механизм обеспечивает быструю адаптацию вируса ящура (ВЯ) в различных условиях и позволяет ему развиваться на широком круге хозяев (A.B. Щербаков, 1996; Т. Fomina, et al., 2001; P.W. Mason et al., 2003; F. Brown, 2003). Эта способность вируса к антигенной вариабельности используется в эпизоотологических исследованиях для его характеристики и

определения происхождения эпизоотического изолята (R.P. Kitching et al., 1998; В.Н. Данилюк, 1994).

Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого штамма, могут варьировать от незначительных до существенных. Существенные изменения антигенных характеристик природного штамма создают сложности при проведении вакцинации, поскольку вакцина, приготовленная из гетерологичного штамма не всегда способна обеспечивать должный уровень защиты. (A.C. Яковлева и др., 2006; A.B. Щербаков и др., 2005; A.M. Рахманов и др., 1995; A.R. Samuel et al., 1990). Одной из важнейших составляющих решения этой проблемы является всестороннее изучение вновь выделяемых изолятов вируса ящура и сравнение их с ранее выделенными и производственными штаммами.

В связи с этим, было необходимо провести сравнение эпизоотических изолятов с производственными штаммами, используемыми при производстве противоящурных вакцин, а также изучение иммунобиологических свойств выделенных изолятов и лабораторных штаммов вируса ящура типов А, О, и Азия-1.

Цель и задачи научных исследований. Целью наших исследований было изучение биологических свойств лабораторных штаммов и эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О, и Азия-1, выделенных в процессе возникновения эпизоотий в различных регионах, а также сравнение эпизоотических изолятов с производственными штаммами, используемыми при изготовлении противоящурных вакцин.

В соответствии с этим необходимо было решить следующие задачи:

1. Оптимизировать методику постановки реакции микронейтрализации (РМН) для определения антигенного соответствия между производственными штаммами вируса ящура и эпизоотическими изолятами.

2. Создать банк сывороток крови вакцинированных животных, содержащих антитела к производственным штаммам вируса ящура, для

использования в РМН при определении антигенного соответствия эпизоотических изолятов производственным штаммам.

3. Изучить способность к репродукции в различных клеточных культурах изолятов и штаммов ВЯ типов А, О и Азия-1 и их бляшкообразующие свойства, а также чувствительность лабораторных и естественно-восприимчивых животных к эпизоотическим изолятам ВЯ типов А, О и Азия-1.

4. Определить в РМН антигенное соответствие эпизоотических изолятов вируса ящура, выделенных в различных регионах, производственным штаммам.

5. Установить двустороннее антигенное родство различных штаммов вируса ящура типов А и Азия-1 в реакции связывания комплемента (РСК).

Научная новизна заключается в широком изучении иммунобиологических свойств различных лабораторных штаммов и эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О и Азия-1.

• Изучена способность к репродукции в различных клеточных линиях и бляшкообразующая способность 10 лабораторных штаммов и 18 эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О и Азия-1, полученных из различных регионов с 2005 по 2007гг.

• Определена чувствительность лабораторных и естественно-восприимчивых животных к заражению изолятами вируса ящура типов А, О, и Азия-1, полученными из различных регионов с 2005 по 2007гг.

• Изучено двустороннее антигенное родство вируса ящура типов А и Азия-1, выделенных в различных регионах с 2005 по 2007гг.

• Оптимизирована методика постановки РМН для определения антигенного соответствия производственных штаммов эпизоотическим изолятам вируса ящура.

• Определено антигенное соответствие в РМН эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О, Азия-1 и производственных штаммов вируса, используемых-при изготовлении противоящурных вакцин.

Практическое значение работы. На основании проведенных экспериментальных исследований определено антигенное соответствие эпизоотических изолятов, выделенных с 2005 по 2007 гг. в различных регионах, производственным штаммам вируса ящура типов А, О и Азия-1.

Штамм вируса ящура типа Азия-1 №1987/Амурский/2005 после изучения иммунобиологических свойств был депонирован 16 мая 2006 г. во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ «ВГНКИ»).

Материалы диссертационной работы использованы при составлении заявки № 2007112591/13(013661) от 04.04.2007 г. на выдачу патента РФ на изобретение «Штамм "Амурский" №1987 вируса ящура типа Азия-1 для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики ящура типа Азия-1, диагностики, контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин».

Создан банк сывороток крови КРС, иммунизированного моновалентными противоящурными вакцинами против типов В Я А, О, Азия-1, для определения антигенного соответствия эпизоотических изолятов производственным штаммам вируса ящура в РМН.

На основании проведенной работы разработаны и внедрены в производственную практику «Методические указания по определению антигенного соответствия между производственными штаммами вируса ящура и эпизоотическими изолятами в реакции микронейтрализации», одобренные ученым советом и утвержденные директором ФГУ «ВНИИЗЖ» (08.02.2008).

Апробация работы. Основные положения. диссертации были доложены на Международной научной конференции, посвященной 45-летию ФГУ «ВНИИЗЖ», на конференции молодых ученых, посвященной проблемам мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных (Владимир, 24-26 марта 2004 г.), на конкурсе научных работ молодых ученых ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»

(ФГУ «ВНИИЗЖ»), (Владимир, 2008г.) а так же на заседаниях ученого совета в ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ»), (г. Владимир, в 2003-2007 гг.).

Публикации результатов. По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, 4 из которых - в изданиях, входящих в перечень ВАК РФ.

Основные положения, выносимые на защиту

- характеристика репродуктивных и бляшкообразующих свойств эпизоотических изолятов и лабораторных штаммов вируса ящура типов А, О и Азия-1;

- особенности репродукции эпизоотических изолятов вируса ящура типа А, О, Азия-1 на естественно-восприимчивых и лабораторных животных;

- результаты определения антигенного соответствия эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О и Азия-1 вакцинным штаммам в реакции микронейтрализаци;

- результаты установления двустороннего антигенного родства эпизоотических изолятов вируса ящура в реакции связывания комплемента.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 142 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Список литературы включает 189 источников, из них 124 отечественных и 65 иностранных. Работа иллюстрирована 27 таблицами и 7 рисунками.

Личный вклад. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы работы по проведению ПЦР, секвенированию эпизоотических изолятов и определению наличия антител к неструктурному полипептиду ЗА в сыворотках крови экспериментально зараженных животных проводились совместно с к.б.н. A.B. Щербаковым. Опыты на КРС, MPC и свиньях были проведены совместно с сотрудниками лаборатории «Биотехнологии» и руководителем отдела биологического и технологического контроля д.в.н. В.И. Диевым.

Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю к.в.н. Кременчугской С.Р. за помощь при выполнении и оформлении диссертационной работы, а также сотрудникам лабораторий «Ящура и везикулярных болезней», «Биотехнологии», «Диагностики особо опасных болезней животных», Отделу биологического и технологического контроля и научной библиотеке за поддержку, практическую помощь и методические советы при выполнении и оформлении диссертации.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Материалы и методы Эпизоотические изоляты и штаммы вируса ящура. В работе использовали штаммы и изоляты вируса ящура следующих типов:

Вирус ящура типа О: О! №194 /афтозный; О) №194 /овечий; О] №194 /мышиный. О, №1618 /лапинизированный; О Тайвань 3/97; О Индия 53/79; О, Маниса; О №1685 /Московский/1995; О №1734 /Приморский/2000; О №1759 /Монголия/2001; О Казахстан/2007; О Киргизия 1/2007; О Киргизия 2/2007; О Нагорный Карабах/2007;

Вирус ящура типа А: А22 №550/Азербайджан/64; А №1707/Армения/98, лабораторные варианты А22 №550/11 и А22 №550/4-10; А22 №550 овечий; А Ирак 24/64; А /Турция/726/2006; А /Турция/738/2006; А /Турция/969/2006; А /Турция/957/2006; А Иран 4/05; А Иран 5/05; ■

Вирус ящура типа Азия-1: Азия-1 №1987/Амурский/2005; Азия-1 №1991/Монголия/2005; Азия-1 №1994/Приморский/2005; Азия-1 №2002/4итинский/2006; Азия-1 №2003 Читинский/2006; Азия-1 Шамир 3/89.

Специфические противоящурные сыворотки крови КРС. В работе использовали сыворотки крови КРС, отобранные у животных через 21-28 сут после вакцинации моновалентными вакцинами против ВЯ типа А22 №550; А22 Ирак 24/64; О №1734; Азия-1 Шамир 3/89, а также сыворотки крови КРС, полученные после вакцинации трехвалентной вакциной А, О №1618, Азия-1.

Культуры клеток. В работе использовали следующие культуры клеток (КК): СП, IB-RS-2, ПСГК-30, ПТ, ПК, MDBK, КГ-91, ВНК-21, КСТ, RSK, Taurus и СПЭВ.

Питательные среды и солевые растворы. В опытах были использованы среды и растворы: Игла, 199, ПСС, ПСП, ГЛА на растворе Эрла, ГЛА на растворе Хенкса, ГЛА на растворе Эрла с двойным набором солей, 0,25% раствор трипсина и 0,02% раствор версена, фосфатно-буферный раствор (ФБР) 1/15 М.

Животные. Опыты проводились на морских свинках, массой 300-400 г, крупном рогатом скоте в возрасте 18-24 мес, разновозрастных козах, овцах трехлетнего возраста и поросятах массой не менее 40 кг в возрасте 5-6 мес.

Подготовка афтозной суспензии. Афтозный патматериал измельчали и готовили 10% и 33% суспензии на ФБР и экстрагировали при комнатной температуре в течение 40 мин. После этого суспензию подвергали замораживанию с последующим оттаиванием. Затем её очищали добавлением хлороформа, 8-10% от общего объема и подвергали центрифугированию при 3000 об/мин в течение 15-20 мин.

Внрусовыделение и репродукция вируса ящура в монослойных клеточных культурах. Культивирование вируса проводили в стеклянных и пластиковых сосудах (матрасах) емкостью 50 и 1500 мл с полностью сформированным монослоем. Инкубировали инфицированную клеточную культуру при температуре 37 °С до дегенерации 80-100% клеток монослоя, но не более 120 часов.

Реакция микронейтрализации (РМН). С помощью реакции микронейтрализации определяли титры противоящурных антител, в сыворотках крови животных, а также антигенное соответствие эпизоотических изолятов вакцинным штаммам. Реакцию ставили на планшетах фирмы «Costar» микрометодом с использованием КК IB-RS-2 согласно «Методике выявления антител к вирусам ящура и везикулярных болезней в реакции нейрализации на микропанелях», утвержденной

директором ВНИИЗЖ в 1996 г. Для определения показателя п (антигенное соответствие) использовали «Методические указания по определению антигенного соответствия между производственными штаммами вируса ящура и эпизоотическими изолятами в реакции микронейтрализации» (2007г.).

Иммуноферментный анализ (ИФА). Титры специфических противоящурных антител в сыворотках крови животных определяли в непрямом жидкофазном блокирующем варианте ИФА согласно «Наставлению по применению набора для определения противоящурных антител в сыворотках крови сельскохозяйственных животных в ИФА» утвержденному руководителем Департамента ветеринарии Минсельхоза России (2004 г.).

Определение инфекционной аетнвности вируса. Титрование ВЯ осуществляли на высокочувствительных первичных и перевиваемых клеточных культурах СП, КСТ, 1В-Я5-2, а также на естественно-восприимчивых и лабораторных животных по общепринятым методикам.

Определение титра инфекционной активности вируса ящура методом бляшек под агаровым покрытием. Применяли КК свиного происхождения (КСТ, ПСГК-30 и 1В-Я8-2). Использовали по 4 флакона емкостью 50 мл с клеточной культурой на одно разведение, куда вносили по 0,1 мл вирусной суспензии и помещали в термостат при температуре 37°С на 1 час. Затем во флаконы вносили по 10 мл агаровой среды-покрытия и инкубировали монослоем вверх при температуре 37 °С в течение 72 часов. Подсчитывали количество образовавшихся негативных колоний, видимых на окрашенном кристаллвиолетом монослое в виде обесцвеченных фокусов.

Определение титра инфекционной активности вируса микрометодом. Определение титра инфекционности вируса в вируссодержащем материале проводили микрометодом в культурапьных 96-луночных планшетах в КК 1В-118-2. Разведения вируса добавляли в лунки культурального планшета, с предварительно внесенной средой Игла с антибиотиками (50 ц1). Затем во все лунки вносили по 50 клеточной

суспензии с концентрацией 0,8-1,0><106'0 кл/мл. Планшет инкубировали при температуре 37°С и 5% С02 в течение 48 ч. Титр вируса выражали в ТЦЦ30/50р1.

Определение титра инфекционной активности вируса ящура в КК СП. Проводили на пенициллиновых флаконах с полностью сформировавшимся монослоем КК ' СП. Последовательные десятикратные разведения вируссодёржащего материала вносили по 1,0 мл в пенициллиновые флаконы с клеточной культурой и помещали в термостат при температуре 37 °С для инкубации в течение 72 ч. Титр вируса выражали в ^ ТЦД5о/мл.

Определение титра инфекционной активности вируса ящура на морских свинках. При титровании афтозного вируса на морских свинках готовили десятикратные разведения на ФБР. На каждое разведение использовали по 4-5 морских свинок. Вирусную суспензию вводили в объеме 0,1 мл в правую заднюю лапку интраплантарно методом туннелирования. Генерализацией инфекционного процесса считали наличие афт хотя бы на одной из 3-х конечностей, в которые вирус не вводили.

Определение титра инфекционной активности вируса ящура по методу Гендерсона. Инфекционность вируса ящура по методу Гендерсона определяли на КРС. Клинически здоровым неиммунным животным в возрасте 16-18 мес. в слизистую оболочку языка вводили последовательные десятикратные разведения вируссодержащего материала на ФБР - в 5 точек по 0,1 мл. Учет титрования проводили через 24 часа. Титр инфекционной активности вируса рассчитывали по методу Кербера и выражали в ^ ИД5О/0,1мл.

Получение гипериммунных сывороток. Согласно опубликованным данным В.К. Спирина и соавт. (1987) были получены гипериммунные сыворотки морских свинок. Здоровых морских свинок иммунизировали трёхкратно с интервалом 21 и 7 сут антигеном, представляющим собой концентрированный инактивированный вирус ящура с добавлением равного количества масляного адъюванта типа неполного адъюванта Фрейнда. Морских

свинок обескровливали на 10 сутки после последней иммунизации. Полученные сыворотки проверяли индивидуально в РСК, а затем объединяли и использовали для постановки РСК при определении двустороннего антигенного родства (R%).

Заражение естественно-восприимчивых животных.

Чувствительность естественно-восприимчивых животных изучали методом интрадермолингвального заражения. Для этого 33% суспензию афтозного материала вводили в 4-8 точек языка, в объеме 1,0 мл на животное для MPC, 8-10 мл 10% суспензии для КРС и по 0,5 мл 10% суспензии - поросятам. Учитывали сроки появления клинических признаков заболевания.

Заражение лабораторных животных. Морских свинок заражали 10% вируссодержащей суспензией по 0,1-0,5 мл в плантарную поверхность задних лапок методом туннелирования. Наблюдения за зараженными животными вели в течение 7 дней, отмечали появление и созревание афт, а так же сроки наступления генерализации инфекционного процесса.

При проведении всех исследований, кроме опытов на естественно-восприимчивых животных количество опытов было равно трем или более трёх (п>3).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Изучение биологических свойств вируса ящура типа А Репродуктивные свойства лабораторных вариантов вируса ящура типа А22 №550. При изучении способности к репродукции в клеточных культурах лабораторных вариантов ВЯ типа А22 №550 было установлено, что они активно реплицировались в перевиваемых клеточных культурах КСТ, IB-RS-2 и ВНК-21. Уже к 2-4 пассажу вирус имел инфекционную активность 5,5±0,09 - 8,5±0,07 lg ТЦД50/мл. В то же время для их адаптации к первичным культурам клеток ПТ и СП требовалось большее количество пассажей (от 4 до 7), а титр инфекционной активности вируса составлял 5,5±0,11 - 6,5±0,07 и 4,0±0,01 - 4,5±0,14 lg ТЦД50/мл соответственно.

При преобладании в монослое субкультуры ПТ фибробластоподобных клеток специфическое ЦПД не отмечали в течение 96 часов, в то время как в монослое с преобладанием клеток эпителиального типа наблюдали 80-100% ЦПД в первые сутки после заражения культуральным ВЯ типа А22№ 550. Таким образом, применять субкультуру ПТ в дальнейших опытах для оценки репродуктивной способности вируса ящура было, нецелесообразно.

Бляшкообразующие свойства лабораторных вариантов вируса ящура типа А22 №550. Титр референтного вируса ящура типа А22 №550 и его вариантов, размноженных в КК СП, при его определении методом бляшек в КК КСТ и 1В-К8-2 был равен или выше, чем титр вируса, определенный в КК СП по ТЦД. В то же время титр варианта вируса ящура Л22 №550/4-10, репродуцированного в КК 1В-Я8-2, при титровании методом бляшек в КК КСТ и Ш-ЯБ-г был ниже, чем титр вируса по ТЦД (7,25±0,11 ^ ТЦД50/мл, 6,54±0,30 и 5,18±0,70 ^ БОЕ/мл соответственно).

Вариант вируса ящура типа А22 №550/4-10 в КК КСТ и 1В-Я8-2 образовывал бляшки более однородные по размеру, чем вирус ящура типа А22 №550 вариант -II и А22 №550 исходный. При этом отмечали, что лабораторный вариант ВЯ А22 №550 /II образовывал от 30 до 42% крупных бляшек, размер которых был более 5мм и приблизительно такое же количество мелких, размером от 1 до 3 мм.

Репродуктивные свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типа А. Эпизоотические изоляты ВЯ типа А активно репродуцировались в КК ПСГК-30, 1В-118-2 и СП. При этом титры инфекционной активности наиболее высокими были у изолятов, репродуцированных в КК ПСГК-30, и составляли 6,17±0,08 и 6,50±0,0 ^ ТЦД50/мл для изолятов ВЯ типа А Турция/726/06 и А Турция/738/06. Следует отметить, что изолят вируса ящура типа А Турция 726/06 при репродукции во всех клеточных культурах имел наиболее высокие титры инфекционной активности: от 6,00±0,03 ^ТЦД50/мл в образцах, размноженных в КК СП, до 6,52±0,22 ^ТЦД50/мл - в КК 1В-Л8-2. В то же время изолят А Турция 957/06 накапливался во всех используемых КК в наименьших титрах: от 3,52±0,14 ^ТЦД50/мл в КК СП до

5,5±0,15 1ёТЦД50/мл в КК ПСГК-30. Изоляты вируса ящура типа А Иран 4/05 и А Иран 5/05 активно размножались как в первично-трипсинизированной КК СП, так и в перевиваемых клеточных линиях. Наиболее высокими титры инфекционной активности были, у изолятов вируса А Иран 4/05 и А Иран 5/05, прошедших 2-3 пассажа в КК ПСГК-30, которые составляли 7,3±0,20 ^ТЦД50/мл и 7,0±0,10 1§ТЦД50/мл соответственно.

При определении инфекционной активности изолятов микрометодом в клеточной культуре IB-RS-2 существенной разницы в титрах вируса, реплицированного в КК ПСГК-30 и IB-RS-2, установить не удалось.

Чувствительность лабораторных животных к вирусу ящура типа А/Турция/06. У морских свинок ВЯ типа А Турция/06 вызывал появление первичных афт на месте инокуляции вирусной суспензии через 56 часов в первом пассаже. При этом генерализацию инфекционного процесса у животных отмечали уже во втором пассаже через 7 суток, а к 6 пассажу генерализацию обнаруживали через 120 часов после заражения.

Чувствительность естественно-восприимчивых животных к вирусу ящура генетической линии А Иран/05. Было установлено, что изоляты вируса ящура типа А Иран 4/05 и А Турция 726/06, принадлежащие к генетической линии А Иран/05, являются патогенными для КРС и при экспериментальном заражении вызывают образование афт на месте введения через 24-28 часов. Также было установлено, что уже в первом пассаже ВЯ типа А Иран 4/05 через 30-47 часов после заражения свиней вызывает образование афт.

Антигенное соответствие эпизоотических изолятов вируса ящура генетической линии А Иран/05 производственным штаммам вируса ящура типа А в реакции микронейтрализации. Полевые изоляты, принадлежащие к линии А Иран/05, антигенно отличались от производственного штамма вируса ящура типа А22 №550, так как все показатели г, были <0,3, что было подтверждено результатами контрольного заражении животных. В то же время изучаемые изоляты, по результатам реакции микронейтрализации антигенно родственны производственному штамму вируса ящура А22 Ирак 24/64 (rt = 0,49-1,0), за исключением изолята

А Турция 969/06 (г, = 0,26). Кроме того, все изоляты по результатам исследования в реакции микронейтрализации оказались антигенно подобны штамму А/Турция 726/2006, который использовался для приготовления экспериментальной моновалентной вакцины. Показатель г, изолятов линии А Иран/05 и штамма ВЯ типа А Турция/06 составлял 0,35-1,0 (табл. 1).

Таблица 1

Результаты определения антигенного соответствия (п) производственных штаммов и эпизоотических изолятов вируса ящура

Эпизоотические изоляты Сыворотка крови вакцинированного КРС, п

А22 №550 А22 Ирак 24/64 А Турция 726/06

А Турция 726/06 0,09 0,49 1,0

А Турция 738/06 0,15 0,67 0,7

А Турция 969/06 0,10 0,26 0,7

А Турция 957/06 0,20 0,71 1,0

А Иран 4/05 0,14 0,61 1,0

А Иран 5/05 0,17 0,78 1,0

Двустороннее антигенное родство вируса ящура типа А/Турция/06 в реакции связывания комплемента. Изоляты А Турция/06 и А Иран/05 являются антигенно близкородственными, поскольку их антигенное родство, установленное в РСК, составляло 70%. В то же время изолят А Турция/06 сильно отличается от производственных штаммов вируса ящура А22 №550 Азербайджан/64 и А №1707/Армения/98, так как степень их родства составляет 13 и 10% соответственно. Изоляты вируса ящура типа А Турция/06 и производственный штамм А22 Ирак 24/64 имеют антигенное родство равное 32% и следовательно могут быть отнесены к разным подтипам (табл. 2).

Таблица 2

Показатели двустороннего антигенного родства эпизоотического

Сравниваемые штаммы вируса ящура Антигенное родство с А/Турция/06

Г] Г1 R%

А22 №550 Азербайджан/64 0,025 0,81 13

А Иран/05 0,5 1,0 70

А22 Ирак 24/64 0,42 0,23 32

А№1707/Армения/98 0,035 0,27 10

Изучение биологических свойств производственных штаммов и

эпизоотических изолятов вируса ящура типа О Репродуктивные свойства лабораторных штаммов вируса ящура типа О1 №>194. Штаммы вируса ящура типа О1 №194/овечий и 0[ №194/мышииый в течение проведенных 2 и 5 пассажей в КК СП не показали увеличения титра инфекционной активности вируса. Также не наблюдалось изменения титра при репродукции в КК КСТ штамма ВЯ О1 №194/'лапинизированный, где титр и в первом, и во втором пассаже, составил 6,0-6,04±0,25 1§ ТЦД50/мл, несмотря на проявление 100% ЦПД через 18-20 часов после заражения клеточной культуры.

В КК ВНК-21 и 1В-Я8-2 на 3-5 пассаже отмечали 100% ЦПД у всех исследуемых штаммов ВЯ типа О. При этом титр вируса увеличивался к последнему пассажу в среднем на 2-3 ^ ТЦД50/мл. Однако при репродуцировании ВЯ О1 №194/мышиный в перевиваемой клеточной линии ВНК-21 наблюдали снижение титра вируса с 5,52±0,25 до 4,50±0,25 1§ ТЦД5о/мл. Вероятно, это было связано с репродуктивными особенностями данного штамма.

Бляшкообразующие свойства лабораторных штаммов вируса яи^ура типа 01 №194. Титры инфекционности ВЯ типа О №194/овечий и О] №194/мышиный, определенные как в КК СП, так и методом бляшек под агаровым покрытием, значительно не различались. Титры определенные в КК СП, составили 7,50±0,25 и 5,75±0,25 ^ ТЦД5о/мл соответственно. При определении инфекционной активности тех же вируссодержащих суспензий в ^ БОЕ в КК КСТ и 1В-118-2 титры были 7,9±0,21 ^ БОЕ/мл и 6,6±0,16 ^ БОЕ50/мл соответственно. Таким образом, титр инфекционности вируса ящура типа О1 №194, выраженный в логарифмах ТЦД50/мл, был несколько ниже, чем в БОЕ.

Репродуктивные свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типа О. Изолят ВЯ О №1759/Монгольский/2001, адаптировался к КК СП, ВНК-21, КСТ и Ш-ЯБ-г на 5-6 пассаже. При этом в КК ВНК-21 титр

инфекционной активности к 6 пассажу не увеличивался по сравнению с первым пассажем, и его величина составила от 2,50±0,23 до 2,00±0,251§ ТЦД 5о/мл. В КК СП, КСТ и 1В-118-2 было отмечено возрастание титра по сравнению с первым пассажем на 1,5-2,5

Титр инфекционной активности ВЯ типа О! №1685/Московский/1995 в КК КСТ уже в первом пассаже был 6,25±0,14 ^ ТЦД50/мл и возрастал ко второму пассажу до 7,50±0,08 ^ ТЦД50/мл. При репродукции того же изолята в КК СП на первом пассаже титр инфекционной активности составлял 4,33±0,22 ^ ТЦЦ50/мл, а к третьему пассажу наблюдали его снижение до 3,75±0,13 ^ ТЦЦ5о/мл. При этом 100% ЦПД наступало не раньше 24-28 ч после заражения КК.

В ходе репродукции ВЯ О1 №1734/Приморский/2000 наиболее значительное увеличение титра наблюдали в КК СП от 0,75±0,25 до 6,25±0,22 ^ ТЦД50/мл и в Ш-ЯБ-г от 2,25±0,25 до 7,25±0,25 ТЦЦ50/мл.

Бляшкообразующие свойства эпизоотического изолята вируса ящура типа О М1685/Московский /1995. Титры инфекционной активности, определенные методом бляшек под агаровым покрытием, оказались несколько ниже титров, определенных на КК СП: 7,50±0,08 ^ ТЦД50/мл и 5,7±0,12 1% БОЕ/мл для ВЯ О №1685/Московский /1995, прошедшего 2 пассажа в КК КСТ. Кроме того, в КК КСТ вирус образовывал в основном крупные бляшки при отсутствии мелких (менее 3 мм), тогда как на КК 1В-118-2 образовывались бляшки всех размеров, но основная часть негативных колоний была среднего (3-6 мм) и мелкого (1-3 мм) размера. Так же необходимо отметить, что эпизоотический изолят ВЯ типа О №1685/Московский /1995 давал бляшки более разнородные по размеру, чем лабораторные штаммы ВЯ типа О.

Чувствительность лабораторных животных к вирусу ящура типа О Тайвань 3/97. Выраженные афты у морских свинок после введения ВЯ типа О Тайвань 3/97 обнаруживали только к 68-70 часу и генерализацию процесса наблюдали у двух животных из трех инфицированных. К

четвертому пассажу полное созревание афт отмечали уже на 20-21 час после введения вируса. Генерализация инфекционного процесса была у всех подопытных животных.

Чувствительность естественно-восприимчивых животных к вирусу ящура типа О №1734/Приморский/2000. У всех животных после интрадермолингвального заражения ВЯ типа О №1734/Приморский/2000 наблюдали образование превичных афт через 24-30 часов и генерализацию инфекционного процесса на 3-4 сутки. Кроме того, у животных при проведении второго и третьего пассажей наблюдали воспаление основания рога, сопровождающееся сильной болезненностью при пальпации. Титр инфекционной активности ВЯ типа О №1734/Приморский/2000 на 4 пассаже, определенный по методу Гендерсона, составил 4,85 ^ ИД50/0,1мл, а при титровании в КК СП - 7,5 1§ ТЦД50/мл.

Антигенное соответствие эпизоотических изолятов вируса ящура типа О производственным штаммам в РМН. Было установлено, что эпизоотические изоляты и штаммы ВЯ типа О №1759/Монголия/2001 (г, = 0,6), О! Маниса (г, = 0,85), 0( №1618 (г, = 0,75) и О, №194 (г, = 0,44) антигенно родственны производственному штамму О №1734/Приморский/2000. В то же время изоляты О Тайвань 3/97, О Индия 53/79 и О №1685/Московский/95 имеют антигенные отличия от производственного штамма ВЯ О №1734/Приморский/2000 (показатель г,<0,3) (табл. 3).

Таблица 3

Результаты определения антигенного соответствия (п) эпизоотических изолятов и штаммов вируса ящура типа О производственному штамму

типа О № 1734/Приморский/2000 в реакции микронейтрализации

Изоляты и штаммы вируса ящура П

О Тайвань 3/97 0,05

О № 1759/Монголия/2001 0,6

О Индия 53/79 0,18

О) Маниса 0,85

О № 1685/Московский/95 0,21

1 О, №194 0,44

О, № 1618 0,75

Кроме того, было проведено изучение антигенного соответствия эпизоотических изолятов вируса ящура типа О, выделенных в 2007 году, производственным штаммам вируса ящура типа О № 1734/Приморский/2000 и С>1 №1618. Результаты представлены в табл. 4 и 5.

Таблица 4

Результаты определения антигенного соответствия (г,) эпизоотических

изолятов вируса ящура типа О, выделенных в 2007 г. производственному штамму типа О № 1734/Приморский/2000 в реакции

Эпизоотические изоляты вируса ящура п

О Казахстан/2007 1,0

О Киргизия 1/2007 0,68

О Киргизия 2/2007 0,34

О Нагорный Карабах/2007 0,5

Таблица 5

Результаты определения антигенного соответствия (Г|) эпизоотических изолятов вируса ящура типа О, выделенных в 2007 г., производственному штамму типа 0[ №1618 в реакции

Эпизоотические изоляты вируса ящура Г1

О Казахстан/2007 0,5

О Киргизия 1/2007 0,49

О Киргизия 2/2007 0,43

О Нагорный Карабах/2007 0,36

При этом было установлено, что все выделенные в 2007 году эпизоотические изоляты являются антйгенно родственными производственным штаммам ВЯ типа О Na 1734/Приморский/2000 и Oí №1618, поскольку показатель ri больше 0,3.

Изучение биологических свойств вируса ящура типа Азня-1 Репродуктивные свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типа Азия-1. При изучении репродуктивных свойств изолятов ВЯ типа Азия-1 №1987/Амурский/2005, Азия-1 №1991/Монгольский/2005, Азия-1 № 1994/Приморский/2005 и Азия-1 №2002/Читинский/2006 в КК ПСГК-30, КСТ, КГ-91, СПЭВ, ПК, IB-RS-2, ВНК-21 заметные морфологические изменения наблюдались уже в первых пассажах. К 3-4 пассажу титры изучаемых изолятов ВЯ типа Азия-1 составляли от 4,0 до 7,5 lg ТЦД50/мл при

времени репродукции 18-24 ч. При репродукции изолятов ВЯ типа Азия-1 №1987/Амурский/2005 и Азия-1№1994/Приморский/2005 в КК ЯБК не отмечали полного разрушения монослоя, однако накопление вируса было не ниже, чем в остальных используемых клеточных культурах.

Бляшкообразующие свойства вируса яи{ура типа Азия-№1994/Приморский/2005. Изолят ВЯ типа Азия-1 №1994/Приморский/2005, репродуцированный в различных КК, образовывал негативные колонии как в КК КСТ, так и в 1В-Я5-2. Так, изучаемый эпизоотический изолят ВЯ, репродуцированный в КК КГ-91, имел титр инфекционной активности в СП выше (6,25±0,25 ТЦД50/мл), чем тот же показатель, определенный по БОЕ (5,3±0,16 БОЕ/мл). В то же время титры инфекционной активности изолята после репродукции в КК КСТ, определенные по ТЦД и по БОЕ, значительно не различались.

Чувствительность невакцинированных и иммунных естественно-восприимчивых животных к штамму вируса ящура типа Азия-1 №1987/Амурский/2005. У овец и свиней, взятых в опыт, до начала эксперимента отсутствовали антитела к структурным и неструктурным полйпептидам вируса ящура. После заражения овец ВЯ типа Азия-1 №1987/Амурский/2005, на вторые сутки наблюдения отмечали гипертермию и эрозии на слизистой оболочке языка. К 6-7 сут после заражения у двух животных были обнаружены афтозные поражения в области пяточных углов и межкопытцевой щели. Антитела к ВЯ типа Азия-1 в разведении 1:128 и неструктурному полипептиду ВЯ ЗА - 1:1280 выявляли у зараженных овец с 10-х сут после заражения. У овцы, находящейся в контакте с зараженными, антитела к ВЯ в разведении 1:32 обнаруживали только на 21 сут после заражения. Через 30 сут у всех овец вируснейтрализующие антитела выявляли в разведениях сывороток 1:128 - 1:256, а антитела к неструктурному полипептиду ВЯ ЗА - в разведениях 1:320 - 1:2560. В течение всего периода наблюдения у незараженной неиммунной овцы

признаков заболевания не наблюдали. Однако результаты исследований сывороток крови на наличие противоящурных антител, в том числе антител к неструктурному полипептиду ВЯ ЗА указывают на переболевание животного ящуром в бессимптомной форме.

У поросят, после заражения ВЯ типа Азия-1 №1987/Амурский/2005, через 40-42 ч наблюдали повышение температуры до 41°С. На 4 сутки наблюдения, появились обширные вторичные афтозные поражения. На 4-6 сутки наблюдения подобная клиническая картина ящура развилась и у поросенка, находящегося в контакте с зараженными. На момент появления клинических признаков заболевания у поросят в сыворотке крови антитела к ВЯ типа Азия-1 и к неструктурным белкам ВЯ ЗА не обнаружили. Однако, на 12 день после заражения, наличие антител к ЗА полипептиду было установлено в разведениях 1:160-1:320, а противоящурных антител к типу Азия-1 - 1:128-1:256, что свидетельствует о переболевании свиней ящуром.

К началу опыта, у коз выявляли поствакцинальные антитела к ВЯ типа Азия-1 в разведениях сывороток 1:64 - 1:128. В то же время ни у одного из вакцинированных животных до начала эксперимента не были обнаружены антитела к неструктурному полипептиду ВЯ ЗА. В сыворотках крови, отобранных на 12-й день после начала эксперимента, антитела к неструктурным полипептидам обнаруживали в разведениях 1:320 - 1:1280 у зараженных коз.

Антигенное соответствие эпизоотических изолятов вируса ящура типа Азия-1 производственному штамму Азия-1 Шамир 3/89 в РМН. В ходе работы было установлено, что изоляты вируса ящура типа Азия-1, вызвавшие вспышки в России и Монголии в 2005-2006 гг., по результатам РМН антигенно отличаются от производственного штамма типа Азия-1 Шамир 3/89, поскольку их антигенное соответствие (показатель г,) составляет <0,3 (табл.6).

Таблица 6.

Результаты определения антигенного соответствия (п)

эпизоотических изолятов вируса ящура типа Азия-1, выделенных во время вспышек 2005-2006 годов, производственному штамму Азия-1 _Шамир 3/89 в реакции микронейтрализации_

Эпизоотические изоляты вируса яшура Г1

Азия-1 №2002/Читинский/06 0,090

Азия-1 №2003/Читинский/06 0,125

Азия-1 №1987/Амурский/05 0,125

Азия-1 №1994/Приморский/05 0,125

Азия-1 № 1991/Монголия/05 0,180

Двустороннее антигенное родство вируса ящура типа Азия-1 в РСК. Изолят вируса ящура типа Азия-1 №1991/Монголия/2005 является антигенно родственным штамму вируса ящура типа Азия-1 №1987/Амурский/2005 (Я - 83%), который 16 мая 2006 года был депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ «ВГНКИ»), В то же время он антигенно отличается от производственного штамма типа Азия-1 Шамир 3/89 и Азия-1 №48 (Я% составляет 28 и 35 % соответственно) (табл. 7).

Таблица 7

Результаты определения двустороннего антигенного родства нзолята вируса ящура Азия-1 №1991/Монголия/2005 в реакции

связывания комплемента

Штаммы вируса ящура п Г1 1Г/о

Азия-1 №1987/Амурский/2005 0,77 0,90 83

Азия-1 №48 0,22 0,36 28

Азия-1 Шамир 3/89 0,35 0,22 35

Банк сывороток крови. По результатам проведенных исследований был создан банк референтных сывороток крови, полученных от КРС и свиней, иммунизированных противоящурными моновалентными вакцинами против ВЯ типов А, О и Азия-1, а также пополнен банк гипериммунных сывороток морских свинок. Сыворотки вакцинированных животных используются в РМН для определения антигенного соответствия

эпизоотических изолятов вакцинным штаммам ВЯ. Гипериммунные сыворотки морских свинок использовались для диагностических целей при типировании новых изолятов вируса ящура и для определения двухстороннего антигенного родства в РСК.

4. ВЫВОДЫ

1. По результатам определения антигенного соответствия установлено, что изоляты вируса ящура типа Азия-1, выделенные во время вспышек на территории России и Монголии в 2005-2006 гг., антигенно отличаются от производственного штамма Азия-1 Шамир 3/98 (Г] = 0,09-0,18). При определении двустороннего антигенного родства изолята ВЯ Азия-1 №1991/Монголия/2005 и производственных штаммов Азия-1 установлено, что он родственен штамму Азия-1 №1987/Амурский/2005 (11% = 83%) и антигенно отличается от штаммов ВЯ типа Азия-1 №48 и Азия-1 Шамир 3/98 (Я% = 28% и 35% соответственно).

2. Определено, что изоляты вируса ящура типа А, выделенные на территории Турции и Ирана в 2005-2006 гг. по результатам изучения двустороннего антигенного родства являются близкородственными (Я%=70%), но отличаются от производственных штаммов вируса ящура типа А22 №550 Азербайджан (Я%=13) и А №1707/Армения/98 (Я%=10%). По результатам определения одностороннего антигенного соответствия изоляты линии А Иран/05 антигенно родственны производственному штамму А2? Ирак 24/64 (г! =0,49-0,78;), за исключением изолята А Турция 969/06 (г, = 0,26).

3. Показано, что изоляты вируса ящура типа О: О Казахстан 2007, О Киргизия 1/2007, О Киргизия 2/2007 и О Нагорный Карабах/2007 являются антигенно родственными производственным штаммам вируса ящура типа О! №1618 и О №1734/Приморский/2000 (г, =0,34 - 1,0).

4. Изучены особенности бляшкообразования и репродукции в клеточных культурах эпизоотических изолятов, выделенных в последние годы, и лабораторных штаммов вируса ящура типов А, О, и Азия-1.

5. Установлено, что изолят вируса ящура типа Азия-1/1987/Амурский, вызывает заболевание ящуром неиммунных свиней и овец без предварительной адаптации вируса.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты проведенных исследований использованы при подготовке штамма вируса ящура типа Азия-1 №1987/Амурский/2005, который после изучения и паспортизации депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ «ВГНКИ») (2006г.).

Создан банк сывороток крови свиней и КРС иммунизированных моновалентными противоящурными вакцинами. Входящие в банк сыворотки используются при определении антигенного соответствия эпизоотических изолятов производственным штаммам вируса ящура в РМН.

По материалам работы подготовлены, одобрены ученым советом и утверждены директором ФГУ Федеральный центр охраны здоровья животных (ФГУ «ВНИИЗЖ») «Методические указания по определению антигенного соответствия между производственными штаммами вируса ящура и эпизоотическими изолятами в реакции микронейтрализации» (2007г.).

Список работ опубликованных по теме диссертации

1. Жильцова М.В. Сравнительное изучение чувствительности новых культур клеток к вирусу ящура/М.В. Жильцова, С.Р. Кременчугская, Т.А. Фомина, Н.В. Коропова//Актуальн.пробл.инф.патол. ж-ных: матер. Междунар. научн. конф., посвящен.45-летию ФГУ «ВНИИЗЖ»,-Владимир, 2003.-С.247-249 Жильцова М.В.

2. Изучение способности к репродукции в клеточных культурах вариантов вируса ящура типа А, отличающихся по биологическим свойствам/Жильцова М.В., Кременчугская С.Р., Фомина Т.А. и др.// пробл. монитор, и генодиагност. инф. бол. ж-ных: Матер. Междунар. Науч. конф. Молодых ученых, 24-26 марта 2004 г.-Владимир, 2004,-С.85-88.

3. Современные методы контроля иммуногенности противоящурных вакцин и оценки иммунитета/Н.Е Камалова, С.Р. Кременчугская, В.М. Захаров, М.В. Жильцова и др./Сб. научн. Трудов ВГНКИ.-М., 2005.-Т.66.-С39-45

4. Жильцова М.В. Изучение репродуктивных свойств изолятов вируса ящура типа Азия-1, выделенных в России во время вспышек в 2005-2006 гг./М.В. Жильцова//Вет. патол. -2006.-№4.-С.31-34

5. Жильцова М.В. Изучение восприимчивости культур клеток и восприимчивых животных к изоляту вируса ящура типа Азия-1 №1987/Амурский/2005/ М.В. Жильцова, С.Р. Кременчугская, A.B. Каньшина и др//Тр. Федерального центра охраны здоровья животных.-Владимир, 2006.-Т.4.-С.71-80

6. Результаты изучения изолята вируса ящура типа Азия-1 № 1991/Монголия/2005/ М.В. Жильцова, С.Р. Кременчугская, А.И. Егорова, Т.Ф. Кошецян// Тр. Федерального центра охраны здоровья животных.-Владимир, 2007.Т.5.-С.59-66

7. Жильцова М.В. Изучение биологических свойств вируса ящура линии А Иран/05./М.В. Жильцова, С.Р. Кременчугская, А.И. Егорова, В.В. Борисов//Российский ветеринарный журнал, вып. посвящ. 50-летию ФГУ «ВНИИЗЖ»; сентябрь 2008 с. 15-16

8. Кременчугская С.Р. Антигенное соответствие изолятов вируса ящура линии А Иран/05 производственным штаммам типа А22 /С.Р. Кременчугская, М.В. Жильцова, В.В. Михалишин, и др. // Российский ветеринарный журнал, вып. посвящ. 50-летию ФГУ «ВНИИЗЖ» сентябрь 2008 с. 16-18

9. Кременчугсая С.Р. Изучение изолятов вируса ящура типов А, О, Азия-1 выделенных в 2002...2003 гг. в республике Таджикистан/ С.Р. Кременчугская, A.B. Щербаков, A.M. Тимина, А.И. Егорова, М.В. Жильцова, и др. // Российский ветеринарный журнал, вып. посвящ. 50-летию ФГУ «ВНИИЗЖ» сентябрь 2008 с. 18-21

Отпечатано на полиграфической базе ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных (ФГУ «ВНИИЗЖ»), Тираж 90 экземпляров, октябрь 2008г.

Оглавление диссертации Жильцова, Милена Владимировна :: 2008 :: Владимир

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика вспышек ящура вызванных генетически измененным вирусом ящура.

1.1.1. Вирус ящура типа О №1685/Московский/1995.

1.1.2. Вирус ящура типа О Тайвань 3/1997.

1.1.3. Вирус ящура типа О №1734/Приморский/2000.

1.1.4. Вирус ящура типа Азия-1, выделенный в России в 2005-2006 гг. 1 б

1.1.5. Вирус ящура типа Азия-1 №1991/Монголия /2005.

1.1.6. Вирус ящура типа А Иран/2005 и А Турция/2006.

1.2. Лабораторннные штаммы вируса ящура типов АиО.

1.3. Методы изучения биологических свойств вируса ящура.

1.3.1. Репродукция вируса ящура в различных клеточных культурах.

1.3.2. Бляшкообразование вируса ящура.

1.3.3. Репродукция вируса ящура в организме лабораторных животных.

1.3.4. Патогенность вируса ящура для естественно-восприимчивых животных.

1.3.5. Штаммовая дифференциация вируса ящура серологическими методами.

1.3.6. Определение антигенного соответствия между вакцинным штаммом и эпизоотическим изолятом в реакции микронейтрализации

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Жильцова, Милена Владимировна, автореферат

Актуальность темы. Ящур относится к числу наиболее опасных инфекционных болезней, способных быстро распространяться на огромные территории, наносит животноводству значительный экономический ущерб. При ящуре в молочном и мясном животноводстве доходы могут снижаться на 35-40%. Кроме того, значительный урон наносит гибель молодняка животных [9, 28, 81, 101, 123].

Высокая контагиозность болезни, широкий спектр восприимчивых животных, множество иммунологических типов и подтипов возбудителя, разнообразие путей его выделения и распространения, способность длительное время сохраняться как во внешней среде, так и в организме животных, создают огромные трудности в ликвидации этой болезни и требуют больших финансовых затрат. Вынужденные карантинные меры по ликвидации ящура нарушают нормальную хозяйственно-экономическую деятельность сельскохозяйственных и перерабатывающих предприятий, затрагивают общественные, экономические и межгосударственные связи. Географические и административные границы не являются преградой дчя эпизоотий ящура, которые могут распространяться в очень короткое время на огромные территории [1, 5, 44, 170].

Широкое распространение ящура, равно как и сложности, возникающие при диагностике и подборе вакцинных штаммов при противоэпизоотических мероприятиях, обусловлено высокой мутационной изменчивостью генома и антигенным разнообразием вируса ящура [106, 145].

Определенные участки капсидных белков, образующих антигенные детерминанты, отличаются значительной вариабельностью. Это свойство позволяет вирусу связываться с рецепторами в новых типах клеток и облегчает переход от одного вида восприимчивых животных к другому. Такой механизм обеспечивает быструю адаптацию вируса ящура в различных условиях и позволяет ему развиваться на широком круге хозяев. При смене хозяина или системы культивирования нередко происходят изменения некоторых биологических свойств вируса. Из всех участков генома максимальной вариабельностью отличается ген VP1, кодирующий основной иммуногенный белок вируса [142]. К фенотипическим проявлениям изменчивости относят антигенность, патогенность, термочувствительность репродукции, тропизм, терморезистентность, бляшкообразование в культуре клеток и др [49, 184]. Кроме того, к появлению антигенных отличий между штаммами вируса ящура приводят спонтанные мутации в определенных участках генома из-за ошибок процесса репликации вирусной РНК [150, 120]. Эта способность возбудителя к антигенной вариабельности используется в эпизоотологических исследованиях для его характеристики и определения происхождения эпизоотического изолята вируса ящура [159, 29, 160]. Определение нуклеотидной последовательности гена VP1 интересуемого эпизоотического изолята и сравнение ее с известными ранее последовательностями, дает возможность установить степень филогенетического родства изолята со всеми известными штаммами и вариантами вируса. Таким образом, можно определить происхождение эпизоотического изолята, а значит и возможный источник вспышки заболевания [137].

Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого штамма, могут варьировать от незначительных до существенных. Существенные изменения антигенных характеристик природного штамма с большой вероятностью способны вызывать ослабление специфического иммунитета индуцированного негомологичным антигеном [85, 106, 112, 123, 131].

Цель и задачи научных исследований. Целью наших исследований было изучение .биологических свойств лабораторных штаммов и эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О, и Азия-1, выделенных в процессе возникновения эпизоотий в различных регионах а также сравнение эпизоотических изолятов с производственными штаммами, используемыми при изготовлении противоящурных вакцин.

В соответствии с этим необходимо было решить следующие задачи:

2. Создать банк сывороток крови вакцинированных животных, содержащих антитела к производственным штаммам вируса ящура, для использования в РМН при определении антигенного соответствия эпизоотических изолятов производственным штаммам.

5. Установить двустороннее антигенное родство различных штаммов вируса ящура типов А и Азия-1 в РСК.

• Определена чувствительность лабораторных и естественно-восприимчивых животных к заражению изолятами вируса ящура типов А, О, и Азия-1, полученным из различных регионов с 2005 по 2007гг.

• Изучено двустороннее антигенное родство вируса ящура типов А, и Азия-1, выделенных в различных регионах с 2005 по 2007гг.

• Определено антигенное соответствие в РМН эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О, Азия-1 и производственных штаммов вируса, используемых при изготовлении противоящурных вакцин.

Создан банк сывороток крови КРС, иммунизированного моновалентными противоящурными вакцинами против типов ВЯ А, О, Азия-1, для определения антигенного соответствия эпизоотических изолятов производственным штаммам вируса ящура в РМН.

На основании проведенной работы разработаны и внедрены - в производственную практику «Методические указания по определению антигенного соответствия между производственными штаммами вируса ящура и эпизоотическими изолятами в реакции микронейтрализации», одобренные ученым советом и утвержденные директором ФГУ «ВНИИЗЖ» (08.02.2008).

Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены на Международной научной конференции, посвященной 45-летию ФГУ «ВНИИЗЖ», на конференции молодых ученых, посвященной проблемам мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных (Владимир, 24-26 марта 2004 г.), на конкурсе научных работ молодых ученых ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ»), (Владимир, 2008г.) а> так же на заседаниях ученого совета в ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ»), (г. Владимир, в 2003-2007 гг.).

Основные положения, выносимые на защиту

- результаты определения двустороннего антигенного родства эпизоотических изолятов вируса ящура в реакции связывания комплемента;

Объем и структура- диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Список литературы

Заключение диссертационного исследования на тему "Биологические свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О и Азия-1"

5. ВЫВОДЫ

1. По результатам определения антигенного соответствия установлено, что изоляты вируса ящура типа Азия-1, выделенные во время вспышек на территории России и Монголии в 2005-2006 гг., антигенно отличаются от производственного штамма Азия-1 Шамир 3/98 (г1=0,09-0,18). При определении двустороннего антигенного родства изолята ВЯ Азия-1 №1991/Монголия/2005 и производственных штаммов Азия-1 установлено, что он родственен штамму Азия-1 №1987/Амурский/2005 (Я%=83%) и антигенно отличается от штаммов ВЯ типа Азия-1 №48 и Азия-1 Шамир 3/98 (К% = 28% и 35% соответственно).

2. Определено, что изоляты вируса ящура типа А, выделенные на территории Турции и Ирана в 2005-2006 гг. по результатам изучения двустороннего антигенного родства являются близкородственными. (Я%=70%), но отличаются от производственных штаммов вируса ящура типа А22 №550 Азербайджан (Я%=13) и А №1707/Армения/98 (Я%=10%). По результатам определения одностороннего антигенного соответствия изоляты линии А Иран/05 антигенно родственны производственному штамму А22 Ирак 24/64 (г1=0,49-0,78;), за исключением изолята А Турция 969/06 (г!=0,26).

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2008 года, Жильцова, Милена Владимировна

1. Авилов, В.М. Обеспечение благополучия России по ящуру -важнейшая задача ветеринарной службы страны / В.М. Авилоз // Пробл. инфекц. патологии с.-х. ж-ных: тез. докл. конф., посвящ. 100-летию открытия вируса ящура. Владимир, 1997. - С. 3-4.

2. Автоматизация постановки РСК при ящуре / В.К. Спирин, Ж.А. Шажко, J1.H. Соколов и др. // Актуал. пробл. вет. вирусол.: тез. докл. конф. Владимир, 1978. - С. 143-145.

3. Адаме, Р. Методы культуры клеток для биохимиков / Р. Адаме. М.: Мир, 1983.-С. 203-208.

4. Антигенные свойства эпизоотических штаммов вируса ящура типов А и О / J1.H. Соколов, Е.В. Гусева, В.А. Мищенко и др. // Науковий вюник. Нацюнального аграрного ушверситету. Киев, 2001. вип. 36. -С.53-57.

5. Апалькин В.А. Эпизоотическая ситуация в России в 2005 году/В.А. Апалькин// Вет. журн.,2006. №2 -С.З.

6. Ашмарин И.П. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов /И.П. Ашмарин, H.H. Васильев, В.А. Амбросов// JL: Изд. Ленинградского ун-та, Изд 2-е, 1975. -78с.

7. Биологические свойства вируса ящура, выращенного в культурах клеток различной видовой принадлежности / В.Н. Герасимов, Г.А. Худяков, А.П. Пономарев и др. // Пробл. инфекц. патологии с.-х. ж-ных: тез. докл. конф. — Владимир, 1997. С. 42-43.

8. Биологические свойства вируса ящура типа 0/1685/«Московский», выделенного у свиней / A.A. Гусев, В.М. Захаров, Т.А. Фомина и др. // Сучасш ветеринарш та технолопчш аспекти свинарства: зб. мат. науково-практ. конф. Киев, 2002. - С. 9-10.

9. Бойко, A.A. Эпизоотия ящура глобальная проблема / A.A. Бойко, Б.А. Кругликов // Ветеринария. - 1994. - № 5. - С. 11- 14.

10. Велимов, М.Т. Чувствительность к вирусам субкультур клеток печек эмбриона коров, и телят / М.Т. Велимов- Ю.Х. Бахтахунов, Ы.Ы. Гизейдинов // Бюл. ВИЭВ. М., 1983. - Вып. 49. - С. 69-71.

11. Вирусные болезни животных / В.Н; Сюрин, А.Я. Самуйлснко, Б.В. Соловьев и др..- М.: ВНИИТИБП, 1998. С. 532-548.

12. Влияние рН суспензии; клеток ВНК-21 на репродукцию вируса ящура / А.П. Пономарёв, О.Г. Андреева, В.А. Мищенко и др. // Ветеринария. 1996, №12. - С. 22-27.

13. Гаврилов, В.И. Перевиваемые клетки в вирусологии / В.И. Гаврилов. М. Медицина, 1964. - 268 с.

14. Гендон, Ю:3. Генетика вирусов человека и животных / Ю.З. Гендон; -М. Наука, 1967г. 356 с.

15. Гладилин, Г.В. Изменение популяции вируса ящура по признаку размера бляшек при культивировании / Г.В; Гладилин, A.A. Сюсюкин // Актуал. пробл. вет. вирусол.: тез. докл. — Владимир, 1977. С. 59-62.

16. Гоголев, М.М. Динамика репликации вируса ящура типа А22 и его РНК в различных клеточных культурах / М.М. Гоголев, А.И. Лебедев, B.C. Авилов // Бюл. ВИЭВ. М., 1972. - Вып.14. - С.81-83.

17. Гоголев, М.М. Изучение взаимодействия вируса ящура с клетками культур тканей различных видов животных: автореф. дисс.канд. вет. наук. / М.М. Гоголев М., 1975. - 20с.

18. Гринева, Е.А. Адсорбция вируса ящура в клеточных культурах при разной дозе заражения / Е.А. Гринева // Вторая всесоюзная конференция молодых ученых по ветеринарии. М., 1971. - С.70-72.

19. Груздев, К.Н. Реализация программы совместных действий стран СНГ по профилактике и борьбе с ящуром и ее совершенствование в современных условиях / К.Н. Груздев, В.М. Захаров, A.M. Рахманов // Вет. патология. 2006. - №4. - С. 12-18.

20. Гуленкин, В.М. Оценка риска заноса ящура на территорию Российской Федерации / В.М. Гуленкин // Вет. патология. — 2006. -№4. С. 18-27.

21. Гусев, A.A. Современная стратегия противоящурных мероприятий в России / A.A. Гусев, В.М. Захаров, A.M. Рахманов // Аграрная Россия. -2001.-№3.-С. 20-23.

22. Дани люк, В.Н. Изучение штаммов вируса ящура типа О, выделенных в СССР с 1983 по 1990 гг.: автореф. дисс. канд. вет. наук. / В.Н. Данилюк Владимир, 1994. - 21с.

23. Дидовец, С.Р. Ящур / С.Р. Дидовец, Г.Ф. Бондаренко. -2-е изд.-Киев: Урожай, 1974.-215с.

24. Диев, В.И. Изучение клиники экспериментального ящура-у ягнят / В.И. Диев // Вирусные болезни с.-х. ж-ных: матер. 1-й Межвуз. вет. вирусол. конф. Владимир, 1970. - 4.1. - С. 200-201.

25. Диев, В.И. Контроль иммуногенности вакцин против ящура типа Азия-1 на овцах / В.И. Диев, Г.А. Блотова, И.Ф. Муртазин // Пробл. инфекц. патологии с.-х. ж-ных: тез. докл. конф., посвящ. 100-летию открытия вируса ящура. Владимир, 1997. - С. 37.

26. Диев, В.И. Специфическая профилактика ящура и оспы мелкого рогатого скота: автореф. дисс.док. вет. наук. / В.И. Диев Владимир, 1999. - 59с.

27. Дудников, А.И. Биотехнология противоящурных вакцин / А.И. Дудников // Животноводство России. 2004,- №9. - С. 42-44.

28. Дудников, А. И. Определение типовых и вариантных свойств вируса ящура посредством РСК и РДП: автореф.дисс.канд. вет. наук. / А.И. Дудников Харьков, 1964. - 18с.

29. Дьяконов, Л.П. Проблемы культивирования клеток животных и некоторые вопросы цитопатологии / Л.П. Дьяконов // Бюл. ВИЭВ. -М., 1983.-Вып. 49.-С. 3-9.

30. Ефимов, Н.И. Изучение иммунобиологических свойств вируса ящура, адаптированного к различным системам культивирования: автореф. дисс. .канд. биол. наук. / Н.И. Ефимов Владимир, 1969. - 23с.

31. Животная клетка в культуре. Методы и применение в биотехнологии / ред. Дьяконова Л.П., Ситькова В.И. М.: Спутник+, 2000. - 400с.

32. Зависимость величины титра вируса ящура различных типов от времени учета результатов титрования. / Т.Ю. Черняева, А.Ф. Бондаренко, Е.В. Белик и др. // Акт. пробл. вет. вирусол.:тез. Докл. Науч. Конф. поев. 30-летию ВНИЯИЧ.П, Владимир, 1988.-С. 36-37.

33. Захаров, В.М. Основные тенденции распространения ящура в мире в 2005-2007 гг. / В.М. Захаров, В.В. Никифоров, В.В. Борисов // Пробл. зоошженерн та вет. Медицини: зб. наук. прац. Харьюв, 2007. -Вип. 15(40). - 4.2, - Т.1. - С. 121-125.

34. Захаров, В. М. Разработка программы по. борьбе с ящуром в странах СНГ / В.М. Захаров, A.M. Рахманов. // Актуал. пробл. инфекц. патологии ж-ных: матер. Междунар. науч. конф., посвящ. 45-летию ФГУ «ВНИИЗЖ». Владимир, 2003. - С. 14-18.

35. Захаров, В. М. Ящур типа Азия-1 в Китае / В.М. Захаров, Д.Г. Мусиев // Ветеринария. 2005. - №9. - С. 8-9.

36. Изучение антигенных и иммунологических взаимоотношений, между штаммами типа О / Ж.А. Шажко, В.Н. Данилюк, Т.А. Фомина и др.

37. Вирусные и микробные болезни ж-ных: сб. науч. тр. Владимир, 1995. - С. 100-103.

38. Изучение молекулярных основ изменения некоторых биологических свойств вируса ящура подтипа Кц / A.B. Щербаков, Н.Ф. Ломакина,

39. B.В. Дрыгин и др. //Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1996.- №1. - С.-24-28.

40. Иммунобиологические свойства эпизоотического штамма вируса ящура типа О №1734 Приморский/2000 / В.К. Спирин, А.И. Егорова,,

41. C.Р. Кременчугская и др. // Тр. Федерального центра охраны здоровья ж-ных. Владимир, 2007. - Т.5. - С. 52-58.

42. Иммунологические свойства клонов вируса ящура типа О / Г.К. Бояджан, В.В. Прохоров, Н.И. Ефимов и др. // Актуал. вопр. вет. Вирусологии: тез. докл. IV Всесоюз. конф. Владимир, 1979. - 4.1. --С.23-25.

43. Испытание нового подхода к серологической оценке иммуногенности противоящурных вакцин / В.М. Гневашев, В.Ю. Кулаков, О.В. Прунтова и др. // Сб. науч. тр. ВГНКИ. М., 2005. - Т.66 - С.54-56.

44. Испытание чувствительности к вирусу ящура клеточных культур свиного происхождения / В.Н. Герасимов, Г.А. Худяков, В.Н. Карачевцева и др. // Актуал. пробл. вет. вирусол.: тезисы докл. науч. конф. к 30-летию ВНИЯИ. Владимир, 1988. - Ч. 2. - С. 7-8.

45. Камалова, Н.Е. Значение комплекса методов лабораторной диагностики в борьбе с ящуром / Н.Е. Камалова // Вет. патология. — 2006. №4.-С. 27-31.

46. Каталог постоянных клеточных линий и субкультур хранящихся в криобанке ВНИИЗЖ. Владимир, 2007 - С. 2.

47. Клеточные культуры в биотехнологии противоящурных препаратов /

48. B.Н. Герасимов, Н.И. Герасимова, Е.Е. Федорова и др. // Пробл. инфекц. патологии с.-х. ж-ных: тез. докл. конф. — Владимир, 1997. С. 41-42.

49. Количественный метод оценки и отбора производственных штаммов вируса ящура (на примере вируса САТ-2) / Ю.А. Черняев, С.Н. Давыдова, Г.С. Манвелян, Л.Ф. Шажко II Вирусные и микробные болезни ж-ных:-сб. науч. тр. Владимир, 1995. - С. 236-242.

50. Куликова, К. С. Сравнительное изучение чувствительности перевиваемых диплоидных и первичных культур клеток к вирусу ящура / К.С. Куликова, С.Х. Хаертынов // Теория и практика использования культур клеток в вирусологии. М., 1965. - С. 17-19.

51. Культивирование вируса ящура в различных клеточных культурах / Н.Е. Беляев, В.В. Прохоров, А.Ф. Бондаренко и др. // Актуал. вопр. вет. вирусол.: тез. докл. конф Владимир, 1990. - С. 48-49.

52. Культура ткани в вирусологических исследованиях / О.Г Анджапаридзе, В. И. Гаврилов, Б. Ф. Семенов, Л. Г. Степанова. М.: Медгиз, 1962. -С. 106-110.

53. Ломакина, Н.Ф. Нуклеотидная последовательность гена РНК-полимеразы аттенуированного варианта вируса ящура и ее сравнение с вирулентными родственными вариантами подтипа А22 / Н.Ф.

54. Ломакина, С.С Рыбаков // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология 1996, №1. - С.-35-39.

55. Мачавариани, Г.В. Сравнительное изучение иммунобиологических свойств разных эталонных и эпизоотических штаммов вируса ящура типа А и О: автореф. дисс.канд. вет. наук. — / Г.В. Мачавариани Владимир, 1978. 22с.

56. Мельник, Р.И. Размножение вируса ящура в культуре переживающей ткани: автореф. дисс.канд. биол. наук. / Р.И. Мельник Москва, 1965.-22с.

57. Методические указания по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура /A.A. Гусев, В.М. Захаров, Ж.А. Шажко и др..-Владимир, 2002. 31 с

58. Молекулярная эпизоотология ящура в России и странах СНГ / A.B. Щербаков, В.Г. Андреев, В.В. Дрыгин и др. // Аграрная Россия. -2002-№2.-С. 8-11.

59. Мусиев, Д.Г. Иммунобиологические особенности эпизоотических штаммов вируса ящура и методы ретроспективной диагностики ящура: автореф. дисс.док. вет. наук. / Д.Г. Мусиев Ставрополь, 2005.-48с.

60. Мусиев, Д.Г. Определение антигенного родства между штаммами вируса ящура серологическим и иммунологическим методами / Д.Г. Мусиев, Ж.А. Шажко, Н.И. Кожеватова // Актуал. пробл. вет. вирусол: тез докл. конф. Владимир, 1986. - С. 136 - 138.

61. Оковытый, A.C. Дифференциация штаммов вируса ящура по комплексу генетических признаков / A.C. Оковытый, В.М. Гневашев, Т.В. Ольшевская // Актуал. вопр. вет. вирусол.: тез докл. конф. -Владимир, 1979.-Ч. 1.-С. 13-15.

62. Определение видовой принадлежности постоянной линии клеток ПСГК-30 / Л.Г. Дегтяренко, А.Е Савельева, М.Х. Мосоян и др. // К новой стратегии борьбы с ящуром: Междунар. конф. Владимир, 1991. - 4.1. - С. 121-122.

63. Опыт производственного выращивания ящура в монослое клеток почек телят / И.С. Кучмасов, Г.Н. Завьялова, В.А. Сергеев и др. // Вирусные болезни с.-х. ж-ных: матер. 1-й межвуз. вет. вирусол. конф. -М., 1970. -4.1. -С. 38-39.

64. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. М.: Медицина. — 416с.

65. Пол, Д. Культура клеток и тканей / Д. Пол. М.: Медгиз, 1963. - 338с.

66. Получение диплоидных клеток почки телят для культивирования вируса ящура / А.А. Сюсюкин, Р.В. Швецова, Г.А. Кудрявцева и др. // Актуал. вопр. вет. вирусол.:тез докл. конф. Владимир, 1979. - 4.1. -С.120-122.

67. Получение иммунных сывороток для "диагностических методов при ящуре естественно восприимчивых животных / В.К. Спирин, Ж.А. Шажко, В.А. Мищенко и др. // Актуал. вопр. вет. вирусол. Наука -производству: тез докл. конф. - Владимир, 1987. - 4.2. - С. 85.

68. Пономарев, А.П. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства / А.П. Пономарев, В.Л. Узюмов, К.Н. Груздев // Владимир: Фолиант, 2006. 250с.

69. Программа совместных действий государств участников СНГ по профилактике и борьбе с ящуром в государствах содружества 16 апреля 2004г./Владимир 2004.

70. Программа совместных действий по профилактике и ликвидации ящура в странах СНГ / В.М.Захаров, Т.З.Байбиков, A.M. Рахманов и др. II Ветинформ. 2002.- №4. - С. 6-7.

71. Прунтова, О.В. Характеристика штаммов вируса ящура по комплексу генетических признаков / О.В. Прунтова, В.М. Гневашев, Ю.А. Черняев // Актуал. пробл. вет. вирусол.: тез докл. конф. Владимир, 1987. - С. 59-60.

72. Рахманов, A.M. Патологоанатомические изменения у КРС при экспериментальном заражении вирусом ящура Азия-1 7 A.M. Рахманов // К новой стратегии борьбы с ящуром: Междунар. конф. -Владимир, 1991. 4.1. - С. 24-25.

73. Рёрер, X. Ящур / X. Рёрер. М.: Колос, 1971. - 303с.

74. Салажов, E.JI. Зависимость биологических свойств вируса ящура в процессе пассирования от вида культур / E.JI. Салажов // Бюллетень ВИЭВ. - М., 1972. - Вып. 24- С. 106-108.

75. Салажов, E.JI. Оценка активности противоящурной вакцины по уровню вируснейтрализующих антител / E.JI. Салажов, Т.Я. Тарасенко // вирусные болезни с.-х. ж-ных: тез. докл. научн.-практ. конф. Владимир, 1995. - С. 115.

76. Салажов, E.JI. Расчет степени антигенного родства штаммов вируса ящура по данным РСК / Е.Л. Салажов // Тр. ВГНКИ. М., 1975. - Т. 43. - С. 195-202.

77. Сергеев, В.А. Культуры клеток в ветеринарии и биотехнологии / В.А.Сергеев, Ю.А. Собко.-Киев: Урожай, 1990. 152с.

78. Сергеев, В.А. Репродукция и выращивание вирусов животных / В.А. Сергеев. М:.Колос, 1976. 304с.

79. Сергеев, В.А. Структура и биология вирусов животных / В.А. Сергеев, Б.Г. Орлянкин.- М.: Колос, 1983. 336с.

80. Собко, А. И. Поствакцинальный иммунитет против гетерологичных штаммов вируса ящура/ А.И. Собко. Л.Н. Соколов, В.А. Мищенко и др. // Ветеринария. 1977 - №9. - С.42-44.

81. Современные тенденции в применении культур клеток в вирусологических исследованиях и создании питательных сред / A.C. Оковытый, Е.В. Абрашин, Т.А. Фомина и др. // Актуал. пробл. вет. вирусол: тез. докл. конф. Владимир, 1988. — 4.2. - С. 3-4.

82. Спиер, Р.Г. Биотехнология клеток животных / Р.Г. Спиер, Дж. Б. Гриффите .- М.: Агропромиздат, 1989. Т. 1, 2 - 822с.

83. Спирин, В.К. Иммунобиологические свойства эпизоотических штаммов вируса ящура типа О, выделенных в 1972-1974 гг. вразличных зонах страны : автореф. дисс канд вет наук — / В.К. Спирин, Владимир, 1977. 24с.

84. Спирин В. К. Методы диагностики болезней с везикулярным синдромом/ JT. А Глобенко, С. Р. Кременчугская // Соврем. Аспекты вет. патологии ж-ных: матер, конф., посвящен. 40-летию ВНИИЗЖ. -Владимир.-1998. С.71-80.

85. Спирин В. К. Получение иммунных сывороток для диагностических методов при ящуре у естественно-восприимчивых животных/ В.К. Спирин, Ж.А. Шажко, В.А. Мищенко // Актуальн. пробл. вет. вирусологии. Наука-производству.- Владимир. 1987 42. С.85

86. Сравнительное изучение иммуногенной активности противоящурных сорбированных и эмульсионных вакцин / Е.В.Велик, В.Н. Боровой А.Ф. Бондаренко, Н.Е. Беляев // Актуал. пробл. вет вирусол.: тез. докл. конф. Владимир, 1987. -4.1 - С. 20-21.

87. Сравнительное изучение иммуногенной активности моно- и полиштаммных из вируса ящура типа Азия-1 / Т.Ю. Черняева, А.Ф. Бондаренко, Е.В. Белик и др.// Актуал. вопр. вет вирусол.:тез. докл. теор. конф. мол. уч., Владимир, 1990 -С.83-84.

88. Сюрин, В.Н. Диагностика вирусных болезней животных / В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина. — М.: Агропромиздат, 1991. -528с.

89. Тарасов, В.Н. Культуры клеток в вирусологии / В.Н. Тарасов // Итоги науки и техники. Вирусология. М., 1990. - Т. 19. - С. 36.

90. Узюмов, В. JT. Ультраструктура и физико-химические свойства вируса ящура / B.JT. Узюмов: Фрунзе: Кыргызстан, 1970. 246 с. '

91. Фомина, М.С. Изучение антигенных свойств вируса ящура типа О / М.С. Фомина, В.П. Онуфриев // Ящур: тем. сб. работ по проблеме ящура. Владимир, 1970. - Т. 1. - С. 189-199.

92. Фомина, С. Н. / Комплексное изучение антигенного родства штаммов вируса ящура типа Азия-1/ С.Н. Фомина // Вет. патология. 2006. -№4. - С. 34-37.

93. Филогенетический анализ российских изолятов вируса ящура / A.B. Щербаков, A.M. Тимина, A.C. Яковлева и др. // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. Владимир, 2005. - Т.4. - С. 2025.

94. Хаертынов, С.Х. Использование перевиваемой линии клеток для культивирования вируса ящура: автореф. дисс. канд. биол. наук. -/ С.Х. Хаертынов: Казань, 1966. - 21с.

95. Хубиев, X.JI. Ящур у диких животных / X.JI. Хубиев // Актуал. пробл. вет. вирусол.: тез. докл. конф. Владимир, 1976. -Ч. 1. - С. 178-180.

96. Цветкова, Н.Е. Цитоморфологические изменения клеток ВНК-21чпри культивировании в них вируса ящура / Н.Е. Цветкова, Г.А. Кудрявцева, A.A. Сюсюкин // Вирусные болезни с.-х. ж-ных: матер. 1 -й межвуз. вет. вирусол. конф. -М., 1970. 4.1. - С. 40-41.

97. Черняева Т.Ю. Сравнительное изучение свойств некоторых штаммов вируса ящура типа Азия-1 в иммунохимической реакции/ Т.Ю. Черняева, А.Ф. Бондаренко, H.H. Лебедева и др. //Акт вопр. вет. вирусол.: тез. докл. науч. конф. мол. уч.; Владимир, 1990 С.-22-23

98. Чувствительность к вирусу ящура новых перевиваемых линий клеток / A.A. Поздняков, B.C. Авилов, Н.Т. Головина и др. // Актуал. вопр: вет. вирусол.: тез. докл. конф. Владимир, 1978. - 4.1. - С. 103-105.

99. Шажко, Ж.А. Обоснование методических основ современных схем лабораторной диагностики ящура и других везикулярных болезней / Ж.А. Шажко // Соврем, аспекты вет. патол. ж-ных. матер, конф., посвящ. 40-летию ВНИИЗЖ. Владимир, 1998. - С. 23-31.

100. Шажко, Ж.А. Проблемы унификации методов лабораторной диагностики ящура и других везикулярных болезней / Ж.А. Шажко // Пробл. инфекц. патологии с.-х. ж-ных.: тез. докл. конф. — Владимир, 1997.-С.25.

101. Шажко, JI. Ф. Сравнительное изучение биологических и физико-химических свойств препаратов лапинизированного и культурального вируса ящура / JL Ф. Шажко // Акт. вопр. вет. вирусологии. -Владимир, 1977. С. 28-30.

102. Швецова, Р. В. Совершенствование реакции связывания комплемента при ящуре // автореф. дисс. канд. вет. наук. / Р.В. Швепова Владимир, 1971. - 20 с.

103. Щербаков, A.B. Сравнительный анализ первичной структуры гена и белка VP1 эпизоотических, производственных и отличающихся по биологическим свойствам лабораторных штаммов вируса ящура: дисс. канд. вет. наук. -/ A.B. Щербаков: Владимир, 1996. 138с.

104. Эпизоотическая ситуация по везикулярным болезням животных на территории СССР / A.M. Рахманов, Т.З. Байбиков, А.П. Дроговцев и др. // Вирусные и микробные болезни животных: сб. науч. тр. -Владимир, 1995. С.64-67.

105. Ящур / А.Н. Бурдов, А.И. Дудников, П.В. Малярец и др. М.: Агропромиздат, 1990. - 320с.

106. Ящур у диких животных/ В.М. Захаров, Т.З. Байбиков, A.M. Рахманов и др. // Диагност., проф. и меры борьбы с особо опасными экзотическими и антропонозными болезн. ж-ных. — Покров, 2000. С. 49-52.

107. Abu Elzein Е., Subtyping of strains of foot-and-mouth disease virus types A and SAT 1 in the Sudan, 1967-1977 / E. Abu, Elzein, B. Newman, J Growther. // Bull. OIE. 1980. - V. 92, № 3-4. - P. 141-146.

108. Annual OIE/FAO FMD Reference Laboratory network report / J.-F. Valarcher. N. Ferris, N.J. Knowless et al.. Pirbright, 2005. режим доступа: http://www. wrlfmd.org/reflabs/find ref lab reports.htm

109. Antigenic analysis of serotype О foot-and-mouth disease virus isolates from the Middle East 1981-198 / A.R. Samuel, E.J. Ouldridge, A.E. Arrowsmith et al. // Vaccine. 1990. Vol. - 8. - P. 390-396 .

110. Archetti, J. Persistent antigenic variation of influenza A viruses after incomplete neutralization in ovo with heterologus immune serum / J. Archetti, F.L. Horsfall // J. Exp. Med. 1950. - Vol. 92, № 5. - P. 441462.

111. Assessing risks of disease transmission between wildlife and livestock: The Saiga antelope as a case study / E. R. Morgan, M. Lunderuold, G. F. Medley et. al. // Biolog. Conser. 2006. - Vol. 131. - P. 244-254.

112. Antigenic characterization of foot-and-mouth disease virus serotype Asia 1 field isolates using polyclonal and monoclonal antibodies / A. Sanyal, C. B. Gurumurthy, R Venkataramanan et al. // Vet. Microbiol. — 2003.-Vol. 93, № 1-2.-P. 1-11.

113. Alexandersen, S. Studies of quantitative parameters of virus excretion and transmission in pigs and cattle experimentally infected with foot-and-mouth disease virus / S. Alexandersen, M. Quan, C. Murphi //J. Comp. Pathol. -2003.- Vol. 129. P. 268-282.

114. Barnett, P. The study of the 'emergency' foot-and-mouth disease antigens held by the international Vaccine Bank within a global context / P.Barnett, A.R. Samuel, Statman // Vaccine. 2001.- 19:2107-17 Vol.19. -P.2107-2117.

115. Beard, C.W. Genetic determinants of altered virulence of Taiwanese foot-and-mouth disease virus / C.W. Beard, P. Mason // J. Virology. 2000. -Vol. 74,N2.-P. 987-991.

116. Brown, F. A brief history of FMD and its causal agent / F. Brown // Foot-and Mouth Disease: Control Strategies: Proc. Int. Symp., Lyons, France, 25 June 2002,-Paris etc., 2003 -P.13.

117. Chen, B.-J. Managing an animal health emergency in Taipei China: foot and mouth disease / B.-J. Chen, W.H.T. Sung, H.K. Shieh // Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz.- 1999. Vol. 18, №1. - P. 186-192.

118. Chinsangaram, J. Ability of foot-and-mouth deaseas virus to from plaques in cell culture is assotiated with suppression of alpha/beta interferon / J. Chinsangaram, M.E. Piccone, M.J. Grubman // J. Virol. 1999. Vol. 73, №12. - P. 91-98.

119. Ciassio, G. Esperiment d'inoculazione carassius auratius con il virusn dell afta epizootyica / G. Ciassio // Veterinaria Ital. 1970. - Vol. 19. - №4. - P. 212-218.

120. Comparison of immune responses after intra-typic heterologous and homologous vaccination against foot-and-mouth disease virus infection in pig / P.L. Eble, M.G.M. de Bruin, A. Bouma et al. // Vaccine. 2006 -Vol. 24.-P. 1274-1281.

121. Comparisons of the complete genomes of Asian, African and European isolates of a resent foot-and-mouth debases virus type O pandemic strain (PanAsia) / P.W. Mason, J.M. Pacheco, Q.-Z. Zhao et al. // J. Gen. Virol. 2003,- Vol 84. - P.1583-1593.

122. Doel, T.R. Foot-and-mouse disease: vaccine strains and field isolates / T.R. Doel // Foot-and Mouth Disease: Control Strategies: Proc. Int. Symp., Lyons, France, 2-5 June 2002.-Paris etc., 2003 P. 287-296.

123. Dopazo, J. Classification related methodology of date fiialysis / J. Dopazo, F. Sobrino, E. Domingo. Amsterdam: Elsevier, 1988. - P. 349-354.

124. Domingo, E. Evolution of FMD virus / E. Domingo, C. Escarmis, E. Baranovski // Virus Res. 2003. - Vol. 91. - P. 47-63.

125. Donn, C.S. Natural adaption to pigs of Taiwanese isolate of foot-and-mouth disease virus: shot communications./ C.S. Donn, A. J. Donaldson // Vet. Rec. 1997. - Vol. 141 P. 174-175.

126. Emergence in Asia of foot-and-mouth disease viruses with altered host range: Characterization of alterations in the 3A protein / N.J. Knowles, P.R. Davies, H. Tina et al. // J. Virol. 2001. - Vol. 75, № 3. - P. 15511556.

127. Evolutionary aspects of oil recognition by viruses / E. Baranovsky, C. M. Ruis-Jarado, N. Pariente et. al. // 6th Int. Congr. Vet. Virol. Virus Persistence and Evolution: Proc. Saint-Malo, France, 2003. - P. 32-34.

128. Fomina, T. A. Comparative charakterization of FMDV strains: O/TAW/97 and O/1685/MOSCOW / T. A. Fomina, A. V. Scherbakov, V. M. Zakharov // 6th Int. Congr. Vet. Virol. Virus Persistence and Evolution: Proc. Saint-Malo, France, 2003. - P. 119.

129. FMD situation in Russia in 2000-2001 / T.A. Fomina, A.V. Scherbakov, V.M. Zakharov et al. // OIE Rep. of the 2 nd Mtg. on FMD Control in East Asia. Seoul, Republic of Korea, 2001. - P. 65-68.

130. Foot-and-mouth disease virus: a long known virus, but a current threat. / F. Sobrino, M. Saiz, M.A. Jimenes-Clavero et al. // Vet. Res. 2001,-Vol.32. - P. 1-30.

131. Gûrhan, S. Adaptation of the new a/an FMDV strain to the cell cultures of different origin / S. Giirhan // Europ. Comm. Cont. FMD: Rep. Sess. Res. Group Stand. Techn. Comm.: Rome. - 1998. - P. 29-37.

132. Identification of optimal regions for phylogenetic studies on VP1 gene of foot-and-mouth disease virus: analysis of types A and O Argentineanviruses / J.I. Nunes, M.J. Martin, M.E. Piccone et al. 11 Vet. Res. 2001. -Vol. 32.-P. 31-45.

133. Identification of foot and mouth disease virus carrier and subclinically infected animals and differentiation from vaccinated animals / R.P. Kitching//Rev. sci. tech. OIE, 2002. V.21. - N.3. - P. 531-538

134. Kitching, R.P. A recent history of foot-and-mouth disease / R.P. Kitching // J. Comp. Pathol. 1998, Vol. 118. - P. 89-108.

135. Kitching, R.P. Epidemiology and control of FMD / R.P. Kitching // 40-th Anniversary of the World Reference Labor for FMD. Woking, UK, 1998.-P. 7.

136. Kitching, R.P. Clinical variation in foot and mouth disease: sheep and goats / R.P. Kitching, G.H. Hughes // Rev. Sci. Tech. OIE. 2002. - Vol. 21 №3.-P. 505-512.

137. Kitching, R.P. Clinical variation in foot and mouth disease: cattle / R.P. Kitching // Rev. Sci. Tech. OIE. 2002. - Vol. 21 №3. - P. 499-504.

138. Kitching, R.P. Clinical variation in foot and mouth disease: pigs / R.P. Kitching//Rev. Sci. Tech. OIE. -2002. Vol. 21 №3. - P. 513-518.

139. Leforban, Y. FMD situation in Greece, Turkey, Russia and Israel / Y. Leforban // Europ. Commiss. Control FMD: Rep. Res. Group Stand. Tech. Commitee. Rome, 1995. - P. 20-25.

140. Leppert M., Point mutation within the G-H loop of FMDV Ol affect virus attachment to target cells / M. Leppert // J. Virol. 1997, Vol. 2. - P. 1046-1051.

141. MacDonald, C. Development of new cell lines for animal cellNbiotechnology / C. MacDonald // CRC Crit Rev. Biotechnol. 1990. - V. 10, №2.-P. 155-178.

142. McKercher, P.D. Foot-and-mouth disease in swine: response to inactivated vaccines / P.D. McKercher, H.E. Farris // Arch. Ges. Virusforsch. 1967. -Bd 22, № 3-4. - S. 451-461.

143. Molecular epidemiological studies on foot and mouth diseases type O Taiwan viruses from the 1997 epidemic / Ching-Ping Tsai, Chu-Hsiang

144. Pan, Min-Yun Liu et al. // Vet. Microbiol. 2000. - Vol. 74. - P. 207216.

145. Microneutralisation tests for serological typing and subtyping of foot-and-mouth disease virus strains / M.M Rweyemamu, J.C. Booth, M. Head et al. // J. Hyg. 1978. - Vol. 81.-P. 107-123.

146. Ouldrige, E. J. New approaches to the epidemiology of foot-and-mouth disease / E. J. Ouldrige, D. J. Roulands // J. Outlook on Agriculture. -1986.-Vol. 15, № 15.-P. 40-45.

147. Pathogenic characteristics of the Korean 2002 isolate of foot-and-mouth disease virus serotype О in pigs and cattle / J.K. Oem, M.T. Yeh, T.S. McKenna et al. // J. Сотр. Pathol. 2008, Vol. 5. - P. 1-11.

148. Peterson, W.D. Cell culture characterization: monitoring for cell identification / W.D. Peterson, W.F. Simpson, B. Hukku // Meth. Enzymol.- 1979.-Vol. 58.-P. 164-178.

149. Pustiglione, N.L. Adaptacao do virus С Waldmann, da febre ai aftoza a ovos embrionados de gallinha / N.L. Pustiglione, A. A. Pinto, O. Suga // Arq. Inst. Biol. S. Paulo, 1970. - Vol. 37, №1. - P. 15-20.

150. Preliminary results to evaluate cross-protection between Oi Manisa and Oi Campos in cattle / V.A. Srinivasan, S.B. Nagendra' Kumar, M. Madhan Mohan et al. // режим доступа: http://www.wrlfmd.org/ref labs/fmd ref lab reports.htm.

151. Resent molecular epidemiology of foot-and-mouth disease virus Asia 1(2004-2006) / N.J. Knowles, J.-F. Valacher, V.M. Zacharov et al. // Int. Control of Foot-and-Mouth Disease: Tools, trends and Persektives. -Paphos, Cyprus, 16-20 October 2006. P. 15

152. Rweyemamu, M. M. Antigenic variation in foot-and-mouth disease: Studies based on the virus neutralization reaction / M. M. Rweyemamu // J. Biol. Stand. 1984. - Vol. 12. - P. 323-337.

153. Serological and biochemical data on FMD viruses of type A isolated in Iran in 1987 / P. Dubourrget, N. Detraz, P. Gareon et al.; Rhone Merieux.- Lyon, France, 1987. P.7.

154. Shin, J.-H. Identification and isolation of foot-and-mouth disease virus from primary suspect cases in Korea in 2000 / J.-H. Shin, H.-J. Sohn, K.-S. Choi //J. Vet. Med. Sci. -2003. Vol. 65,№1. - P. 1-7.

155. Selection of foot and mouth disease vaccine strains a review / D.J. Paton, J.-F. Valacher, J. Bergman et al. // Rev. Sci. Tech. OIE. - 2005. - Vol. 24(3).-P. 981-993.

156. Sharma, S. K. FMD in sheep: Pattern of virus extraction and distribution in the experimentally infection animals / S.K. Sharma, D.K. Morty // Indian J. Anim. Sci. 1981. - Vol. 51, №1 P. 61-11.

157. Spier, R.E. The reproductctibility of yields of foot-and-mouth disease virus from BHK monolayer and suspension cells / R.E. Spier // Int. Symp. FMD. -Lyon, 1977.-P. 73-78.

158. The cell attachment site of FMD includes the amino acid sequence RGD (arginine-glicine-aspartic acid) / G. Fox, N.R. Pratty, P. V. Barnett et al. // J. Virol. 1989. - Vol. 70, №3. - P. 625-637.

159. The epithelial integrin avp6 is a receptor for foot-and-mouth debases virus / T. Jacsin, D. Sheppard, M. Denyer et al. // J. Virol. -2000. Vol. 74, № 11. - P.-4949-4956.

160. Thomson, G. R. Foot and mouth disease in wildlife / G. R. Thomson, W. Vosloo, A. D. S.Bastos//Virus Res.-2003.-Vol. 91.-P. 145-161.

161. World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease. Pirbright. Quarterly Reports. Also available at: Режим доступа: http://www.wrlfmd.org/reflabs/fmd ref lab reports.htm

162. Yadin, H. Small ruminants as FMD virus carriers / H. Yadin // Europ. Commiss. Control FMD. Rep. Res. Group Stand. Tech. Commitee. -Rome. 1995. App. 3. - P. 26-32.