Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Биологические свойства энтеробактерий, выделенных от кур в Алжире

■ у

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ МОСКОВСКАЯ ВЕТЕРИНАРНАЯ АКАДЕМИЯ имени К.И.СКРЯБИНА

На правах рукописи

БУВСЕ5 АБДАЛЛАХ

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА' ЭК1ЕРОБАКТЕРИЙ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ КУР В АЛШРЁ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, . эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1993

Работа выполнена в ветеринарной лаборатории г.Эль-Тарф Народной Демократической Республики Алжир я Московской ветеринарной академии им.К.И.Скрябина.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

профессор ^урлахов В.А. .

Официальные оппоненты: t доктор ветеринарных наук, профессор Малахов Ю.А. кандидат ветеринарных наук, доцент Масиыов H.A.

Ведущая организация: Московская государственная академия прикладной биотехнологии.

Защита состоится " ~/£щ ¿¿/0/$/$ 1993 г. в "/О ^часов на заседании специализированного совета К 120.36.05 по защите диссертаций на* соискание ученой степени кандидата наук в Московской ветеринарной академии им.К.И.Скрябина (103472, Москва, ул.академика Скрябина, 23, тел.377-93-83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Автореферат разослан " " _ 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета

Федосеева Т.Н.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние года установлена полиэтиоло-гичность острых килечных заболеваний с существенный весом возбудителей, относящихся к условно патогенным бактериям. Между тем, . в' ветеринарии подавляющее больвииство случаев заболеваний аивот-ных не ккевт бактериологического подтверждения и остаются нерас-пифрованшвги, что затрудняет анализ, учет заболеваемости н проведение лечебно-профзхазтяческкх керопркятнй, из-за чего невозможно . целенаправленно конструировать специфические биологические препарата н объективно оценивать их эффективность. Кроме того, следует учитывать, что состав убиквктарнеЗ иикрофлоры постепенно меняется, • в за последние года изменилась структура заболеваний, вызываемых энтеробактершщи.

' : Выделение, количественный учет и точная идентификация условно патогенных бактерий вызывает определенные затруднения. Анализ •исследований по изучении морфологии, тинкториальных, культурально-биохимических свойств и патогенноетм наделяемой от швотных основных родов энтеробоктерпЯ позволяя бы рационализировать и, йо возможности, упростить бактериологический анализ при заболеваниях, вызываемых условно патогенной микрофлорой, включая сальмонеллезы, колибактериозы, клзбеиеллэзы и протейше инфекции.

Использование жидких питательных сред, что принято в практика большинства бактериологических лабораторий в мире, затрудняет проведение экспресс-исследований на зитеробактерии, включая их идентификации, вносит элементы нестандартности в получаемые результаты, и проведение подобных исследований невозможно в полевых условиях (вне оснащенных лабораторий).

Использование стабильных тзст-сисгеи обеспечивает унифкнациэ исследований, зкоийято иатериальных средств и сохранение затрат времени. Они удобны для транспортировки, хранения, особенно незаменимы при работе в экспедиционных условиях. Кроке того, исследователи описцваат противоречиво морфологические, бяорганические, антигенные и патогенные свойства ряда знгеробакторкЯ; возмогно это результат генетической изгкзггтовости отдельных свойств или результат нестандартности применяемых методов, или неполноты имевшихся данных об их биологических свойствах. Например, для многих исследователей остаются неяенжш различия и номенклатура салыюне^, Ш5 '

именуемых часто "пуллорум-галлинарум". Или чек объяснить, что в определителе Берги описаны 2 вида эперихий, тогда как по классификации других исследователей описывается 5 их видов? Выяснении этих актуальных вопросов в процессе выделения к изучения энтеробактерий, изолируемых из органов птиц в восточном регионе Алжира -и посвящена данная работа.'

Цель и задачи исследований. Целью работы являлось изучение эффективности классических и новых тест-систем для выделения, характеристики свойств и идентификации энтеробактерий, изолируемых из органов клинически здоровой; и больной птицы, разработка рациональней схемы идентификации основных родбв этого семейства.

В соответствии с этим перед нами были поставлены следующие . задачи: "

1. Изучить состав антеробсатернй, выделяемых из органов здоровой и больной птицы.

2. Изучить морфологические, культурально-биохимичеекке и патогенные свойства основных видов энтеробактерий, выделенных от птиц.

3. В сравнительных опытах выявить эффективность тест-систек для выделения и идентификации энтеробактерий и выяснить возможность разработки рациональной схеш первичной идентификации основных родов энтеробактерий.

Научная новизна. Получены сведения о частоте выделения энтеробактерий из органов клинически здоровых и больных цыплят и кур классическим пробирочным методом с'жидкими питательными средами и стандартной системой API-20E. Проведена сравнительная идентификация энтеробактерий, вцделенных от цыплят и кур в восточном регионе Алжира. В сравнительном аспекте изучена антибиотикорезистент-ность культур энтеробактерий, выделяемых из внутренних органов клинически здоровых и больных цыплят к кур.

•Практическая значимость. Установлено важное этиологическое значение в инфекционной патологии птиц в хозяйствах восточного региона Алжира Echarichia coli биовариантов I, 2, Salmonella pullorum, Salmonella galllnarum, а также Proteus mirabilis и Proteus vulgaris.

Проведение диагностики, профилактика и мер борьбы должно базироваться на полученных данных о циркуляции этих условно патогенных энтеробактерий; естественно, также ¡требуется разработка вакцин

с учетом циркулирующей микрофлоры.

Кроме того, для практической работы предложена схема первичной идентификации знтеробактерий с использованием стандартной си--стемы API-20E.

Апробация работы. Материалы были доложены и одобрены на отчетной научной конференции Московской ветеринарной академии в I990-I99I гг.

Публикации. По теме диссертации сдана в печать для публикации а трудах Московской ветеринарной академии им.К.И.Скрябина статья "Основные биологические свойства знтеробактерий, выделяемых из органов птиц в восточном регионе Алаира".

Объем я структура диссертация. Диссертационная работа изложена на 115 страницах ыаяинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения и выводов. Список использованной литературы вклшаот 146 публикаций по тематике исследований, из них 84 на русской языке и 62 зарубежных источника. Материалы ндлвстрироваш 23 таблицами.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. 1!атериалы н изтоды исследований

Работа проводилась в областной ветерлтрной лаборатории департамента Эль-Tapjb на востоке Алжира и на кафедре микробиологии, вирусологии и биотехнологии Московской ветеринарной академии имени К.И.Скрябина в I990-1993 гг.

При выполнении работы были попользована клинические, патологические, бактериологические н серологические иетодн исследования.

Исследованная птица поступала в ветеринарную лабораторию из различных птицеводческих хозяйств, а также ог отдельных владель-| цев. Клиническое исследование вклтало оценку общего состояния организма птица, изучение состояния перьевого покрова, гребешков и сергкея, видяки слизистых оболочек. Поступивших в лабораторию птиц убивали и проводили патологоанатошяеспоз вскрытие. Кур с вы-рзгзшшми клинкческккя признакам:! казпх-^ибо заболеваний, с учетом тех или иных патологоанатокгчзсхкх кс^гненпЯ во внутренних органах г та ос ют а группу явно болыиг, а без шгл!П5ческ«х и патологоанато- . нпческих пзкенеккй - к клг.ппески здорозим. ' '•

Всего за период работы Сало подвергнуто клиническому и пато-лагоанатоияческоцу исследованию 1821 голова птиц различного возра-

ста, из которых 443 отнесены в группу клинически здоровых я 1378 -к явно больной птице.

Материалом для бактериологического исследования служили внутренние органы птиц, а именно селезенка, печень,, костный мозг, кровь и яичники.

Для ввделения культур энтеробахтерий из внутренних органов использовали общепринятые в (бактериологии питательные среда и методики.

Полученные изоляты из обследованного патологического материала подвергались оараске по Граму и Романовскоцу-Гиыза с целью изучения их морфологических характеристик.

Интерпретации полученных результатов при изучении биохимических свойств культур энтеробахтерий проводили согласно определителю бактерий (Вагееу, 1984), а также инструкции, прилагаемой к набору системы АР1-20Е.,

У выделенных культур, охарактеризованных как представителей семейства энтеробахтерий, в дальнейшем были изучены следующие свойства: В-галахтозидаза, аргю<индигидролаза, яизиндекарбоксилаза, орнитиндекарбокснлаза, цитрат Сиыыонса, сероводород, уреаза, трип-тофандеэаминаэа, индол, реакция Фогес-Проскауэра, аелатиназа, глюкоза, маннит, инозит, сорбит, рамнсза, сахароза, мелибиоза, амилаза, арабиноза, ио2, И2, океидаза, подвижность.

Изучение антигенных свойств культур Е.соИ и сальмонелл, определение их сероварианткой принадлежности проводили с помощью типовых агглютинирующих сывороток, изготовленных Институтом Пастера (Франция) и Армавирской биофабрияой в соответствии с наставлениями по га: применению.

Для определения чувствительности энтеробахтерий к антимикробным препаратам использовали метод бумажных дисков на плотных пита-, тельных средах. В работе были использованы стандартные диски с ампициллином, пенициллином, тетрациклином, комицином, фуразолидоном, сульфанетроксазолом, трнметоприыом, канашцином, калидиксиновой кислотой, гентамициноы, хлорамфенихолом, эритромицином.

Патогенные свойства культур энтеробахтерий изучали на белых мысах кассой 15-18 г путем внутрибрюкиннйго их заражения 0,5 мл суточной бульонной культуры. Для определения энтеробактериЯ

были изучены 90 культур. Расчет ьс50 проводили по методике Спир-мена-Кербера (Л.Закс, 1976). Всего в ог^тах по изучению патоген-

iœx it вирулентных свойств было использовано 1300 белых ишей.

Статистическую обработку данных проводили по методике Спирме-иа-Кербера (Л.Закс, 1976).

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ КССЛВДОВАНИЙ

2.2.1. Вцделенке энтеробактерий на питательных средах

Всего бактериологически было исследовано 7654 пробы клинического материала, в том числе: печень - 1821, селезенка - 1621, кровь - 1519, костный мозг - 1418 и яичники - 1075 проб; причем было взято от каждой головы по одной пробе перечисленных материалов. Из исследованных проб материала 5381 проба была взята от боль-,ных кур и цыплят и 2273 пробы - от клинически здоровых.

Для выделения чистых культур из испытуемых материалов использовали метод предварительного обогащения в яидких питательных средах, наиболее широко прдаеняеыых для отих целей в лабораторной практике: питательный бульон. (Difсо), - селенитовый бульон и бульон Цвллера-Коуф-^ана. Через 24 ч проводили высевы на плотные дифференциально-диагностические среды: Hektoea (Гектоен), Endo (Эндо), Нао Conioy (Как Конки) и 33 (сальионелла-вигелла). После инкубаг ции исследуеирго.цатеркала при 37°С в течение 24-48 ч на этих средах изучали характер роста и форуу колоний.

С использованием перечисленных питательных сред были выделены энтеробактерии из 849 проб клинического катериала. '

С целы) выделения колифораных энтеробактерий, феркентирущих лактозу, нами использована среда Эндо, на которой перечисленные микроорганизмы образовывали теыно-рхеные колонии с металлическим блеском или бзэ него. Энтеробактерии, на фарментирукцие или замедленно ферментирущие лактозу, образовывали на этой среде бесцветные колонии.

Из исследованных 7654 проб патиатериалов волиформные энтеробактерии, сбраякващие дахтозу, били выделены из 490 ( 6,4$) проб.

Параллельно эти се культуры выделяли на средах Гектоен, líax Конкн и S3. . " '

- На среде Гектоен колонки колкфоруных энтеробактерий образовывали колония кпрппчно-орангевого цвета; колонии сальмонелл на _ этой среде г**гели серо-голубой цвет, а колонии протея - ккрпично-оранзевого с черьгыи центром или серо-голубке с чергош центром. Представители родов вигедла и проэидензил ка этс.1 среда образозы-Л-ЗК '

вали колонии зеленого цвета.

- На среде SS бактерии, не ферментируйте лактозу (сальмонеллы, шигеллы и др.), образовывали прозрачные и бесцветные колонии. Лактозопозитивные энтеробактерии образовывали колония с черным центром

На среде Мак Конхк бактерии, сбрахиващие лактозу, образовывали колонии красно-кирпичного цвета с помутнением вокруг колонии, а не ферментирующие яак?оэу образовывали бесцветные колонии.

Рост энтеробактерий в жидких питательных средах отличался однообразностью: после 24 ч инкубации он проявлялся' в виде равномерного помутнения среда, а на вторые-третьи сутки инкубации у одних родов энтеробактерий поверхность бульона покрывалась пленкой . с образованием пристеночного кольца, а у других - пленка не образовывалась. Но во всех следах при наличии знтеробактернй на дне пробирки образовывался легко разбивающийся осадок.

При микроскопнроваии;; •"аков-отпечатхов из органов от павших и убитых больных птиц, а мазков из выделенных культур наблю-

дали бактерии (в первом «аучм - непостоянно) в виде шздких коротких с закругленными хонцаасз. палочек, грел-отрицательные.

Энтеробактерии чааз удавалось вуделять из органов, взятых от больной птицы; пртзи чщз четя бшш изолированы на использованных средах колонии, харажтер-дге дая E.coli {8,6%), Salmonolla (2,930' и Proteus (1,8!»); oHTejtf. бактерии других родов были вцдеяены из 65 проб (1,1%) исслодс - 'лсго патологического материала.

Анализируя подучен.да нами результаты, цожно сказать, что вн-теробактерии (в особенности кишечная, палочка, сальмонелла и протей) довольно часто выделяются из всех внутренних органов больной птицы. При существенной разнице неаду частотой выделения энтеробактерий из материалов от больной и клинически здоровой птицы, в отдельных случаях все же следует отметить возможность их успешного выделения и'в. последнем случае.

2.2.2. Биохимические свойства энтеробактерий, . выделенных от птиц

Всего исследованы свойства 780 культур энтеробактерий, в том числе выделенных из внутренних органов клинически здоровых кур -143 и из органов больной птицы - 637 культур.

Первоначально были изучены следующие свойства: образование сероводорода, индола, наличие уреазы, рёакция с мртиленовым крас-

нш|, Фогес-Проскаузра, каинитом, фенилаланиндеаминазой, а также утилизация цитратов на среде Снммонса и ксн. Учет результатов реакций и роста на средах проводили з -течение 30 дней и группировали по следущей схеме:

+ - результат положительный в первые 1-2 дня - - результат отрицательный в течение 30 дней (+) - результат положительный спустя 3 дня и более. Из 780 культур энтеробактерий сероводород образовывали 268 (34,355) культур, из них 265 - через 1-2 дня и 3 (0,4%) - через 3 и более дней после начала инкубирования. В тестах с уреазой были положительными 56 (7,17%) культур, с индолом - 561 (71,9$), в реакции с метиленовни красный - 724 (92,8%), в реакции Фогэст Прос-■ кауэра - 14 (1,8%). На среде Сикмонса цитраты утилизировали 243 (31,15?) культуры, выделенных энтеробактер:1Й; на среде с kcn поло-вительный результат бил зафиксирован з 96 (12,2%) случаях, причем в одном случае - через 7 дней инкубирования." В тесте с фенилаланин-дезаминазей пояоамтелышй результат бил отдачей в 98 (12,6%) слу-'чаяг. Из исследованных энтеробактерий ыаннит расщепляли 702 (90,0%) культуры.

Анализируя полученные результаты, наш» была определена родовая принадлежность этих культур в еобтветствии с определителем бактерий Bergaу (1984).

С учетом результатов проведенных проб, реакций "и особенностей роста энтеробактерий на вышеперечисленных средах ('основные тесты для определения родов энтеробактерий) из 180 культур были отнесены В роду Escherichia v 460 (58,9%) культур, к роду Salmonella -168 (21,5%), i Proteus - 96 (12,255), к Klebsiella - 14 (1,8%) к у 42 (5,3%) исследованных культур семейства энтеробактерий по биохимическим свойствам определить родовую принадлежность нам не удалось.' < .7; ..'■'-'•'."' \ ''

Следующим этапом навей работы было изучение биохимических свойств энтеробактерий, выделенных от птиц, с использованием полных наборов тестов, позволяющих определить видовую принадлежность энтеробактерий. В нашей работе ш использовали систему API-20E для дифференциации энтеробактерий, которая включала следующие тесты: В-галактозидаза, арг'дниндкгидролаза, лиэиндекарбоксилаза, орнитин-' декарбоксилаза," цитрат Сгаомкса, сероводород, уре&за, триптофанде-эаминаза, индол, реакция Фогес-Проскауэра, ¡гелатиназа, глюкоза,

ыаннит, инозит, сорбит, рамноэа, сахароза, ыеяибиозвг, ашлаза, ара-биноза, оксидаза, ко2 и н2, подвижность.

Параллельно с использованием стандартных планшет о сухими реагентами этой системы нами был использован и классический метод с применением жидких сред в пробирках, готовящихся непосредственно перед использованием. Результаты реакций учитывали через 18-24 ч инкубирования при 35-37°С. Интерпретации полученных результатов проводили согласно прилагаемой инструкции к системе API-20E. Одновременно проводили и первичную идентификацию основных родов внте-, робактерий, апробируя предложенную нами для атого схецу.

Из 460 культур эшерихий, исследованных нами по предложенной схеме и в системе API-20E 437 (95?)били положительны с В-галакто-эидазой, 377 (82,1%) с лизиндекарбоксилазой, 345 (75%) с орнитин-декарбоксилазой, 450 (9,77?)- индолположительные; все культуры расщепляли глюкоз/, ыаннит и образовывали Ш2,409 (89%) - рамнозу, 340 (74?) - сорбит, 409 (89?) арабинозу и рамнозу: 451 (94?) культура была отрицательной с аргиииндегидролаз ой н на ураазную активность; и 424 культуры (92?) не образовывали HgS) кроме того, все культуры не утилизировали цитраты, не разжижали желатину, были отрицательными в реакции Фогес-Проскеузра, в тестах с оксидазой, инозитом, триптофандезаминазой, не образовывали W2. 264 (40?) культуры эшерихий сбраживали сахарозу, 285 (62?) мелибиозу. На основа-, нии биохимических свойств эшерихий в системе API-20E было выявлено, что большинство из них относились к биотипам I, 2 и 3 Esohericbia coll. "

Различий в биохимических свойствах между штаммами, выделенными от клинически здоровой и больной птицы, т.е. биотиповых различий нами не установлено.

Все 168 культур сальмонелл, как и эшерихий, давали положительные результаты с глюкозой, каинитом, образовывали но2, не реагировали с'триптофандезаминазой, были отрицательными в реакции Фогэса-Проскауэра, не разжижали желатин, не выделяли н2 и были отрицательными в оксидазной пробе; не было выявлено сальмонелл,,* расцепляющих мочевину или амилазу. У 2 (1,2?) хультур сальмонелл обнаружено наличие В-галактозидаэы, у 9 (5,4?) - аргин^ндегидролазы, у 143 (85,1?) - лизиндекарбоксилазы, у 92 (54,7?) - орнитиндекарбоксила-зы. В отличие от опытов с вверихиями, 4 (4,4?) культуры утилизировали цитраты на среде Симмоиса. Образование сероводорода (Hgs) было отмечено <юще у 51 (30,4?) исследованных куль!ур, а индола -

Схема I

Первичная идентификация основных родов знтеробаятерий по биохимическим реакциям в комбинированных средах

Enterobacter

Н подвиг уреаза -

Escherichia

"W +

VP -

Klebsiella

уреаза ±|

Citrobacter

Примечание:

tsi - трехсахарный агар с нелезом KIA - агар Клиглера TDA — триптофандеаминаза VP - реакция Фогеса Проскауэра

цитрат -индол +

цитрат +

,ол -

грамотри-цательные бактерии

| оксидаза -I тз1 V каталаза i> тгТ. I но2 +[ SJA

КОЛИК РЫНЫЕ г

глек.; + лакт.; HjS; + газ +

w

глек.; + лакт.; HgS; -/+ ■ газ

глюк.; + лакт.; HgS; -/+ +++ газ *

ТДА + f—' уреаза ±

подвия.+

Ш -—уреаза -

подвид. -

Proteus

ч

ТДА + уреаза +

ТДА

уреаза

: ь-

I

«о

I

Provi'dancia

h

Shigella

Salmonella

-Хо-

лишь у 2 (1,2%) культур (у эшерихий 97,7%); 2 (1,2%) культуры ферментировали инозит, II (6,6%) - сорбит, 131 (77,9%) - рамнозу, лишь одна культура расщепляла сахарозу, 6 (3,6%) - мелоидозу, 98 (58,3%) - арабинозу. Кроме того, нами была отмечена выраженная подвижность всего у 6 (3,6%) штаммов сальмонелл (у эшерихий - 4§,8%).

Анализируя полученные данные по каждой культуре, нами была определена видовая принадлежность сальмонелл. Из 168 исследованных культур 149 (88,6%) были: отнесены к тому или иному виду сальмонелл . (практически к З.риНогша или 3;ва111шгша)| а 19 (11,4%) культур идентифицировать по биохимическим свойствам нам не удалось.

В связи с нечеткой классификацией сальмонеллы пуллорум и га- ; линарум мы детально изучали морфологию колоний и культурально-био-химические свойства этих 147 культур.

Все 92 культуры З.риНогит образовывали на плотной питательной среде мелкие колонии диаметром меньше I мм, тогда как колонии з.еаШшгит отличались большим размером (2-3 мм). •

Оказалось, что отличительными биохимическими свойствами этих биовариантов былЬ образование (аза в средах с глюкозой, мальтозой и дульцитом:- все культуры з.риНогшп образовывали в отличие от З.ваШаагит газ из глюкозы и не образовывали из дульцита; 23 (25,0%) культур 3.ри11оги& ферментировали мальтозу с образованием газа, а З.гаШпазгит - 100% кулыур. .

При изучении биохимических свойств сальмонелл в системе АР1-20Е нами отмечено, что все культуры 8.ри11огиа, в отличие от З.ваШаагит,' образовывали орнитиндекарбоксилаэу и 87,5% - ферментировали рамнозу в отличие от инертных по этим показателям культур з.е&Шпахит. Кроме того, нами было отмечено образование сероводорода у 16 (17,4%) иаолятов З.риНогша, тогда как втаммы З.ва111юа-гит н^з не образовывали. Все культуры з.еаШпагшп не ферментировали арабинозу с образованием кислоты, а иа 92 культур З.риНогиа такие свойства проявляли 23 (25,0%).' Характерным, было то, что хз 23 культур з.риИогиш образующие газ из мальтозы, 20 (87,8%) ферментировали к арабинозу и лишь 3 (12,2%) из 69 (75,0%) культур этого биоварианта, не образующих газ из мальтозы, ферментировали арабинозу.

Все остальные биохимические свойства биовариамтов з.ри11огит и З.еа111пагшп совпали во всех случаях.

Таким образом, проведенные нами исследования показывают, что

'характерными отличительными свойствами биовариантов s.pullorum и. S.gallinarum являются размеры колоний, образование газов при ферментации глпхозы, мальтозы и дульцита, наличие орнитиндекарбокси-лазы, образование н^з.

89 (92,7%) культур протеев образовывали на твердой питательной среде (НПА) характерный вуалеобразный налет. Из 7 культур, не образующих налета на плотных питательных средах при 37°С, у 4 (4%) это свойство отмечалось при культивировании в среде с пониженным содержанием агара (1$) при температуре 20-22°С. Культивирование всех 96 культур протея на средах Плоскирева, висцут-сульфит агаре, ss-arape и на агаре Мак Канки подавляло "роение" и образование налета во всех случаях.

Отличительными свойствами P.nirabilia и P.vulgaris являлись наличие орнитиндекарбоксилазы у всех P.mirabllis, в отличие от P.vulgaris, а также индолообраэование и ферментация сахарозы и алилазы культурами P.vulgaris.

Из 7 кеиденткфицнроваиных культур протеев у 6 (85,7%) отмечалось наличие арнитиндекарбоксилазы.

Изучение биохимических свойств 42 культур энтеробаятерий, родовую принадлежность которых lio предложенной схеме установить не удалось, проводили также с использованием системы API-20E. В этом случае видовув принадлежность уточнили у 27 культур (62%) из них. Видовую и родову® принадлежность 15 культур нам установить не удалось в связи с выраженной вариабельность*) их биохимических свойств в отдельных опытах. Из 27 идентифицированных культур в соответствии с методическим пособием к системе API-20E 5 были отнесены к E.coli, 7 - S.pullorum, 3 - К S.gallinaruri, 4 - К Shigella dosenteria, 3 - к Sh.boydii, 2 - Klebsiella pneumonia, 2 - К Alcaneоsua dynpar и одна культура была идентифицирована как Sorratiae liquefaciena.

Результаты биохимической идентификации знтеробактерий пробирочным методом и системой API-20E совпали в 95,1% случаев. Из 3 культур, неидентифицированных классическим пробирочным методом, в стандартной системе API-20E одна была отнесена к малоизученному виду клебсиелл (K.oxytoca).

Кроме того, не совпали результаты идентификации одной из культур сальмонелл;, более мелкие колонии и вирулентность, для цыплят позволяют считать, что более точно культура идентифицирована в системе API-20E.

т 12 -

2.2.3. Серологическая идентификация выделенных'ентеробактерцП

Использование 0-сыворотох из наборов Paeteur dlagaostlca (Ojjj, Ogg, 0Qg, Ogg и.02д) позволило идентифицировать 57 (49,5%) хультур аяерихий, из которых' 14 '(22,236) отнесены х серотипу Ojjj, 14 (12,2?) - 655, 9 (7,8?) - 02б, 7 (6,1?! - 0Ш и 13 Ш,3?)'куль-тур были отнесены к сероваруО^. 58 ( 50,5?) хультур не были идентифицированы. ■"

Эти же культуры эшерихий параллельно идентифицировали с помощью набора О-сывороток Армавирской биофабрики. Пояснительную реак- • . цию агглютинации отмечали с Ojg-сквороткой в 22 (19,1?) случаях, с 0П1 - 15 (13,0?), с 055 - 16 (13,9?) и с 0J6.~ 10 (8,6?) случаях. 9 (7,8?) культур были отнесены ш серотипу 0^, 7 (6,1?) - к серотипу Ogg, 12 (10,4?) - к 0^ и одна культура - к O^q. Сероти-ровую принадлежность 23 культур определить с использованием данио-_ го набора 0-сцвороток нам установить также не удалось.

Сравнение результатов серотушиэедии вперихнй показало отсут-- .ствие существенных различий в количестве культур, отнесенных к тем или. иным серотипац, имеющимся в обоих наборах агглютинирующих 0-сывороток (Ojjj, Ogg, Ogg, Ogg, o^h"

В последующем нами также были изучены серологические свойства сальмонелл,' выделенных от птиц.

Как ожидалось, из 22 культур, идентифицированных биохимически как s.pullorum,. со стандартньвщ I, 9 н 12- О-антигенами положительно реагировали 20 (90?), а остальные 2 (9,1?) культуры реагировали только с 9 и 12 О-сывороткаии. Аналогично реагировали и культуры S.gallinarum, однако, относительное количество культур, реагирующих только с 9 и 12 О-сыворотками, было несколько выхе и составляло 13,3. Остальные культуры реагировали с I, 9 и 12 О-сыворотками. Из культур, отнесенных к S.pulloxum и S.gallinarun ' ни одна не давала положительный результат с какой-либо Н-сыворот-кой. Учитывая положительную реакцию с поливалентной сывороткой, согласно схеме антигенной структуры сальмонелл (Ккуфман-Уайт), 20 культур были отнесены к S.pullorum, а 13 - к S.gallinaxum,

Из 7 не идентифицированных по биохимическим свойствам культур у 2-х отмечена положительная решсцкя при выявлении группового Д антигена. Эти же культуры реагировали с О-антигенами I, 9 и 12.

Такии образом, из проведешь® наизг исследования видно, что выделенные и идентифицированные по их биохимическим свойствам соль-

ыонеллы-были в большинстве случаев идентифицированы аналогично и в серологических реакциях со стандартными сыворотками.

2.2.4. Определение чувствительности энтеробактерий к ' • антибиотикам и другим химиотерапевтическиы средствам

С целью изучения устойчивости энтеробактерий к антимикробным препаратам нами были изучены 98 культур эшэрихий, 71 - сальмонелла и 64,культуры протея. Определение чувствительности бактерий к ампициллину, калидексинозой кйслоте, хлорам^ениколу, колистину, эритромицину, фуразолндону, гентамицину, канаыицину, пенициллину, сульфаметаксазолу, трикетопрюу, тетрациклину и полимиксину проводили на чашках Петри со средой Mulier-Hinton, используя бумажные диски, пропитанные этими веществами.

. Изучение чувствительности х перечисленным препаратам 98 культур е. с oil показало,-что все культуры были устойчивы к пенициллину, 93 {95%) - к эритромицину, 89 ( 90,2551 - к сульфаметоксазолу, 58 (59,0%) - к ампициллину, 42 (43,1%) - к колистину, и 40 (4Сг,9%) культур были резистентны и налидиксиновой кислоте.

Наибольшую чувствительность е.coli проявляла по отношению к яанащцину (92,7% испытанных культур), хлорамфенихолу (75,0%), полимиксину (73,6%), триметаприму (72,0%) и гентамицину (67,9%).

Из 71 культуры сальмонелл, испытанных нами, 49 (69,0%) были идентифицированы хак s.pullorum и 22 (31%) как S.gallinarun.

Культуры s.pullor ил проявляли высокую чувствительность к тетрациклину (42 - 87,6%), тогда как штаммы 3.gallinarum были резистентны (19 - 86,3%). .

Высокую чувствительность сальмонеллы проявляли к хлорамфени-нолу, колистину, фуразолидону и гентамицину.

Прм еыяспэним чувствительности к антимикробным средствам протея было изучено 64 культуры, из которых 41 (64,1%) были отнесены х P.mirabilia и 23 (35j9%) - к P.vulgaris. Проведенные нами исследования показали высокую устойчивость этих микроорганизмов к лекарственным препаратам.

Так все культуры P.mirabilia были резистентны к колистину, эритромицину и тетрациклину; 40 (97,6%) культур проявляли устойчивость к пенициллину, 39 (95,1%) - к полимиксину, 37 (90,2%) - к налидихсинозой кислоте, 31 (75,6%).- к сульфаметаксазолу. Относительно высокую чувствительность культуры протеев 'Проявляли к хло-рамфениколу и гентамицину.

Анализируя полученные результаты по изучение устойчивости эн-' теробактерий, выделенных из внутренних органов клинически здоровой и больной птицы, можно.сказать о высокой резистентности эше-р'ихий, сальмонелл и протея к-антимикробным препаратам, довольно часто применяемым в ветеринарной практике. Кроме того, отмечается значительная вариабельность чувствительности.энтеробактерий к антимикробным препаратам, как в пределах родов, так и отдельных ВИ7 дов этих микроорганизмов; Полученные результаты подтверждают необходимость постоянного-контроля за применением антимикробных средств, при заболеваниях птиц, вызываемых энтеробахтериями.

2.2.5. Патогенные свойства энтеробактерий,

. выделенных от птиц ' .

Для выяснения, патогеиности 18-24 часовые бульонные культуры' зшерихий, сальмонелл н протея вводили белым ьмг.м внутрабрппинно в дозе 0,5 мл (по 3 животных на каждый изолят). Набяадение за зараженными аивотнши проводили в течение 5 суток. Культура признавались патогенными■в случае, ес/и в указанный срок из 3-х зараженных еивотннх погибало не менее двух. Контролем' слуяили нэзарааен-ные белые мыши аналогичного веса и возраста, содержащиеся в таких

ео условиях. ...

Всего патогенные, свойства были изучены у 246 культур энтеробактерий, в том числе: 99 эшзрихий, 67 сальмонелл и 60 протеев.

Разница в частоте выделения патогенных культур Е.соИ из внутренних органов, клинически здоровой и больной птицы оказалась недостоверной (при Р 0,01), хотя из органов бельньос пткц их удавалось вцделять заметно чаце.

Из исследованных на патогенность для белых мышей .67 культур сальмонелл, патогенными оказались 42 (63,0?) культур, в том числа . 5 - от клинически здоровой птицы и 37 - от больной

Из 10 культур протевз, вцделеннкх из внутренних органов клинически здоровой птицы, гибель двух и более мыией вызывал'/. 7 (70,0%) изолятов.

3. ШВО,®

I. При комплексном исследовании внутренних органов от 443 клинически здоровых и 1378 больных птиц в областной вет.лаборатории г.Эль-Тарф (Алжир) выделено 849 культур &нтеробй1:тер»;й, изучены

их морфологические, культурально-^биохимические, патогенные свойства и чувствительность их к антибиотикам и химиопрепаратам.

2. Из йнутреннйх органов больных кур выделяли патогенные эн-теробактерии в соотноаении 8,6% -эшерихии, 2,9% - сальмонеллы, 1,8% - протей и 0,5% - клебсиеллы из общего количества 7564 исследованных проб различных органов, что следует учитывать при профилактике заболеваний с использованием средств специфической защиты.

3. В сравнительных опытах установлены преимущества использования стандартной АР1-20Е системы по сравнении с классической пробирочной методикой с использованием кндкгас сред для идентификации различных энтеробаятерий. *

4. На основании морфологии, биохимических свойств я патоген-ности для циплят я кур подтаерздена целесообразность выделения самостоятельных видов З.рШогша и З.ваШпагша и необоснованность использования многими исследователями номенклатуры Э.риНо-гша-еа111пагии. З.риПогит- является возбудителем пуллороза цыплят, формирует на твердых питательных средах мелкие колонии (до

I мм), образует газ из глюкозы и не образует издуяьцта,дает пользительную реакцию с орнитиндекарбоксилазой, ферментирует рамнозу, патогенна для циплят; ввделенныэ культуры чувствительны к хлораы-фенкколу, фуразолидону, генташцину, колистину, тетрациклину, суль-фаштаясазоду, резистентны к пенициллину.

3.еаШшпш является возбудителем сальмонеллеза кур, формирует крупные колония (2-3 кн), не образует газ из глюкозы и образует из дудьцита и кальтозы, не ферментирует рсинозу, дает отрицательную реакцию на орнитиндекарбоксилазу; выделенные ¡гультуры чувствительны а колистину , фуразолидону, хлоракфниколу, гентамицину, сульфаиатаксаэолу, канамицину и устойчивы я пенициллину и тетрациклину.

5. Разработана и предложена схема первичной идентификации основных родов знтеробактерий по биохимическим свойствам.

4. ШГО1ЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

Целесообразно внедрение отработанных методов .идентификации знтеробактерий из органов клинически здоровых и больных цыплят и кур в практику работы ветеринарных лабораторий с целью своевременной диагностики и обоснованной профилактики инфекционных заболева-

ний, вызываемых возбудителями, принадлежащими к семейству энтеробактерий. Подученные научные сведения о перспективности использования в профилактике стандартных систем для идентификации энтеробактерий, выделении самостоятельных видов З.риНогшц « З.ва111-па.гша, о резистентности циркулирующих энтеробактерий к применяемым на практике антибиотикам и химиопрепаратам необходимо использовать в учебном процессе при подготовке специалистов высшей квалификации по курсу "Ветеринарная микробиология и имцунология".

СПИСОК РАБОТ ПО ТЕМЕ .ДИССЕРТАЦИИ ' '

I. Буюсеф Абдаллах. Основные биологические Свойства энтеробактерий, выделяемых из- органов птиц в восточном регионе Алжира // Сб.научных трудов Московской ветеринарной академии им.К.И.Скряби- • • на (сдана в печать).

Ротапринт Подписано в печать 0&. 93 г. Оорм&т

буыагв 60к901/1б Объем I п.л. Ткраа 100 акз. Заказ 375

Типография Московской ветеринарной академии имени К.И.Скрябина

109472, г.Москва, ул. Академика Скрябина, 23