Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Атипичная форма колибактериоза поросят

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РООССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ И БИОТЕЖ^^ГшО Д

имени К.И.СКРЯБИНА _ ^ ..

2 5 С!И

на правах рукописи

е

»

БЕДНЯГИН ВЯЧЕСЛАВ ЕВГЕНЬЕВИЧ

АТИПИЧНАЯ ФОРМА КОЛИБАКТЕРИОЗА ПОРОСЯТ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва-2000

Работа выполнена в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина и в Каменской ветеринарной лаборатории Пензенской области.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

профессор Бурлаков В.А.

• Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор Сидоров М.А.

2. Кандидат ветеринарных наук, доцент Васенко C.B.

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко.

Защита состоится « года в 'j^часов на заседании

диссертационного совета Д 120.36.02. в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина,23,тел.: 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина.

Автореферат разослан « _2000 г.

диссертационного совета

Ученый секретарь

Брылииа В.Е.

/7 Fis. ^¿-ягг.э

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Болезни пищеварительного тракта новорожденных поросят составляют одну го сложнейших проблем для современной ветеринарии. В нозологической структуре алиментарных инфекций колибактериоз занимает одно из ведущих мест. Вариантная (типовая) многофакторность этого заболевания делает его трудно контролируемым, в результате животноводство несет колоссальные убытки от заболевания и падежа животных в пре - и постнатальные периоды развития.

По мнению многих исследователей (А. А. Гутковский, 1979; И. А. Анисим, В. В. Вангеев, 1980; М. А. Сидоров, 1981; В. В. Федоров, 1982; А. А. Авроров, А. В. Акулов, П. Г. Бурба и др., 1984; Т, К. Курашвили, 1992), в зависимости от ряда условий колибактериоз (эшерихиоз) может проявляться в септической, кишечной и энтеротоксемической формах. Его возникновение и клиническое проявление обычно связано с состоянием колострального иммунитета у новорожденных, микробным прессингом вариантов эшерихий, а также от многих факторов внешней среды. Наиболее частый путь заражения - алиментарный, реже аэрогенный; возможно внутриутробное заражение (Ветеринарный энциклопедический словарь, 1998).

В последние годы в ряде областей Российской Федерации в свиноводческих хозяйствах наблюдаются массовые аборты, рождение ослабленных, мертвых, нежизнеспособных поросят с различными патологиями и уродствами (А. Л. Семенихин, И. Ф. Вишняков, В. А. Седов и др., 1992). Часты случаи гибели новорожденных поросят с различными патологиями органов зрения, такими как: отсутствие глаз, гипертрофия и атрофия глазного яблока, помутнение роговицы. Также в некоторых случаях у новорожденных поросят обнаружены укороченные фаланги, отеки конечностей, области шеи и подгрудка (Т. 3. Байбиков, 1998).

Этиологические объяснения подобных патологий самые разнообразные.

Можно утверждать, что колибактериоз также может быть причиной патологии воспроизводства. И он может пополнить список заболеваний, которые передаются трансплацентарно.

Цель и задачи исследований. Перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Изучить клиническую картину атипичной формы колибактериоза поросят.

2. Изучить патологоанатомические изменения при атипичной форме колибактериоза.

3. Исследовать наличие внутриутробного инфицирования плодов на различных стадиях супоросности.

4. Произвести бактериологическую диагностику с выделением чистых культур и изучить-основные свойства возбудителя.

5. Разработать мероприятия по борьбе и профилактике атипичной формы колибактериоза поросят.

Научная новизна. Диагностированы атипичные формы колибактериоза с поражением органов зрения у плодов и поросят и репродуктивной функции у свиней. Они были обусловлены инфицированием плодов уже на ранних сроках супоросности (25-30 дней). Получены дополнительные данные об особенностях клинической картины, патологоанатомических изменениях при колибактериозе, изучены морфологические, культураль-ные, серологические, биохимические и вирулентные свойства 796 культур эшерихий; проведена серотипизация 231 культуры, из которых 71 % не типировано выпускаемыми наборами агглютинирующих сывороток и 29 % отнесено к серогруппам 015, 078, 0127а:К63. Экспериментальные образцы вакцины с использованием местных штаммов подтверждали правильность диагноза и устраняли наблюдавшуюся ранее патологию.

Практическая ценность работы. Обнаруженные клинические и пато-логоанатомические изменения при атипичной форме колибактериоза, а также выделенные редко встречавшиеся штаммы, играют важное значение в диагностике колибактериоза.

Выделенные патогенные штаммы при атипичном колибактериозе введены в экспериментальную вакцину. Экспериментальная ассоциированная инактивированная вакцина против колибактериоза и сальмонеллеза поросят показала высокую эффективность при ликвидации как атипичного, так и типичного колибактериоза в свиноводческих хозяйствах.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и одобрены на заседании секции «Ветеринарная биотехнология» отделения ветеринарной медицины Российской академии сельскохозяйственных наук, которое состоялось 25 ноября 1999 года. Атипичная форма колибактериоза, включая клиническое проявление, патологоанатомические изменения, сроки инфицирования плодов и меры борьбы с заболеванием включены в учебный процесс (лекции и лабораторные занятия) для студентов 3 курса факультета ветеринарной медицины.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 статьи.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту: особенности клиники, патологоанатомических изменений, локализации, свойств возбудителя и мероприятий по борьбе с колибакте-риозом при внутириутробном инфицировании поросят.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 124 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения и выводов. Список использованной литературы включает 160 публикаций по тематике исследований, из них 85 на русском языке и 75 зарубежных источников. Материалы иллюстрированы 26 фотографиями и 9 таблицами.

2. Собственные исследования 2.1. Материалы и методы

Работа проводилась на кафедре микробиологии и иммунологии Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им К. И. Скрябина и в Каменской ветеринарной лаборатории Пензенской области в 1997-2000 гг.

При выполнении работы были использованы клинические, патолого-анатомические, бактериологические и серологические методы исследования.

Исследования проводились на материале, взятом в четырех свиноводческих хозяйствах: КСП «Покровское», КСП «Пустынное» Каменского района Пензенской области - 1999г, АОЗТ «Белая дача» Люберецкого района Московской области и ЗАО «Северогаз» Ярославской области.

Клиническое исследование включало оценку общего состояние, изучение состояния глаз, кожи и волосяного покрова, видимых слизистых оболочек, термометрию. Отдельных клинически больных животных убивали и проводили их патологоанатомическое вскрытие, а также патологоанатомическое вскрытие павших животных.

Всего за период работы было подвергнуто клиническому и патоло-гоанатомическому обследованию 3600 голов евшей различного возраста, из них: 600 свиноматок, 1200 поросят в возрасте до 1 мес и 1800 - до 2,5 мес.

Материалом для бактериологического исследования служили пробы го следующих органов плодов, поросят и свиней: пораженные органы зрения, головной мозг, легкое, сердце, печень, почка, селезенка, стенка желудка, стенка тонкого, толстого кишечника, стенка матки, околоплодные воды, плодные оболочки и внутренние органы плодов.

Исследования проводились в соответствии с Методическими рекомендациями по выделению и идентификации условно-патогенных энтеробакге-рий и сальмонелл при острых кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных (И. Н. Блохина, Е. С. Воронин, Н. Ф. Брусники-на, Н. В. Залесских, В. М. Лавровская, Д. А. Девришов, Л. А. Позднышева, К. Я. Соколова, А. Ю. Лихачева, Т. М. Матвеева, 1990).

Статистическую обработку данных проводили по методу Стьюдента с учетом методических рекомендаций Ю. К. Баюна (1989).

2.2. Клинические признаки и патологоаиатомические изменения при типичном и атипичном колибактериозе у поросят

В двух исследуемых нами хозяйствах наблюдалась типичная картина колибактериоза при колиэнтеритной форме с острым и подострым течением. Клинические признаки и патологоаиатомические изменения были характерны для колибактериоза.

В 1991-1998 гг. в ряде свиноводческих хозяйств Пензенской, Курской, Тульской, Волгоградской областей исследователи наблюдали своеобраз-

ную патологию, этнология, которой была не ясна (Семсшшш A.A., Вишняков В.Л. и др., 1992).

Как было установлено нами позднее подобное атипичную форму коли-бактериоза мы наблюдали в двух свиноводческих хозяйствах: КСП «Покровское» и «Пустынное» Каменского района Пензенской области.

С февраля 1996 года по октябрь 1997 года в КСП «Покровское» у свиноматок наблюдался высокий процент абортов, мертворожденных и рождение ослабленных и дефектных (с уродствами) поросят. Аборты наблюдались в поздние сроки - в последнюю треть супоросности.

За весь период (8 месяцев), при наличии 500 свиноматок, на отъёме было получено 50 полноценных и 67 дефектных поросят вместо 45005000 ожидаемых. В помете рождалось в среднем 8-9 поросят, 70 % из которых были мертвыми (у них также наблюдалась патология органов зрения). Мертвыми родилось около 2600 поросят. Живые поросята рождались слабыми и погибали в первые 1-7 дней.

При клиническом осмотре органов зрения у дефектных поросят была выявлена следующая однотипная патология: глазные яблоки отсутствуют, у некоторых поросят веки опухшие, внутри глазницы имеется корочка засохшего экссудата или глазные яблоки имеют гипотрофиро-ванный вид (меньше нормы в два-три раза) и помутневшую роговицу светло-серого цвета, либо глазные яблоки имеют увеличенный (гипертрофированный) размер (так называемый «рыбий глаз») больше нормального в 1,5-2 раза и помутневшую роговицу, серо-голубого цвета. Около 40 % поросят с данной патологией были полностью слепыми, у части отъемышей зрение было сохранено частично (в диссертации представлено 26 фотографий с клинической картиной и патизменениями у поросят и плодов).

Свиноматки на ранней и средней стадиях супоросности признаков заболевания не имели. Некоторые свиноматки на поздней стадии супоросности находились в угнетенном состоянии: от корма отказывались, лежали на брюхе, температура тела была повышена, что указывает на воспаление, которое вызвано гибелью плодов. Такие свиноматки либо абортировали за несколько дней до опороса, либо рожали мертвых поросят. Абортировало 40 % свиноматок (около 200 голов).

Атипичная форма колибактериоза в другом хозяйстве (КСП «Пустынное») проявлялось рождением мертвых и нежизнеспособных поросят. Аборты в первые две трети супоросности наблюдались редко.

В марте-апреле 1999 г. хозяйство получило всего 544 живых поросят от 170 свиноматок, вместо 1700 ожидаемых. В среднем рождалось 7-8 поросят, 60 % из которых были мертвыми.

Больные поросята рождались слабыми с пониженным аппетитом. После рождения их приходилось подкладывать к соску свиноматки для первых глотков молозива.

Поросята при рождении имели удовлетворительную упитанность. Щетина была взъерошена, тусклая, сухая. На голове волос редкий, кожа розовая, воспаленная. Слизистые оболочки бледно-розового цвета. В области головы, шеи и подгрудка наблюдались отеки различной степени. Температура тела была повышена (41-41,5°С). Обычно на 1-3 сутки у поросят начиналась диарея, после чего через 1-3 дня они погибали. В результате к отъемному периоду осталось 87 живых поросят.

Клинические признаки у свиноматок в данном случае сходны с клиническими признаками, которые были обнаружены и описаны у свиноматок в предыдущем хозяйстве.

После клинического осмотра нами был произведен убой и вскрытие 8 поросят в возрасте от 1 дня до 2,5 месяцев.

Патизменения обнаружены в желудке и тонком кишечнике. Желудок умеренно наполнен кормом, слизистая светло-красного цвета, набухшая, покрыта слизью. Стенка желудка утолщена. Слизистая тонкого отдела кишечника светло-красного цвета, набухшая, покрыта слизью.

В связи с рождением поросят, у которых клинические и патолого-анатомические изменения произошли во время внутриутробного развития, был произведен убой свиноматок на ранней (25 дней после осеменения) и поздней (104 дня после осеменения) стадиях супоросно-сти.

Свиноматка для убоя на ранней стадии супоросности имела удовлетворительную степень упитанности. Слизистые оболочки розовые. Кожа бледно-розового цвета.

При вскрытии у свиноматки на 25 день супоросности обнаружили 8 плодов. Плоды находились в стадии формирования органов. Плоды розового цвета, занимали правильное положение, пуповина красная и кровенаполненная. Патологические изменения плодов не обнаружены. Они обнаружены в желудке свиноматки и на плодных оболочках. Желудок утолщен, особенно в области большой кривизны. Слизистая оболочка воспаленная, розовая, с большим количеством слизи. На трех плодных оболочках со стороны прилежания к эмбрионам были обнаружены участки некроза.

Свиноматка для убоя на поздней стадии супоросности была выбрана с наиболее типичной клиникой из 40 супоросных свиноматок, которые по данным зоотехнической отчетности должны были опороситься в течение 2-х ближайших недель. Свиноматка была вялая, лежала на брюхе, аппетит отсутствовал, слизистые оболочки бледные, дыхание затрудненное, кожа и волос тусклые, температура тела 40,2 "С.

В результате осмотра внутренних органов свиноматки наблюдалось лишь геморрагическое воспаление желудка. Всего у свиноматки было обнаружено 11 плодов. Восемь плодов из одиннадцати имели патологию органов зрения (лишь три плода без видимых уродств). У двух плодов обнаружена патология «рыбий глаз» - размер глаза в два раза больше

нормального, с мутной роговицей. Внутри глаз заполнен черной жидкостью, хрусталик имеет размер около 5 мм и прикреплен ко дну глаза. У трех плодов глаза отсутствовали. У шестого плода один глаз отсутствовал, а второй глаз очень маленький белого цвета. У седьмого и восьмого оба глаза были недоразвиты. Все 11 плодов были вскрыты и внутренние органы осмотрены на наличие патологоанатомических изменений. Внутренние органы плодов сформировавшиеся. Патологоанатомических изменений при осмотре этих органов не обнаружено.

В другом хозяйстве «Пустынное», где поросята рождались клинически больными или мертвыми так же был произведен в соответствии с регистрацией убой свиноматок на ранней (30 дней после осеменения) и поздней (110 дней после осеменения) стадиях супоросности.

При вскрытии у свиноматки обнаружено 13 плодов. Плоды находились в стадии формирования органов. Околоплодная жидкость слизистая, светло-желтого цвета. На внутренней поверхности плодной оболочки обнаружены многочисленные прозрачные пузырьки диаметром 3-4 мм, содержащие в себе жидкость липкой консистенции, которая напоминает асептический гной. У всех плодов наблюдаются кровоизлияния на коже и увеличенные (расширенные) поверхностные подкожные сосуды. У семи плодов ярко выраженные отеки головы и шеи. У одного плода обнаружен большой отек на спине и в области шеи. У двух плодов ярко выраженная гиперемия головы. Положение органов плодов анатомически правильное. Грудная полость без видимых изменений, розового цвета. Анатомически сформировано только сердце. Внутренние органы брюшной полости не сфор,миро-ванные, имеют розовый цвет и желеобразную консистенцию. Мышцы красного цвета, без видимых изменений. Черепа и кости эмбрионов мягкие без патизменений. Органы зрения имеют темно-синий цвет, без видимых патизменений.

Свиноматка на поздней стадии супоросности имела удовлетворительную степень упитанности.

Патологоанатомическая картина органов этой свиноматки идентична ранее описанной. Из патологических изменений у этой свиноматки было обнаружено утолщение стенки желудка (особенно в пилорическойчасти). При вскрытии у данной свиноматки обнаружено пять плодов. Все плоды имеют отеки в области шеи, подгрудка и спины. Околоплодная жидкость слизистая, светло-желтого цвета. На внутренней поверхности плодной оболочки обнаружены прозрачные пузырьки диаметром 3-4 мм, содержащие в себе жидкость липкой консистенции, которая напоминает асептический гной. У всех плодов наблюдается воспаление кишечника. Один из плодов имел кровоизлияния на сердце. Других патологических изменений органов у плодов обнаружено не было.

2.3. Выделение и основные биологические свойства возбудителя

При микроскопировании мазков отпечатков из проб, взятых от больных и павших животных, а также мазков из выделенных культур наблюдали бактерии в виде мелких коротких с закругленными концами палочек, расположенных одиночно или попарно, подвюкные, грамотрицательные, сходные с Е. coli и другими энтеробактериями.

Всего бактериологически исследовано 536 проб клинического материала в том числе: пораженный глаз - 12, головной мозг - 43, легкое - 56, сердце -62, печень - 65, почка - 77, селезенка - 66, стенка желудка - 56, стенка тонкого и толстого кишечника - 64, стенка матки - 5, околоплодные воды -5, плодные оболочки -12, внутренние органы плодов - 27.

Из головного мозга, пораженных глаз, стенки матки, околоплодных вод, плодных оболочек, внутренних органов плодов были выделены только культуры, ферментирующие лактозу и образующие на среде Эндо фуксиново-красные колонии с металлическим блеском 0,3-0,5 см в диаметре с ровными краями.

Всего было выделено 525 культур, которые ферментируют лактозу. Культур, не ферментирующих или слабо ферментирующих лактозу было выделено в 1,5 раза меньше (271 культура).

Рост энтеробактерий в жидкой пт-ателыюй среде (мясо-пептонном бульоне) отличался однообразностью: после 24 часов инкубации он проявлялся в виде равномерного помутнения среды, а на вторые и третьи сутки инкубации поверхность бульона покрывалась пленкой, с образованием пристеночного кольца.

Из некоторых органов, в частности из легкого, печени, стенки желудка, стенки кишечника на МПА и кровяном МПА выделены отличающиеся от основной массы мелкие колонии, круглые полупрозрачные плоские с приподнятым центром и краями.

На кровяном МПА наблюдался ß-гемолиз. На среде Эндо микроорганизмы из этих колоний не росли. Всего было выделено И культур этих бактерий, которые по Граму окрашивались положительно и по культураль-но-морфологическим свойствам были отнесены нами к роду Streptococcus.

При посеве па МПА и кровяной МПА га отдельных проб был обнаружен рост колоний, обладающее свойством «роения».

Из данных таблицы 1 видно, что из исследованных нами материалов было выделено 826 культур микроорганизмов, которые по комплексу культуральных свойств с учетом биохимической активности, описанной ниже были отнесены: к Е. coli - 796, к Proteus - 7, к Streptococcus - 11 культур.

Не удалось идентифицировать 12 культур, которые на МПА и кровяном МПА образовывали колонии среднего размера с ровными краями, выпуклые, мажущейся консистенции. Гемолиз не вызывали. На среде Эндо образовывали розовые, ровные, выпуклые колонии. Лактозу не ферментировали. На висмут-сульфитном агаре наблюдались мелкие, прозрачные, выпуклые колонии с ровными краями.

Таблица 1

Результаты выделения различных бактерий из исследованных __материалов __

ПП Пробы материалов Е. coli Proteus Streptococcus Другие бактерии

кол-во культур % кол-во культур % кол-во культур % кол-во культур %

1. Головной

мозг 17 2,4 - - - - - -

2. Легкое 90 12,6 2 28,6 3 27,3 2 16,7

3. Сердце 81 10,2 - - - - ■ -

4. Печень 85 11,9 - - 2 18,2 2 16,7

5. Селезенка 89 12,4 - - - - 2 16,7

6. Почка 105 14,7 2 28,6 3 27,3 2 16,7

7. Стенка

желудка 127 17,8 2 28,6 1 9,1 2 16,7

8. Стенка

кишечника ■ 141 19,7 1 14,3 2 18,2 2 16,7

9. Пораженный

глаз 12 1,7 - - - - - -

10. Стенка матки 5 0,7 - - - - -

11. Околоплодные

воды 5 0,7 - - - - - -

12. Плодная

оболочка 12 1,7 - - - - - -

13. Внутренние

органы

плодов 27 3,7 - - - - -

Всего 796 7 11 12

При микроскопировании этих культур наблюдались неподвижные, грамотрицательные, в 1,5-2 раза превышавших размеры эшерихий длинные палочки.

Таким образом, анализируя полученные нами результаты, можно сказать, что бактерии вида Е. coli выделялись нами из всех проб больных поросят и свиноматок.

2.3.1. Биохимические свойства эшерихий

Всего исследованы биохимические свойства 796 культур бактерий, которые по культурально-морфологическим свойствам могли относится к Е. coli.

Результаты изучения биохимических свойств выделенных нами коли-формных культур суммированы в таблице 2.

Из таблицы 2 следует, что все 796 культур, отнесеных нами по морфологическим, культуральным и тинкториальным свойствам к колиформным бактериям имели сходные биохимические свойства, подтверждающие их принадлежность к эшерихиям.

Таблица 2

Биохимические свойства выделенных колиформных культур (п - 796)

№№ Тесты Положительная Отрицательная

пп пряк-тто

кол-во % кол-во %

1. Утилизация

цитрата натрия 0 0 796 100

2. Утилизация

малоната натрия 5 0,6 791 99,4

3. Утилизация цитрата

латрия с глюкозой 796 100 0 0

4. Наличие

лизиндекарбоксилазы 669 84 127 16

5. Наличие

аргининдигндролазы 25 за 771 96,8

6. Наличие орнитшщекарбоксила-

зы 621 78 175 22

7. Наличие фенилаланиндезами-

назы 0 0 715 100

8. Образование индола 796- 100 0 0

9. Образования ацетил-

метил карбинола 2 0,3 794 99,7

10. Наличие уреазы 10 1.3 786 98,7

И. Образование

сероводорода 0 0 796 100

12. Утилизация глюкозы 796 100 0 0

13. Наличие

Р-галактозидазы 708 89 88 11

14. Утилизация лактозы 782 98,2 14 1,8

15. Утилизация маннита 795 99,9 1 0,1

16. Утилизация сахарозы 478 60 218 40

17. Утилизация инозита 0 0 796 100

18. Утилизация сорбита 621 78 175 22

19. Утилизация арабино-

зы 69 84 127 16

20. Утилизация мальтозы 700 88 96 12

2.3.2. Серологическая идентификация эшерихий

Серологическая идентификация штаммов была проведена с агглютинирующими О-коли и ОК сыворотками на стекле. Адгезивные антигены у исследуемых штаммов выявляли в РА при использовании адгезивных эшерихиозных сывороток.

Нами было идентифицирована 231 культура, что составяет 29 % от общего количества культур отнесенных нами по культур алыю-морфологическим и биохимическим свойствам к эшерихиям. 71 культура

(9 % от всех культур эшерихий) имела антигенную формулу 015, 98 (12 %) культур - 078, 62 (8 %) культуры - 0127 (0127а:К63). Результаты выявления адгезивных антигенов у исследуемых культур были отрицательными, хотя эти же сыворотки были активными для пыявления К89 и F41 у эталонных штаммов. Не удалось идентифицировать 565 культур (71 %).

2.3.3. Патогенные свойства эшернхнй

Всего патогенные свойства были изучены у 796 культур эшерихий.

Культуры, выделенные от свиноматок, поросят и плодов вызывали: гибель мышей (в течение 1-5 суток), некроз кожи (обычно в области брюшка), бактерионосительство (угнетение, частичный отказ от корма с последующим выздоровлением). Гибель мышей в течение 1-5 суток вызывали 525 (66 % от общего количества) культур: из головного мозга 17 (2,1 %), из легкого - 54 (6,8 %), из сердца - 6,1 (7,7 %), из печени - 64 (8,0 %), из селезенки - 63 (7,8 %), из почек - 77 (9,7 %), из стенки желудка - 59 (7,4 %), из стенки кишечника - 69 (8,7 %), из пораженных глаз - 12 (1,5 %), из стенки матки - 5 (0,6 %), из околоплодных вод - 5 (0,6 %), из плодных оболочек - 12 (1,5 %), из внутренних органов плодов - 27 (3,4 %). Некроз кожи вызывали 124 (16 %) культуры: из легкого 16 (2 %), из сердца - 8 (1 %), из печени - 14 (1,8 %), из селезенки - 12 (1,5 %), из почек - 10 (1,3 %), из стенки желудка - 28 (3,5 %), из стенки кишечника - 36 (4,5 %). Бактерионосительство вызывали 147 (18 %) культур (мышей убивали через 21 сутки и делали посевы из внутренних органов на питательные среды).

Таким образом, анализируя полученные данные можно сказать, что большинство культур 525 (66 %) являются вирулентными и с ними связана болезнь. Все культуры, выделенные нами из головного мозга поросят (17 культур), пораженных глаз поросят (12 культур), внутренних органов плодов (27 культур), стенки матки (5 культур), околоплодных вод (5 культур) и плодных оболочек (12 культур) свиноматок были вирулентными для мышей. Это свидетельствует о том, что наблюдаемая патология сопровождалась генерализованным процессом, вызванным высоковирулентной Е. coli.

2.4. Профилактика эшернхноза поросят

Результаты лабораторных исследовшшй необходимо было подтвердить созданием эффективного препарата для борьбы и профилактики с данным заболеванием. То есть, нужно было создать эффективный вакцинный препарат с включением в него штаммов с предполагаемым этиологическим агентом.

2.4.1 Приготовление н применение экспериментальной серии вакцины

Для ликвидации колибактериоза поросят в контролируемых нами хозяйствах была изготовлена экспериментальная ассоциированная инакгивиро-ванная вакцина против колибактериоза и сальмонеллеза свиней. Штаммы

сальмонелл были введены в вакцину по просьбе ветеринарной службы хозяйств. Всего было приготовлено пять серий данной вакцины. Вакцина пополнялась патогенными штаммами бактерий по мере их выделения в исследуемых хозяйствах.

Данные о полученных образцах концентрированных препаратов, включая объемы, концентрацию микробных тел и результаты проверки на полноту инактивации представлены в таблице 4.

Из данных таблицы 3 видно, что в лабораторных условиях кратность конце1ггрирования культур достигала от 2 до 10 раз по объему. Полученные концилраты содержали от 16 до 33 млрд. микробных

Таблица 3

Получение концентрированных ПЭГ препаратов эшерихий и

сальмонелл

Культура Объем Объем Крат- Концент- Стериль-

пп (вид) культуры получен- ность рация ность и

00 ного кон- кон- микр.тел безвред-

центрата центри- (млрд/мл) ность

(л) рования по объему

1. Е. coli 015 3 0,300 10 33 Стерилен, безвреден

2. Е. coli 078 3 1 3 19 Тоже

3. Е. coli 0127а:К63 3 0,750 4 17 То же

4. 5. 6. 7. 8. Е. coli 1- не тапиров. 3 1,5 2 10 Тоже

Е. coli 2 - не типиров. S. tiphimurium S. dublin S. choleraesuis 3 3 3 3 0,5 0,6 0,375 0,750 6 5 8 4 . 20 24 30 16 Тоже Тоже То же Тоже

тел в 1 мл, в то время как в исходных культурах до концентрирования было от 2-х до 4-х млрд. микробных тел в 1 мл.

Перед концентрированием рН в исходных культурах была доведена до уровня 7,2 - 7,6. Оседание бакмассы обычно было хуже в тех бутылях, где в процессе роста отмечали резкое закисление культуры (до рН = 6,0-6,5).

В последующем, в зависимости от характера осадка, надосадок удаляли сифоном, не допуская слива микробной массы.

Вакцина расфасовывалась в пузырьки объемом по 200 мл, герметично закрывалась резиновыми пробками и завальцовывалась алюминиевыми колпачками с соблюдением правил асептики и антисептики.

После стояния вакцина расслаивалась на две части: прозрачная надоса-дочная жидкость бесцветного (слегка желтоватого) цвета и рыхлый осадок белого цвета, легко разбивающийся при встряхивании.

Далее производилась проверка вакцины на безвредность, стерильность.

Приготовленной вакциной были провакципироваиы свиноматки, поросята и хряки в соответствии с проектом наставления.

После вакцинации у свиноматок, хряков и поросят каких-либо ухудшений в состоянии здоровья не наблюдалось. В месте введения вакцины воспалительных реакций обнаружено не было.

За свиноматками велось наблюдение с момента вакцинации (за 1 -2 мес. до опороса) до отъема поросят. Отъем в КСП «Покровское», «Пустынное», ЗАО «Северогаз» проводился по достижении поросятами двух месяцев,в ТОО «Белая дача» по достижении поросятами 35 дневного возраста.

В первые два месяца применения вакцины (месяц до опороса) наблюдалось рождение мертвых и нежизнеспособных поросят, а также оборты. Постепенно, когда осеменялись вакцинированные свиньи количество рождающихся полноценных поросят увеличивалось.

В хозяйствах были созданы контрольные группы свиноматок (по 10 голов в каждом), которые не подвергались вакцинации. У таких свиноматок наблюдались аборты в поздние сроки супоросности, рождение мертвых и нежизнеспособных поросят. По требованию руководителей хозяйств и ветслужбы района через 2 мес. такие контрольные группы были аннулированы. Результаты заболеваемости и отхода поросят до и после вакцинации представлены в таблице 4.

Таблица 4

Заболеваемость и гибель поросят от колибактериоза до и после вакцинации.

До применения После применения

ГШ

Кол-во Заболело Пало Кол-во Заболело Пало

поросят поросят

Кол-во % Кол-во % Кол-во % Кол-во %

1. КСП

«Покровское» 1008 958 95 891 88 3024 61 2 54 1,8

2. КСП

«Пустынное» 1700 1156 68 1139 67 2550 153 6 102 4

3. ТОО

«Белая дача» 900 360 40 351 39 924 93 10 91 10

4. ЗАО

«Северогаз» 540 477 88 242 45 431 44 10 22 5

Итого 4148 2951 73 2623 63 6929 351 5 269 4

Применение экспериментальной вакцины показало выраженное профилактическое действие во всех четырех хозяйствах.

До применения вакцины заболеваемость колибактериозом в этих хозяйствах составляла в среднем 73 % от общего количества рожденных поросят. Погибало 63% от рожденных. После применения вакцины заболеваемость составляла в среднем 5 %, а гибель 4 %.Полностью удалось ликвидировать заболевание в КСП «Покровское», ЗАО «Северогаз». В КСП

«Пустынное», ТОО «Белая дача» заболеваемость и падеж значительно снизились.

Несмотря на имеющиеся нарушения зоогатиешгческих норм содержания у вакцинированных свиноматок рождалось по 8-13 нормально развитых поросят.

В свиноводческих хозяйствах где ранее наблюдалась атипичная форма колибактериоза (аборты, рождение больных и не жизнеспособных поросят) в период оздоровления было убито по 1 вакцинированной свиноматке в поздние сроки супоросности (100-110 дней после осеменения). Данные свиноматки должны были пороситься впервые.

У свиноматки из КСП «Покровское» при вскрытии было обнаружено 12, а у свиноматки из КСП «Пустынное» - 8 нормально развитых плодов без патологоанатомических изменений. Внутренние органы свиноматок (легкое, сердце, печень, желчный пузырь, селезенка, почки, желудок, кишечник) без видимых пат.изменений. Плодные оболочки без каких-либо повреждений и участков некроза.

При бактериологическом исследовании проб, взятых из выше перечисленных органов патогенных бактерий выделено не было. Плоды, околоплодные оболочки и околоплодные воды были стерильны.

ВЫВОДЫ

1. Диагностированы атипичные формы колибактериоза с поражением органов зрения у плодов и поросят и репродуктивной функции у свиней.

2. В сравнительном аспекте описаны клинические признаки и патолого-анатомические изменения при типичной и атипичной формах колибактериоза. Атипичпые формы колибактериоза были обусловлены инфицированием плодов уже на ранних сроках после осеменения (25-30 дней).

3. Из патматериалов 4-х неблагополучных хозяйств выделено 796 культур эшерихий, изучены их морфологические, биохимические, серологические и вирулентные свойства. Проведена серотипизадия 231 культуры: 9 % из них относились к 015, 12 % - к 078, 8 % - к 0127. 71 % культур не тнпировались производственными наборами поли- и моноагглютинирующих сывороток.

4. Изготовлены экспериментальные образцы вакцины против эшерихио-за и сальмонеллеза свиней с использованием штаммов обусловивших атипичные формы колибактериоза. До применения вакцины в 4-х хозяйствах отход поросят колебался от 39 до 88 %, после применения вакцины заболеваемость снизилась на 68 % и отход был в пределах от 1,8 до 9,8 %.

Практическая значимость

Знание особенностей клинического проявления, патологоанатомических изменений, локализации возбудителя при атипичном колибактериозе с системным поражением органов зрения или репродуктивной функции

позволяет ускорить постановку диагноза и применения мер борьбы, что приведет к сокращению потерь от колибактериоза в свиноводстве.

Сведении о практическом использовании полученных автором научных результатов

Новые данные об атипичной форме колибактериоза, патологоанатоми-ческие изменения, локализацию возбудителя в органах и тканях плодов и поросят, меры борьбы с заболеванием используются при чтении лекций и лабораторных занятий со студентами 3 курса факультета ветеринарной медицины по теме: «Колибактериоз» (см. Приложение).

Рекомендации но использованию научных выводов

Сложности при типировании возбудителей, дифференциальной диагностики заболеваний вызываемых энтеробактериями, неукомплектованность институтов музейными штаммами, показанные в данной работе и сообщения на основе этой работы на конференциях и координационных совещаниях позволили РАСХН и Департаменту ветеринарии РФ поставить вопрос о создании лаборатории энтеробактериозов.

Перечень работ, опубликованных по теме диссертации

1. Бурлаков В.А., Беднягин В.Е. Атипичная форма колибактериоза поросят // Тезисы докладов Международной конференции, посвященные 80-летию МВА им. К.И.Скрябина.- М.: МВА им К.И. Скрябина, 1999. - С. 186-188.

2. Беднягин В.Е. Характеристика атипичной формы колибактериоза поросят // Сборник научных трудов молодых ученых. - М.: МГАВМ и Б им. К.И. Скрябина, 2000. - С. 32-34.

Выражаю признательность за активное содействие в организации проведения опытов в хозяйствах и производстве вакцины главному ветеринарному врачу Каменского района Пензенской области Лободе A.A. и директору Каменской ветеринарной лаборатории Тимакову М.А.

Несмотря на существенный прогресс в области борьбы с инфекционными болезнями животных, в последние годы вновь наблюдается рост заболеваемости животных колибактериозом. Это заболевание часто регистрируется как в промышленных комплексах с большим поголовьем животных, так и на традиционных свиноводческих фермах. Высокая заболеваемость и летальность от эшерихиоза (от 60 до 80 %) наносит хозяйствам значительный экономический ущерб, складывающийся из потерь от сокращения поголовья, затрат на лечение больных животных и потерь от снижения продуктивности переболевших.

Возникновению инфекции, а затем и развитию эпизоотического процесса, способствует антисанитария, скученное содержание, нарушение технологического процесса получения и выращивания поросят. Перегруппировки животных обуславливают перезаражение животных, а среди взрослых животных длительное носительство энтеропатогенных штаммов возбудителя колибактериоза.

Таким образом, создается стационарный эпизоотический очаг, в котором резервуаром и источником возбудителя являются взрослые животные, а условия содержания, кормления и эксплуатации определяют возникновение заболевания и развития эпизоотического процесса (В. П. Урбан, М. М. Широбокова, 1986)

Актуальность темы. Болезни пищеварительного тракта новорожденных поросят составляют одну из сложнейших проблем для современной ветеринарии. В нозологической структуре алиментарных инфекций колибактериоз занимает одно из ведущих мест. Вариантная (типовая) многофакторность этого заболевания делает его трудно 5 кошролируемым, в результате животноводство несет колоссальные убытки от заболевания и падежа животных в пре - и постнатальные периоды развития.

По мнению многих исследователей (А. А. Гутковский, 1979; И. А. Анисим, В. В. Вантеев, 1980; В. В. Федоров, 1982; А. А. Авроров, А. В. Акулов, П. Г. Бурба и др., 1984; Т. К. Курашвили, 1992), в зависимости от ряда условий колибактериоз (эшерихиоз) может проявляться в септической, кишечной и энтеротоксемической формах. Его возникновение и клиническое проявление обычно связано с состоянием колострального иммунитета у новорожденных, микробным прессингом вариантов эшерихий, а также от многих неспецифических факторов внешней среды. Наиболее частый путь заражения - алиментарный, реже аэрогенный; возможно внутриутробное заражение (Ветеринарный энциклопедический словарь, 1998).

Патология воспроизводства может быть обусловлена разными причинами, при этом в последнее время возрастает доля инфекционной патологии. Аборты, мертворожденность отмечают при ящуре, везикулярной болезни свиней, везикулярной экзантеме свиней, классической чуме свиней, болезни Ауески, гриппе, энцефаломиокардите, репродуктивно-респираторном синдроме свиней, парво -, энтеро парамиксо -, реовирусных инфекциях, лептоспирозе, хламидиозе и сальмонеллезе. Степень патогенного воздействия разных возбудителей во многом обусловлена сроком супоросности при инфицировании (В. А. Мищенко, Е. В. Гусева, М. В. Бабкина, 1997).

В последние годы в ряде областей Российской Федерации в свиноводческих хозяйствах наблюдаются массовые аборты, рождение ослабленных, мертвых, нежизнеспособных поросят с различными патологиями и уродствами (А. Л. Семенихин, И. Ф. Вишняков, В. А. 6

Седов и др., 1992). Часты случаи гибели новорожденных поросят с различными патологиями органов зрения, такими как: отсутствие глаз, гипертрофия и атрофия глазного яблока, помутнение роговицы. Также в некоторых случаях у новорожденных поросят обнаружены укороченные фаланги, отеки конечностей, области шеи и подгрудка (Т. 3. Байбиков, 1998).

Этиологические объяснения подобных патологий самые разнообразные.

Можно утверждать, что колибактериоз также может быть причиной патологии воспроизводства. И он может пополнить список заболеваний, которые передаются трансплацентарно.

Цель и задачи исследований. Перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Изучить клиническую картину атипичной формы колибакте-риоза поросят.

2. Изучить патологоанатомические изменения при атипичной форме колибактериоза.

3. Исследовать наличие внутриутробного инфицирования плодов на различных стадиях супоросности.

4. Произвести бактериологическую диагностику с выделением чистых культур и изучить основные свойства возбудителя.

5. Разработать мероприятия по борьбе и профилактике атипичной формы колибактериоза поросят.

Научная новизна. Диагностированы атипичные формы колибактериоза с поражением органов зрения у плодов и поросят и репродуктивной функции у свиней. Они были обусловлены инфицированием плодов уже на ранних сроках супоросности (25-30 дней). Получены дополнительные данные об особенностях клинической картины, патологоанато7 мических изменениях при колибактериозе, изучены морфологические, культуральные, серологические, биохимические и вирулентные свойства 796 культур эшерихий; проведена серотипизация 231 культуры, из которых 71 % не типировано выпускаемыми наборами агглютинирующих сывороток и 29 % отнесено к серогруппам 015, 078, 0127а:К63. Экспериментальные образцы вакцины с использованием местных штаммов подтверждали правильность диагноза и устраняли наблюдавшуюся ранее патологию.

Практическая ценность работы. Знание особенностей клинического проявления, патологоанатомических изменений, локализации возбудителя при атипичном колибактериозе с системным поражением органов зрения или репродуктивной функции позволяет ускорить постановку диагноза и применения мер борьбы, что приведет к сокращению потерь от колибактериоза в свиноводстве.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и одобрены на заседании секции «Ветеринарная биотехнология» отделения ветеринарной медицины Российской академии сельскохозяйственных наук, которое состоялось 25 ноября 1999 года. Атипичная форма колибактериоза, включая клиническое проявление, патологоанатомические изменения, сроки инфицирования плодов и меры борьбы с заболеванием включены в учебный процесс (лекции и лабораторные занятия) для студентов 3 курса факультета ветеринарной медицины.

Публикации. По теме диссертации опубликовано две статьи:

1. Бурлаков В.А., Беднягин В.Е. Атипичная форма колибактериоза поросят // Тезисы докладов Международной конференции, посвященной 80-летию МВА им. К.И. Скрябина. - М.: MB А и К.И. Скрябина, 1999. -С. 186-188. 8

2. Беднягин В.Е. Характеристика атипичной формы колибактериоза поросят // Сборник научных трудов молодых ученых. - М.: МГАВМ и Б им. К.И. Скрябина, 2000. - С. 32-34.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту: особенности клиники, патологоанатомических изменений, локализации, свойств возбудителя и мероприятий по борьбе с колибак-териозом при внутириутробном инфицировании поросят.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 124 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения и выводов. Список использованной литературы включает 160 публикаций по тематике исследований, из них 85 на русском языке и 75 зарубежных источников. Материалы иллюстрированы 26 фотографиями и 9 таблицами.

5. ВЫВОДЫ И ПРЕДЛОЖЕНИЯ 5.1. ВЫВОДЫ

1. Диагностированы атипичные формы колибактериоза с поражением органов зрения у плодов и поросят и репродуктивной функции у свиней.

2. В сравнительном аспекте описаны клинические признаки и пато-логоанатомические изменения при типичной и атипичной формах колибактериоза. Атипичные формы колибактериоза были обусловлены инфицированием плодов уже на ранних сроках после осеменения (25-30 дней).

3. Из патматериалов 4-х неблагополучных хозяйств выделено 796 культур эшерихий, изучены их морфологические, биохимические, серологические и вирулентные свойства. Проведена серотипизация 231 культуры: 9 % из них относились к 015, 12 % - к 078, 8 % - к 0127. 71 % культур не типировались производственными наборами поли- и моноагглютинирующих сывороток.

4. Изготовлены экспериментальные образцы вакцины против эше-рихиоза и сальмонеллеза свиней с использованием штаммов обусловивших атипичные формы колибактериоза. До применения вакцины в 4-х хозяйствах отход поросят колебался от 39 до 88 %, после применения вакцины заболеваемость снизилась на 68 % и отход был в пределах от 1,8 до 9,8 %.

5.2. Практическая значимость

Знание особенностей клинического проявления, патологоанатомиче-ских изменений, локализации возбудителя при атипичном колибактерио

106 зе с системным поражением органов зрения или репродуктивной функции позволяет ускорить постановку диагноза и применения мер борьбы, что приведет к сокращению потерь от колибактериоза в свиноводстве.

Сведения о практическом использовании полученных автором научных результатов: новые данные об атипичной форме колибактериоза, патологоанатомические изменения, локализацию возбудителя в органах и тканях плодов и поросят, меры борьбы с заболеванием используются при чтении лекций и лабораторных занятий со студентами 3 курса факультета ветеринарной медицины по теме: «Колибактериоз» (см. Приложение).

Рекомендации по использованию научных выводов: сложности при типировании возбудителей, дифференциальной диагностики заболеваний вызываемых энтеробактериями, неукомплектованность институтов музейными штаммами, показанные в данной работе и сообщения на основе этой работы на конференциях и координационных совещаниях позволили РАСХН и Департаменту ветеринарии РФ поставить вопрос о создании лаборатории энтеробактериозов.

107