Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Антимикробные свойства химических соединений классов азаадамантанов и четвертичных аминов
- Ученая степень
- кандидата ветеринарных наук
- ВАК РФ
- 16.00.03
Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Антимикробные свойства химических соединений классов азаадамантанов и четвертичных аминов
На правах рукописи
УДК 619 614 48
ВОЛОГИНА ИРИНА ВИКТОРОВНА
АНТИМИКРОБНЫЕ СВОЙСТВА ХИМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ КЛАССОВ АЗААДАМАНТАНОВ И ЧЕТВЕРТИЧНЫХ АМИНОВ
16 00 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология 16 00 06 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВВиМ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ)
Научные руководители
доктор биологических наук, старший научный сотрудник кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник
Селянинов Юрий Олегович Зубаиров Муртазали Мухтарович
Официальные оппоненты:
доктор ветёринарных наук, старший научный сотрудник доктор биологических наук, профессор
Кушнир Анатолий Тимофеевич Денисов Аркадий Алексеевич
Ведущая организация - ГНУ Всероссийский НИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (ГНУ ВНИИВСГЭ)
Защита диссертации состоится 11 июля 2008 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 006.003.01 при ГНУ Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии по адресу 601120, Владимирская обл, Покров, ГНУ ВНИИВВиМ Тел/ факс (49243) 62125
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИИВВиМ Автореферат разослан 2 июня 2008 г
Ученый секретарь диссертационного совета,
кандидат биологических наук Савукова В Я
1. Общая характеристика работы 1.1. Актуальность темы. В последней трети XX века, несмотря на определенные успехи в борьбе с инфекционными болезнями, значение инфекционной патологии, как одного из основных критериев здоровья населения, признано всем мировым медицинским и ветеринарным сообществом
Сегодня можно констатировать, что суммарная распространенность инфекционных (и паразитарных) болезней, несмотря на предпринимаемые усилия, направленные на борьбу с ними, не только не сокращается, но даже возрастает Так, если в начале 90-х годов в России ежегодно регистрировалось в среднем 30 млн случаев инфекционных заболеваний, то в последние годы эта величина превышает 40 млн [М Г Шандала, 2005, Н А Семина и др , 2006]
Мировой опыт борьбы с болезнями животных показал, что в системе мероприятий ветеринарного обеспечения здоровья всех видов животных наряду со специфической профилактикой важное место занимают антимикробная терапия и дезинфекционные мероприятия, которые позволяют значительно снизить наносимый отрасли экономический ущерб Это связано с тем, что хотя активная иммунизация и является наиболее эффективным средством предотвращения многих болезней вирусной и бактериальной этиологии, в ряде случаев высокая изменчивость и антигенная вариабельность патогенов, особенности их репродукции или биологических свойств, недостаточная изученность некоторых инфекционных болезней, могут свести на нет эффективность любых совершенных вакцин (последний пример - грипп птиц) [Н А Семина с соавт, 2006, А М Смирнов, 2006, М Г Шандала, 2003, В В Шкарин, 2006, Е Б Иванова, Е Б Ежлова, 2006]
В ветеринарной практике при проведении общих противоэпизоотических мероприятий для снижения микробной обсемененности наиболее широкое применение нашли такие вещества как гашеная известь, горячие растворы кальцинированной соды, растворы формальдегида, едкого натра, хлорной извести, гипохлорита кальция, хлорамина и др [А В Каштанов, 2003, М Р Саврилов, 2004, Н И Попов с соавт, 2005, А Э Высоцкий, 2005] Вместе с тем, эффективность их применения невысока, в рекомендуемых концентрациях они оказывают коррозионное действие, после применения этих соединений необходима
нейтрализация воздуха, их нельзя применять в присутствии животных Кроме того, большинство из применяемых препаратов может длительно находиться во внешней среде без изменения или трансформироваться до канцерогенов и экотоксинов [А Э Высоцкий, 2005, 2006] Следует отметить, что, не смотря на то, что за последние годы в России расширился ассортимент разрешенных к применению дезсредств в период 2001—2005 гг в РФ зарегистрировано более 100 дезинфектантов [М Г Шандала, 2006, Т А Костюкова, М Н Ляпин, Т А Малюкова, 2005], арсенал экологически безопасных препаратов, разлагающихся в природных условиях до продуктов, не загрязняющих окружающую среду, ограничен [МРСаврилов, 2004, Т А Костюкова, М Н Ляпин, Т А Малюкова, 2005] Поэтому изучение антибактериальных и антивирусных свойств соединений различных классов, с целью разработки новых нетоксичных, высокоэффективных, экологически безопасных антимикробных препаратов представляет собой весьма актуальную задачу для ветеринарной науки и практики [А Э Высоцкий, 2005, В Н Аржаков, М М Ермакович, П В Аржаков, 2003, 2004]
1.2. Цель и задачи исследования. Целью работы являлось изучение антимикробных свойств химических соединений в ряду азаадамантанов и четвертичных аминов, оценка взаимосвязи их химической структуры и бактерицидных свойств, а также определение их пригодности для применения в комплексе общих противоэпизоотических мероприятий
Для достижения поставленной цели необходимо бьшо решить следующие задачи
1 Провести скрининг производных азаадамантанов по антимикробной активности
2 Изучить m vitro антибактериальную активность отобранных соединений класса азаадамантанов в отношении тест-микроорганизмов, возбудителей токсикоинфекций (сальмонеллез, листериоз) и сибирской язвы.
3 Изучить антивирусную активность отобранных соединений класса азаадамантанов на модели ДНК-содержащего вируса миксомы кроликов и РНК-содержащего вируса гриппа А птиц
4 Оценить дезинфицирующие свойства тетраазадигомоадамантана и его производных на различных тест-объектах
5 Изучить токсикологические показатели безопасности тетраазадигомоадамантана и его производных
6 Провести электронно-микроскопическое изучение изменений бактериальных клеток под воздействием тетраазадигомоадамантана
7 Изучить антимикробную активность и обеззараживающие свойства соединений класса четвертичных аминов
1J. Научная новизна исследований. Научная новизна данной работы состоит в следующем
- изучена антимикробная активность 250 вновь синтезированных веществ, относящихся к химическому классу каркасных гетероциклических соединений группы азаадамантанов, в результате чего впервые установлена взаимосвязь характера и положения заместителей в боковых цепях и количества атомов азота в узловых положениях структуры азаадамантанов с их бактерицидной активностью,
- изучены бактерицидные и вирулицидные свойства наиболее активного соединения класса азаадамантанов - тетраазадигомоадамантана (теотропин) и двух его Zn- и ЫН3-содержащих производных,
установлена высокая инактивирующая способность тетраазадигомоадамантана и его производных в отношении тест-микроорганизмов, возбудителей токсикоинфекций (листериоз, сальмонеллез), сибирской язвы, ДНК- и РНК-содержащих вирусов
- изучены токсикологические показатели безопасности отобранных соединений и установлена их низкая токсичность (III класс опасности) для теплокровных животных,
- изучено влияние тетраазадигомоадамантана на ультраструктуру St aureus и установлены основные механизмы его бактерицидного действия,
- изучен спектр антимикробной активности соединений класса четвертичных аминов и их дезинфицирующие свойства
1.4. Теоретическая и практическая значимость исследований
Сведения, полученные при экспериментальной оценке антимикробного действия соединений класса азаадамантанов с различными заместителями в боковых цепях и количеством атомов азота в узловых положениях, а также четвертичных аминов дополнили теорию взаимосвязи структуры и антибактериальной активности в ряду этих соединений новыми данными и могут быть использованы при разработке препаратов, пригодных для эффективного и безопасного применения в комплексе противоэпизоотических мероприятий
Результаты экспериментальной работы использованы при разработке следующих документов
- проекта нормативной документации на препарат «Теотропин» СТО 00495549-0008-2006, предназначенный для профилактической и вынужденной дезинфекции объектов ветеринарно-санитарного надзора
- «Методические рекомендации по подготовке проб почв к исследованию на контаминацию возбудителем сибирской язвы» (2008 г)
Вышеперечисленные документы одобрены ученым советом и утверждены директором ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии
1.5. Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:
1 Теоретические и экспериментальные аспекты антимикробной активности соединений класса азаадамантанов
2 Результаты комплексного изучения бактерицидной, спороцидной, вирулицидной, обеззараживающей активности и токсикологических показателей безопасности тетраазадигомоадамантана и его производных
3 Экспериментальная оценка антимикробных свойств соединений класса четвертичных аминов
1.6. Апробация работы
Результаты исследований, выполненных по теме диссертационной работы, доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ ВНИИВВиМ (2005-2007 г г), межгосударственной научно-практической конференции «Санитарная охрана территорий государств - участников СНГ проблемы биологической безопасности и противодействия биотерроризму в современных условиях» (Волгоград, 2005), международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных» (Москва, 2005), международных научно-практических конференциях «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов» (Щелково, 2006, 2007), Международной научно-практической конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных» (Ульяновск, 2006)
1.7. Публикации
По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 1 статья в журнале «Ветеринария»
1.8. Личный вклад соискателя
Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором самостоятельно В выполнении работы по отдельным этапам работы оказывали практическую и консультативную помощь сотрудники ГНУ ВНИИВВиМ В Н Пономарев, Г Ф Архипова, И Ю Егорова
Соединения синтезировали сотрудники Московской государственной академии тонкой химической технологии им М В Ломоносова
1.9. Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 135 страницах и содержит следующие разделы введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований, обсуждение, выводы, дополнена приложениями Список литературы включает 197 источников Работа иллюстрирована 10 рисунками и 24 таблицами
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы
Микроорганизмы: культуры возбудителя сибирской язвы - В anthracis - вакцинный штамм 55-ВНИИВВиМ, инв№25 и М-71, инв.№6, кишечной палочки - Ecoh (штаммы К-12 (инв№17) и 195(3 (инв№21)), золотистого стафилококка - St aureus (штамм 209-Р), инв_№2, сальмонеллы -S enteritidis (инв №33), S tranoroa{инв№37), листерии - L monocytogenes (штамм 766 серогруппа I), В cereus штамм 96 (инв.№41), вирус гриппа А птиц подтип H5N), кат №2573, вирус миксомы кроликов штамм MP, кат №1827
Все перечисленные штаммы микроорганизмов получены из музея бактериальных культур и музея микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ
Культуры клеток:
первично-трипсинизированная культура клеток куриных эмбриональных фибробластов (ФЭК),
- перевиваемая культура клеток тестикул поросенка (ПТП), кат №10.1,
- перевиваемая культура клеток почки сибирского горного козерога, линия ПСГК-60, монослойный трофовариант, кат.№25,
- перевиваемая культура клеток почки крольчонка (RK-13), кат №36 Все культуры клеток получены в лабораториях «Биология и культивирование вирусов» и «Культуры клеток с музеем клеточных штаммов» ГНУ ВНИИВВиМ
Животные- аутбредные белые мыши живой массой 18-20 г, развивающиеся эмбрионы кур 8-10-дневного возраста, свободные от специфических патогенных агентов
Содержание и кормление осуществляли согласно принятым нормам Питательные среды, растворы, реактивы: питательная среда для культивирования клеточных культур Игла (MEM) фирм Sigma, Ну Clon, сыворотка плода КРС (Sigma,США), питательный бульон (ПБ) и агар (ПА) для культивирования микроорганизмов, желточно-солевой агар, солевой бульон, среда Эндо, SS-arap, среда Кода, питательный агар и бульон с 1% глюкозы, агар Сабуро, питательная среда для выделения и идентификации энтеробактерий сухая (SDS-бульон), физиологический раствор, дистиллированная вода, стерильная водопроводная вода, Tween-80, фосфатно-буферный раствор (ФБР), 3%-ная фосфорно-вольфрамовая кислота
Изучение антимикробной активности. Антимикробную (бактерицидную, спороцидную, вирулицидную) активность определяли методом серийных разведений препаратов согласно «Методическим указаниям по отбору, испытаниям и оценке антивирусных и антибактериальных химиопрепаратов среди соединений различных химических классов», (Москва, 2004), а также «Методическим указаниям по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам МУК 4 2 1890-04»
Изучение обеззараживающей активности. Обеззараживающую активность соединений определяли на тест-поверхностях из различных материалов согласно «Методам испытаний дезинфекционных средств для оценки их безопасности и эффективности» (Москва, 1998), а также как описано В И Вашковым, 1977
Определение показателей токсичности препаратов. Изучение токсических свойств препаратов проводили на культурах клеток, куриных эмбрионах и аутбредных белых мышах согласно методике, изложенной в «Методических указаниях по отбору, испытаниям и оценке антивирусных и
антибактериальных химиопрепаратов среди соединений различных химических классов», (Москва, 2004) и «Методах испытаний дезинфекционных средств для оценки их безопасности и эффективности» (Москва, 1998)
Электронная микроскопия. Для изучения изменений, происходящих в структуре бактериальных клеток под воздействием соединений проводили негативное контрастирование суспензий клеток, подвергшихся их воздействию с последующим микроскопированием при увеличении от 15 до 40 тыс раз
Статистическая обработка результатов. При анализе и обработке результатов исследований использовались статистические методы, описанные ИПАшмариным и А А Воробьевым (1962), а также пакет прикладных программ Statgraphics (Version 21) для персонального компьютера Достоверными считались данные, полученные после обобщения результатов не менее 3-х опытов
2.2. Результаты собственных исследований 2.2.1. Скрининг производных азаадамантанов по антимикробной активности
На данном этапе исследований нами были проведены эксперименты по первичной оценке антимикробной активности ряда синтезированных соединений химического класса каркасных гетероциклов групп аза- (моно-, ди-, три-, тетраазаадамантаны), азагомо- (ди-, три-, тетраазагомоадамантаны) и азадигомоадамантанов (тетраазадигомоадамантаны) с различными заместителями в боковой цепи (табл 1)
В общей сложности была оценена бактерицидная активность 250 веществ В качестве тест-микроорганизма использовали В anthracis штамм «55-ВНИИВВиМ» в вегетативной форме Вещества, не проявлявшие выраженной бактерицидной активности в концентрации 10,0 и более мг/см3, считались неактивными и дальнейшим испытаниям не подвергались
Как показали результаты исследований бактерицидная активность в концентрации 10 мг/см3 и менее выявлена приблизительно у 8 % исследованных соединений Характерно, что вещества с выраженной бактерицидной активностью в ходе скрининга обнаружены в основном в группе азагомо- и азадигомоадамантанов, тогда как среди представителей
группы азаадамантанов выявлено лишь 1 вещество со значимой бактерицидной активностью
Таблица 1
Тип химической структуры ряда соединений класса азаадамантанов, обладающих бактерицидной активностью
Структурный тип
Формула (шифр соединения, бактерицидная концентрация, _мг/см3)_
Моноазаадамантаны
АИ-1 (> 10 мг/см3) АИ-2 (> 10 мг/см3)
Ди-, три-,
тетраазаадамантаны
СООН
мн.
N к. /
АИ-3 (>10 мг/см3) АИ-4 (> 10 мг/см3) АИ-6 (1,25 мг/см3)
;=снс6н4ыо2
АИ-7 (> 10 мг/см3) АИ-8 (> 10 мг/см3)
\
Ди-, три-,
гетраазагомоадамантаны
ООН
АИ-1 В (1,25 мг/см3) АИ-19 (1,25 мг/см3) АИ-11 (>10 мг/см3)
N Н г
N02
\
¿¿Уч/
М е
АИ-12 (1,25 мг/см3) АИ-13 (0,3 мг/см3) АИ-9 (1,25 мг/см3)
Таким образом установлено, что соединения химического класса каркасных гетероциклов групп аза-, азагомо- и азадигомоадамантанов
обладают антимикробной активностью, которая в значительной степени варьирует и зависит от наличия, характера и положения заместителей Так, например, при введении у соединения 8-амино-1,3,6-триазагомоадамантан (АИ-11) в положение С(4) метальной группы (АИ-12) бактерицидная активность вещества возрастает в 8 раз, а при замене амино- на нитрогруппу в положении С(8) у этого же соединения (АИ-13) — более чем в 30 раз Синтез гомо- и дигомоадамантановых структур с атомами азота в узловых положениях ведет к повышению бактерицидной активности соединений в указанном классе химических веществ
Одним из наиболее перспективных для более углубленного изучения соединений явилось вещество - 1,3,6,8-тетраазатрицикло[4 4 1 I3,8] додекан (АИ-20, теотропин) Однако, теотропин - сильный комплексон, поэтому для улучшения проникающей способности было приготовлено два его комплексных производных - комплекс с ацетатом цинка (7п-тетраазадигомоадамантан - АИ-21) и с ЫН3 (ЫН3-тетраазадигомоадамантан -АИ-22), которые испытывались в сравнении с исходным соединением 2.2.2. Изучение спектра антимикробного действия тетраазадигомоадамантана и его производных 2.2.2.1. Бактерицидная активность тетраазадигомоадамантана и его
Ъп- и ]ЧН3-содержащих производных Бактерицидную активность соединений определяли методом серийных разведений, контроль полноты инактивации бактериальных суспензий - путем высева на твердые питательные среды В ходе опытов определяли минимальную бактерицидную концентрацию (МБК) изучаемых соединений в отношении тест-микроорганизмов, наиболее часто применяемых в качестве моделей для оценки эффективности дезинфектантов Результаты представлены в табл 2
Из данных таблицы 2 видно, что тетраазадигомоадамантан (АИ-20) в концентрациях 0,07-0,67мг/см3 полностью инактивирует все исследуемые микроорганизмы Бактерицидная активность его Ъл,- и ИНз-содержащих производных в отношении различных видов микроорганизмов несколько ниже и находится в пределах 0,13-0,78 мг/см3 и 0,07-0,67 мг/см3, соответственно Наиболее устойчивыми к действию испытуемых соединений являлись бактериальные клетки ВсегеиБ штамм 96, которые погибали при воздействии тетраазадигомоадамантана и его ЫН3-производного (АИ-21) в
концентрации 0,67±0,03 мг/см3, а Zn-содержащего производного (АИ-22) -0,78±0,00 мг/см3
Дополнительно была изучена динамика инактивации испытуемых тест-микроорганизмов тетраазадигомоадамантаном и его производными (рис 1-3) Установлено, что инактивация микроорганизмов тетраазадигомоадамантаном (АИ-20) проходит несколько быстрее, чем его производными При концентрации тетраазадигомоадамантана 0,313% рост тест-микроорганизмов на поверхности агара отсутствовал через 3 часа после внесения инактиванта, тогда как аналогичное количество Zn- (АИ-21) и NH3-производных (АИ-22) инактивировало бактерии St aureus 209-Р и Е coll К-12 в более поздние сроки
Таблица 2
Бактерицидная активность тетраазадигомоадамантана и его производных
п=3
Микроорганизм Бактерицидная активность соединений, мг/см
АИ-20 АИ-21 АИ-22
В anthracis штамм «55-ВНИИВВиМ» 0,39±0,00 0,32±0,07 0,39±0,00
В cereus штамм 96 0,67±0,03 0,78±0,00 0,67±0,03
St aureus штамм 209-Р 0,32±0,07 0,32±0,07 0,39±0,00
L monocytogenes 766 0,20±0,00 0,20±0,00 0,20±0,00
Е coh штамм К-12 0,17±0,03 0,32±0,09 0,25±0,07
Е coll штамм 195 Р 0,12±0,03 0,25±0,07 0,12±0,03
S enteritidis 0,19±0,00 0,30±0,01 0,19±0,00
S tranoroa 0,07±0,02 0,13±0,03 0,07±0,02
Примечание АИ-20 - тетраазадигомоадамашан,
АИ-21 - Zn-содержащее производное тетраазадигомоадамантана, АИ-22 - NH3 -содержащее производное тетраазадигомоадамантана
Через 24 часа экспозиции инактивацию культур St aureus 209-Р, Е coli К-12, Е coli 195ß и S enteritidis наблюдали при концентрации тетраазадигомоадамантана не ниже 0,032%, 0,017%, 0,012% и 0,019%, соответственно Кроме того, чем выше была концентрация внесенных в бактериальную суспензию инактивантов, тем быстрее снижалось количество живых микробов
Результаты экспериментов свидетельствуют о наличии у тетраазадигомоадамантана и его производных высокой бактерицидной активности в отношении как грамположительной, так и грамотрицательной микрофлоры Несмотря на незначительные различия, грамотрицательные микроорганизмы более чувствительны к инактивирующему воздействию соединений, чем грамположительные - инактивация клеток Е coli и S
enteritidis происходила при более низких концентрациях и за более короткое время, чем St. aureus.
3 6 9 18 24
Экспозиция в часах
Рис. 1. Бактерицидная активность тетраазадигомоадамантана в отношении различных видов бактерий.
3 6 9 18 24
Экспозиция в часах
Рис. 2. Бактерицидная активность ¿п-содержащего производного тетраазадигомоадамантана в отношении различных видов бактерий.
Экспозиция в часах
Рис. 3. Бактерицидная активность 14Нз-содержащего производного тетраазадигомоадамантана в отношении различных видов бактерий.
Показано, что белки питательной среды (белковая нагрузка) оказывают влияние на активность испытуемых соединений, снижая ее в 1,23-2,78 раза Наиболее выраженное снижение активности наблюдалось в отношении культур кишечной палочки Белковый индекс (отношение концентрации препарата, вызывающей гибель микроорганизмов в присутствии белковой нагрузки к концентрации препарата без добавления белков в те же сроки) тетраазадигомоадамантана для St aureus 209-Р равнялся 1,23, Е coli К-12 -1,89, £ coli 195ß- 1,00, S enteritidis - 1,33
2.2.2.2. Спороцидная активность тетраазадигомоадамантана и его Zn- и ТЧНз-содержащих производных Так как исследуемые соединения обладали выраженной бактерицидной активностью, нами была изучена их спороцидная активность, которую оценивали в отношении В anthracis (штаммы «55-ВНИИВВиМ» и М-71) и близкородственных спорообразующих сапрофитов (В cereus штамм 96) Результаты представлены в табл 3
Таблица 3
Спороцидная активность тетраазадигомоадамантана и его производных,
мг/см3
п=3
Шифр соединения В anthracis 55-ВНИИВВиМ В anthracis М-71 В cereus 96
Экспозиция, ч
24 48 24 48 24 48
АИ-20 12,5 0,78 25,0 12,5 50,0 6,25
АИ-21 12,5 3,13 25,0 6,25 50,0 6,25
АИ-22 25,0 6,25 25,0 12,5 50,0 25,0
Примечание АИ-20 - тетраазадигомоадаманган,
АИ-21 - Zn-содержащее производное тетраазадигомоадамантана, АИ-22 - ЫНз-содержащее производное тетраазадигомоадамантана
Из данных таблицы 3 видно, что наиболее устойчивыми к воздействию тетраазадигомоадамантана и его производных являлись споры В сегеия 96, которые гибли через 24 часа при содержании действующего вещества 50,0 мг/см3 Споры В агикгасю 55-ВНИИВВиМ и М-71 инактивировались тетраазадигомоадамантаном и гп-содержащим производным при 24-часовой экспозиции в концентрациях 12,5 мг/см3 и 25,0 мг/см3, соответственно При увеличении времени контакта до 48 часов эти показатели снижались в 2 - 16
раз Споры В cereus 96 инактивировались изучаемыми соединениями в концентрации 50,0 мг/см3
2.2.2.3. Вирулицидная активность тетраазадигомоадамантана и его
Zn- и 1ЧНз-содержащих производных Для оценки вирулицидной активности исследуемых соединений были использованы РНК-содержащий вирус гриппа А птиц (подтип H5N1) и ДНК-содержащий вирус миксомы кроликов (штамм MP)
В ходе проведенных опытов установлено, что тетраазадигомоадамантан и его производные в концентрации 0,1% (по действующему веществу) оказывают вирулицидное действие по отношению вируса гриппа А птиц при экспозиции 3 часа и по отношению вируса миксомы кроликов при экспозиции 10-12 часов и температуре 37°С
Таким образом, проведенные исследования указывают на широкий спектр антимикробного действия исследованных соединений, как в отношении вирусов различных таксономических групп (вирусы гриппа А птиц и миксомы кроликов), так и в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий (Staphylococcus aureus, Escherihia coli, Salmonella enteritidis, Salmonella tranoroa, Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Listeria monocytogenes)
2.2.3 Изучение обеззараживающих свойств тетраазадигомоадамантана и его Zn- и РШ3-содержащих производных На первом этапе исследований нами были проведены опыты по изучению бактерицидного действия 5,0%-ных растворов соединений по отношению Е coli К-12, Е coli 195ß, St aureus 209-P, Sal enteritidis in vitro
Установлено, что в зависимости от вида тест-микроорганизма время, необходимое для его полной инактивации, находилось в пределах 2-3 часов для 5,0%-ных растворов всех испытуемых соединений Менее выраженной бактерицидной активностью обладало Zn-содержащее производное тетраазадигомоадамантана
Учитывая, что инактивирующее действие препаратов in vitro может не соответствовать их бактерицидной активности в отношении микроорганизмов, находящихся на объектах внешней среды, нами изучена активность их растворов при нанесении на тест-объекты из различных материалов
Обеззараживающую активность 5%-ных растворов
тетраазадигомоадамантана и его производных изучали на батистовых тест-объектах в отношении пяти тест-культур микроорганизмов Escherichia coli (штаммы К-12 и 195Р), Staphylococcus aureus (штамм 209-Р), Salmonella enteritidis и В anthracis в споровой форме Результаты исследований представлены в табл 4
Из представленных в табл 4 данных видно, что эффективность изучаемых соединений в отношении тест-микробов, находящихся на батистовых тест-объектах, характеризовалась следующими показателями 5%-ные растворы тетраазадигомоадамантана и его производных при температуре 37°С инактивировали не спорообразующие тест-микроорганизмы в течение не менее 1 часа При температуре 20-22°С 5%-ные растворы тетраазадигомоадамантана и его производных инактивировали культуры этих же микроорганизмов после 18-24 часовой экспозиции
Таблица 4
Динамика инактивации тест-микроорганизмов на батистовых тест-объектах при температурах инкубации 37°С и 20-22°С
п=3
Соединение Тест-микроорганизм Экспозиция, ч Контроль
t=37"C t=20-22"C
1 3 6 9 18 18 24 48 72
5%-ный раствор АИ-20 Ecoli К-12 + - - - - + - - - +
Е coli 195 ß + - - - - + - - - +
St aureus 209-Р + - - - - + - - - +
S enteritidis + - - - - + - - - +
Споры В anthracis 55-ВНИИВВиМ + + + + + + + + + +
5%-ный раствор АИ-21 Ecoli К-12 + - +
Ecoh 195 ß + - - - - + - - - +
St aureus 209-P + - +
S enteritidis + - - - - + - - - +
Споры В anthracis 55-ВНИИВВиМ + + + + + + + + + +
5%-ный раствор АИ-22 E coli К-12 + - - - - + - - - +
Ecoh 195 ß + - - - - + - - - +
St aureus 209-P + - - - - + - - - +
S enteritidis + - - - - + - - - +
Споры В anthracis 55-ВНИИВВиМ + + + + + + + + + +
Примечание «+/-»- наличие/отсутствие роста тест-микроорганизма,
АИ-20 - тетраазадигомоадамантан,
АИ-21 - Zn-содержащее производное тетраазадигомоадамантана, АИ-22 - ЫНз-содержащее производное тетраазадигомоадамантана
Полной инактивации спор В anthracis при испытанных условиях проведения эксперимента не наблюдалось
Изучение эффективности исследуемых соединений при обеззараживании поверхностей проводили по общепринятой методике В качестве тест-объектов использовали гладкие (стекло) и пористые (метлахская плитка) тест-поверхности Инактивирующую активность исследуемых соединений изучали в отношении тест-культур, обозначенных в «Инструкции по определению свойств новых дезинфицирующих средств» - St aureus, Е coli, В anthracis, дополнительно нами была изучена активность соединений по отношению к L monocytogenes Обработка проводилась методом полива из расчета 5 см3 рабочего раствора препарата (температурой 20-22°С и 40-80°С) на 100 см2 обрабатываемой поверхности Контрольные поверхности обрабатывались стерильной водопроводной водой При этом за 100% результат принималось отсутствие (в трех повторностях) роста возбудителей в смывах с поверхностей после проведенной дезобработки, при росте возбудителя в посевах с контрольных поверхностей Результаты представлены в табл 5
Таблица 5
Бактерицидная активность 5%-ных растворов азаадамантанов
п=3
Микро- Экспо- t Тест-объект Контроль
организм зиция, раствора,°С Стекло Метлахская
ч плитка
АИ- АИ- АИ- АИ- АИ- АИ-
20 21 22 20 21 22
1 40 + + + + + + +
60 - - - - - - +
St aureus 2 + + + + + + +
3 20-22 - - - + + + +
4 - - - - - - +
20 + + + + + + +
1 70 + + + + + + +
L monocytogenes 80 - - - - - - +
3 20-22 - - - - - - +
1 - - + - - + +
2 70 - - - - - - +
E coli + + + + + + +
3 20 - - - - - - +
Примечание «+/-»- наличие/отсутствие роста тест-микроорганизма
АИ-20 - тетраазадигомоадамантан,
АИ-21 - Zn-содержащее производное тетраазадигомоадамантана, АИ-22 - NH3 -содержащее производное тетраазадигомоадамантана
Как видно из данных табл 5 при температуре раствора 20-22°С время контакта, необходимое для полного обеззараживания поверхности стекла и метлахской плитки колеблется от 3 до 4 часов в зависимости от типа тест-объекта и вида микроорганизма
При повышении температуры рабочего раствора до 60-80°С экспозиция, необходимая для полного обеззараживания стекла и метлахской плитки, обсемененных вегетативными формами микроорганизмов уменьшается до 1 часа
Испытуемые растворы при аналогичных условиях не вызывают полной инактивации ВаШгаав нанесенных на поверхность метлахской плитки и стекла, ни в споровой, ни в вегетативной формах
Другим не менее важным объектом для обеззараживания является почва, которая часто контаминирована патогенными микроорганизмами, в частности В ашИгаск, длительно сохраняющим в ней свою жизнеспособность [Е В Пименов и соавт, 2000, И А Бакулов и соавт, 2001, Б Л Черкасский, 2002, П И Маринин, 2006, Н П.Иванов, 2006], представляя постоянную угрозу возникновения заболевания В связи с этим разработка методов индикации и средств деконтаминации почвы являются одними из наиболее важных задач при проведении противоэпизоотических мероприятий при сибирской язве Известно, что существующие в настоящее время методы выделения возбудителя сибирской язвы из проб почв не обладают достаточно высокой эффективностью - процент выделения патогена из почвы колеблется от 0,6 до 9,7 [П Н Бургасов и сотр, 1970, А Г Абгарян и сотр, 2003] Для получения более объективных данных о количественном содержании сибиреязвенных спор в пробах почвы нами была проведена работа по усовершенствованию способа пробоподготовки почв для исследования на контаминацию возбудителем сибирской язвы В результате работ по оптимизации состава элюирующей жидкости и непосредственно методики пробоподготовки почвы, включающей двукратную элюцию, отмывку спор от остатков элюирующей жидкости центрифугированием и концентрирование, эффективность выделения спор ВамИгаск из почвы была повышена в 7,6-12 раз. Разработаны «Методические рекомендации по подготовке проб почв для исследования на контаминацию возбудителем сибирской язвы», которые рассмотрены на ученом совете и утверждены директором ГНУ ВНИИВВиМ (27 03 2008 г)
В ходе экспериментов по обеззараживанию почвы установлено, что в песчаной почве 5%-ный раствор тетраазадигомоадамантана инактивирует споры при 2-х суточной экспозиции В черноземной и глинистой почвах единичные жизнеспособные споры выявлялись и после 4 суток экспозиции Вероятно, это связано с наличием органических веществ, которые взаимодействуют с активными группами дезинфектантов и блокируют их действие Дополнительно нами были проведены исследования, в ходе которых установлено, что только при сочетанном применении химического и физического методов (использование тетраазадигомоадамантана и прогревания при температуре 80°С) обработки зараженной почвы независимо от ее типа в течение 1 часа происходит полная инактивация спор штамма 55-ВНИИВВиМ возбудителя сибирской язвы
2.2.4. Изучение токсикологических показателей тетраазадигомоадамантана и его Ъа- и 1ЧН3-содержащнх производных
Препараты, используемые в качестве обеззараживающих веществ при проведении общих противоэпизоотических мероприятий в присутствии животных в соответствии с требованиями, предъявляемыми к ним, наряду с высокими бактерицидными и дезинфицирующими свойствами, не должны оказывать вредного воздействия на организм животного, птиц и человека Учитывая это, нами были проведены исследования по изучению ряда токсикологических показателей отобранных соединений, характеризующих степень воздействия химических средств на биологические системы организма
Объем токсикологических исследований включал изучение цитотоксического действия соединений на культуру клеток (определение максимально переносимой дозы - МПД), определение МПД соединений на развивающихся куриных эмбрионах, а также при пероральном введении белым мышам
В ходе экспериментов установлено, что токсическое действие соединений на культуры клеток проявляется на 4-6-сутки инкубирования в зависимости от испытуемой культуры и дозы вносимого вещества, характеризуется образованием конгломератов клеток и в дальнейшем полным отслоением монослоя
Анализ полученных результатов показал, что МПД тетраазадигомоадамантана и его 7п-содержащего производного для культуры
клеток ФЭК составляет 3125 мкг/см3 (спустя 6 суток инкубирования), для культуры клеток ПТП - 1562,5 мкг/см3 (спустя 4 суток инкубирования), для культуры клеток ПСГК-60 МПД тетрааздигомоадамантана составляет - 250 мкг/см3, NH3- и Zn-содержащих производных - 97,65 мкг/см3 и 195,3 мкг/см3 (спустя 2 суток инкубирования), соответственно
МПД тетраазадигомоадамантана для РЭК составляет 729,0 мкг/КЭ, а его Zn- и ЫНз-содержащих производных - 1938,0 мкг/КЭ и 400,0 мкг/КЭ, соответственно (табл 6) Существенных отклонений в развитии РЭК опытных групп, которым вводили соединения, по сравнению с контрольными группами не отмечено
Таким образом, исследованные соединения обладают низкой токсичностью для РЭК и культур клеток, а в указанных дозах не обладают терратогенным действием
МПД для белых мышей при введении тетраазадигомоадамантана per os составляет 3500,0 мг/кг (70,0 мг/гол), Zn-содержащего производного - более 750,0мг/кг (15,0 мг/гол), а ЫН3-содержащего производного - более 500,0 мг/кг (10,0 мг/гол) (табл 6)
Таблица 6
Характеристика токсических свойств тетраазадигомоадамантана и его
производных
п=3
Шифр соединения Характеристика
МПД для РЭК мг/КЭ МПД для культур клеток, мкг/см3 Острая токсичность на белых мышах (МПД), мг/кг
ФЭК ПТП ПСГК
АИ-20 729,0 3125,0 1562,5 250,0 3500,0
АИ-21 1938,0 3125,0 1562,5 195,3 >750,0
АИ-22 400,0 Ни Ни 97,65 >500,0
Примечание ФЭК - первично трипсинизированная культура куриных эмбриональных фибробластов, ПТП - перевиваемая культура тестикул поросенка, ПСГК - перевиваемая культура почки сибирского горного козерога, Н и - не исследовалась АИ-20 - тетраазадигомоадаманган, АИ-21 - 2п-содержащее производное тетраазадигомоадамантана, АИ-22 - N11 (-содержащее производное тетраазадигомоадамантана
Клиническая симптоматика острого отравления
тетраазадигомоадамантаном для белых мышей носила дозозависимый характер Признаки интоксикации при этом проявлялись через 3-5 минут и характеризовались сильным беспокойством, одышкой, дрожью, ослаблением сердечно-сосудистой деятельности, параличами. Смерть наступала через 0,5 -1 час после введения препарата Картина патолого-анатомических изменений характеризовалась общим венозным застоем, отеком легких, асфиксией
Полученные данные свидетельствуют о том, что тетрааздигомоадамантан и его производные согласно ГОСТ 12 1 007-76 относятся к классу умеренно опасных веществ
2.2.5. Определение срока годности рабочих растворов тетраазадигомоадамантана и его производных Определение срока годности рабочих растворов проводили на основе метода «ускоренного старения» при повышенной температуре (37°С) и при температуре 20-22°С Для определения срока годности образцы 5%-ных растворов тетраазадигомоадамантана и ЫН3-производного, а также 2,5%-ный раствор Zn-содержащего производного помещали во флаконы, которые хранили при указанных температурах
Основным показателем, по которому определялась стабильность растворов в процессе хранения, служила их бактерицидная активность по отношению к вегетативной форме штамма «55-ВНИИВВиМ» В anthracis
Установлено, что бактерицидная активность рабочих водных растворов тетраазадигомоадамантана и его производных сохраняется не менее 3 месяцев при температуре хранения 20-22°С и не менее 1 месяца при температуре хранения 37°С
2.2.6. Электронно-микроскопическое изучение изменений бактериальных клеток под воздействием тетраазадигомоадамантана В данных экспериментах мы применяли методику, позволяющую изучать динамику инактивации бактерий на популяционном уровне [Е А Голов, 2005, И Б Павлова и соавт, 2007], которая основана на определении числа колониеобразующих единиц (КОЕ) микроорганизмов до и после воздействия антимикробных соединений с последующим исследованием электронной микроскопией специально подготовленных образцов
Электронно-микроскопические исследования изменений структуры клеток St aureus под воздействием тетраазадигомоадамантана, позволили выявить определенные закономерности процесса инактивации Так, исходные микробные клетки в основном представлены в виде микроколоний, заключенных в оболочки В течение 30 мин тетраазадигомоадамантан вызывает разрыхление покровов микроколоний и нарушение их структуры в виде снижения плотности упаковки за счет расхождения отдельных клеток После 60 минутной экспозиции в поле зрения микроскопа наблюдаются
разъединенные клетки с разрыхленной клеточной стенкой, а при более продолжительном воздействии (120 и 180 мин) - не имеющие четко очерченных границ округлые образования с темным центром и светлой периферией
Полученные данные, а также данные литературы о биологических свойствах азаадамантанов, позволяют сделать предположение о том, что основным механизмом действия соединения АИ-20 является его воздействие на внутриклеточные структуры и, в частности, блокировка матрично-генетической функции нуклеиновых кислот Дезинтегрирующее действие соединения на покровы микроколоний стафилококков с последующим разрушением их клеточной стенки и внутриклеточных компонентов позволяет инактивировать оставшуюся, наиболее устойчивую к воздействию химических веществ часть популяции St aureus
Представленные результаты экспериментов позволяют сделать следующее заключение растворы тетраазадигомоадамантана и его Zn- и ЫНз-содержащих производных обеззараживают тест-объекты из различных материалов, контаминированных микроорганизмами и могут применяться в качестве дезинфектантов среднего уровня при проведении общих противоэпизоотических мероприятий, направленных на уменьшение микробной обсемененности и улучшение ветеринарно-санитарной обстановки в животноводческих помещениях
Для подтверждения эффективности применения
тетраазадигомоадамантана нами были проведены его испытания в производственных условиях в свиноводческих хозяйствах, на мясоперерабатывающих предприятиях Московской и Смоленской областей, Госкомплексе «Завидово» Тверской области Установлена высокая эффективность дезинфекции помещений с применением 2 - 5%-ных водных растворов препарата, в том числе использованных и в присутствии животных
2.2.7. Изучение спектра антимикробной активности некоторых четвертично-аммониевых соединений
Нами было проведено изучение антимикробной активности следующих соединений, относящихся к этому классу - клатрат додецилдиметилдиаммоний бромида, бензилтриэтиламмоний бромида и 1,2 -этилен-бис-(Ы,К-диметил-карбдецил-оксиметил)-аммония дихлорида
(этоний) Поскольку только первое из них обладало выраженной активностью в отношении возбудителя сибирской язвы, более глубокие исследования антимикробной активности были проведены именно с этим соединением
Установлено, что клатрат додецилдиметилдиаммоний бромида обладает выраженной вирулицидной, бактерицидной, спороцидной активностью по отношению к St aureus штамм 209-Р, В anthracis штамм 55-ВНИИВВиМ, В cereus штамм 96, а также к вирусам гриппа А птиц и миксомы кроликов
В ходе проведенных экспериментов установлено, что это соединение в концентрации 0,039-0,078 мг/см3 оказывает бактерицидное действие на В anthracis, В cereus и St aureus, а в концентрации 0,15-0,31 мг/см3 оказывает спороцидное действие на В anthracis и В cereus Раствор клатрата додецидиметиламмоний бромида в 1%-ной концентрации обладает вирулицидной активностью, инактивируя вирусы гриппа А птиц и миксомы кроликов при экспозиции 15 мин, при экспозиции 1 час обладает обеззараживающей активностью, полностью инактивируя St aureus, а также вегетативные формы Bacillus anthracis и В cereus, нанесенные на метлахскую плитку и окрашенные металлические поверхности При оценке инактивирующей активности испытуемого четвертично-аммониевого соединения в отношении споровых форм микроорганизмов установлено, что при 2 часовой экспозиции происходит обеззараживание контаминированных окрашенных металлических поверхностей, а при 3 часовой экспозиции -метлахской плитки, контаминированной спорами Bacillus anthracis
Таким образом, среди соединений класса четвертичных аминов имеются вещества как не обладающие антимикробной активностью, так и обладающие различным уровнем противомикробного действия, вплоть до высокоактивных Из трех испытанных ЧАС клатрат додецилдиметилдиаммоний бромид обладает наиболее выраженным бактерицидным, спороцидным и вирулицидным действием, которое в испытаниях in vitro проявляется при экспозиции 15 минут В то же время бактерицидность данного соединения в экспериментах с использованием однократной обработки тест-объектов методом орошения 1 %-ным раствором проявляется после 1 часовой экспозиции, а спороцидность после 2-3 часов воздействия Это указывает на то, что его, в отличие от тетраазадигомоадамантана и его производных, можно использовать лишь в
качестве потенцирующей добавки в составе композиционных антимикробных средств
Выводы
1 При изучении бактерицидной активности химических соединений класса азаадамантанов, синтезированных в Московской государственной академии тонкой химической технологии им М В Ломоносова, установлено, что из 250 производных лишь 20 (8 %) обладают выраженным антимикробным действием
2 Тетраазадигомоадамантан и его Zn- и NH3-содержащие производные обладают широким спектром антимикробной, в том числе спороцидной активности в отношении грамотрицательной и грамположительной микрофлоры (Staphylococcus aureus, Escherihia colt, Salmonella enteritidis, Salmonella tranoroa, Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Listeria monocytogenes), имеющей этиологическое значение в инфекционной патологии Бактерицидная концентрация колеблется от 0,07 до 0,78 мг/см3, а спороцидная - от 12,5 до 50,0 мг/см3 в зависимости от вида микроорганизма
3 Исследуемые химические соединения в концентрации 0,1% оказывают вирулицидное действие по отношению к вирусам различных таксономических групп (вирус гриппа А птиц (РНК-содержащий), вирус миксомы кроликов (ДНК-содержащий))
4 Установлено, что 5%-ные растворы изучаемых веществ обеззараживают тест-поверхности, контаминированные штаммами кишечной палочки, золотистого стафилококка и листерий в течение 3-4 часов
5 Тетраазадигомоадамантан и его Zn- и ИНз-содержащие производные по токсикологическим показателям безопасности являются малотоксичными препаратами и согласно ГОСТ 12 1 007-76 относятся к классу умеренно опасных веществ
6 При определении срока годности рабочих растворов тетраазадигомоадамантана и его производных показано, что они не снижают антимикробной активности в течение не менее 3 мес при температуре 20°С
7 При электронно-микроскопическом исследовании культур стафилококка, подвергнутых воздействию тетраазадигомоадамантана, установлены морфологические изменения, характеризующиеся разрыхлением микроколоний, разъединением клеток и разрыхлением клеточной стенки бактерий
8 Из трех испытанных четвертично-аммониевых соединений - клатрат додецилдиметилдиаммоний бромида, бензилтриэтиламмоний бромида и 1,2-Этилен-бис-(Ы,Н-диметил-карбдецил-оксиметил)-аммония дихлорида
(этоний), только первое обладает наиболее выраженным бактерицидным, спороцидным и вирулицидным действием
Практические предложения
В комплексе мероприятий по борьбе, профилактике и ликвидации инфекционных болезней животных применять безопасный препарат «Теотропин», предназначенный для профилактической и вынужденной дезинфекции объектов ветеринарно-санитарного надзора (СТО 004955490008-2006) Эффективность применения теотропина подтверждена положительными результатами испытаний, проведенных в свиноводческих хозяйствах, на мясоперерабатывающих предприятиях Московской и Смоленской областей, Госкомплексе «Завидово», Тверской области
На основании проведенных исследований разработаны, утверждены директором ГНУ ВНИИВВиМ и рекомендуются для практического применения «Методические рекомендации по подготовке проб почв к исследованию на контаминацию возбудителем сибирской язвы» (протокол №3 от 26 03 2008г)
Список работ, опубликованных по материалам диссертации
1 Вологина, И В Антимикробное действие производных азаадамантанов / ИВ Вологина, И Ю Егорова // Санитарная охрана территорий государств - участников СНГ проблемы биологической безопасности и противодействия биотерроризму в современных условиях материалы VI Межгосударст науч -практ конф государств - участиников СНГ, Волгоград - 2005 - С 215-217
2 Вологина, И В Дезинфицирующие средства в ветеринарии / И В Вологина / Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных материалы Междунар науч -практ конф / ВИЭВ -Москва -2005 -С 601-603
3 Егорова, И Ю Сравнительная эффективность методов индикации Bacillus anthracis в почве / И Ю Егорова, Ю О Селянинов, И В Вологина // Ветеринария -2006 -№6 - С 26-30
4 Вологина, И В Сравнительное изучение антимикробной активности теотропина и его производных /ИВ Вологина, Ю О Селянинов,
М М Зубаиров // Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных материалы Междунар науч конф -Ульяновск — ГСХА -2006 -С 396-400
5 Вологина, И В Изучение дезинфицирующих свойств азаадамантана и его производных / ИВ Вологина, Ю О Селянинов // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов материалы Междунар науч -прак конф - Щелково - 2006 - С 220-224
6 Вологина, И В Антимикробная активность и характеристики токсических свойств теотропина и его производных /ИВ Вологина // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов материалы Междунар науч -практ конф - Щелково - 2007 - С 345-349
Отпечатано в типографии ГНУ ВНИИВВиМ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ, г Покров Владимирской области Тираж 75 экз
Оглавление диссертации Вологина, Ирина Викторовна :: 2008 :: Покров
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
1. ВВЕДЕНИЕ
1.1. Актуальность работы
1.2. Цель и задачи исследований
1.3. Научная новизна исследований
1.4. Практическая значимость исследований
1.5. Основные положения диссертационной работы, 9 выносимые на защиту
1.6. Апробация работы
1.7. Публикации
1.8. Личный вклад соискателя
1.9. Структура и объем работы
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Представления о строении поверхностных структур 12 бактериальных клеток
2.1.1. Строение клеточной стенки бактерий
2.1.1.1. Особенности строения клеточной стенки 14 грамположительных бактерий
2.1.1.2. Особенности строения клеточной стенки 17 грамотрицательных бактерий
2.1.2. Строение цитоплазматической мембраны
2.1.3. Структура бактериальных спор
2.1.4. Основы взаимодействия дезинфектантов с бактериями
2.2. Основные классы соединений, применяемых в системе 25 общих противоэпизоотических мероприятий, их физико-химические свойства, механизм действия и антимикробная активность
2.2.1. Гидроксилсодержащие ароматические соединения
2.2.2. Галоиды - хлор- и йодсодержащие соединения
2.2.3. Окислители
2.2.4. Спирты
2.2.5. Альдегиды
2.2.6. Поверхностно-активные вещества
2.2.7. Сложные эфиры
2.2.8. Лактоны
2.2.9. Кислоты
2.2.10. Щелочи
2.2.11. Соли тяжелых металлов
2.3. Требования, предъявляемые к дезинфицирующим 42 препаратам, применяемым при проведении общих противоэпизоотических мероприятий
Оглавление
Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Вологина, Ирина Викторовна, автореферат
1.1 Актуальность темы. В последней трети XX века, несмотря на определенные успехи; в, борьбе, с инфекционными болезнямщ значение инфекционной патологии, как одного из основных критериев здоровья населения, признано всем мировым медицинским и ветеринарным сообществом.
Сегодня можно констатировать, что суммарная распространенность инфекционных (и паразитарных) болезней, несмотря на предпринимаемые усилия^ направленные на борьбу с ними, не только не сокращается, но даже возрастает. Так, если в> начале 90-х годов в России; ежегодно регистрировалось, в; среднем 30 млн. случаев инфекционных заболеваний, то в последние годы эта величина превышает 40 млн. [М.Г.Шандала, 2005; Н;А.Семина и др., 2006]i
Мировой опыт борьбы с болезнями животных; показал, что в, системе мероприятий ветеринарного обеспечения' здоровья; всех видов животных наряду со специфической профилактикой важное место занимают антимикробная терапия и дезинфекционные мероприятия, которые позволяют значительно снизить наносимый отрасли экономический ущерб. Это связано с тем, что хотя активная иммунизация- и является наиболее эффективным средством предотвращения многих болезней вирусной; и бактериальной этиологии, в ряде случаев высокая изменчивость и антигенная вариабельность патогенов,, особенности, их репродукции или биологических свойств, недостаточная изученность некоторых инфекционных болезней,, могут свести на нет эффективность любых совершенных вакцин.(последний пример - грипп птиц) [Н.А.Семина с соавт., 2006; А.М.Смирнов, 2006; М.Г.Шандала, 2003; В;В;Шкарин, 2006; Е.Б.Иванова, Е.Б.Ежлова, 2006].
В ветеринарной практике при проведении общих противоэпизоотических мероприятий для снижения; микробной обсемененности наиболее широкое применение нашли такие вещества как гашеная известь, горячие растворы кальцинированной соды, растворы
Введение7 формальдегида, едкого натра, хлорной извести, гипохлорита кальция, хлорамина и др. [А.В.Каштанов, 2003; М.Р.Саврилов, 2004; Н.И.Попов с соавт., 2005; А.Э.Высоцкий, 2005]. Вместе с тем, эффективность их применения невысока, в рекомендуемых концентрациях они оказывают коррозионное действие, после применения этих соединений необходима нейтрализация воздуха, их нельзя применять в присутствии животных. Кроме того, большинство из применяемых препаратов может длительно находиться во внешней среде без изменения или трансформироваться до канцерогенов и экотоксинов [А.Э.Высоцкий, 2005, 2006]. Следует отметить, что, не смотря на то, что за последние годы в России расширился ассортимент разрешенных к применению дезсредств: в период 2001—2005 гг. в РФ зарегистрировано более 100 дезинфектантов [М.Г.Шандала, 2006; Т.А.Костюкова, М.Н.Ляпин, Т.А.Малюкова, 2005], арсенал экологически безопасных препаратов, разлагающихся в природных условиях до продуктов, не загрязняющих окружающую среду, ограничен [М.Р.Саврилов, 2004; Т.А.Костюкова, М.Н.Ляпин, Т.А.Малюкова, 2005]. Поэтому изучение антибактериальных и антивирусных свойств соединений различных классов, с целью разработки новых нетоксичных, высокоэффективных, экологически безопасных антимикробных препаратов представляет собой весьма актуальную задачу для ветеринарной науки и практики [А.Э.Высоцкий, 2005; В.Н.Аржаков, М.М.Ермакович, П.В.Аржаков, 2003, 2004].
Заключение диссертационного исследования на тему "Антимикробные свойства химических соединений классов азаадамантанов и четвертичных аминов"
Выводы114 разрыхлением микроколоний, разъединением клеток и разрыхлением клеточной стенки бактерий.
8. Из трех испытанных четвертично-аммониевых соединений - клатрат додецилдиметилдиаммоний бромида, бензилтриэтиламмоний бромида и 1,2-Этилен-бис-(ТЧ,К-диметил-карбдецил-оксиметил)-аммония дихлорида этоний), только первое обладает наиболее выраженным бактерицидным, спороцидным и вирулицидным действием.
Практические предложения115
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
В комплексе мероприятий по борьбе, профилактике и ликвидации инфекционных болезней животных применять безопасный препарат «Теотропин», предназначенный для профилактической и вынужденной дезинфекции объектов ветеринарно-санитарного надзора (СТО 004955490008-2006), эффективность применения которого подтверждена положительными результатами испытаний, проведенных в свиноводческих хозяйствах и на мясоперерабатывающих предприятиях Московской и Смоленской областей.
На основании проведенных исследований разработаны, утверждены директором ГНУ ВНИИВВиМ и рекомендуются для практического применения «Методические рекомендации по подготовке проб почв к исследованию на контаминацию возбудителем сибирской язвы» (протокол №3 от 26.03.2008г.).
Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2008 года, Вологина, Ирина Викторовна
1. Антибактериальная активность дезинфектантов нового поколения / О.Н. Воробьева и др. // Материалы VTII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб. статей. Т.4. М.,2002. — С.9-10.
2. Антимикробные и дезинфицирующие свойства двух хлорактивных дезинфектантов: усовершенствованного гипохлорита натрия и ДТСГК / В.Н.Герасимов и др. // Дезинфекционное дело. 1999 . - №4. - С.10-18.
3. Аржаков, В.Н. Дезинфекция и ее место в системе противоэпизоотических мероприятий / В.Н.Аржаков, Н.В. Аржаков // БИО.- 2003. №7. - С. 9-21.
4. Аржаков, В.Н. Основные требования безопасности при проведении дезинфектологических работ в ветеринарии / В.Н. Аржаков, М.М. Ермакович, П.В. Аржаков //БИО.- 2004. № 7. -С.36-37.
5. Ассоциаты на основе хлоргексидина и синергетический эффект / Г.Г. Кардаш и др. // Материалы VTII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб. статей. Т.4. М., 2002. - С.21-22.
6. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях/И.П.Ашмарин, А.А. Воробьев. Л.: Медгиз, 1962. -180 с.
7. Бактерицидная активность препаратов на основе полигексаметиленгуанидин гидрохлорида на возбудителей инфекционных заболеваний/ А.П. Лысенко и др. // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии: труды ВНИИВСГЭ.Т. 116. М., 2004. - С.69-73.
8. Бакулов, И.А. Сибирская язва (АНТРАКС): новые страницы в изучении старой болезни / И.А.Бакулов, В.А.Гаврилов, В.В.Селиверстов. Владимир; Вольгинский: Посад, 2001. -283с.
9. Вашков, В. И. Средства и методы стерилизации применяемые в медицине/В.И.Вашков. М.: Медицина, 1972.- С. 175-201.
10. Вашков, В.И. Антимикробные средства и методы дезинфекции при инфекционных болезнях / В.И. Вашков. — М. :Медицина, 1977. 295 с.
11. Ветеринарная микробиология и иммунология / Н.А. Радчук и др. / под ред. Н. А.Радчука. М.: Агропромиздат, 1991.-383 е.: ил.
12. Вирулицидная, туберкул оцидная и фунгицидная активность новых средств из группы поверхностно-активных веществ / Л.Г.Пантелеева и др. // Дезинфекционное дело. 1998. - №3. - С.16-17.
13. Высоцкий, А.Э. Бактерицидная активность и токсикологическая характеристика дезинфицирующего препарата КД/ ' А.Э.Высоцкий // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии: сб. .науч. тр. ВНИИВСГЭ.Т. 117. М., 2005. -С.183-195.
14. Высоцкий, А.Э. Сравнительная биоцидная активность дезинфектанта «Сандим-Д» / А.Э.Высоцкий // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии: сб. науч. тр. ВНИИВСГЭ. Т.117. М., 2005. -С.176-182.
15. Гаджиева, Л.И. К вопросу о механизме дезинфицирующего действия аэрозолей формальдегида / Л.И.Гаджиева, А.А. Шахбанов // Проблемы ветеринарной дезинфекции объектов животноводства: тр. ВНИИВС. 1987. -С. 93-101.
16. Государств: материалы VII Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ. Оболенск, 2006. - С. 192-193.
17. Гинсбург, А.А. Введение в химию комплекных соединений / А.А. Гинсбург. -М., 1986 . -С.263.
18. Говорун, В.М. Зависимость переноса холестерина из липосом в плазматические мембраны клеток Acholeplasma laidlwii от содержания в мембранах каротиноидов / В.М.Говорун, А.Б. Капитонов // Биологические мембраны. 1992. - №9 (10). -С.940-945.
19. Голов, Е.А. Антимикробные и физико-химические свойства новых перекисных дезинфектантов: дис. . канд. биол. наук: 03.00.06/ Голов Евгений Александрович. М.,2005. - С. 11-44.
20. Громов, Б.В. Строение бактерий / Б.В.Громов. Л.: Издательство Ленинградского университета, 1984. - 192 с.
21. Гудкова, Е.И. Прошлое, настоящее и будущее четвертично-аммониевых соединений / Е.И.Гудкова, А.А.Красильников, Н.Л.Рябцева // Дезинфекционное дело. 2002. - №4. -С. 18-22
22. Дезинфекция последствий биотерроризма / В.В. Буянов и др.. -Черноголовка, 2005. — 175 с.
23. Дезинфицирующая активность йодеза и его композиций против микобактерий / И.Б.Павлова и др. // Ветеринария. 2003. - №7. - С.9-11.
24. Дмитриева, Н.Д. Липотейхоевые и тейхоевые кислоты патогенных стрептококков: структура, функции, роль во взаимодействии возбудителя смакроорганизмом / Н.Д.Дмитриева, Ю.М.Тимофеев, Н.И.Брико // ЖМЭИ. -2007. №6.-С.100-107.
25. Егорова, И.Ю. Сравнительная оценка результативности методов индикации возбудителя сибирской язвы в почве / И.Ю.Егорова, Ю.О.Селянинов, И.В.Вологина // Ветеринария.- 2006. №6. - С.26-30.
26. Емцев, В.Т. Микробиология / В.Т.Емцев, Е.Н. Мишустин. М.: Дрофа, 2005.-445 с. : ил.
27. Ефимов, К.М. Полигуанидины класс малотоксичных дезсредств пролонгированного действия/ К.М. Ефимов, П.А. Гембицкий, А.Г. Снежко // Дезинфекционное дело. - 2000.- №4.- С.5-13.
28. Зенгер; пер с англ. М.: Мир, 1987. - 548 с.
29. Зефиров Н.С.,Рогозина С.В.// Усп. химии, 1973, т. 42, с. 423.43.3лыгостев, А. Бактерии и актиномицеты. Общая характеристика бактерийи актиномицетов Электронный ресурс.- Режим доступа:http://plant.geoman.ru «Жизнь растений»
30. Иванова, Е.Б. Современные методы определения вирулицидной активности дезинфекционных средств в отношении вирусов гепатитов В и С / Е.Б.Иванова, П.Г.Дерябин, Е.И.Исаева // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2003. - №5. - С.56-57.
31. Ивков, В.Г. Липидный бислой биологических мембран / В.Г. Ивков, Г.Н, Берестовский. М., 1982. - 244 с.
32. Исследование механизма действия нового класса перекисных дезинфектантов пероксогидратов / В.Н. Герасимов и др. // Дезинфекционное дело. -1999.- № 1.- С. 14-18.
33. Кисленко, В.Н. Ветеринарная микробиология и иммунология Часть 1. Общая микробиология./ Кисленко В.Н., Колычев Н.М.- М.: КолосС, 2006. -183с.
34. Колычев, Н.М. Ветеринарная микробиология и иммунология / Н.М. Колычев, Р.Г. Госманов. 3-е изд., перераб и доп. - М.: КолосС, 2003. - 432 е.: ил.
35. Комплексная оценка вирулицидной активности дезинфектантов на основе четвертичных аммониевых соединений в отношении вирусагепатита А/ Л.И. Замятина и др. // Эпидемиология и инфекционные болезни. №1. - 2007. - С. 37-41.
36. Костина, Г.Н. К вопросу о механизмах химической инактивации микроорганизмов / Г.Н.Костина // ЖМЭИ. 1983. -№12. - С.25-32.
37. Кострюкова, Н.Н. Современные представления о механизмах патогенного действия менингококка / Н.Н. Кострюкова, В.А. Бехало // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2003. - №3. - С.40-43.
38. Костюкова, Т.А Дезинфектанты: широкий спектр и возможности выбора/ Т.А.Кострюкова, М.Н.Ляпин, Т.А.Малюкова// Медицинская микробиология XXI век: материалы Всероссийской научно-практической конференции. -Саратов,2004.- С.- 123-124.
39. Кузнецов, А.И. Адамантаны с атомами азота в узловых положениях/ А.И.Кузнецов, Н.С.Зефиров // Успехи химии. 1989. - т. 58. - С. 1815-1843.
40. Марченко, Т.В. Биологические свойства Pseudomonas aeruginosa, выделенной от животных, из кормов и объектов внешней среды в Краснодарском крае : дис. . канд. вет. наук : 16.00.03 / Марченко Татьяна Витальевна. — Краснодар,2006. 16 с.
41. Механизмы бактерицидного действия перекиси водорода / И.И.Самойленко и др. . // ЖМЭИ. 1983.- №12. - С. 30-33
42. Микробиологические, биофизические и биохимические исследования механизма действия дезинфектанта Метацид на бактерии / В.Н.Герасимов и др. // Дезинфекционное дело. 1998. - №5. - С. 19-25.
43. Микшис, Н.И. Продукция белков S-слоя штаммами Bacillus anthracis / Н.И.Микшис и др. // Биотехнология. 2004. - № 5. - С.22-32.
44. Морозова, Н.С. Дезрезистентность микроорганизмов в проблеме внутрибольничных инфекций / Н.С.Морозова, С.В.Корженевский, А.В.Теленев // Вестник ассоциации. 2001. - №3 .- С. 4-5
45. Несмеянов, А.Н., Органическая химия. Кн.1 / А.Н. Несмеянов, Н.А. Несмеянов. М.: Химия, 1974. - 744с.
46. Особенности механизма действия перекисного дезинфектанта ПВК-2 на микробные клетки и споры / В.Н.Герасимов и др. // Дезинфекционное дело. 1998. -№1.-С.12-19.
47. Павлова, И.Б. Атлас морфологии популяций патогенных бактерий / И.Б.Павлова, Е.М.Ленченко, Д.А.Банникова. -М.: Колос, 2007. 180 с.
48. Павлович, Н.В. Возможные механизмы реализации токсического потенциала липополисахаридов патогенных бактерий / Н.В.Павлович, В.И. Тынянова // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология.- 2005. -№2.-С. 9-13
49. Павлович, Н.В. Возможные механизмы реализации токсического потенциала липополисахаридов патогенных бактерий / Н.В.Павлович,
50. B.И.Тынянова // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология.-2005.-№2.-С. 9-13.
51. Пантелеева, Л.Г. Современные дезинфицирующие средства для профилактики внутрибольничных инфекций / Л.Г.Пантелеева // Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб. статей. Т.4.-М., 2002. -С.45-46.
52. Патент 2416745 МКИ 61 L2/00, ФРГ. Anionaktiv und Kationaktiv Inside enthalten de Wash und Reinigungeasmitle. - 83N-99707.-1975.
53. Пименов, E.B. Создание вакцин против сибирской язвы / Е.В.Пименов, В .В.Кожухов, Ю.И.Строчков // Природа. 2000. - №10. - С. 5-12.
54. Поляков, А.А. Ветеринарная дезинфекция / А.А.Поляков. М.: Колос, 1979.-416 с.
55. Попов, Н.И. Дезинфекция в системе ветеринарно-санитарных мероприятий / Н.И.Попов, В.В.Селиверстов, В.В. Дудницкий // Ветеринария. 1999. - №2.-С.
56. Пояркова, Т.В. Антимикробная активность и лечебная эффективность мирамистина при колибактериозе и сальмонеллезе поросят дис. . канд. вет. наук: 16.00.03 / Пояркова Татьяна Владимировна. Воронеж, 2005. -С. 3543.
57. Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора/ Утверждены заместителем руководителя Департамента Ветеринарии, М., 2002. 105с.
58. Применение дезинфектантов в ветеринарии / В.Е.Романов и др. // Международный семинар Современные средства и методы, применяемые при работе с патогенами: тезисы докладов.- Киров, 2006. С.54-57.
59. Проблемы борьбы с инфекционными заболеваниями и состояние вакцинопрофилактики в Российской Федерации/ Н.А. Семина и др.//
60. Актуальные проблемы медико-биологической защиты: сборник материалов расширенного заседания центрального правления. -М., 2006. С.148-156.
61. Прозоркина Н. В., Рубашкина П. А. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии Электронный ресурс. - Режим доступа: http://www.medbookaide.ru/books/fold9001/book2046/p2.php.
62. Пхакадзе, Т.Я. Выбор дезинфектанта. Краткая характеристика наиболее часто используемых дезинфицирующих средств Электронный ресурс. : http: // www.iacmac.ru/
63. Равилов, И.М. АБСОЛЮЦИД Вет — современная дезинфекция / И.М.Равилов // Ветеринария и кормление. 2003. - №3.- С. 28-29.
64. Результаты испытаний препарата ПВК / Н.И.Попов и др. // Ветеринария.- 2001. № 5.-С.10-12.
65. Рис, Э. Введение в молекулярную биологию: От клеток к атомам: Пер. с англ. / Э. Рис, М. Стенберг. М.: Мир, 2002. - 142 е., ил.
66. Роль компонентов S-слоя в иммуногенности возбудителя сибирской язвы / Н.И. Микшис и др. // ЖМЭИ. 2006. - №1. - С.29-32.
67. Романов, В.Е. Применение дезинфектантов в ветеринарии / В.Е.Романов, О.Г.Малых, Т.А.Тимошенко //Международный семинар «Современные средства и методы дезинфекции, применяемые при работе с патогенами»: тезисы докладов. Киров, 2006.- С.54-57.
68. Романова, Т.В. Использование комбинированного способа обеззараживания объектов, загрязненных спорами возбудителя сибирской язвы, средствами «Велтолен», «Велтаб» и «Велтогран», производства НПО1."
69. Саврилов, М.Р. Изыскание средств дезинфекции при сибирской язве / М.Р. Саврилов // Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных: материалы Международной научной конференции молодых ученых, Владимир, 2004.- С.175-177.
70. Сварваль, А.В. Липополисахарид иерсиний и его биологическая активность / А.В. Сварваль, Г.Я.Ценева, О.А. Шендерович // ЖМЭИ. 2006. -№3.-С. 100-104.
71. Сибирская язва / Н.Г. Ипатеноко и др.. — М.: Колос, 1996. 335с.
72. Сибирская язва / П.Н.Бургасов и др. М., 1970. - 127 с.
73. Сибирская язва сельскохозяйственных животных / Н.Г.Ипатенко и др.. М.: Агропромиздат, 1987. - 256 с.
74. Сидоренко, С.В. Место бактерий в живой природе / С.В. Сидоренко // Инфекции и антимикробная терапия.- 2000. №2 (Т.2) -С. 12-19.
75. Синтез и исследование реакционной способности производных 1,3,5-триазаадамантана / М.И. Шахгельдиев и др. // ХиГС. -1987. №5. - 712 с.
76. Смирнов, А. М. Актуальные проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии / А.М.Смирнов // Актуальные проблемы медико-биологической защиты: сборник материалов расширенного заседания центрального правления. М, 2006. - С. 156-160.
77. Смирнов, A.M. Дезинфекция как мера профилактики и ликвидации инфекционных болезней / А.М.Смирнов, Н.И. Попов // Ветеринария и кормление. 2005.- №4. - С.24-27.
78. Совершенствование метода индикации возбудителя сибирской язвы / А.Г. Абгранян и др. // ЖМЭИ. 2003. - №6 (приложение). - С.47-51.
79. Современные средства дезинфекции и дезинсекции. Характеристика, назначение, перспективы / Л.С.Федорова и др. // Медицина и здравоохранение. Обзорная информация.- М., 1991.- С. 3-25.
80. Современные средства для дезинфекции изделий медицинского назначения в ЛПУ стоматологического профиля / И.М.Цвирова и др. // Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб.статей. Т.4.- М., 2002. С.65-66.
81. Современный подход к выбору дезинфицирующих средств в системе профилактики внутрибольничных инфекций / И.Ф. Веткина и др. // ФАР Миндекс- Практик.- 2005.-№7. -С.13-20.
82. Соколова, Н.Ф. Методологические основы определения устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам / Н.Ф.Соколова // Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб.статей. Т.4. — М., 2002. С.55-56.
83. Соколова, Н.Ф. Современные средства и методы дезинфекции при сибирской язве / Н.Ф.Соколова // Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб. статей. Т.4.- М., 2002.-С.56-57.
84. Специализированный справочно-информационный каталог Электронный ресурс. Режим доступа: www.DEZSREDSTVA.RU.
85. Сравнительный анализ средств, применяемых для дезинфекции опасных микроорганизмов / А.Д.Украинцев и др. //Химическая и биологическая безопасность. 2005.- №6 (24). -С. 12-22.
86. Стрептококкус пиогенес: выделение, идентификация и определение чувствительности к антибактериальным препаратам / К.В.Шпынев и др. / КМАХ. 2007. - №2.- С. 104-120.
87. Стрилец, О.И. Дезинфектанты. Новые аспекты исследований, /О.И.Стрилец, И.А.Дикий, JI.C. Стрельников // Дезинфектанты. 1999. -Вып. 11.- С. 15-19.
88. Тикунов, В.И. Комплексные дезинфектанты на основе гипохлорита натрия: дис. . канд. вет. наук: 16.00.03 / Тикунов Владимир Иванович. -Белгород, 2000. 140 е., прил.
89. Титова, К.В. Координационные соединения пероксида водорода / К.В.Титова, В.Л.Никольская, В.В.Буянов.- Черноголовка, 2000.- С. 3-4; С. 121-12.
90. Толстиков, Г.А. Реакции гидроперекисного окисления / Г.А. Толстиков. -М.: Наука, 1976.-200 с.
91. Тульская, Е.М. Сравнительное изучение тейхоевых кислот клеточных стенок актиномицетов Glycomices rulgersensis и G.harbinensis. / Е.М. Тульская, Н.В. Потехина, И.Б. Наумова // Микробиология. 1993. -№5(62). - С. 932-937.
92. Турова, Т.П. Изучение происхождения двух типов строения клеточной стенки и способности к спорообразованию у эубактерий с помощью молекулярно-биологических методов / Т.П.Турова // Микробиология. 1995. -№3(64).-С. 301-309.
93. Угрюмова, B.C. Изучение новых дезинфектантов при ящуре : автореф. дис. . канд.вет.наук : 16.00.03 / Угрюмова Валентина Степановна. Владимир, 1982. - 21с.
94. Федорова, Л.С. Актуальные проблемы повышения эффективности дезинфекционных мероприятий / Л.С.Федорова// Дезинфекционное дело. — 2004. №4.-С. 41-45.
95. Федорова, Л.С. Научный подход к обоснованию выбора средств для дезинфекции поверхностей // Материалы VIII Всероссийского съездаэпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб.статей. Т.4. М.:000 «Росинэкс», 2002. - С.59-60.
96. Феофилова, Е.П. Клеточная стенка грибов / Е.П.Феофилова. М.: Наука, 1983.-248 с.
97. Физико-химические и антимикробные свойства перекисных композиций Грилен, Дезоксон-4 / В.Н.Герасимов и др. // Дезинфекционное дело. 1998. - №2. - С.10-18.
98. Фридович, М. Радикалы кислорода, перекиси водорода и токсичность кислорода // Свободные радикалы в биологии. Т.1 / пер. с англ. ; под ред. М.Н.Эммануэля. -М.:Мир, 1979.-С.272-378.
99. Черкасский, Б.Л. Эпидемиология и профилактика сибирской язвы. М.: ИНТЕРСЭН, 2002. - 385 с.
100. Чичибабин, А.Е. Основные начала органической химии. Т.1. -М.:Госхимиздат, 1963. 910 с.
101. Шандала, М.Г. Новые дезинфекционные технологии для профилактики инфекционных болезней / М.Г.Шандала // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2006. - №4. - С.15-17.
102. Шандала, М.Г. Перспективы и проблемы современной дезинфектологии / М.Г.Шандала// ЖМЭИ. 2003. - №3. - С.119-125.
103. Шандала, М.Г. Современное состояние и возможные перспективы решения проблемы тестирования вирулицидности дезинфицирующих средств/ М.Г.Шандала // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2005. -№2. - С. 42-43.
104. Шкарин, В.В. Мониторинг устойчивости к дезинфектантам микроорганизмам в ЛПУ различного профиля / В.В .Шкарин// Актуальные проблемы медико-биологической защиты: сборник материалов расширенного заседания центрального правления. — М., 2006. С. 180-184.
105. Шуккур А.Х. Синтез и изучение азагомоадамантанов и их производных: автореф. дис.канд.хим. наук: 02.00.08 / Шукур Ахмет Хамет. -М, 2007.-21с.
106. Эффективность и безопасность химических средств для дезинфекции, предстерилизационной очистки и стерилизации / В.М.Бахир и др. // Дезинфекционное дело. 2003. - №1. -С. 29-36.
107. A dual role for phosphatidilglycorol in protein translocation across the E.coli inner membrane / R. Kusters et al. // J.Biol.Chem. 1994. -№1. - P. 1560-1563.
108. Anantaswamy, H.N. Synergistic lethality of phage T7 by hear-UV radiation and hydrogen peroxide: an action spectrum / H.N. Anantaswamy, P.S. Hartman, A. Eisenstark // Photochem. and Photobiol. 1979. - Vol.29, №1.- P.53-56.
109. Ansari, A.S. Degradation of phynylamine in the presents of hydrogen peroxide /A.S. Ansari, S.Tahib, R.Ali // Experimentia. 1976. - Vol.32, N5. - P. 573-574.
110. Aroson, A.S. Structure and morphogenesis of the bacterial spore coats / A.S. Aroson, Fits-James Oh // Bacteriol. Revs. 1976. - Vol.40. - P.360-402.
111. Babb, J. Methods of cleaning and disinfection / J. Babb // Zentr. Sterilization.- 1993. № 4.- P. 227-237.
112. Bactericidal and Desinfectional Properties of New Preparation in Regard to Francisella tularensis / V.Gerasimov et al.// Second International Conference on Tularemia. Czech Republic, Praga, 1997. - P.26.
113. Block, S.S. Peroxyden compounds / S.S.Block // Disinfection, sterilization and preservation/ Ed. Febier L.S.-Philadelfia, 1991.- P.167-181.
114. Borick, P.M. Antimicrobial activiti of nome higner amin of carboxylic acids / P.M. Borick, M. Bratt // Appl.microbiol. 1961. - Vol.9. - P.475-477.
115. Bretscher, M. Membrane structure: same general principles / M. Bretscher // Science. 1973. - Vol. 181 - P.622-699.
116. Dahl, T.A.Comparison of killing of gram-negative and-gram-positive bacteria by pure singlet oxygen / T.A.Dahl, W.R.Midden, P.E. Hartman // J.Bacteriology. 1989.- Vol.l71,№4. - P.2188-2194.
117. Dale, J. Azaadamantanes. The Carbonil Reactions /J. Dale, T. Sigvartsen // Acta Chem. Scand. 1991. - Vol. 45. - P. 1064.
118. Devinsky, F. Desinfection and the control of nosocomial infection /
119. F.Devinsky, J. Lacko // Tenside Delerg., 1985.- Vol. 227,№1. -P.-10-15.
120. Dragon, D.C. The ecology of anthrax spores: though but not invincible / D.C.Dragon, R.P.Rennie // Can.Vet.J. 1995. - Vol.36, №5. - P.295-301.
121. Eggensperger, H. Gesinfectionswirkstoffe und ihre Wirkungsmechanismen / H. Eggensperger // Hosp.-Hyg. Gesundh. und Desinfect. 1975.- №9. - P.321-329.
122. Fisher, O. The Sinthesis of aromatic Tetraazaadamantanes/ O.Fiser, H. Wreszinski // Chem. Ber. -1982.- Vol. 25. P. 2711.
123. Frankel, E.N. Analysis of autoxydised fast by gas chromotografymass spectrometry. IV. Soybean oil methyl esters / E.N.Frankel, W.E. Neff // Lipids. -1979. Vol.14,№1. - P.39-46.
124. Hallivell, B. Superoxyde dependent formation of hydroxy radicals in the presents of from salts. Its role in degradation of hyaluronic acids by a superoxyde -generation system / B. Hallivell // FEBS Lett. - 1978. - Vol.96, №2. - P.238-242.
125. Hamblin, M.R. Photodynamic therapy: a new antimicrobial approach to infectious disease? / M.R. Hamblin, T.Hasan // Photochem Photobiol Sci., 2004.-Vol.3,№>5.-P. 436-450.
126. Hampton, S. Germ warfare / S. Hampton // Nurs Times.-1997.-Vol.93.-P.74-77.
127. Isolation of 9-hydroxy-5-tetradecalactone from lipid A of Pseudomonas diminuta and Pseudomonas vesicularis / S.Arata et al. // FEMS Microbiol. Lett. -1989. -Vol. 60,№2.- P.219-222.
128. King, W.L. Lysis of bacterial spores with hydrogen peroxide / W.L.King,
129. G.W.Gould // J. Appl. Bacteriol. 1969. -Vol. 32,№4. - P.481-490.
130. Larson, E.L. Alcohols / E.L.Larson // Disinfection, sterilization and preservation. Block S.S. (editor). 3rd ed. Philadelphia: Lea & Febiger, 1991. P. 191-203.
131. Leelaporn, A. Multidrug resistance to antiseptics and disinfectants in coagulase-negative Sthaf./ A. Leelaporn, J.T.Pansen., J.M.Tennett // J.Med.Microbiol.-1994.-Vol.40 P.214-220.
132. Levy, S.B. The chollenge of antibiotic resistance / S.B.Levy // Sci.Am.-1998.-Vol.278. P.46-53.
133. Lewis, К. Multi-drug resistance pumps provide broad defence / K.Lewis, D.S. Hooper, M. Quilette// ASM News.-1997.-Vol.63. P.605-610.
134. Lipid and protein composition of outher and inner membranes in wild-type strains and nod mutants of Rhizobium meliloti / C.Hurac et. al. // J. Microbiol. -1992.-№9.-P. 1973-1983.
135. Malik, Y.S. Comparative efficacy of ethanol and isopropanol against feline calicivirus, a norovirus surrogate. / Y.S. Malik, S. Maherchandani, S.M. Goyal // Am J Infect Control. 2006. - Vol. 1,№34. - P. 5-31.
136. Matousek J. Development of solution and mixture for decontamination of supertoxic lethal chemicals on the frurfases militery equipment. // 7 International simposium on protection against chemical and biological warfare agent. Stockgholm, 2001.
137. Moorer, W.R. Antiviral activity of alcohol for surface disinfection. / W.R. Moorer // Int J Dent Hyg. 2003. - Vol. 1,№3. - P.42-138.
138. Murray-Rust, P. Tetraazaadamantanes. Nitro-reactions/ P.Murray-Rust, F. G. Riddel. //J. Chem. Soc. Perkinl. 1974.- Vol. 10. - P. 1433.
139. New disinfection and sterilization methods / W.A. Rutalla, P.J. Weber // Emerging Infect.Dis. 2001.- №2. - P.348-353.
140. Nikaido, H. Molecular basis of bacterial outer membrane permeability /H.Nikado, M.Vaara M. // Microbiol. Rev.- 1985.-Vol. 49. P. 1-32.
141. Power E.G. Aldenhydes as biocides / E.G. Power //Prog.Med.Chen.-1995.-Vol. 34.- P. 149-201.
142. Principles and practice of disinfection, preservation and sterilization/, Russel, A.D. et al.//Blackwell sci.- Publ.1982.- 653p.
143. Quintiliany, R. Meshanisms of resistance to antimicrobiol agents / R.Quintiliany, P.Courvalin // Manual of clinical microbiology.-USA: American Society of microbiology.-1995.- P.1308-1326.
144. Rothman, J. Membrane asymmetry / J. Rothman, J. Lenard // Science. -1977. Vol.195. - P.743-753.
145. Rouch, D.A. Efflux-mediated antiseptic resistance gene qag A from Staph.aureus / Rouch, D.A., D.S.Gram, D.Berendino // Mol.Microbiol. -1990.-Vol.4.- P.2051-2062.
146. Russel, A.D. Microbial susceptibility and resistans to biocides / A.D.Russel, J. Furr, J.Y. Maillard // ASM News.-1997.-Vol.63. P.481-489.
147. Russel, A.D. Principles of antimicrobial activiti / A.D.Russel // Disinfection, sterilization and preservation. 4lh.ed.- Philadelphia, 1991. - P.29-58.
148. Sasatsu, M. The original of the antiseptic-resistance gene ebr in Staph.aureus/ M.Sasatsu, Y.Shirai // Microbios. -1995.-Vol.40. P. 161-169.
149. Simultaneous control of microorganism, disinfection by-products and bio-stability by sequential chlorination disinfection / C. Chen et al. // Huan Jing Ke Xue. 2006. - Vol. 1,№27. - P.9-74.
150. Singer, R.D. The Sinthesis of 1,3.6-azahomoadamantanes / R.D. Singer, K. Yaughan, D. L. Hooper. // J. Chem. Res.- 1998. Vol.21. - P. 1567.
151. Sterilization, desinfection and antisepsis in the hospital / Favero, N.S. et al.// Manual of Clinical Microbiology. -5th ed. Washington, DC: American Society for Microbiology, 1991. P. 183-200.
152. Sykes, G. The influence of germicides on the dehydrogenases of Bact.coli 1. The succine acid dehydrogenases of Bact.coli / G.Sykes // Z Hyg.-1999.-Vol.39.-P.463-469.
153. Thorpe, N.O. Cell biology / N.O. Thorpe // New York, Chichester, Brisbane, Toronto, Singapore.; J. Willey& Sons. 1984. - 719 p.
154. Thurston-Enriquez, J.A. Inactivation of enteric adenovirus and feline calicivirus by chlorine dioxide / J.A. Thurston-Enriquez, C.N. Haas, J. Jacangelo // Appl. Environ Microbiol. 2005. - Vol. 6,№71. - P.5-31.
155. Tree, J.A. Disinfection of feline calicivirus (a surrogate for Norovirus) in wastewaters / J.A.Tree, M.R. Adams, D.N.Lees // J Appl Microbiol.- 2005. №98. -P.62-155.
156. Turner, F.J. Hydrogen peroxide and other oxidant disinfectants / F.J. Turner // Desinfection, sterilization and preservation. Block S.S. (editor). 3rd ed. Philadelphia: Lea & Febiger.- 1991. P. 240-250.
157. Vaara,M. Polycations as outer membrane-disorganizing agents/ M.Vaara, T.Vaara // Antimicrobial. Agents Chemother. -1983.-Vol.24. -P. 114-122.
158. Walker, J.E. E.coli F 410 ATP-ase interact with a membrane protein component of proton channel / J.E. Walker, M.Saratse, N.J. Gay // Nature. 1982. -Vol. 289.-P. 867-869.
159. Whitnely, Е. Inactivation of Bacillus anthracis Spores / E. Whitnely, E. A. Spotts // Emerging Infectious Diseases. 2003. - Vol.9, №6. - P.623-627.