Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Антигенные и иммуногенные свойства хламидий в ассоциированной вакцине против кампилобактериоза и хламидиоза овец

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ВСЕРОССИИСКИП НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ имени Я. Р. КОВАЛЕНКО

На правах рукописи

ГОРОВАЯ Людмила Ивановна

АНТИГЕННЫЕ И ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ХЛАМИДИЙ В АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЕ ПРОТИВ КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА И ХЛАМИДИОЗА

ОВЕЦ

16.00.03,— ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва — 1994

Работа выполнена в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики болезней овец, лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики патологии воспроизводства сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я- Р. Коваленко.

доктор ветеринарных наук, профессор М. А. Лучко лауреат премии Совета Министров СССР, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник Н. И. Налетов

доктор ветеринарных наук, профессор Бурлаков В. А. кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Беклешова А. Ю.

Ведущее учреждение—Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности

Защита диссертации состоится « 1994 года

в /т" часов на заседании специализированного совета К 020.28.03 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии имени Я. Р. Коваленко по адресу: 109472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

ВИЭВ.

Автореферат разослан »

1994 года.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат ветеринарных наук

Ф. Г. Терешков

- 3 -

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш.

Одним из важнейших направлений хозяйственной деятельности является обеспечение населения страны продуктами питания и това-" рами повседневного спроса. В связи с чем необходимо развитие овцеводства, которое является поставщиком мяса,шерсти, кож и других видов сырья и продукции.

Значительный ущерб овцеводству наносят различные инфекционные болезни, в том числе кампилобактериоз и хламидиоз. Экономические потери от этих заболеваний связаны с недополучением приплода, снижением веса животных, ухудшением шерстной продуктивности, затратами на проведение ветеринарно-санитарных мероприятий.

Эти инспекционные заболевания зарегистрированы почти во всех странах с развитым овцеводством ( Шгефан М. К., 1985; Каптюшин В.

A., 1986; Атамась В. А. , 1987; Караваев Ю. Д. , 1987; Лучко М. А. , Трубицкий А. Н. , 1987; Chapman H. M. , 1986; Hampson Robert J. , 1987; Appleyard V.T., 1986; Krishna Lal et al., 19371.

В нашей стране для борьбы с указанными болезнями разработаны и внедрены в производство эффективные моновакцины. Однако их применение в хозяйствах, имеющих 10-15'маточных отар, связано со значительными затратами рабочей силы и материальных средств.

Поэтому создание ассоциированных вакцин, как наиболее экономичного и перспективного метода профилактики инфекционных заболеваний, является актуальной'и перспективной задачей (Рыже н ко

B. П., 1983; Ченчев И. и др., 1903; Караваев Ю. 'Д. ,1987; Керимбаев У. Н. , ЖилаМ. Е., 1985; Койчэв Ч. , 1986; Bodley, 1982; Dravecky, 19*32; Travnicek M. étal., 1986? Sour lau A: et al. ,19881

Цель работы.

Изучить имыуногенные свойства хламидий в ассоциации с кам-пилобактериями при конструировании вакцины против хлашдиоза и кампмлобактериоза овец.

Задачи исследования:

- выяснить наличие- или отсутствие конкуренции (или синер-пш) хламлдийного и кампилобактерийкого антигенов в организме лабораторных животных и овец;

- определить оптимальное соотношение зткх антигенов для создания ассоциированной вакцины;

- изучить иммукогенные свойства хлающий в ассоциации с кампилобактерияьш в опытах на морских свинках, кроликах и овцах.

Научная новизна.

Впе-рвые в России изучены ишуноге-нкыа свойства хламидий б ассоциации с кампилобактерияш. Доказано отсутствие конкуренции (и синергии') каыпилобакгерийного к хлаыидийного антигенов в организме лабораторных животншс и оьец, что явилось предпоенлксй' рля создания ассоциированной вакцины.

Практическая знач!шость работ

1. Установлена возможность исполь&ования хламидайного антигена совместно с кашшлобактеркйяш антигеном для приготовления ассоциированной вакцина, - *

2. Материалы работы вошли во Временную инструкцию по приготовлению и контролю ассоциированной инактизироваккой эмульсин-

вакшшы против кампилобактериоза и хламидиоэа овец, утверзденную директором ВЙЗВ Г. Ф. Коромысловым 30.01.1989г.; ТУ 10-02-23-89 на изготовление ассоциированной инактивированной эмульсин-вакцины против хламидиоэа и кампилобактериоза овен; Наставление по применению ассоциированной инактивированной эмульсин-вакцины против'. хламиДиоза и кампилобактериоза овец, утверзденное 09.11.1989 Главным управлением ветеринарии при Государственной комиссии Совета Министров СССР по продовольствию и закупкам.

Апробация работы.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсук-дены на научной конференции молодых ученых "Актуальные проблеш инфекционной патологии животных в ветеринарной биотехнологии" (Москва, В11ЭВ, 19891; на заседа яиях■лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики болезней овец (1987, 1938, 1989), на совместном заседании лабораторий эпизоотологии, диагностик!- л профилактики болезней овец и эпизоотологии, диагностики и профилактики патологии воспроизводства сельскохозяйственных лагвотных ВЙЭВ Г1989), на заседании Ученого совета ВИЭВ С1989).

Основные результаты работы излозкены в статьях: "Результаты исследования антигенных свойств ассоциированной вакцины против хламидиоэа и кампилобактериоза овец" и'"Антигенные и иммуноген-ные свойства хламидий в ассоциации с кампилобактериями".

- 6 -

Объем и стругаура работы.

Диссертация изложена на _ страницах машинописного

текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуаэдение результатов, выводи, практические предложения, список литературы. Материалы диссертации иллюстрированы 13 таблицами, 2 графиками. Список литературы содержит _ источников, в том числе _ иностранных.

С. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы.

Работа выполнена в период 1987-1989 гг. в лабораториях эпизоотологии, диагностики и профилактики болезней овец и эпизоотологии, диагностики и профилактики патологии воспроизводства сельскохозяйственных животных ЕИЭВ, а тагоа на опытной базэ Выи-' ке-Волоцкого отдела ЕИЭВ в Тверской области.

В опытах использовали 56 морских свинок, 20 кроликоЕ, 20 суягных овец, 1,5-2-летнего возраста, приобретенных б хозяйствах Тверской области.

ПРЩГОТ 0ВЛЕЮ12 АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ.

Для приготовления ассоциированной инактивированной эмульсин -вакцины против кампилобактериоза и хламидиоза овец использовали штамм хламидий К-8 (ВИЭВ), который культивировали в 6-7 дневных I растущих куриных эмбрионах и штамм кампилобактерий N 30 ВИЭВ.

В качестве контроля были использованы эмульсин-вакцина инактивированная против хламидиозного аборта овец (производство Курской биофабрики) и эмульсин-вакцина кнактивированная против кампилобактериоза овей (производство Армагюрской биофабрики).

Для определения имунного ответа использовали серологические ыетоцы: реакцию длительного связывания комплемента (РДСЮ, реак-

цию непрямой гемагглстинации (PIFA), иммуноферментный анализ ('ИФА1, реакцию агглютинации ('РА). Напряженность иммунитета сиени-вали в опытах прямого заражения животных (морских свинок, суягных овец) вирулентными культурами хламидий и глмтилобактерий.

Кровь для серологических исследований получали: у морских свинок - из сердца, у кроликов - из вены уха,. у овец - из яремной вены.

Исследования сьшороток крови на наличие антител к хламидиям и кампилоСактерияи проводили в динамике, через 7, 14 и 21 сутки после вакцинации.

Для получения ассоциированной вакцины готовили отдельно инактивированкые хламидиосоде^иуто и кампилобактерийнуга суспензии. Последняя была приготовлена в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики патологии воспроизводства сельскохозяйственных животных ВИЭВ совместно с Е Э. Иаликовым.

Хламт шосодержашую суспензию готовили в ло.боратории эпизоотологии. диагностики и профилактики болезней овец. Для культивирования хламидий использовани 6-7-дневные развивающиеся куриное эмбрионы. Для этого разводили ллсйилизироваяный материал (raraj.w К 3 ВИЭВ) физиологическим раствором. Полученной суспензией, в разведении 10 , в дозе 0,2 куб. см заражали куриные эмбрионы. За-раленные куриные эмбрионы инкубировали при температуре 36-37°С е i течение 11-12 сугск. Гибель эмбрионов в- первые четверо суток считали неспешфической. Эмбрионы, павшие на 5-е и последующие сутки после заражения,, вскрывали с соблюдением правил асептики. После этого извлекали желточный мешок, освобождали его от содержимого, а желточную оболочку помеиали в стерильный пенициллино-вый флакон. Из каждой желточной оболочки делали мазок-отпэчаток, который исследовали на наличие хламидий, а также высевали материал для исследования на стерильность.

При микроскопии мазков-отпечатков определяли накопление

хламидий в клетках ;хелточной ободочки. Для изготовления вакцины использовали желточные оболочки с обильным накоплением хдамидий. Из них готовили 10%-ную хламидиосодержащую суспензию, которую очишали ди<Йереициальным центрифугированием. После этого суспензию инактивировали формалином (0,47. конечной концентрации'). Экспозиция инактивации составляла 72 часа при температуре 37°С.

Затем полученную хламидиосодержащую суспензию смешивали с инактивированной бакмассой кампилобактерий. Смесь антигенов объединяли с масляным адъювантом в соотношении 1:1. Полученную таким образом опытную серию ассоциированной вакцины проверяли на стерильность, безвредность и стабильность по общепринятой методике.

Для определения оптимального соотношения хламидийного и кампилобактерийного антигенов в ассоциированной вакцине использовали 30 морских свинок, массой 400-600 г, которых распределяли в группы по 5 животных. Перед вакцинацией все животные были исследованы на отсутствие в крови антител к хламидиям и кампилобак-териям.

Было приготовлено несколько вариантов ассоциированной вакцины, которые отличались соотношением хламидий и кампилобактерий (в иммунизирующих дозах дозах моновакцин)-. Б работе были использованы варианты: 1/4:1; 1/2:1; 1:1; 2:1; 4:1, где доза кампилобактерий оставалась неизменной и составляла 1 .вакцинальную дозу (40 млрд. м. т. в куб. см), а доза хдамидий менялась от 1/4 до 4 иммунизирующих доз.

Полученными препаратами иммунизировали морских свинок. Через 21 сутки по^ле вакцинации, определив антигенный ответ организма животных, всех морских свинок инфицировали внутрибрюшинно

-а

возбудителем хламидиоэа в дозе 1 куб.см х Ю.ЭДДцд'О.З куб.см.

Иммуногенные свойства хламиций в ассоциированной вакцине против хламидиоэа и кампглобактериоза определяли нз 26 морских свинках.

Изучение иммуногенных свойств хламидий.

Иммуногэиные свойства хламидий в ассоциации с кампилобакте-риями в эмульсин-вакцине против какпилобактериога и хлачидиоза овец изучали на 26 морских свинках.

Первую группу животных (б морских свинок) иммунизировали ассоциированной вакциной, вторую - иоковакциной против хламиди-озного аборта оЕец, третью группу - моновакцикой против кампило-бактериоза овец, четвертую группу не вакцинировали, она оставалась в качестве контроля. Через каждые 7 суток после вакцинации от всех животных получали кроеь из сердца для исследования в РДСК, РИГА и РА на наличие комплементсвязызаших, гемагглютини-рущпх антител к хламидиям и агглютинирующих антител к кампило-Оастяриям.

Через 21 сутки после ваккинашш все давотнке были инфицированы оттитрованной дозой возбудителем хламидиоза. Заражкие проводили внутрибрюиинно з дозе 1 куб. см хламидиосодэршащей суспензией в разведении 10 3 За лявотньаш было организовано еждневное клиническое наблюдение. Павших животных вскрьшали, и из паренхиматозных органов готовили мазки-отпечатки, которые окрапдгаали по методу Романовского-Гкыза, затем микроскопировали.

При изучении динамики образования антител к хламидиям в ас-еоциации с глипилсбаюте риями попользовали 20 кроликов, массой, 1,5-2 кг. Антигенные свойства хламидий, ¡сак компонента ассоциированной вакцины, изучали по титрам антител в сыворотках крови иммунизированных животных. Кровь для исследований получали из краевой вены уха Для опыта использовали животных, сыворотка крови которых была свободна от антител к хламидиям л кампилобак-териям. Для этого предварительно сыворотку крови от всех животных" исследовали в РДСК и РА.

Подопытных животных распределили на четыре группы, по 5 кроликов в каждой. Первую группу аивотных иммунизировали ассоциированной вакциной, вторую - вакциной против хлашдиозного аборта овец, третью - вакциной против кампилобактериоза овец, четвертая группа не подвергалась иммунизации - контроль. •

Бакшну вводили подкожно в области спины в объеме 1 куб. см. За »¡цветными проводили ежедневное клиническое наблюдение. Через каждые семь суток от всех кроликов получали сыворотки крови, которые исследовали на наличие антител к исследуемым антигенам.

После изучения иммуногешых свойств хламидий в ассоциации с кампилобактериями на лабораторных животных, провели опыт на суягных овцематках.

Для этого 20 овцематок, сыворотки крови которых не содержали антител к хламидиям, распределили в три группы по принципу аналогов и разместили в блок-лаборатории Выкне-Волоокого отдела ЕЮВ. Размещение давотных по группам с использованием вакцин показаны на схеме опыта N 1.

СХЕМА ОПЫТА 1

NN : Количество : Используемая

групп : ОЕде маток : вакцина

Ассоциированная вакцина Эмульсин-вакцина против хламидиоза Контроль (неиммунные животные)

5Кивотных иммунизировали подкожно, в области средней трети шеи, в дозе ? куб. см.

За подопытными животными было установлено клиническое наблюдение в течение б месяце: В течение 10 дней после иммунизации у всех животных измеряли температуру тела животных.

Кровь для исследований брали из яремной вены через 10, 52 и 78 суток после иммунизации. Сыворотки крови исследовали на нали-

1

6

чие комплементсвязывакиих антител с хламидийным антигеном в РДСК, а та'сжэ при помоки метода иммуноферментного анализа ГИФА).

Через 78 суток после иммунизации всех животных инфицировали подкожно возбудителем хламидиоза Chlamydia psittaci (штамм К-8 ВИЭВ) в дозе 5 куб. см. Термометрию проводили утром и вечером, в течение 10 суток.

Патологический материал,полученный от павших и мертворожденных ягнят исследовали на наличие хламкдий шкроскопированием мазков-отпечатков из паренхиматозных органов и методом заражения растущих куриных эмбрионов 10%-ой суспензией из тех же органов.

Для производственных испытаний, на Грузинском биокомбинате была приготовлена опытная сер$я ассоциированной инактивированной эмульсин-вакцины против кампилобактериоза и хлаыидиоза овец, которая прешла биологический контроль на стерильность, безвредность и иммуногекную активность.

С р: зрешения Главного упразления ветеринарии Госагропро» а СССР вакцина была приманена в хозяйствах Буг/некого района Чимкентской области КазССР, стационарно неблагополучных по хлашди-озу и кампилобактериозу овец.

2.2. Результаты исследований.

212.1. Определение оптимального.соотношения хламидийного и кампилобактерийного антигенов в ассощпфованной вакцине.

При изискании оптимального соотношения используемых антигенов отмечены низкие титры антител к хламидиям при иммунизации малыми дозами вакцины (таблица 1).

Таблица 1

НАКОПЛЕНИЕ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ МОРСКИХ СВИНОК ПРИ РАЗЛИЧНОМ СООТНОШЕНИИ ХЛАМИДИЙ И КАМПИЛОЕАКТЕРИЙ В ВАКЦИНЕ

NN групп

ММ

№ -вот-

ных

Соотношение : Логарифм по основанию 2 обратной : величины титров антител

антигенов

: к хламидиям : к (сампилобактериям

до : через : до : через : иммуни-: 21 сутки: иммуни: 21 суши ; 'зации : : зации:

1001 1002

1003

1004

1005

1006

1007

1008

1009

1010

3 1011 1012

1013

1014

1015

4" 1016

1017

1018 101Р 1020

5 1021 1022

1023

1024

1025

1/4: 1

М-нп 1/2:1

М+т . 1:1

■ Шт 2:1

Щот 4:1

2 10,64

2 10,64

2 11,64

3 11,64

3 12,64

2,440,55 11,4410,84

4 10,64

4 11,64

3 11,64

2 12,64 ;

2 10,64

3,0+1,0 11,44^0,84

5 10,64

6 11,64

5 10,64

7 12,64

6 11,64

5,Щ:0,84 11,441£>,84

5 11,64

6 10,64

5 11,64

' 6 12,64

7 . - 10,64

5,8Ю,84 - 11,4410,84

7 11,64

6 10,64

6 10,64

г 12,64

5 11,64

5,8±0,84 - 11,4^+0,84

1

2

- 13 - •

В группах 1 и 2, где хламидийный антиген разводили в 4 и 2 раза, тигры антител были низкими. В группах 3, 4 и 5 титры комплементсвязывавдих антител были 1:32 - 1:128, что существенно не отличается от титров антител, выявленных в сыворотке крови животных при вагавшации моновакщшой против, хламидиозного аборта овец.

Из таблицы 1 видно, что .логарифмы величин, обратных титрам в группах 1 и 2 соответственно составили: 2,4+0,55 и 3,011,0. В группах 3, 4 и 5 эти величины составили 5,8^0,34. Анализируя эти данные мы установили, что оптимальным соотношением хламидийного и кампилобактерийного'антигенов является соотношение 1:1.

Результаты заражения подопытных животных представлены в таблице 2. ■ •

Животных, павших в результате заражения, вскрывали, из паренхиматозных органов готовили суспензию и заражали ею растущие куриные эмбрионы. Результаты исследования патологического материала отражены в таблице 2.

Из таблицы 2 видно, что в первой и второй группах животньг\ где количество хламидийного антигена составляло соответственно 1/4 и 1/2 иммунизирующей дозы, не бшо полной зашиты от заражения культурой возбудителя хламидиоэа У животных 3, 4 и 5 групп формировался напрятанный иммунитет, и они противостояли заражению вирулентной культурой хламидий.

По результатам этих исследований было определено оптимальное соотношение хламидийного и кампилобактерийного антигенов, которое составило 1: 1.

Таблица 2

РЕЗУЛЬТАТЫ ЗАРАЖЕНИЯ ВАКЦИНИРОВАННЫХ И КОНТРОЛЬНЫХ МОРСКИХ СВИНОК ' ■>'"''

NN Соотношение : Результаты Исследования : Процент

: контрольного патологического: защиты

групп анпгенов : заражения материала : животных от хлами-_диоза

1 1/4:1 4/5 + 20

О 1/2:1 2/5 + 60

3 1:1 0/5 - 100

4 2:1 0/5 - 100

С и 4:1 0/5 - .100

6 Контроль 5/5 + 0

Примечание: числитель - количество заболевших животных •знаменатель - количество животных в опыте

3.2. йммуногенные свойства хламидий в ассоциации с кампилобактериями в опытах на морских свинках.

Серологические исследования сывороток крови, полученных от вакцинированных морских свинок, показали, что уровень компле-ментсвязываотих и гемагглюгинирующих антител к хламидиям при применении ассоциированной и моновакцины . против хламидиоза не отличался и составлял 1: 40 в РДСК и 1:170-1:176 в РИГА соответственно. _ . .

Результаты определения агглютинирующих антител к кампило-бактериям в сыворотке крови вакцинированных'морских свинок показа-

ли, что средний титр указанных антител в обеих Г1 и 3) группах животных был одинаков и составил 1: 2400.

Контрольные отвотные не имели антител к изучаемым антигенам

Б результате контрольного заражения у яевакцинированных животных наблюдали конъюнктивиты, риниты, бронхиты, животные отказывались от корма, мало двигались. В течение 10 суток наблюдения две морские свинки згой группы пали. В мазках-отпечатках, приготовленных кз паренхиматозных органов павиих животных^ были обнаружены хламидии.

У вакцинированных ливотных обеих групп С 1,2 ) на вторые сутки после заражения наблюдали угнетенное состояние, жадду, снижение аппетита. Чгрез двое-трое суток эти симтомы исчезали. Всэ иммунизированные животике остались жзы.

Эти результаты свидетельствуют о приобретении морскими свишсаш устойчивости к заболеванию хламидиозом после их вакцинации ассоциирпованной вакциной против хламидиоза и кампилобак-териоза овец.

3.3. Динамика образования антител против хламидий и кампилобактерпй (в опытах на кроликах)/

Результаты изучения динамики образования антител на 20 кроликах показали, что титры антител против хламидий и кампилобак-терий нарастали одинаково при иммунизации кроликов ассоциированной и моновакцшгами.

Средние титры комплеиентсвязыва.одих антител в сыворотке кропя животных, вагадпшроваяных ассоциированной вакциной против кампилобактериоза и хламидиоза через 7 суток составляли 1:5,6; через 14 суток 1:20,6; через 21 сутки - 1:41,6. В группе кроликов, Шгсмунизированных моновакциной против хламидиоза, через 7

суток титры антител были 1:6,4; через 14 суток 1:20,8, через 21 сутки - 1:41,6.

Исследования по изучению динамики образования агглютинирующих кампилобактериальньвс антител в группе животных, иммунизированных ассоциированной вакциной, показали, что средние титра выявленные на 7 сутки в разведении сывороток крови 1:520, через 14 суток - 1:11?0 и через 21 сутки - 1:2240. В группе животных, иммунизированных эемульсин-Еакциной против кашклобактериоза овец, .титры антител составляли: на 7-е сутки - 1:"640; через 14 суток -1:128С и через 21 сутки - 1:2360.

У контрольных г зэтньк антител к кампилобактериям не выявлено.

Результаты этих исследований указыв&нл- на антигенную актив-

г

ность хламидий и кашн.юбаете рий в ассоциированной вакцине.

3.4. Иммуногенные свойства ассоциированной вакцины (в опыте на суягных овцах").

При клиническом наблюдении у вакцинированных животных было зарегистрировано незначительной повышение температуры тела( 40°С) При осмотре места введения вакцины отмечали припухлость, болезненную при пальпации. ■

По результатам серологических исследований сывороток крови вакцинированных овец отмечено, что титры антител к хламидиям у тавотных, иммунизированных ассоциированной вакцной на 10 сутки составили 1:^ 1:8; средний тигр по группе составил 1:5. В группе животных, иммунизированных эмульсин-вакциной против хламвди-. озного аборта.овэц титры составляли 1:4- 1:8 и средний титр 1:5. Через 52 суток зти титры .в первой группе животных была-: 1:32-1:128, (средний титр по группе - 1:59). Во второй группе животных - 1: 32-1:128, (средний титр - 1:54,9). Перед заражзни

ем овец, через 73 суток после вакцинации титры были: в первой группе 1:32-1:64, (средний титр 1:45,7'); во второй группе - 1:32 -1:64, (средний - 1:50).

После заражения овец хламидиями у иммунизированных животных наблюдали незначительное повышение температуры тела в течение 23 суток. Контрольные животные реагировали на заражение подъемом температуры тела до 41,6°С, в среднем по группе температура тела животных составила 40,б°С. У животных наблюдали угнетенное состояние, отказ от корма, жажду. Они почти все время лежали, при принуждении вставали неохотно.

КЗ семи овцематок, иммунизированных ассоциированной вакциной, а затем инфицированных хламидиями, б овцематок окотились нормально, и от них получено б здоровых ягнят. У одной овцематки родился нежизнеспособный ягненок, который пап на 4-е сутки. При исследовании хлашдпи не были обнаружены.

Во второй группе, где применялась эмульсин-вакцина против хламидиозного аборта овец, нормально окотились все 7 овцематок.

В группе контрольных животных■одна овцематка абортировала на 14 сутки после заражения, и у нее отмечено задерлсанне последа Две овцематки абортировали на 64 сутки после заралзнкя. У трех овцематок на 64-76 сутки после заражения родились слабые нежизнеспособные ягнята, которые пали на 3-4 сутки.

В мазках-отпечатках, приготовленных из плодовых оболочек и паренхиматозных органов абортированных плодов и павших ягнят, были обнаружены элементарные тельца возбудителя хламидиозного

аборта. Хяашдии выделены такде из куриных эмбрионов, которым вводили суспензию, приготовленную из патологического материала, полученного ст павших ягнят и абортированных плодов.

Результаты этих исследований показывают, что ассоциированная вакцина обеспечивает такую ¡не защиту овец от заражения, хла-мидиозом как и моновакпина против этого заболевания."

3.5. Испьгание икактивированной ассоциированной змулъсин-вакщшы в производственных условиях.

При применении ассоциированной вакцины в условиях хозяйств Бугунс.:эго района Чимкентской области Казахстана, стационарно неблагополучных"по хламидиозу и кашилобактериозу овец, вакцинировали 2970? овцематок

В трех хозяйствах: совхозе "60 лет ВЛКСЫ", совхозе имени и совхоза "Кок-Арал", где вакцинировали 11209 овцематок,. заболевание овец хламидиозоы и кампилобактериозом в период еуягности не установлено.

Статистическую обработку данных провели по другим трем хоз-хяйствам, в которых установлены аборты кампилобактерийкой и хла-мидийной этиологии: совхозу имени Уунайтпассова, совхозу "Бур-жарский" й соехозу "Караспанский", где имелось 47580 овцэматок (77 отар), из которых вакцинировали 18498 (29 отар) и 29082 овцематок ( 48 отар 1 - контрольная группа 29082 овцематки (48 отар). Результаты исследования эффективности вакцины представлены в таблице &

Таблша 3

Эффективность применения ассоциированной вакцины против кампиЛобактериоза и хламидиоза овец в неблагополучных хозяйствах

: Общее : Количество заболевших ж-х Группы животных : количество :

ливотных : Всего : *

Вакцинированная 18498 141 0,76

Контрольная 29082 2594 12,25

Коэффициент эпизоотологической эффективности вычисляли по формуле:

р ЮО(б-а) Е---,

где: Е - коэффициент эпкзоотологической эффективности; а - заболеваемость среди привитых; б - заболеваемость з контрольной группе. Е-93,85%

Из данных, приведенных вьше, видно, что эффект вакцинации на уменьшение заболеваемости в иммунизированной группе, по сравнению с контрольной, достоверен с вероятностью более 957. и не является случайным.

- 20 -шводы

1. При сравнительном изучении антигенных сбойсте хламидий в ассоциации с кашшлобактериями и без них установленно, что введение в организм двух антигенов индуцирует выработку у животных антител к хламидям б тех же титрах и в те же сроки сроки, что и моноантиген.

2. В экспериментах на морских свингах и овиах показано, что хламидии в ассоциации с кампилобактериями в сочетании с масляным адьювантом обладают выраженными имуногенныш свойствам*!.

3. Определено оптимальное соотношение хламидийного и камли-лобактерийцого антигенов в ассоциированной эмульсин-вакцине против к^чшлобактериоза и хламидиоза овец, которое составило 1:1 по объему.

4. В экспериментах на лабораторных животных и овцах установлений отсутствие конкуренции и синергии при одновременном введении в организм жиеотных кампилобактерийного и хламидийного антигенов ввице масляной эмульсии.

5. В лабораторных условиях из отечественных штаммов приготовлена и испытана ассоциированная инактивированная эмульсин* вакшша против капилобактериоза и хламидиоза овец.

6. В производственном опыте в условиях неблагополучных по хламидиозу и камполобактериозу овец хозяйств показана достаточно высокая .запштная эффективность ассоциированной вакцины' против абортов' хламидиозкой этиологии (93%).'

• 7. При использовании ассоциированной вакцины для профилактики хламидиоякнх и кампилобактсриозных абортов значительно сокращаются затраты на изготовление препарата и его применение. Вакцинацию ог--ц рекомендуется включить в качестве основного звена в систему мер борьбы с хламидиозом и кампилобактериозом овец.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1&териалы работы использованы при подготовке документов:

-"Временная инструкция по изготовлению и контролю ассоциированной эмульсин-ваздшы инактивированной против камяилобактериоза и х'ламидиоза овец", утверждена 30.01.1980 г. , директором ВИЭВ, Г. Ф. Еоро .числовым;

-"Наставление по применению ассоциированной инактквирован-ной эмульсин-вакцина против кашидобактериоза и хламидиоза овец", утверждено 09.11.1989 ГУБ при Госагропроме;

- ТУ 10-09-"3-89 на изготовление ассоциированной кнактиви-рованной эмульсин-вакцины против хлаадиоза и кампплобактериоза овец, утверждены 02.11.1983. ГУВ при Госагропроме.

СШ1ССК РАБОТ, ОтТЛЙКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИЙ

1. Горовая Л, II, Налетов Я II , Лучко 14 А. , Цалкков II Э. Результаты исследования антигенных свойств ассоциированной вакцины против хламидиоза и кашшлобактериоза овец. //Тр. ВИЭВ. 1993. - N 87-88.

2. Горовая Л. И.. Налетов а ¡1 . Лучко Я А. Антигенные и им-муногенные свойства хламидий в ассоциации с кампилобактериями. / /Тр. ВИЭВ. -1983. N 87-88.