Значение показателей оксидативного стресса и фагоцитоза при хроническом гепатите С

Го, Алексей

Диссертации по медицине → Инфекционные болезни

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.09) на тему:Значение показателей оксидативного стресса и фагоцитоза при хроническом гепатите С

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Го, Алексей Санкт-Петербург 2011 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.01.09

Автореферат диссертации по медицине на тему Значение показателей оксидативного стресса и фагоцитоза при хроническом гепатите С

На правах рукописи

ГО АЛЕКСЕЙ

ЗНАЧЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ОКСИДАТИВНОГО СТРЕССА И ФАГОЦИТОЗА ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ С

14.01.09 - инфекционные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

О 3 [.;;.р 2371

Санкт-Петербург 2011

4856619

Работа выполнена в ФГБУ «Научно-исследовательский институт гриппа» Минздравсоцразвития РФ

Научный руководитель:

доктор медицинских наук профессор Эсауленко Елена Владимировна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор Антонова Тамара Васильевна доктор медицинских наук Гусев Денис Александрович

Ведущее учреждение - ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И.Мечникова» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Защита диссертации состоится "15" марта 2011 года в 1315 часов на заседании диссертационного совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д.208.090.02 при ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский Государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию в Научно-исследовательском институте пульмонологии

(197022,Санкт-Петербург, ул. Рентгена, д. 12, зал заседаний Ученого Совета)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад.И.П. Павлова» (197022, Санкт-Петербург, ул. Л.Толстого, д. 6-8)

Автореферат разослан "_"_2011 г.

Ученый секретарь совета по защите докторских и кандидатских диссертаций,

доктор медицинских наук, профессор Александров Альберт Леонидович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. По данным ВОЗ в настоящее время в мире насчитывается более 170 млн. больных хроническим гепатитом С (ХГС), а число инфицированных HCV достигает 500 млн. человек [Жербун А.Б., 2008; Рахманова А.Г., 2006; Яковлев А.А. и соавт., 2002].

Хорошо известно, что хронизация при остром гепатите С крайне высока и достигает 50 - 90% [Майер К.-П., 2004; Pawlotsky J.-M, 2004]. Многочисленные исследования доказали возможность неблагоприятных исходов хронического гепатита С, таких как развитие цирроза печени в 10 - 20% и гепатоцеллюлярной карциномы в 10 - 20% случаев терминальных поражений печени, требующих ее пересадки [Лобзин Ю.В., 2006; Read А.Е. et al., 1991; Resnick R.H.et al., 1993]. При естественном течении заболевания летальность в течении 20 - 40 лет составляет 15,5% - 35% [Майер К.-П. 2004; Pawlotsky J.-M. 2004].

До настоящего времени молекулярные механизмы патогенеза хронического гепатита С (ХГС) остаются не достаточно изученными. Известно, что оксидативный стресс играет значительную роль в патогенезе ХГС. Заболевание характеризуется увеличением уровня маркеров оксидативного стресса [Choi J.et al, 2004]. У больных ХГС увеличено содержание продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме, периферических мононуклеарах, биоптатах печени. Развитие оксидативного стресса при ХГС может быть объяснено хроническим воспалением, а продолжающееся образование активных форм кислорода (АФК) вероятно связано с окислением НАДФН оксидаз (Nox2 протеин) в Купферовских клетках и полиморфонуклеарных клетках печени [Forman H.J. et al, 2004]. , -

Отмечена связь между уровнем маркеров оксидативного стресса и выраженностью печеночного фиброза [Nakashima Т. et al, 2000; Maki et al, 2007], a также, эффективностью интерферонотерапии [Sumida Y. Et al, 2000]. Важное значение в развитии оксидативного стресса отводится фагоцитам - нейтрофилам и моноцитам, которые являются основными продуцентами кислородных радикалов [Владимиров Ю.А., 2000; Racek J. et al, 2001]. Имеющиеся данные указывают на истощение их кислородозависимого потенциала при ХГС, что приводит к их функциональной недостаточности [Скляр Л.Ф., 2006; Нагоев Б.С., Понежева Ж.Б. 2009].

В немногочисленных опубликованных исследованиях последних лет содержатся противоречивые данные относительно уровня активности супероксиддисмутазы (СОД) и глютатионпероксидазы (ГПО) у больных ХГС. Так, например, сообщается, что активность СОД и ГПО в эритроцитах у больных достоверно выше чем у здоровых добровольцев, в то время как в плазме крови активность ГПО ниже у больных, чем у здоровых [Ко W.S., et al. 2005]. В другом аналогичном исследовании активность СОД и ГПО в эритроцитах оказалась ниже у больных, чем у здоровых [Levevt G., et al. 2006].

Таким образом, учитывая значение оксидативного стресса в формировании фиброза и развитии гепатоцеллюлярной карциномы, а также его влияние на интерферонотерапию, является перспективным изучение связанных с фагоцитарной активностью нейтрофилов механизмов развития оксидативного стресса, его роли в патогенезе ХГС, а также возможности коррекции.

Цель исследования: Сопоставить активность супероксиддисмутазы, глютатионпероксидазы и фагоцитарного состояния нейтрофилов с основными характеристиками хронического гепатита С.

Задачи исследования:

1. Охарактеризовать течение хронического гепатита С с оценкой данных клинических, биохимических и вирусологических методов обследования.

2. Изучить показатели активности супероксиддисмутазы, глютатионпероксидазы, и фагоцитарного состояния нейтрофилов больных хроническим гепатитом С.

3. Провести сравнительный анализ активности супероксиддисмутазы, глютатинпероксидазы с показателями фагоцитарного состояния нейтрофилов больных хроническим гепатитом С

4. Оценить активность супероксиддисмутазы, глютатионпероксидазы, показателей фагоцитарного состояния нейтрофилов и сывороточного железа у больных при различных вариантах хронического гепатита С с учетом эффективности противовирусной терапии.

5. Оценить влияние гепатопротектора «Хофитол» на показатели антиоксидантной защиты и фагоцитарного состояния нейтрофилов при хроническом гепатите С.

Научная новизна работы

Получены новые данные о повышении активности антиоксидантных ферментов у больных хроническим гепатитом С при наличии или отсутствии цитолиза.

Впервые при хроническом гепатите С выявлена взаимосвязь между выраженностью оксидативного стресса и фагоцитарным состоянием нейтрофилов.

Впервые показано значение уровня активности антиоксидантных ферментов и фагоцитоза в формировании устойчивого вирусологического ответа при комбинированной противовирусной терапии хронического гепатита С.

Новыми являются данные о корригирующем влиянии препарата «Хофитол» на фагоцитарную активность нейтрофилов (ФЧ, ФИ) в крови больных хроническим гепатитом С.

Практическая значимость работы

На основании данных, полученных в результате проведенного исследования, обоснована целесообразность включения в схему обследования больных ХГС маркеров оксидативного стресса и фагоцитарной активности нейтрофилов, которые позволяют оценить тяжесть течения заболевания и прогноз эффективности противовирусной терапии.

Обосновано включение в патогенетическую терапию гепатопротекторов с антиоксидантной активностью, поскольку они способствуют уменьшению активности воспаления (цитолитического синдрома, оксидативного стресса), а также повышению фагоцитарной активности нейтрофилов.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Хронический гепатит С в большинстве случаев сопровождается повышением активности супероксиддисмутазы и глютатионпероксидазы на фоне понижения фагоцитарной активности нейтрофилов.

2. У больных хроническим гепатитом С изменение степени фагоцитарной активности нейтрофилов соответствует выраженности

цитолитического синдрома. У больных хроническим гепатитом С при отсутствии цитолиза достоверно повышена активность антиоксидантных ферментов и понижены показатели фагоцитарной активности нейтрофилов.

3. Маркеры оксидативного стресса и фагоцитарной активности нейтрофилов могут быть использованы для прогноза эффективности противовирусной терапии при хроническом гепатите С

4. Применение препарата «Хофитол» оказывает положительное влияние на оксидативный статус и фагоцитарную активность нейтрофилов у больных хоническим гепатитом С.

Апробация работы

Основные положения работы доложены на Семинаре для практических врачей «Рациональная терапия хронических вирусных гепатитов» 22 ноября 2005г., СПб., 2-й Российско-Итальянской конференции «Актуальные вопросы социально-значимых вирусных инфекций» 2-3 марта 2006г. Великий Новгород, Российской научно-практической конференции, посвященной 110-летию кафедры инфекционных болезней Военно-медицинской академии им.С.М. Кирова «Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины» 22-24 марта 2006г., СПб., Научной конференции отдела экспериментально-клинических исследований НИИ гриппа СЗО РАМН 16 марта 2010г.

По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Реализация работы

Результаты исследования используются в работе отделения экспериментальной терапии хронических гепатитов специализированной клиники ФГБУ НИИ гриппа Минздравсоцразвития РФ, в ГУЗЛО «Центр по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями», внедрены в учебный процесс кафедры инфекционных болезней Санкт-Петербургской государственной педиатрической медицинской академии, на кафедре терапевтических дисциплин с курсом инфекционных болезней МУФО.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 112 страницах компьютерного набора, состоит из введения, 7 глав, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа содержит 27 таблиц, 9 рисунков, 2 выписки из истории болезни. Библиографический указатель включает 171 источник, в том числе 46 отечественных и 125 иностранных.

ОБЪЕМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование проведено в отделении экспериментальной терапии хронических гепатитов специализированной клиники ФГБУ НИИ гриппа Минздравсоцразвития РФ (директор академик РАМН профессор О.И.Киселев) в периоде 2005 по 2010 годы.

Обследовано 197 пациентов с подтвержденным диагнозом хронический гепатит С: из них 114 мужчин (средний возраст- 33±10лет) и 83 женщин (средний возраст 34±11лет).

Группу сравнения составили 17 здоровых добровольцев: 10 женщин и 7 мужчин (средний возраст 19±5 лет) не имевших каких либо заболеваний печени.

Клиническое наблюдение за больными включало сбор анамнеза заболевания, эпидемиологических данных, клинический осмотр с обследованием по системам и органам, оценку тяжести основного заболевания по стадиям и выраженности клинических проявлений, а также сопутствующих заболеваний.

Лабораторное исследование состояло из клинических, иммунологических, биохимических и вирусологических методов.

Клинический анализ крови проводили на гематологическом анализаторе РСЕ-90 (ERMA INC, Япония) он включал определение количества эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов, лейкоцитов и лейкоцитарной формулы, СОЭ.

С целью уточнения функционального состояния печени проводили определение следующих биохимических показателей крови: уровень общего билирубина, активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) на биохимическом анализаторе Microlab-300, содержание общего белка фотокалориметрическим методом.

Всем пациентам проведено определение РНК вируса гепатита С и его генотипирование методом ПЦР с помощью амплификатора «Терцик» и тест систем АмплиСенс (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзор).

Для изучения оксидативного стресса больных хроническим гепатитом С проводилось определение некоторых его показателей. У всех больных проводилось определение таких маркеров оксидативного стресса, как супероксиддисмутаза (СОД) и глютатионпероксидаза (ГПО) с помощью полуавтоматического биохимического анализатора Microlab-ЗОО. За нормальные значения принимали -для СОД 164-240 Ед/мл, для ГПО 4171-10881 Ед/мл.

Для изучения фагоцитоза проводили оценку фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови. Интенсивность реакции оценивали по следующим показателям: фагоцитарному индексу Гамбургера (ФИ) - количеству фагоцитировавших нейтрофилов в процентах от общего числа нейтрофилов и фагоцитарному числу Райта (ФЧ) - среднему количеству фагоцитированных частиц каждым нейтрофилом. За нормальные значения принимали для ФИ 40%-82%, для ФЧ 4,0-8,3.

В комплекс обязательных исследований для всех пациентов входило ультразвуковое исследование органов брюшной полости с целью уточнения степени поражения печени, а также выявления сопутствующей патологии. Исследования проводили на аппарате Logiq а200. Перед процедурой все больные проходили соответствующую подготовку.

Пункционная биопсия печени с последующим гистологическим исследованием биоптатов была проведена 36 больным. Морфологическое исследование гепатобиоптатов осуществлялось по стандартной методике сотрудниками патологоанатомического отделения ГИБ № 30 (зав. отделения Комарова Д.В.). Выраженность воспалительных изменений оценивалась по (Knodell R.G. и соавт., 1981) и степень фиброза по (METAVIR).

Из общего числа обследованных 22 больным была проведена патогенетическая терапия. В исследовании принимало участие 13мужчин и 9 женщин в возрасте от 19 до 48 лет. Препарат с антиоксидантным действием

Хофитол назначался перорально по 2 таб. Зраза в день в течешь 30 дней в режиме монотерапии.

Комбинированную противовирусную терапию с использованием препаратов «Альтевир» и «Рибапег» получали 34 больных из общего числа обследованных, 20 мужчин и 14 женщин в возрасте от 20 до 38 лет. Терапия назначалась по общепринятым показаниям с использованием схем рекомендованных фирмами производителями в течение 24-48 недель. Через 6 месяцев после окончания терапии устанавливали ее эффективность по наличию устойчивого вирусологического ответа (УВО).

Полученные в процессе исследования данные обрабатывали с помощью программы SPSS 17.0. Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы (об отсутствии различий и влияний) принимали равным 0,05. Характеристики выборок представлены в виде средних величин (М), стандартных отклонений (SD). В последующем в случаях нормального распределения для сравнения двух выборок использовали t тест Стьюдента для независимых выборок, в случаях ненормального распределения U тест Манна и Уитни. Для сравнения более двух независимых выборок использовали Н-тест по методу Крускала и Уоллеса. Для сравнения двух зависимых выборок в случае ненормального распределения применяли тест Уилкоксона.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

В результате исследования было установлено, что большинство больных являлись преимущественно людьми молодого и среднего возраста, что свидетельствует о том, что ХГС - болезнь лиц трудоспособного возраста.

Из обследованных больных 136 (69,1%) человек жалоб не предъявляли, а у остальных пациентов отмечались незначительные нейровегетативные и диспептические расстройства. Обследование 197 больных подтверждает тот факт, что ХГС протекает без видимых проявлений. У большинства пациентов инфицирование было обнаружено как «случайная находка» после выявления антител к вирусу гепатита С.

Полученные в работе данные позволяют констатировать, что несмотря на отсутствие жалоб, в 85% случаев активность АлАТ превышает нормальные значения. Только у 15% обследованных больных данный показатель оставался в пределах нормы. Незначительная гипербилирубинемия отмечалась лишь у 41 (21%) пациента. Необходимо отметить, что статистически достоверно повышенная активность АлАТ не сопровождалась появлением каких-либо жалоб у больных ХГС.

В соответствии с целью исследования, была проведена оценка активности показателей, характеризующих оксидативный стресс пациентов и фагоцитарное состояние нейтрофилов.

У всех обследованных больных (197 пациентов) в большинстве случаев определялось повышение активности ГПО (60%) и СОД (78%) и снижение показателей ФЧ (70%) и ФИ (22%).

Выявлено, что у больных с повышенной активностью АлАТ (167 пациентов) значительно изменены показатели оксидативного статуса. У большинства обследованных - 120 пациентов (72%) значение активности ГПО оказалось

достоверно выше значений контрольной группы и лишь у 15 пациентов (9%) значение данного показателя - ниже нормы. В 19% случаев (32 пациента) зафиксированы нормальные значения ГПО.

У большинства обследованных больных 104 человек (62%) активность СОД оказалась выше нормальных значений, у 50 человек (30%) в пределах нормальных значений и только у 13 человек (8%) ниже нормы (рис.1):

7096

-ае^г

киже N

Рис.1. Частота определения различных вариантов значений СОД и ГПО у больных хроническим гепатитом С с наличием цитолитического синдрома (п=167)

Таким образом, установлено наличие повышенных значений активности СОД и ГПО у большинства больных ХГС с цитолитическим синдромом.

При исследовании состояния фагоцитоза у больных ХГС с цитолитическим синдромом, функциональная активность фагоцитов оказалась сниженной в большинстве случаев (76%) по данным ФЧ и у 39% больных ХГС отмечается отклонение по показателю ФИ, т.е. в 21% случаев ФИ оказался ниже нормальных значений и в 18% - выше (рис.2).

Рис.2 Частота определения различных вариантов значений Ф11 и ФЧ у больных хроническим гепатитом С с цитолитическим синдромом (п= 167)

Сравнительный анализ маркеров океидативного стресса и показателей фагоцитоза показал, что при значениях ФИ ниже нормальных активность ГПО была достоверно повышена (16358±6327 Ед./л). Полученные данные можно объяснить тем, что при ХГС хроническая активация фагоцитов и, возможно, прямое действие вируса ведет к снижению их функциональной активности на фоне развития океидативного стресса и усиления цитолитического синдрома, вызванного последним.

Проведя сравнительный анализ показателей океидативного стресса и фагоцитоза, было выявлено, что уровень СОД достоверно не изменялся в зависимости от показателя ФИ, однако, отмечалась тенденция к снижению этого показателя (на 16%) в группе с ФИ ниже нормы. В этой группе отмечалась достоверно высокая активность ГПО, причем ее значения превышали нормальные, что свидетельствует о наибольшей выраженности океидативного стресса в группе больных ХГС с ФИ ниже нормы.

Уровень активности ГПО и СОД достоверно не изменялись в зависимости от показателя ФЧ, однако отмечалась тенденция к повышению (на 15%) ГПО у больных ХГС с ФЧ ниже нормы.

Нами был проведен корреляционный анализ между показателями неспецифической резистентности и исследуемыми маркерами океидативного стресса, который показал наличие обратной корреляционной связи между активностью ГПО и значениями ФИ и ФЧ (г=0,30, р=0,001 и г=0,25, р=0,004 соответственно)

Нами изучены показатели, характеризующие оксидативный стресс и фагоцитарное состояние нейтрофилов в зависимости от степени выраженности цитолитического синдрома.

Результаты анализа исследуемых показателей при различной выраженности цитолитического синдрома приведены в табл.1.

У больных с наличием цитолитического синдрома при уровне активности АлАт, превышающим 2Ы, выявлено достоверное (р=0,001) снижение показателей фагоцитоза, как ФИ, так и ФЧ по сравнению с больными с невысоким цитолизом (менее 2Ь1). Следует отметить, что снижение ФИ происходило только в пределах его нормальных значений, тогда как - ФЧ снижалось значительно.

Маркеры осидативного стресса оказались менее чувствительны к повышению активности АлАТ, при этом СОД и ГПО имела тенденцию к более высоким показателям у больных с повышенной активностью АлАТ.

Таблица 1.

Биохимические маркеры океидативного стресса и показатели фагоцитарной активности при различной выраженности цитолитического синдрома_

Группа\локазатель СОД (Ед/л), М+БО ГПО (Ед/л), М+БО ФИ (%), М±БО ФЧ М±50

АЛТ до 2N п=93 346±136 11318±3469 76±15 4,2±2,2

АЛТ выше 2N п=74 314±146 10130±5793 б4±15 2,9±1,2

Р-критерий Манна-Уитни 0.42 0,39 0,001 0,001

При анализе показателей активности СОД, ГПО и величины ФЧ, ФИ у больных с нормальными показателями АлАТ и у группы сравнения оказалось, что у больных ХГС достоверно выше активность ГПО и СОД. Показатели ФИ и ФЧ достоверно ниже (табл. 2):

Таблица 2.

Показатели СОД, ГПО, ФИ, ФЧ, больных ХГС с нормальными показателями АлАТ и здоровых добровольцев из группы сравнения __

Группа\показатель СОД (Ед./л) М±БО ГПО (Ед./л) М±8Б ФИ(%) М±БО ФЧ М±БО

AлAT=N п=30 297± 146 14732± 5111 63±23 3,2 ±1,8

Группа сравнения п=17 242± 123 10201± 4527 85± 10 5,4± 0,4

Р критерий Манна-Уитни 0,048 0,001 0,049 0,020

Таким образом, показатели активности ГПО и СОД, ФЧ и ФЧ могут быть использованы как дополнительные критерии активности ХГС, особенно в группе больных с нормальными показателями АлАТ.

При проведении генотипического исследования установлено, что большинство больных имели За генотип вируса гепатита С 57% (110 пациентов). Остальные пациенты были инфицированы вирусами 1Ь генотипа 33% (65 пациентов), 1а генотипа 4% (9 пациентов), 2 генотипа 5% (11 пациентов) и За+1Ь генотипа 1% (2 пациента). Известно, что эффективность противовирусной терапии зависит от генотипа вируса гепатита С. В литературе широко обсуждается вопрос о причинах таких различий. Большинство авторов склоняются к наличию некоторых патогенетических особенностей заболевания, что проявляется различиями морфологической картины при 1-ом и 3-ем генотипах [В.В. Серов, З.Г. Апросина. 2004].

Следующим этапом нашего исследования было изучение маркеров оксидантного статуса больных и факторов активности фагоцитоза в зависимости от генотипа вируса. Для этого мы сформировали две группы пациентов в зависимости от генотипа вируса гепатита С;

1. Группа пациентов с 1 -м генотипом ВГС - 55 пациентов

2. Группа пациентов с За генотипом ВГС - 94 пациента

Определение активности СОД в сравниваемых группах выявило повышение данного показателя у больных с 1 генотипом в 38% случаев, а с За - в 50%. Средние значения активности СОД несколько выше у больных инфицированных За генотипом, чем 1-м, но не достоверно. Поэтому мы ввели относительный показатель «коэффициент отклонения» (Ко), характеризующий степень отклонения СОД от нормы, выраженный в процентах. Группа больных ХГС с Ко более 10% с 1-м генотипом вируса составили 19 человек (35%), а с За - 48 (50%). В результате проведенных расчетов оказалось, что величина коэффициента отклонения в два раза выше (р=0,045) у больных с 3-м генотипом. Кроме того, обе группы достоверно различались по степени выраженности цитолитического синдрома. (табл.3).

Таблица 3.

Значение активности СОД и АлАТ у больных ХГС в зависимости от

генотипической принадлежности вируса гепатита С

Группа\показатель 1 генотип (п=19) Згенотип (п=48) Р

СОД (Ед./л) 293±57 340±91 0,062

Коэф.отклонения % 46±14 70±23 0,045

АлАТ (Ед./л) 89±23 96±9 0,048

В группах больных ХГС с первым и третьим генотипом были выделены больные, с повышенной активностью ГПО, затем, во вновь образованных группах был определен «коэффициент отклонения» и выделены больные с коэффициентом отклонения больше 10%, таковых оказалось в группе больных с 1генотипом - 30 человек (54%) и в группе с За генотипом - 48 человек (48%). В результате проведенных расчетов оказалось, что активность ГПО при третьем генотипе ниже статистически достоверно (р=0,032) и Ко тоже ниже (р=0,032), также статистически достоверно (р=0,039) при третьем генотипе более выражен цитолитический синдром чем в группе больных с первым генотипом ( табл.4).

Таблица 4.

Значение активности ГПО и АлАТ у больных ХГС в зависимости от

генотипической принадлежности вируса гепатита С

Группа\показатель 1 генотип (п=30) Згенотип (п=48) Р

ГПО (Ед./л) 17179±5367 14126±2600 0,032

Коэф. отклонения, % 121±71 80±33 0,032

АлАТ (Ед./л) 91±21 106±29 0,039

Таким образом, у больных ХГС, вызванным 1 генотипом вируса, коэффициент отклонения активности СОД достоверно ниже, а ГПО выше, чем у больных с ХГС 3 генотипа. Цитолитический синдром более выражен у больных ХГС, вызванным За генотипом вируса.

Полученные различия показателей оксидативного стресса больных ХГС при инфицировании 1-м и За генотипами вируса гепатита С, позволили нам предположить возможность их использования для прогнозирования эффективности противовирусной терапии.

Для подтверждения данной гипотезы, мы провели сравнительный анализ активности СОД и ГПО, а так же уровень ФЧ и ФИ у больных ХГС, прошедших курс противовирусной терапии в зависимости от ее эффективности.

Эффективность противовирусной терапии оценивалась по достижению устойчивого вирусологического ответа (УВО) через 6 месяцев после окончания терапии. В зависимости от наличия или отсутствия УВО, больные подразделялись на две группы. Первую группу больных составили 19 человек, достигших УВО, а вторую- 15 человек с рецидивом в первые 6 месяцев. Показатели оксидативного стресса и фагоцитарной активности, а так же активность АлАТ оценивалась на старте терапии.

Анализ результатов выявил, что УВО развивается у больных с высокой активностью АлАТ (более 4]ч1), повышенной активностью ГПО при сниженной фагоцитарной активности нейтрофилов (табл.5).

Таблица5.

Начальные значения степени цитолитического синдрома, уровня фагоцитарной активности и оксидативного стресса в зависимости от эффективности

Группа\показатель АлАТ (Ед/л) АсАТ (Ед/л) СОД (Ед/л) ГПО (Ед/л) ФИ (%) ФЧ

Есть УВО п= 19 134±76 75±40 318±113 14304± 26869 57±27 2,3±1,3

Нет УВО п=15 77±31 50±16 309±140 12748± 7769 71±16 4,3±1,9

Р критерий Манна-Уитни 0,045 0,091 0,270 0,047 0,030 0,049

Таким образом, возможно использовать показатели ГПО, ФИ и ФЧ как предикторы эффективности противовирусной терапии.

У 36 обследованных больных была проведена пункционная биопсия печени. У 5 человек (13%) в результате проведенного морфологического исследования биоптатов, фиброз оценивался в 0 баллов, у 29 человек (76%) -в 1 балл, и у 4 человек (11%) -в 3-4балла.

Эти больные были разделены на 2 группы в зависимости от выраженности цитолитического синдрома.

В группе с выраженным цитолитическим синдромом (АлАТ больше 2М), отмечалось достоверно высокий уровень сывороточного железа (р=0,027), фиброза (р=0,039) и ИГА (р=0,011) по сравнению с группой больных с активностью АлАТ меньше 2К

В дальнейшем больные были разделены на 2 групп в зависимости от выраженности фиброза печени.

1 группа - фиброз 1 балл и 2 группа - фиброз 3-4балла. При сравнении показателей в этих группах отмечался статистически достоверно (р=0,002) более выраженный цитолитический синдром во второй группе, достоверно (р=0,038) активность СОД была ниже во второй группе по сравнению с первой. Достоверной зависимости показателей фагоцитарной активности (ФИ и ФЧ) и ГПО от степени фиброза установить не удалось, что может быть связано с недостаточным числом наблюдений.

Учитывая закономерное развитие окисдативного стресса при гепатитах нами проведено изучение влияния гепатопротектора растительного происхождения «Хофитол» на активность СОД, ГПО и фагоцитарную активность нейтрофилов у больных ХГС.

«Хофитол» назначали перорально по 2 таблетки Зраза в день в течение 30 дней в режиме монотерапии. Группу сравнения составили 22 больных, не получавших терапию гепатопротекторами.

Применение препарата вызвало тенденцию к снижению уровня активности АлАТ после терапии, снижение уровня активности АсАТ после терапии оказалось статистически достоверным (р=0,048) (табл.6).

Таблица 6.

Изменения показателей цитолитического синдрома при применении

«Хофитола»

Группа\показатель АлАТ (Ед./л) АсАТ (Ед./л)

До лечения п=22 131±69 76±45

После лечения п=22 119±97 47±30

р критерий Уилкоксона 0,680 0,040

На фоне проводимой терапии хофитолом отмечалось достоверное повышение активности ГПО (р=0,012). Наблюдалась также тенденция к повышению активности СОД, но статистически достоверного изменения активности этого фермента выявить не удалось (р=0,535) (табл. 7).

Таблица 7.

Изменения показателей оксидативного стресса при применении «Хофитола»

Группа\показатель СОД ( Ед./л) ГПО (Ед./л)

До п=22 307±89 4880±1847

После п=22 311±66 7019±3463

р критерий Уилкоксона 0,53 0,01

Воздействие «Хофитола» на фагоцитоз оказалось значительно более выраженным. Как значение ФИ, так и ФЧ достоверно (р=0,001) увеличились после терапии причем у 25% пациентов выявлено восстановление до нормальных и более высоких значений первой фазы фагоцитоза - фазы поглощения. У остальных отмечалась отчетливая тенденция к восстановлению фагоцитарной функции нейтрофилов, в среднем ФЧ увеличилось в 1,6 раза по сравнению с исходными данными. Число фагоцитирующих нейтрофилов увеличилось на 8,4%. (табл.8).

Таблица 8.

Изменения показателей фагоцитарной активности нейтрофилов при применении «Хофитола»__

Группа\показатель ФИ (%) ФЧ

До п=22 70±10 3,7±2,3

После п=22 79±6 5,5±2,4

Р критерий Уилкоксона 0.001 0,001

Таким образом, у больных ХГС выявлена закономерная реакция ферментов антиоксидантной защиты на фоне снижения фагоцитарной активности нейтрофилов. Проведенные исследования свидетельствуют о необходимости учитывать эти изменения при назначении противовирусной терапии и патогенетических средств лечения.

ВЫВОДЫ

1. Хронический гепатит С у лиц молодого и среднего возраста характеризуется слабовыраженной клинической симптоматикой, наличием цитолитического синдрома в 85% случаев и преобладанием больных инфицированных За генотипом вируса (57%).

2. У большинства больных хроническим гепатитом С повышена активность антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы и глютатионпероксидазы (в 60% и 78% случаях соответственно).При отсутствии признаков цитолиза у больных хроническим гепатитом С с нормальной активностью АлАТ активность антиоксидантных ферментов достоверно превышели показатели группы контроля.

3. У больных хроническим гепатитом С с выраженным цитолитическим синдромом ( активность АлАТ более 2 норм) в сравнении с пациентами с нормальной или умеренно повышенной активностью АлАТ достоверно выше уровень сывороточного железа, стадия фиброза и индекс гистологической активности. При слабо выраженном фиброзе печени (И) активность супероксиддисмутазы достоверно выше, чем при выраженном и тяжелом фиброзе (РЗ-4). При гепатите С, вызванном 1Ь генотипом вируса имеется тенденция к более низкой активности СОД и высокой активности ГПО в сравнении с гепатитом обусловленным 3 генотипом вируса.

4. У большинства больных хроническим гепатитом С (76%) снижено фагоцитарное число и в 21%- снижен фагоцитарный индекс, что отражает снижение функциональной активности нейтрофилов периферической крови. При выраженном цитолизе (активность АлАТ более 2 норм) фагоцитарный индекс и фагоцитарное число достоверно ниже, чем при ХГС с нормальной и умеренно повышенной АлАТ. У больных с низким фагоцитарным числом имеется тенденция к повышению активности ГПО, при снижении фагоцитарного индекса активность этого антиоксидантного фермента достоверно повышена.

5. У больных ХГС с устойчивым вирусологическим ответом на комбинированную противовирусную терапию перед началом лечения достоверно выше активность АлАТ, ГПО, ниже ФИ и ФЧ, чем у пациентов с отсутствием терапевтического эффекта.

6. На фоне лечения больных ХГС в течении 30 дней растительным гепатопротектором «Хофитол» получена положительная динамика биохимических показателей (достоверное снижение активности АсАТ повышение активности ГПО) и функциональной активности фагоцитов (достоверное повышение ФИ и ФЧ).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДОЦИИ

1. В комплексной оценке состояния больных ХГС рекомендуется определять активность СОД и ГПО, а также значения ФИ и ФЧ.

2. 2. Для прогноза эффективности противовирусной терапии и опенки активности патологического процесса при хроническом гепатите С рекомендуется определять ГПО и значение ФИ.

3. 3. Применение препарата с антиоксидантной активностью «Хофитол» у больных с ХГС способствует стабилизации биохимических показателей и повышению фагоцитарной активности нейтрофилов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.ЭсауленкоЕ.В., Иващенко В.Д., Го A.A., Романов O.A. Неспецифическая резистентность организма у больных хроническим гепатитом С возможность ее коррекции хофитолом // Ученые записки Санкт-Петербургского медицинского университета им. Акад. И.П.Павлова. - 2006г. - Том XIII №3.- С. 63-65

2. Эсауленко Е.В., Ветров Т.А., Го A.A. Опыт применения препарата «Рибапег» в комбинированной этиотропной терапии больных хроническим гепатитом СП Российский медицинский журнал. Том 7, № 2. С. 2-4

3. Го A.A. Изменение показателей оксидативного статуса и неспецифической резистентности при хроническом гепатите С и возможности их медикаментозной коррекции // Вирусные гепатиты- эпидемиология диагностика и профилактика: Материалы VII Российской научно-практической конференции с международным участием. 29-31 мая 2007г. Москва.- 194 с.

4. Го A.A., Эсауленко Е.В. Применение гепатопротектора хофитол в терапии хронического гепатита С // Хвороби печшки в практищ клшщиста: Маер1али науково-практично! конферснцп з м1жнародною участю. 1-2 березня 2007року Харьк1в 2007 С,- 78.

5. ЭсауленкоЕ.В., Павлова О.О., А.А.Го, Осе И.В. Эффективность нового отечественного интерферона альфа-2Ь в терапии хронического гепатита С: результаты открытого рандомизированного сравнительного исследования// Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. 2007г. №1. С.29-34.

6. Эсауленко Е.В. Иващенко В.Д., Го A.A., Романов O.A. Некоторые показатели неспецифической резистентности организма у больных хроническим гепатитом С при применении хофитола // Инфекционные болезни: проблемы здрвоохранения и военной медицины: Материалы Российской научно-практической конференции ,посвященной 110-летию кафедры инфекционных болезней Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова. 22-24 марта 2006г. Санкт-Петербург. - С. 136.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АлАТ- аланинаминотрансферраза

АсАТ- аспартатаминотрансферраза

АФК- активные формы кислорода

ГПО- глугатионпероксидаза

ДНК- дезоксирибонуклеиновая кислота

ИГА- индекс гистологической активности

Ко- «коэффициент отклонения»

ПОЛ- перекисное окисление липидов

СОД- супероксиддисмутаза

ФИ- фагоцитарный индекс

ФЧ- фагоцитарное число

ХГС- хронический гепатит С

ЭПР- электронный парамагнитный резонанс

вБИ- глютатион

ЛР № 020365

Подписано в печать 09.02.2011 г. Заказ №1802 Формат бумаги 60*84. Тираж 100 экз. усл. п.л. 1,0

Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. ИИ. Мечникова Типография ООО «Каро» Санкт-Петербург, Красногвардейская пл., д. 3

Оглавление диссертации Го, Алексей :: 2011 :: Санкт-Петербург

СПИСОК СОКРАЩЕНИИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ВЛИЯНИЕ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ НА ТЕЧЕНИЕ И ИСХОД ХРОНИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА С (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Хронический гепатит С - социально значимая инфекция.

1.2. Свободнорадикальные процессы и их физиологическая роль.

1.3. Значение фагоцитоза в развитии оксидативного стресса.17"

1.4. Значение оксидативного стресса в патогенезе хронического гепатита С.

1.5. Антиоксиданты и их значение в терапии хронического гепатита С.

Глава 2. ПАЦИЕНТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Общая характеристика обследованных больных.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Клинические методы исследования.

2.2.2. Лабораторно-инструментальные методы исследования.

2.2.3. Методы исследования показателей оксидативного стресса и фагоцитарной активности.

2.3. Статистическая обработка результатов исследований.

Глава 3. КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

ОБСЛЕДОВАННЫХ БОЛЬНЫХ.

3.1. Клиническая характеристика больных хроническим гепатитом С.

3.2. Лабораторная характеристика больных хроническим гепатитом С.

Глава 4. СОСТОЯНИЕ СИСТЕМЫ АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ У

БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ С.

Глава 5. ИЗМЕНЕНИЕ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ У БОЛЬНЫХ

ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ С.

Глава 6. СРАВНИТЕЛБНЫЙ АНАЛИЗ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ОКСИДАТИВНОГО СТРЕССА И АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТОЗА ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ВАРИАНТАХ ТЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОГОГЕПАТИТА С.

6.1. Взаимосвязь выраженности оксидативного стресса и степени нарушений активности фагоцитоза.

6.2. Изменение биохимических маркеров цитолитического синдрома, пигментного обмена, оксидативного стресса и значений активности фагоцитоза при различных вариантах течения хронического гепатита С.

6.3 Возможность использования показателей оксидативного стресса и активности фагоцитоза для прогноза эффективности противовирусной терапии.

Глава 7. АНАЛИЗ ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИОКСИДАНТНОЙ ТЕРАПИИ

У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ С.

Введение диссертации по теме "Инфекционные болезни", Го, Алексей, автореферат

Актуальность вопроса

По данным ВОЗ в настоящее время в мире насчитывается более 170 мхги больных хроническим гепатитом С (ХГС), а число инфицированных НСУ достигает 500 млн. человек [20, 38 48]. Гепатит С занимает лидирующее место среди гепатотропных инфекций в развитых странах, где инфицировано от 1 д0 24% населения [35, 43, 47].

Ежегодный прирост заболеваемости на территории РФ исчисляется ^ несколько десятков тысяч человек, так за 2009 год этот показатель по давщ^,^ Федеральной службы по надзору в сфере прав потребителей и благополту-сз^д^ человека составил 57966 человек. В настоящее время чаще всего инфицирухот^^ молодые люди, преимущественно мужчины [6, 46].

Хорошо известно, что хронизация при остром гепатите С крайне высока и достигает 50 - 90% [24, 141]. Многочисленные исследовании доказали возможность неблагоприятных исходов хронического гепатита С, таких как развитие цирроза печени в 10 - 20% и гепатоцеллюлярной карциномы в 10 — I

20% случаев - терминальных поражений печени, требующих ее пересадки ^ 23,32, 33, 63, 147, 148]. При естественном течении заболевания летальность. ^ течении 20 - 40 лет составляет от 15,5% до 35% [24, 141].

До настоящего времени молекулярные механизмы патогенеза хронического гепатита С (ХГС) остаются неясными. Оксидативный стресс являясь основой развития многих патологических состояний, играет значительную роль и в патогенезе ХГС. Известно, что ХГС сопровождает увеличение уровня маркеров оксидативного стресса в печеночных клетках: [67] Продукты перекисного окисления липидов (ПОЛ) нарастают у больных ГХЗГ^С в плазме, периферических мононуклеарах, биоптатах печени. Уровень» 4 Нус1гоху-2-попепа1 и 8-Hydroxydeoxyguanosin, являющихся маркер ами оксидативного повреждения дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) клеток, также повышается [116]. К тому же имеет место достоверное снижение уровня глютатиона (GSH) в плазме, лимфоцитах и биоптатах печени у пациентов с ХГС, особенно, 1в генотипа. Развитие оксидативного стресса при XFC, вероятно связано с хроническим воспалением; а продолжающееся образование активных форм кислорода (АФК). можно объяснить окислением НАДФН оксидаз (Nox2 протеин) в Купферовских клетках и полиморфонуклеарных клетках печени [81].

Отмечена связь между уровнем стрессорных маркеров и степенью выраженности печеночного фиброза [130], а также, эффективностью интерферонотерапии [155]. Важное значение в развитии оксидативного стресса отводится фагоцитам - нейтрофилам и моноцитам, которые являются основными продуцентами кислородных радикалов [12, 145]. Указывается на истощение их кислородозависимого потенциала при ХГС, что приводит к их функциональной недостаточности [39].

Таким образом, учитывая значение оксидативного стресса в формировании- фиброза и развитии гепатоцеллюлярной карциномы, а также его влияние на интерферонотерапию, в настоящее время является перспективным изучение связанных с фагоцитарной активностью механизмов развития оксидативного стресса, его роли в патогенезе хронического гепатита С, а также возможности его коррекции.

Цель исследования

Сопоставить активность супероксиддисмутазы, глютатионпероксидазы и фагоцитарного состояния нейтрофилов с основными характеристиками хронического гепатита С.

Задачи исследования

3. Провести сравнительный анализ активности супероксиддисмутазы, глютатинпероксидазы с показателями фагоцитарного состояния* нейтрофилов больных хроническим гепатитом С

Личный вклад автора

Автор лично выполнил комплексное клиническое обследование всех пациентов, включенных в исследование, принимал участие в выполнении лабораторных исследований. Произвел статистическую обработку результатов и проанализировал полученные данные.

Основные положения, выносимые на защиту

2. У больных хроническим гепатитом С изменение степени фагоцитарной активности нейтрофилов соответствует выраженности цитолитического синдрома. У больных хроническим гепатитом С при отсутствии цитолиза достоверно повышена активность антиоксидантных ферментов и понижены показатели фагоцитарной активности нейтрофилов.

Научная новизна работы

Получены новые данные о повышении активности антиоксидантных ферментов у больных хроническим гепатитом С независимо от наличия или отсутствия цитолиза.

Новыми являются данные о коррегирующем влиянии препарата «Хофитол» на фагоцитарную активность нейтрофилов (фагоцитарное число, фагоцитарный индекс) в крови больных хроническим гепатитом С.

Практическая значимость работы

Обосновано включение в патогенетическую терапию гепатопротекторов с антиоксидантной активностью, поскольку они способствуют уменьшению интенсивности воспаления (цитолитического синдрома, оксидативного стресса), а также повышению фагоцитарной активности нейтрофилов.

Апробация работы и публикации

Основные положения работы доложены на Семинаре для практических врачей «Рациональная терапия хронических вирусных гепатитов» (Санкт-Петербург, 2005); 2-й Российско-итальянской конференции «Актуальные вопросы социально-значимых вирусных инфекций — 2006» (Великий Новгород, 2006); Российской научно-практической конференции, посвященной 110-летию кафедры инфекционных болезней Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова «Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины» (Санкт-Петербург, 2006), Научной конференции отдела экспериментально-клинических исследований НИИ гриппа СЗО РАМН 16 марта 2010г., Санкт-Петербург.

По теме диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 3 - в журналах, рекомендованных ВАК.

Реализация работы

Результаты исследования используются в работе отделения экспериментальной терапии хронических гепатитов специализированной клиники ФГБУ «НИИ гриппа» Минздравсоцразвития РФ, в ГУЗЛО «Центр по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями», внедрены в учебный процесс кафедры инфекционных болезней взрослых Санкт-Петербургской государственной педиатрической медицинской академии.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста, состоит из введения, 7 глав, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа содержит 35 таблиц, 9 рисунков, 2 выписки из истории болезни. Библиографический указатель включает 171 источник, в том числе 46 отечественных и 125 иностранных.

Заключение диссертационного исследования на тему "Значение показателей оксидативного стресса и фагоцитоза при хроническом гепатите С"

ВЫВОДЫ

1. Хронический гепатит С у лиц молодого и среднего -возраста характеризуется- слабовыраженной клинической симптоматикой, наличием-цитолитического* синдрома в 85% случаев- и преобладанием больных инфицированных За генотипом вируса (57%).

2. У большинства больных хроническим гепатитом С повышена активность. антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы и глютатионпероксидазы (в, 60% и 78% случаях, соответственно). При отсутствии признаков цитолиза у больных, хроническим' гепатитом С с нормальной активностью- аланинаминотрансферазы активность, антиоксидантных ферментов достоверно превышали показатели- группы сравнения:

3'. У больных хроническим гепатитом С с выраженным цитолитическим синдромом*' (активность аланинаминотрансферазы более 2 норм) в сравнении с пациентами с нормальной или. умеренно повышенной активностью аланинаминотрансферазы достоверно выше уровень сывороточного железа, стадия фиброза и индекс гистологической активности. При слабо выраженном фиброзе печени активность супероксиддисмутазы достоверно выше,.чем при* выраженном'и тяжелом фиброзе. При-гепатите С, вызванном^ 1Ь генотипом вируса имеется тенденция к более низкой активности супероксиддисмутазы и высокой активности' глутатионпероксидазы в сравнении с гепатитом, обусловленным 3 а генотипом вируса.

4. У большинства больных хроническим гепатитом С (76%) снижено фагоцитарное число и в 21% снижен фагоцитарный индекс, что отражает снижение функциональной активности нейтрофилов периферической, крови. При выраженном цитолизе (активность аланинаминотрансферазы более 2 норм) фагоцитарный индекс и фагоцитарное число достоверно ниже, чем при хроническом гепатите С с нормальной и умеренно- повышенной аланинаминотрансферазой. У больных с низким фагоцитарным числом имеется тенденция к повышению активности глутатионпероксидазы, при снижении фагоцитарного индекса активность этого антиоксидантного фермента достоверно повышена.

5. У больных хроническим гепатитом С с устойчивым вирусологическим ответом на комбинированную противовирусную терапию перед началом лечения достоверно выше активность аланинаминотрансферазы, глутатионпероксидазы, ниже фагоцитарный индекс и фагоцитарное число, чем у пациентов с отсутствием терапевтического эффекта.

6. На фоне лечения больных хроническим гепатитом С в течении 30 дней растительным гепатопротектором «Хофитол» получена положительная динамика биохимических показателей (достоверное снижение активности аспартатаминотрансферазы, повышение активности глутатионпероксидазы) и функциональной активности фагоцитов (достоверное повышение фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДОЦИИ

1. В комплексной оценке состояния больных хроническим гепатрж С рекомендуется определять активность супероксиддисмутазы глутатионпероксидазы, а также значения фагоцитарного индекса, фагоцитарного числа.

2. Для прогноза эффективности противовирусной терапии и оц& активности патологического процесса при хроническом гепатите рекомендуется определять активность глутатионпероксидазы, значе? фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса. В связи со сниже: фагоцитарной активности необходимо проводить ее коррекцию, особенно ж проведении противовирусной терапии.

3. Применение препарата с антиоксидантной активностью «Хофит у больных хроническим гепатитом С способствует стабилиз биохимических показателей и повышению фагоцитарной активное нейтрофилов.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Го, Алексей

1. Антонова Т.В., Иващенко В. Д. Неспецифическая ре^организма у реконвалесцентов вирусного гепатита В // ПроСхлг:д1агностики та терапи гепаташв: зб прац наук-практ.конф.-Харьк!:^ 29 30.

2. Антонова Т.В., Эсауленко Е.В., Иващенко В.Д. Несп<резистентность организма в период реконвалесценции остры-гепатитов // Омский научный вестник. 2005!. - №.4(35). - С. 11 - 12—

3. Беляева Н.М., Тетова В.Б., Алешкович Т.В. Применение комплексной терапии вирусных гепатитов // Инфекционные бол Т. 2, №2. С. 93 - 96.

4. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные поврежден: М: Медицина. 1989. - 368 с.

5. Блюменфельд Л.А., Тихонов А. Н. Электронный парамагнитна // Соросовский Образовательный журнал. 1997. - №9. - С. 91 - 99.

6. Болезни печени и желчевыводящих путей: Руководство для ред. В. Т. Ивашкина. М.: ООО "Издат. дом "М-Вести". - 2005. - 53^

7. Буеверов А.О. Оксидативный стресс и его роль в поврежденз^: РЖГГК. 2002. - №4. - С. 21 - 25.

8. Бурлакова Е.Б. Особенности действия сверхмалых доз бвс«3^стентность .еми клинки2005. с.мифическая вирусных--^офитола в 2004. активных веществ и физических факторов низкой интенсивности // J== химический журнал. 1999. - Т. 53, №5. - С. 3 - 11.

9. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник Российской Академии Медицинских Наук. 1998'. - №7. - С.43 - 51.

10. Владимиров Ю.А. Свечение, сопровождающее биохимические реакции // Соросовский Образовательный журнал. 1999. - №6. - С. 25 - 32.

11. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский Образовательный журнал. 2000. - №121 - С. 13 - 19.

12. Владимиров. Ю.А., Азизова О. А. Деев А. И. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Биофизика. 1992. - Т.29. - С. 3 -250.

13. Владимиров Ю.А., Арчаков' А. И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М»: Наука. - 1972. - 252 с.

14. Владимиров Ю.А., Литвин Ф. Ф. Исследование сверхслабых свечений в биологических системах // Биофизика. 1956. - Т. 4, №5. - С. 601- - 605.

15. Владимиров Ю.А., Потапенко А .Я: Физико-химические основы фотобиологических процессов. М.: Высшая школа. - 1989. - 198 с.

16. Владимиров Ю.А., Шерстнев М. П. Хемилюминесценция клеток животных // Итоги науки и техники. Биофизика. 1989. - Т. 24. - 176 с.

17. Гепатит С: консенсус 2002, Национальный институт здоровья (США), 1012 июня 2002 // Вирусные гепатиты. Достижения) и перспективы. Инф. бюллетень. 2002. - №2(15). - С. 3 - 11.

18. Горбачев В.В., Горбачева В: Н. Витамины микро- и макроэлементы: Справочник. Минск: Книжный Дом; Интерпресс-сервис. - 2002. - 542 с.

19. Жербун А.Б. Вирусные гепатиты в Россиийской Федерации. Аналитический обзор. 7 выпуск. СПб: ФГУН НИИЭМ имени Пастера Роспотребнадзора. - 2008. - 160 с.

20. Змушко Е.И., Белозеров Е.С., Иоанниди Е.А. Вирусный гепатит. Элиста, Джангар. - 2002. - 160 с.

21. Ивашкин В.Т., Буеверов А.О. Аутоиммунные заболевания печени в практике клинициста. М.: «М-Вести». - 2001. - 102 с.

22. Лобзин Ю.В., Жданов К.В., Волжанин В.М., Гусев Д.А. Вирусные' гепатиты: клиника, диагностика, лечение. М.: Фолиант. - 2006. - 192 с.

23. Майер К.-П. Гепатит и последствия гепатита: Практич. рук.: Пер. с нем. / Под ред. A.A. Шептулина. Ml: ГЭОТАР МЕДИЦИНА. - 2004. - 720 с.

24. Маянский А.Н., Маянский Д. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. -Новосибирск: Наука, Сиб. отд-ние. 1989. - 344 с.

25. Митохондрии в патологии. Материалы всероссийского совещания: — Пущино.-2001. -258 с.

26. Онищенко Г.Г. О государственных мерах по предупреждению распространения в, Российской Федерации заболеваемости, вирусными гепатитами // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2002. - №3. - С. 4 - 8.

27. Осипов А.Н., Якутова Э.Ш., Владимиров Ю.А. Образование гидроксильных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа // Биофизика. 1993. - Т. 38, № 3. - С. 390 - 396.

28. Павлов Ч.С., Ивашкин В.Т., Шульпекова Ю.О., Золоторевский В.П. Современные представления о патогенезе, диагностике и лечении фиброза печени // РЖГГК. 2005. - T.XV, №5. - С. 13 - 20.

29. Подымова С.Д. Болезни печени. Руководство для врачей. М.: Медицина. -2005.-768 с.

30. Покровский В.И., Рордиенко С.П., Литвинов В:И. Иммунология инфекционного процесса: Руководство для врачей. М.: РАМН. - 1994. - 305 с.

31. Радченко B.F., Шабров A.B. Нечаев? В.В. Хронические заболевания печени. СПб: Лань. - 2000. - 190 с.

32. Рахманова А.Г. Хронические вирусные гепатиты и цирроз печени. СПб: Специальная литература. - 2006. - 413 с.

33. Стельмах ВЖ Морфофункциональное состояние системы! мононуклеарных фагоцитов у больных хроническим вирусным гепатитом В и« С при проведении этиопатогенетической*терапии: Автореф. дис.канд. мед. наук. -СПб. 2003. - 24 с.

34. Тотолян А.А.Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы. СПб.: Наука.-2000.-231 с.

35. Харченко Н.В. Вирусный гепатит С: новое в лечении и профилактике осложнений // Здоров'я Украши. 2009. - №6/1. - С. 4 - 7.

36. Хронический вирусный гепатит / Под ред. В.В. Серова, З.Г. Апросиной. -М.: Медицина. 2004. - 384 с.

37. Шанин Ю:Н., Шанин- В.Ю. Зиновьев Е.В. Антиоксидантная терапия в клинической практике. Элби-СПб. - 2003. - 128 с.

38. Шахгильдян Д.П. Эпидемиология парентеральных вирусных гепатитов« в-России // Рос.журн.гастроэнтерол, гепатол., колопроктол. 2001. - № 4. - С. 46

39. Шерлок Ш. и Джули Дж. Болезни печени и желчевыводящих путей: -М.:РЭОТАР Медицина: 1999. - 864 с.

40. Яковлев А.А., Виноградова* Е.Н:, Рахманова А.Г. .Хронические вирусные-гепатиты (клинико-лабораторные аспекты). СПб: Издательство НИИХ СПбТУ. - 2002. - 290 с.

41. Abdalla M.Y., Ahmad I.M, Spitz D.R., Schmidt W.N., Britigan B.E.Hepatitis С virus-core and non structural proteins lead to different effects on cellular antioxidant defenses // J:Med.Virol. 2005. - Vol.76, №4. - P. 489 - 497.

42. Alexander J., Tung B.Y., Croghan A., Kowdley K.V. Effect of iron depletion on serum markers of fibrogenesis, oxidative stress and serum liver enzymes inchronic hepatitis C: results of a pilot study // Liver Int. 2007. - Vol.27, №2. - P. 268 -273.

43. Brown K.E., Broadhurst K.A., Mathahs M.M., Weydert J. Differential expression of stress-inducible proteins in chronic hepatic iron overload // Toxicol.Appl.Pharmacol. 2007. - Vol.223, №2. - P.80 - 186.

44. Brown K.E., Mathahs M.M., Broadhurst, K.A., Weydert, J. Chronic iron overload stimulates'hepatocyte proliferation and cyclin D1 expression in rodent liver // Transl.Res. 2006. - Vol.148, №2. - P. 55 - 62.

45. Cacoub P. Extrahepatic manifestations associated with hepatitis C virus // Nephrologie. 2001. - Vol.22; №6. - P.4 295 - 296.

46. Cacoub P. Treatment of extrahepatic manifestations associated with hepatitis C virus infection // Gastroenterol.Clin.Biol. 2002. - Voli26 Spec №2. - B210f- B219.

47. Choi J., Lu W., Ou J.H. Structure and" functions of Hepatitis C Virus core protein //Recent. Res. Devel. Virol. 2001. - Vol.3. - P. 105 - 120.

48. Demirdag K., Yilmaz S., Ozdarendeli A., Ozden M., Kalkan A., Kilic S.S. Levels of plasma malondialdehyde and erythrocyte antioxidant enzyme activities in patients:withichronic:hepatitis Bi/7 Hepatogastroenterology.- 2003L- Vol:50* №51?. -P. 766 770. '

49. Emerit Jí, Samuel DI, Pavio, N; Cu-Zn super oxide dismutase as? at potential antifibrotic drug for hepatitis C related fibrosis // BiomedlPharmacother. 2006. -Vol.60, №1.-Pi 1-4.

50. Evans J.L., Maddux B.A., Goldfine I D. The molecular basis for oxidative stress-induced insulin resistance // Antioxid.Redox.Signal. 2005. - Vol:7, №7-8. - P. 1040 - 1052.

51. Fan X.Gv Liu W.E., Li, C.Zl, Wang ZlC., Luo L.X., Tan D.M., Hu-G.L., Zhang Z. Circulating Till and Th2 cytokines in patients with hepatitis C virus infection // Mediators.Inflamm. 1998. - Vol.7, №4. - P. 295 - 297.

52. Forman H!Ji, .FukutOiJiM!, TorrestMi Redoxi signaling: thiols chemistry defines^which: reactive: oxygem and! nitrogen? species; cant act as:, second! messengers? //

53. Am.J.Physiol Cell Physiol. 2004. - Vol.287, №2. - P. 246 - 256.82: Forman H!Jt, Fukuto :J:M!,, TorressMi:Redox:signaling: thiol!chemistry defines:which reactive oxygem and nitrogen species? can: act as seconds messengers? //

54. Am JiPhysiol Cell Physiol. 2004. - Vol.287, №2: -P. 246-256.83: Fujitat N., Horiike: S:,. Sugimoto? R., Tanaka: Hi, Iwasa: MC, KobayasKis Y.,.

55. Hasegawa K., MaN., Kawanishi S., Adachi Y., Kaito M. Hepatic oxidative DNAdamage: correlates; with? iron overload1 in; chronic hepatitis. C patients // Free:

56. Radic.BioliMed: 2007. - VoM2;j №3:.- P: 3 53' - 362:

57. Fujita N., Sugimoto R., Ma N., Tanaka H., IwasaM., Kobayashi Y., Kawanishi S;, Watanabe S., Kaito M., Takei Y. Comparison of hepatic. oxidative DNA damage impatients withichronic hepatitis BlandfC II J:№arHepat 2008: - Vol:l-5v№7: - P: 498 - 507. ,

58. Graziani'Ri, Paonessa G. Dominant negative effect of wild-type'NS5A on NS5A-adapted subgenomic hepatitis C virus RNA replicon // J.Gen.Virol. 2004*. -Vol:85, №Pt 7. - P. 1867 - 1875.

59. Greenwald R.A. Oxygen radicals, inflammation, and1 arthritis: pathophysiological considerations and implications for treatment // SemimArthritis Rheum. 1991s. - Vol.20, №4. - P. 219 - 240.

60. Gressner A.M., Weiskirchen R. Modern pathogenetic concepts of liver fibrosis suggest stellate cells and TGF-beta as major players and therapeutic targets // J.Cell Mol.Med. 2006. - Vol.10; №1. - P: 76 - 99.

61. Halliwell B. Oxidants and human «disease: some new concepts // FASEB J. -1987. Vol.1, №5. - P. 358 - 364.

62. Isom H.C., McDevitt E.I., Moon M.S. Elevated hepatic iron: ^ °7q0 №7. Pfactor in1 chronic hepatitis C // Biochim.Biophys.Acta. 2009. - Vol. X sy 7 650- 662.-nirof blood'

63. Kato A*., Odamaki M., Nakamura.H., Yodoi J., Hishida, A. Elev^10-tridney Int. thioredoxini in hemodialysis patients with hepatitis C virus infection 2003: Vol.63, №6. - P. 2262 - 2268.nto R', Sato

64. Kato J., Kobune M., Nakamura.T., Kuroiwa G., Takada.K.,^lization of

65. Y., Fujikawa K., Takahashi M.*, Takayama T., Ikeda T., NiitsuY. Nor^^- C patientselevated hepatic 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine levels> in chronic hepatx^*^ ^^by phlebotomy and* low iron diet // Cancer Res. 2001: - Vol.61, —8702.insforming

66. Kmiec Z. Cooperation of liver cells in' health aia<z3L Adv.Anat.Embryol.Cell Biol. 2001. - Vol':161. - P. Ill - 151.diabetes: a

67. Knobler H., Schattner A. TNF-(alpha), chronic hepatitis* C and ^ novel triad // QJM: 2005. - Vol.98, №1. - P. 1 - 6.1. A. Tumor

68. Knobler H., Zhornicky T., Sandler A., Haran N., Ashur Y., Schattn^c^1. C virusnecrosis factor-alpha-induced insulin4 resistance may mediate the hepatx^tr^ 2756diabetes association it Am J.Gastroenterol. 2003. - Vol.98, № 121 - P. 275" "1. TVI.C., Lin

69. Ko W.S., Guo C.H., Yeh M.S., Lin L.Y., Hsu G.S., Chen P.C., Lixc=»~fca chronic

70. C.Y. Blood micronutrient, oxidative stress, and viral* load in patients vs^lT^hepatitis CI I World J.Gastroenterol. 2005. - Vol.11, №30. - P. 4697 - 4:adulating

71. Koike K. Hepatitis C virus contributes to hepatocarcinogenesis by 2007metabolic and intracellular signaling pathways // J. Gastroenterol. Hepatol— Vol.22, Suppl. 1'. S108 - Sill.

72. McCall M.R., Frei B. Can antioxidant vitamins materially reduce oxidative damage in humans? // Free Radic.Biol.Med. 1999. - Vol.26; №7-8. - P. 1034 - 1053.

73. Mehta S., Levey J.M., Bonkovsky H.L. Extrahepatic manifestations of infection with hepatitis C virus // Clin.Liver Dis. 2001. - Vol:5, №4. - P: 979 - 1008.

74. Miller K., McArdle S., Gale Mi J:, Geller D.A., Tenoever B;, Hiscott J., Gretch D.R., Polyak S.J. Effects of the hepatitis C virus core protein- on innate cellular defense pathways // J.Interferon Cytokine Res. 2004. - Vol.24; №7. - P. 39! - 402.

75. Moncada S., Palmer R.M., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology // Pharmacol.Rev. 1991. - Vol.43, №2. - P. 109 - 142.

76. Okuda M., Li K., Beard M.R., Showalter L.A., Scholle F., Lemon SM., Weinman S.A. Mitochondrial injury, oxidative stress, and antioxidant geneexpression are induced by hepatitis C virus core protein // Gastroenterology. 2002. -Vol.122, №2.-P. 366-375.

77. Olszewska Ml The effect of hemodialysis on some parameters of the antioxidant system in the blood of patients with chronic renal failure // Ann.Acad.Med.Stetin. 2004. - Vol.50, №1. - P. 41 - 52.

78. Par A., Roth E., Rumi G., Kovacs Z., Nemes J., Mozsik G. Oxidative stress and*antioxidant defense in alcoholic liver disease and chronic hepatitis C // Orv.Hetil.- 2000. Vol.141, №30. - P. 1655 - 1659.

79. Parola M., Robino G., Dianzani M.U. 4-hydroxy-2,3-alkenals as molecular mediators of oxidative stress in the pathogenesis of liver fibrosis // Int.J.Mol.Med. -1999. Vol.4, №4. - P. 425 - 432.

80. Pawlotsky J.-M. Pathophysiology of hepatitis C virus infection and related liver disease // Trends Microbiol'. 2004. - Vol.12, №2. - P. 96 - 102.

81. Poli G. Pathogenesis of liver fibrosis: role of oxidative stress // MolAspects Med. 2000. - Vol.21, №3. - P. 49 - 98.

82. Prince A.M., Brotman B., Grady G.F., Kuhns W.J., Hazzi C., Levine R.W., Millian S.J. Long-incubation'post-transfusion hepatitis without serological evidence of exposure to hepatitis-B virus // Lancet. 1974. - Vol.2; №7875. - P. 241 - 246.

83. Racek J., Herynkova R:, Holecek V., Faltysova J., Krejcova I. What is the source of free radicals causing hemolysis in stored'blood? // Physiol Res. 2001. -Vol.50,' №4. - PI 383 - 388.

84. Ray S., Broor S.L., Vaishnav Y., Sarkar C., GirishR., Dar L., Seth P., Broor S. Transforming* growth factor beta in hepatitis C virus infection: in vivoand in vitro» findings // J.GastroenterollHepatol. 20031 - Vol.18, №4. - P. 393 - 403.

85. Read A.E., Donegan E., Lake J., Ferrell L., Galbraith C., Kuramoto I. K., Zeldis J.B1, Ascher N.L., Roberts Jl, Wright T.L. Hepatitis C in patients undergoing liver transplantation // Ann.Intern.Med. 1991. - Vol.114, №4. - P. 282'- 284.

86. Resnick R.H., Koff R. Hepatitis C-related hepatocellular carcinoma. Prevalence and significance // Arch.Intem.Med. 1993. - Vol.153, №14i - P. 1672 -1677.

87. Saba T.M. Physiology and physiopathology of the reticuloendothelial system // Arch.Intern.Med. 1970. - Vol.126, №6. - P: 1031 - 1052.

88. SheikhM.Y., Choi J., Qadri I., Friedman J.E., Sanyal AJ1 Hepatitis C virus infection: molecular pathways to metabolic syndrome // Hepatology. 2008. - Vol.47, №6.-P. 2127-2133.

89. Shih C.M., Lo S.Jl, Miyamura T., Chen S.Y., Lee- Y.H. Suppression of hepatitis B virus expression and replication'by hepatitis C virus core protein in HuH-7 cells // J.Virol. 1993. - Vol.67, №10. - P. 5823 - 5832.

90. Streiff M.B., Mehta S., Thomas D.L. Peripheral blood count abnormalities among patients with hepatitis C in the United States // Hepatology. 2002. - Vol.35, №4. - P. 947 - 952.

91. Tardif K.D., Waris G., Siddiqui A. Hepatitis C virus, ER stress, and oxidative stress// Trends Microbiol. 2005. - Vol.13, №4. - P. 159 - 163.

92. Tarwadi K., Agte V. Linkages of antioxidant, micronutrient, and socioeconomic status with the degree of oxidative stress and lens opacity in indian cataract patients //Nutrition. 2004. - Vol.20, №3. - P. 261 - 267.

93. Walsh M.J., Vanags D.M., Clouston A.D., Richardson M1M., Purdie D.M., Jonsson J. R, Powell E.E. Steatosis and liver cell apoptosis in chronic hepatitis С: a mechanism for increased liver injury // Hepatology. 2004. - Vol.39, №5. - P. 1230 -1238.

94. Wang C., Pflugheber J., Sumpter R., Sodora D.L., Hui D., Sen G.C., Gale M., Alpha interferon induces distinct translational control programs to suppress hepatitis С virus RNA replication // J.Virol. 2003. - Vol.77, №7. - P. 3898 - 3912.

95. Wang T., Weinman, S.A. Causes and consequences of mitochondrial reactive oxygen species generation in hepatitis C // J.Gastroenterol.Hepatol. 2006. - Vol.21 Suppl. 3. - S34 - S37.

96. Waris G., Siddiqui A. Hepatitis C virus stimulates the expression of cyclooxygenase-2 via oxidative stress: role of prostaglandin E2 in RNA replication // J.Virol. 2005. - Vol.79, №15. - P. 9725 - 9734.

97. Williams E.J., Gaca M.D., Brigstock D.R., Arthur M.J., Benyon R.C. Increased expression of connective tissue growth factor in fibrotic human liver and in activated hepatic stellate cells // J.Hepatol. 2000. - Vol.32, №5. - P. 754 - 761.