Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Закономерности морфо-функциональной организации дуоденальных желез (сравнительно-морфологическое и экспериментальное исследование)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ им. И. М.СЕЧЕНОВА

РГБ ОД

На правах рукописи УДК 616.342-002:611.43-08

Яцковский Александр Никодимович

ЗАКОНОМЕРНОСТИ МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ОРГАНИЗАЦИИ ДУОДЕНАЛЬНЫХ ЖЕЛЕЗ сравнительно-морфологическое и экспериментальное исследование

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва - 1994 г.

/ :./ с

Работа выполнена в Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова

Научный консультант: доктор медицинских наук,

профессор Е. Ф. Котовский

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Ю. К. Елецкий, доктор биологических наук, профессор Е. А. Шубникова, доктор медицинских наук, профессор И. М. Яровая.

Ведущее учреждение: Российский университет дружбы народов.

Защита состоится «_»_1994 г. в _ часов на

заседании Специализированного совета Д 074.05.05 при Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова (119881,Москва, ул.Б.Пироговская,2/6).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова.

Автореферат разослан «_»_1994 г.

Ученый секретарь

специализированного совета,

доктор медицинских наук,

профессор В.А. Варшавский'

;

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Дуоденальный отдел кишечника занимает в пищеварительной системе особое место. Здесь начинается формирование характерного по составу кишечного химуса, инициируются процессы его гидролиза и всасывания нутриентов. Обладая мощными рефлексогенными зонами, хорошо развитым собственным эндокринным аппаратом, двенадцатиперстная (12-п) кишка играет существенную роль в регуляции деятельности всей пищеварительной системы (Губарь В.Л. 1970; Коротько Г.Ф. 1987; Уголев A.M. 1978; Чадвик B.C., Филлипс С.Ф. 1985; Greamer В. 1974). Нарушение функционирования этого отдела кишечника является важным звеном в патогенезе многих гастроинтестинальных заболеваний и провоцирует изменения общего гомеостаза организма (Медведев М.А., Сакс Ф.Ф., Грацианова А.Д. и др. 1985).

Особенностью 12-п кишки млекопитающих является наличие собственных (дуоденальных, бруннеровых) желез. Ряд вопросов их строения и функционирования является дискуссионным. Противоречивы, а для некоторых систематических групп животных отсутствуют данные о степени развития и характере распределения дуоденальных желез. Указывается на отсутствие зависимости между их гистофункциональной организацией и составом пищи и, следовательно, предполагается существование иных причин, обуславливающих разнообразие дуоденальных желез у млекопитающих (Krause W.J. 1972; 1973).

Абсолютно не изучен в сравнительном плане моносахаридный состав гликопротеинов, секретируемых дуоденальными железами. Между тем подобный анализ, помимо самостоятельного значения для выяснения общих закономерностей морфо-биохимической организации желез, открывает возможность установления связи между структурой синтезируемых гландулоцитами гликоконъюгатов и физико-химическими свойствами их секрета. Последние также практически не исследовались, хотя для конкретизации роли дуоденальных желез это имеет существенное значение.

Характер секреторной деятельности дуоденальных желез при различ

ных функциональных состояниях пищеварительной системы рассматривается с позиции традиционного представления о цикличности секреции и поэтапности реализации ее отдельных фаз, что противоречит современным воззрениям на секреторный процесс (Шубникова Е.А., Коротько Г.Ф. 1986).

Практически не исследованы возможные изменения дуоденальных желез при варьирующих по времени и составу пищи рационах. Слабо освещен вопрос о закономерностях гистогенеза желез в постэмбриональном периоде в связи с изменением типа питания животных. Эти аспекты имеют значение для понимания причин и характера их адаптивной перестройки в онто- и филогенезе.

Решение обозначенных вопросов не только расширяет знания о структуре, но также позволяет получить более полное представление о функции дуоденальных желез, которое требует нового осмысления.

Общепринятым является мнение о защитной роли слизистого секрета, выделяемого дуоденальными железами (Р1огеу Н.\ЛЛ 1955; 1956). Исследования последних лет дали принципиально новую трактовку механизмов гидролиза в зонах полостного и пристеночного пищеварения, а также роли мукоидных секретов в структурировании энтеральной среды и в организации слоя слизистых наложений, обеспечивающего домембран-ное пищеварение (Гальперин Ю.М., Лазарев П.И. 1986; Морозов И.А., Лысиков Ю.А., Питран Б.В. и др. 1988). Это послужило предпосылкой для проверки возможного участия дуоденальных желез в реализации указанных процессов. Установление такого участия является важной научно-практической задачей, решение которой оказалось возможным на основе комплексного подхода, предусматривающего сопоставление результатов сравнительного морфологического анализа дуоденальных желез с данными их экспериментального изучения.

Совокупность изложенных вопросов определяет актуальность выбранного направления исследований. Оно проведено в соответствии с планом НИР ММА им. И.М. Сеченова по темам N 018660048894

и N 01910040003, входящим в проблему N 0702 «Морфогенез клеток, тканей и органов».

Цель и задачи исследования. Целью работы явилось изучение закономерностей структурно-функциональной организации собственных желез 12-п кишки млекопитающих.

Для достижения этой цели были сформулированы следующие задачи:

1. Провести сравнительный анализ макро-микроскопических, ультраструктурных и гистохимических характеристик дуоденальных желез человека и животных с различным типом пищевой специализации и относящихся к различным систематическим группам.

2. Исследовать особенности секреторного процесса в гландулоцитах дуоденальных желез при различных функциональных состояниях пищеварительной системы и после стимуляции пилокарпином.

3. Выявить возможные морфо-функциональные изменения дуоденальных желез животных при модификациях рациона в эксперименте и при естественной смене типов питания в постнатальном онтогенезе.

4. Исследовать физико-химические свойства секрета дуоденальных желез животных, отличающихся по характеру питания и по составу секретируемых железами гликопротеинов.

5. Изучить усвояемость пищевых веществ и активность пищеварительных ферменов при экспериментальном выключении дуоденальных желез из процесса пищеварения.

6. На основе полученных фактов сформулировать новые представления о функциональной роли доуденальных желез, а также охарактеризовать основные направления их эволюционной динамики.

Научная новизна. Выявлены и описаны ранее неизвестные топографические и морфологические особенности желез 12-п кишки у ряда растительноядных, всеядных и плотоядных млекопитающих. Установлена общая закономерность локализации основной массы желез в зоне формирования кишечного химуса и инициации процессов его гидролиза. Впервые показана связь между удельной протяженностью железистого поля 12-п кишки и массой тела.

Для большинства исследованных в работе видов животных и человека впервые получены данные о моносахаридном составе секрета дуоденальных желез. Различия в характере и структуре гликопротеинов сопоставлены с физико-химическими свойствами секрета желез у животных с неодинаковым типом питания.

Установлена способность дуоденальных желез к базальной секреции в отсутствие пищевых стимулов. Получены новые данные, указывающие на возможность изменения характера экструзии секрета гландулоцитами в зависимости от способов их стимуляции. Приоритетным является проведенное с помощью лектиногистохимического метода исследование цитотопографии процессов гликозилирования в клетках дуоденальных желез.

Впервые изучен характер адаптаций дуоденальных желез к составу пищи. Получены неизвестные ранее данные о динамике цитодифферен-цировки собственных желез 12-п кишки при изменениях типа питания в раннем постнатальном онтогенезе у зрело- и незрелорождающихся видов млекопитающих.

Впервые получены сравнительные данные о количестве, распределении и типах эндокриноцитов в дуоденальных железах различных групп млекопитающих, а также о влиянии типа питания на их число.

Впервые показано значение дуоденальных желез в обеспечении поверхностно-активных, реологических и сорбционных свойств кишечного сока и пристеночной слизи из бруннеровского отдела 12-п кишки. Установлен факт снижения усвояемости пищевых веществ при выключении дуоденальных желез из процесса пищеварения.

Сформулирована новая концепция о физиологической роли дуоденальных желез, в которой в дополнение к существующим представлениям о защитной функции обосновывается их участие в процессах кишечного пищеварения.

Впервые приведен анализ возможных причин и характера филогенетических преобразований дуоденальных желез.

Полученные данные, в совокупности с ранее накопленными фактами,

использованы для ряда теоретических обобщений, которые нашли отражение в предложенных оригинальных схемах и рисунках.

Практическая значимость и внедрение результатов. Выполненное исследование содержит новые знания о морфологических и функциональных особенностях собственных желез 12-п кишки животных и человека, а также о причинных факторах, обуславливающих закономерности их организации. Рассмотренный в работе круг вопросов относится по содержанию к фундаментальной проблеме биологии и медицины -адаптации организма к условиям внешней среды. Совокупность полученных данных конкретизирует представления об общем характере преобразований одной из важнейших экзосоматических систем организма, пищеварительной, при ее адаптации к составу пищи.

Данные о влиянии секрета дуоденальных желез на физико-химические и сорбционные свойства кишечного сока и пристеночной слизи позволяют конкретизировать механизмы кишечного пищеварения и морфологическую основу их реализации. Они могут быть использованы для уточнения этиологии и патогенеза заболеваний, связанных с нарушением гидролиза и всасывания пищевых веществ. Выявленная лабильность адаптивных перестроек дуоденальных желез указывает на возможность воздействовать с помощью модификаций рациона на химический состав их секрета и, тем самым, на состояние энтеральной среды, что еще раз доказывает целесообразность индивидуального терапевтического применения диеты при ряде гастроэнтерологических заболеваний.

Приведенная в работе характеристика моносахаридного состава и предполагаемой структуры гликопротеинов, секретируемых дуоденальными железами, специализированных по типу питания животных, расширяет информацию по сравнительной гистохимии гликоконъюгатов и служит основой для последующего анализа изменений этой структуры при нарушении функции желез. Подобный анализ позволит приблизить решение обозначенных проблем патологии желудочно-кишечного тракта.

В области практической гистологии полезными являются разработанные либо усовершенствованные в ходе выполнения настоящего исследо

вания способы окрасок гистологических срезов. Эти методы, а также фактические данные и теоретические обобщения диссертации используются в практике научной и педагогической работы ряда лабораторий и кафедр медицинских вузов РФ и стран СНГ, что подтверждено соответствующими актами о внедрении.

Апробация работы. Основные результаты работы докладывались и обсуждались на: X Всесоюзном съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Винница, 1986); II Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Ленинград, 1988); II съезде анатомов, гистологов и эмбриологов Белоруссии (Минск, 1991); ХУ Всесоюзной конференции по проблемам пищеварения и всасывания (Краснодар, 1990); IV и \ Закавказских конференциях морфологов (Тбилисси, 1985; Баку, 1989); XI, XII и XIII Международных конференциях по лектинам (Тарту, 1989; Лиф-Лэйк, 1990; Берлин, 1991); Всесоюзной конференции по современным проблемам охраны животных (Москва, 1989); XXX Морфологичесом конгрессе ЧССР (Брно, 1988); Московском научном обществе анатомов, гистологов и эмбриологов (Москва, 1988); научной конференции, посвященной 130-летию со дня рождения И.Ф. Огнева (Москва, 1985). Результаты работы изложены в 29 публикациях, на которые получено свыше 40 запросов от зарубежных коллег, информационных и исследовательских центров.

Объем и структура работы. Диссертация написана в монографическом плане и содержит в целом ... страниц. Текст изложен на... страницах и состоит из введения, характеристики материалов и методов исследования (глава I), описания результатов собственных исследований и их обсуждения (главы II - У), общего заключения (глава VI), выводов и указателя литературы, содержащего 127 публикаций отечественных и 245 -зарубежных авторов. Текст иллюстрирован и документирован 21 таблицей, 88 рисунками в виде схем, графиков, микро- и электронных микрофотографий.

Положения, выносимые на защиту.

1. Дуоденальные железы изученных видов млекопитающих имеют структурно-функциональные различия, определяющиеся типом питания животных и не зависящие от их систематического положения.

2. При смене типа питания животных структурно-функциональные особенности дуоденальных желез претерпевают изменения, отражающие их адаптацию к составу пищи.

3. У всех животных: секреторный ответ дуоденальных желез связан с поступлением и временем пребывания пищи в полости кишки; наибольшая плотность их локализации соответствует зоне формирования кишечного химуса; степень развития желез зависит от массы тела.

4. Секрет дуоденальных желез влияет на физико-химические свойства компонентов энтеральной среды, за счет чего оптимизируется пространственная и структурная организация процесса кишечного пищеварения.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Виды и количество животных, использованных для сравнительно-морфологического анализа и в экспериментах, приведены в таблицах 1 и 2. Исследовали материал от взрослых особей обоего пола, а также от мужчин и женщин, погибших от случайных причин в возрасте 25-45 лет. Эксперименты с модификацией рационов выполнены на крысятах -отьемышах. Гистогенез дуоденальных желез изучали у 11, 13, 15, 17, 19 и 21-дневных зародышей крыс, а также у морских свинок, мышей, крыс и кроликов в период новорожденности и первых 4-х недель постнатальной жизни.

Для изучения топографии желез 12-п кишку выделяли целиком, определяя ее дистальную границу по расположению первой ветви верхней брыжеечной артерии (Bonfert А. 1928; Villemin F. 1922).

Для микроскопического и гистохимического исследований кусочки из краниальной части 12-п кишки фиксировали в 10% забуференном нейтральном формалине или жидкости Ценкера не позднее 1 часа после гибели животных. Кишку человека - через 10-12 часов после смерти.

Ультраструктуру желез изучали на материале, префиксированном в 4% параформальдегиде, либо в 2.5% глютарапьдегиде сразу после забоя или биопсии и постфиксированном в 1% четырехокиси осмия. Кусочки заключали в смесь эпон-арапдит. Срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца. Для предотвращения вымывания липидов и увеличения контраста содержащих их структур применяли ОТО - метод (Morozov I.A. 1984).

В тотальных препаратах 12-п кишки, обработанных по методу Landboe-Christensen (1944), измеряли гландуло-дуоденальный индекс: (ГДИ = длина железистого поля/длина кишки х 100). Величину относительного прироста железистого поля в ходе гистогенеза рассчитывали как: ГДИ2- ГДИ ,/ГДИ, х 100, где ГДИ] и ГДИ2 - показатели предшествующего и последующего наблюдений. Удельную протяженность железистого поля кишки рассчитывали на единицу массы животного, используя

Таблица 1. Объем материала сравнительно-морфологических исследований

Отряды из них число

семейств видов особей

1. НАСЕКОМОЯДНЫЕ 3 4 24

2. РУКОКРЫЛЫЕ 1 1 2

3. ЗАЙЦЕОБРАЗНЫЕ 1 2 40

4. ГРЫЗУНЫ 6 11 193

5. ХИЩНЫЕ 3 14 100

6. ПАРНОКОПЫТНЫЕ 3 9 50

7. НЕПАРНОКОПЫТНЫЕ 1 1 5

8. ХОБОТНЫЕ 1 1 1

9. ПРИМАТЫ (в т.ч. 2 5 48

человек)

21 48 463

Таблица 2. Объем материала экспериментальных исследований

Содержание экспериментов Вид животных К - во

Исследование пролиферативной мыши, крысы 87

активности

Анализ секреторного процесса

при пищевои депривации и при крысы 119

стимуляции кормлением или пи-

локарпином

Изучение морфофункциональных

адаптации при искусственных и крысы, морские

естественных модификациях свинки, кролики 207

рационов

Исследование физико-химических крысы, морские

свойств бруннеровского кишечно- свинки 69

го сока

Оценка усвояемости нутриентов крысы 47

Измерение активности гидролаз в

кишечном соке и пристеночной крысы 76

слизи

собственные данные взвешивания, а в случае невозможности их выполнения - данные публикаций (Пантелеев П.А. 1983; Флиндт Р. 1992).

Для обзорной микроскопии использовали окраски гематоксилином-эозином, ШИК-гематоксилином, альциановым синим-ШИК, толлуи-диновым синим.

Дифференциальное выявление гликопротеинов осуществляли окрашиванием ШИК, альциановым синим, основным коричневым, альде-гидфуксином с использованием реакций блокирования фенилгидрази-ном, метилирования, омыления, дезаминирования, гидролиза сиалидазой (Пирс Э. 1962, Cook Н.С. 1977).

Выявление моносахаридных остатков проводили с помощью лек-тинов, конъюгированных с пероксидазой хрена и специфичных к: маннозе - л. чечевицы (LCA) и конкавалин A (Con А), галактозе - л. клещевины (RCA) и л. арахиса (PNA); фукозе - л. бобовника (LAA) и л. тетрагоноло-буса (LTA); глюкозамину- л. завязей пшеницы (WGA); галактозамину - л. сои (SBA); сиаловым кислотам - л. бузины черной (SNA). Окрашивание и контроль специфичности реакций осуществляли по стандартным методикам (Луцик А.Д., Детюк Е.С. 1987).

Сравнение гистохимических свойств дуоденальных желез между группами животных проводили на основе расчета индекса частоты и интенсивности признака по формуле: N х I / Nq ,где N и Nq - число случаев с положительной реакцией и общее число животных в группе, а I - среднее значение интенсивности реакции в условных баллах.

Эндокринные клетки выявляли аргирофильной реакцией по Гриме-лиусу, для идентификации Ес-клеток использовали аргентаффиный метод Массона-Гамперля.

Секреторную активность гландулоцитов оценивали по: концентрации ШИК-положительного секрета в цитоплазме и РНК в ядрышках после обработки срезов ДНК-азой и окраски галлоцианином; изменению высоты клеток и ядерно-цитоплазматического коэффициента; площади цитоплазмы, занятой секреторными гранулами и их размерам; соотношению ядер с разным содержанием эу- и гетерохроматина, выявляемых методом

полихромной окраски в собственной модификации (Яцковский А.Н. 1987).

Секрецию дуоденальных желез в межпищеварительный период исследовали через 24 часа после последнего кормления. Суточные колебания активности желез у голодных животных оценивали на протяжении 48 часов с 3-х часовыми интервалами. Стимуляцию секреции проводили однократным кратковременным кормлением или однократным подкожным введением 0,1% водного раствора пилокарпина в дозе 15 мг/100г. Исследовали материал, полученный в момент кормления, а также через 30 мин, 1,3,6,9,12,18 и 24 часа после приема пищи или инъекций.

Пролиферативную активность оценивали по: митотическому индексу; плоидности ядер, окрашенных по Фельгену или галлоцианином после обработки РНК-азой (диплоидным эквивалентом ДНК служили ядра интраэпителиальных лимфоцитов в тех же срезах); количеству меченых ядер после однократного внутрибрюшинного введения крысам Вистар 3Н-тимидина в дозе 3 мкКи/г. Суточную динамику ИМЯ изучали на мышах F, (СВА*С57 BI) при импульсном мечении 3Н-тимидином (1 мкКи/г) с 2-х часовыми интервалами между группами. Общее время наблюдения -48 часов.

Цитофотометрические измерения концентраций ШИК-положительного секрета, РНК и ДНК проводили на цитоспектрофотометре SMP-03 (Оптон). Оценивали величину поглощения в условных единицах. Использовали одноволновый метод при длинах волн: 550 нм - для ШИК реакции и комплексов ДНК-фуксин, 500 нм - для комплексов ДНК-галлоцианин и РНК-галлоцианин. Измерения проводили точечным зондом, совпадающим при заданном увеличении с площадью анализируемых структур.

Для морфометрии использовали полуавтоматическую систему анализа изображений MOP-Videoplan (Райхерт). Учитывая асинхронность функционирования клеток дуоденальных желез, фотометрировали либо морфометрировали гландуолоциты, расположенные в четырех противоположных участках концевых отделов, срезанных поперек.

Рационы, применявшиеся в экспериментах, составляли в соответствии с рекомендациями (Высоцкий В.Г., Тутельян В.А. 1987; Покровский A.A.

1977; Риго Я. 1982). При однократном кормлении использовали сырое мясо или овощную смесь с расчетным суммарным содержанием клетчатки = 31.3% на 100 г сухой массы. Аналогичный корм использовали при содержании животных на альтернативных рационах, чередующихся с периодичностью 1,3,5 и 7 суток. Моделью растительноядения являлось потребление в течение 3-х месяцев корма, составленного на основе стандартных брикетов с добавлением до 30% от его сухой массы продуктов, богатых пищевыми волокнами. Плотоядение моделировали использованием в течение аналогичного периода времени вареного мяса с добавлением минеральной и витаминной смеси, приготовленной на основе крахмала.

При изучении усвояемости пищевых веществ использовали искусственную диету, содержавшую: 17% белка, 19% жира, 60% углеводов, 3% минеральной и 1% витаминной смеси.

Выключение дуоденальных желез из процесса пищеварения осуществляли путем хирургического удаления бруннеровского отдела 12-п кишки у крыс. Контролем служили животные с обходным гастродуодено-анастомозом, а также ложнооперированные крысы. В остром опыте наркотизированным животным (0.4-0.5 мл 5% р-ра гексенала внутрибрю-шинно) накладывали лигатуру ниже зоны локализации дуоденальных желез. В контроле перевязку производили на уровне пилорического сфинктера.

Усвояемость пищевых веществ исследовали через 1.5 мес после резекции бруннеровского отдела кишки в соответствии с методическими рекомендациями (Игнатьев А.Д. и др. 1975). Оценку проводили по относительному количеству нутриенов, задержанному в организме за время обменного опыта (5 суток).

Исследование фракций энтерального содержимого. О свойствах секрета дуоденальных желез судили путем сравнения кишечных соков (химуса) и пристеночной слизи из бруннеровского (содержащего железы) и дистального (не содержащего желез) отделов 12-п кишки. Кишечный сок получали у наркотизированных животных через фистулы соответству-

ющих изолированных участков органа и центрифугировали (10-15 мин при 3000 об/мин) для осаждения частиц химуса. Пристеночную слизь соскабливали тупым шпателем со стандартных по размеру и локализации участков 12-п кишки. Фракции энтерального содержимого получали также методом смыва и вибрационного стряхивания вывернутого кишечного препарата (Морозов И.А., Ишкова В.Ю., Смирнова Е.Н. 1990).

Вязкоупругие свойства кишечных соков и пристеночной слизи оценивали по их реологическим характеристикам (Виноградов Г.В., Малкин А.Я. 1977), полученным на ротационном вискозиметре Реотест-2

1 4 П

в диапазоне скоростей сдвига = 10 - 1,6 х 10 с " при 20 С.

Поверхностно-активные свойства кишечных соков исследовали полустатическим методом (Ребиндер П.А. 1979), используя их растворы, приготовленные последовательным разведением в бидистиллированной воде с поверхностным натяжением = 72,75 мН м"1 при 20° С.

рН-зависимую динамику флокулообразования в кишечных соках, разведенных физиологическим р-ром с рН = 7,2 (1:4), исследовали на спектрофотометре МРР - 4 (Хитачи). Измеряли светорассеяние под углом 90° к падающему свету (Дичберн Р. 1965) при длине волны 350 нм и спектральной ширине щели прибора = 4 нм. Исследования проводили через 30 мин после титрования растворов сока 0.1 н НС1 до значений рН 6,0-1,0.

Сорбционные свойства кишечных соков изучали по характеру распределения активности трипсина между надосадком и осадком, образующихся при закислении среды до рН 4,0. Время достижения адсорбционного равновесия = 20 мин при 37° С. Осадок отделяли центрифугированием (15 мин при 3000 об/мин) и ресуспендировали в соответствующем объеме физиологического р-ра.

Биохимические методы. В искусственно составленной диете и в кале животных определяли содержание белка по Кьельдалю, жира по Соксле-ту, углеводов и минеральных веществ (Бурштейн А.Е. 1963; Минх А.А. 1971). Во фракциях кишечных соков и пристеночной слизи определяли: количество общего белка (Покровский А.А. и др. 1964), активность

трипсина (Erlanger B.F. et al. 1961), амилазы (Smith B.W., Roe J. H. 1957), энтерокиназы (Nordstrom С., Dahlqvist А. 1971), сахаразы (Лукомская В.Я. 1977). Активность ферментов рассчитывали в нмоль/мг белка или в нмоль/см протяженности кишки.

Статистическая обработка. Средние величины сравнивали по критерию Стъюдента с учетом индивидуальной и групповой дисперсий (Потапова И.Г. и др. 1983). Достоверными считали различия при Р<0,05. Применяли однофакторный дисперсионный и корреляционный анализы, используя в расчетах программы для микрокалькуляторов (Кузнецов С.Л. и др. 1987).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Сравнительная морфо-функциональная характеристика дуоденальных желез человека и животных с различным типом пищевой специализации.

При сравнительном исследовании выявлены закономерности, отражающие общие, свойственные всем млекопитающим, черты организации дуоденальных желез. У всех изученных животных и человека они альвеолярно-трубчатые, разветвленные, локализованы в подслизистой основе кишки. Выводные протоки дуоденальных желез у разных животных впадают в крипты либо открываются в полость кишки у основания ворсинок. Указанные варианты встречаются как у отдаленных, так и у близких по систематике животных, равно как и у видов со сходным типом пищевой специализации. Результаты собственных исследований эмбрионального гистогенеза 12-п кишки и анализ данных литературы привели к заключению, что характер расположения протоков зависит от очередности дифференцировки из эпителиальной выстилки кишки зачатков крипт и почек роста дуоденальных желез. Опережающее развитие почек роста определяет будущее расположение протоков между формирующимися несколько позже криптами. Наоборот, раньше появляющиеся зачатки

крипт служат в последующем источником образования дуоденальных желез.

Попытки ряда авторов классифицировать дуоденальные железы по типам гландулоцитов (см. обзор: Яцковский А.Н. 1990) не нашли подтверждения в собственных исследованиях. Клетки желез изученных млекопитающих характеризуются принципиально одинаковым планом ультрамикроскопической организации, позволяющим рассматривать их как типичные мукозные.

Ультраструктура гландулоцитов свидельствует о возрастающем уровне их дифференцированности и функциональной активности в направлении от устья выводных протоков к терминальным участкам концевых отделов. В устье протоков сконцентрированы клетки со структурными признаками, указывающими на преобладание в них аутосинтетических процессов, и, по-видимому, являющиеся камбиальными элементами дуоденальных желез. На примере грызунов установлено, что перемещение клеток из камбиальной зоны в направлении концевых отделов и, следовательно, обновление клеточного состава желез идет более медленно, чем в системе крипта-ворсинка покровного эптелия 12-п кишки. Это подтверждает низкая митотическая активность в железах взрослых животных, а также отсутствие накопления в концевых отделах меченых 3Н-тимидином клеток в течение 48-часового периода наблюдения, т.е. времени, достаточного для миграции энтероцитов из крипт к ворсинкам (Зуфаров К.А. и др. 1974). В отличие от ранее проведенных исследований (Мавлян-Ходжаев Р.Ш. 1989), установлена способность дифференцированных гландулоцитов дуоденальных желез к синтезу ДНК. Через 30 мин после импульсного введения 3Н-тимидина в концевых отделах желез мышей и крыс содержится 0,88-1,35% меченых клеток. По результатам морфометрии ядер и фотометрии ДНК, 25-30% популяции гландулоцитов дуоденальных желез взрослых животных являются тетраплоидными.

В работе получены сравнительные данные о количественном содержании в дуоденальных железах животных и человека эндокринных (аргирофильных) клеток. Часть из них представлена аргентаффинными

клетками. При электронной микроскопии выявлены Ее, G, S, и D типы эндокриноцитов. Их количество в дуоденальных железах обратно коррелирует с числом в криптах. Учитывая преобладающее значение гуморальных механизмов в регуляции деятельности дуоденальных желез (Lang L.M., Tansy M.F. 1982), следует думать о контроле их функции как со стороны собственного эндокринного аппарата, так и эндокриноцитов крипт.

Исходя из цели настоящего исследования, более пристальное внимание уделено выяснению закономерностей, отражающих связь структурных характеристик дуоденальных желез с питанием животных. Практически у всех растительноядных видов относительная протяженность железистого поля 12-п кишки значительно превышает аналогичный показатель для плотоядных млекопитающих. Причем, у первых, в случае питания различными по пищевой ценности кормами, индекс желез тем выше, чем больше в растениях содержится трудноперевариваемой клетчатки и меньше протеинов, жиров и легкорастворимых углеводов. Обусловленность протяженности желез характером питания подтверждена сравнительным анализом соответствующих показателей у плотоядных животных, рацион которых может включать значительную часть растительных кормов, а также у всеядных млекопитающих, отдающих предпочтение тому или иному виду пищи.

Плотность расположения желез на протяжении 12-п кишки варьирует у разных животных. У плотоядных млекопитающих ограниченное по размерам железистое поле образовано компактным скоплением желез в начальном отрезке кишки и лишь небольшая часть представлена единично лежащими железистыми дольками. У растительноядных и близких по питанию всеядных видов, при абсолютно большей протяженности желез, зона их компактно-диффузной локализации составляет около половины железистого поля, ниже следуют столбчатая зона, в которой железы' лежат в составе продольных складок слизистой оболочки, и зона единичных долек, расположенная в каудальной части кишки. Отчетливую зависимость от пищевой специализации животных проявляет '

также характер гликопротеинов, входящих в состав секрета дуоденальных желез. Два крайне выраженных варианта гистохимических свойств железистых клеток выявлены у плотоядных и растительноядных млекопитающих. В секрете желез плотоядных видов содержатся преимущественно нейтральные гликопротеины, реже и в меньшем количестве, чем у растительноядных, выявляются сиалированные и слабо кислые сульфо-муцины и практически отсутствуют сильно ионизированные сульфомуци-ны, характерные для желез растительноядных животных. Подобный характер гликопротеинов обнаружен также в железах всеядных млекопитающих, в рационе которых преобладает пища животного происхождения или реже концентрированные растительные корма.

Лектиногистохимические исследования позволили установить, что основное различие в моносахаридном составе гликопротеинов у специализированных по питанию животных заключается в более частом и интенсивном реагировании желез растительноядных с сиалоспецифич-ным SNA и с глюкозаминоспецифичным WGA. Реакция с маннозоспеци-фичными Con А и LCA всегда положительна у растительноядных и отрицательна у плотоядных млекопитающих. Эти результаты, в совокупности с данными о специфичности связывания лектинов (Лахтин В.М. 1987; Хомутовский O.A. и др. 1986; Shibuya N. et al. 1987) и об общем принципе организации гликопротеиновых молекул (Хьюз Р. 1985; Gottschalk А. 1963; Schachter Н. 1986), привели к заключению о том, что, в сравнении с плотоядными млекопитающими, гликопротеины секрета дуоденальных желез растительноядных видов имеют более длинную и разветвленную структуру олигосахаридных цепей за счет присутствия в них маннозиль-ных остатков и участков с последовательностью хитобиозамина и обязательно содержат концевые дисахариды, состоящие из остатков галактозы и сиаловых кислот.

Различия в составе гликопротеинов секрета дуоденальных желез отражаются на коллоидных свойствах компонентов энтеральной среды у специализированных по питанию животных. Кишечный сок и пристеночная слизь из 12-п кишки растительноядных морских свинок более

устойчивы к разрушению и, следовательно, имеют более выраженные вязкоэластичные свойства, чем у всеядных крыс, у которых состав и структура гликопротеинов секрета соответствуют плотоядным млекопитающим. Поверхностная активность кишечного сока морских свинок также выше, чем у крыс, что свидетельствует о более выраженной его способности к мицеллообразованию.

Установлена зависимость между типом питания и числом эндокринных клеток в дуоденальных железах, которое убывает в ряду: всеядные -растительноядные - плотоядные виды. Результаты однофакторного анализа свидетельствуют о том, что среди возможных причин, обуславливающих эти различия, доля фактора, связанного с характером питания, составляет около 70%.

У человека, как и у изученных видов приматов, дуоденальные железы распространены по всей 12-п кишке. Зона их компактно-диффузной локализации занимает в среднем 43% железистого поля. Секрет желез человека богат нейтральными гликопротеинами. Гландулоциты окрашиваются с разной степенью интенсивности практически всеми применявшимися лектинами. Характер реагирования с RCA и PNA свидетельствует о присутствии в синтезируемых гл и ко протеинах терминальных дисахари-дов, в которых галактоза связана с остатками галактозамина или глюко-замина. Поскольку секрет дуоденальных желез человека не содержит сиаловых кислот, именно с этими остатками связано положительное окрашивание SNA, что подтверждено использованием разработанного в ходе выполнения исследований метода дифференциального окрашивания (Яцковский А.Н., Луцик А.Д. 1991). Присутствие галактозамина не во всех клетках и концевых отделах демонстрируется мозаичностью окрашивания SBA. Также мозаично железы человека окрашиваются фукозоспе-цифичными LLA и LTA. Подобные факты свидетельствуют о разнообразии спектра моносахаридов и характера связи между ними и, следовательно, о неоднородности гликопротеинов, синтезируемых в различных участках дуоденальных желез человека. Существенной характеристикой этих гликорпротеинов явялется также разветвленность олигосахаридных це

пей в зоне локализации маннозильных остатков, что следует из результатов положительного окрашивания Соп А и 1_СА. В этом отношении, а также по ряду других особенностей (протяженность, топография) дуоденальные железы человека более напоминают железы многих растительноядных млекопитающих, нежели близких по систематике и по всеядному типу питания приматов, и значительно отличаются от желез плотоядных видов.

Сопоставление результатов сравнительного изучения дуоденальных желез с данными о питательной ценности, объеме потребления и времени обработки используемой исследованными животными пищи (Коштоянц Х.С. 1940; Пантелеев П.А. 1983; Слоним А.Д. 1971) позволило заключить, что увеличение индекса желез и усложнение структуры гликопротеинов их секрета сочетается с необходимостью переваривания в течение достаточно продолжительного отрезка времени обильной по абсолютной массе и низкой по каллорийности пищи. Неодинаковые условия пищеварения у животных с разным типом питания определяют и те флюктуации в количестве эндокриноцитов, которые выявлены даже на фоне их общего низкого содержания в дуоденальных железах.

Существенным в понимании роли дуоденальных желез оказались данные о зависимости их распределения в стенке кишки от локализации устья панкреатических протоков. У всех животных, даже у имеющих высокий гландуло-дуоденальный индекс, дуоденальные железы сконцентрированы преимущественно между пилорическим сфинктером желудка и местом впадения панкреатического протока. Другими словами, локализация основной массы дуоденальных желез (всего железистого поля у плотоядных или его компактно-диффузной зоны у растительноядных) соответствует месту, где происходит формирование кишечного химуса и начинается его гидролиз ферментами полостного пищеварения.

Установлена обратная корреляция между относительной протяженностью железистого поля 12-п кишки и массой животных, выраженная с одинаковой силой у плотоядных, всеядных и растительноядных видов. Коэффициент корреляции варьирует от -0,93 у растительноядных до -0,99 у

плотоядных млекопитающих. Согласно основным представлениям о биоэнергетике животных, виды, имеющие неодинаковую массу, отличаются по интенсивности энергообмена (Дольник В.Р. 1978; РосгорКо Р. 1979), что сочетается с адаптивной перестройкой органных систем, включая пищеварительную, ответственных за компенсацию энергозатрат (Шмидт-Ниельсен К. 1982). Допуская возможность участия дуоденальных желез в пищеварении, легко объяснить, почему в каждой специализированной по питанию группе животных мелкие виды, характеризующиеся более высоким уровнем энергопотерь и энергообразования, имеют большую удельную протяженность дуоденальных желез, чем крупные виды, хотя абсолютные размеры железистого поля у первых значительно меньше, чем у вторых.

2. Секреторный процесс в дуоденальных железах в условиях функционального покоя и при стимуляции их деятельности.

При отсутствии пищевых стимулов гландулоциты дуоденальных желез исследованных животных и человека резервируют секреторный материал, проявляя при этом способность к его синтезу и выделению путем экзоцитоза гранул. Хотя по данным исследования ультраструктуры клеток последние два процесса имеют у голодных животных невысокую интенсивность, они в целом обеспечивают базальный уровень секреции желез в межпищеварительный период, что является одним из компонентов известного феномена периодической деятельности пищеварительной системы (Разенков И.П. 1948). Способность дуоденальных желез к спонтанной секреции подтверждена получением кишечного сока через фистулу изолированного бруннеровского отдела 12-п кишки. Уровень такой секреции меняется вне зависимости от внешних стимулов. Результаты цитофото- и морфометрии гландулоцитов у голодных лабораторных грызунов свидетельствуют об усилении функционирования дуоденальных желез в ночные часы, что связано с характерными для исследованных животных ритмами пищевой активности.

Экзогенная стимуляция увеличивает секреторную активность дуоденальных желез. После приема пищи экструзия секрета осуществляется в основном путем экзоцитоза гранул. Причем, даже на высоте активности процесса пищеварения в клетках сохраняется определенное количество секреторного материала благодаря одновременному усилению транспорта веществ в цитоплазму и биосинтеза с последующим оформлением его продуктов в гранулы. Пилокарпин вызывает более выраженное опустошение клеток. Вначале быстрое, в течение первого часа, выделение ранее накопленных запасов секреторного материала реализуется за счет экзоцитоза, а также апокринии. Снижение концентрации секрета в цитоплазме стимулирует его биосинтез выше уровня, свойственного гландулоцитами голодных животных. Резко расширенные цистерны эндоплазматичесого ретикулума заполняются мелкозернистым, либо тонкофибриллярным электронноплотным материалом, в зоне Гольджи расширяются канальцы и увеличивается содержание транспортных везикул. Характерно, что через 6-12 часов после введения пилокарпина нарастание концентрации гликопротеинов в цитоплазме железистых клеток опережает увеличение ее площади, занятой секреторными гранулами. Очевидно, что большая часть секреторных продуктов в этом случае перемещается по цитоплазме минуя комплекс Гольджи, либо транспортируется через него без оформления в гранулы и выделяется из клеток путем диффузии. Следовательно, адаптация дуоденальных желез к более интенсивной, чем кормление, стимуляции пилокарпином проявляется в переключении гландулоцитов на эволюционно более древний способ экструзии, требующий меньших затрат времени для адекватного обеспечения потребностей в секрете (Шубникова Е.А., Коротько Г.Ф. 1986). Прекращение действия стимулов на дуоденальные железы (эвакуация химуса, инактивация пилокарпина) снижает уровень экструзии и переводит клетки желез в состояние накопления продуктов до уровня, характерного для базальной секреции. Таким образом, в клетках дуоденальных желез практически одновременно и непрерывно происходят синтез, накопление и выделение секреторных веществ, скорость, интенсивность и характер которых зависят от

внутренних ритмов и способа экзогенной стимуляции. Помимо одновременности реализации этапов секреторного процесса в отдельно взятой клетке, непрерывность работы дуоденальных желез в целом, как в условиях голода, так и после их стимуляции, достигается асинхронностью функционирования отдельных клеток и различных концевых отделов. Электронномикроскопические наблюдения этого совпадают с данными измерений оптической плотности цитоплазмы гландуолоцитов, при которых постоянно отмечается несколько классов клеток, варьирующих по степени поглощения и, следовательно, по концентрации в них ШИК-положительного секрета.

Усиление секреторной деятельности дуоденальных желез на фоне стимуляции кормлением и поликарпином сопровождается перестройкой внутриклеточного метаболизма, в силу чего в цитоплазме клеток накапливаются липидные включения. Это может использоваться как морфологический критерий высокой функциональной активности дуоденальных желез.

Различия в реакции дуоденальных желез на стимуляцию кормлением неодинаковой по составу пищей имеют временной характер и зависят от скорости прохождения химуса через 12-п кишку. Более позднее поступление химуса из желудка и замедленная его эвакуация из кишки после кормления овощами коррелируют с временем усиления секреции гланду-лоцитов (спустя 1 час вместо 30 мин после кормления мясом) и продолжительностью этого процесса (12 часов вместо 9 часов). Однофак-торный дисперсионный анализ подтвердил высокую зависимость между наличием химуса в 12-п кишке и секреторной деятельностью дуоденальных желез. Вклад этого фактора в изменение морфологических показателей активности гландулоцитов при кормлении различной пищей составляет 84-93%. Это подтверждает, что секреторный ответ дуоденальных желез связан с поступлением и временем пребывания пищи в полости кишки, в чем видится сходство с деятельностью крупных пищеварительных желез.

3. Морфологическая характеристика дуоденальных ж»лез животных при модификациях рациона в эксперименте и смене типа питания в постнатальном онтогенезе.

Состав пищи при однократном кормлении не оказывает заметного влияния на уровень секреторной активности гландулоцитов. Относительные показатели концентрации секрета в клетках и их высоты в одинаковые интервалы времени после поступления соответствующей пищи в кишку совпадают. Отсутствуют также различия в химическом составе секрета дуоденальных желез.

Длительное использование различных рационоз подтвердило связь ряда морфо-функциональных характеристик дуоденальных желез с составом потребляемой пищи. Кормление крыс з течение 3-х месяцев пищей, богатой продуктами растительной природы, вызывает изменение структуры дуоденальных желез и состава их секрета в сторону признаков, свойственных железам растительноядных видов млекопитающих. Увеличивается общая масса желез за счет активации пролиферативных процессов в криптах и образования новых концевых отделов. В результате нарастает величина гландуло-дуоденального индекса и меняется соотношение топографических зон железистого поля 12-п кишки. В клетках выявляются гликопротеины с разветвленной структурой олигосахаридных цепей, содержащие маннозильные остатки. Усиливается биосинтез и секреторная активность гландулоцитов. После длительного потребления мяса структурные и гистохимические особенности дуоденальных желез отличаются от выявленных в группе животных, получавших богатую клетчаткой пищу, и в большей степени соответствуют железам плотоядных млекопитающих.

Проявления адаптации дуоденальных желез к составу пищи развиваются в определенной последовательности. Наиболее лабильными и достаточно быстро возникающими являются изменения, связанные с метаболическими свойствами клеток. Уже через 5-7 суток кормления растительной либо животной пищей в клетках модифицируется состав секретируемых гли-

копротеинов, что является результатом сдвигов в процессах их гликози-лирования. Структурные изменения желез, отсутствующие в первые дни использования рационов, возникают в ходе адаптации к составу пищи значительно позднее.

Последовательная перестройка собственных желез 12-п кишки в раннем постнатальном периоде, различия в уровне дифференцированное™ железистых клетиок у зрелорождающихся и имматурантных видов млекопитающих подтвердили взаимосвязь между составом пищи и мор-фо-функциональными особенностями дуоденальных желез. Критическим моментом, определяющим становление близкого кдефинитивному характера цитодифференцировки, является начало потребления твердой пищи при переходе на смешанное питание. У питающихся подобным образом практически с первых дней жизни морских свинок данный процесс реализуется в основном в эмбриогенезе. В постнатальном периоде изменения желез имеют лишь количественный характер. У имеющих продолжительный лактотрофный период кроликов процесс дифференци-ровки дуоденальных желез реализуется после рождения. Причем, основные структурные и цитохимические признаки желез, свойственные взрослым животным, формируются в период смешанного питания. Переход на дефинитивное питание сопровождается у млекопитающих изменением соотношения мембранного и полостного пищеварения. Роль последнего возрастает по мере использования животными обычного корма (Морозов И.А. и др. 1988). Сопоставление фактов явилось основанием для вывода об определенной корреляции между сроками развития дуоденальных желез и усилением процессов полостного гидролиза пищи.

Сравнение характера морфо-функциональных преобразований дуоденальных желез при длительном питании той или иной пищей с величиной рН химуса показало, что меньшая протяженность железистого поля и более низкая секреторная активность желез, характерные для крыс, получавших мясо, сочетаются с поступлением в этом случае из желудка пищевых масс, имеющих достаточно высокую кислотность (2,3+0,4). Напротив, меньшая кислотность химуса (3,4+0,3), отмеченная

при использовании рациона, богатого продуктами растительной природы, совпадает с интенсивным развитием дуоденальных желез, их высокой секреторной активностью и качественными изменениями состава секрета. У новорожденных морских свинок рИ химуса желудка составляет в среднем 6,1+0,2. Снижение рН, с постепенным приближением к уровню взрослых особей (2,2+0,2), происходит не ранее 2-й недели постнаталь-ного развития. Сопоставление этих фактов с морфо-функциональными характеристиками дуоденальных желез морских свинок разного возраста указывает на отсутствие зависимости между уровнем дифференцирован-ности гландулоцитов и степенью кислотности химуса, поступающего из желудка.

4. Экспериментальное исследование физиологической роли дуоденальных желез.

Впервые проведенное сопоставление физико-химических характеристик кишечных соков и пристеночной слизи из бруннеровского и дистального отделов 12-п кишки животных дало возможность выявить различия в их поверхностно-активных и вязкоупругих свойствах, а также в способности адсорбировать некоторые гидролитические ферменты. В результате показано, что секрет дуоденальных желез заметно влияет на состояние энтеральной среды.

Присутствие секрета дуоденальных желез в составе кишечного сока определяет его большую вязкость и устойчивость к разрушению и, следовательно, более высокий уровень жидкокристаллической организации. После резекции бруннеровского отдела 12-п кишки эти характеристики кишечного сока заметно снижаются. Отмеченные реологические свойства бруннеровского кишечного сока связаны с его выраженной способностью к мицеллообразованию. Анализ поверхностного натяжения в растворах кишечного сока, содержащего секрет дуоденальных желез, показал, что мицеллообразование начинается при критической концентрации равной 30% от исходной. Кишечный сок из дистального участка 12-п кишки обладает меньшей поверхностной активностью.

Значение секрета дуоденальных желез в формировании реологических свойств пристеночной слизи не является столь решающим, как для кишечного сока. Пристеночная слизь из дистального отрезка 12-п кишки обладает несколько большей вязкостью, чем слизь бруннеровского отдела, по-видимому, вследствие дополнительного включения в ее состав продуктов секреции покровного эпителия, а также отторгающихся с поверхности слизистой оболочки энтероцитов и фрагментов ворсинок (Руденская М.В. 1976, 1980).

Снижение рН кишечных соков вызывает их помутнение, что на микрорскопическом уровне проявляется в структурировании среды -флокулообразовании. В результате интенсивность светорассеяния в растворах бруннеровского кишечного сока нарастает по мере их закис-ления и достигает воспроизводимого максимума при рН = 3,5-4,0. Это соответствует значениям кислотности в начальном отделе 12-п кишки в условиях in situ (Ovesen L. et al. 1986). Расчеты показали, что объем формирующихся при этом структур двукратно увеличивается. В кишечном соке из дистального участка 12-п кишки близкое по значению увеличение объема формирующихся структур происходит лишь при смещении рН в сильно кислую сторону, т.е. в условиях, отличающихся от реально существующих в полости кишки.

Роль секрета дуоденальных желез в обеспечении сорбционных свойств кишечных соков показана при измерении активности панкреатического трипсина в жидкой и плотной фазах, образующихся при закис-лении до рН 4,0 сока из дистального участка 12-п кишки до и после смешивания его с бруннеровским кишечным соком. В последнем исходная активность фермена была невысокой (1,4+0,7 нмоль/мг белка). Получен принципиально важный результат, свидетельствующий о значительном увеличении активности исследованного фермена в структурах плотной фазы, образующейся в смеси кишечных соков. По отношению к исходной (незакисленной) смеси, доля адсорбированного в осадке трипсина составляет 86-100% против 35-48% для «чистого» дуоденального сока из дистального отрезка кишки. Это означает, что содержащая

секрет дуоденальных желез фракция кишечного сока, обладающая максимальной способностью к флокулообразованию при выбранных значениях рН, стимулирует процесс структурирования дуоденального содержимого и тем самым повышает его сорбционные свойства.

Через 1,5 мес после резекции бруннеровского отдела 12-п кишки в оставшейся части органа желез не обнаружено. Отсутствовали также нарушения структуры слизистой оболочки, которые следовало бы ожидать после удаления дуоденальных желез исходя из мнения о протектив-ном значении их секрета. Очевидно, что защитный барьер, не содержащий секрета дуоденальных желез, достаточно устойчив к воздействию факторов энтеральной среды. Определенная роль в этом принадлежит бокаловидным клеткам, число которых на единицу поверхности кишечных ворсинок после резекции составило 52,3+2,0 против 29,1 + 1,7 у ложноо-перированных и 31,4+1,9 у животных с обходным гастродуоденоанасто-мозом (Р<0,01). В контрольных группах животных морфологически регистрируемых изменений функциональной активности дуоденальных желез не выявлено.

Выключение дуоденальных желез из пищеварения ведет к снижению активности гидролитических ферментов в реакционных зонах полости 12-п кишки. Удельная активность трипсина и амилазы в химусе и пристеночной слизи у животных с удаленным бруннеровским отделом составляет 50% и менее от величин, полученных в контрольных группах. Подобное снижение активности панкреатических ферментов не связано с нарушением функции поджелудочной железы в ответ на оперативное вмешательство. Их содержание в гомогенатах этого органа, полученных от животных экспериментальной и контрольных групп , существенно не отличались. Падение уровня активности трипсина в исследованных фракциях энте-рального содержимого не связано и с изменением энтерокиназной активности, так как нив химусе, нив пристеночной слизи, ни в гомогенатах слизистой оболочки 12-п кишки не обнаружено значимых различий в содержании этого фермента у оперированных и контрольных животных. После удаления бруннеровского отдела кишки активность энтероцитар-

ной сахаразы в пристеночном слое слизи также снижается более, чем в 2 раза. Удельная активность сахаразы, соотнесенная с активностью фермента в химусе, в 2,5 - 3 раза ниже после резекции бруннеровского отдела в сравнении с контрольными группами, что косвенно указывает на изменение свойств геля, формирующего пристеночный слой. Близкие по смыслу результаты получены при исследовании активности ферментов в остром опыте после перевязки 12-п кишки ниже зоны локализации дуоденальных желез. Изложенное явилось основанием для заключения о том, что отсутствие секрета дуоденальных желез в составе химуса и пристеночной слизи меняет их физико-химические свойства, в результате чего сорбционная емкость компонентов энтерапьной среды в отношении ряда эндо- и экзогидралаз падает.

Очевидно, что обнаруженные изменения служат причиной нарушения процесса кишечного пищеварения. В отсутствии дуоденальных желез у животных, наряду с увеличением суточного количества выделяемого кала, теряется примерно в 2 раза больше белка и углеводов и примерно в 1,5 раза больше минеральных веществ, чем в контроле. В отношении жира различия менее выражены. Возросшие потери являются результатом снижения усвояемости нутриентов, которая составила для белка -84,5%; углеводов - 88,4%; минеральных веществ - 82,1%; жира - 96,9%. Следовательно, нарушение процесса структурирования энтеральной среды и снижение ее сорбционных свойств, происходящие из-за отсутствия в ее составе секрета дуоденальных желез, меняют характер фермент-субстратных взаимодействий, что в конечном итоге ведет к нарушению гидролиза и всасывания пищевых веществ.

5. Заключение: функция дуоденальных желез и их эволюционная динамика.

Совокупность сформировавшихся в последние годы представлений об особенностях протекания гидролиза и транспорта пищевых субстратов в тонкой кишке (Гальперин Ю.М., Лазарев П.И. 1986) с полученными в

работе данными позволяет рассматривать дуоденальные железы в качестве активных участников процесса пищеварения (рис.1). Секрет дуоденальных желез, по мере выделения преимущественно в начальный отдел 12-п кишки, включается в состав пристеночного слоя слизи (1), существенно меняя его сорбционные возможности в отношении эндо- и экзогидра-лаз (6,7). В полости кишки секрет желез формирует основной объем растворимой слизи кишечного сока (2) и вовлекается в процесс флоку-лообразования, который инициируется снижением рН среды в результате поступления из желудка более кислого, чем кишечный сок, химуса (3). На образующихся структурах геля (4) сорбируется основная часть ферментов пищеварительных соков. Это является условием активации гидролиза пищевых субстратов в полости органа при взаимодействии образующихся флокуллярных структур с частицами химуса (5). Образующиеся олиго-мерные субстраты транспортируются через слой слизистых наложений, в котором реализуется домембранное пристеночное пищеварение. Таким образом, секрет дуоденальных желез, повышая сорбционную емкость компонентов энтеральной среды и связанную с этим удельную активность гидролитических ферментов, влияет на процессы, происходящие в обеих реакционных зонах полостного пищеварения. Суммируя, можно заключить, что пищеварительная функция дуоденальных желез состоит в пространственной и структурной организации процессов гидролиза и всасывания, т.е. в оптимизации условий кишечной фазы пищеварения.

Несмотря на очевидность полученных в работе доказательств в пользу иной, чем защитная, функции дуоденальных желез, последнюю вряд ли следует полностью исключить. В эволюции выработались различные формы защиты пищеварительного тракта от механических и химических повреждений (Проссер Л. 1977). Одним из наиболее ранних событий филогенеза явилось возникновение способности клеток различных отделов желудочно-кишечного тракта выделять слизь. Несомненно, что в органах, покрытых однослойным эпителием кишечного типа, защитная функция слизи и синтезирующих ее структур (например, бокаловидных

Дле ТГЗ.ЛЦ а TUTze.pc.T3-r3.sc зсгс-исэсз.

железистый эпителии, пилоржшого отделз

И

поджелудочная ^У^Чк. ^ ел езз.

• X. А-■ лдаЙЙШШйк

Рис. 1 Схема, отражающая участие дуоденальных желез в структурной организации процессов пищеварения в кишке.

клеток позвоночных) является одной из основных. Вс ледстаие специализации среднего отдела кишки, дополнительной функцией слизистых секретов стало их участие в гидролизе пищевых субстратов в определенных топографических зонах полости кишечника и обеспечение транспорта конечных продуктов гидролиза для последующего их всасывания. В ходе развития организмов (структур) происходит интенсификация основных либо второстепенных признаков (Уголев A.M. 1985). Можно полагать, что появление дуоденальных желез в эволюции пищеварительной системы связано с расширением функциональных возможностей их секрета и интенсификацией тех из них, которые обеспечили существенные изменения процесса пищеварения у млекопитающих. Свойства секрета, образующегося в таких специализированных и характерных только для млекопитающих железах, должны объединять в себе все многообразие прослеживаемых в филогенезе функциональных возможностей слизи. Однако, изначально второстепенные функции кишечной слизи, связанные с обеспечением гидролиза и всасывания, для секрета дуоденальных желез становятся основными.

Возникновение дуоденальных желез и их соответствующая морфо-функциональная специализация явились одним из существенных звеньев в цепи эволюционных преобразований желудочно-кишечного тракта млекопитающих. Общий подъем жизнедеятельности у представителей этого класса позвоночных, сопровождающийся увеличением энерготрат организма, обусловил изменение всей организации животных (Шмальга-узен И.И. 1983). Не является исключением и такая важная экзосоматичес-кая система, как пищеварительная, претерпевшая у млекопитающих ряд частных ароморфных преобразований. К категории подобных частных ароморфозов следует отнести возникновение собственных желез в 12-п кишке, что в совокупности с другими изменениями вело к интенсификации процессов пищеварения и, следовательно, к восполнению возросших энерготрат организма. С подобной трактовкой причины возникновения дуоденальных желез у млекопитающих хорошо согласуются полученные

данные об участии их секрета в оптимизации полостного гидролиза. Напротив, причина остается не совсем ясной, если рассматривать дуоденальные железы как структуры, специализировавшиеся только для защиты кишечника от агрессивных факторов его среды. Ведь для многих представителей других классов позвоночных также, как и для млекопитающих, характерны и высокая кислотность желудочного сока, и присутствие в пищеварительных соках активных ферментов, и потребление пищи, способной вызвать механические повреждения слизистой оболочки.

■ Формирование собственных желез в 12-п кишке является эволюцион-но более поздним событием, чем соответствующие преобразования других отделов желудочно-кишечного тракта млекопитающих. Достаточно сравнить организацию пищеварительной трубки млекопитающих и представителей других классов, не имеющих дуоденальных желез (Шим-кевич В.М. 1923, Шмальгаузен И.И. 1938). С другой стороны, для эмбрионального гистогенеза желудочно-кишечного тракта млекопитающих характерна определенная очередность закладки и дифференцирования структур, участвующих в секреции пищеварительных соков - поджелудочной железы, печени, желез желудка, желез 12-п кишки. Последние, в отличие от других перечисленных структур, возникают на более поздних этапах эмбрионального развития, а у некоторых животных - только после рождения (Krause W.J., Leeson C.R. 1967, 1969; Mann H. et al. 1967; Wolff H. 1961). В собственных исследованиях также прослежена подобная закономерность. Следовательно, возникновение дуоденальных желез независимо и в дополнение к другим железистым образованиям желудочно-кишечного тракта, явилось результатом филогенетической надставки (анаболии), т.е. носило характер вторичных филэмбриогенезов (Северцев А.Н. 1934).

В понимании закономерностей эволюционных преобразований дуоденальных желез факт более позднего их формирования в онтогенезе имеет смысл лишь при его сопоставлении со скоростью развития организма в целом. У зрелорождающихся млекопитающих дуоденальные

железы закладываются значительно раньше и дифференцируются быстрее, чем у незрелорождающихся, хотя у тех и у других - позже поджелудочной железы, печени и желез желудка. Следовательно, в онтогенезе зрелорождающихся животных имеет место ускорение развития собственных желез 12-п кишки в сравнении с аналогичным процессом у имматурантных видов. Подобное ускорение развития является филогенетическим приспособлением, благодаря которому дефинитивное состояние органов достигается к моменту, когда оно должно стать необходимым с функциональных позиций для конкретного вида (Северцев А.Н. 1934). Применительно к дуоденальным железам такая необходимость возникает в период усиления роли полостного гидролиза при переходе животных с лактотрофного питания на потребление твердой пищи.

На основе таких параметров, как протяженность железистого поля кишки или гистохимические свойства гландулоцитов, не удается выделить отчетливых группо-специфических (таксономических) признаков в мор-фо-функциональной организации дуоденальных желез, которые по результатам проведенного исследования отличаются достаточным разнообразием даже у близких по систематике животных. Причина такого разнообразия связана с широкой адаптивной дивергенцией млекопитающих, проявлявшейся как на уровне целостных организмов, так и отдельных систем (Шмальгаузен И.И. 1946, 1982). Изменения пищеварительной системы млекопитающих в результате расширения кормового диапазона сопровождались морфо-биохимической дифференцировкой различных ее отделов. Очевидно, что возникновение разнообразия в организации дуоденальных желез также было связано с меняющимися пищевыми привычками животных, т.е. носило характер идиоадаптаций.

Полученный сравнительный материал свидетельствует, что идиоадап-тивныо изменения дуоденальных желез происходили как на макро-морфологическом, так и на клеточном уровнях. Так, если допустить в качестве филогенетически исходной для всех млекопитающих локализацию дуоденальных желез в пилородуоденальной зоне кишечной трубки (что характерно для современных менее специализированных видов -

клоачных, ряда сумчатых, насекомоядных), то совершенно очевидно, что смещение границ железистого поля 12-п кишки в каудальном направлении происходило в связи с расширением пищевых возможностей животных за счет употребления растительных кормов. Такое приспособление на макро-структурном уровне, ведущее к увеличению суммарного объема секрета дуоденальных желез, видимо оказалось полезным для максимально эффективного переваривания и усвоения низкой по калорийности и значительной по массе растительной пищи. Увеличение полезной функции пищеварительной системы достигалось также за счет усложнения структуры олигосахаридных цепей синтезируемых клетками желез гликопротеинов, изменения состава терминальных моносахаридных остатков и степени ионизации реакционнеспособных групп. По полученным данным, это существенно влияет на физико-химические характеристики компонентов энте-ральной среды, что, в свою очередь, имеет значение для оптимизации пищеварения в кишке. Морфо-функциональные признаки дуоденальных желез, возникшие на основе идиоадаптаций, остаются достаточно лабильными и, как показали результаты проведенных экспериментов, могут менять свой характер при варьировании состава пищи. Очевидно, что лабильность дуоденальных желез, наряду с другими мобильными изменениями органов пищеварительной системы, дает млекопитающим возможность при необходимости расширять в известных пределах кормовой диапазон.

1 Таким образом, эволюционные преобразования дуоденальных желез, возникших в филогенезе в результате частного ароморфоза среднего отдела пищеварительного тракта млекопитающих, имели дивергентный характер и происходили на основе адаптаций к меняющимся условиям питания. Независимо возникшие пищевые специализации у представителей различных систематических групп определили однотипный (параллельный) характер этих изменений. Поэтому у относящихся к различным таксонам, но близких или идентичных по пищевым привычкам современных млекопитающих прослеживаются более или менее выраженные черты сходства морфо-функциональной организации собственных желез 12-п кишки. Многочисленные примеры такого сходства можно найти в имеющемся в данной работе сравнительном материале.

ВЫВОДЫ

1. У млекопитающих изученных систематических групп существуют различия в структурно-функциональной организации дуоденальных желез, определяемые пищевой специализацией видов и не зависящие от их таксономического положения.

2. Относительная протяженность дуоденальных ж^лез у плотоядных и сходных по питанию всеядных животных не превышает 20%. У растительноядных и близких к ним по характеру пищи всеядных видов она составляет от 60 до 100%. В каждой из специализиоованных по питанию групп существует обратная корреляция между протяженностью желез в двенадцатиперстной кишке и массой животных.

3. Плотность расположения дуоденальных желез в стенке кишки уменьшается в каудальном направлении и характеризуется зональностью, более выраженной у растительноядных млекопитающих. Основное скопление желез (компактно-диффузная зона) занимает 75-100% железистого поля кишки у плотоядных и около 50% у растительноядных животных. Дистальная граница компактно-диффузной зоны у гс^х видов млекопитающих локализована выше или на уровне устья панкреатических протоков.

4. Гликопротеины секрета дуоденальных желез у растительноядных млекопитающих, в сравнении с плотоядными, имеют бол^е длинную и разветвленную структуру олигосахаридной цепи, обязательно содержат маннозу и сиаловые кислоты и характеризуются высокой степенью ионизации сульфатных и карбоксильных групп. Это определяет более выраженные поверхностно-активные и вязкоэластичные свойства кишечного сока и пристеночной слизи у растительноядных животных.

5. Дуоденальные железы содержат аргирофильные и аргентаффин-ные клетки открытого и закрытого типов, среди которых выявлены Ее, С, Б и О эндокриноциты. Их количество обратно коррелирует с числом эндокринных клеток в кишечных криптах. Количество эндокринных клеток в дуоденальных железах убывает в ряду: всеядные - растительноядные -плотоядные виды.

6. Для дуоденальных желез человека характерны: высокий гландуло-дуоденальный индекс, выраженная зональность железистого поля, наличие в гликопротеинах секрета разветвленных маннозосодержащих олиго-сахаридных цепей, что в большей степени сближает их с железами двенадцатиперстной кишки растительноядных млекопитающих.

7. В межпищеварительный период дуоденальные железы проявляют базальную секреторную активность, уровень которой может меняться в течение суток. Стимуляция желез кормлением усиливает экструзию и биосинтез секрета, которые остаются высокими до опустошения двенадцатиперстной кишки от химуса. Пилокарпин (15 мг/100 г) вызывает более выраженное и длительное повышение секреции путем экзоцитоза, апок-ринии или диффузии секрета без оформления в гранулы.

8. При смене рационов происходит адаптивная перестройка дуоденальных желез, что проявляется в изменениях: их общей протяженности и топографии; состава синтезируемых гликопротеинов за счет модификации процессов гликозилирования; уровня секреторной активности. Наиболее лабильными и быстро возникающими являются адаптации, связанные с перестройкой биосинтеза гликопротеинов секрета.

9. Формирование зачатков дуоденальных желез у зрелорождающих-ся млекопитающих происходит раньше и темпы их цитодифференцировки выше, чем у имматурантных видов, что связано с характером питания животных в раннем постнатальном онтогенезе. Критическим моментом, определяющим уровень дифференцированности дуоденальных желез, является переход с лактотрофного на смешанное питание.

10. Секрет дуоденальных желез: увеличивает поверхностно-активные, вязкоэластичные и сорбционные свойства кишечного сока; усиливает сорбционную способность пристеночной слизи и в меньшей степени влияет на ее реологические свойства. Кишечный сок, содержащий секрет желез, при закислении среды подвергается структурированию, что проявляется в увеличении интенсивности светорассеяния в его растворах, максимум которой наблюдается при рН = 3,5 - 4,0.

11. Секрет дуоденальных желез способствует формированию эндогенной плотной фазы энтеральной среды, повышлр г сорбцию ферментов в реакционных зонах полости кишечника, что создает оптимальные условия для пространственной и структурной организации гидролиза и всасывания. Выключение дуоденальных желез меняет физико-химические свойства компонентов энтеральной среды, врдет к падению удельной активности пищеварительных ферментов и снижает усвояемость питательных веществ.

12. Дуоденальные железы возникли в эволюции в результате частного ароморфоза среднего отдела пищеварительного тракта. Их появление у млекопитающих имело характер филогенетической надставки. Эволюционные преобразования желез происходили дивергентно на основе адап-таций к условиям питания. Однотипные пищевые специализации у представителей различных систематических групп определили однонаправленный (параллельный) характер адаптаций, с чем связано сходство морфо-функциональной организации дуоденальных желез у относящихся к различным таксонам, но близких по пищевым привычкам современных млекопитающих.

Список публикаций по теме диссертации

1. Суточная динамика функциональной активности клеток дуоденальных желез у голодных крыс и при стимуляции кормлением. // Материалы 1У Закавказской конференции морфологов, Тбилисси, 1985, с. 25-26. (соавт. Ю.И. Афанасьев).

2. Материалы к сравнительной морфологии дуоденальных желез млекопитающих./ / X Всесоюзный съезд АГЭ, тезисы докладов. Полтава, 1986, с. 409.

3. Развитие дуоденальных желез у крыс при повышенном содержании в рационе клетчатки.// Бюлл. экспер. биол. мед., 1987, N 2, с. 208-209 (соавт. Т.В. Боронихина).

■ 4. Метод оценки функциональной активности клеточных ядер.// Архив анат., 1987, N1, с. 76-79.

5. Влияние рациона с избытком клетчатки на морфофункциональное состояние дуоденальных желез крыс.// Архив анат, 1987, N II, с. 87-92 (соавт. Т.В. Боронихина).

6. Эндокринные клетки дуоденальных желез млекопитающих.// 2-й Всероссийский съезд АГЭ, тезисы докладов. Москва, 1988, с. 196.

7. Морфологическая оценка активности слизепродуцирующих структур двенадцатиперстной кишки крыс при введении в рацион пшеничных отрубей разной степени дисперсности.// Бюлл. экспер. биол. мед., 1989, N1, с. 104-106. (сопвт.Б.П.Суханов, М.В. Мышева).

8. Количественная характеристика эндокринных клеток дуоденальных желез у млекопитающих отряда хищных.// Архив анат., 1989, N8, с. 49-55. (соавт. Т.В. Боронихина).

9. Морфофункциональные изменения дуоденальных желез крыс при модификации рациона.// Материалы У Закавказской конференции морфологов, Баку, 1989, с. 282-283. (соавт. Б.П.Суханов, Л.В.Мунтян).

Ю.Морфология и гистохимия слизепродуцирующих структур двенадцатиперстной кишки зубра. // Современные проблемы Красной книги СССР, сб. научн. трудов. М., ВНИИ природы, 1989, с. 37-40. (соавт. Т.П.Сипко).

11.Влияние секрета дуоденальных желез на активность трипсина в химусе и слое слизистых наложений двенадцатиперстной кишки.// ХУ Всесоюзная конференция по физиологии пищеварения и всасывания, тезисы докладов. Краснодар, 1990, с. 334-335.(соавт. В.Ю.Ишкова,Д.А.Еремин).

12.Влияние диеты на углеводный corran секрета дуоденальных желез крыс.// XY Всесоюзная конференция по физиологии пищеварения и Есасывания, тезисы докладов. Краснодар, 1990, с. 335-336.(соавт. Б.П. Суханов, Т.В.Боронихина).

13.Дуоденальные железы: сравнительная морфология и гистохимия.// Успехи совр.биол., 1990, т. 109, вып. 3, с. 424-439.

14.Дуоденальные железы: функциональные особенности и регуляция.// Успехи совр. биол., 1990, т. 110, вып. 3/6/, с. 446-460.

15.Использование метода лектиногистохимии для характеристики процессов гликози-лирования биополимеров в клетках дуоденальных желез.// Бюлл. экспер. биол. мед., 1990, т. 110, N 10, с. 440-443. (соавт. А.Д.Луцик).

16.Эндокриноциты дуоденальных желез у некоторых представителей отряда приматов.// Архив анат., 1991, N I, с. 57-61. (соавт. Т.В. Боронихина).

17.Сравнительный лектиногистохимический анализ дуоденальных желез некоторых млекопитающих.// Архив анат., 1991, N 2, с. 61-69. (соавт. А.Д.Луцик).

18.Метод селективного гистохимического выявления сиалогликанов с использованием лектина бузины черной.// Бюлл. экспер. биол. мед., 1991, N I, с. 71-74 (соавт. А.Д.Луцик).

19.Лектиногистохимическая характеристика эпителиев желудка и двенадцатиперстной кишки крыс в раннем онтогенезе.// Материалы объединенного II съезда анатомов, гистологов, эмбриологов и X съезда хирургов Белоруссии, Минск, 1991, т.1, с. 27. (соавт. Т.В. Боронихина, А.Д.Луцик).

20.Активность трипсина в химусе и пристеночном слое слизи при экспериментальном выключении бруннеровского отдела двенадцатиперстной кишки у крыс.// Бюлл. экспер. биол. мел., 1991, N II, с. 542-545 (соавт. В.Ю.Ишкова, Д.А.Еремин, И.А. Морозов).

21.Влияние хирургического удаления бруннеровского отдела двенадцатиперстной кишки на усвояемость пищевых веществ у крыс.// Бюлл. экспер. биол. мед., 1991, N6, с. 653-656. (соавт. Б.П.Суханов, Д.А.Еремин).

22.Дуоденальные железы зрело- и незрелорождающихся млекопитающих на ранних этапах постнатального онтогенеза.// Морфология, 1992, N 11-12, с. 84-92. (соавт. Е.Ф.Котовский).

23.Лрктиногистохимическое исследование дуоденальных желез при модификации рациона.// Морфология, 1993, вып. 3-4, с. 79-87. (соавт. Т.В.Боронихина, Б.П.Суханов, А.Д.Луцик).

24.Дуоденальные железы представителей насекомоядных и приматов.// Морфология, 1994, вып. 1-3, 94-103 с. . (соавт. Т.В.Боронихина, А.Д.Луцик).

25.Brunner glands lektin histochemistry of different animal species.// 11-th International Lectin conference (abstr.). Tartu, 1989, p. 149. (co-auth. A.D.Lutsik).

26.Experimental substantiation of differences in the extent of development of the duodenal glands in mammals.// Folia morphologica, 1989, v. 37, N4, p. 356-364. (co-auth. Yu.l.Afanasyev).

27.Lectin histochemistry of duodenal glands in rats maintained on different diets.// 12-th International Lectin conference (abstr.). California, Davis a. Fallen Leaf-Lake, 1990,p. 71. (co-auth. T.V.Boronikchina, B.P.Sukhanov, A.D.Lutsik).

28.Method for selective histochemical detection of sialoglycans using Elderberry (Sambucus Nigral L.) Bark lectin.// 12-th International Lectin conference (abstr.). California, Davisa. Fallen Leaf-Lake, 1990, p. 67 (co-auth. A.D. Lutsik, E.N.Panasjuk, V.A.Antonjuk).

29.Lectin-detected processing of glycoconjugates in duodenal gland cells.// 13th International Lectin meeting (abstr.). Berlin, 1991, p. 70. (co-auth. A.D.Lutsik).

Изобретение:

Способ выявления сиаловых кислот в гистологических срезах. Авт. свидетельство СССР N 1809386 А 1, приоритет от 06.11.90. |(соавт. А.М.Ященко, А.Д.Луцик, В.А.Антонюк).

Рационализаторское предложение:

Способ окраски ядер клеток с целью оценки их функциональной активности. Удостоверение N 27(660) выдано 26.06,86 1 ММИ им. И.М.Сеченова.

Преобладающая часть содержащихся в диссертации результатов получена на базе кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии ММА им. И.М.Сеченова. Лектиногистохимические исследования осуществлены на кафедре гистологии Львовского медицинского института при консультативной помощи по методическим вопросам д.м.н. А.Д.Луцика. Изучение усвояемости пищевых веществ проведено на кафедре гигиены питания ММА при содействии д.м.н. Б.П.Суханова. При выполнении биохимических исследований техническая помощь оказана м.н.с. Института питания РАМН В.Ю.Ишковой. Анализ физико-химических свойств секрета желез проведен при участии сотрудников кафедр общей химии ММА к.х.н. Н.В.Машинной, коллоидной химии МГУ д.х.н. В.Н.Матвеенко и биофизики МГУ к.ф-м.н. А.А.Бутылина. Операции на животных выполнены совместно со ст. лаборантом кафедры оперативной хирургии ММА Д.А.Ереминым. Перечисленным коллегам автор выражает глубокую благодарность.

Автор благодарен д.м.н., профессору И.А.Морочопу за предоставленную возможность выполнения электронномикрос.копических и биохимических исследований на базе возглавляемой им лаборатории, а также за проявленный интерес к работе и конструктивную критику на стадии ее оформления.

Особую признательность и благодарность автор приносит заведующему кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии ММА им. И.М.Сеченова, чл-кор. АЕН РФ, д.м.н. профессору Ю.И.Афанасьеву и своему научному консультанту и наставнику, профессору кафедры д.м.н. Е.Ф.Котовскому за поддержку и помощь в работе.