Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Закономерности формирования сенсибилизации к HAEMOPHILUS INFLUENZAE, совершенствование индикации и иммунокоррекции

министерство здрлюахрлныпет казахской оср

Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней

На правах рукописи

ДОБРИЦЛ Валерий Павлович

УДК 612. 017. 3;616. 96:579. 643. 94

ЗАКОНОМЕРНОСТИ ЛОРНИРОВАНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ К HAEHOPHILUS IHFLUEHZAE.COBEPKEHCTBOBAHHE ИНДИКАЦИЯ а ИННУНОКОРРЕКЦИП

00. 36 - Аллергология и имнуналогия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Алма-Ата 1991

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Министерства здравоохранения Казахской ССР.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

Профессор И. Г. Цси

доктор медицинских наук, Профессор И. Л КАСАЖИНА

доктор медицинских наук, Профессор К К ХАКБЕРДЫЕВ

Ведущее учреждение - Научно-исследовательский инстату

иммунологии Минздрава СССР

Зашита диссертации состоится 1991 г,

в "—¿£_" часов на заседании специализированного Совета Д 079.05.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора медицинских наук при Научно-исследовательском институте эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Минздрава КазССР по адресу: 460002, Алма-Ата, уя. Макатаева (Пастера), 34.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Минздрава КазССР, г. Алма-Ата.

Автореферат разослан " " ¿срхА^С'/ЬеР 1991 г.

Ученый секретарь специализированного Совета, кандидат медицинских наук

Н. М. НУРКИНА

'..Sä <■•■ .U ' *

--■'S ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

' '"']

c 1 ^Актуальность темы. Все большее внимание клиницистов различных спе-и^льндотей, бактериологов и иммунологов-аллергологов привлекают услов-о патогенные микробы Haemophilus influenzae (Hi). Эти микробы явля-гся строгими плесморфными паразитами, требуют оообнх условий (X и У остовых факторов) для искусственного культивирования, способны давать азличнне формы и виды колоний (З.М.Андреева, Н.И.Храмова, 1979; Ki-len, Biberstein, 1984),

Как сапрофиты гемофилы достаточно часто (2-48^ обследованных) мо-ут встречаться на слизистых оболочках у детей и взрослых, а при снизим резистентности микроорганизма у здоровых носителей могут вызнать различные локальные и системные острые и хронические заболевания Curk, May, 196?; Sell., Wright, 1982; Sherry е.a., 1989). Известно коло 30 нозологических форм без тенденции к снижению заболеваемости э всех возрастных группах, несмотря на применение сильнодействущкх ¡»временных антибактериальных препаратов. Наиболее часто выявляются гмофильные пневмония, бронхит, менингит, сепсис, отит, синусит, гай-зрит, артрит, адиексит, перитонит и до. (Г.Я.Каган, В.И.Покровский и эавт., 1966; О.К.Лунева, 1971; Н.И.Храмова. З.М.Андреева, 1973, 1979; .В.Шапиро, 1975-1988; Т.А.Бажукова, 1979; Л.А.Вишнякова и'соавт., )8I. 1985; А.А.Демина, 1985, 1988; Н.Б.Наймушина, 1986; М.С.Байжомар-m и соавт., 1987; Г.П.Аминова и соавт., 1989; Л.Г.Боронйна, 1990).

Опубликованные результаты изучения значения гемофилов в патогене> аллергических болезней (tlajoa, I9G3, 1966; Clexka. 1979; Ж.Гёнци, >83; Н.Д.Беклемишэв, Т.Н.Нурпеисов, 1985; Sheinmen е.a«, 1986; Norn, >88) показали их этиологическую роль у 30-60$ больных с наиболее тяглой формой аллергического заболевания - инфекционно-аллергической юнхиальной астмой. Проведение популяциоиной специфической диагности-i гемофильной сенсибилизации среда населения в нашей стране и изуче-;э иммунного статуса в отношении гемофилов затруднено из-за отсутст-я отечественного производственного выпуска стандартного микробного игергена.

Клиническая потребность в аффективных препаратах гемофильной пачки для диагностики и специфической иммунотерапии больных с повышен-й чувствительностью в этим микробам определяет актуальность и важ-сть разработки соответствующих аллергенов для внедрения ® промышлен-е производство. Можно отметить, что современные достижения аллерго-

- г -

логин и иммунологии в значительной степени определяются разработкой новых эффективных препаратов для специфической диагностики и лечешш (Н.Д.Беклемшдев, Г.С.Суходоева, 1979; В.А.Фрадкин, 1980, 1990; Н.В. Медушщын, 1983; Г.В.Порядин, IS84; Р.В.Петров, Р.И.Хаитов, 1988; Ф.И. Ершов, С.В.Прозоровский, 1990). Лабораторная разработка нами ульраоз-вученного диагностического аллергена гемофильной палочки и его первичная клиническая апробация (В.П.Добрица, 1983) показали возможность эффективного использования такого препарата для проведения специфической диагностики аллергии в тестах in vivo и in vitro. Процесс технологического переоснащения производственных линий единственной в СССР базы по промышленному выпуску микробных аллергенов при Казанском НИИ эпидемиологии и микробиологии Минздрава РСФСР потребовал от нас последовательных разработок нового препарата, названного промышленным аллергеном, а также соответствующего оформления нормативно-технической документации на его коммерческий выпуск.

Комплексная оценка значимости гемофилов в патологии у людей по нашей стране затруднена из-за отсутствия единого подхода к диагностике и регистрации этих возбудителей у здоровых бактерионосителей и больных ладей. В развитых странах предпринимаются энергичные меры по специфической профилактике гемофильных заболеваний. Так, в 1985 году Комитет инфекционных болезней С11Й принял постановление о необходимости такой иммунизации всех американских детей, начиная с 2-летнего возраста. Комплексные расчеты стоимости массовой иммунизации детей показали выигрыш общества даже от 50$ и меньшей протективной эффективности вакцинации (Cochi е.а., 1985). В Финляндии аналогичную массовую специфическую профилактику регулярно проводят о 1974 года десяткам тысяч детей (Peitola е.в., 1977, 1984; Keybty е.а., 1984; Eskola е.а., 1985, 1987). В некоторых странах для профилактики гемофильных заболеваний у детей стали иммунизировать беременных яэнщин в 34-36 недель беременное ти (Catea, 1985).

Введение таких препаратов людям кроме ожидаемого действия в стимуляции иммунитета может способствовать аллергизации населения и инициировать местные и системные аллэргичесние реакции, что уже описано г литературе (Petxola е.е., 1977).

Одним из перспективных направлений, разрабатываемых в настоящее время "в НИИ иммунологии Мив трава СССР (Р.В.Петров и соавт., 1985; Р.В.Пвгров, Р.М.Хаитов, 1988), является изучение возможностей использс вания неприродных синтетических полиэлектролитов для коррекции первич-

ного и вторичного иммунного ответов. В последнее время большое внимание привлекает использование различных иммуномодуляторов с целью коррекции нарушений иммунного и аллергического статуса организма.

Все вышесказанное явилось обоснованием для проведения собственных исследований, выполненных по планам НИР НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Миндрава КазССР в 1980-1991 годах по проблеме 05.02 номер гос.регистрации 78057923 (01.79-12.81) "Гуморальные я клеточные реакции при инфекционно-аллергических заболеваниях а их динамика при лечения аэрозолями аллергенов"; № 01825003863 (01.8212.85) "Полиаллзргия и смешанные формы сенсибилизации. Механизма развития и разработка способов лечения"; совместно о Казанским НИИ эпиде-«иологии и микробиологии МЗ РСФСР * 01870026463 (01.87-10.89) "Разработка новых бактериальных аллергенов с расширенным спектром действия I усовершенствование технологии их получения"; по Научно-технической хрограмме ГКНТ СССР 0.69.97.02.06, этап НЗ, * гос.регистрации >1860086076 "Выявить особенности иммунологического статуса при полли-юэах, аллергии к низкомолекулярным химическим веществам, лекарствен-юй аллергии, бронхиальной астме для оптимизации диагностики; разработать а испытать в клинике более совершенные форма диагностических 1ллергвн0в" (01.86-12.90).

Цель ц основные задачи исследования. Целью работы являлось изуче-1И9 особенностей патогенеза инфекционного процесса и закономерностей юрмирования повышенной чувствительности к гемофилъвой палочке, разра-отка н совершенствование применения препаратов для специфической дв-гностихи и иммунокоррегаш.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести электроино-шкросношческив исследования особеннос-ей структуры капсулированных и бескапсульных форы эталонных штаммов емофильной палочки в зависимости от условий культивирования.

2. Разработать экспериментальные модели и изучить некоторые ас-акты патогенеза гемофяльной инфекции и сенсибилизации о иопользованв-и напсулированяых а бескапсульных микробов.

3. На модели геыофильной аллергии смешанного типа определить воз-эжаости проведения некоторых специфических и неспецифаческих методов амунотераяии.

4. Отработать технологию промышленного производства отечественно> аллергена гемофилъвой палочки и изучить аллергенные свойства сос-1ВЛЯЮЦИХ его компонентов.

5. Изучить протективные и сенсибилизирующие свойства некоторых

антигенных комплексов гемофильной палочки и их изменения под влиянием неириродного синтетического полиэлектролита ка-5.

6. Испытать разработанную ранее питательную среду для улучшения диагностики гемофильных заболеваний, проведения бактериологического скрининга по геыофилам и накошшшя больших объемов микробной массы, полноценной в антигенном составе.

Научная новизна и теоретическая значимость работы. Впервые в комплексном исследовании патогенеза гемофильной инфекции установлено, что эти условно патогенные микробы и их антигены способны инициировать: во-первых, гнойно-геморрагическую, серозно-дескваыативную мелко очаговую (капсулированные бактерии) и интерстициальную (бескалсулыше микробы) пневмонии; во-вторых, развитие системных аллергических реакций различных типов, а также их сочетания на корпускулярные и раство риыыв комплексные антигены; в-третьих, общее и локальное усиление чувствительности к гистамзшу.

Получены новые данные об иммуноааодулирующих и аллергенных свойст вах фракционированных антигенных групп и белковолипополисахаридного комплекса антигенов гемофильной палочки.

Разработана новая биотехнология промышленного выпуска отечествен ного аллергена гемофильной палочки, составлена и утверждена нормативно-техническая документация.

. Изучены, апробированы и усовершенствованы некоторые метода сшщ фической гипосенсибилизации, а также исследованы некоторые нетрадиционные подходы к проведении несшпифической иммунотерапии интерферона-ми и юс индукторами микробной сенсибилизации различных типов.

Впервые и с положительным результатом исследованы профилактические возможности проведения иеспецифичесяой коррекции иммунного ответ! интерфероногенами на этапе формирования ишуно-аллергических реакций к антигенам гемофильной палочки.

Разработаны и усовершенствованы методы бактериологической в имц но-аллергологической индикации гемофильной инфекции и сенсибилизации

Впервые анализирована региональная распространенность гемофилыг заболеваний в установлен спектр чувствительности в резистентности этих возбудителей к используемым в клинике антибактериальным препара там.

•Практическая рдцнооть работы заключается в том. что проведены разработки для решения крупной практической задачи совершенствования бактериологической, шмуно-аллергологической диагностики гемофильных

инфекций в гомологичной сенсибилизации в налей стране.

Для нувд практического здравоохранения рдэработана новая элективная питательная среда (объект изобретения - вещество, A.c. 1369277 от 22.09.87 г.) по эффективному культивированию геыофилов, наяаяены её серийное производство на базе НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Минздрава КазССР и почтовая рассылка согласно заявкам по рекламным информдисткам КазНШНТИ.

Разработан и апробирован в клинике первый отечественный аллерген гемофильной палочки, технология промышленного производства которого изложена в нормативно-технической документации, утверадена Комитетом по аллергенам и иммуно-диагностическим препаратам Минздрава СССР и Государственным Институтом стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов Минздрава СССР, принята предприятием по проиэ-1 водству бактериальных аллергенов при Казанском НИИ эпидемиологии и' шфобиологии Минздрава РСФСР.

В процессе разработки новых препаратов и совершенствования имму-w-аллергологического обследования оформлено 17 рационализаторских 1редложэний в НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болез-шй, Алма-Атинском Институте усовершенствования врачей Минздрава ¡ССР, Алма-Атинском, Семипалатинском и Актюбинском мединститутах. Казанском НИИ эпидемиологии, микробиологии Минздрава РСФСР.

Разработаны стабильные антигенные эритроцитарннэ диагностические :ест-системы для определения активности сывороточных антител к гемо-эильной палочки в реакции пассивной гемагглютинации.

На основе анализа ангибиотикочувствительности региональных штам-гав гемофильной палочки определен спектр наиболее эффективных лекарст-1ЭННЫХ препаратов для практического использования.

Изданы: монография 'Темофильная палочка - возбудитель инфекций и .ллергии" (1990), 3 методические рекомендации по совершенствованию дагностики и лечению гемофилышх заболеваний: "Haemophilus lnfiuen-;ае-инфекция" (1984), "Патоморфология и диагностика гемофильной инфек-т" (1989), "Бактериологическая и серологическая индикация гемофи-ов" (1990), листовхи "Темофильная инфекция" памятка для бактериоло-ов. Получено 23 акта внедрения.

Основные положения, выносимне на заяигу.

На основании собственных и современных литературных данных раз-аботана усовершенствованная концепция развития (модель патогенеза) емофильной инфекции и сенсибилизации: первичную воспалительную резкий мог7Т индуцировать живые капсулированные и бескапсульные гемофи.ш,

а их антигены и продукты метаболизма являются триггерами для вторичного иммунологического воспаления и динамичного развития различных типов аллергических реакций и их сочетаний. Проявление их может быть локальным, во генез - системный.

Разработаны надежные модели гемофильных острых и хронических форм гнойно-геморрагической, серозно-десквамативной, а также интер-стициальной форм пневмонии.

Установлена возможность развития нескольких форм проявления ге-мофильного воспаления, обусловленного внеклеточной или внутриклеточной локализацией и жизнедеятельностью микроба, а также за счет развития оистемных иыыуно-аллергических реакций с локальным проявлением на различные группы антигенов и аллергенов гемофилов.

В эксперименте установлена возможность аффективной специфической интраназальной и ингаляционной гипосеноибилизации, улучшающейся при использовании модифицированных аллергенов, полученных в сочетании о неопецифическими или специфическими иммуномодуляторама.

Экспериментально обоснована принципиальная возможность эффективного проведения нетрадиционного метода иымунокоррекции микробной аллергии некоторыми видами интерферонов и их индукторами.

Разработана и утверждена биотехнология промышленного выпуска у и версального аллергена гемофильной палочки для диагностического и лечебного применения.

Отработаны методики получения стабильных эритроцитарных иммуно-реагентов для определения активности сывороточных антител к гемофиль ной палочке в реакции пассивной гемагглютинации. '

Введение неприродного синтетического полиэлектролита иа-5 о ант; генами гемофильной палочки способно инициировать у морских свинок ус коренную индукцию антител и пролонгирование гуморального иммунного о вета 66з существенной стимуляции сенсибилизации.

Внедрена в производство ранее разработанная элективная питатель ная среда для совершенствования бактериологического выделения гемофа лов от здоровых носителей» больных детей и взрослых.

Установлены чувствительность в резистентность регионально выделенных штаммов гемофильной палочки к антибактериальный препаратам дл назначения стартовой терапии больных, а также популяционной профилнк теки данной инфекция й сг-юибилизацил.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждена на У Симпозиуме по аллергологии и клинической иммунологии со циалистических стран (Болгария, Варна, 1985); 1У объединенном съезде

гигиенистов, эпидемиологов, паразитологов и инфекционистов Казахстана (Чимкент, 1985); У Межреспубликанской конференции аллергологов-иммунологов Казахстана и Республик Средней Азии (Алма-Ата, 1986); заседании Республиканского научного общества иммунологов и аллергологов КазССР (Алма-Ата, 1987); Европейском Конгрессе по аллергологии и клинической иммунологии (Польша,Варшава-Яхранка,1988); У1 Республиканской конференции "Актуальные проблемы иммунотерапии" (Ворошиловград, 1988)» Научно-практических конференциях аллергологов-иммунологов "Проблемы региональной аллергологии" (Ташкент, 1989); "Иммунный гомеостаз в норме и патологии" (Фрунзэ, 1989); IX Всесоюзной конференции "Измерения в медицине и их метрологическое обеспечение" (Москва, 1989); Всесоюзной конференции "Стресс и иммунитет" (Ростов-на-До-ау, 1989); ХУЛ съезде Всесоюзного общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им. Й.И.Мечникова (Алма-Ата, 1989); Всесоюзной мнференции "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической иммунологии" (Москва, 1989); I Всесоюзном съезде иммунологов (Сочн-Да-?омус, 1989); Всесоюзной конференции "Экологические аспекты иммунопатологических состояний" (Алма-Ата, 1990); Всесоюзной конференции "Сов-юменные аспекты применения интерферонов и других ил-му н смодуляторов " ;Киев, 1990); I съезде иммунологов и аллергологов 7зССР "Актуальные юпросы клинической иммунологии и региональной аллергологии" (Ташкент-!амаркаяд, 1991); Всесоюзном съезде "Аллергические заболевания у де-■ей" (Москва-Иахачкала, 1991); I съезде иммунологов и аллергологов "ССР (Душанбе, 1991); П Всесоюзном Конгрессе по болезням органов ды-ания (Москва-Челябинск, 1991); Всесоюзной конференции "Поствакцнналь-;ие осложнения: патогенез, профилактика, лечение" (Ленинград, 1991); бъединенном заседании Ученого Совета НИИ эпидемиологии, микробиоло-ии и инфекционных болезней Минздрава КазССР и Республиканского науч-ого общества иммунологов и аллергологов (Алма-Ата, 1991).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 41 работа,в том чис-е 25 в центральной и зарубежной печати, 3 методических рекомендаций, онография, авторское свидетельство на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 5зора литературы, семи глав собственных исследований, обсуждения поученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка ио-эльзованной литературы, включающего 186 отечественных и 208 иностранце источников. Текст диссертации изложен на 291 странице "машино-юи, включает 26 рисунков и 64 таблицы.

Все разделы представленной диссертации выполнены и анализированы

автором лично при научном консультировании заслуженного деятеля науки, академика АН КаэССР, лауреата Государственной премии КазССР, профессора Н.Д.Беклемшпева, лауреата Государственной премии -КазССР, доктора медицинских наук, профессора Г.С.Суходоевой. Разделы работы с вирусами и интерфероногенаыи проводили совместно с О.А.Заворохиной при научном консультировании доктора медицинских наук Р.Д.Аспетова. Патоморфологические исследования выполнены при научном консультировании доктора медицинских наук, профессора Л.П.Царевского совместно с сотрудниками кафедры патанатомии Алма-Атинского института усовершенствования врачей Минздрава СССР, ЦНИЛ А3№ (Ы.Р.Рыс-Улы). Бактериологические исследования выполнены совместно с сотрудниками бактериологической лаборатории НИИ клинической и экспериментальной хирургии Минздрава КазССР (с Г.П.Амияовой) и Централизованной бактериологической' лаборатории г.Чишента (с Г.О.Пошевиной, А.В.Белоусовой).

Считаю своим приятным долгом выразить благодарность научным консультантам, коллегам, друзьям и родственникам за помощь в процессе выполнения данной работы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и метода исследования

В работе использовали эталонные гемофильные штаммы Н1Ь н 11,505, полученные из музея живых культур ГИСК им. Л.А.Тарасовича Минздрава СССР. Изучение различных свойств этих шкробоа и получение из них антигенов или аллергенов проводила по описанным методикам (В.П.Добрица, 1983; Г.С.Суходоева и соавт., 1984) после культивирования на разработанной нами питательной среда (ДИСО-агар).

Электрснночдиф оскопичагаое исследования микробных тел и тканевых клеток проводила по описанным методикам (К. и Л.Цапф, 1965; Б.Уи] ли, 1975; Л.А.Сешгюва, 1976). Для воспроизведения экспериментальных моделей к капсулыша и бескапсудьашл бактериям пользовались ранее разработанным схешла аосцроизвэдзйия повизшюй чувствительности 1 Ш и 1У танов, а т&кео их сочетаний (В.П.Добрица, 1283).

Фракционирование антигенов аз аллергена гемофильной палочка про водили сульфатом аммония г ва колонке о сефарозой 6 В по описанным методикам (Л.А.Остерман, 1935).

Выделение комплексного антигенного препарата белковолипополиса-

харидной вакцины (БЛПВ) проводили из штамма № 505 по производственному методу, описанному В.И.Кувакпной (1973, 1974) для менингококков. Получение белковолипополисахариддого эритропитарного (БП ЭД) диагнос-тикума и липополисахаридного диагностикума (Ш ЭД) для определения активности сывороточных антител в реакции пассивной ремагглютинации (РИГА) проводили по описанным методикам (Б.В.Каральник, 1976, 1982; В.А.Шамардин, Б.В.Каральник, 1978; В.А.Шамардин, Т.И.Тугамбаев, 1989).

В качестве индукторов эндогенного интерферона использовали: вирус болезни Ньюкасл (ВБН), полученный из музея вирусных штаммов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского АМН СССР, гемодез (Красноярский завод медпрепаратов), дрожжевую двусшралъную рибонуклеиновую кислоту (дсРНК), любезно предоставленную чл.-корр. AÍ.HI СССР, профессором Ф.И .Ершовым,- метронидазол (трихопол, 1-/2-гидроксиметил/-2-ме-тил-5-натроимидазол) фарш Polfa (Польша), вакцину БЦЖ(ГаиНИИ вакцин и сывороток), очищенный туберкулин (Ленинградский НИИ вакцин и сывороток) . Определенно сывороточного интерферона проводили по описанной методике (Д.Н.Носик и соавт., 1982) в модификации Р.Д.Аспетова (1985) микрометодом.

В процессе проведения специфической гипосенсибилизэцил (СГ) была использованы водорастворимые нетоксичные поверхносгно-активнно вещества (ПАВ) ОС-I и КС-3, синтезированные А.Ф.Артамоновым в Институте химии АН КазССР.

Для фенотипичоской коррекции иммунного ответа использовали имду-юмодулятор лиэлин из группы цитомединов, производных естественных эегуляторннх пептидов. Лиелт получен В.Г.Морозовым, В.Х.Хавинсоном (1983) и любезно предоставлен чл.-корр. АЩ СССР,! профессором O.K. (мельницким.

Использовали также один из наиболее перспективных полимеров в но-зоы поколении неприродных синтетических полиэлэктролитов - препарат МА-5 (Р.М.Хаитов, 1988; M.S.Тарасов, 1987), который синтезирован в Гнстятуте биофизики Минздрава СССР И.В.Савиновой. Препарат na-5 пред-¡тавляет собой сополимер акриловой кислоты и н-винилпирролидона, со-[еряащий 45 мол. Я звеньев акриловой кислоты с м.м. 50 кД.

Постановку и учет иммуно-аллергических реакций проводили с оттит-юванныма рабочими дозами препаратов: кото-аллергические реакции А.Д.Адо, А.А.Польнер, 1963; В.С.Ыошкевич, 1973); реакцию торможения играции лейкоцитов (РТШ1) ставали капиллярным методом в описании ;.К.Новикова, В.Н.Новиковой (1979) в модификации Г.С.Суходоевой 1985); реакцию дегрануляции тучных клеток (РДТК) - по методике, опи-

санной Л.М.Ищимовой, Л.И.Зеличенко (1969); реакцию пассивной кожной анафилаксии (РПКА) - в соответствии с рекомендациями 2. Ovary е.а. (1958, 1976), w.Perish (1970, 1981); реакцию Щультца-Дейла - в.описании Р.Блаттнера и соавт. (1983); при воспроизведении острого анафилактического шока (АШ) рассчитывали индекс шока (ИШ) по Weigle е.а. (1966), аналогично учитывали'антигистаминовый шок (И.С.Гущин, 1973; А.Х.Канчурин, И.Г.Цой, 1981)-, реакцию агглютинации на стекле и учет результатов проводили по методике, описанной Н.И .Храмовой (1973), Н.И.Храмовой, З.М.Андреевой (1975); реакцию простой радиальной имму-нодиффузии в геле (Х.Фримель, 1987); определение Т-, Б-, 0-лимфоци-тов в периферической крови и лиыфоидных органах животных проводили по методикам, описанным Ж.С.Нугмановой и соавт. (1987).

При морфологическом изучении материалов пользовались предложенной ВОЗ схемой гистотопографических исследований, после окрашивания парафиновых или криостатных срезов гематоксилином и эозином, пикро-фуксином по ван-Гизону, импрегнации серебром по Тибор-Иаппу и Гомори, а также изучали прямым методом Кунса.

Определение лекарственной чувствительности и резистентности ге-мофильных штаммов к антибактериальным препаратам проводили с использованием стандартных дисков в соответствии с действующими методическими указаниями (Москва, 1983).

Статистическую обработку полученных результатов проводили по описанным методикам (Б.С.Бессмертный, 1967; В.Ю.Урбах, 1975) с использованием мини-ЭВМ £3 21 по составленным программам (Л.И.Фраяцевич, 1979).

Общий объем проведенных исследований резюмирован в таблице. I.

Как видно из таблицы I» общий объем проведенных исследований заключался в постановке и анализе экспериментов с использованием 1524 морских овинок, 2 баранов, 18 кроликов', 27 крыс-самцов линии Август, а также результатов комплексного обследования 18303 взрослых и детей, больных инфекционно-аллергическими или соматическими заболеваниями. При выполнении экспериментальных исследований руководствовались "Правилами проведения работ с использованием животных" и Приложениями 1-4, регламентированными Приказом Минздрава СССР № 755 от 12.08,77 г.

Общий объем исследований

Таблица I

№№ Наименование проведенной работы

Объект и объем исследования

I. Пассирование и культивирование эталонных штаммов гемофялов

1.1. Приготовление сухой микробной массы

1.2. Выделение БЛПВ

'1.3. Получение гипериммунных сывороток

2. Бактериологическое обследование больных детей и взрослых

3. Патоморфологическиэ исследования умерших больных

4. Клиническая апробация аллергена в Алма-Ате и Казани

5. Определение рабочих доз использованных в работе препаратов (аллергенов, БЛПВ, ыа-5, интерфероногенов и др.)

6. Моделирование гемофильной инфекции

7. Изучение сравнительной активности ультраозвученного и промышленного аллергенов

8. Изучение аллергодиагностической активности фракционированных антигенов

9. Изучение протективных и сенсибили-зирувднх свойств БЛПВ

10. Изучение эффективности инграназаль-нои и ингаляционной специфической гипосенсибилизащш

11. Изучение эффективности неспецифнчес- 351 м.св. кой иммунотерапии индукторами интер-

феронов и профилактики микробной сенсибилизации

Доноры-кролики (6), бараны (2); ЫДСО-агар: 293,7 кг (14687 чашек Петри); МНА -82 кг (41ООО чашек); Агар Хоттингера - 15 кг (750 ч.); Агар Дифко - 210 г

238 г

815 иг Кролики (12)

В Чимкенте - 2042 больных, Алма-Ате- - I6I95 больных

17 человек 49 человек

220 морских свинок (м.св.)

260 м.св. 107 м.св.

137 м.св., 27 крыо

153 м.св. 296 м.св.

Итого:

Обследовано детей и взрослых

Использовано экспериментальных животных

18303

1524 м.св., 2 барана, 18 кроликов, 27 крыс линии Август

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение патогенеза гемофилыюй инфекции и закономерностей развития микробной сенсибилизации

В данной серии исследований стремились максимально приблизить условия экспериментального моделирования пневмонии к её клиническому проявлению у человека с использованием капоулированных и бескап-сулышх гемофильных палочек, а также одного из важных стрессоподоб-иых по действию на организм факторов окружающей среды - охлаждению сразу после интраназального инфицирования животных в течение 3 часов при -15°С.

При последующем микроскопическом исследовании гистологических срезов ткани легкого, инфицированных капсулированными формами микробов, отмечали спустя 5-10 суток картину сегментарной гнойно-некротической и гнойно-геморрагической двусторонней бронхопневмонии, десква-мативно-слизистого бронхита с появлением мелких очагов некроза в легочной ткани и серозно-гнойной экссудации, васкулитов и лимфангиитов. В течение 11-20 и вплоть до 55 последующих суток в легких развивались крупные очаги гнойной пневмонии.

При исследовании ткани легких, инфицированных бескапсульнымв формами микробов, отмечали на 2-3 сутки формирование серозно-десква-мативиой пневмонии с выраженной интерстициальной реакцией. В динамике наблюдений отмечали утолщение и деформацию межальвеолярных перегородок за счет массивной лимфоцитарно-макрофагальной инфильтрации, ведущей к нарушению рисунка строения легких, а также значительную гиперплазию бронхассоциированной ткани легкого.

Электронной микроскопией были выявлены нарушения в ультраструктурной организации аэрогематического барьера легких, - в эндотелио-цитах капилляров, альвеолярном эпителии и интерстиции. В просвете капилляров отмечали микротромбы, представленные нейтрофильными лейкоцитами, тромбоцитами и эритроцитами. В цитоплазме макрофагов наблюдали множество лизосоы, фогосоы, контрастный осмиофильный материал и кокк« бациллярные формы гемофилов.

В последующие сроки исследований обнаруживали мелкие очаги эмфиземы на фоне дизателекта?ов, массивные очаги лимфо-гистиоцитарной инфильтрации межальвеолярных перегородок, лерибронхиалыше и периваску-лярныв муфтообразные лимфо-макрофагальные клеточные инфильтраты, гиперплазию лимфоидной ткани с образованием крупных и мелких лшлром,

десквамацию альвеолярного эпителия, скопление в альвеолах серозного экссудата с примесью макрофагов, пролиферацию эндотелия кровеносных сосудов, гиперсекрецию слизи в бронхах.

Интраназальнов инфицирование животных без последующего охлаждения вызывало однотипные изменения в организме без существенных различий от капсулированности бактерий. Анализ иьмуно-гкстологических исследований в целом позволяет считать, что наиболее яркая и типичная патология развивалась в ткани легкого. В других органах (печень, почки, головной мозг и его оболочки, сердце) прямым иммунофлюоресцентным методом Кунса непостоянно обнаруживали единичные антигенсодержащие клетки. В то же время в легких на 5 сутки опыта в поле зрения люминесцентного микроскопа (х 70) можно было обнаружить до 5 антигенсодержа-щих клеток; на 56 сутки их число возрастало до 60-70, а к 360 суткам их количество увеличивалось до 250. Наибольшее количество люминесци-рующих клеток наблюдали в интерстиция легкого, по ходу альвеолярных перегородок, которые были резко утолщены за счет пролиферации гистиоцитов и выраженной лимфоидной инфильтрации. Для сопоставления данных об изменении площади интерстиция в динамике опыта использовали показатель удельной площади интерстиция. В контрольной группе этот показатель составил 29±3,4&, а у опытных животных достигал 58,6±4,2% (Р< 0,001).

При импрегнации легкого серебром по Тибор-Паппу с 28 суток опыта выявляли новообразование аргпрофилышх волокон в виде нежных нитей, располагающихся по ходу межальвеолярных перегородок (наиболее выракзн-но спустя год после инфицирования). Среди эозинофильных лейкоцитов и мононуклеаров постоянно выявляли нейтрофзльные лейкоциты п макрофаги, инфицированные палочкаш (капсулированныма и бескапсулышми гемофзлагяф.

Следует отметить, что динамичное шадуно-еллоргологическое обследование инфицированных животных не выявляло развития специфических аллергических реакций до 21 суток после инфицирования, а с 35 суток наблюдала кокяо-аллергические реакции, хотя индекс торможения миграции лейкоцитов во все сроки наблщений (до 55 суток включительно) оставался отрицательным, что, по-видимому, отражало самостоятельность динамики выработки различных лимфокинов - медиаторов ПЧЗТ.

В поздние сроки исследования (спустя 55 суток и более) наблюдали выработку специфических и з&01Ъ аллергических антител (площадь окрашенных пятен в РПКА по Овари составляла 66,7±40,8 и 81,3±52 мм2 соответственно), которые у свинок являются аналогами реагиновых антител.

Таким образом, в эксперименте на морских свинках впервые изучена оригинальная модель гемофильной инфекции, при которой возможно формирование не только различных типов воспалительной реакции, но и различных типов аллергии.

Сравнительная характеристика иммуно-диагностических свойств различных антигенов гемофильной палочки на моделях ПЧЗТ, ИЧНТ и смешанной аллергии

Результаты исследования аллергенных свойств различных серий препаратов гемофильной палочки на моделях повышенной чувствительности немедленного (ОТИТ), иммуяокомплексного (Ш) и замедленного (ПЧЗТ) типов представлены в таблице 2.

Таблица 2

Возможности индикации различных типов аллергических реакций антигенами гемофильной палочки

Ш Антигены > Типы аллергических реакций _ I Ш 1У

Корпускулярные

1 Капсударованные бактерии

2 Бескапсульные микробы 3'Клеточные стенки Растворимые

4 Ультраозвученный аллерген

5 Промышленный аллерген

6 Белковолипополисахаридный комплекс антигенов (БЛПВ)

Фракционированные су (%%)

7 25

8 50

9 75

10 90

Сефаровой 6 В (кДЪ

11 42

12 60

13 370

14 650

15 660

* Не исследовано.

+ + +

+ + +

+ + +

+ + +

+ + . +

+ + +

льфатом аммония

- + +

+ + +

+ +

- - +

+ н*

+ н +

+ н +

+ н +

+ н +

При сравнительном исследования результатов учета диагностической активности различных препаратов установлены преимущества растворимых аллергенов перед корпускулярными. Однотипная активность диагностической эффективности ультраозвученного и промышленного аллергенов была выявлена в кожных пробах при моделировании ПЧЗТ микродозами ультраозвученного аллергена. Диагностика ПЧЗТ у сенсибилизированных животных аллергеном промышленного производства была также нисколько не хужо ультраозвученного в сбалансированных по белку дозах (2,0 мг).

Аналогичные результаты диагностики немедленной и замедленной аллергии были получены на модели повышенной чувствительности смешанного типа к гемофильной палочке.

Нормативно-промышленная документация на производство промышленного аллергена гемофильной палочки (техническое задание, экспериментально-производственный регламент, временная фармакопейная статья, патентный формуляр, отчеты о лабораторно-экспериментальном и клиническом исследовании аллергена, программа расширенной клинической апробации препарата, инструкция по применению, рекламная проработка) вместе с контрольными сериями аллергена были представлены совместно с к.б.н. С.Х.Исхаковой (ШИЭМ Минздрава РСФСР, г.Казань) в Комитет по аллергенам и иммунодиагностическим препаратам Миндрава СССР. Решением Комитета * 3 от 05.06.88 г. признано целесообразным продолжать представленные научно-технологические разработки и дальнейшие испытания диагностических и лечебных свойств аллергена. Получено положительное решение Комитета о результатах проведенной НИР за Л 119 от 12.07.80 г.

При дифференцированном высаливании белков из растворимого аллергена гемофильной палочки с помощью сульфата аммония наиболее активная фракция для диагностики кожной гиперчувствительности замедленного типа была получена при 25$ насыщении. По немедленным (ранней и поздней фазы) кожным реакциям более интенсивные реакции вызывали белки, выделенные после 50& насыщения сульфата аммония.

При гель-хроматографии на сефарозе.6 В фракции аллергена с 25% насыщения сульфатом аммония было получено 2 пика элюции с м.м. около 650 и 42 кД; из них диагностической активностью в замедленных кожных реакциях обладал элгаат с м.м. около 650 кД, а в реакции деграну-ляции тучных клеток - оба элюата.

При гель-хроматографии на сефарозе 6 В фракции с 50<» насыщения сульфатом аммония получено 3 пика с м.м. около 660, 370 и 80 кД, которые обладали одинаковой активностью в замедленных кожных реакциях и реакции дегрануляции тучных клеток.

Протективнце и сенсибилизирующие свойства белковолипополисахаридного комплекса антигенов гемофильной палочки

В эксперименте проводили изучение протективного антительного и аллергического ответов на введение различными путями нативных антигенных препаратов гемофильной палочки и их модифицированных форм. БЛПВ-комплекса с неприродным синтетическим полиэлектролитом

Объектом исследования служили 6 групп морских свинок, иммунизированных подкожно различными дозами (0,1-1,0-10,0 мг) БЛПВ (группы 1-3). В 4-6 группах животных проводили исследование протективных свойств модифицированной вакцины-смеси аналогичных доз БЛПВ с иммуно-модулятором N¿-5 , соответственно, в дозах 0,5-50,0 мг.

Динамика антительного ответа на белково-полисахаридный и липопо-лисахаридный антигены после иммунизации комплексом БЛПВ представлена в Таблице 3.

Как видно из таблицы 3, кинетика специфической активности сывороточных антител к Селново-потоахаридному и тпопомсахаридяому комплексам БЛПВ зависела от величины использованной дозы БЛПВ и имела как сходства, так и различия. Так, при иммунизации наименьшей из испытанных доз БЛПВ - 0,1 мг, - оба вида антител начинали определяться с 7 дня и персисгировали по 21 день примерно в равных количествах. При увеличении дозы БЛПВ до 1,0 и 10,0 мг антитела к липополисахари-дам уже на 4 день практически достигали уровня, наблвдавшегося до 37 дня; эти дозы стимулировали образование антител к белково-полисахарид ным антигенам вакцины лишь к 7 дню, причем количество их при дозе вакцины 10,0 мг уступало антилипополисахаридным. Из изложенного можно отметить следующие общие закономерности. Во-первых, при увеличении дозы БЛПВ в 10 раз (с 0,1 до 1,0 мг) ускорялся (на 4 день) и пролонгировался синтез антител к липололисахарндам; пролонгировался синтез антител к белковополисахаридным антигенам вакцины.

Во-вторых, при увеличении дозы БЛПВ в ЮО раз (с 0,1 до 10,0 мг) существенно усиливался ранний синтез анти-липополисахаридных антител (4 день после вакцинации) с тенденцией к дальнейшему пролонгированию их образования; существенно пролонгировалась и повышалась активность антител к белково-цолисахапидным компонентам вакцины.

Оценивая динамику прозявомикробных антител обеих специфичностей, следует отметить определенную монотонность: значительные титры антител появлялась уже в саше первые дни после вакцинации (быстрое вклю-

Тайлвда 3

Кинетика антительного ответа у морских свинок при иммунизации нативаым и

модифицированным ВЛИВ

Иммунизация животных

Средняя геометрическая титра РЛГА и её средняя квадратичная ошибка в указанные сроки после вакцинации (сутки;

4 7 14 21 37

I 0,1 мг БЛПВ 0* 1,50 ±0,32 1,2420,34 0,8520,21 0

2 _ я _ 0 1,45 ±0,20 0,8520,21 0,8520,21 0

3 1,0 мг БЛПВ 0 1,3020,12 1,020,15 0,7020,19 0,9420,34

4 Я 1,09*0,12 1,1520,21 1.0920,12 1,020,42 1,3920,30

5 10,0 ЫГ БЛПВ 0 1,1020,12 1,020,42 1,620,21 1,7020,28

6 N ^ 1,5420,09 1,5020,12 1,4620,17 1,4620,11 1,5420,09

7 0,1 мг БЛПВ + 0,5 мг ЫА-5 0 1,9020,31 1,3020,10 0,7020,19 0

8 Я 0 1,6020,21 1,020,16 1,3020,10 0

9 1.0 мг БЛПВ + 5,0 ыг 0 1,3220,17 0,9420,34 0,9420,34 1,0920,12

10 — и — 1,3020,37 1.6620,15 1,3020,42 1,3620,22 1,4520,21

II 10,0 мг БШВ + 50,0 мг ИА-5 1,3020,11 1,1020,15 1,1520,21 1,5420,09 1,7820,28

12 1,4610,17 1,7020,07 2,0520,64 1,9020,37 1,7520,21

Достоверные различия Р<0,05

4-6

1-5, 3-5 7-И, 2-6

* Нечетная сторона - антительный ответ к белховополисахаркдным, четная - к липополи-сахаридным антигенам БЛПВ.

-Те-

чение иммунного ответа) и, в раде случаев, медленно нарастали к 37 дню исследования.

При комплексированаи 0,5 ыг Щг-5 с О.Г мг БЛПВ не отмечали существенного влияния лолаэлектролига на кинетику и уровень активности специфических антител. Можно лишь отметить, что на 21 день у животных статистически значимо превалировали антитела к лилополисахариднш антигенам в сравнении с белково-полисахаридным; однако на 37 день оба вида антител в опыте и контроле не определялись.

При коиплексированш 5,0 мг о 1,0 мг БЛПВ существенных изменений динамики антител также не выявлено.

Наконец, при иммунизации животных конъюгированным препаратом, содержащим 50,0 мг ыа-5 в 10,0 мг БЛПВ, отмечали четкую стимуляцию раннего синтеза антител к белково-полисахаридным антигенам БЛПВ. Следовательно, большие (относительно других испытанных) дозы нетоксичас-кого синтетического полиэлектролата ид-5 способны стимулировать ранний иммунный ответ на белково-полисахаридный комплекс, введенный в большой дозе (также относительно других испытанных доз) вакцины из гемофильной палочки.

Таким образом, в условиях, когда необходимо достичь раннего и длительного образования антител к протеинам микробной клетки, установлена эффективность добавления синтетического полиэлектродита ца-5 к ацтигену в дозах 50 мг полиэлектродита и 10 мг антигена. Эта иммунизация приводила также к повышению титров и пролонгированию образования антител к липополисахаридннм антигенам микробной клетки. Достигнутое такой иммунизацией одновременное стимулируицее действие на образование антител различной специфичности, по-видимому, наиболее отвечает целям и задачам иммунизации.

Для выявления процесса развития - аллергических реакций во всех 6 группах иммунизированных животных через 54 суток проводили аллерго-логические тесты. Прежде всего, следует ответить, что в ИШ. по Овери не было выявлено сывороточной циркуляции специфических аллергических антител всех известных изотилов в I, 2,4 и & группах. В то же время было установлено, что увеличение антигенной нагрузки в БЛПВ до 10,0 мг стимулировало не только выработку специфических лротективных антител, но индуцировало в развитие аллергических реакций. Так, в 3 и 6 группах животных отмечали ■ ИЖА. по Овери наличие сывороточных гомоци-тотрошшх хошо-свясиаяжзирущях антител (г^сие. ХеОЬ, 1йЕ).

Существенного влияния КА-5 на выработку и циркуляцию в крови аллергических антител не выявлено.

Не выявлено в этих группах стимулирующего влияния на_з также и на проявление поздних кожно-аллергических реакций и РТЫЛ. Вместо с тем отмечено, что в 3 и 6 группах после иммунизации значительными дозами нативного препарата БЛПВ (10,0 мг) или его модифицированной формой в смеси о 50,0 мг на-5 наблюдали через 54 суток выраженные кожно-аллергические реакции 1У типа -0,65±0,19 и 0,?3±0,12 см^ соответственно, хотя РТЫЛ оставалась отрицательной, что может отражать процесс самостоятельной кинетики выработки различных лимфокинов.

На основании этих полученных данных в последующих исследованиях использовали дозу 1,0 мг БЛПВ для определения её иммуностимулирующей и сенсибилизирующей активности в зависимости от путей введения в организм и от сочетания с МА-5 (50 мг). Для этого I группе животных вводили подкожно БЛПВ; 2 группе - аналогично БЛПВ + 3 группе - внутримышечно БЛПВ; 4 группе - аналогично БЛПВ + и А-51 5 группе - пер-орально БЛПВ; 6 груше - аналогично БЛПВ + N1-5; ? группе - внутривенно БЛПВ; 8 группе - аналогично БЛПВ +

Динамику инициированного гуморального иммунного ответа исследовали разработанными антигенными эритроцитарными диагностикумами в РПГА спустя 4-60 суток после иммунизации; сенсибилизирующую активность изучали в аллергических тестах.

Было установлено, что БЛПВ может бистро (уже с 4 дня после вакцинации) и продолжительно (в течение 2 месяцев, срок наблюдений) индаии- , ровать сывороточный антительный ответ к белковополисахарвдным антигенам при внутримышечном и подкожном введении, но не столь продолжительно после пероральной или внутривенной антигенной стимуляции; а к липо-полисахаридным антигенам - только после внутримышечного пути введения, но не после шрорального или внутривенного, при которых индуцировали антительный ответ аналогично белковополисахаридным антителам только в течение первых 4-7 суток после иммунизации. Следует отметить, что при использовании модифицированной гемофильной вакцины (БЛПВ в сочетании с неприродным синтетическим полиэлектролитом иа-5 ) наблюдали эффект значительного пролонгирования сывороточной активности специфических антител, а значит, и эффективности вакцины при пероральном (до 2 мес) и внутривенном (до I мес) путях введения.

Результаты изучения аллергических реакций в динамике наблюдений показали, что, во-первых, спустя 21-60 сут после иммунизации у животных не выявляли специфических кожно-сенсибилизируицих гомоцитотропных антител и полностью отрицательные результаты внутрикожных проб на введение оттитрованных рабочих доз как БЛПВ, гак и ыа-5. Полученные ре-

зулътаты свидетельствовали об отсутствии в организме всех вакцинированных животных иммуно-аллергической перестройки на введенные препараты БЛПВ и NÀ-5-

Патоморфологические исследования различных органов и тканей (тимуса, легких, периферических паховых, шейных и хиллерных лимфоузлов) также не выявляли проявлений токсичности БЛПВ или ыж-5, а также формирования аллергических процессов.

Лабораторная разработка и изучение эффективности некоторых методов специфической гипосеясибилизации микробной аллергии смешанного типа

В литературе показана наибольшая эффективность локальной иммунотерапии различных аллергозов (В.С.Ыошкевич, Л.А.Царевская, 1981; Ы.К. Каппасов, 1983; Г.М.Есенжанова, 1983; Т.Н.Нурпеисов, 1989), что связы-шется с непосредственным воздействием на шоковый орган в сенсибилизированном организме (И.Д.Беклемишев,1987) .Исходя из этого,изучали возможности разработанного аллергена гемофильной палочки для лечебного применения при интраназальном и ингаляционном путях введения в организм на модели смешанной (ПЧНТ + ПЧЗГ) аллергии.

При изучении эффективности интраназальной специфической гидасен-сибилизации (СГ) нативныы аллергеном а при к©индексировании его с некоторыми поверхностно активными веществами (ПАВ) или глицерином оказалось, что разработанный аллерген может эффективно использоваться в процессе СГ. Дробное интраназальное введение в курсовых дозах 125-185 мкг не оказывало токсического воздействия на внутренние органы животных и приводило к эффективной десенсибилизации: значительно уменьшались кожно-ашгергические реакции, восстанавливался до, нормы сниженный индекс миграции лейкоцитов в ИМ, наблюдали полную супрессию аллергических антител в РПКА, Следует отметить эффективность аналогичных курсов СГ на сенсибилизированных животных с применением ПАВ 0C-I или КС-3, которые существенно не изменяли аллергенности антигенов гемофильной палочки, но способствовали лучшей солгхЗилизации и более полному всасыванию слизистыми носоглотки, что способно инициировать лучшую степень десенсибилизации за счет более полного проникновения антигенов в сенсибилизированный организм.

При этом более перспективной представляется последующая разработка 0C-I, чем КС-3, который после 19 инстилляций индуцировал у сенсибилизированных животных выработку фактора стимуляции миграции лейкоци-

тов, что можно рассматривать как показатель повышенной чувствительности (Н.В.Медунииын, 1983),. Вместе с тем, оба препарата ПАВ могут эффективно использоваться не только в составе модифицированных аллергенов при СГ, но и при разработке новых методов получения высокоочи-щенных и специфичных аллергенов для диагностики и лечения (М.А.Саты-балдиева и соавт., 1986; Г.С.Шамсугдииова и соавт., 1988).

При проведении СГ было также установлено, что полезным наполнителем аллергена гемофильной палочки оказался глицерин, который способствовал эффективной гипосенсибилизации животных со смешанной аллергией. При этом после окончания курсового инграназального введения 545 мкг аллергена с 10& глицерина отмечали полное отсутствие проявлений токсичности в специальных патоморфологических исследованиях и существенное (Р <0,001) снижение размеров поздних кожно-аллергических реакций, нормализацию индекса миграции в КГМЛ, полную супрессию аллергических антител в РИКА, значительное (6-8-кратное) уменьшение количества полос преципитации в реакции гелевой иммунодиффузии между специфическим аллергеном и сыворотками сенсибилизированных животных, а также полную отмену острого анафилактического шока после внутривенного введения разрешающих доз аллергена гемофильной палочки.

Разработанный аллерген гемофильной палочки оказался также эффективным при ингаляционном проведении СГ у 75$ животных посла курсового икгалирования. Достигали значительного снижения интенсивности и размеров замедленных кожно-аллергических реакций и частоты обнаружения специфических аллергических антител всех изотипов, а также наблюдали восстановление индекса миграции в РТМЛ до нормы. Суммарная курсовая доза аллергена, внесенная в аппарат для ингалирования. составляла 20 мг. Однако, принимая во внимание опубликованные данные о меньшем количестве аллергена, проникающим непосредственно в легкие при дыхании животных (около от исходной дозы), предполагаем, что эффект гипосенсибилизации наступал после ингалирования специфического аллергена в дозе 400 мкг по белку.

При разработке оптимальных возможностей лечебного применения аллергена гемофильной палочки впервые установлены интересные данные о возможности эффективного комплексироваяия ингаляционной специфической иммунотерапии с модуляторами иммунного ответа.

На модели смешанной аллергии было установлено, что естественный иммуномодулятор из группы цитомединов лиелин при внутримышечном введении непосредственно после сенсибилизации или через 2 месяца после неё существенно не влиял на последующие проявления аллергических реакций

немедленного или замедленного типов к микробным антигенам. Это открывает заманчивые перспективы дальнейшей разработки таких препаратов, которые способны системно так стимулировать иммунитет, что при этом активируются его протективные, но не сенсибилизирующие звенья. Вместе с тем, сочетанное парентеральное применение лиелина с курсовым инга-лированием аллергена в процессе проведения специфической гипосенсиби-лизации животных со смешанной аллергией к гемофильной палочке приводило к такой лечебной эффективности, которая превосходила результаты терапии только аллергеном (100 и соответственно).

Сочетание ингаляций растворимого аллергена с внутримышечным введением неприродного синтетического полиэлектролита кА-5 также статистически значимо супрессировало проявление кожно-аллергических реакций и полностью устраняло сывороточную активность циркулирующих антител. Интерес.но, что курсовое введение только полиэлектролита N¿-5 без ингаляций специфического аллергена также достоверно уменьшало аналогичные показатели - интенсивность и площадь окрашенных пятен в РПКА (1£Е, хемь-специфические антитела), а также размеры поздних кожно-аллергических проб. Это может быть связано с индукцией неспецкфических биологически активных веществ типа альфа-интерферона. Аналогичный механизм действия на микробную аллергию смешанного типа наблщали при изучении гипосенсибилизирувдего действия гемодеза, в который входит полавинил-пирролидон (составная часть ЫА-5).

Очевидно, что положительная результирующая эффекта гипосенсибили-зации после комплексного лечения суммировалась за счет специфического действия ингаляций аллергена и неприродного синтетического полиэлектролита »А-5. Полученные результата делают перспективной дальнейшую углубленную разработку данного направления в иммунологии и аллергологии не только в эксперименте, но и в клинике.

При изучении механизма гипосенсибилизации на уровне определений основных Популяций лимфоцитов у леченных животных в сравнении с контрольными группами было установлено, что дополнительное к ингаляциям аллергена внутримышечное введение полиэлектролита стимулировало выход субпопуляций активных и общих Т-лимфоцитов из тимуса в периферические органы - кровь, легкие и шейные лимфоузлы. Количество В-лимфоцитов после лечения значительно возрастало в крови, менее значительно - в селезенке, а в легких была обнаружена только тенденция к их снижению.

Совершенствование методов неспецифической иммунокоррекции различных типов повышенной чувствительности к микробным антигенам индукторами интерферонов

Особое внимание исследователей в последнее время привлекает так называемое непротивовирусное действие интерферонов, а противобактери-альное, антиклэточное, иммуномодулирупцее и др. (Ф.И.Ершов, С.В.Прозоровский, 1990; И.Г.Кишко и соавт., 1990).

Иммуномодулирупцее действие интерферонов на формирование и проявление микробной аллергии различных типов длительное время оставалось неизученным, в связи с чем предприняты нижеописанные исследования.

При изучении кинетики сывороточной активности эндогенных интерферонов у морских свинок было установлено, что после внутривенного введения 5-Ю3 ЗИДзд ВБК эта активность была наибольшей спустя 4-8 час после введения и составляла 59834^5136 ед/мл. Спустя 24 час и более эндогенный интерферон не обнаруживали.

Дрожжевая дсРНК инициировала быстрое накопление интерферона о пиком максимальной сывороточной активности 284±42 ед/мл спустя 4 часа после введения.

Гемодез и метронидазол индуцировали сывороточную активность эндогенного интерферона с пиком на 6-8 час после введения, 296±31 и 4Б0± 71 ед/мл соответственно. После введения гемодеза активность интерферона сохранялась в течение 48 час, а после введения метронвдазола -в течение 24 час.

Внутрикожное введение вакцины БЦЖ индуцировало выработку интерферона с максимальной активностью спустя 14 суток после введения до 218±32 ед/мл, а полное исчезновение индукции интерферона происходило к 26 суткам. При введении животным из этой группы на 14 сутки очищенного туберкулина наблюдали повышение сывороточной активности интерферона до 2136*354 ед/мл спустя 6- чао после инъекции, что сохранялось в течение последующих суток.

На разработанной модели аллергии 1У типа к гемофильной палочке было установлено, что эффект предшествующего сенсибилизации внутривенного введения ББН находился в прямой зависимости от временного интервала до последующего введения антигенов: ПЧЭТ не развивалась, если ВЕН вводили за 24 и 48 час, но не более 72 час до сенсибилизации.

Следует отметить, что другие индукторы эндогенного альфа/бета-интерферона (дрожжевая дсРНК, гемодез и метронидазол), но не гамма-интерферона (БЦЯ или БЦ2 + туберкулин) оказались способными препятство-

вать выработке лим^окинов-медиаторов ПЧЗТ вплоть до полной супрессии. Ото действие проявлялось и в эфферентном и в афферентном звеньях микробной аллергии 1У типа к гемофильной палочке. Аналогичные результаты наблюдали и при изучении стафилококковой модели ПЧЗТ (О.А.Заворохина, 1990).

При этом установлена общая обратно пропорциональная временная зависимость между степенью супрессии развития микробной ПЧЗТ и периодом после введения индукторов интерферона: при увеличении временного интервала после введения интерфероногенов и последующей сенсибилизации протективное супрессируюцее воздействие интерферона уменьшалось. Установлено, что большая активность интерферона индуцировала более выраженную супрессию аллергии. Эти закономерности были однотипными и для проявления немедленных аллергических реакций. Так, однократная стимуляция выработки эндогенного интерферона способна угнетать выработку и уменьшать активность сывороточной циркуляции аллергических антител различных классов и подклассов (а. 1е&1Ь. 1сЕ) вплоть до полного быстрого (через 2-3 суток), но не очень пролонгированного (в течение последующих 3-6 суток) их исчезновения с последующим постепенно развивающимся восстановлением исходного уровня активности.

В экспериментах была показана возможность многократного курсового введения иццуктсрсв интерферона метронидазола, гемодеза различными путями, что равно эффективно судрессировало сывороточную активность специфических аллергических антител на моделях гемофильной аллергии немедленного и смешанного типов. Было установлено, что альфа/бета-интерферон способен блокировать аллергические реакции I типа посредством снижения рецепторной чувствительность к гистамину гладкой мускулатуры изолированных сегментов кишечника интактных или сенсибилизированных морских свинок, и также препятствовать развитию бронхоспастических реакций в сенсибилизированном организме в ответ на введение разрешающей дозы специфического микробного аллергена, проявление 1Д типа аллергических реакций также значительно супрессировалось после гипосенсибили-зирущего воздействия индукторов альфа/бета-интерферонов. Особо следует отметить, что судрессирующее действие интерферонов на аллергические реакции I, Ш и 1У типов вместе с тем не сопровождалось снижением общей реактивности организма. Считаем, что лечение микробной сенсибилизации индукторами интерферонов является новым и, безусловно, перспективным направлением, которое, очевидно, требует специальных расширенных клинических исследований.

Совершенствование индикации гемофильной инфекции и изучение её региональной распространенности

При световой и электронной микроскопии наблюдали выраженный плео-морфизм капсулироианных и бескапсульных микробов: встречали преимущес-ственно кокковидные (0,5-0,6 х 0,5-0,6 мкм), кокко-бациллярные (0,751,08 х 1,9-4,8 мкм) и палочковидные (0,5-0,9 х 3,3-5,1 мкм) формы, а также редкие длинные нити (0,5-0,7 х 7,0-8,5 мкм) и единичные булавовидные клетки ("рукоятка" длиной 2,1-3,2 мкм, шириной 0,5-0,9 и "ово-ид" 1,1-1,3 х 1,7-1,8 мкм).

У бескапсульных кокко-бациллярных и палочковидных бактерий отчетливо были видны перитрихиальные фимбрии (или пили) диаметром 4,7-6,0 нм, длиной II7-I52, в отдельных случаях до 218 нм.

При пассивировании лиофильно высушенных эталонных микробов из ампул в первых генерациях наблюдали нестабильные формы гетероморфного роста, похожие на описанные у гемофилов l-формы (Г.Я.Каган и соавт., 1966). В наших наблюдениях они имели полиморфный вид амебо-груневидных выпячиваний.

Описанные результаты исследований эталонных штаммов гемофильной палочки были использованы в процессе совершенствования технологического процесса культивирования бактерий и накопления большого количества однородной микробной массы, полноценной в антигенном составе и пригодной для последующего приготовления специфических препаратов-аллергенов, антигенных комплексов, вакцин, эритроцитарных диагностикумов, гипериммунных сывороток. Эти наблюдения при использовании разработанной нами МДСО-средн и поливалентной иммунной сыворотки к гемофильной палочке в реакции агглютинации на стекле способствовали более совершенной индикации возбудителей-гемофилов при проведении клинических бакисследо-ваний различных материалов от больных детей и взрослых.

В г.Чимкенте было проведено 2042 исследования материалов от взрослых и детей в возрасте от нескольких месяцев до 64 лет. Объектами исследований были транссудаты и мазки из зева (303), носа (286), уха (23), а также мокрота (828), моча (382) и секрет предстательной железы (110) от больных с острыми или хроническими, локализованными или системными заболеваниями.

Из 1451 бактериологически положительного анализа Н1 были выделены в 103 случаях, что составляло в среднем 7,1%. Среди нозологических форм Hl-инфекций преобладали хронические бронхопневмонии, от этих больных было выделено 42 штамма; при острых пневмониях - 25; при ин-

фекционно-аллергической бронхиальной астме - 9; затем в равной степени наблюдали ш.-бронхиты и ревмокардиты - по 4; сепсис - 3; гайморит, пиелонефрит и ОРЗ - по 2; ринит, хроническая ангина, простатит и гнойный отит - по одному больному. При указанных заболеваниях 76 изоля-тов (73,8$) были выделены от взрослых, в том числе 67 (65,1%) - от больных старше 45 лет. От детей выделено 27 штаммов (26,2&), причем из них десять - от детей до 3-летнего возраста.

Можно отметить высокую резистентность выделенных гемофильных шташов к действию оксациллина (93&), олеандомидина (91%), карбеяи-циллина (68&), стрептомицина (60?°), пенициллина (49$). Большинство выделенных штаммов были чувствительны к ампициллину (71», левомице-тину (71%), канамицину (67&), тетрациклину (62%), полимиксину (61%).

В г.Алма-Ате было обследовано 16195 амбулаторных и стационарных больных, госпитализированных в отделениях НШ клинической и экспериментальной хирургии (15241 человек). Республиканской клинической больнице (724 больных), госпитале Инвалидов Отечественной войны (230 больных). Полученные результаты представлены в таблице 4.

Таблица 4

■ Динамика выделения Н.лшаиепгае от 16195 больных, обследованных

в г.Алма-Ате

Результаты исследований 1980 1981 1982 Годы 1983 1984 1985 1986 1987

Количество обследованных больных 438 2544 2166 2189 1845 2213 2248 2552

Выделение щ 5 45 69 . 48 53 271 338 ЗП

Этиологическое значение в % 1.1 1,8 3,2 2,2 2.1 12,2 15,0 12,5 -

Можно отметить, что среди различных нозологических форм заболеваний преобладали больные с бронхо-легочной патологией (ангины гнойно-некротические, фарингиты, острые и хронические бронхиты с обструктив-ным компонентом, пневмонии, абсцессы легких, эмфизема, инфекционно-аллергическая бронхиальная астма), а также абсцессы и нагноившиеся раны.

Результаты определения чувствительности выделенных шташов к антибактериальным препаратам представлены в таблице 5.

Из таблицы 5 очевидно прогрессирующее снижение чувствительности

Таблица 5

Динамика изменения чувствительности (в Я) к антибиотическим дискам 1148 клинических изолятов н.influenzae

Годы исследований

1981 62 74 76 73 70 58 72 45 15 43 40 97 81 н* Н 1987 20 29 32 65 37 22 41 0 0 5 0 28 45 90 80

* Не исследовано.

гемофильной палочки к широко используемым в клиниках антибиотикам, поэтому в основу терапии каждого больного или для санации бактерионосителей должны быть положены конкретные результаты определения эффективности тех или иных антибактериальных препаратов.

При проведении иммунофлюоресцентного и патологоанатомического анализа материалов от умерших больных было выявлено 17 аутопсий с гемофильной инфекцией. Установлены возрастные и.иммуно-морфологические особенности у детей и взрослых. Среди умерших большая часть была представлена детьми (10 человек), взрослых - 7. Возраст детей колебался от 20 дней жизни до 3,5 лет, причем детей да года - 9, в возрасте от 3 мес до I года - 8 человен. Среди взрослых более часто встречались больные, умершие в возрасте 50 лет и старше (4). Во всех случаях секционных наблюдений отмечено развитие пневмонии различной степени тя-жеоти. У детей наблюдали сочетание пневмонии, носящей характер очаго-во-сливной, серозно-гнойяой о ДВС-синдромом я нейротоксикозом. У взрослых гемофильная инфекция была представлена серозно-гнойяой пневмонией, гнойным плевритом, абсцессом между перикардом и левым легким, делим-фатизацией, лимфолиэисои У двух детей и одного взрослого отмечали развитие гнойного менингознцефалита. В большинстве случаев смерть наступила в результате раэвития острой сердечно-легочной недостаточности.

Таким образом, патоморфологичеокие изменения, выявленные в экспериментах на животных при моделировании гемофильной инфекции, во мно-

гом наши свое подтварвдение при исследовании клинического материала.

ВЫВОДЫ

1. В патогенезе гемофильной инфекции и аллергии установлено:

1.1. После инграяаэального инфицирования морских свинок с последующим охлаждением организма капсулированныа формы н.influenzee способны вызывать в легких гнойно-геморрагическую сегментарную бронхопневмонию, а бескапсульныа - серозно-десквамативдую мелкоочаговую и ин-терстициальную пневмонии. Обе Форш микробов при этом способны вызывать некрозы тканей и абсцодирование лимфоузлов.

1.2. При исключении фактора охлаждения животных после интраназаль-ного введения капсулированных и беокапсульных микробов развивается продуктивная воспалительная тканевая реакция в легких по типу пневмо-нита. Установлено, что возбудители способны персиотироватд, внутрикле-точно в интерстициальных и альвеолярных макрофагах в течение года (срои наблюдений), являясь источником-резервуаром инфекции и сенсибилизации.

1.3. Доказано, что уже через месяц после локального инфицирования к воспалительным процессам присоединяются аллергические реакции и иммунологическое воспаление.

1.4. Доказана выраженная способность н.influenzae к быстрому индуцированию системной аллергической перестройки I, ill, 1У типов аллергических реакций, их сочетаний и разновидностей.

2. Впервые установлено, что контакт с растворимыми антигенами н.influenzae может оказывать потенцирующее действие на чувствительность к гистамину тканей гладкой мускулатуры интактных животных, а также сенсибилизированного организма в целом.

3. Разработана биотехнология производства первого отечественного диагностического и лечебного аллергена гек,офильной палочки, оформлена и утверждена нормативно-техническая документация на промышленный выпуск этого препарата.

4. В эксперименте показана высокая эффективность промышленного аллергена■для проведения специфической гипосенсибилизации интрана-зальным а ингаляционным методами. Установлено, что сочетание аллергена с поверхностно активными веществами, глицерином, лиелином, полиэлектролитом na-5 не изменяет вммуногенности препарата и способствует повышению эффективности иммунотерапии при аллергии к н.influenzae.

5. Установлены аллергодиагностические характеристики фракциони-

рованних антигенов аллергена гемофильной палочки: антигенные груши o молекулярной массой от 80 до 660 килодальгон проявляли диагностическую активность в реакциях 1У типа, от 42 до 660 килодальтон - в диагностике реакций I типа, что позволяет рекомендовать дифференцированное использование фракционированных микробных аллергенов в диагностике аллергии.

6. В эксперименте впервые показана возможность эффективного использования некоторых индукторов эндогенного альфа/бета и гамма-ин-терферонов для проведения неспецифической иммунокоррекции и профилактики микробной аллергии замедленного типа, а также для снижения проявлений немедленной и смешанной повышенной чувствительности к бактериальным аллергенам.

7. Получен очищенный белковолипополисахаридный антиген н.influenzae, перспективный для специфической вакщонной профилактики гемофильг-ных заболеваний. Установлены закономерности проявления иммуностимулирующих и сенсибилизирующих свойств нативного или модифицированного использования препарата в зависимости от дозы и путей введения в организм. При сочетании антигена с неприродным синтетическим полиэлектролитом НА-5 возможно эффективное ускорение и пролонгирование специфического антитального ответа без стимуляции аллергических реакций.

8. Разработаны стабильные антигенные эритропвтарные диагиостику-мы для определения активности сывороточных антител к гемофильной палочке в реакции пассивной ге.магглотинации.

9. Проанализирована популпционная высеваемость гемофильной палочки от 18237 больных детей и взрослых: установлено динамичное возрастание роли гемофилов при неспецифической легочной патологии; на секционном материале выявлены морфологические маркеры гемофильных заболеваний.

10. Впервые в республике изучен спектр антибиотикочувствитель-ности 1251 выделенного штамма гемофильной палочки и установлено, что для санации большинства таких больных или носителей, а также для профилактики микробных аллергозов этой этиологии могут быть эффективны клафоран, кефзол, линксмицин, левогацетин, ампициллин.

ВНЕДРЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ В ПРАКТИКУ

I. Оформлена и утверждена нормативно-техническая документация на промышленное производство аллергена гемофильной палочки, предназначенного для клинического диагностического (in vitro и in vivo ) и лечеб-

ного применения. Документация принята предприятием по производству бактериальных аллергенов при Казанском НИИ эпидемиологии и микробиологии Минздрава РСФСР.

2. Разработана элективная питательная МДСО-среда для эффективного культивирования гемофилов и других прихотливых к искусственному культивированию бактерий (объект изобретения - вещество. А.с. 1369277 от 22.09.87 г.). Среда производится в НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Минздрава КазССР и высылается по заявкам в республиканские и другие бактериологические лаборатории,

■ 3. Изданы и распространены листовки "Темофильная инфекция", 3 методические рекомендации для улучшения лабораторной, клинической или патоморфологической диагностики и лечения гемофильных заболеваний.

4. По результатам исследования написана монография "Темофильная палочка - возбудитель инфекций и аллергии" в соавт. с Г.С.Суходоевой, где представлены современные материалы по диагностике, лечению и профилактике гемофильных инфекционных и аллергических заболеваний.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Добрица В.П., Перехода В.А. Значение Haemophilus influenzae в акушерской и гинекологической практике. - М., 1984. - 4 с. - Рук. деп. во ВНИИМИ 22.03.84, Д-7618. - MPS. - 1984. - & 12. - 2134.

2. Суходоева Г.С., Добрица В.П., Гёнци Ж., Ващенко Т.П. НееиорЫ-lus influenzae -инфекция // Методические рекомендации Минздрава КазССР. - Алма-Ата, 1984. - 15 с.

3. Добрица В.П., Беклемишев Н.Д., Суходоева Г.С. Диагностика аллергии к Haemophilus influenzae в клинике и эксперименте // Симпозиум по аллергологии и клинической иммунологии социалистических стран: Мат. - Варна, Болгария, 1985. - С. 49.

4. Пошевина Т.О., Белоусова А.В., Добрица В.п., Беклемишев Н.Д., Суходоева Г.С. Бактериологический Haemophilus influenzae-мониторинг у больных города Чимкента // Материалы 1У Республиканского съезда эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов Казахстана. - Чимкент, 1985. - Т.З. - С. 91-92.

5. Добрица В.П., Суходоева Г.С., Беклемишев Н.Д, Изучение сенсибилизирующих свойств растворимых антигенов Haemophilus influenzae« // КМЭИ. - 1986. - * 6. - С. 59-62.

6. Добрица В.П., Бульвахтер Я.Л., Лисицын Ю.В., Рыс-Улы М.Р. Инт-раназальная десенсибилизация глицеринизированных бактериальными ал-

лергенами в эксперименте // У Межреспубликанская конференция и материалы Научного Совета по иммунологии АМН СССР. - Алма-Ата, 1986. -С. 17-19.

7. Добрица В.П., Ермекова Д.М., Заворохина О.А., Аспетов Р.Д. Имму-номодулирупцее действие эндогенного вирусиндуцированного интерферона на Haemophilus Influenzae-сенсибилизацию у морских свинок //. Там же. -С. 19-20.

8. Царевский Л.П., Добрица В.Д., Рыс-Улы М.Р., Суходоева Г.С., Умбетбаева Э.Н., Бабин К.С. Морфология аллергии к гемофилам // Аллергические заболевания: Сб.научн.тр. АИУВ МЗ СССР. - Алма-Ата, 1987, -С. 86-90.

9. Рыс-Улы М.Р., Умбетбаева ЭЛ., Добрица В.П., Царевский Л.П., Олейник Л.С., Левинский Я.А. Кардиореспираторная патология при Haemophilus influenzae-инфекции // Гам же. - С. II2-II5.

10. Меньшиков Л.Ф., Добрица В.Ц., Суходоева Г.С., Осьмуха Н.И. Питательная МДСО-среда для культивирования Haemophilus influenzae //

А.о. 1369277 от 22.09.87 г.

11. Добрица В.П., Суходоева Г.С., Никитин С.А. Аллергенные свойства фракционированных антигенов Haemophilus influenzae // Основные проблемы аллергологии: Сб.тр. НИИ ЭМИБ МЗ КазССР. - Алма-Ата, 1987. -Т.ЗЗ. - С. II7-I22.

12. Добрица В.П., Суходоева Г.С., Каскеев К.М., Рыс-Улы М.Р., Ясутис И.М., Нургалиев Н.Н. Электронная микроскопия Haemophilus influenzae

// МЭИ. - 1987. - Л 7. - С. 14-16.

13. Пак Н.В., Заворохина О.А., Добрица В.П., Аспетов Р.Д. Изучение интерфероногенных и иммунооупрессорных свойств метронидазола // Изв. АН КазССР. Сер.биол. - 1987. - * 6. - С. 51-65.

14. Добрица В.П., Суходоева Г.С. Клиническое значение и бактериологическая диагностика гемофильной палочки Афанасьева-Лфейффера // Здравоохранение Казахстана. - 1987. - № II. - С. 55-67.

15. Заворохина О.А., Ермекова Д.М., Аспетов Р.Д., Добрица В.П., Суходоева Г.С., Бекенова Н.А. Изучение влияния вирусиндуцированного эндогенного интерферона на чувствительность гладкой мускулатуры к гистамину // Вирусы и вирусные инфекции: Сб.научн.тр. НИИ ЭМИБ МЗ КазССР. - Алма-Ата, 1988. - Т.35. - С. 16-19,

16. Добрица В.П., Тарасов МЛ. Гуморальный иммунный ответ на на-тивную и модифицированную вакцины гемофильной палочки // Вопросы клинической иммунологии, и иммунологической диагностики: Сб.научн.тр. НИИ

ЭШБ ЫЗ КазССР. - Алма-Ата, IS88. - С. 40-44.

17. Суходоева Г.С., Буль вахтер Я.Л., Нугманова Ж.С., Добрица В.П. К вопросу об имыунокорригирувдей терапии микробной аллергии // Актуальные вопросы иммунотерапии: Тез.докл. 17 Респ.конф. - Ворошиловград, 1988.

18. Добрица В.П., Суходовва Г.С., Беклемишев Н.Д., Кузьмин Ю.А., Молотилов Б.А., Исхаиова С.Х., Сайфутданов Ф.Г. Клинико-эксперимен-тальные исследования универсального препарата для диагностики и лечения Haemophilus influentее-сенсибилизации И индикации гомологичной инфекции // Материалы Европейского Конгресса по аллергологии и клинической иммунологии социалистических стран. - Варшава-Яхранка. Польша,

1988. - С. ТО.

19. Шамсутдинова Г.С., Суходоева Г.С., Беклемишев Н.Д., Артамонов А.Ф., Добрица В.П., Никонов Г.К. Изучение возможности экстрагирования аллергенов с помощью неионного детергента МЭСК // Изв. АН КазССР. Сер. биол. - 1988. -КЗ,- С. 64-69.

20. Добрица В.П., Суходовва Г.С., Заворохина О.А. Специфическая анафилаксия с повышением чувствительности к гистамину гладкомышечных органов при аллергии к Haemophilus influenzae // Аллергология и клиническая иммунология: Сб.научн.тр. НИИ ЭШБ ЫЗ КазССР. - Алма-Ата,

1989. - С. 65-68.

21. Царевский Л.П., Кисельгоф И.Ю., Добрица В.П., Головина А.К. Иммуноморфология и вопросы патогенеза Haemophilus influenzae-инфекции // Проблемы инфекционных болезней. - Алма-Ата, 1989. - С. 8-13.

22. Добрица В.П., Суходоева Г.С. Специфическая гипосенсибилизацня модифицированными аллергенами микробной аллергии смешанного типа // Молекулярные и клеточные аспекты клинической иммунологии: Сб.научн.тр. П ЮЛГШ им. Н.И.Пирогова МЗ СССР. - М., 1989. - С. 226-229.

23. Аминова Г.П., Карабаш Т.И., Суходоева Г.С,, Добрица В.П. Нееаиъ-philus influenzae-скрининг у больных города Алма-Аты в I980-I987 годах // ХУП съезд Всесоюзного общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им. И.И.Мечникова МЗ СССР и АМН СССР: Тез.докл. - Ы., 1989. - T.I. - С. 155-156.

24. Ермакова Д.М., Заворохина О.А., Добрица В.П. Иммуномодулирую-щее действие индукторов альфа- и гамма-интерферонов пгч'аллергии немедленного и замедленного типов // Иммунный гомеостаз в норме и патологии. - Фрунзе, 1989. - С. 31-33.

25. Царевский Л.П., Кисельгоф И.Ю., Добрица В.П,, Патоморфология и

диагностика гемофильной инфекции // Методические рекомендации АП1УВ МЗ СССР. - Алма-Ата, 1989. - 19 с.

26. Суходоева Г.С., Беклемишев Н.Д., Добрица В.П., Бульвахтер Я.Л., Артамонов А.Ф. Аллерго- и иммуномодулирувдое действие некоторых химических соединений // I Всесоюзный съезд иммунологов: Тез.докл. - М., 1989. - T.I. - С. 378.

27. Заворохина O.A., Аспетов Р.Д., Добрица В.П., Бостанджян М.Г., Иржанов С.Д. Влияние индукторов альфа- и гамма-интерферонов на реакции повышенной чувствительности замедленного типа в эксперименте // Здравоохранение ТССР. - 1989. - Ä 6. - С. 29-31.

28. Суходоева Г.С., Добрица В.П.; Заворохина O.A. Автоматизированный учет иммуно-аллергических реакций при микробной сенсибилизации // Измерения в медицине и их метрологическое обеспечение: Мат.IX Всесоюз. конф. ГК СССР по стандартам, ВНИИ ОФИ, МЗ СССР. -М.. 1989.

29. Добрица В.П., Кисеяьгоф И.Ю., Суходоева Г.С., Хмельницкий O.K., Царевский Л.П., Хавинсон В.Х. Изучение эффективности использования иммуномодуляторов при специфической гкпосенсибилизации микробной аллергии // Иммунные дисфункции: Сб.яаучн.тр. АГИУВ МЗ СССР. - Алма— Ата, 1990. - С. 11-20.

30. Зумеров Е.Л., Умбетбаев Э.Н., Добрица В.П. Морфогенез процесса репарации кардиомиоцитов при аллергии к гемофялам // Там же. - С. 139141.

31. Добрица В.П., Аспетов Р.Д., Заворохина O.A., Суходоева Г.С. Использование индукторов эндогенных интерферонов для коррекции микробной аллергии // Сборник трудов Киевского НИИ ШБ им. Л.В.Громашевско-го МЗ УССР и НИИ ЭМ им. Н.Ф.Гамалеи АШ СССР. - М., 1990, - С. 32-33.

32. Добрица В.П., Суходоева Г.С, Бактериологическая и серологическая индикация гемофилов // Методические рекомендации МЗ КазССР. - Ал-гла-Ата, 1990. - 18 о.

33. Добрица В.П., Суходоева Г.С., Лисицын Ю.В., Останова Э.Н. Специфическая гипосенсибшшзация микробной аллергии с использованием синтетического неприродного полиэлектролита // МЭИ. - 1990. - Х II. -

С. 79-вЗ.

34. Суходоева Г.С., Добрица В.П. Гемофильная палочка - возбудитель инфекций и аллергии / Под ред. акад. АН КазССР Н.Д.Беклемишева. - Алма-Ата: Наука, 1990. - 168 о.

35. Мурзатаева Р.Г., Аспетов Р.Д., Добрица В.П., Ищанова P.I. Влияние бруцеллезной лечебной вакцины на клеточно опосредованный иммунитет // Актуальные вопросы клинической иммунологии и региональной аллер-

гологии: Сб.научн.тр. филиала Ин-та иммунологии МЗ СССР. - Ташкент-Самарканд, 1991. - С. 271-272.

36. Добрица В.П., Суходоева Г.С., Беклемишев Н.Д., Царевский Л.П., Кисельгоф И.Ю., Исхакова СД., Сайфутдинов Ф.Г. Современные подходы к диагностике и лечению легочной гемофильной инфекции и аллергии // 2 Всесоюзный конгресо по болезням органов дыхания: Мат. - Л.-Челябинск, 1991.

37. Кисельгоф И.Ю., Добрипа В.П., Головина А.К., Суходоева Г.С. Возрастные и морфологические особенности гемофильной инфекция // I Республиканский съезд иммунологов и аллергологов ТадССР: Тез.док. -Душанбе, 1991. - С. 108-109.

38. Добрица В.П., Суходоева Г.С., Беклемишев Н.Д., Царевский Л.П., Кисельгоф И.Ю., Головина А.К. Изучение поствакцинальной аллергической патологии на модели Haemophilus unfluenzaa // Поствакцинальные осложнений: Патогенез, профилактика, лечение: Мат.Всесоюзн.конф. -Л., 1991.

39. Кисельгоф И.Ю., Добрипа В.П., Суходоева Г.С., Царевский Л.П. Патогенез гемофильной инфекции и сенсибилизации // Аллергические заболевания у детей? Мат.Всесоюзн.съезда. - М.-Махачкала, 1991.

40. Суходоева Г.С., Беклемишев Н.Д.. Шамсутдинова Г.С., Андреева H.A., Добрица В.П., Оопанова Э.Н., Лукпанова Ш.З. К вопросу об использовании гормонов тицуса в качестве иымуномодуляторов в вакцинопрофи-лактике // Поствакцинальные осложнения: Патогенез, профилактика, лечение: Мат.Всесоюзн.конф. - Л., 1991.

41. Суходоева Г.С., Шамсутдинова Г.С., Добрица В.П,, Оспанова Э.Н., Лукпанова Ш.З. Влияние тималина на формирование сенсибилизации к растворимым микробным антигенам и фенотипический состав субпопуляций лимфоцитов в органах иммунитета // ЖЭИ. - 1991.