Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Взаимоотношения процессов окисления и ацетилирования лекарственных веществ у животных с различной устойчивостью к гипоксии

Р Г Б ОД 1 о АПР 1995

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ , И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ НОВОСИБИРСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

НЛ ПРАВАХ РУКОПИСИ

КОЛПАКОВ МИХАИЛ АРКАДЬЕВИЧ

ВЗАИМООТНОШЕНИЯ ПРОЦЕССОВ ОКИСЛЕНИЯ И АЦЕТИЛИРОВАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ У ЖИВОТНЫХ С РАЗЛИЧНОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ к гипоксии

14.00.16 - ПАТОЛОГИЧЕСКАЯ ФИЗИОЛОГИЯ 14.00.25 -ФАРМАКОЛОГИЯ

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских нате

Новосибирск — 1995'

Работа выполнена в Новосибирском Медицинском Институте, Институте клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН.

Научила руководители:

доктор медицинских наук, профессор Грек О.Р. доктор медицинских наук, профессор Шарапов В.И.

Офщпалыщэ оппонента:

доктор медицинских наук, профессор Куликов В.Ю. кандидат медицинских наук, доцент Рыбакова Т.А.

Ведущая органкзацззя - Алтайский медицинский университет

Задита состоится ¿"¿-¿¿/и?- 1995 г. в часо

на заседании диссертационного совета К 084.52.03 при Новсси бирском медицинском институте (830091, г.Новосибирск, Красны проспект, д. 52).

С диссертацией мояяо ознакомиться а библиотеке Новом бирского медицинского института.

Автореферат разослан " /р" г.

Ученый секретарь диссертационного совета, д.м.н., профессор

Шарапов В.

Актуальность проблемы. Гиг.окскческие состояния, возникаю-таэ в результате ограшгчения поступления кислорода е клетку I—в связи с потерей способности утилизировать его в реакциях биологического смоления, играет важную роль г- ~.и?недеятель-нссти организма. Особенностью гипоксических состояний пуляется то. что они сопутствуют любой патологии - органов. ин-

фекционным заболеваниям, травмам, и'окам различной этиологии и другим состояниям, поэтому справедливо считается, что гипоксия является универсальна поврегсгипцм фактором (Лукьянова Л.Д. с соавт., 1932; Нэповский В.А., 1S36; Сарапов В.И., 1993; Но-chachka P.W. et al., 1994). На уровне организма проявления гипоксии Еключавт реакции дыхательной, сердечно-сосудистой, эндокринной, нервной систем. 3 результате детгглпта кислорода наругается окисление субстратов. ресинтез макрозргов, ионный го-месстаз, что приводит к нарушению функции ферментов, клеточных мембран и усиливает расстройства гемодинамики и микропиркуля-ции (Кулинский В.И., Ольховский В.А., 1989; Че;:мгн И.С., 1939; Jones D.P. et al., 1GS9; Dransfleld D.I., Aprlllo J.R., 1994; Weiss J.N., Shieh H.C., 1994). Решение эти;- проблем в конечном счете связано с устранением гипоксического воздействия или со снижением чувствительности организма к этому состоянию, позтс-

актуальней является проблема индивидуальной устойчивости к гипсксическсму фактору.

Анализ литература псказивает, что устойчивость организма к неблагоприятным воздействиям (в том числе и гипоксии) определяется гепо- и фекотишгческиу.и особенностями организма (Еере-зоескип В. А., 19?3; Власова И.Г., Лукьянова Л. Д., 1990; Реггзтог. А. et al., 1933). Известно, что цветные, обладает» высокой естественней резистентностью к гипоксии, обладает и бальезй лабильностью суклинатдегидрсгенази, пнтснсомокспдвоь!. АТ"аз и других рер-мгнтоЕ. Это позволяет t.vzf.?m своевременно прн действии гипоксии переходить на качественно иней уровень гомеостаза при низкой активности метаболизма, что обусловливает развитие толерантности к недостатку кислорода (Берегогский 3.А., 1973; Лукьянова Л.Д., 1939; Hochaohka Р.У., 19S5).

В сеязи с этим представляет интерес изучение состояния энергоемких кислородгависимъ.'х процессов в группа?: хивсткых с различной устойчивостью к гипоксии. Мнтохондриалькые кчелород-поглодаюлке систе.мы жестких с различной резистентностью к гипоксии ранее бы..и измены (Корнеев A.A., 1935; Чернобаева Г.Н., '19В5; Лукьянова Л. Д., 1989; Велоусова В.В. с соавт., 1932), а имеющиеся данные о различиях в активности ферментных систем

лекарственного метаболизма имеют противоречивый характер и касаются только I фазы бистрансформации ксенобиотиков - окисления (Березовский В.А., 1978; Горчакова Л.А., 1987; Дудченко

A.M. и др., 1983; Шарапов В.И., Грек O.P., 1990; Белоусова З.В. с соавт., 1391). Это выдвигает в качестве актуального вопрос о взаимосвязи активности биотрансформации лекарственных веществ с устойчивостью организма к гипоксии.

Данная работа является продолжением'многолетних исследований, проводимых на кафедре фармакологии Новосибирского медицинского института и в лаборатории фармаколога: Института клинической и экспериментальной лимфслогии СО РАМН по проблеме изменения активности кислородпотребляжщих процессов метаболизма и их фармакологической коррекции при гипсксических состояниях (Грек O.P., 1982; Грек O.P., 1986; Грек O.P., Шарапов

B.И., 1937; Шарапов В.И., Грек O.P., 1990; Шарапов В.И.,1993).

• Диссертация выполнена в рамках договора с Министерством здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации в соответствии с планом научно-исследовательской работы Новосибирского медицинского института по теме "Разработать и внедрить новые методы прогнозирования, прсфилак~".ки и лечения на основе фундаментальных исследований сбцих патогенетических механизмов хронических заболевании - гипоксии, ишемии, воспаления" в рамках государственной проблемы 10.07 - "Фармакологическая коррекция гипоксических состояний").

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Изучить окисление и ацетилирование лекарственных веществ у животных с различной устойчивостью к гипоксии и еыявить закономерности их изменений в восстановительной периоде после гипоксических воздействий.

: ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Изучить скорость метаболнзм'а ксенобиотиков - антипирина, диазепама, анилина, амидопирина - маркеров активности ферментов I фазы биотрансформащш у животных с различней устойчивостью к гипоксии.

2. Изучить фармакокикетику изониазида - тест-препарата активности ацетилирования (II фазы биотрансформации) у лшветныз с различной резистентностью к гипоксии.

3. Выяснить возможные биохимические оснозы функционирова-нил системы биотрансформации в субполуляцкях высоко- и низкоустойчивых к гипоксии животных.

4. Изучить особенности изменений метаболизма вышеперечисленных лекарственных веществ под действием острой гкпобаои-

ческой гипоксии в зависимости от индивидуальной чувствительности организма к гипоксии.

, 5. Выявить закономерности реагирования ферментных систем бнотрансформации при острой ишемии миокарда у кквстных с различной резистентностью к гипоксии.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

- Проведено комплексное изучение активности ферментных систем бнотрансформации лекарственных веществ у .тавотных с различней устойчивостью к гипоксии.

- Впервые изучено состояние процессов ацетилирования в печени у животных с различной резистентностью к гипоксии.

- Впервые показаны реципрокные взаимоотношения процессов окисления и ацетилирования, сопряженные с индивидуальной чувствительностью к гипоксии.

- Показано, что в формировании ответной реакции на гипокси-ческие воздействия (острую гипобаркческую гипоксия, циркуля-торнуа гипоксга - острый инфаркт миокарда) принимают участие ферментные системы бнотрансформации.

, - Выявлена зависимость изменений активности лекарственного метаболизма при гипоксических состояниях от индивидуальной чувствительности к гипоксии.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

1. Разработано положение о сопряженности процессов метаболизма лекарственных веществ с устойчивостью организма к гипоксии.

2. Полученные данные развивают и дополняют теорию метаболической адаптации на уровне ферментных систем Окотргксформз-цки ксенобиотикоз.

3. Полученные данные позволяют рассматрив!ть гипоксию как фактор, вносящий существенные изменения в фармакоккнетпческие

• и фармакодиномические параметры лекарственных препаратов, ме-таболизггрутзлкхся в печени. Это свидетельствует о необходимости учета гипоксического фактора при проведении рациональной фармакотерапии заболеваний, основным звенс?<? патогенеза которых является гипоксия.

ПОЛОЖЕНИЯ. ВЫНОСЮДЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Функциональная активность процессов окисления и ацетилирования ксенобиотиков находится в обратной зависимости к сопряжена с устойчивостью организма к гипоксии.

2. Различные гипоксические воздействия вызывают разнонаправленные изменения активности ферментных систем биотрансформации лекарственных веществ в зависимости от устойчивости ор7

3

ганизма к гипоксии.

3. Снижение активности метаболизма ксенобиотиков является наиболее рациональным ответом организма на недостаток кислорода Е тканях.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Результаты работы используются в лаборатории фармакологии и клинике (МСЧ N168) Института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, на кафедре фармакологии Новосибирского медицинского института в лекционных курсах. "Об:дая фармакология", "Основы фармакокинетики".

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Материалы диссертации докладывались на 2-й Всесоюзной конференции "Фармакологическая коррекция гипсксических состояний", Гродно, 1991, на 9-м международном симпозиуме "Microsomes and Drug Oxidation", Jerusalem, Israel, 1S32, на республиканском симпозиуме "Ыонооксигеназная система. Теоретические и прикладные аспекты", Ташкент, 1992, на 53-й и 54-й итогозых научных конференциях студентов и молодых ученых, Новосибирск, 1992, 1993, на III World Congress о^ the International Society for Adaptive Medicine, Tokyo, Jcipan, 1993, на международном симпозиуме "Проблемы саногенного и патогенного аффектов экологических воздействий на внутренний среду организма, Чолдон-Ата, 1993, на Новосибирских межвузовских конференциях "Интеллектуальный потенциал Сибири", 1993, 1994, на региональной конференции "Реабилитация больных илемической болезнью сердца, церебральной ишемией и артериальными гипертониями", Томск, 1993, на научной конференции молодых ученых России "Здоровье и болезни человека на рубеже XXI века", посвя-иэнной БОтлетиш академии медицинских наук, Москва, 1994.

Г

; ПУБЛИКАЦИИ.

По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация изложена на 122 страницах машинописного текста. Состоит из ЕЕедения и 4-х глав, включасаих обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов и еыеоды. Список литературы включает 147 работ отечественных и 146 зару-бежых авторов. Диссертация иллюстрирована 24 таблицами и 3 рисунками.

L'ATZPKAH К НЕГОДУ ИССЛЕДОВАНИЯ Лабораторные гатзотные Работа выполнена на 450 крысах-самцах линия Еистар касссн около 200 г. в зесенне-осеннии период. Крысы были получены из нкваркев гг. Новосибирск и Toücica. Животные содержались в тсловиях естественного освецения па стандартном рационе. Перед проведением экспериментов .гзеотных адаптировали i: местным условиям не менее двух недель.

Устойчивость крыс к гипоксии определяли по методу Еере-зоеского В.А. (1978) при подъёме на "высоту" 11 500 м в барокат мере Кравченко со скоростью 50 м/с. Если у крыс на данной высоте судороги и (или) второй атональный вдох появлялись в течение первых трех taniyt, то íocbothíjx относили к группе киз-коустойчнЕых (НУ), если более, чем через 10 минут - к группе Еысокоустойчтых (ЕУ) к гипоксии. Остальные животные были отнесены к группе среднеустойчивых. Дальнейлие исследования проводились к а лпиотны:: не рачее, чем через 2 недели с момента разделения на группы и подтвердив™« своз групповую принадлел-нооть не менее двух раз.

Р;'-г'порт"'дт?тя7^гые моледи -■ -

2йделнроЕачиэ инфаркта мнсг^арда (Данный раздел работы выполнен совместно с В.Г. Худаговым) Острый гс:фар.1:т мио!:ардз (0I2.Í) у !срыс создавали по методу Г. Селье (1950) с доступом к сердцу по Когану А.Х. (1979). Операция проводилась с соблюдением правил асептики и ачтисеп-thí:h под эфирным наркозом. После вскрытия грудкой клетют и перикарда перезязывалась левая нисходяцая коронарная артерия. Грудная клетка ушивалась послойно. Группу сравнения составили ложнооперировачные хивотиые, которым проводилась торакотомия, перикардотомия, но коронарная артерия не перевязкзалась. Контролем служили гатактные хивотнке. Наличие некротических изме-нешй миокарда регистрировали злектрскардиоскога:чес;:и. Исследования проводились на 3-й,7-е,14-е и 21-е сутки острого инфаркта миокарда.

Моделирование острой гипобарическсй гипоксии. Острая гипобарическая гипоксия вызывалась у крыс в барокамере Кравченко ->бьёмом 128 л. Подьём ссуаествл.яли со скоростью 50 м/с без остановок до "высоты" 8 ООО м. На этой "высоте" ки-1 вотные находились 1 час. Исследования проводили непосредственно после спуска, через 24 часа, 1 и 3 суток после воздействия.

5

Изучение количественного содержания и функциональной активности ферментов I фазы биотрансформации лекарственных веществ Оценка функциональной активности монооксигеназной системы печени in vivo.

Функциональную активность монооксйгеназ печени в условиях in vivo оценивали по фармакокинетике антипирина и диазепама, а также содержанию метаболитов антипирина в моче.

1. Антипирин вводили внутрибршинно в дозе 18 мг/ кг массы животного ( Викторов А.П., Рыбак АЛ., 1990). Кровь брали из хвостовой сены через 1,5; 2; 2,5 и 3 часа. Определение концентрации антипирина в плазме проводили методом сбраценно-фа-зовсй высокоэффективной жидкостной хроматографии (сф-ЕЕ"С0 с ультрафиолетовой детекцией на хроматографе "Мнлихрам-1А" согласно описакиз Рахманова И. А. с ссавт. (1939).

2. Дяазепам (реланиум) Евод$ии внутрибршзшо в дезе 2D мг на 1 кг массы животного. Кровь брали из хвостовой гоны черос 2, 2,5, 3 ц 3,5 часа. Определение концентрации дкасепама 2 плазме крови прсводкаи методом сф-ЕЗЛХ на хроматографе ".Уиллх-ром-lA" как описано у Яанбуловичз A.A. с coas-. (1936).

Рассчитывались следулг?« $армз.чаюш«т:!чгеккг гарамегра (Соловьев З.К. с ссавт., 1030; Лакин K.M., Кр&эз Ю.Ф., 1931): константа скорости элиминации - Kel, период пелузлтаинацнк -Т1/2, каязпзаяся начальная кэгаэнтрадад - Со, удельной сбь$м распределения препарата - Yd, сбапй клиренс препарата - С1.

3. Дал сцонки акт.гзнсстя цктохрока Р-450 в условиях in vivo использовалось определение метаболитов антипирина в моче крыс. После внутр;:0р;ссинного введения антипирина в дозе 13 мг па 1 кг массы животного в метаболических клетках собиралась 9-ти часовая порция мочи. Определение основных метаболитов антипирина - кораятипирпна, З-гидроксиметилантипирика и 4,-пц;-рсксиантипирина проводилось методом оф-ESSX согласно описания Рахманова И.А. с соавт. (1989). Рассчитывались концентрация метаболита в 1 мл мочи, процентное содержанке метаболитов антипирина от их ебщего количества, принятого за ICO?, и метаболический индекс (Idle I.R., Smith R.L., 1979).

Оценка активности ферментных систем I фазы биотрансформации In vitro.

Активность монооксигеназной системы печени In vitro оценивали по концентрации цитохремов Р-450 и Ь5 з микроссмальнсй фракции печени, а также по скорости микроссмалъного метаболизма амидопирина, анилина и диазепама.

6

¡¿жросомалыгую фракцию печени выделяли дифференциальным центрифугировали;!.! (Арчаков А.И., 1975). Концентрацию цитохро-мов Р-450 и Ь5 определяли по методу, описанному Onura Т., Sato ?.. (1954). Исследования проводили с поморю двухлучевогс спектрофотометра "Hltachi-356" с записью на самописце ÇPD-54 (Япония). Скорость N-деметилированил амидопирина определялась по колотеству образсвавпегося формальдегида (Smuckler Е.А.. et. al., 1957) с помощью цветной реакции по метсду Nash Т. (1953). Скорость р-гидроксил1фова.чия анилина оценивалась по количеству образовавшегося р-аминофзнола (Ir.ai У. et al., 1965). Скорость биотрансформации диазепама оценивали по его убыли из инкубируемой смеси (Garattinl S. et al., 1973). Диа-зепам и его метаболиты з среде инкубации определяли кгтодсм оф-ВЗНХ на приборе "Цилихром-IA" по методу, описанному Оакбуиевтем А. А. с соавт. (1S85) аналогично определенга диазепама в плазме крови.

Изучение саомакокинетики изсниазплз - маркера активности адетилировання (II йззы бпотранеФопмацпи ксенобиотиков) • Изониазид вводили внутрибрялинно в дозе 100 мг/кг. Образцы крови брали из хвостовой вены через 1,5; 2; 2,5 и 3 часа поело введения. Концентрата изониазида в плазме определяли по методу, описанным Морозовым A.S. е соавт. (1991). Оармлкоккяети-ческие параметры изониазнда (Т1/2, Со, Kel, Cl, Vd) рассчнти-вали по принятым формулам (Соловьев В.Н. с ссзвт., 1С30; .lasca K.U.. Крылсз }Э.Ф., 1531).

1г.о:-:центрэ1д:э белка м:п:рсссм определяли по :.:етоду Lowry О.Н. et al. (1251), з качестве стандарта использовали кристаллический бычий сывороточный альбумин.

Экспериментальные данные подвергал:; статистической обработка с вычислением средней арнф:.:ет:г-:еской (И), елкбки средней арифметической (¡tí). Достоверность различий (Р) зкеперпменталь-ных данных рассчитывали с использованием критериев Стьюдентз, Колмогорова и кепараметрического критерия Колмогорова-йгирно-ва. Различия считати значимыми при Р<0',05 (Гублер Е.В. ,1978; Лагаш Г.О., 1930). Данные обрабатывались на микрокалькуляторе "Электрошока КХ-61" с использованием пакета программ, предложенных Ю.И.Ивановым и И.И.Погopeлюком (1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Еиотрансфор. - лкн ксенобиотиков, в частности, фармакологических агентов происходит, в основном, с участием системы оксидаз со смешанной функцией, использующей кислород как

7

субстрат реакций ыикроеомального окисления (Лакин К.У., Крьтов Ю.О., 1981; Juchau M.R.,1990). Поэтому гкпоксичэские состояния оказывает существенное влияние на активность моноокс;:геназ. Из литературных данных не представляется возможным сделать заклхз-чение о закономерностях изменения активности ферментных систем биотраксформацин при гипсксических воздействиях, так как авторы приводят противоречивое результаты (Еугалей E.G. с соазт., 1983; du Scuich P. et al., 1990; Shan X. et a.:., 1992). сто мо:-кко обьяснить различными моделями г ¡токсических воздействий, разной продол:кительнсстьв и интенсивность» гипоксии, а тгге&г неодинаковей индивидуальной чувствительность::: к гипоксии (Ее-резовекпй Б.Д., 1SS5; Лукьянова Л.Д. , 1939; Корнэс-в А. А. , 1991). В литературе -.цлсется противоположное данные о метаболизме ксенобиотиков у организмов с различной устойчивость.-:; к гипоксии, не полена и реакция ферментов I ;i II фаз сиограпс-формапии у животных с различной резистентность» к недостатку кислорода lia гипскспчеекпе воздействия (Горчакова Л. А., 1С37; Дудчекко A.M. с соавт., 1Q33; Параггов В.л., Грек O.P., 1990).

Характеристик.-!. активности процессов окислен: - - /. огетлгпго-

ванил лекарственных негеств у высоко?стсй"-;к!-1х и нилкоус-

тоичивыи к гппсксп'л кпые

Проведенное изучение активное:.! мопсоксигепаз у жгветпы:: о различной устойчивость;-: к гипоксии выявило раслич::л в солер.т.а-нии и Функциональной активности микрсссмальньгх ферментов. Изучение фармакокллетл.:л антипирина у :глвстных с различной резистентностью к гипоксии показало, что элиминация препарата в условиях кормокси:; ежплее происходит у ЕУ г.пвотных, однако У ЕУ крыс больше Vd к, как следствиз, Cl (Табл.2).

Учитывал преоблада-окую рол.^; метаболизма в зл;п.:ина1дп: антипирина (B.arstcv.' L., Sr.all R.E., 1SG0), модно заключить. что НУ ¡¡азотные яеляются быстрыми "мэтаболизерами" препарата; однако это сопря.т.еко с риском токсического действия, вследствие большей концентрации антипирина в крови, меньшего объема распределения и обаэго клиренса. Анализ распределения выборок, крыс с различной резистентностью к гипоксии (Рис.1 А) пстзал бимодальное распределение пепуляции, причем в группе медленных окислителей антипирина сказались ЕУ животные, а в группе быстрых "злиминаторов"- КУ крысы.

Значения фармакскинетическкх параметров дпазелама яэ раза

SD4-

I

25+ i

2 Dt

I

15f 1

10+ I

5 + H

I I

I ! I

I ! !

I I 1

I ! I I I I

i-! !-1 !-!

i I ! ! I I

0,3 1,0 1,2 1,4.

I I ! I ! I

J_I_I_1_I_!_

0,3 0,6 0,9 1,2 Tl/2

Pnc.l. Гистограмма распределения выбор:-::; крыс Впстар по периода:.! полузл:с.:и::ац:п: апгнлиркга (А) и изсниазнда (S). Еор-мальксз распределение отвергается но унтера Г.олмсгсрззз Р(Х) < 0,05. По сои абсцисс - период пслузлнмннзцин препаратов (Т1/2, час), по сои орд;гнат - процент пгизотпых от всей выборки.

1_

личзлг.съ мепду группам!!, вероятно, вследствие большего, по сравнена с антипирином, распределения и депонирования препарата по т::апп;! (Greenblatt D.J. ой al., 19S0), так глк метаболизм дпарс-памз In vitro активнее проходи-л у ЕУ крыс.

При изучении содержания метаболитов антипирина в моче ВУ и 1С крыс обнаружено, что в 1 мл 9-и часовой порции мочи НУ крыс содержится больсе метаболитов антипирина, чем у ЕУ крыс. Процентное содергланпе метаболитов (метаболический профиль) не различается ме.ггду группами, что свидетельствует об участии одних и тех г.е изоформ цитохрома Р-450 у БУ и НУ крыс в метаболизме препарата. Метаболические индексы метаболитов у ЕУ .ти-зстеых превьлпапт соответствуйте показатели у НУ крыс (Табл.1), что свидетельствует о большей скорости микросомаль-нсго метаболизма антипирина в группе НУ кивотных (Idle I.R., Sr.ith R.L. , 1979).

Эксперимент1-.! in vitro подтверждают- больщуи активность окислительных процессов у НУ животных - концентрации цитохро-моз Р-450 и Ь5 в микросомальной фракиии Еыше на 35,3 и 18,22 соответствующих показателей ВУ крыс. В группе НУ животных ско-

9

Таблица 1.

Метаболические индексы метаболитов антипирина у ВУ и НУ животных (М + м, п-В - 10).

i t i Метаболиты | « ЕУ | НУ | Р -!-j-j-

норантипирин | 0,45+0,06 | 0,25+0,05 | <0,05

4-гидроксиАП I 0,19+0,03 I 0,13+0,01 | <0,05

3-гидрокспметилАД | 0,12+0,02 | 0,07+0,01 | <0,05 Примечание. АП - антипирин.

рссть гадроксклироваша анилина, дизгеяама и деметилированкл амидопирина была больпе на 93,9, 66,4 и 56,3% соответствуй;« значении у ЕУ крыс (Табл.5). Сопоставление профилей метаболитов диазепама в микросомах печени указьзает на неравнозначное участи® iraoçopM ?-450b, k, h и p ('Гайбушзвпч A.A. с ссавт., 1900) в fcsxaöüäijsüi* дпазепама у ЗУ к ЕУ кпвотнгк.

Таким образом, нами показано, что крысы, змгвз:? писку;: естественную устойчивость к гипоксии отличатся бельсей активностью I фазы метаболизма лекарственных ве~ост£ ic ерзгвэнил с ЕУ животными; прк атсм отмеча'отся различил в функциенальной активности отдельные из сфер:.; цитохремз Р-450 - IIE1 - субстрат амидопирин (Кесоза И.Г., Цырлов И.Б., 1991). IIE1 субстрат -аншаи (Levin У., 1930), IA2 - антипирин и анилин (Горенкоз ?.В. с соазт., 102-4), a rasas кзеформ, метабохизкрувзк диазе-пам,- у еу жзогсаа их активность достоверно ексэ. зто может быть следствпзм большего содержания и активности у НУ крыс как общего количества цптохремов р-450 к Ь5, так и отдельных пзс-зимов, большей активности НАДН-оксидазных процессов у НУ крыс (Лукьянова Л.Д., 1233), разных Km по кислороду для ферментов ВУ и ВУ животных (Дудчзнко -А.Ы:^ 1983), различий в структуре микрсссмаяьных мембран (Шарапов Е.И. с соавт., 1993).

Ферменты II фазы биотрансфсрмации непосредственно не являются кислородзависим.ыми, так как не используют молз;с/лярньп кислород в катализируемых ими процессах, но требуют наличи: АТФ, синтез которого идет с потреблением 1с:слсро-а, и ксфактс-ров, образование которых также кислородзависпмо (Скулаче1 В.П., 1939). Использование изониазида как тест-препарата активности процессов ацетилирования ксенобиотиков позволило выявить, что скорость элиминации препарата у ЕУ жизотпых в 2, раза больше, чем в НУ группе, в тоже время у ВУ крыс наблкда втея меньшие значения Vd и Cl изониазпда по сравнен™ с КУ жи

10

ватными (Табд.З). Проведенный анализ распределения выборок ЕУ и ЕУ крыс по периоду полузлиминапии изониазида (Рис. 15) показал существование бю.гадальнсго распределения параметра 2 популяции; отмочено, что в группу медленных анэтилятсрсз ггспагззвг КУ :о!вотнне, а к быстрым ацетилатсрам - БУ крысы. Малые ошибки средних величин периода полузл;в,!инации, а та!с:е бимедальпссть распределения свидетельствует о сопряженности скорости аыетл-ллоовапия ксенобиотиков с устойчивостью организма к гипоксии.

Таким образом, изучение активности ферментов мс-табслнз."з ксенобиотиков 1г. vivo и In vitro свидетельствует, что в популяции крыс лия-ли Еизтар наблюдается внутривидовая заслабель-пссть активности данный •¿•¿рмзнтсз. При ото1.; от: ас тс л тазнси-

подсста:;-* кислорода. Днзстны''-, высокой устойчи-

востью к гипоксии, относятся к медленным с:";слител^м и быстры?!

тел;::.::; л :::длен:н!ли вцстилятсрам:: лекарстве:::":: валюта. Данное = , пз-ЕИд;г'С'-:у> является более тля

д- ííc [jj'—""нло \.м. , ^ с q с 'лсл-л'","7

•:.ц-г ::"л.:рс:'лп.!н лекарственный и еле от:: сппсл.на :: у л-:л:л CJ.-zzz-

зсстьэ организма к гипоксии, что псзволл-т по типу мгтабсл::""^ определите чувствительность к пчдостзтку кнслсрола.

Длинние острой гиллбагической гипоксии на метаболизм г каест пенным в е о т з '•* .т.!ест:й"< с различной чтистнит?."!--нсстью к недостатку кислорода

Изучение изменений ^грмакскяпстггкскк параметров антипирина з ответ на острую изобарическую гяпскс;») з зависимости от устойчивости ;тавотпих к недостатку кислорода полагало (Табл.2), что скорость элиминации и С1 препарата у БУ х:шоткых снюхается, но зкачдтвяьяо возрастает Vd (на г?5,7%), что мсжт являться компенсаторным механизмом уменьшения токсичности. Нормализация показателей наблюдается на 3-й сутки после ги-пс?:сичзского воздействия. у еу xhbgthux изменения фармакскине-тических показателей не обнаружено.

11

Таблица 2.

Изменение фзрмакокинетических параметров антипирина у крыс с различной резнстентностЬв к гипоксии в ответ на острую гипобэрическую гипоксию (М + и, п «= б - 10).

Условия опыта ...... Т1/2, Ч Со, мкг/мл 1 | Ус), МЛ/КГ" 1 — С1, мл/ч/кг ■ - Ко 1, 1/ч

ВУ контроль 1,32+0,11 19,1+2,2 1 | 990,1+107,5 628,9+23,2 0,59+0,06

НУ контроль 0,93+0,10* 53,6+10,9* | 337,4+73,1* 247,6+20, 1А 0,7940,08л

ВУ + ОГ 2,81+0,05** 9,7+0,2** 11333,5+38,0** 4.53,5+11, 4*А 0,25+0,02**

НУ + ОГ 0,97+0,07* 40,9+2,4* | 359,2+21,1* 205,0+10,0* 0,73+0,05* ■

Таблица 3.

Изменение фзрмакокинетических параметров изониазида у ВУ и НУ крыс п ответ па оструп гипобарическую гипотсию (М + го, п = 0-10).

Условия опыта Т1/2, Ч 1 ■■ 1 Со, мкг/мл 1........ 1 ........ | Ус1, !лл/:гг 1 01, мл/ч/кг 1 1 I Ко1, 1/4 1

ВУ контроль 0 54+0 04 . | | 691 8+174,4 1 1 | 191,3+48,9- | 238,4+50,0 1 I 1,30+0,08

НУ контроль 1 21+0 05* | 93 9+10,3* 11064,8+155,1*1 588,6+64,1* I 0,58+0,02л

ВУ + ОГ 1 00+0 02** | 117 7+10,6** | 009,6+99,8**| 692,6+64,4** | 0,66+0,01**

НУ + ОГ 1 17+0 05* | 102 6+11,3 | 974,2+65,7 | 570,1+33,1 1 0,59+0,04*

Примечание к таблицам 2 и 3. ОГ - острая гипобаричэская гипоксия. * - достопзрность различий между группами, ** - достоверность различий с контролен (140,05).

Активность мснссксиггкй'г in vitre "изменяется неод-

нозначно у ЗУ и ЕУ крыс при сстрсй гипоксии: в группе ЕУ ветлых с сдое содержание цлтонремев, р- гж:?с:тек "»rcot-'W.'» на и деметиднрсзапие амидопирина не менялись, а у IE7 кг не возрастали (Табл.4).

Таблица Л.

.'l3vie::eHKi активнее?:! мспсекепгеказ печени у *-Г/ н ЕУ крыс г. стает .'.i остр ус гллебарлчзскуо ггпскс;"з •''! * л. п - 10 - 12)

_______i----------!________________1----

! 11-0,10! О.ТЗ'О.СТ ■ -.! .0'■<!

I П :г.п .->'11 п ГТ-1,1 ^ - '--..I 1 yjl

!

лла. -<•-< - пес говернсстъ улгелчлл '/л.лу УУ л -У ксн-:-

Tai-:::-« лерзем, у ливлтных с различие: у лглллнг.елгвл к т".:-лсксли з ралнллн >а лллскс:гоекс'" лесдслетзл:- яр-'л ллллллл

вел еле тепе различил е активнее гл и клслсрсдлулйтвлгельлс':;-: келстллутлвпкх изотерм цлтелерзка F--150 (ыегу—Цг I.E. г!.. 19?0; Ес'попЛгеп j.E. et. ai., 1939), а такке раенкк путях -та-"-Зелллескел адаптации на уровне микрсссмальныл ферментов (Ке-:г.лсг.!:а ?.';]., 1005). Так как функциональная активность мзло-скеигеллз 5 бслькси степени зависит от "липиднего" фактора (Ллхсвил З.В., Цырлоз И.В., 1978), то едней из причин изменения активности монссксигеназ при гипоксии у ;:.;шотннх с различней чувствительностью к гипоксии является перестрелка ляписного состава мпнрссемзльных мембран (Еарапсв В.М., 1993).

Изучение динамики фармакскинетических пара?,ветров изониази-

13

да б постгипоксичееком периоде покаеало (Табл.3), что у НУ крыс ки один из изучаемых показателей не изменился; у ВУ ки-ботных элиминация препарата замедлялась, но значительно увеличивался Vd и Ci, так что значения фарыакокинетических параметров изониазида у ВУ тавотных приближались к таковым у НУ крыс.

Таким образом, на примере реакций окисления и ацетилирова-ни.~ лекарственных веществ показано, что ферментные системы метаболизма ксенобистикоз изменяют свою активность при гипобарп-ческсй гипоксии в зависимости от исходной устойчивости к недостать кислорода - ВУ киъотные замедляют метаболизм, одновременно с этим происходит увеличение обьемов распределения препаратов, что модет препятстзоЕать развитие токсических аффектов в условиях сниженной активности биотрансформзции; у НУ животных активность процессов метаболизма ксенобиотиков либо не изменяется, либо даг.е ускоряется. У ВУ гивотных в условиях гипоксии реализуется стратегия минимизации метаболизма и' стабилизации мембрал (Хочачка П., Сомеро Дк., 1933), что способствует рациональному использованию ¡желореда в условиях его дефицита; у НУ крыс наблюдается перестройка ферментоз метаболизма ксенобиотиков, направленная на поддер-глние исходного уровня и проявлянидаяся увеличением активности отдельных изо-фэрк'. и увеличением ненасьщенности липидного компонента (Шарапов З.И. с соавт., 1993), что в условиях гипоксии является нецелесообразным, так как приводит к повышенна потребления кислорода и увеличивает позрегдаемость мембран в реакциях ли-твдиой пероксидации.

Состояние процессов биогрансформздии лекарственных веп:еств

у животных с различной устойчивостью к гипоксии в динамике острого коронашокклюзионного инфаркта миокарда

Проведенное исследование фармакокинетики антипирина в динамике ОИМ ползало отсутствие изменения параметров у НУ крыс, как лежнооперировакных, так и б группе с инфарктом миокарда. Изменения у ВУ кизотных характеризовались продолжительным замедлением элиминации и уменьшением клиренса препарата. Динамика фармакокинетических показателей диазепама у ВУ крыс на 7-е сутки инфаркта свидетельствовали о замедлении элиминации и увеличении обьема распределения, в то время как у НУ крыс наблюдалось уменьшение распределения препарата по тканям на фоне неизмененной скорости элиминации; к 14-м суткам ОИМ у ВУ крыс нормализовалась элиминация диазепама, в обеих группах уменыпа-

14

лись объем распределения и клиренс.

3 Ессстановительнсм периоде инфаркта миокарда у ЕУ и Г!У крыс наблюдаются неоднозначные изменения фармакскннетичеек:1х параметров изониазида. Изменения показателей у НУ .тавотных отражали гемодинамические нарушения - снижение объемного крсзо-тска вследствие уменьшения сердечного выброса (Елапыга-01екз1ак I., 1392) в остром периоде СИМ. В группе ЕУ животных на протяжении 2-х недель отмечалось замедление злимннагнп: изониазида и параллельно с этим увеличение и С1.

Неодинаковая степень реагирования мснссксигеназ на з"иг:г,'-лятсрнуя гипскс!-зз выявлена при изучении количественного содержания метаболитов злтзстнрика з 9-и чассззй пепсин мечи НУ л НУ жилетных в динамике СП!. На 7-е сут:сн наблюдения з ?У группе обнаружено белее глубокое замедление метаболизма, по сравнена с К7 животными. Однако на 14-е сутки в группе НУ животных ко-

~ п п-, --------, —--. д д.,--, ~ ~ - с

"п у -_-у то-а,"с,г>Ь ст,'*3"'ч"г'*-л<, Г-Т7е т^ЛЬО^"5 ~~

зало о зеестазззле::;:;: метаболической функции'п ече-ни : НУ п-

чости вяепече-нечней элиминации СЛякнн К.П., Лпглеа Ю.'"1. . лслздсв Л. Н. , Л:*СЗТпз Н. П. , '■"•■25^ , хс"1'7 и'^'-—ее'.'ЗЧе

Скорость метаболизма анилина, амилепиг:::и еназ-ез-.'а :п

'п з з—! е^^кн с*1"1зз11 °" с'■ --^-т--,:.;———■>.-- —— Р-450 и Ь5 (Табл. 5). У КУ животных скорость тазслизма :-:э изменялась, не содержание цитсхромов ползло и еставз-тссь оннж-::--"гч г* о-1—м чт^ ст^ еьепале о ——

з ёупглеиенированнн моносксигеназ на протяжении злого -сг::~я-фагктнеге периода. Существенно изменялся профиль метаболитов дназепвмг з динзмике СМ - у обеих групп животных чазаетоло содержание темазепома; кол;г;ество сксазепама уменьшалось, особенно у НУ животных; ссдер-тлнне нердназепама в сбей.:; гзуппзл уменьшалось к 7-м суткам наблюдения и восстанавливался на 14-21 сутки.

Теким образом, в динамике ОТ!М фармаксккнетичеекн? пазамет-ры лекарственна препаратов, метаболизируж!дихся различны.»«! Ферментными системами, изменяются в зависимости от исходной чувствительности к гипоксии:, у ВУ .тавотных замедляется элиминация и увеличиваются объемы распределения; з группе НУ крыс не наблюдается изменения скорости элиминации, а объемы распре-

15

Таблица Б.

Изменение активности мойооксигензз у животных с различной устойчивость*) к гипогаип п динамике острого инфаркта миокарда (И + и, п « О - 8).

Шраметрч Контроль -1 ....... 1 ......... | 7-е сутки ( 14-о сутки 21-о сутки

Цитохром Р-450 1 0,82+0,05 1 | 0,60+0,06л,*л 0,БЗШ,08*,*л 0,7710,09

2 1,11+0, Юл | 0,72+0,04** 0,7610,06** 0,7010,03 А*

Цитохром Ь5 1 0,55+0,02 | 0,44+0,05л* 0,40+0,03*,** 0,5010,03

2 0,05+0,03л | 0,46+0,03** 0,50+0,04** 0,4710,02 л*

Атшш-р-гид- 1 0,33+0,04 | 0,22+0,03** 0,3410,03* . 0,3410,03 *

роксилированиз' 2 0,64+0,08* | 0,68+0,04л . 0,6810,04 0,6410,04

Амидопирин-М-' 1 1,28+0,07. | 0,89+0,05** 1,0010,09** 1,2410,09 л

деметшшрование. 2 2,00+0, Юл | 2,01+0,07* 2,0210,07* 2,0610,11

Гидрокеилирова- 1 1,16+0,11 ¡0,07+0,07** 0,6010,07** 1,0910,11 л

ний диазепама 2 1>93+0(21* ., | 1,75+0,14* 1,7910,11* 1,02+0,14

Примечание. 1 - группа ЕУ животных," 2 - группа НУ кшотннх.' * - достоверность различий между группами, л* - достоверность различий с южтролем (Р<0,05). Концентрации цитохронов Р-4Б0 и ЬБ пираляны в нмоллх на 1 иг Бедна микросом, скорость Н-доие-тилировзния амидопирина - в я молях НСКО за 1 мш на' 1 нг белка, старость р-лгдрогаи-лировашта анилина - в нгалях р^амшгофояола за 1 шш на 1 мг бе я-га, скорость гид- -- ... -- А .гт~1 ^ ,т Латпгя 1ЯП"ППГ»ПИ

деления уменьшаются. Эти измененная у ЗУ .тнвстных являются следствием уменьсен;:я скорости метаболизма и могут препятствовать развитию токсических реакций; а у НУ гсзстных указанные сдвиги, по-видимому, есть проявление дезадаптации, когда на фоне ¡сислсроднсй недостаточности кислсрсдзависимые системы метаболизма не изменяют своей активности, ко вследствие гемоди-на.:.нпес!Л!:г нарушений не могут эффективно метаболизирсвать препараты, их концентрация в крови резко возрастает, тем самым создаются предпосылки к возникновению токсических -ффектсз . Данные выводы подкрепляются результатами опытов in vitro. 3 острый период инфаркта миокарда у 2У хивоткых замедляется метаболизм ксенобиотиков и сшпсается ссдерглние цитсхрсмсз з м:ткрсссматьной фракции печени, в то время как У НУ крыс возрастает интенсивность (в пересчете на кол:пество цитохрома P-45Q) биотрансфсрмации некоторых субстратсз (ко нэ антипирина). С другой стороны, замедление метаболизма у ЗУ .тавотных есть временная, ксмленсатсркзд реакция, а угнетение метаболизма антипирина в групе НУ крыс более продолжительно и свидетельствует о стойком угнетении "ачтипиринсвых" изофсрм цитох-рсма Р-450. йпсрссомзльный метаболизм диазепама такта указывает на неоднородную реаншзо изсфорн на ш;ркуляторную гипоксию. До-видимому, различные изофсрмы у НУ крыс по разному реагирует на кислородную недостаточность, одни активируются, а другие угнетается, а то время как у ЗУ .тлвотных реализуется единый адаптивны"! ответ з виде ограничения метаболической функции, что является наиболее оптимальным в условиях гипоксии (Хсчачка П., Сомеро Дж., 1SS8; Hcchachka P.W., 1S85).

Зьшеизлеженное пеззеляет заключить, что ферментные систеьш биотрансформации лекарственных веществ являются заяным звеном в формировании адаптивного ответа на гипоксические состояния. При этом устойчивые к гипоксии жзотные облагают приспособительным механизмом, обеспечивающим снижение скорости метаболизма при недостатке кислорода, перераспределяя его на бслеэ вашые а данных условиях реакции биологического окисления и ресинтеза макроэргов. Замедление скорости метаболизма компенсируется увеличением распределения препаратов по тканям, вследствие чего общий клиренс лекарственных веществ не уменьшается, а следовательно, не увеличивается вероятность развития побочных эффектов.

выводы

1. В популяции крыс линии Бистар существуют реципроккые взаимоотношения процессов окисления и ацетилирования лекарственных веществ, сопряженные с индивидуальной чувствительностью к гипоксии.

2. Скорость о.'сисления лекарственных ЕецестЕ сопряжена с устойчивостью организма к гипоксии:

а) высокоустойчивые к гипоксии животные являются медленными окислителями антипирина, диазепама, анилина, амидопирина;

б) кизкоустойчивые животные является быстрыми окислителями лекарственных веществ.

3. Фармакокинетические параметры изониазида зависят от устойчивости организма к гипоксии:

а) высокоустойчивые животные являются быстрыми ацетилято-рами изониазида;

б) низкоустойчивые животные являются медленными "инактива-торами" изониазида.

4. Острая гипсбарическая гипоксия и инфаркт миокарда вызывает угнетение ферментных систем биотрансформации у высокоустойчивых животных:

а) снижается скорость метаболизма антипирина, диазепама, анилина, амидопирина, изониазида;

б) уменьшается содержание цитохромов Р-450 и Ь5 в микросо-мальной фракции печени.

5. .Изучаемые гипоксические состояния ведут к увеличения обьемов распределения антипирина, диазепама, изониазида у вы-сокоустойчкеых к гипоксии животных, что может препятствовать развитию токсических эффектов тест-препаратов.

6. В группе низкоустойчивых животных гипоксические воздействия не изменяют скорости реакций I и II фазы биотрансформации или активируют их.

. 7. Дальнейшее изучение проблемы взаимосвязи лекарственное метаболизма и устойчивости организма к гипоксии даст возможность прогнозировать реакцию организма на лекарственные вещества и целенаправленно корригировать нарушения злиминацга этих веществ при заболеваниях, основным зЕеком патогенеза которых является гипоксия.

список

работ, епублжссванных по теме диссертапга.

1. Грек О.?., харапоз В.й., Кслпакоз М.Д., Ананьев Е.А. Влияние острой киемни миокарда на фзрмако!с:.четнку антнпиргпга, нпфедипина и диасепама //¡армаколсгичеекзя коррекции гипекск-'чзеких состояний: Мат. 2-й Есессва. копф. - Гродно, 1591. - Ч. 2. - С. 199-2С0.

2. Шарапов В.К. , Кс.гпакоэ !i.A. , Грек О.?. £армакокикетика антипирина и изониазида у крыс с различной устойчивостью к гп-пскеичеоксл гипоксии! // Мснсексигеназная система. Теоретические и прикладные аспекты: Мат. Респ. с:!мп.- Ташкент, 1S32.-С. 26-27.

2. Sharapov V. I., Kolpakov М.А., GrekG.R. , "aibushavieh A.A. Ccr.parative activity of ar.ticyrir.e. nifedipine and diazepam .Tetafcclian in Wistar rats '.rider experimental myocardial infarction // J. Eos. Clin. Physiol. Pharmacol.- 1992.- Vol. 3, Sappi.- ?. 277.

■4. Шарапов В.Л., Грек 0.?., Ананьев S.A. , Кслпакоз М.А. ■Гармакскинетика антипирина, нифелилина и дназепама при зкспэ-•р:э'ент2лгнсм интаркте мио;:аода // Вал. океперим, виол, мед.-1992,- ?. 113, N 4.- С. 281-333.

5. Колпаков У.Л. Сармакскинетика изениазида у крыс с различной устспч;1дсетьЕ к г'.птсб прической гипоксии //Актуальные проблема современней медицп:дк Тзгв. докл. 52-й итеговей науч. кенф. студентоз и молоться ученых. - Новосибирск.- 1992. - С.6.

6. Соболева М.К., Колпаков М. А., Е'аеапсв З.И., Грек О.Р. Особенности обмена .г.елеза и состояние системы трансферрин-иеру-леплазмнн у крыс с различной устойчивостью к гипсксин // Еюд. зкспер;:м. бисд. мед. - 1993. - Т. 115, N 5. - С. 614-616.

7. Нарапсв В.И., Колпаков М.А., Грек О.Р. Влияние острей гипоксии на фармакекинетику антипирина и изениазила у крыс с различней резистентность» к недостатку кислорода /'/Екзл. зкепе-рим. биол. мед. - 1SS3. - Т. 116, N 7. - С. 53-59.

3. Grek 0., Sharapov V., Kolpakov №.., Jacobean S. Tfr? relationship between dregs oxidation and acetyiation in HS and LS to hypoxia rats. // Prec. of the III World Congress of the International Society for Adaptive Medicine. - Tokyo, Japan. -1393. - P. 35.

9. Kolpakov M., Soboleva M., Sharapov V., Grek 0. The response of the blood antioxidant system of Wlstar rats to acute hypoxia //Ibid. - P. 36.

10. Грек O.P., Колпаков Ы.А., Шарапов Е.К. Фармакэкинети-ка изониазида у крыс при гипоксии и острой гаекии миокарда. // Проблемы саногеккого и патогенного эффектов экологических воздействии на внутреннюю среду организма: Мат. международного симп. - Чолпон-Ата. - 1993. - С.- 62-63.

11. Колпаков Ы.А. Метаболическая и белоксинтееирушая функции печени крыс при острой гипоксии //Современны? проблемы гуманитарных и естественных наук: Tes. докл. Новосибирской межвузовской науч. конф. "Интеллектуальный потенциал Сибири". - Новосибирск. - 1993.- С. 92.

12. Грек O.P., Шарапов В.И., Колпаков М.А., Худашов В.Г. Активность метаболической системы печени крыс при экспериментальном инфаркте миокарда //Реабилитация больных изземической болезнью сердца, церебральной даемией и артериальными гипертониями (актуальные вопросы патогенеза, диагностики', консервативного и хирургического восстановительного лечения, использование природных факторов): Тез. докл. региональной конф.-Томск. - -1933. - С. 26.

13. Колпаков М.А. Реакция железотранспорткрующей системы крови крыс на острую гипобарическую гипоксию // Тез. докл. 54-й итоговой науч. конф. студентов и молодых ученых.- Новосибирск. - 1993. - С. 30-31.

14. Колпаков М.А. Особенности фармакокинетики кзониазида у крыс с различной резистентностью к гипоксии //Науч. конф. молодых ученых России "Здоровье и болезни человека на рубеже XXI века", посвященная 50-лгтии академии медицинских наук: Тез. дога. - Москва. - 1994. - С. 76-77. ■

15. Колпаков U.A. Фенотипы окисления и ацетилировакия ксенобиотиков связаны с устойчивостью организма к гипоксии //Современные проблемы гуманитарных и естественных каук: Тез. докл. Новосибирской межвузовской науч. конф. "Интеллектуальный потенциал Сибири". - Новосибирск. - 1994.- С. 40.

Соискатель:

пот, г прч. 13. СЗ. 95.С'оп;.:ат 60x84/16. Объём 1.25 п.л. Ткргк Iûû экз. Ьгказ 100. Новосибирск. СКА ЯК.