Возрастные особенности развития иммунного ответа людей на живую и инактивированную гриппозные вакцины

Баранцева, Ирина Борисовна

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Возрастные особенности развития иммунного ответа людей на живую и инактивированную гриппозные вакцины

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Баранцева, Ирина Борисовна Санкт-Петербург 2003 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему Возрастные особенности развития иммунного ответа людей на живую и инактивированную гриппозные вакцины

На правах рукописи

БАРАНЦЕВА Ирина Борисовна

ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ РАЗВИТИЯ ИММУННОГО ОТВЕТА ЛЮДЕЙ НА ЖИВУЮ И ИНАКТИВИРОВАННУЮ ГРИППОЗНЫЕ ВАКЦИНЫ

14.00.36 - аллергология и иммунология 03.00.06 - вирусология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2003

Работа выполнена в Государственном учреждении Научно-исследовательском институте экспериментальной медицины Российской Академии Медицинских Наук

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Найхин Анатолий Нойевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Полевщиков Александр Витальевич доктор медицинских наук, профессор Сомннина Анна Адольфовна

Ведущая организация:

Государственный институт стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича МЗ РФ

Защита диссертации состоится «/¿Гу>^¿мд^У 2003 года в в часов на заседании Диссертационного Совета Д 001.022.01 при ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН (197376, Санкт-Петербург, ул. Академика И.П. Павлова, 12).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН.

Автореферат разослан «// » 2003 года.

Ученый секретарь доктор медицинских наук

Диссертационного Совета Бурова Лариса Александровна

^ООЭ-Д

^^^ (^-Актуальность проблемы. Грипп в глобальном масштабе наносит значительный урон здоровью населения и экономике. В настоящее время одним из самых эффективных методов борьбы с этой инфекцией является вакцинация [Munoz F.M. et al, 2000; Rudenko L.G. et al, 2001; Hannoun C., 2002]. В США и странах Запада более 30 лет применяется инактивированная парентеральная гриппозная вакцина (ИГВ). Альтернативой ИГВ является отечественная живая холодоадаптированная реассортантная интраназальная гриппозная вакцина (ЖГВ), разработанная в ГУ НИИЭМ РАМН в середине 70-х гг. прошлого века [Александрова Г.И., 1977]. Позднее подобная, но не идентичная вакцина создана в США [Longini I.M. et al, 2001; Piedra P.A. et al, 2002].

Важнейшим критерием качества вакцин является их иммуногенность. Количественные показатели иммуногенности напрямую связаны с возрастной недостаточностью иммунной системы у детей и пожилых лиц. С точки зрения тяжести и частоты поражения гриппом эти возрастные контингенты отнесены к группам повышенного риска [Glezen W.P., 1982; Simonsen L. et al, 1998]. Поэтому разработка для них оптимальных схем вакцинации особенно актуальна. В этом направлении ведутся активные исследования [Gorse G.J. et al, 1991; Powers D.C., 1997; Bernstein E.D. et al, 1998; McElhaney J.E. et al, 1998; Treanor J.J., Betts R.F., 1998].

Показано, что иммунизация людей старше 65 лет стандартной дозой ИГВ низкоэффективна в отношении индукции у них системного и локального иммунитета [Keren G. et al, 1988; Gross P.A. et al, 1988]. Сочетанная иммунизация ЖГВ+ИГВ приводит к усилению гуморального иммунного ответа у престарелых людей [Treanor J.J. et al, 1992]. В 1994-1998гг. проведено специальное российско-американское исследование по сравнению способности разных схем иммунизации ЖГВ и ИГВ индуцировать гуморальный иммунный ответ у людей старше 65 лет. В итоге среди изученных шести схем вакцинации оптимальным вариантом признано сочетанное введение ЖГВ+ИГВ с последующей ревакцинацией ЖГВ через 1 месяц [Найхин А.Н. и др., 1998, Rudenko L.G. et al, 2001]. Однако в то время авторам не удалось исследовать ряд важных моментов. Так, они не определяли клеточный иммунитет и уровень продукции основных иммунорегуляторных цитокинов, не изучали в сравнительном плане пролонгированность разных факторов поствакцинального иммунитета и их стимуляционную сочетанность, не оценивали отдельно иммуногенную значимость вакцинации и рявак-пиняпии иг нак-пнрп. не сопоставляли количественные параметры пос ответа

С-Пстербу

О® --Й i, /у^

Шй

у МОЛОДЫХ и пожилых лиц.

Как уже упоминалось, помимо пожилых людей к группе повышенного риска по заболеваемости гриппом относятся дети. В России до проведения настоящего исследования эти контингенты прививались двукратно специальным детским вариантом ЖГВ, который отличается от взрослого варианта донором аттенуации, используемым при создании вакцинных штаммов вирусов гриппа А [Александрова Г.И., Климов А.И., 1994]. Иммуногенность ЖГВ для детей оценена только с позиции стимуляции сывороточных антител. Вопрос о способности этого препарата индуцировать локальный иммунитет остается открытым. Кроме того, наличие двух доноров аттенуации создает определенные трудности при производстве ЖГВ, а двукратная иммунизация детей приводит к снижению числа ревакцинируемых по отношению к числу вакцинируемых [Григорьева Е.П. и др., 2002]. В этой связи был необходим поиск упрощенной схемы противогриппозной вакцинации детей.

Настоящая работа посвящена изучению перечисленных выше актуальных вопросов, связанных с возрастными особенностями формирования поствакцинального противогриппозного иммунитета.

Цель исследования: изучение особенностей развития клеточного и гуморального иммунного ответа на ЖГВ и НТВ у людей разных возрастов.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи.

1. У пожилых людей старше 65 лет, иммунизированных ЖГВ и ИГВ раздельно и в сочетании, исследовать динамику формирования клеточного пролиферативного и гуморального (циркулирующие и локальные антитела) иммунного ответа, а также продукцию IL-2 in vitro и in vivo.

2. У молодых и пожилых людей сравнить количественные параметры клеточного пролиферативного, гуморального (циркулирующие антитела разных классов и подклассов, локальные IgA-антитела) иммунного ответа и продукции основных Thl (IFNy)- и Th2 (1Ь-4)-маркерных цитокинов после раздельного и сочетанного введения тех же вакцин.

3. У детей 3-6 и 7-14 лет сопоставить количественные характеристики системного (сывороточные антитела) и местного (локальные IgA-антитела) иммунного ответа при вакцинации взрослым и детским вариантами ЖГВ.

4. Выбрать оптимальные схемы противогриппозной иммунизации детей и лиц пожилого возраста с позиции активности индукции у них разных факторов поствакцинального иммунитета.

Научная новизна работы

- Впервые осуществлено исследование клеточных и гуморальных факторов противогриппозного иммунитета у молодых и пожилых людей при комбинированной и раздельной иммунизации ЖГВ и ИГВ.

- Показано комплексное воздействие таких факторов как возраст людей, биологические свойства вакцинного вируса, способ и схема его введения на развитие поствакцинального иммунного ответа к вирусам гриппа по клеточному (Thl) и гуморальному (Th2) типам.

- Получены данные о сочетанности и продолжительности поствакцинального клеточного и гуморального иммунного ответа у пожилых лиц старше 65 лет.

- Обосновано преимущество ЖГВ перед ИГВ в индукции клеточного пролиферативного иммунного ответа, а также в стимуляции продукции IFNy и IL-2 in vitro у людей старше 65 лет.

- Впервые у людей, иммунизированных ЖГВ и ИГВ, исследована возможность оценки клеточной и гуморальной составляющей поствакцинального иммунитета по индукции Thl (IFNy)- и Th2 (IL-4)-маркерных цитокинов.

- Впервые сопоставлена продукция IL-2 in vitro и in vivo (в сыворотке крови) у пожилых людей, иммунизированных ЖГВ и ИГВ раздельно и в сочетании.

- Впервые проведен сравнительный анализ продукции циркулирующих и локальных антител у детей 3-6 и 7-14 лет после иммунизации взрослым и детским вариантом ЖГВ.

Практическая значимость работы

1. Показана эффективность однократной вакцинации взрослым вариантом ЖГВ детей дошкольного и школьного возраста. ЖГВ для взрослых с 2003г. применяется в качестве единого препарата для вакцинации населения всех возрастов старше 3-х лет (решение Комитета медицинских иммунобиологических препаратов Минздрава РФ от 27.02.2003г).

2. Разработан оптимальный метод противогриппозной вакцинации людей преклонного возраста с точки зрения стимуляции у них полноценного поствакцинального клеточного и гуморального иммунитета - сочетанное однократное введение ЖГВ+ИГВ.

Основные положения, выносимые на защиту

1. У людей развитие иммунного ответа на гриппозные вакцины по клеточному (Thl) и гуморальному (Th2) типам определяется комплексом взаимосвязанных факторов, в том числе возрастом иммунизируемых лиц (пожилые, молодые), типом вакцины (живая, инактивированная), способом ее аппликации (на слизистую, парентерально) и схемой введения (раздельно, в сочетании).

2. Влияние возраста на иммунный ответ на гриппозные вакцины проявляется в отличиях способности ЖГВ и ИГВ индуцировать у пожилых и молодых людей такие факторы противовирусного иммунитета как пролиферативная активность лимфоцитов, Thl-маркерные цитокины и циркулирующие антитела.

4. Оптимальным методом стимуляции поствакцинального противогриппозного иммунитета для детей 3-14 лет является однократное введение взрослого варианта ЖГВ, а для лиц старше 65 лет - сочетанная однократная иммунизация ЖГВ+ИГВ.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на III Съезде иммунологов и аллергологов СНГ (Сочи, 2000) - доклад занял I место на конкурсе стендовых докладов; на Всероссийской научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика A.A. Смородинцева (Санкт-Петербург, 2001) - доклад занял Ш место на конкурсе молодых ученых; на V научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 2001); на XII Международном конгрессе вирусологов (Париж, 2002).

Диссертационная работа апробирована на совместной научной конференции отделов иммунологии и вирусологии ГУ НИИЭМ РАМН 25 сентября 2003г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, в том числе 5 статей и 8 тезисов.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов

исследования и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы. Диссертация изложена на /17 страницах текста, включающего 13 таблиц и 12 рисунков. Список цитируемой литературы включает 23 отечественных и 157 иностранных источников.

Работа выполнена по программе совместных исследований с Центром по контролю за заболеваемостью (Атланта, США), поддержана грантом Мэрии Санкт-Петербурга.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Вакцины. Для иммунизации использовали 3 варианта гриппозных вакцин: 1) живую холодоадаптированную реассортантную тривалентную гриппозную вакцину для взрослых (ЖГВ); 2) ЖГВ для детей (обе вакцины производства Федерального государственного унитарного предприятия по производству иммунобиологических препаратов; Иркутск, Россия); 3) инактивированную расщепленную тривалентную вакцину (ИГВ) (\УуеЙ1-Ауез1 Со, США). Отличие взрослого и детского вариантов ЖГВ заключается в числе пассажей при сниженной температуре и количестве мутаций донора атгенуации вакцинных штаммов вирусов гриппа типов А (НШ1) и А (Н3№). Донор аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (Н2И2) для взрослых прошел 17 пассажей при 25°С и имеет 8 мутаций в генах, кодирующих негликозилированные белки; донор аттенуации А/Ленинград/134/47/57 для детей прошел 47 пассажей при 25°С, имеет 11 кодирующих мутаций. Донор аттенуации В/СССР/60/69 является единым для обоих вариантов ЖГВ. В состав ЖГВ для взрослых и детей входили холодоадаптированные реассортантные вирусы с биологической активностью штаммов типа А(НШ1), А (Н3№) 106,5 ЭИД 50/0,2 мл, типа В -10б'° ЭИД 50/0,2 мл. ИГВ содержала по 15 мг гемагглютинина каждого штамма в 1 дозе.

ЖГВ включала в себя следующие реассортантные штаммы: А/17/Пекин/95/25 (НШ1), А/17/Сидней/97/76 (№N2), В/Санкт-Петербург/95/20. В состав ИГВ входили штаммы А/Пекин/262/95 (НШ1), А/Сидней/05/97 (НЗК2) и В/Харбин/07/94. Все штаммы рекомендованы ВОЗ.

ЖГВ вводили интраназально в объеме 0,5 мл (по 0,25 мл в каждый носовой ход), ИГВ — внутримышечно по 0,5 мл в верхнюю треть плеча. В качестве интраназального препарата плацебо использовали лиофилизированную аллантоисную жидкость неинфицированных куриных эмбрионов (субстрат для производства ЖГВ). Внутримышечным препаратом

плацебо являлся стерильный 0,14 М раствор NaCl.

Вакцинируемые контингенты. В исследовании участвовало 117 детей дошкольного возраста (3-6 лет), 131 ребенок школьного возраста (7-14 лет), посещавшие детские сады и школы Ленинградской области, а также 80 молодых людей 18-27 лет из организованных коллективов и 169 пожилых лиц в возрасте 67-89 лет из домов престарелых г. Санкт-Петербурга. Все лица ранее против гриппа не прививались. Вакцинацию и забор исследуемых материалов у детей осуществляли с разрешения родителей, а у взрослых людей - на основе добровольного согласия. В каждой возрастной группе случайно-выборочным методом были сформированы подгруппы вакцинируемых и контроля. Все схемы вакцинации ЖГВ, ИГВ и различные их комбинации не вызывали клинических реакций.

Определение уровня антигемагглютинирующих сывороточных антител. Титры сывороточных антител определяли в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), которую выполняли по общепринятой методике с использованием 1% взвеси куриных эритроцитов и 4 АЕ соответствующих антигенов. Для удаления термостабильных и термолабильных ингибиторов гемагглютинации исследуемые сыворотки обрабатывали экстрактом нейраминидазы авирулентного штамма холерного вибриона (Deka Seiken Со, Япония) и затем прогревали в течение 30 мин при 56°С.

Специфические сывороточные антитела классов A, G, подклассов Gl, G3, G4 и антитела класса А в секретах верхних дыхательных путей (СВДП) определяли в непрямом варианте твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) в модификации [Найхин А.Н. и др., 1997]. Рабочая доза сорбируемого антигена составляла 16АЕ/0,1мл. Субстратом являлся ортофенилендиамин (Sigma Со, США). За титр антител принимали последнее разведение образца, оптическая плотность которого в 2 раза и более превышала оптическую плотность контроля, включающего все ингредиенты реакции, кроме исследуемой пробы. Достоверным приростом титров секреторных IgA-антител в ИФА и сывороточных иммуноглобулинов в РТГА и ИФА считали его 4-кратное и более увеличение в поствакцинальном образце по отношению к предвакцинальному.

Пролиферативную активность лимфоцитов оценивали в реакции бластотрансформации, которую выполняли традиционным способом с использованием в качестве метки 3Н-тимидина [Bradley L.M., 1980]. Культуры мононуклеаров периферической крови (МПК) стимулировали

фитогемагппотинином (ФГА) (Sigma Со, США) и инактивированными (+56°С 60 мин) антигенами вирусов гриппа, гомологичными штаммам, входящим в состав вакцин. Рабочая доза антигенов составляла 20 АЕ/0,1 мл, ФГА - 5 мг/мл. Пролиферативную активность лимфоцитов оценивали по индексу стимуляции лимфоцитов, который представлял собой частное от деления числа импульсов в минуту стимулированных и нестимулированных МПК.

Уровень IL-2, IFNyu IL-4 определяли in vitro (в надосадках 4-хдневных культур МПК, стимулированных ФГА и гомологичными вирусами), а также in vivo (в сыворотке крови). Процедуры осуществляли в ИФА с помощью стандартных наборов (Biosource International Со, США).

Статистическая обработка результатов была выполнена стандартными методами. Сравнение выборок производили с помощью t критерия Стьюдента и критерия %2. Обработку данных вели в программе "Excel".

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Поствакцинальный иммунный ответ у пожилых людей старше 65 лет

90 престарелых людей 65-89 лет были иммунизированы гриппозными вакцинами по следующим схемам:

Группа Вакцинация Ревакцинация через 21 день

I ЖГВ+ИГВ ЖГВ

II ЖГВ ЖГВ

П1 ИГВ Плацебо

IV Плацебо Плацебо

Каждая из этих групп включала от 20 до 22 человек. I Количественные показатели специфического иммунитета определяли в

четырех временных интервалах: (Г) - непосредственно перед вакцинацией, (и) -через 21 день после вакцинации, (ш) - через 28 дней после ревакцинации, (¡V) -спустя 12-13 недель после ревакцинации. Точка (1) давала представление о фоновых показателях, точки (и) и (ш) - об эффективности соответственно вакцинации и ревакцинации, точка (¡у) - о продолжительности сохранения иммунитета.

Динамика развития поствакцинального гуморального и клеточного иммунитета. После сочетанной вакцинации ЖГВ+ИГВ (рис. 1-1) или только ЖГВ (рис. 1-П) наблюдалось достоверное повышение уровня сывороточных

антигемагтлютинирующих антител, секреторных IgA-антител и пролиферативной активности лимфоцитов по отношению к предвакцинальному периоду.

6 -

(0 (ii) (ш) (iv)

ш ■— *** /Г *** н ***

7 ■ —ш

I......... —а—

А —А

(И)

(iii)

(iv)

б -

4 -

2 -

II *** ***

*** ^

' **

***

* *

(1) (ii) (iii) (iv)

(Ш) (iv)

Рис.1. Изменение уровня сывороточных антигемагтлютинирующих, секреторных IgA-антител и пролиферативной активности лимфоцитов у пожилых людей: I - после иммунизации ЖГВ+ИГВ с ревакцинацией ЖГВ через 21 день; П - после двукратной иммунизации ЖГВ с интервалом в 21 день; Ш - после однократной иммунизации ИГВ; IV - после введения препаратов плацебо. По оси абсцисс - время взятия образцов: (i) - до вакцинации, (ii) - через 21 день после вакцинации, (iii) - через 28 дней после ревакцинации, (iv) - через 12-13 недель после ревакцинации; по оси ординат -интенсивность иммунного ответа: кружки - log2 средних геометрических титров (СГТ) сывороточных антител к вирусу гриппа A(H1N1), квадраты - log2 СГТ секреторных IgA-антител к вирусу гриппа A(H1N1), треугольники - средний арифметический индекс стимуляции лимфоцитов, стимулированных in vitro вирусом гриппа A(H1N1).

Здесь и далее по тексту: * - различия с предвакцииальным уровнем достоверны при р<0,05, ** - при р<0,01, *** - при р<0,001.

Наибольшая активность в отношении увеличения показателей не только гуморального, но и клеточного иммунитета отмечена при комбинированном введении. Иммунизация ИГВ активно стимулировала синтез циркулирующих антител, но практически не повышала уровень секреторных IgA-антител и пролиферативный иммунный ответ (рис. 1-П1).

После ревакцинации ЖГВ в группе П (рис. 1-II) наблюдалось достоверное увеличение концентрации только сывороточных антител, тогда как уровни секреторных IgA-антител и пролиферативной активности лимфоцитов не изменялись. У лиц из группы I (рис. 1-1) ревакцинация вообще не оказывала иммуностимулирующего действия.

Через 12-13 недель после ревакцинации у привитых как сочетано ЖГВ+ИГВ, так и отдельно ЖГВ количественные характеристики клеточного и локального иммунитета снизились до исходных значений, тогда как уровень сывороточных антител оставался достоверно выше предвакцинальных показателей (р<0,001).

Близкие по значению результаты получены и в отношении иммунитета к другим вакцинным вирусам гриппа: A(H3N2) и В.

Таким образом, у людей старше 65 лет ИГВ активно стимулировала только продукцию сывороточных антител. Сочетанная однократная вакцинация ЖГВ+ИГВ обеспечивала у них хорошо выраженную индукцию гуморального и клеточного иммунитета. Ревакцинация ЖГВ не обладала дополнительным иммуногенным эффектом у лиц, ранее вакцинированных ЖГВ+ИГВ. Поствакцинальный уровень клеточного и локального иммунитета снижался быстрее, чем уровень сывороточных антител.

Полученные результаты о более высоком иммуногенном эффекте сочетанной вакцинации ЖГВ+ИГВ по сравнению с раздельным введением препаратов подтверждены данными о профилактической эффективности этих схем иммунизации [Rudenko L.G. et al, 2001].

С точки зрения упрощения оценки иммуногенности вакцин весьма важен вопрос о корреляции между разными факторами поствакцинального противовирусного иммунитета [Schwab R. et al, 1990; Gorse G.J. et al, 1991]. В этой связи был проанализирован вопрос о сочетанности индивидуальных клеточных и гуморальных поствакцинальных иммунных реакций у тех же людей.

Среди 46 лиц, привитых комбинировано ЖГВ+ИГВ и отдельно ЖГВ и ИГВ, у которых отмечалось достоверное увеличение титров циркулирующих и

(или) секреторных антител, частота увеличения индексов стимуляции лимфоцитов более чем в 2 раза составляла 39-52%, а у людей с отсутствием достоверного повышения титров антител (20 человек) - лишь 10-15% (р<0,01). Эти результаты демонстрируют достаточно высокую (но не полную) сочетанность поствакцинального гуморального и клеточного индивидуальных иммунных ответов у лиц пожилого возраста.

Концентрации IL-2 в супернатантах культур лимфоцитов, стимулированных in vitro гомологичными вирусами и ФГА. Возрастную дисфункцию иммунной системы связывают с пониженнием активности Т-лимфоцитов в отношении синтеза IL-2 [McElhaney J. et al, 1992]. Кроме того, по данным [Huang Y.P. et al, 1992] вакцинация ИГВ приводила к супрессии продукции IL-2 in vitro у пожилых людей. В этой связи было проведено исследование способности ЖГВ и ИГВ индуцировать продукцию этого цитокина у лиц преклонного возраста.

Концентрации IL-2 определяли в супернатантах культур стимулированных лимфоцитов у тех же пожилых людей после однократной сочетанной вакцинации ЖГВ+ИГВ и отдельно ЖГВ и ИГВ (рис. 2-А).

120

100

А *** 1

** 1 га J

ЖГВ ИГВ ЖГВ+ИГВ Плацебо

Рис. 2. Уровень IL-2 in vitro (А) и in vivo (В) у лиц пожилого возраста после иммунизации ЖГВ и ИГВ. А: по оси ординат - концентрация IL-2 (пг/мл) в надосадках культур лимфоцитов, стимулированных вирусом гриппа A(H1N1). В: по оси ординат -концентрация IL-2 (пг/мл) в сыворотке крови. Белые столбики - средний арифметический уровень IL-2 до вакцинации, черные столбики - через 21 день после вакцинации.

Средние значения уровня IL-2, выявляемого in vitro после стимуляции вирусом гриппа A(H1N1), у привитых ЖГВ+ИГВ возросли в 8,8 раза (р<0,001), у иммунизированных только ЖГВ и ИГВ соответственно в 2,7 (р<0,001) и в 1,3 раза (р>0,05). Сходные результаты получены при определении IL-2 в супернатантах культур клеток, стимулированных вирусами гриппа A(H3N2), В и ФГА.

Таким образом, противогриппозная иммунизация отдельно ЖГВ и ЖГВ в сочетании с ИГВ не вызывала супрессии продукции IL-2 in vitro. Наиболее высокие показатели прироста уровня IL-2 отмечались у привитых комбинировано ЖГВ+ИГВ, средние - у привитых однократно ЖГВ и очень низкие - у привитых однократно ИГВ.

Изучена взаимосвязь между уровнем продукции IL-2 in vitro и другими звеньями противогриппозного иммунитета, поскольку этот вопрос носит дискуссионный характер [McElhaney J. et al, 1995, Kiecolt-Glaser J.K. et al, 1996]. Среди 30 лиц с достоверным поствакцинальным увеличением концентрации IL-2 in vitro доля людей с одновременным достоверным увеличением показателей пролиферативной активности лимфоцитов, титров сывороточных и локальных антител составила соответственно 53, 73 и 20%, а у 36 привитых лиц с отсутствием достоверного увеличения продукции IL-2 in vitro - соответственно 11 (р<0,001), 50 (р<0,05) и 19% (р>0,05). Это косвенно свидетельствует, что продукция IL-2 в наибольшей степени связана с количественными параметрами клеточного иммунитета и очень слабо с локальным антителообразованием.

Концентрации IL-2 in vivo (в сыворотке крови) (рис. 2-В). У обследованных пожилых людей уровень IL-2 в сыворотке крови оказался в 8-10 раз ниже аналогичного показателя при определении этого цитокина in vitro. В поствакцинальный период у иммунизированных ИГВ наблюдалось незначительное снижение уровня IL-2 в крови. У вакцинированных ЖГВ этот показатель не изменился, а у получивших сочетанную прививку ЖГВ+ИГВ -возрос в 1,3 раза (р>0,05).

Таким образом, у лиц старше 65 лет все исследуемые схемы иммунизации не приводили к достоверному увеличению уровня IL-2 в сыворотке крови через 21 день после вакцинации.

Сравнительный анализ поствакцинального иммунного ответа у пожилых и молодых людей

О полноценности развития поствакцинального иммунитета лиц старше 65 лет можно судить только в том случае, когда имеется возможность сопоставить количественные параметры иммунного ответа у пожилых и молодых людей в едином исследовании.

Для изучения этого вопроса была проведена однократная иммунизация 80 молодых (18-27 лет) и 79 пожилых (65-89 лет) людей по трем схемам: сочетанное введение ЖГВ+ИГВ; вакцинация ЖГВ и ИГВ отдельно. Контрольные группы получали соответствующий препарат плацебо. Каждая из 8 групп включала от 19 до 21 человека. Через 21 день у этих людей определяли количественные показатели антителообразования, пролиферативную активность лимфоцитов и уровень продукции Thl (IFNy)- и Th2 (IL-4)-маркерных цитокинов in vitro.

Гуморальный иммунный ответ, (рис. 3). У молодых и пожилых людей, иммунизированных ЖГВ, поствакцинальные уровни антигемагглютинирующих антител существенно не различались (р>0,05), но у тех и других их абсолютные значения были значительно ниже, чем у вакцинированных ЖГВ+ИГВ (р<0,001). ИГВ активно индуцировала системный гуморальный иммунный ответ только у молодых лиц (р<0,001).

Рис. 3. Уровень сывороточных антител у молодых и пожилых людей после

иммунизации ЖГВ и ИГВ По оси ординат - СГТ антител в РТГА к вирусу гриппа A(H1N1)*. Белые столбики - до вакцинации, черные столбики - через 21 день после вакцинации. М - молодые, П - пожилые "Результаты, полученные с вирусами A(H3N2) и В, близки по значению.

Таким образом, ИГВ имела преимущество перед ЖГВ в индукции синтеза сывороточных антител у молодых, но не у престарелых лиц. У пожилых людей самые высокие поствакцинальные уровни

антигемягглютинирующих антител наблюдались при сочетанном введении ЖГВ+ИГВ.

Далее у тех же людей была изучена в ИФА продукция сывороточных специфических антител разных классов и подклассов.

Ни у молодых, ни у пожилых лиц не выявлено достоверных отличий в частоте конверсий сывороточных 1§А-антител при иммунизации по всем трем схемам. 1^1 был доминантным подклассом и у пожилых, и у молодых людей. Однако, если у молодых лиц обе вакцины стимулировали синтез ^в-антител всех исследованных подклассов, то у пожилых людей после иммунизации ИГВ наблюдались достоверные приросты уровня и ^ОЗ-антител, а после

введения ЖГВ - только 1§01-антител. Сочетанная иммунизация ЖГВ+ИГВ приводила к практически одинаковому уровню конверсий общих 1§С1- и ^вЗ-антител в обеих возрастных группах.

Таким образом, эти данные в целом подтвердили результаты, полученные при выявлении общего пула сывороточных антител в РТГА.

Иной характер носили результаты определения локальных 1§А-антител в СВДП (рис.4). Введение ЖГВ приводило к достоверному повышению уровня секреторных 1§А-антител у пожилых и молодых людей (р<0,001). ИГВ в одинаковой степени слабо индуцировала синтез местных антител у тех и других лиц (р>0,05). Сочетанная иммунизация ЖГВ+ИГВ не имела преимущества перед ЖГВ в стимуляции секреторных 1§А-антител у престарелых людей (р>0,05).

Рис. 4. Уровень локальных ^А-ангител у молодых и пожилых людей после

иммунизации ЖГВ и ИГВ По оси ординат - СГТ 1{>А-антител к вирусу гриппа А(НШ1)'. Белые столбики - до вакцинации, черные столбики - через 21 день после вакцинации. М - молодые, П - пожилые. "Результаты, полученные с вирусами гриппа А(НЗК2) и В, близки по значению.

Плацебо

МПМ ПМПМП

Клеточный пролиферативный иммунный ответ (рис. 5). ЖГВ активно стимулировала пролиферативный иммунный ответ как у молодых, так и у пожилых людей, тогда как ИГВ - только у молодых лиц. У пожилых людей самые высокие показатели пролиферативной активности лимфоцитов

Рис.5. Пролиферативная активность лимфоцитов у молодых и пожилых людей после иммунизации ЖГВ и ИГВ

По оси ординат - средний арифметический индекс стимуляции лимфоцитов, стимулированных in vitro вирусом гриппа A(H1N1)*. Белые столбики - до вакцинации, черные столбики - через 21 день после вакцинации.

М - молодые, П - пожилые "Результаты, полученные с вирусами гриппа A(H3N2), В и ФГА, близки по значению.

Связь ТН1/ТЪ2-дихотомии с поствакцинальным иммунным ответом. В вакцинологии концепция Th 1 /Th2-дихотомии важна с точки зрения индукции конкретными вакцинными препаратами сбалансированного клеточного (Thl) и гуморального (Th2) поствакцинального иммунного ответа. Была предпринята попытка, с одной стороны, проанализировать в сравнительном плане Thl- и ТЬ2-иммунный ответ у пожилых и молодых людей на сочетанное и раздельное введение ЖГВ и ИГВ с позиции поствакцинальной продукции Thl (IFNy)- и Th2 (1Ь-4)-маркерных цитокинов in vitro, с другой, сопоставить количественные параметры этой продукции с реальными данными о клеточном и гуморальном иммунном ответе.

Показатели продукции IFNy (рис. 6) в целом совпадали с данными пролиферативного иммунного ответа (рис. 5). Так, введение ЖГВ как отдельно, так и в сочетании с ИГВ активно стимулировало продукцию этого цитокина in vitro как у молодых, так и пожилых лиц (р<0,001). В отличие от молодых, у пожилых людей ИГВ практически не повышала уровень IFNy (р>0,05).

Таким образом, у престарелых людей ЖГВ имела преимущество перед ИГВ в стимуляции продукции Thl-маркерного цитокина IFNy.

наблюдались при сочетанном введении ЖГВ+ИГВ.

МПМПМПМП

800 -

600 -

400 -

200

ЖГВ+ИГВ *** || Плацебо

II №

мпмпмпмп

Рис. 6. Продукция у молодых в пожилых людей после

иммунизации ЖГВ и ИГВ

По оси ординат -концентрация 1Шу (пг/мл) в надосадках культур лимфоцитов,

стимулированных вирусом гриппа А(НШ1)\ Белые столбики - средний арифметический уровень ШЫу до вакцинации, черные столбики - через 21 день после вакцинации. М - молодые, П — пожилые. 'Результаты, полученные с вирусами гриппа А(НЗ№) и В, близки по значению.

Анализ поствакцинальной продукции ТЬ2-маркерного цитокина 1Ь-4 показал отсутствие достоверных отличий в интенсивности изменения его уровня у молодых и пожилых лиц при всех способах иммунизации (рис. 7). При этом значения кратности изменения концентрации 1Ь-4 в поствакцинальный период оказались очень низкими и колебались от 0,9 до 1,2 (р>0,05).

М П

МП МП МП

Рис. 7. Продукция 1Ь-4 у молодых и пожилых людей после

иммунизации ЖГВ и ИГВ

По оси ординат концентрация 1Ь-4 (пг/мл) в надосадках культур

лимфоцитов,

стимулированных вирусом гриппа А(НШ1)". Белые столбики - средний арифметический уровень иЬ-4 до вакцинации, черные столбики - через 21 день после вакцинации. М - молодые, П - пожилые. "Результаты, полученные с вирусами гриппа А(НЗ№) и В, близки по значению.

10 0

Таким образом, и ЖГВ, и ИГВ обладали очень слабыми индуктивными свойствами в отношении синтеза 1Ь-4 вне зависимости от возраста людей. В отличие от данных о продукции ПТ^у, которые хорошо согласовывались с интенсивностью развития клеточного иммунитета на введение ЖГВ и ИГВ, количественные характеристики уровня 1Ь-4 в поствакцинальный период не соответствовали результатам стимуляции этими препаратами гуморального иммунного ответа.

Поствакцинальный иммунный ответ у детей.

Основная задача этого раздела работы заключалась в сравнении способности взрослого и детского вариантов ЖГВ индуцировать системный и локальный иммунитет у детей дошкольного (3-6 лет) и школьного (7-14 лет) возраста. Дети 7-14 лет были привиты ЖГВ для взрослых однократно и ЖГВ для детей двукратно, а дети 3-6 лет - взрослым вариантом ЖГВ однократно. В каждую группу входило от 33 до 80 человек.

Концентрации антигемагглютинирующих антител в поствакцинальный период у школьников, привитых взрослым и детским вариантом ЖГВ, существенно не различалась (р>0,05). У детей 3-6 лет, получивших ЖГВ для взрослых, поствакцинальный уровень сывороточных антител был сопоставим с аналогичным показателем у детей 7-14 лет (р>0,05), (рис. 8).

Рис. 8. Уровень

7-14 лет 3-6 лет

Г« г1 ГИ 1.

ЖГВ 1 ЖГВ II Плацебо ЖГВ I Плацебо

сывороточных антител у детей после

иммунизации ЖГВ для взрослых (ЖГВ I) и ЖГВ для детей (ЖГВ II) По оси ординат - СГТ антител в РТГА к вирусу гриппа А(НШ1)*. Белые столбики - до вакцинации, черные столбики - через 21 день после вакцинации ЖГВ I или ревакцинации ЖГВ П.

"Результаты, полученные с вирусами гриппа А(НЗ№) и В, близки по значению.

Не было выявлено достоверных отличий между поствакцинальными значениями СГТ секреторных 1§А-антител у детей 7-14 лет, вакцинированных взрослой и детской ЖГВ (рис. 9). У детей 3-6 лет, привитых ЖГВ для взрослых, поствакцинальный уровень локальных антител был достоверно ниже значений

этого показателя у школьников (р<0,01).

Рис. 9. Уровень секреторных 1{>А-

антител у детей после иммунизации ЖГВ для взрослых (ЖГВ I) и ЖГВ для детей (ЖГВ II) По оси ординат - СГТ секреторных 1цА-антител к вирусу гриппа А(НШ1)\ Белые столбики - до вакцинации, черные столбики - через 21 день после вакцинации ЖГВ I или ревакцинации ЖГВ П. "Результаты, полученные с вирусами гриппа А(НЗН2) и В, близки по значению.

Полученные результаты свидетельствуют, что иммуногенная активность ЖГВ для взрослых (ЖГВ I) не уступала иммуногенной активности ЖГВ для детей (ЖГВ II).

Обе вакцины обладали высокой профилактической эффективностью [Григорьева Е.П. и др., 2002].

Таким образом, ЖГВ для взрослых и ЖГВ для детей оказались ареактогенными препаратами, обладающими высокой иммуногенностью и профилактической эффективностью при применении среди детей. В то же время технологические и социальные преимущества однократного введения ЖГВ для взрослых детям 3-14 лет позволяют признать этот метод антигенной стимуляции наиболее приемлемым.

70 60 -50 -

7-14 лет

3-6 лет

ЖГВ I ЖГВ II Плацебо ЖГВ I Плацебо

ВЫВОДЫ

1. ЖГВ имеет преимущество перед ИГВ в индукции у пожилых людей клеточного пролиферативного иммунного ответа, в стимуляции синтеза Thl-цитокинов (IFNy, IL-2) in vitro и локальных IgA-антител.

2. Поствакцинальный уровень пролиферативной активности лимфоцитов и локальных IgA-антител у пожилых людей, иммунизированных ЖГВ или ЖГВ+ИГВ, снижается быстрее, чем уровень сывороточных антител. После вакцинации ЖГВ в сочетании с ИГВ ревакцинация ЖГВ не повышает показатели клеточного и гуморального иммунитета.

3. Имеются возрастные отличия в иммуногенности ЖГВ и ИГВ. В отличие от ЖГВ, ИГВ активно стимулирует клеточный иммунный ответ и продукцию IFNy in vitro только у молодых, но не у пожилых лиц. ЖГВ уступает ИГВ в индукции сывороточных антител у молодых людей.

4. Раздельное и сочетанное введение ЖГВ и ИГВ не индуцирует продукцию П12-цитокина IL-4 in vitro ни у молодых, ни у пожилых лиц.

5. У детей 7-14 лет не обнаружены отличия в активности индукции циркулирующих и локальных антител при однократном введении ЖГВ для взрослых и двукратном введении ЖГВ для детей.

6. Наиболее эффективным способом стимуляции поствакцинального противогриппозного иммунитета для лиц старше 65 лет является сочетанное однократное введение ЖГВ+ИГВ, а для детей старше 3-х лет - однократная прививка взрослым вариантом ЖГВ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Оригинальные статьи

1. Сравнительная оценка безвредности, иммуногенной активности и профилактической эффективности взрослого и детского вариантов живой гриппозной вакцины у школьников 7-14 лет / Григорьева Е.П., Дешева Ю.А., Донина С.А., Найхин А.Н., Рекстин А.Р., Баранцева И.Б., Завиткова Е.А., Москвичева Т.М., Жаворонков В.Г., Руденко Л.Г. // Вопр. вирусологии. - 2002. -№4. - С. 24-27.

2. Иммунный ответ на живую гриппозную вакцину / Найхин А.Н., Рекстин А.Р., Баранцева И.Б., Донина С.А., Дешева Ю.А., Григорьева Е.П., Киселева И.В., Руденко Л.Г. // Вестник РАМН. - 2002. - №12. - С. 24-28.

3. Гуморальный и локальный иммунный ответ на гриппозные вакцины у пожилых и молодых людей / Баранцева И.Б., Найхин А.Н., Донина С.А., Степанова Л.А., Рекстин А.Р., Григорьева Е.П., Дешева Ю.А., Руденко Л.Г. // Вопр. вирусологии. - 2003. - № 2. - С. 32-36.

4. Локальный иммунный ответ на живую гриппозную вакцину у детей, молодых и престарелых лиц / Донина С.А., Найхин А.Н., Григорьева Е.П., Дешева Ю.А., Баранцева И.Б., Рекстин А.Р., Руденко Л.Г. // Вопр. вирусологии. - 2003. - №2. - С. 29-31.

5. The humoral response to live and inactivated influenza vaccines administered alone and in combination to young adults and elderly / Stepanova L., Naykhin A., Kolmskov C., Jonson G., Barantseva I., Bichurina M., Kubar O., Linde A. // J. Clin. Virol. - 2002. - V.24. - P. 193-201.

Тезисы докладов

6. Системный и локальный иммунные ответы на живые и инактивированные гриппозные антигены у молодых и пожилых людей / Найхин А.Н., Баранцева И.Б., Руденко Л.Г. // Мат. науч. конф., поев. 110-летию ИЭМ, СанктПетербург. -2000.-С. 115.

7. Поствакцинальный системный и локальный иммунный ответ людей на живые и инактивированные гриппозные вакцины / Баранцева И.Б., Найхин А.Н., Рекстин А.Р., Донина С.А., Дешева Ю.А., Григорьева Е.П., Руденко Л.Г. // Мат. Всероссийской науч. конф., поев. 100-летию со дня рожд. акад. A.A. Смородинцева, Санкт-Петербург. - 2001 - С.79-81.

8. Продукция Thl- и ТЬ2-маркерных цитокинов у людей после иммунизации живыми и инактивированными гриппозными антигенами / Баранцева И.Б., Найхин А.Н., Рекстин А.Р., Донина С.А., Дешева Ю.А., Руденко Л.Г. // Мед.

иммунология. - 2001. - Т.З, №2. - С. 212.

9. Индукция гуморального и локального иммунного ответа после иммунизации взрослым вариантом живой гриппозной вакцины детей 3-6 лет / Дешева Ю.А., Донина С.А., Григорьева Е.П., Баранцева И.Б., Суховецкая В.Ф., Дриневский В.П., Ерофеева М.К., Найхин А.Н., Руденко Л.Г. // Мед. иммунология. - 2001. -Т.З, №2. - С.218.

10. Human post-vaccination immune response to influenza virus in dependent of inoculated antigen form and application / Naykhin A.N., Donina S.A., Rekstin A.R., Desheva J.A., Grigor'eva E.P., Barantseva I.B., Rudenko L.G. // Abstr. Options for the Control of Influenza IV, Hersonissos. - 2000. - P. 118. - P2-1.

11. The comparative safety and efficacy of live influenza cold-adapted vaccine derived from A/Leningrad/134/17/57, A/Leningrad/134/47/57 and B/USSR/60/69 master strains in schoolchildren aged 7-14 years / Grigor'eva E.P., Barantseva I.B., Donina S.A., Rekstin A.R., Rudenko L.G. // Abstr. Options for the Control of Influenza IV, Hersonissos. - 2000. - P. 120. - P2-7.

12. Reactogenicity and immunogenicity of trivalent cold-adapted reassortant influenza vaccines in children 1-6 years old / Desheva J., Drinevsky V., Donina S., Erofeeva M., Kiseleva I., Klimov A., Barantseva I., Naykhin A., Rudenko L. // Abstr. Options for the Control of Influenza IV, Hersonissos. - 2000.- P. 120. - P2-8.

13. Local immune response to live cold-adapted reassortant influenza vaccine in children, adults and elderly persons / Barantseva I., Naykhin A.N., Donina S.A., Grigorieva E.P., Desheva J.A., Rekstin A.R., Rudenko L.G. // Abstr. Xllth International Congress of Virology, Paris. - 2002. - P. 267. - V-791.

Отпечатано в ООО «АиБ» 190013, Санкт-Петербург, ул. Рузовская, д.9 Подписано в печать 03.11.2003г. Заказ № 1074, Тираж 80 экз. Бумага офсетная, печать ризограф

I !

»leslf^

Оглавление диссертации Баранцева, Ирина Борисовна :: 2003 :: Санкт-Петербург

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Факторы специфического противогриппозного иммунитета

1.1.1. Гуморальный иммунный ответ

1.1.2. Клеточный иммунный ответ

1.1.3. Цитокины, участвующие в развитии противогриппозного иммунитета

1.2. Основные факторы, влияющие на поствакцинальный иммунный ответ

1.2.1. Влияние возраста на иммунный ответ, индуцируемый

ЖГВиИГВ

1.2.2. ТЫ/Т112-дихотомия в регуляции поствакцинального иммунного ответа

2. Материалы и методы исследования

2.1. Вакцины

2.2. Вакцинируемые контингента и схемы иммунизации

2.3. Определение уровня антигемагглютинирующих сывороточных антител

2.4. Определение уровня сывороточных антител разных классов и подклассов

2.5. Определение IgA-антител в СВДП

2.6. Оценка пролиферативной активности лимфоцитов

2.7. Определение уровня цитокинов

2.8. Статистические методы

3. Результаты собственных исследований

3.1. Поствакцинальный иммунный ответ у пожилых людей старше 65 лет

3.1.1. Гуморальный иммунный ответ

3.1.2. Клеточный иммунный ответ

3.2. Сравнительный анализ поствакцинального иммунного ответа у пожилых и молодых людей

3.2.1. Гуморальный иммунный ответ

3.2.2. Клеточный иммунный ответ

Поствакцинальный иммунный ответ у детей Обсуждение полученных результатов Выводы

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Баранцева, Ирина Борисовна, автореферат

Актуальность проблемы. Грипп в глобальном масштабе наносит значительный урон здоровью населения и экономике. В настоящее время одним из самых эффективных методов борьбы с этой инфекцией является вакцинация [83, 128, 147]. В США и странах Запада более 30 лет применяется инактивированная парентеральная гриппозная вакцина (ИГВ). Альтернативой ИГВ является отечественная живая холодоадаптированная реассортантная интраназальная гриппозная вакцина (ЖГВ), разработанная в ГУ НИИЭМ РАМН в середине 70-х гг. прошлого века [1]. Позднее подобная, но не идентичная вакцина создана в США [129].

Важнейшим критерием качества вакцин является их иммуногенность. Количественные показатели иммуногенности напрямую связаны с возрастной недостаточностью иммунной системы у детей и пожилых лиц. С точки зрения тяжести и частоты поражения гриппом эти возрастные контингенты отнесены к группам повышенного риска [74, 154]. Поэтому разработка для них оптимальных схем вакцинации особенно актуальна. В этом направлении ведутся активные исследования [36, 77, 116, 139, 166].

Показано, что иммунизация людей старше 65 лет стандартной дозой ИГВ низкоэффективна в отношении индукции у них системного и локального иммунитета [81, 94]. Сочетанная иммунизация ЖГВ+ИГВ приводит к усилению гуморального иммунного ответа у престарелых людей [165]. В 1994-1998гг. проведено специальное российско-американское исследование по сравнению способности разных схем иммунизации ЖГВ и ИГВ индуцировать гуморальный иммунный ответ у людей старше 65 лет. В итоге среди изученных шести схем вакцинации оптимальным вариантом признано сочетанное введение ЖГВ+ИГВ с последующей ревакцинацией ЖГВ через 1 месяц [5, 14, 147]. Однако в то время авторам не удалось исследовать ряд важных моментов. Так, они не определяли клеточный иммунитет и уровень продукции основных иммунорегуляторных цитокинов, не изучали в сравнительном плане пролонгированность разных факторов поствакцинального иммунитета и их стимуляционную сочетанность, не оценивали отдельно иммуногенную значимость вакцинации и ревакцинации и, наконец, не сопоставляли количественные параметры поствакцинального иммунного ответа у молодых и пожилых лиц.

Как уже упоминалось, помимо пожилых людей к группе повышенного риска по заболеваемости гриппом относятся дети. В России до проведения настоящего исследования эти контингенты прививались двукратно специальным детским вариантом ЖГВ, который отличается от взрослого варианта донором аттенуации, используемым при создании вакцинных штаммов вирусов гриппа А [2]. Иммуногенность ЖГВ для детей оценена только с позиции стимуляции сывороточных антител. Вопрос о способности этого препарата индуцировать локальный иммунитет остается открытым. Кроме того, наличие двух доноров аттенуации создает определенные трудности при производстве ЖГВ, а двукратная иммунизация детей приводит к снижению числа ревакцинируемых по отношению к числу вакцинируемых. В этой связи был необходим поиск упрощенной схемы противогриппозной вакцинации детей.

Цель исследования: изучение особенностей развития клеточного и гуморального иммунного ответа на ЖГВ и ИГВ у людей разных возрастов.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи.

Научная новизна работы

- Впервые осуществлено исследование клеточных и ^моральных факторов противогриппозного иммунитета у молодых и пожилых людей при комбинированной и раздельной иммунизации ЖГВ и ИГВ.

- Впервые проведен сравнительный анализ продукции циркулирующих и локальных антител у детей 3-6 и 7-14 лет после иммунизации взрослым и детским вариантом ЖГВ. Практическая значимость работы

Основные положения, выносимые на защиту

3. Поствакцинальный иммунный ответ пожилых людей можно корригировать с помощью подбора оптимальной схемы противогриппозной иммунизации. У лиц преклонного возраста сочетанная иммунизация ЖГВ+ИГВ повышает показатели гуморального и клеточного иммунитета до уровня, наблюдаемого у молодых людей, получивших аналогичную прививку. 4. Оптимальным методом стимуляции поствакцинального противогриппозного иммунитета для детей 3-14 лет является однократное введение взрослого варианта ЖГВ, а для лиц старше 65 лет - сочетанная однократная иммунизация ЖГВ+ИГВ.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на III Съезде иммунологов и аллергологов СНГ (Сочи, 2000) - доклад занял I место на конкурсе стендовых докладов; на Всероссийской научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика А.А. Смородинцева (Санкт-Петербург, 2001) - доклад занял III место на конкурсе молодых ученых; на V научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 2001); на XII Международном конгрессе вирусологов (Париж, 2002).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, в том числе 5 статей и 8 тезисов.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы. Диссертация изложена на 127 страницах текста, включающего 13 таблиц и 12 рисунков. Список цитируемой литературы включает 23 отечественных и 157 иностранных источников.

Заключение диссертационного исследования на тему "Возрастные особенности развития иммунного ответа людей на живую и инактивированную гриппозные вакцины"

ВЫВОДЫ

4. Раздельное и сочетанное введение ЖГВ и ИГВ не индуцирует продукцию ТЬ2-цитокина IL-4 in vitro ни у молодых, ни у пожилых лиц.

6. Наиболее эффективным способом стимуляции поствакцинального противогриппозного иммунитета для лиц старше 65 лет является сочетанное однократное введение ЖГВ+ИГВ, а для детей старше 3-х лет -однократная прививка взрослым вариантом ЖГВ.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2003 года, Баранцева, Ирина Борисовна

1. Александрова Г.И. Живая гриппозная вакцина в СССР: разработка, изучение и практическое использование / В кн.: Новое в эпидемиологии и профилактике вирусных инфекций. Л., 1986. - С. 66-83.

2. Александрова Г.И. Живая вакцина против гриппа / Г.И. Александрова, А.И. Климов. СПб: Наука, 1994. - 151 с.

3. Влияние реаферона на функциональную активность лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови добровольцев / Д.И. Габрилович и др. //ЖМЭИ. 1988. - №3. - С. 61-65.

4. Горев Н.Е. Изучение защитной роли антител к поверхностным антигенам вируса гриппа при экспериментальной гриппозной инфекции / Н.Е Горев, Т.С.Титова, Г.И. Коровина // В кн.: Проблема гриппа и острых респираторных заболеваний. Л., 1977. - С. 85-92.

5. Дешева Ю.А. Разработка оптимальной схемы иммунизации против гриппа лиц пожилого возраста: Автореф. дис. на соиск. уч. ст. канд. мед. наук. -СПб., 1998.-21 с.

6. Донина С.А. Локальный иммунный ответ и функциональная активность антител при гриппозной инфекции и иммунизации гриппозными вакцинами: Автореф. дис. на соиск. уч. ст. канд. мед. наук. СПб., 1997. -22 с.

7. Железникова Г.Ф. Механизмы иммунного ответа при острых респираторных вирусных инфекциях // Вопр. вирусол. 1997. - №4. - С. 153-157.

8. Карпухин Г.И. Грипп. СПб.: Гиппократ, 2001. - 359 с.

9. Медуницын Н.В. Вакцинология. М., 1999. - 272 с.

10. Ю.Методические указания к работе опорных баз Всесоюзного центра по гриппу и ОРЗ. Л., 1986. - С. 40-42.

11. Найхин А.Н. Закономерности формирования коллективного иммунитета к гриппу и принципы сероэпидемиологического надзора за этой инфекцией: Автореф. дис. на соиск. уч. ст. д. м.н. Л., 1986. - 35 с.

12. Моноклональная иммуноферментная тест-система для оценки секреторного иммунитета к вирусам гриппа А и В / А.Н. Найхин и др. // Вопр. вирусол. 1997. - №5. - С. 212-215.

13. Изучение в ИФА поствакцинального секреторного иммунитета к вирусам гриппа А и В с помощью разработанной моноклональной иммуноферментной тест-системы / А.Н. Найхин и др. // Вопр. вирусол.1997.-№6.-С. 271-275.

14. Формирование гуморального и секреторного иммунитета у лиц пожилого возраста при различных схемах иммунизации гриппозными вакцинами / А.Н. Найхин и др. // Вопр. вирусол. 1998. - №1. - С. 20-24.

15. Иммунный ответ лиц пожилого возраста в зависимости от числа ежегодных сезонных иммунизаций живой и инактивированной гриппозными вакцинами / А.Н. Найхин и др. // Вопр. вирусол. 1998. - №3. -С. 130-134.

16. Приймяги Л.С. Защита детей от гриппа и других острых респираторных заболеваний / Л.С. Приймяги, А.С. Шадрин, Р.И. Васильева. Таллинн, 1987.

17. Влияние повторной иммунизации инактивированными гриппозными вакцинами на формирование специфического и неспецифических факторов иммунитета / Л.Г. Руденко и др. // Журн. микробиол. 1984. - №12. - С. 98101.

18. Смородинцев А.А. Основы противовирусного иммунитета / А.А. Смородинцев, Т.Я. Лузянина, Ал.А. Смородинцев. Л., 1975. - 311 с.

19. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты. СПб.: НТФФ Полисан,1998.- 111 с.

20. Исследование иммуноглобулинов и других белков в секретах человека / Е.В. Чернохвостова и др. М., 1987. - 33 с.

21. Иммунология гриппа / Я.С. Шварцман, И.Х. Шуратов, А.Н. Найхин, А.Т. Исмагулов. Алма-Ата: Наука, 1985. - 144 с.

22. Human influenza resulting from aerosol inhalation / R.H. Alford et al. // Proc. Soc. Exp. Biol. 1966. - Vol. 122, №3. - P. 800-805.

23. Characterization of mouse nasal lymphocytes isolated by enzymatic extraction with collagenase / H. Asanuma et al. // J. Immunol. Meth. 1995. - Vol. 187, №1.-p. 41-51.27.1solation and characterization of mouse nasal-associated lymphoid tissue / H.

24. Clinical and immunological characteristics of the emulsion form of inactivated influenza vaccine delivered by oral immunization / S.S. Avtushenko et al. // Biotechnology. -1996. Vol. 44, №1-3. - P. 21-28.

25. Balkovic E.S. Immunoglobulin G subclass antibody responses of mice to influenza virus antigens given in different forms / E.S. Balkovic, J.A. Florack, H.R. Six // Antiviral Research. 1987. - Vol. 8, №3. - P. 151-160.

26. Baumgarth N. In vivo blocade of gamma interferon affects the influenza virus-induced humoral and the local cellular immune response in lung tissue / N. Baumgarth, A. Kelso // J. Virol. 1996. - Vol. 70, №7. - P. 4411-4418.

27. The efficacy of live attenuated, cold-adapted, trivalent, intranasal influenza virus vaccine in children / R. Belshe et al. // New Engl. Med. 1998. - Vol. 338, №20.-P. 1405-1412.

28. Bergman K.C. Stimulation of secretory antibody following oral administration of antigen / K.C. Bergman, R.H. Waldman // Rev. Infect. Dis. 1988. - Vol. 10, №5. - P. 939-950.

29. Cytokine production after influenza vaccination in a healthy elderly population / E.D. Bernstein et al. // Vaccine. 1998. - Vol. 16, №18. - P. 1722-1731.

30. Antibody induction by influenza vaccines in the elderly: a review of literature / W.E.P. Beyer et al. // Vaccine. 1989. - Vol. 7, №5. - P. 385-394.

31. IL-12 in conjunction with dendritic cells enhances antiviral CD8+ CTL responses in vitro / N. Bhardwaj et al. // J. Clin. Invest. 1996. - Vol. 98, №3. -P. 715-722.

32. Biddison W.E. T cell subpopulations requered for the human cytotoxic T lymphocyte response to influenza virus: Evidence for T cell help / W.E. Biddison, S.O. Sharrow, G.M. Shearer // J. Immunol. 1981. - Vol. 127, №2. -P. 487-491.

33. Influenza A virus specific T cell immunity in humans during aging / A.C.M. Boon et al. // Abstr. the First European Influenza Congress. October, 2002. - P. 48, P-S2-3.

34. Bot A. Protective role of gamma interferon during the recall response to influenza virus / A. Bot, S. Bot, C.A. Bona // J. Virol. 1998. - Vol. 72, №8. - P. 6637-6645.

35. Brandtzaeg P. Molecular and cellular aspects of the secretory immunoglobulin system//APMIS.- 1995.- Vol. 103, №1.-P. 1-19.

36. Human T cell recognition of influenza A nucleoprotein / Brett S.J. et al. // J. Immunol. 1991. - Vol. 147, №3. - P. 984-991.

37. M.L. Clements, B.R. Murphy // J. Clin. Microbiol. 1986. - Vol. 23, №1. - p. 66-72.

38. Comparison of heterotypic protection against influenza A/Taiwan/86 (H1N1) by attenuated and inactivated vaccines to A/Chile/83-like viruses / R.D. Clover et al. // J. Infect. Dis. -1991. Vol. 163, №2. - P. 300-304.

39. Cytokines and the Acute Phase Response to Influenza Virus in Mice / C.A. Conn et al. // Am. J. Physiol. 1995. - Vol. 268, №1. - P. 78-84.

40. Crowe J.E. The role of antibodies in respiratory viral immunity // Seminars in Virology. 1996. - Vol.7. - P. 273-283.

41. Davis S.S. Nasal vaccines // Adv. Drug Deliv. Rev. 2001. - Vol. 51, №1-3. p. 21-42.

42. Doherty P.C. T-cells and viral infections // Brit. Med. Bull. 1985. - Vol. 41, №1. - P. 7-14.

43. Doherty P.C. Establishment and persistance of virus-specific CD4+ and CD8+ T cell memory / P.C. Doherty, D.G. Topham, R.A. Tripp // Immunol. Rev. -1996.-Vol. 150.-P. 23-44.

44. Dolin R. Lymphocyte blastogenic responses to influenza virus antigens after influenza infection and vaccination in humans / R. Dolin R., B.R. Murphy, E.A. Caplan // Ibid. 1978. - Vol. 19, №3. - P. 867-874.

45. A randomized controlled trial of cold-adapted and inactivated vaccines for prevention of influenza A disease / K.M. Edwards et al. // J. Infect. Dis. 1994. -Vol. 169, №1.- P. 68-76.

46. E1-Madhun The effect of age and natural priming on the IgG and IgA subclass responses after parenteral influenza vaccination / A.S. El-Madhun, R.J. Cox, L.R. Haaheim //J. Infect. Dis. 1999. - Vol. 180, №4. - P. 1356-1360.

47. HLA-restricted virus-specific cytotoxic T lymphocyte responses to live and inactivated influenza vaccines / F.A. Ennis et al. // Lancet. 1981. - Vol. 2. - P. 887-891.

48. Ennis F.A. Antibody and cytotoxic T lymphocyte responses of humans to live and inactivated influenza vaccines / F.A. Ennis, Qi. Yi-Hua, C. Schild // J. Gen. Virol. 1982. - Vol. 58, №2. - P. 273-281.

49. Ernst P.B. Isotype regulation at mucosal surfaces: a case for T-cell-dependent antibody responses / P.B. Ernst, J. Bienenstock // Ann. Inst. Pasteur: Immunology. 1988. - Vol. 139, №2. - P. 199-203.

50. The covalent linkage of secretory component to IgA. Structure of slgA / E. Fallgreen-Gebauer et al. // Biol. Chem. Hoppe. Seyler. 1993. - Vol. 374, №11. -P. 1023-1028.

51. Cathepsin E in follicle associated epithelium of intestine and tonsils: localization to M cells and possible role in antigen processing / G. Finzi et al. // Histochemistry. 1993. - Vol. 99, №3. - P. 201-211.

52. Fleischer B. Recognition of viral antigens by human influenza A virus-specific T lymphocyte clones / B. Fleischer, H. Becht, R. Rott // J. Immunol. 1985. -Vol. 135, №4. - P. 2800-2804.

53. French M.A. An investigation into the effect of the IgG antibody system on the susceptibility of IgA-deficient patients to respiratory tract infections / M.A. French, G. Harrison // Clin. Exp. Immunol. 1986. - №3. - P. 640-647.

54. Fujimura Y. Evidence of M cells as portals of entry for antigens in the nasopharyngeal lymphoid tissue of humans // Virchows Arch. 2000. - Vol. 436, №6. - P. 560-566.

55. The role of interferon in influenza virus tissue tropism / A. Garcia-Sastre et al. // J. Virol. 1998. - Vol. 72. - P. 8550-8558.

56. Human CD4+ T-Cell Repertoire of Responses to Influenza A Virus Haemagglutinin after Recent Natural Infection / C.M. Gelder et al. // J. Virol. -1995. Vol. 69, №12. - P. 7497-7506.

57. Glezen W.P. Serious morbidity and mortality associated with influenza epidemics // Epidemiol. Rev. 1982. - Vol. 4. - P. 25-44.

58. Gorse G.J. Local and systemic antibody responses in high-risk adults given live attenuated and inactivated influenza A virus vaccines / G.J. Gorse, R.B. Belshe, N.J. Munn // J. Clin. Microbiol. 1988. - Vol. 26. - P. 911-918.

59. Gorse G.J. Enhanced Lymphoproliferation to Influenza A Virus Following Vaccination of Older, Chronically 111 Adults with Live-attenuated Vaccine / G.J. Gorse, R.B. Belshe// Scand. J. Infect. Dis. -1991. Vol. 23, №1. - P. 7-17.

60. Gorse G.J. Superiority of live attenuated compared with inactivated influenza A virus vaccines in older, chronically ill adults / G.J. Gorse, R.B. Belshe, N.J. Munn// Chest. -1991. Vol. 100, №4. - P. 977-984.

61. Induction of mucosal antibodies by live attenuated and inactivated influenza vaccines in the chronically ill elderly / G.J. Gorse et al. // J. Infect. Dis. 1996. -Vol. 173,№2.-P.285-290.

62. Identification of the viral molecules by influenza specific human cytotoxic T lymphocytes / F.M. Gotch et al. // J. Exp. Med. 1987. - Vol. 153. - P. 910-923.

63. Immunization of Elderly People with High Doses of Influenza Vaccine / P.A. Gross et al. // JAGS. 1988. - Vol. 36, №3. - P. 209-212.

64. Haaijman J.J. Vaccine-related determinants of the interleukine-2 response to influenza vaccination in healthy young and elderly adults // Age. 1987. - Vol. 10.-P. 110-121.

65. Hannoun C. Immunogenicity of vaccines and protection against influenza // Abstr. the First European Influenza Congress. October, 2002. - P. 82, P-W8-9.

66. Enhancement of immune response to influenza HA vaccine by microparticle resin / M. Higaki et al. // Vaccine. 1998. - Vol. 16, №7. - P. 741-745.

67. Antibody prevalence and immunoglobulin IgG subclass pattern to Norwalk virus in Sweden / J. Hinkula et al // J. Med. Virol. 1995. - Vol. 47, №1. - P. 52-57.

68. Nasal immune system: distinctive ThO and Thl/Th2 type environments in murine nasal-associated lymphoid tissues and nasal passage, respectively / T. Hiroi et al. // Eur. J. Immunol. 1998. - Vol. 28, №10. - P. 3346-3353.

69. Hocart M.J. Serum IgG subclass responses of humans to inactivated and live influenza vaccine compared to natural infections with influenza A / M.J. Hocart, J.S. Mackenzie, G.A. Stewart // J. Med. Virol. 1990. - Vol. 30, №2. - P. 92-96.

70. Degeneracy of T cell receptor recognition of an influenza virus haemagglutinin epitope restricted by HLA-DQ and -DR class II molecules / C.M. Jones, R.A. Lake, J.R. Lamb, A. Faith // Eur. J. Immunol. 1994. - Vol. 24, №5. - P. 11371142.

71. Failure of influenza vaccination in the aged / G. Keren et al. // J. Med. Virol. -1988.-Vol. 25, №1,-P. 85-89.

72. Comparison of US inactivated split-virus and Russian live attenuated cold-adapted trivalent unfluenza vaccines in Russian schoolchildren / A.S. Khan et al. // J. Infect. Dis. 1996. - Vol. 173, №2. - P. 453-456.

73. Kos F.J. Role of Natural Killer Cells in the Generation of Influenza Virus-Specific Cytotoxic T cells / F.G. Kos, E.G. Engleman // Cell. Immunol. 1996. -Vol. 173, №1.-P. 1-6.

74. The role of nasopharyngeal lymphoid tissue / C.F. Kuper et al. // Immunology Today. 1992. - Vol. 13, №6. - P. 219-224.

75. Cascade of fever production in mice infected with influenza virus / M. Kurokawa et al. // J. Med. Virol. 1996. - Vol. 50, №2. - P. 152-158.

76. Rapid effector function in CD8+ memory T cells / A. Lalvani et al. // J. Exp. Med. 1997. - Vol. 186, №6. - P. 859-865.

77. Lamb J.R. Human T cell recognition of influenza viral antigens and class II MHC gene products / J.R. Lamb, D.D. Eckels // J. Cell. Biochem. 1985. -Suppl. 9. - P. 291.

78. Lazar A. Humoral and cellular immune responses of seronegative children vaccinated with cold-adapted influenza HK/123/77 (H1N1) recombinant virus / A. Lazar, N. Okabe, P.F. Wright // Infect. Immunol. 1980. - Vol. 27, №3. - P. 862-866.

79. NK and T CD4 cells producing interferon-gamma after influenza antigen stimulation in adult and old subjects before and after 1999/00 influenzavaccination / E. Lepri et al. // Abstr. the First European Influenza Congress. -October, 2002. P. 68.

80. Liang B. Nasal-associated lymphoid tissue is a site of long-term virus-specific antibody production following respiratory virus infection of mice / B. Liang, L. Hyland, S. Hon // J. Virol. 2001. - Vol. 75, №11. - p. 5416-5420.

81. Lin Y. Biological properties of an influenza A virus specific killer T cell clone / Y. Lin, B.A. Askonas // J. Exp. Med. 1981. - Vol. 154, №2. - P. 225234.

82. Lukacher A.E. In vivo effector function of influenza virus specific cytotoxic T lymphocyte clones is highly specific / A.E. Lukacher, V.L. Braciale, T.J. Braciale // J. Exp. Med. 1984. - Vol. 160, №3. - P. 814-826.

83. Specific IgG subclasses reactivity in herpes simplex encephalitis / T. Mathiesen, A. Linde, E. Olding-Strenkvist, B. Wahren // J. Neurol. 1988. -Vol. 235, №7. - P. 400-406.

84. Mazanec M.B. Intracellular neutralization of influenza virus by IgA anti-HA monoclonal antibodies / M.B. Mazanec, C.L. Coudret, D.R. Fletcher // J. Virol. 1995. - Vol. 69, №2. - P. 1339-1344.

85. Mbawuike I.N. Enhancement of the protective efficacy of inactivated influenza A virus vaccine in aged mice by IL-2-liposomes / I.N. Mbawuike, P.K. Wyde, P.M. Anderson // Vaccine. 1990. - Vol. 8, №4. - P. 347-352.

86. Mbawuike I.N. Diminished Influenza A Virus-Specific MHC Class I-Restricted Cytotoxic T-lymphocyte Activity among Elderly Persons / I.N. Mbawuike, A.R. Lange, R.B. Couch // Viral Immunol. 1993. - Vol. 6, №1. - P. 55-64.

87. Reversal of age-related deficient influenza virus-specific CTL responses and IFN-gamma production by monophosphoryl lipid A / I.N. Mbawuike et al. // Cell. Immunol. 1996. - Vol. 173, №1. - P. 64-78.

88. Cytotoxic T lymphocyte responses of infants after natural infection or immunization with live cold-recombinant or inactivated influenza A virusvaccine / I.N. Mbawuike et al. // J. Med. Virol. 1996. - Vol. 50, №2. - P. 105111.

89. Human interleukin-12 enhances interferon-gamma-producing influenza-specific memory CD8+ cytotoxic T lymphocytes / I.N. Mbawuike et al. // J. Infect. Dis. 1999. - Vol. 180, №5. - P. 1477-1486.

90. Age-Related Decline in IL-2 Production in Response to Influenza Vaccine / J.E. McElhaney etal. //JAGS. 1990. - Vol. 38, №6. - P. 652-658.

91. The effect of influenza vaccination on IL-2 production in healthy elderly: implications for current vaccination practices / J.E. McElhaney et al. // J. Gerontol. 1992. - Vol. 47, №1. - P. 3-8.

92. Immune response to influenza vaccination in institutionalized elderly: effect on different T-cell subsets / J.E. McElhaney et al. // Vaccine. 1998. - Vol. 16, №4. - P. 403-409.

93. Responses to influenza vaccination in different T-cell subsets: a comparison of healthy young and older adults / J.E. McElhaney et al. // Vaccine. 1998. -Vol. 16,№18.-P. 1742-1747.

94. HLA restriction of cell mediated lysis of influenza virus infected human cells / A.J. McMichael et al. // Nature. 1977. - Vol. 270, №5637. - P. 524-526.

95. Cytotoxic T cell immunity to influenza / A J. McMichael, F.M. Gotch, G.R. Noble, P.A. Beare//New Engl. J. Med. 1983. - Vol. 309, №1. - P. 13-17.

96. Recognition of Influenza A Virus Nucleoprotein by Human Cytotoxic T Lymphocytes / A.J. McMichael et al. // J. Gen. Virol. 1986. - Vol. 67, №4. - P. 719-726.

97. McMichael A.J. Cytotoxic T lymphocytes specific for influenza A virus // Current Topics in Microbiol. Immunol. 1994. - Vol. 189. - P. 75-91.

98. Mestecky J. The common mucosal immune system and current strategies for induction of immune responses in external secretions // J. Clin. Immunol. -1987. Vol. 7, №4. - P. 265-276.

99. Monteiro J.M. Role of interleukin-12 in primary influenza virus infection / J.M. Monteiro, C. Harvey, G. Trinchieri // J. Virol. 1998. - Vol. 72, №6. - P. 4825-4831.

100. Interleukin-4 causes delayed virus clearance in influenza virus-infected mice / T.M. Moran et al. // J. Virol. 1996. -Vol. 70, №8. - P. 5230-5235.

101. Th2 resonse to inactivated influenza virus can be converted to Thl responses and facilitate recovery from heterosubtypic virus infection / T.M. Moran, H. Park, A. Fernandez-Sesma, J. Schulman //J. Infect. Dis. 1999. - Vol. 180, №3. - P. 579-585.

102. Mosmann T.R. Thl and Th2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties / T.R. Mosmann, R.L. Coffman // Ann. Rev. Immunol. 1989. - Vol. 7. - P. 145-173.

103. Mosmann T.R. The expanding universe of T-cell subsets: Thl, Th2 and more / T.R. Mosmann, S. Sad // Immunology Today. 1996. - Vol. 17, №3. - P. 138146.

104. Enhancement of primary and secondary responses to sheep red blood and influenza virus in BALB/c mice by recombinant human interleukin-2 / M. Mumcuoglu et al. // Exp. Hematology. 1996. - Vol. 24, №13. - P. 1516-1520.

105. Current Research on Influenza and other Respiratory Viruses: II International Symposium / F.M. Munoz et al. // Antiviral Research . 2000. - Vol. 46, №2. -P. 91-124.

106. Murphy B.R. Use of live attenuated cold-adapted influenza A reassortant virus vaccines in infants, children, young adults and elderly adults // Infect. Dis. Clin. Pract.2. 1993. - P. 176-181.

107. Effect of age on the human high affinity interleukin-2 receptor of phytohaemagglutinin stimulated peripheral blood lymphocytes / J.E. Nagel, R.K. Chopra, D.C. Powers, W.H. Adler // Clin. Exp. Immunol. 1989. - Vol. 75,№2.-P. 286-291.

108. Reduce IFNy production in elderly people following in vitro stimulation with influenza vaccine and endotoxin / Q. Ouyang et al. // Mech. Age. Dev. 2000. -Vol. 121, №1-3.-P. 131-137.

109. Studies of reactogenicity and immunogenicity of attenuated bivalent cold recombinant influenza type A and inactivated trivalent influenza virus vaccines in infant and young children / P. Piedra et al. // Vaccine. 1993. - Vol. 11, №7. -P. 718-724.

110. Reduced infectivity of cold-adapted influenza A H1N1 viruses in the elderly: correlation with serum and local antibodies / D.C. Powers et al. // JAGS. 1992. -Vol. 40, №2.-P. 163-167.

111. Effect of age on cytotoxic T lymphocyte memory as well as serum and local antibody responses elicited by inactivated influenza virus vaccine / D.C. Powers, R. Belshe // J. Infect. Dis. 1993. - Vol. 167, №3. - P. 584-592.

112. Interleukin-2 production and activity in aged humans / H. Rabinowich et al. // Mech. Age. Dev. 1985. - Vol. 32, №2-3. - P. 213-226.

113. Renegar K.B. Immunoglobulin A mediation of murine nasal anti-influenza virus immunity / K.B. Renegar, P.A. Small // J. Virol. -1991. Vol. 65, №4. - P. 2146-2148.

114. Renegar K.B. In vitro comparison of the biologic activities of monoclonal monomelic IgA, polymeric IgA, and secretory IgA / K.B. Renegar, G.D. Jackson, J. Mestecky // J. Immunol. 1998. - Vol. 160, №3. - P. 1219-1223.

115. Romagnani S. Human Thl and Th2 subsets: doubt no more // Immunology Today. -1991. Vol. 12, №8. - P. 256-257.

116. Immunogenicity and efficacy f Russian live attenuated and US inactivated influenza vaccines used alone and in combination in nursing home residents / L.G. Rudenko et al. // Vaccine. 2001. - Vol. 19, №2-3. - P. 308-318.

117. Cytokine profiles in bronchoalveolar lavage cells from mice with influenza pneumonia: consequences of CD4+ and CD8+ T cell depletion / S.R. Sarawar et al // Reg. Immunol. 1993. - Vol. 5, №3-4. - P. 142-150.

118. Schulman J.L. Protective effects of specific immunity to viral neuraminidase of influenza virus infection / J.L Schulman, M.K. Khakpour, E.D. Kilbowrne // J. Virol. 1968. - Vol.2, №8. - P. 778-786.

119. Schwab R. Loss of МНС-restricted T cell recognition of influenza antigens in aging / R. Schwab, C. Russo, M.E. Weksler // Aging Immunol. Infect. Dis. -1990.-Vol. 2.-P. 111-116.

120. Effect of influenza A virus infection on natural and adaptive cellular immunity / D.P. Sconer et al. // Clin. Immunol. Immunopathol. 1996. - Vol. 79. - P. 294-302.

121. Shakid F. The IgG4 subclass. Basic and Clin. Aspects IgG Subclasses. Basel, 1986.-P. 223-226.

122. Shearer G.M. Thl/Th2 changes in aging // Mech. Age. Dev. 1997. - Vol. 94, №1-3.-P. 1-5.

123. Pandemic versus epidemic influenza mortality: a pattern of changing age distribution / L. Simonsen et al. // J. Infect. Dis. 1998. - Vol. 178, №1. - P. 5360.

124. Investigation of the lymphokine system in elderly individuals / J. Sindermann et al. // Mech. Age. Dev. 1993. - Vol. 70, №1-2. - P. 149-159.

125. Sissons J.G. Antibody-mediated destruction of virus-infecred cells / J.G.

126. Sissons, M.A. Oldstone // Adv. Immunol. 1980. - Vol. 29. - P. 209-260. 157.Sissons J.G. Killing of virus-infected cells by cytotoxic lymphocytes / J.G.

127. Sissons, M.A. Oldstone // J. Infect. Dis. 1980. - Vol. 142. - P. 114-119. 158.The role of antibody and complement in lysing virus-infected cells / J.G. Sissons et al. // Med. Microbiol, and Immunol. - 1982. - Vol. 170, №4. - P. 221227.

128. Tolerance and efficacy of intranasal administration of recombinant pserme interferon in healthy adults / S.J. Sperber et al. // J. Infec. Dis. 1988. - Vol. 158, №1. - P. 166-175.

129. Fine specificity analysis of human influenza specific cloned T cell lines / G. Sterkers et al. // Cell. Immunol. 1985. - Vol. 94, №2. - P. 394-405.

130. Preventon of influenza by the intranasal administration of cold-recombinant, live-attenuated influenza virus vaccine: importance of interferon-gamma production and local IgA-response / T. Tomoda et al. // Vaccine. 1995. - Vol. 13, №2.-P. 185-190.

131. Topham D.J. Clearance of an Influenza A Virus by CD4+ T cells is inefficient in the absence of В cells / D.J. Topham, P.C. Doherty // J. Virol. 1998. - Vol. 72, №1.- P. 882-885.

132. Protective efficacy of combined live intranasal and inactivated influenza A virus vaccines in the elderly / J.J. Treanor et al. // Annals of Internal Medicine. -1992. Vol. 117, №8. - P. 625-633.

133. Treanor J.J. Evaluation of live, cold-adapted influenza A and В virus vaccines in elderly and high-risk subjects / J.J. Treanor, R. Betts // Vaccine. 1998. - Vol. 16,№18.-P. 1756-1760.

134. Treanor J. Respiratory viral infections in the elderly / J. Treanor, A. Falsey // Antiviral Research. 1999. - Vol. 44. - P. 79-102.

135. Tschopp J. Cytotoxic T lymphocyte mediated cytolysis / J. Tschopp, C.V. Jongeneel // Biochemistry. 1988. - Vol. 27, №8. - P. 2641-2646.

136. Hemagglutinin-specific complement-dependent cytolytic antibody response to influenza infection / M.W. Verbonitz et al. // J. Exp. Med. 1978. - Vol. 147, №1. - P. 265-270.

137. Vie H. Decline, with age, in the proportion of mouse T cells that express IL-2 receptors after mitogen stimulation / H. Vie, R.A. Miller // Mech. Age. Dev. -1986. Vol. 33, №3.-P. 313-319.

138. Oral immunization against influenza / R.H. Waldman et al. // Trans. Am. Clin. Climatol. Assoc. 1982. - Vol. 93. - P. 133-140.

139. Wiley D.C. Structural identification of the antibody-binding sites of Hong Kong influenza haemagglutinin and their involvement in antigenic variation / D.C. Wiley, I.A. Wilson, J.J. Skehel // Nature. 1981. - Vol. 289, №5796. - P. 373-378.

140. Induction of antibody-secreting cells and T-helper and memory cells in murine nasal lymphoid tissue / H.Y. Wu et al. // Immunology. 1996. - Vol. 88, №4. - P. 493-500.

141. Wu H.Y. Nasal lymphoid tissue (NALT) as a mucosal immune inductive site / H.Y. Wu, H.H. Nguyen, M.W. Russell // Scand. J. Immunol. 1997. - Vol. 46, №5.-P. 506-513.

142. Wu H.Y. Nasal lymphoid tissue, intranasal immunization, and compartmentalization of the common mucosal immune system / H.Y. Wu, M.W. Russell // Immunol. Res. 1997. - Vol. 16, №2. - P. 187-201.

143. Antibody response of inactivated influenza vaccine in the elderly / M. Yamakoshi et al. // J. Japanese Association Infect. Dis. 1998. - Vol. 72, №4. -P. 358-364.

144. Yap K.L. Transfer of specific cytotoxic T lymphocytes protects mice inoculated with influenza virus / K.L. Yap, G.L. Ada, I.F. McKenzic // Nature. -1978. Vol. 273, №5659. - P. 238-239.

145. Cytotoxic T cells to type A influenza virus; viral haemagglutinin induces A-strain specificity while infected cells confer cross-reactive cytotoxicity / H.J. Zweerink et al. // Eur. J. Immunol. 1977. - Vol. 7, №9. - P. 630-635.1. БЛАГОДАРНОСТИ

146. От всей души благодарю научного руководителя Анатолия Нойевича Найхина за неоценимую помощь и поддержку, оказанную в ходе выполнения представленной работы.

147. Выражаю искреннюю признательность сотрудникам отдела вирусологии ГУ НИИЭМ РАМН, особенно Светлане Александровне Дониной, Андрею Роальдовичу Рекстину, Елене Петровне Григорьевой за активное участие и помощь в освоении новых методик.

148. Искренне благодарю сотрудников НИИ гриппа: Владимира Павловича Дриневского и Марьяну Константиновну Ерофееву за организацию проведения вакцинаций в коллективах.

149. Огромное спасибо сотрудникам Центра по контролю за заболеваемостью, особенно Жаклин Кац за финансовую поддержку работы.

150. Выражаю глубокую признательность руководителю отдела вирусологии ГУ НИИЭМ РАМН Ларисе Георгиевне Руденко за предоставленную возможность обучения в аспирантуре и всестороннюю помощь.