Возрастные особенности иммунокомпетентных клеток плаценты человека при сахарном диабете

Дурнова, Анна Олеговна

Диссертации по медицине → Геронтология и гериатрия

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.30) на тему:Возрастные особенности иммунокомпетентных клеток плаценты человека при сахарном диабете

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Дурнова, Анна Олеговна Санкт-Петербург 2011 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 14.01.30

Автореферат диссертации по медицине на тему Возрастные особенности иммунокомпетентных клеток плаценты человека при сахарном диабете

Ацчочи" На правах рукописи

ДУРНОВА Анна Олеговна

ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК ПЛАЦЕНТЫ ЧЕЛОВЕКА ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ

14.01.30 - геронтология и гериатрия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 7 ЯНв 2011

Санкт-Петербург - 2011

4843483

Работа выполнена в лаборатории клеточной биологии отдела патоморфологии Учреждения Российской академии медицинских наук

«НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта СЗО РАМН» и в лаборатории нейроэндокринологии Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН

Научные руководители: доктор биологических наук Полякова Виктория Олеговна

доктор медицинских наук Коновалов Сергей Сергеевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

Кветная Татьяна Викторовна

доктор биологических наук Чернышева Марина Павловна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им И.И. Мечникова Росздрава»

Защита диссертации состоится «_»_2011 г. в_часов

на заседании диссертационного совета Д 601.001.01 при Санкт-Петербургском институте биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН по адресу: 197110, Россия, Санкт-Петербург, пр. Динамо, д. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН (197110; Россия, Санкт-Петербург, пр. Динамо, д. 3). Автореферат разослан «_»_2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор Козина Л.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

В последнее время число женщин репродуктивного возраста с сахарным диабетом прогрессивно увеличивается, при этом весомую роль в увеличение вносит сахарный диабет второго типа. По данным Т. Сипс1у [Сипйу Т. е! а1., 2007], в настоящее время число беременных женщин с сахарным диабетом 2 типа превосходит число женщин с сахарным диабетом 1 типа. Несмотря на это течение беременности, осложнения и ее исходы изучены для группы женщин с сахарным диабетом 2 типа в меньшей степени.

Из данных литературы известно, что женщины с сахарным диабетом являются группой риска по развитию воспалительных заболеваний, в особенности репродуктивной системы, что может приводить к осложненному течению беременности. В развитие воспаления существенный вклад вносят иммунокомпетентные клетки, локализованные в плаценте. Однако присутствие этой группы клеток в плаценте женщин с сахарным диабетом остается недостаточно изученным. Неизвестно в какой мере сопутствующие заболевания матери, ее возраст и течение беременности влияют на выраженность воспалительного процесса. Кроме того, необходимо учитывать, что в последние годы увеличивается частота беременности у женщин старшего репродуктивного возраста, среди таких женщин также чаще встречается сахарный диабет, течение которого во время беременности имеет возрастные особенности, отягощающий процесс гестации. В связи с этим актуальным представляется изучить возрастные особенности экспрессии маркеров основных иммунокомпетентных клеток, участвующих в воспалении в плаценте у женщин с разными типами сахарного диабета, корреляции уровня их экспрессии с течением беременности и частоты выявления гистологических аномалий в плаценте, связанных с развитием воспалительного процесса.

Результаты многолетних исследований показали, что здоровье новорожденного ребенка в значительной степени определяется течением антенатального периода. Нарушение функций плаценты - одна из основных причин перинатальной заболеваемости и смертности [Савельева Г.М. и др., 1991]. Из плацентарных компонентов объектом нашего исследования был выбран ворсинчатый хорион, т.к. в силу особенностей строения он играет наиболее важную роль в осуществлении обменных процессов между кровью матери и плода. В настоящее время убедительно доказано, что наиболее активной тканью плаценты в метаболическом и функциональном плане, является эпителий ворсинчатого хориона.

Цель и задачи исследования

Цепью исследования является сравнительный анализ возрастных особенностей экспрессии маркеров иммунокомпетентных клеток плаценты человека при сахарном диабете.

Для достижения указанной цели были поставлены и последовательно решены следующие задачи:

1. Верифицировать клетки, активно участвующие в механизмах воспаления в плаценте, с использованием маркеров: макрофагов (CD68), натуральных киллеров (CD57) и В-лимфоцитов (CD20);

2. Выявить возрастные особенности экспрессии и оценить диагностическую значимость указанных маркеров при оценке состояния плаценты, как при нормально протекающей беременности, так и при патологических изменениях плаценты у женщин с сахарным диабетом;

3. Провести сравнительное изучение состояния фето-плацентарного комплекса у женщин с сахарным диабетом разных возрастных групп;

4. Оценить вклад различных факторов воспаления в патологическое течение беременности у женщин старшего репродуктивного возраста.

Научная новизна

Впервые выполнено детальное исследование субпопуляций резидентных иммуннокомпетентных клеток (макрофаги, В-лимфоциты, NK-клетки)

в ворсинчатом хорионе зрелой плаценты у беременных различного возраста в норме и при сахарном диабете.

Установлено, что все три субпопуляции присутствуют в ворсинчатом хорионе. Впервые проведен сравнительный анализ иммунокомпетентных клеток в плаценте у рожениц разного возраста с эпдокринно-метаболической патологией. Показано увеличение экспрессии маркера макрофагов в плаценте у первородящих здоровых женщин старше 28 лет, аналогичная тенденция установлена для маркера В-лимфоцитов. У беременных женщин с сахарным диабетом экспрессия маркеров воспаления зависела от типа сахарного диабета. Выявлены различия в экспрессии маркеров иммунокомпетентных клеток у перво- и повторнородящих женщин, например, экспрессия маркера В-лимфоцитов в группе с сахарным диабетом 2 типа увеличивалась с возрастом, а у повторнородящих женщин не выявлено возрастных изменений экспрессии. Полученные данные свидетельствуют о ключевой роли медиаторов в формировании иммунного ответа в плаценте при воспалительных процессах, при этом вклад конкретных сигнальных молекул зависит от возраста беременных.

Практическая значимость Результаты проведенного исследования позволяют расширить представление о возрастных морфо-функциональных изменениях доношенной плаценты в норме и при сахарном диабете. Полученные данные позволяют оптимизировать тактику ведения беременных разного возраста, страдающих сахарным диабетом, для снижения риска развития воспалительных процессов и связанной с этим патологии в плаценте, а также прогнозировать тяжесть и риск развития патологической беременности у женщин старшего репродуктивного возраста.

Положения, выносимые на защиту 1. Функциональная активность резидентных иммунокомпетентных клеток плаценты (макрофагов, В-лимфоцитов и натуральных киллеров) коррелирует с возрастом беременных и типом сахарного диабета

2. В плаценте женщин старшего репродуктивного возраста отмечается снижение экспрессии маркеров иммунокомпетентных клеток при всех типах сахарного диабета.

3. Для старшего репродуктивного возраста характерно снижение экспрессии маркера макрофагов у повторнородящих женщин с сахарным диабетом 2 типа и маркера натуральных киллеров у первородящих женщин с сахарным диабетом 2 типа и у повторнородящих с сахарным диабетом 1 типа.

4. Частота развития воспаления, приводящего к последующей плацентарной недостаточности и внутриутробному инфицированию плода, достоверно выше у беременных старшего репродуктивного возраста.

5. Оценка экспрессии маркеров воспаления в плаценте у женщин старшего репродуктивного возраста является эпидемиологически значимой, позволяя оценить риск последующего развития патологии у новорожденных детей.

Связь с научно-исследовательской работой Института

Диссертационная работа является научной темой, выполняемой по основному плану НИР Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН.

Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, 3-х глав, выводов, указателя литературы и приложения. Текст диссертации изложен на 101 странице, содержит 7 таблиц, иллюстрирован 2В рисунками. Список литературы содержит 131 источник, из них отечественных — 48, зарубежных - 83.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 15 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах, включенных в Перечень ВАК Мйнобрнауки РФ для публикации материалов диссертационных исследований, 1 глава в учебном руководстве, 11 тезисов докладов.

Апробация и реализация диссертации

Материалы диссертации доложены на XII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (Санкт-Петербург, 2009); Научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Санкт-Петербург, 2009); Научно-практической конференции «Исследования по приоритетным направлениям в медицине и биологии» (Санкт-Петербург, 2009); 18-ой Международной конференции «СПИД, рак и общественное здоровье» (Санкт-Петербург, 2009); Международной научно-практической конференции с международным участием «Осенняя геронтологическая конференция в Белгороде» (Белгород, 2009); У1-Й международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2009), 1-й ежегодной научной конференции молодых ученых и специалистов «Репродуктивная медицина: взгляд молодых — 2010» (Санкт-Петербург, 2010), 3-й международной научно-практической конференции «Геронтологические чтения - 2010» (Белгород, 2010).

Полученные в работе результаты включены в главу книги «Введение в молекулярную диагностику», которая рекомендована УМО ММА им. И.М. Сеченова в качестве учебного пособия для студентов медицинских вузов и врачей.

Результаты исследований используются в научной, педагогической и практической деятельности Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН и НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отга СЗОРАМН.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом для морфо-функционального исследования был выбран ворсинчатый хорион 160 плацент (срок гестации 36-40 недель), полученных

в родильном отделении Научно-исследовательского института акушерства и гинекологии им. Д.О. Отга СЗО РАМН у первородящих и повторнородящих женщин различного возраста (от 18 до 39 лет). В качестве основных признаков распределения материала по группам служили три показателя: возраст, наличие сахарного диабета и количество предшествующих родов (табл. 1). Нами было сформировано три группы с сахарным диабетом: 1-я - роженицы с сахарным диабетом 1 типа, 2-я - с сахарным диабетом 2 типа и 3-я — с сахарным диабетом беременных. Внутри каждая группа была разделена на женщин, у которых изучаемые роды были первыми или повторными, соответственно плаценты от перво-или повторнородящих женщин. По возрасту группы были разделены на рожениц младше 28 лет (что является физиологической нормой для родов) и женщин старше 28 лет. В качестве контрольной группы были отобраны женщины, не имеющие сахарного диабета с доношенной беременностью. В плаценте объектом для исследования были выбраны стволовые, промежуточные и терминальные ворсины.

Таблица 1

Распределение материала по группам

Название группы Кол-во плацент

Контрольная группа Первородящие <28 лет 10

Первородящие >28 лет 10

Повторнородящие <28 лет 10

Повторнородящие >28 лет 10

Сахарный диабет 1 типа Первородящие <28 лет 10

Первородящие >28 лет 10

Повторнородящие <28 лет 10

Повторнородящие >28 лет 10

Сахарный диабет 2 типа Первородящие <28 лет 10

Первородящие >28 лет 10

Повторнородящие <28 лет 10

Повторнородящие >28 лет 10

Сахарный диабет беременных Первородящие <28 лет 10

Первородящие >28 лет 10

Повторнородящие <28 лет 10

Повторнородящие >28 лет 10

Гистологические методы

Образцы плацент объемом 1 см3 обезвоживали в 10% нейтральном забуференном растворе формалина (pH 7.2), проводили при помощи гистологического процессора Leica TP1020, заливали в парафин и готовили микротомные срезы 5 мкм. В качестве обзорной окраски использовали гематоксилин и эозин.

Иммуногистохимические методы

Парафиновые срезы помещали на предметные стекла, покрытые пленкой из поли-Ь-лизина (Sigma). Для иммуногистохимического исследования использовали первичные моноклональные антитела к маркерам натуральных киллеров - CD57 (1:50, Novocastra), В-лимфоцитов - CD20 (1:100, Dako) и макрофагов - CD68 (1:50, Novocastra). В качестве вторых антител использовали универсальный набор, содержащий биотинилированные анти-мышиные и анти-кроличьи иммуноглобулины. Визуализацию окрасок проводили с применением комплекса авидина с биотинилированной пероксидазой (ABC-kit), с последующим проявлением пероксидазы хрена диаминобензидином (все реагенты Novocastra). Методику визуализации экспрессии всех антител проводили по стандартному протоколу.

Количественная оценка результатов исследования

Для оценки результатов иммуногистохимического окрашивания проводили морфометрическое исследование с использованием системы компьютерного анализа микроскопических изображений, состоящей из микроскопа Nikon Eclipse Е400, цифровой камеры Nikon DXM1200, персонального компьютера на базе Intel Pentium 4 и программного обеспечения Vidiotest Morphology 5.0». В каждом случае анализировали 5 полей зрения при увеличении 400х.

Относительную площадь экспрессии рассчитывали как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади

клеток в поле зрения и выражали в процентах. Оптическую плотность экспрессии выявленных продуктов измеряли в условных единицах. Указанные параметры отражают интенсивность синтеза или накопления исследуемых сигнальных молекул.

Методы статистической обработки Статистическая обработка всех экспериментальных данных включала в себя подсчет среднего арифметического, стандартного отклонения и доверительного интервала для каждой выборки и проводилась с помощью программы Statistica 6.0. Для анализа вида распределения использовали критерий Шапиро-Уилка (Shapiro-Wilk's W-test). Для проверки статистической однородности нескольких выборок были использованы непараметрические процедуры однофакторного дисперсионного анализа (критерий Крускала-Уоллиса). В случаях, когда дисперсионный анализ выявлял статистически значимую неоднородность нескольких выборок, для последующего выявления неоднородных групп (путем их попарных сравнений) применяли процедуры множественных сравнений с помощью критерия Манна-Уитни. Критический уровень достоверности нулевой гипотезы (об отсутствии различий) принимали равным 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Верификация экспрессии маркера макрофагов - CD68 в плаценте у женщин с сахарным диабетом разных возрастных групп

При светооптическом исследовании выявлено, что в группе первородящих женщин старшего репродуктивного возраста с СД 1 типа, область иммуноокрашивания была больше, по сравнению с контрольной группой.

При морфометрическом анализе микроскопических изображений ворсин хориона были выявлены следующие достоверные различия экспрессии маркера макрофагов в зависимости от возраста. В контрольной группе у первородящих женщин старше 28 лет наблюдалось достоверное

увеличение экспрессии маркера макрофагов в плаценте, по сравнению с молодыми роженицами в 1,5 раза по показателю относительной площади экспрессии. Аналогичная тенденция наблюдалась в группе женщин с СД 1 типа, где среднее значение у женщин младше 28 лет составило 1,55±0,40%, а старше 28 лет 2,53±0,39%. В группах женщин с СД 2 типа и с СДБ не наблюдалось статистически достоверных отличий в экспрессии СБ68 между роженицами старше 28 лет двумя возрастными группами (рис.1).

Контроль СД 1 типа СД 2 типа СДБ □ <28 В >28

0,6

0,5

Ё оз

в:

£ од

I :

Контроль СД 1 типа СД 2 типа СДБ 0£28 В >28

Рис. 1. Экспрессия протеина СБ68 в плаценте первородящих женщин с разными типами сахарного диабета.

А - относительная площадь экспрессии протеина СБ68; * - статистически достоверное отличие показателя в группе младшего репродуктивного возраста (<28 лет) от показателя в группе старшего репродуктивного возраста (>28 лет) (р<0,05);

Б - оптическая плотность иммуноокрашенных структур; # - статистически достоверное отличие показателя в группе с сахарным диабетом от показателя в контрольной группе (р<0,05).

При анализе показателя оптической плотности экспрессии протеина С068 в плаценте у первородящих женщин, статистически достоверных различий между женщинами младшего и женщинами старшего

репродуктивного возраста не выявлено. При этом нами установлено, что во всех плацентах от женщин с сахарным диабетом младше 28 лет, значения оптической плотности маркера макрофагов были статистически достоверно выше, чем в контрольной группе (0,489±0,04; 0,42±0,06; 0,438±0,04 и 0,314±0,05 у.е., соответственно) (рис. 1).

Показатель оптической плотности, повышенный у женщин с сахарным диабетом младше 28 лет по сравнению с контрольной группой, свидетельствует о более активном участии макрофагов в процессах, происходящих в плаценте у женщин с метаболическими нарушениями.

Усиление экспрессии маркера макрофагов у женщин старше 28 лет в контрольной группе, а также в группе с СД 1 типа, по нашему мнению, может быть связано с функциями, выполняемыми ими в плаценте. С возрастом частота воспалительных заболеваний возрастает, также показано, что макрофаги (Мф) на поздних сроках беременности сохраняют свою активность и способны связывать и инактивировать бактериальные и дрожжевые клетки. Поэтому закономерным является увеличение присутствующих в плаценте Мф в старшей возрастной группе.

У женщин с сахарным диабетом 1 типа данный показатель еще выше, так как в этой группе женщин по результатам анализа историй болезни носительство уреаплазмы, повторяющийся кандидоз и бактериальный вагиноз были выявлены у 80% рожениц. Вероятным является выполнение макрофагами в плаценте защитной функции.

В группе с сахарным диабетом 2 типа наметилась тенденция к снижению относительной площади экспрессии маркера СОб8 с возрастом. Показано, что гипергликемия снижает функции иммунных клеток (например, клетки слабее отзываются на действие митогенов, то есть имеют сниженную способность к пролиферации) и повышает интенсивность воспалительных реакций.

У первородящих женщин старшего возраста с сахарным диабетом беременных не происходит увеличения экспрессии протеина СБ68, как

наблюдается в норме, что, по-видимому, связано с супрессорным действием гипергликемии на иммунную систему.

Факт отсутствия в старшей возрастной группе аналогичного увеличения оптической плотности экспрессии маркера макрофагов может подтверждать теорию угнетения иммунитета у женщин с сахарным диабетом старшего репродуктивного возраста

Сравнение средних значений относительной площади окрашивания у повторнородящих женщин выявило следующие различия: в группе женщин старше 28 лет с сахарным диабетом 1 типа экспрессия маркера макрофагов в ворсинах хориона была достоверно выше (3,20±0,40%) по сравнению с экспрессией его в плацентах женщин младшей возрастной группы (2,42±0,29%).

В группе же с сахарным диабетом 2 типа, наоборот, у беременных старшего возраста экспрессия маркера макрофагов достоверно снижалась (2,97±0,36 и 1,62±0,35%, соответственно). Достоверных различий по показателю относительной площади экспрессии протеина С068 в контрольной группе и группе с сахарным диабетом беременных нами не зарегистрировано (рис. 2).

Анализ оптической плотности иммуноокрашенных клеток выявил повышенную экспрессию С068 в ворсинчатом хорионе у повторнородящих женщин младше 28 лет в группе с сахарным диабетом 1 типа, со значением 0,510±0,05 у.е, и во всех трех группах с сахарным диабетом старшего возраста (0,455±0,04, 0,452±0,05, 0,451±0,02 у.е.) по сравнению с контрольной группой (0,355±0,03 у.е.) (рис. 2).

Усиление экспрессии маркера макрофагов у повторнородящих женщин в группе с сахарным диабетом 1 типа может быть обусловлено, как общей реакцией организма на хроническое воспаление, так и наличием гестоза именно в этой группе женщин, где средняя и тяжелая степень гестоза наблюдалась в самом большом числе случаев.

Рис. 2. Экспрессия протеина С068 в плаценте повторнородящих женщин с разными типами сахарного диабета.

А - Относительная площадь экспрессии протеина СЭ68; - статистически достоверное отличие показателя в группе младшего репродуктивного возраста (<28 лет) от показателя в группе старшего репродуктивного возраста (>28 лет) (р<0,05);

Наметившаяся тенденция к снижению в группе беременных старшего возраста экспрессии маркера макрофагов у первородящих женщин с сахарным диабетом 2 типа, у повторнородящих беременных той же группы становится статистически достоверной.

Увеличение оптической плотности у повторнородящих женщин старше 28 лет может объясняться лучшим состоянием здоровья, так как даже перЬая беременность при сахарном диабете 1 типа является риском, как для матери, так и для плода. Высокая активность макрофагов способствует сохранению беременности, они выполняют важную роль в защите от патогенных организмов, а также в борьбе с патологическими процессами в плаценте на поздних сроках.

Верификация экспрессии маркера В-лимфоцитов в плаценте у женщин разных возрастных групп

Маркером В-лимфоцитов является протеин СБ20, который участвует в их активации и пролиферации. Визуально экспрессия этого протеина в ворсинах хориона различалась в исследуемых группах. Отмечены различия между экспрессией маркеров В-лимфоцитов в плацентах рожениц разных групп, например, в контрольной группе выявлены лишь единичные клетки, тогда как в группе с сахарным диабетом 1 типа, в поле зрения отмечается 10-15 клеток.

Котроль СД1тцпа СД2тппа СДБ Ш£23 В>28

0,8 0,7

<и

ё I

0,4 —

8 0,3

<и

0,2 ОД 0

»4 С

чччч ^

III

Котроль СД1тш1я СД2 типа СДБ □ £28 Е3> 28

Рис. 3. Экспрессия протеина СВ20 в плаценте первородящих женщин с разными типами сахарного диабета.

А - Относительная площадь экспрессии протеина СР68; * - статистически достоверное отличие показателя в группе младшего репродуктивного возраста (<28 лет) от показателя в группе старшего репродуктивного возраста (>28 лет) (р<0,05);

Б - оптическая плотность иммуноокрашенных структур; § - статистически достоверное отличие показателя в группе с сахарным диабетом от показателя в контрольной группе (р<0,05).

Морфометрический анализ микроскопических изображений позволил сравнить уровень экспрессии СБ20 у женщин разных групп. Установлено,

что в плаценте у первородящих женщин младшего возраста (18-28 лет) с сахарным диабетом 2 типа число В-лимфоцитов в 2 раза меньше, по сравнению с первородящими старшего возраста (29-40 лет) (0,37±0,10% по сравнению с 0,20±0,04%) (р<0,05). В группе с сахарным диабетом беременных наблюдалась противоположная тенденция установлено увеличение количества В-лимфоцитов в младшей возрастной группе по сравнению со старшей (0,54±0,13 и 0,2б±0,07%, соответственно) (р<0,05).

Возрастных изменений экспрессии протеина С020 по показателю относительной площади экспрессии в группе с сахарным диабетом 1 типа и контрольной группе нами не зарегистрировано (рис. 3).

Подсчет оптической плотности иммуноокрашенных клеток выявил повышенную экспрессию СБ20 в ворсинчатом хорионе у первородящих женщин младше 28 лет в группе с сахарным диабетом 1 и 2 типов, а также в группе женщин старше 28 лет с сахарным диабетом 1 типа, по сравнению с контрольной группой.

Большее число В-лимфоцитов в плаценте женщин с сахарным диабетом может быть связано с выполняемой ими функцией по инактивации патогенных микроорганизмов. Известно, что у женщин с сахарным диабетом частота урогинетальных заболеваний намного выше, чем у здоровых женщин, это объясняется благоприятной средой для развития дрожжеподобных грибов и бактерий (обилие глюкозы), а также ослаблением местного иммунитета.

Увеличение с возрастом экспрессии СБ20 в группе женщин с сахарным диабетом 2 типа может быть связано с высокой частотой преждевременного излития околоплодных вод у этой группы женщин - время безводного периода составляло от 2 часов 55 мин до 11 часов.

Снижение экспрессии маркера В-лимфоцитов с возрастом в группе женщин с сахарным диабетом беременных может быть обусловлено тем, что гипергликемия приводит к недостаточной активации иммунных клеток, в частности В-лимфоцитов, что сопровождается нарушениями иммунного

ответа, что, в свою очередь, может способствовать повышенной инфицированности у пациенток с сахарным диабетом беременных.

Повышенная оптическая плотность экспрессии маркера СВ20 в группе женщин с сахарным диабетом 1 и 2 типов, по сравнению с нормальными значениями контрольной группы, возможно, отражает необходимость большего числа рецепторов для активации, так как увеличение содержания сахара в крови подавляет функцию иммунной системы.

При светооптическом исследовании экспрессии маркера В-лимфоцитов в ткани плаценты повторнородящих женщин нами были установлены различия с его экспрессией в контрольной группе, где были отмечены единичные клетки, и группами с сахарным диабетом.

Подсчет суммарной площади иммуноокрашенных структур по маркеру СБ20 позволил сделать вывод о различии экспрессии маркера В-лимфоцитов между повторнородящими женщинами младшего и старшего репродуктивного возраста.

В контрольной группе повторнородящих женщин в плацентах от женщин старше 28 лет площадь экспрессии протеина СЭ20 была больше (0,22±0,04%), по сравнению с этим показателем в плацентах младшей возрастной группы (0,13±0,03%). Тогда как в группах с сахарным диабетом не было изменения экспрессии маркера В-лимфоцитов с возрастом (рис. 4).

Если у первородящих женщин только в нескольких группах с сахарным диабетом оптическая плотность была выше, по сравнению с значениями контрольной группы, то у повторнородящих женщин всех групп с сахарным диабетом он был выше (рис. 4). Это свидетельствует о большей активности В-лимфоцитов у повторнородящих женщин с сахарным диабетом.

В норме у повторнородящих женщин старшего возраста происходит увеличение числа В-лимфоцитов, а у женщин с сахарным диабетом возраст не влияет на экспрессию маркера В-лимфоцитов, он остается повышенным и в старшей и в младшей возрастной группе по сравнению с контролем.

Рис. 4. Экспрессия протеина С020 в плаценте повторнородящих женщин с разными типами сахарного диабета.

А - Относительная площадь экспрессии протеина С020; * - статистически достоверное отличие показателя в группе младшего репродуктивного возраста (<28 лет) от показателя в группе старшего репродуктивного возраста (>28 лет) (р<0,05);

Повышенная экспрессия протеина СБ20 на поверхности В-лимфоцитов у повторнородящих женщин с сахарным диабетом свидетельствует о большей активности данных клеток в плаценте по сравнению с контрольной группой.

Верификация экспрессии маркера КК-клеток в плаценте у женщин разных возрастных групп

Визуально экспрессия маркера МК-клеток в ворсинах хориона практически не различалась в исследуемых группах.

Подсчет суммарной площади иммуноокрашеных клеток по экспрессии маркера CD57 позволил выявить различия показателей в разных возрастных группах. Нами было проведено сравнение средних значений суммарной площади протеина CD57 и показано, что у первородящих женщин с сахарным диабетом 2 типа, экспрессия маркера NK-клеток с возрастом снижается (0,19±0,02% по сравнению с 0,49±0,05%). В других исследуемых группах не было выявлено достоверных различий в экспрессии протеина CD57 в разных возрастных группах (рис. 5). Оптическая плотность экспрессии протеина CD57 была статистически достоверно выше в группе с сахарным диабетом 1 типа младше 28 лет (0,391±0,05 у.е.), по сравнению с контрольной группой (0,292±0,03 у.е.) (рис. 5).

Контроль СД1 типа СД 2 типа 0S28 Ш>28

СДБ

Контроль СД J типа

СДБ

BS2B В>28

Рис. 5. Экспрессия протеина CD57 в плаценте первородящих женщин с разными типами сахарного диабета.

А - Относительная площадь экспрессии протеина CD57; * * - статистически достоверное отличие показателя в группе младшего репродуктивного возраста (<28 лет) от показателя в группе старшего репродуктивного возраста (>28 лет) (р<0,05);

Б ~ оптическая плотность иммуноохрашеяных структур; # - статистически достоверное отличие показателя в группе с сахарным диабетом от показателя в контрольной группе (р<0,05).

По-видимому, повышенная экспрессия рецептора CD57 на NK-клетках отражает компенсаторную реакцию организма молодых женщин на гипергликемическое состояние, которое снижает активацию и препятствует нормальному состоянию иммунокомпетентных клеток. Повышенная экспрессия маркера NK-клеток у женщин младшего возраста с сахарным диабетом 2 типа, может объясняться активным участием натуральных киллеров в процессе ангиогенеза.

Известно, что при сахарном диабете 2 типа, сильно выражена дегенерация капиллярного русла и, возможно, NK-клетки активно участвуют в компенсаторных механизмах по восстановлению нормального кровоснабжения. У беременных старшего возраста, в связи с ослаблением иммунной функции, они привлекаются не так активно и хуже функционируют, что подтверждается большим числом острых нарушений кровообращения в этой группе женщин.

В группе повторнородящих женщин при светооптическом исследовании также визуально было сложно увидеть различия в экспрессии маркера NK-клеток в двух возрастных группах.

Однако при морфометрическом анализе ворсинчатого хориона повторнородящих женщин показано снижение экспрессии протеина CD57 в плаценте женщин старше 28 лет в группе с СД 1 типа по сравнению с более молодыми женщинами (0,21±0,02% и 0,31±0,04% соответственно, р<0,05). В других исследованных группах значения средних показателей относительной площади экспрессии не отличались в плацентах женщин разных возрастных групп (рис. 6).

По показателю оптической плотности экспрессии протеина CD57 не было зафиксировано ни возрастных, ни ассоциированных с сахарным диабетом, статистически достоверных изменений между разными группами (рис. 6).

Сниженная экспрессия маркера МС-клеток в группе повторнородящих женщин с СД 1 типа может свидетельствовать об угнетении иммунной функции у данной группы женщин.

0,45 0,4 £о,35

S о,з

0 к

gCUJ g

§ 0,2

a o.i? -Н

с,

1 о-1

0,05 0

Ф1 Pi

ill

ll ll

a il

Контроль СД 1 пша СД2 типа СДБ DS28 И>28

Контроль СД1ПШ СД2 пшя СДБ П528 Я>28

Рис. 6. Экспрессия протеина CD57 в плаценте повторнородящих женщин с разными типами сахарного диабета.

А - Относительная площадь экспрессии протеина CD57; * - статистически достоверное отличие показателя в группе младшего репродуктивного возраста (<28 лет) от показателя в группе старшего репродуктивного возраста (>28 лет) (р<0,05). Б - оптическая плотность иммуноокрашенных структур.

При исследовании женщин с сахарным диабетом установлено, что чем старше возраст женщины, тем выше степень повреждения плаценты. Это подтверждается следующими данными о морфо-функциональном состоянии плаценты: • плацентарная недостаточность в виде субкомпенсированной формы встречалась в 80% у первородящих женщин старшей возрастной группы с СД 1 типа, тогда как в младшей группе она равнялась 20%, а в контрольной группе отсутствовала;

строение плаценты не соответствовало сроку беременности в 80% случаев у первородящих женщин СД 1 типа и у повторнородящих женщин с СД 2 типа старшей возрастной группы, тогда как в младших возрастных группах строение плаценты соответствовало сроку беременности; степень инволютивно-дистрофических процессов в плаценте была повышена в группе рожениц старшего возраста с СД 1 и 2 типов, как у перво- так и у повторнородящих женщин;

низкая степень компенсаторно-приспособительных реакций в наибольшем количестве случаев отмечалась в группе первородящих с СДБ старшего возраста;

инфаркты плаценты наиболее часто встречались в группе повторнородящих женщин с СД 2 типа старшего возраста (в 50% случаев).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные исследования позволили выявить достоверные корреляции между экспрессией маркеров воспаления резидентными иммунокомпетентными клетками плаценты и патологическими состояниями, возникающими во время беременности у женщин разного репродуктивного возраста. При этом следует отметить, что именно сигнальные молекулы, продуцируемые иммунными клетками, играют ключевую роль в развитии этих состояний.

Это подтверждается полученными статистически достоверными

данными о связи уровня экспрессии маркеров иммунокомпетентных клеток

с сопутствующими заболеваниями и осложнениями беременности.

У рожениц разного возраста повышенный уровень экспрессии маркеров

иммунных клеток свидетельствует о присутствии воспалительного процесса,

с чем может быть связано самопроизвольное прерывание беременности,

преждевременные роды, преэклампсия, а также осложнения

у новорожденных. В этой связи важным является проведение мероприятий

направленных на санацию очагов хронического воспаления и лечения

урогенитальной инфекции, предупреждение прогрессии гестоза до тяжелой стадии, планирование беременности с целью снижения влияния осложнений сахарного диабета на беременность.

Полученные результаты свидетельствуют о высокой эпидемиологической значимости маркеров воспаления для оценки течения беременности и возможного развития соматической патологии у новорожденных детей, особенно у рожениц старшего возраста, открывая, таким образом, широкие перспективы для дальнейшего детального изучения эпидемиологической значимости сигнальных молекул в патологии социально значимых заболеваний человека, учитывая особенности онтогенеза и старения организма.

ВЫВОДЫ

1. В плаценте человека впервые верифицирована экспрессия маркеров макрофагов, В-лимфоцитов и натуральных киллеров, что позволяет оценить резидентный характер их присутствия в ворсинчатом хорионе. Установлена неодинаковая динамика возрастных особенностей функциональной активности резидентных иммунокомпетентных клеток, как при нормально протекающей беременности, так и у женщин, страдающих сахарным диабетом.

2. Экспрессия маркера макрофагов у женщин с СД 1 типа в старшем репродуктивном возрасте достоверно выше, как в группе перво- так и повторнородящих женщин, по сравнению с женщинами младшего репродуктивного возраста. С возрастом, у повторнородящих женщин с СД 2 типа происходит достоверное снижение экспрессии маркера макрофагов.

3. В старшем репродуктивном возрасте наблюдается усиление экспрессии маркеров В-лимфоцитов в группе первородящих женщин с СД 2 типа, тогда как в группе с сахарным диабетом беременных наблюдается противоположная тенденция. У повторнородящих женщин возрастные

различия экспрессии маркера В-лимфоцитов при сахарном диабете отсутствуют.

4. С увеличением возраста у первородящих женщин с СД 2 типа и у повторнородящих женщин с СД 1 типа популяция натуральных киллеров в ткани плаценты уменьшается.

5. У женщин старшего репродуктивного возраста с сахарным диабетом хроническая плацентарная недостаточность развивается чаще и осложняется острыми дисциркуляторными расстройствами в плаценте с последующим внутриутробным инфицированием плода.

6. Определение экспрессии маркеров воспаления позволяет прогнозировать течение беременности у женщин старшего репродуктивного возраста, страдающих сахарным диабетом, и развитие в последующем различной патологии у новорожденных детей.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

При исследовании плацент после родов у женщин старшего репродуктивного возраста, страдающих сахарным диабетом, рекомендуется проводить оценку экспрессии маркеров воспаления макрофагов, В-лимфоцитов и МК.-клеток для оценки риска постнатальной патологии у новорожденных детей.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в журналах, включенных в Перечень ВАК Минобрнауки РФ

1. Дурнова А.О. Возрастные особенности иммунокомпетентных клеток плаценты человека при сахарном диабете/А.О. Дурнова, В. О. Полякова, Н. А. Пальченко//Успехи геронтологии. - 2010. - Т.23 . - №2. - С. 208-212.

2. Роль иммунокомпетентных клеток в плаценте в норме и при патологии/Э.К. Айламазян, И.М. Кветной, В.О. Полякова, Н.С. Линькова, А.О. Дурнова/Журнал акушерства и женских болезней - 2010. - №6. С. 12-16.

3. Экспрессия сигнальных молекул - регуляторов апоптоза в плаценте у женщин разного возрасга/Е.А. Лапина, Н.С. Линькова, А.О. Дурнова, В.О. Полякова, НА. Пальченко, A.B. Костылев, С.С. Коновалов, И.М. Кветной //Научные ведомости БелГУ. Серия Медицина. Фармация. Геронтология и гериатрия - 2010. - № 22. - С. 45-48.

Глава в руководстве

4. Иммуногистохимические маркеры в оценке функционального состояния плаценты в кн. «Введение в молекулярную диагносгику»/В.О. Полякова, Н.С. Линькова, A.B. Костылев, И.М. Кветной, С.С. Коновалов, А.О. Дурнова, Р.И. Абдулрагимов. М., Медицина, 2010. - С. 318-343.

Тезисы докладов

5. Абдулрагимов Р.И. Нейроиммунноэндокринные механизмы старсния/Р.И. Абдулрагимов, H.H. Севастянова, А.О. Дурнова//13-я Всероссийская медико-биологическая конференция «Фундаментальная и клиническая медицина». - СПб. -2010.-С. 4-5.

6. Возрастные изменения экспрессии макрофагов, B-лимфоцитов, и натуральных киллеров в плаценте женщин с сахарным диабетом/А.О. Дурнова, В.О. Полякова, М.А. Клещев, H.A. Пальченко//Матер. 3-ей международной научно-практической конференции «Геронтологические чтения - 2010». - Белгород. -2010.-С. 22-23.

7. Дурнова А.О. Значение провоспалительного маркера макрофагов CD68 в плаценте у женщин с сахарным диабетом/А.О.Дурнова//Русский журнал «СПИД, рак и общественное здоровье» - 2009. - № 2 (27). - С. 17.

8. Дурнова А. О. Иммунокомпетентные клетки в плаценте женщин разных возрастных групп с сахарным диабетом/А.О.Дурнова//Осенняя геронтологическая конференция в Белгороде. - Белгород - 2009. - С. 7-8.

9. Дурнова А.О. Присутствие иммунокомпетентных клеток в плаценте женщин с сахарным диабетом при воспалении/А.О.Дурнова//Исследования по приоритетным направлениям в медицине и биологии - СПб - 2009. -С. 160-162.

10. Дурнова А.О. Экспрессия макрофагов в плаценте у женщин с сахарным диабетом разных возрастных групп/А.О.Дурнова//Осенняя геронтологическая конференция в Белгороде. - Белгород - 2009. - С. 6-7.

11. Дурнова А.О. Экспрессия маркера CD20 в плаценте у женщин с сахарным диабетом разных возрастных групп/А.О.Дурнова//ХН Всероссийская медико-

биологическая конференция молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина». - Санкт-Петербург. - 2009. - С. 117-118.

12. Дурнова А.О. Экспрессия протеина CD68 в плаценте у женщин с сахарным диабетом разных возрастных групп/А.О.Дурнова//ХП Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина». - Санкт-Петербург. - 2009. - С. 118-119.

13. Дурнова А.О., Полякова В.О. Верификация иммунокомпетентных клеток в плаценте женщин с нормально протекавшей беременностью и отягощенной сахарным диабетом/А.О.Дурнова, В.О. Полякова//У1-я Международная конференция «Молекулярная медицина и биобезопасность». - Москва. - 2009. - С. 84-86.

14. Дурнова А.О., Полякова В.О. Паттерн экспрессии макрофагов у первородящих женщин старшего возраста с сахарным диабетом/А.О. Дурнова, В.О. Полякова/Я ежегодная научная конференция молодых ученых и специалистов «Репродуктивная медицина: взгляд молодых-2010». - СПб - 2010. - С. 10-11.

15. CD 8 как маркер угрозы выкидыша у женщин разных возрастных групп на фоне гестоза/Н.С. Линькова, A.B. Костылев, И.ШСоспочек, А.О. Дурнова, H.A. Пальченко, В.О. Полякова//Акгуальные вопросы клинической и эксперементальной медицины. - Санкт-Петербург. - 2009. - С. 191-192.

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ

ИКК Иммунокомпетентные клетки

Мф Макрофаги

СД Сахарный диабет

СДБ Сахарный диабет беременных

РЖ-клетки Натуральные киллерные клетки

Дурнова Анна Олеговна ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК ПЛАЦЕНТЫ ЧЕЛОВЕКА ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ//Автореф. дис. канд. биол. наук: 14.01.30-СПб., 2011.-26с.

Подписано в печать ..2010. Формат 60*84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 420. Отпечатано с готового оригинал-макета.ЗАО "Принт - Экспресс" 197376, С.-Петербург, ул. Большая Монетная, 5 лит. А

Оглавление диссертации Дурнова, Анна Олеговна :: 2011 :: Санкт-Петербург

Список сокращений

Введение

Обзор литературы

Глава 1. Современные представления о структурно-функциональном развитии плаценты

1.1. Анатомия и физиология плаценты

1.1.1. Закладка и развитие органа

1.1.1.1. Строение ворсинчатого хориона во второй половине беременности

1.1.1.2. Функциональная активность плаценты в конце беременности

1.1.2. «Старение» плаценты

1.2. Сахарный диабет и беременность

1.2.1. Типы сахарного диабета при беременности

1.2.2. Осложнения, возникающие у беременных женщин с сахарным диабетом

1.3. Плацента как иммунокомпетентный орган

1.3.1. Иммунокомпетентные клетки плаценты

1.3.2. Особенности иммунитета в системе мать-плацента-плод

1.3.3. Характеристика воспалительного процесса в плаценте

1.3.4. Изменения структуры плаценты при сахарном диабете

1.4. Клеточные основы воспалительного процесса в плаценте

1.4.1. Макрофаги плаценты

1.4.2. Натуральные киллеры в плаценте

1.4.3. В-лимфоциты 37 Результаты собственных исследований и их обсуждения

Глава 2. Материал и методы исследования

2.1. Характеристика исследуемого материала

2.2. Гистологические методы

2.3. Иммуногистохимические методы

2.4. Морфометрические методы и компьютерный анализ микроскопических изображений

2.5. Статистическая обработка результатов

Глава 3. Возрастные особенности экспрессии маркеров 44 иммунокомпетентных клеток плаценты и ее морфо-функционального состояния.

3.1 .Верификация иммунокомпетентных клеток в плаценте

3.1.1. Верификация экспрессии маркера макрофагов в плаценте женщин разных возрастных групп

3.1.2. Верификация экспрессии белка - маркера В-лимфоцитов в плаценте женщин разных возрастных групп

3.1.3.Верификация экспрессии белка - маркера натуральных киллеров в плаценте женщин разных возрастных групп

3.2. Анализ морфо-функционального состояния плацент

3.4.Анализ состояния здоровья новорожденных детей от матерей страдающих сахарным диабетом.

Введение диссертации по теме "Геронтология и гериатрия", Дурнова, Анна Олеговна, автореферат

Актуальность темы

В последнее время число женщин репродуктивного возраста с сахарным диабетом прогрессивно увеличивается, особый вклад в увеличение вносит сахарный диабет второго типа. По данным Т. Сипёу [2007], в настоящее время число беременных женщин с сахарным диабетом 2 типа превосходит число женщин с сахарным диабетом 1 типа. Несмотря на это течение беременности, осложнения и ее исходы изучены для группы женщин с сахарным диабетом 2 типа в меньшей степени.

Из данных литературы известно, что женщины с сахарным диабетом являются группой риска по развитию воспалительных заболеваний, в особенности репродуктивной системы, что может приводить к осложненному течению беременности. В развитие воспаления существенный вклад вносят иммунокомпетентные клетки, локализованные в плаценте. Однако присутствие этой группы клеток в плаценте женщин с сахарным диабетом остается недостаточно изученными. А также неизвестно, в какой мере сопутствующие заболевания матери, ее возраст и течение беременности влияют на выраженность воспалительного процесса. Кроме того, необходимо учитывать, что в последние годы увеличивается частота беременности у женщин старшего репродуктивного возраста, среди таких женщин также чаще встречается сахарный диабет, течение которого во время беременности имеет возрастные особенности, отягощающие процесс гестации. В связи с этим актуальным представляется изучить возрастные особенности экспрессии маркеров основных иммунокомпетентных клеток, участвующих в воспалении в плаценте у женщин с разными типами сахарного диабета, корреляции уровня их экспрессии с течением беременности и частоты выявления гистологических аномалий в плаценте, связанных с развитием воспалительного процесса.

Из плацентарных компонентов объектом нашего исследования был выбран ворсинчатый хорион, т.к. в силу особенностей строения он играет наиболее важную роль в осуществлении обменных процессов между кровью матери и плода. В настоящее время убедительно доказано, что наиболее активной тканью плаценты в метаболическом и функциональном плане является эпителий ворсинчатого хориона.

Цель и задачи исследования

Целью исследования является сравнительный анализ возрастных особенностей экспрессии маркеров иммунокомпетентных клеток плаценты человека при сахарном диабете.

Для достижения указанной цели были поставлены и последовательно решены следующие задачи:

1. Верифицировать клетки, активно участвующие в механизмах воспаления в плаценте с использованием маркеров: макрофагов (CD68), натуральных киллеров (CD57) и В-лимфоцитов (CD20);

4. Оценить вклад различных факторов воспаления в патологическое течение беременности в старшем репродуктивном возрасте.

Научная новизна

Впервые выполнено детальное исследование субпопуляций резидентных иммуннокомпетентных клеток (макрофаги, В-лимфоциты, ]МК-клетки) в ворсинчатом хорионе зрелой плаценты у беременных различного возраста в норме и при сахарном диабете.

Установлено, что все три субпопуляции присутствуют в ворсинчатом хорионе. Впервые проведен сравнительный анализ иммунокомпетентных клеток в плаценте у рожениц разного возраста с эндокринно-метаболической патологией, страдающих сахарным диабетом. Показано увеличение экспрессии маркера макрофагов в плаценте у первородящих здоровых женщин старше 28 лет, аналогичная тенденция установлена для маркера В-лимфоцитов. У беременных женщин с сахарным диабетом экспрессия маркеров воспаления зависела от типа сахарного диабета. Выявлены различия в экспрессии маркеров иммунокомпетентных клеток у перво- и повторнородящих женщин, например, экспрессия маркера В-лимфоцитов в группе с сахарным диабетом 2 типа увеличивалась с возрастом, а у повторнородящих женщин не выявлено возрастных изменений экспрессии. Полученные данные свидетельствуют о ключевой роли медиаторов в формировании иммунного ответа в плаценте при воспалительных процессах, при этом вклад конкретных сигнальных молекул зависит от возраста беременных.

Практическая значимость

Результаты проведенного исследования позволяют расширить представление о возрастных морфо-функциональных изменениях доношенной плаценты в норме и при сахарном диабете. Полученные данные позволяют оптимизировать тактику ведения беременных разного возраста, страдающих сахарным диабетом, для снижения риска развития воспалительных процессов и связанной с этим патологии в плаценте, а также прогнозировать тяжесть и риск развития патологической беременности у женщин старшего репродуктивного возраста.

Положения, выносимые на защиту

1. Функциональная активность резидентных иммунокомпетентных клеток плаценты (макрофагов, В-лимфоцитов и натуральных киллеров) коррелирует с репродуктивным возрастом беременных и типом сахарного диабета.

2. В плаценте женщин старшего репродуктивного возраста отмечается снижение экспрессии маркеров иммунокомпетентных клеткок при всех типах сахарного диабета.

Связь с научно-исследовательской работой Института

Диссертационная работа является научной темой, выполняемой по основному плану ПИР Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, 3-х глав, выводов, указателя литературы и приложения. Текст диссертации изложен на 101 странице, содержит 7 таблиц, иллюстрирован 28 рисунками. Список литературы содержит 131 источник, из них отечественных - 48, зарубежных — 83.

Заключение диссертационного исследования на тему "Возрастные особенности иммунокомпетентных клеток плаценты человека при сахарном диабете"

выводы

1. В плаценте человека впервые верифицирована экспрессия маркеров макрофагов, В-лимфоцитов и натуральных киллеров, что позволяет оценить резидентный характер их присутствия в ворсинчатом хорионе. Установлена неодинаковая динамика возрастных особенностей функциональной активности резидентных иммунокомпетентных клеток как при нормально протекающей беременности, так и у женщин, страдающих сахарным диабетом.

2. Экспрессия маркера макрофагов у женщин с СД 1 типа в старшем репродуктивном возрасте достоверно выше, как в группе перво- так и повторнородящих женщин по сравнению с женщинами младшего репродуктивного возраста. С возрастом у повторнородящих женщин с СД 2 типа происходит достоверное снижение экспрессии маркера макрофагов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

При исследовании плацент после родов у женщин старшего репродуктивного возраста рекомендуется проводить оценку экспрессии маркеров воспаления макрофагов, В-лимфоцитов и ЫК-клеток для оценки риска постнатальной патологии у новорожденных детей.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Дурнова, Анна Олеговна

1. Автандилов Г.Г. Диагностическая медицинская плоидометрия. М., «Медицина», 2006. — 192 с.

2. Автандилов Г.Г. Основы клинической патологической анатомии. Учебное пособие для студентов и аспирантов. М., «Медицина», 2002. - 240 с.

3. Айламазян Э.К. Акушерство. Учебник для студентов медицинских вузов. СПб., СпецЛит, 1997. - 496 с.

4. Айламазян Э. К. Акушерство: 4-е изд., доп./Э. К. Айламазян Учебник для медицинских вузов. СПб., СпецЛит, 2007. - 528 с.

5. Арбатская Н.Ю., Демидова И.Ю. Сахарный диабет типа 1 и беременность // Consilium Medicum. 2003. - № 9. - С. 494-450.

6. Афанасьева Н.В., Стрижаков А.Н. исходы беременности и родов при фетоплацентарной недостаточности различной степени тяжести // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. -2004,. Т.3,№2.-С. 7-13.

7. Балаболкин М. И. Сахарный диабет. М.: Медицина, 1994. С. 30-33.

8. Бодяжина, В.И. Акушерство. / В.И. Бодяжина, И.Б. Семенченко. -2-е изд. Ростов н/Д., Феникс, 2002. — 477 с.

9. Бокарев И.Н., Беликов В.К., Шубина О.И. Сахарный диабет: Руководство для врачей. — М., ООО «Медицинское информационное агенство». 2006. — 400 с.

10. Брусиловский А.И. Функциональная морфология плацентарного барьера человека. — Киев, «Здоровье», 1976. 129 с.

11. П.Бурместер Г-Р., Пецутто А. Наглядная иммунология. Пер. с анг.

12. М., БИНОМ. Лаборатория знаний, 2007. 320 с.

13. Валькович Э.И. Общая и медицинская эмбриология: Учебноепособие для медицинских вузов. С-Пб., Фолиант, 2003. — 320 с.88

14. Глуховец Б.И. Восходящее инфицирование фето-плацентарной системы / Б.И. Глуховец, Н.Г. Глуховец. М., МЕДпресс-информ, 2006. - 240 с.

15. Глуховец Б.И. Патология последа. / Б.И. Глуховец, Н.Г. Глуховец. -С-Пб., ГРААЛЬ. 2002. 448 с.

16. Говорка Э. Плацента человека. Варшава, Польское государственное медицинское издательство, 1970. —470 с.

17. Григорьев М.Ю., Имянитов E.H., Хансон К Л. Апоптоз в норме и патологии // Медицинский академический журнал. 2003. — Т. 3, № 3. - С. 3-11.

18. Грязнова И. М. , Второва В. Г. Сахарный диабет и беременность. М., Медицина, 1985. С. 156-160.

19. Гурьянов В.А. Беременность в контексте общего синдрома адаптации / В.А. Гурьянов A.B. Пырегов, Г.Н. Толмачёв. // Анастезиол. и реаниматол. — 2007. № 6. С. 4-8.

20. Кнорре А.Г. Краткий очерк эмбриологии человека. — Л., «Медгиз», 1967. 223с.

21. Князев Ю.А., Беспалова В.А. Проблемы перинатальнойэндокринологии // Педиатрия. 1984. - № 4. - С. 59-64.89

22. Козлова JI.B., Иванян А.Н., Грибко Т.В. Диагностика, профилактика и лечение внутриутробных инфекционных заболеваний. Смоленск, 1997. — 18 с.

23. Коржевский Д.Э., Отеллин В.А., Неокесарийский A.A., Павлов Н.Г. Структурная организация макрофагов формирующейся плаценты человека // Морфология. 2005. - Т. 128, № 6. - С. 60-62.

24. Краснопольский В.И. Формирование и патология плаценты. Под ред. Краснопольский В.И., Логутова Л.С., Туманова В.А. -Москва, «Медицина», 2007. — 112 с.

25. Лака Г.П,. Захарова Т.Г. Сахарный диабет и беременность. Ростов на Дону,"Феникс", 2006. 128 с.

26. Макарова О.В. Инфекции в акушерстве и гинекологии / под ред. О.В. Макаровой, В.А. Алешкиной, Т.Н. Савченко. М. «Мед-пресс», 2009. 287 С.

27. Милованов А.П. Патология системы мать плацента - плод. Руководство для врачей. - М., «Медицина», 1999. - 448 с.

28. Мищенко H.A., Копань Е.Г., Макаров А.Д. Вариантная анатомия плаценты человека. Материалы 62-й итоговой науч. конфер. студентов и молодых ученых ВолГМУ. - Волгоград, 2004. -С.114-115.

29. Павлова Т.В., Петрухин В.А., Терехова Н.В., Завалишина Л.Э., Павлова Л.А. Клинико-морфологические исследования при сахарном диабете у матери // Вестник Российской Ассоциации Акушеров

30. Гинекологов. 1998. - № 1. - С.25-2890

31. Пальцев М.А., Иммунологические аспекты материнско-плодовых взаимоотношений / М.А. Пальцев, И.Н. Волощук, Е.М.Демидова, А.В.Мещерякова, В.Б. Носов. // Вестник РАМН -1999.-№5.-С. 32-36.

32. Пальцев М.А., Кветной И.М. Руководство по нейроиммунноэндокринологии. М., "Медицина", 2006. - 384 с.

33. Пальцев М.А. , Кветной И.М. Руководство по нейроиммуноэндокринологии. 2-изд; М., "Медицина", 2008. - 512 с.

34. Радзинский В.Е., Ордиянц И.М. Плацентарная недостаточность при гестозе. // Акушерство и гинекология, 1999; № 1, С. 11-6.

35. Савельева Г.М., Федорова М.В., Клименоко П.А., Сичинава Л.Г. Плацентарная недостаточность. М. 1991. - 276 с.

36. Сельков С.А., Павлов О.В. Плацентарные макрофаги. — М., Товарищество научных изданий КМК, 2007. 186 с.

37. Скворцов В.В., Машкова Е.В. Сахарный диабет и беременность // Медлайн-Экспресс. 2003. - N 5. - С. 5-11.

38. Улумбекова Э.Г. Гистология (введение в патологию) / Под ред. Э.Г.Улумбекова, Ю.А.Челышева. М., ГЭОТАР, 1997. - 960 с.

39. Федорова М.В., Калашникова Е.П. Плацента и ее роль при беременности. Москва, «Медицина», 1986 - 256 с.

40. Федорова М.В., Краснопольский В.И., Петрухин В.А. Сахарный диабет, беременность и диабетическая фетопатия. — Москва, «Медицина» , 2001 288 с.

41. Хавинсон В.Х., Коновалов С.С. Избранные лекции по геронтологии. С-Пб., Прайм, 2009. - 896 с.

42. Цинзерлинг A.B. Современные инфекции. Патологическая анатомия и вопросы патогенеза. — Санкт-Петербург, «Сотис», 1993. -363 с.

43. Цинзерлинг В.А., Мельникова В.Ф. Перинатальные инфекции. (Вопросы патогенеза, диагностики и клинико-морвологических сопоставлений). Практическое руководство. СПб., Элби СПб, 2002. -352 с.

44. Шатилова И.Г., Милованов А.П., Кадыров М. Плацентарные макрофаги (клетки Кащенко-Гофбауэра) и их роль в патологии // Архив патологии. 1997. - Т.59, № 5. - С.70-74.

45. Шехтман М. М. Экстрагенитальная патология и беременность. Медицина, Ленинградское отделение, 1987. -215 с.

46. Ширшев С.В. Иммунобиологические особенности антигенов плаценты // Успехи современной биологии. 2000. - Т. 120, № 3. -С. 279-290.

47. Allen V.M. Teratogenicity associated with pre-existing and gestational diabetes.// Armson B.A., Wilson R.D., Blight C., Gagnon

48. A., Johnson J.A., Langlois S., Summers A., Wyatt P., Farine D., Armson

49. B.A., Crane J., Delisle M.F., Keenan-Lindsay L., Morin V., Schneider

50. C.E., Van Aerde J. / J Obstet Gynaecol Can. 2007. Vol. 29. P. 927-944.

51. Anteby E.Y., Greenfield C., Natanson-Yaron S., Goldman-Wohl

52. Pneumonia and infections, sepsis, outcome, acute renal failure and acid base, nutrition and glycaemic control / Intensive Care Med. 2010 V. 36 №2. P.196-209.

53. Aschkenazi S, Straszewski S, Verwer K.M., Foellmer H, Rutherford T, Mor G. Differential regulation and function of the Fas/Fas ligand system in human trophoblast cells // Biol Reprod. — 2002. Vol. 66, № 6. -P.1853-1861.

54. Ashkar A.A., Croy B.A. Functions of uterine natural killer cells are mediated by interferon gamma production during murine pregnancy // Semin. Immunol. -2001. Vol. 13. - P. 235-241.

55. Barcena A, Kapidzic M, Muench MO, Gormley M, Scott MA, Weier JF, Ferlatte C, Fisher SJ. The human placenta is a hematopoietic organ during the embryonic and fetal periods of development // Dev Biol. -2009. Vol. 327(1). P.24-33

56. Bell J.C., Ford J.B., Cameron C.A., Roberts C.L. The accuracy of population health data for monitoring trends and outcomes among women with diabetes in pregnancy // Diab. Res. and clin. practice. 2008. - Vol. 81. -P.105-109.

57. Benirschke K., Kaufmann P. // Patology of the Human Placenta. -3rd ed. New York: Springer-Verlag, 1990. - 720 p.

58. Bollapragada S, Youssef R, Jordan F, Greer I, Norman J, Nelson S. Term labor is associated with a core inflammatory response in human fetal membranes, myometrium, and cervix. // Am J Obstet Gynecol. -2009 Vol. 200(1). -P.104.el-ll.

59. Boyd P.A. Quantitative studies of the normal human placenta from 10 weeks of gestation to term // Early Hum. Devel. 1984. - Vol. 9. -P.297-307.

60. Boyson J. E., Aktan I., Barkhuff D. A., Chant A. NKT cells at the maternal-fetal interface // Immunol invest. 2008. V. 37, № 5. - P. 565582.

61. Bukovsky A, Cekanova M, Caudle M.R.Variability of placental expression of cyclin E low molecular weight variants // Biol. Reprod. —2002. Vol. 67, № 2. — P.568-574.93

62. Bulmer J.N., Williams P.J., Lash G.E. Immune cells in the placental bed // Int. J. Dev. Biol 2010. - Vol. 54. P. 281-294.

63. Castellucci M., Kaufmann M. Basic structure of the villous trees // Pathology of the human placenta /Eds. K. Bernirschke, M. Kaufmann. New York: Springer Verlag. . 2000. -P.82-88.

64. Challier JC, Galtier M, Cortez A, Bintein T, Rabreau M, Uzan S Immunocytological evidence for hematopoiesis in the early human placenta. // Placenta. 2005. - Vol. 26(4). P.282-288.

65. Christiansen OB, Nielsen HS, Kolte AM. Inflammation and miscarriage. // Semin Fetal Neonatal Med. 2006.- Vol; 11(5). P.302-308.

66. Cundy T., Gamble G., Neale L., Elder R., McPherson P., Henley P., Rowan J. Differing causes of pregnancy loss in type 1 and type 2 diabetes // Diabetes Care. 2007. - Vol.20, № 10. - P.2603-2607.

67. Daoud A.K., Tayyar M. A., Fouda I. M., Abu Harfeil N. Effects of diabetes mellitus vs. in vitro hyperglycemia on select immune cell functions // Journal of Immunotoxicology. 2009. - Vol. 6, № 1. — P.36-41.

68. Definition, Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus and its Complications. Report of a WHO Consultation; WHO/NCD/NCS/1999.02. Geneve. 1999. 123 pp.

69. Demir R, Kayisi U.A., Ozenci-Celik C., Korgun E.T., Demir-Weusten A.Y. Ultrastructural diversities of the human decidual granular leukocytes during early pregnancy // Early Pregnancy. 2003. - P.345-355.

70. Evers I.M., Nikkels P.G., Sikkema J.M., Visser G.H. Placental pathology in women with type 1 diabetes and in a control group with normal and large-for-gestational-age infants // Placenta. — 2003. Vol. 24, № 8-9. -P.819-825.

71. Fox H. Aging of the placenta // Arch. Dis. Child. Fetal. Neanatal.

72. Ed. 1997. - Vol. 77. -P.171-175.94

73. Fox H. The incidence and significance of Hofbauer cells in the mature human placenta // J. Pathol. Bacteriol. 1967. Vol. 93. №. 2. P.710-717.

74. Frank HG, Malekzadeh F, Kertschanska S, Crescimanno C, Castellucci M, Lang I, Desoye G, Kaufmann P. Immunohistochemistry of two different types of placental fibrinoid.//Acta Anat (Basel). -1994.-Vol. 150(1). P.55-68.

75. Fraser RB, Waite SL, Wood KA, Martin KL.Impact of hyperglycemia on early embryo development and embryopathy: in vitro experiments using a mouse model. // Hum Reprod. 2007. - Vol. 22(12), P.3059-3068.

76. Fujiwara N, Kobayashi K. Macrophages in inflammation //Curr. Drug. Targets. Inflamm. Allergy. 2005. - Vol. 4. - P.281-286.

77. Fukuda M, Okuyama T, Furuya H. Growth and function of the placenta -with special reference to various enzymes involved in the biosynthesis of steroids in the human placenta // Nippon. Sanka. Fujinka. Gakkai Zasshi. 1986. - Vol. 38, № 3. - P. 411-416.

78. Gardner L., Moffett A. 2003. Dendritic cells in human deciduas // Biol. Reprod. V. 69, №. 4. P. 1438-1446.

79. Garcia-Lloret MI, Yui J, Winkler-Lowen B, Guilbert LJ. Epidermal growth factor inhibits cytokine-induced apoptosis of primary human trophoblasts // J Cell Physiol. 1996. - Vol. 67(2). P.324-332.

80. Geerlings. S.Pathogenesis of bacteriuria in women with diabetes mellitus // Int. J. of Antimic.Ag., 2007. - Vol. 119, P.539.

81. Geier G., Schuhman R., Kraus H., Regional unterschliedliche Zellproliferation innerhalb der Placentome reifer menschlicher Placenten:95autoradiographische Untersuchungen // Arch Gynacol. -1975. Vol. 218. P. 31-37.

82. Goldstein J., Braverman M., Salafia C., Buckley P. The phenotype of human placental macrophages and its variation with gestational age // Am. J. Pathol. 1988. - Vol. 133, №. 3. -P.648-659.

83. Gray H. Anatomy of the Human Body. 1918. twentieth edition thoroughly revised and re-edited by warren h. lewis illustrated with 1247 engravings philadelphia: lea & febiger, 1918 new york: bartleby.com, 2000

84. Greco M.A, Kamat B.R, Demopoulos R. Placental protein distribution in maternal diabetes mellitus: an immunocytochemical study // Pediatr. Pathol. 1989. - Vol. 9, № 6. - P.679-690.

85. Gude N.M., Roberts C.T., Kalionis B, King R.G. Growth and function of the normal human placenta // Thromb. Res. — 2004. Vol. 114(5-6).-P.397-407.

86. Hanna J, Goldman-Wohl D, Hamani Y, Avraham I, Greenfield C, Natanson-Yaron S. Decidual NK cell regulate key developmental processes at the human fetal-maternal interface // Nat. Med. — 2006. — Vol. 12.-P. 1065-1074.

87. Heap R.B. Paracrine and autocrine functions of the placenta: a key to the success of viviparity? // Exp. Clin. Endocrinol. — 1994. Vol. 102, № 3. — P.262-268.

88. Hussein MR Abd-Elwahed A.R., Abodeif E.S., Abdulwahed S.R Decidual immune cell infiltrate in hydatidiform mole // Cancer Invest. -2009.-Vol. 27(1). P.60-66.

89. Isihara N., Matsuo H., Murakoshi H. Increased apoptosis in the syncytiotrophoblast in human term placentas complicated by either preeclampsia or intrauterine growth retardation // Am. J. Obstet. Gynecol. -2002.-Vol. 186, № 1.-P. 158-166.

90. Iverson I.E., Farsund T. Flow cytometry in the assessment of human placental growth // Acta. Obstet. Scand. 1985. - Vol. 64. - P. 605-607.

91. Jackson M.R., Mayhew T.M., Boyd P.A. A quantitative description of the elaboration and maturation of villy from 10 weeks of gestation to term//Placenta. 1992. - Vol. 13. - P. 357-370.

92. Kammerer U., Schoppet M., McLellan A. Human decidua contains potent immunostimulatory CD83(+) dendritic cells // Am. J. Pathol. -2000.-Vol. 157, № 1. -P.159-169.

93. Kara SA, Toppare MF, Sara? E. Pyelocaliectasis and intrarenal artery doppler indices in uncomplicated pregnancies. //Gynecol Obstet Invest. -1999.-Vol. 48(1). P.18-21.

94. Kinsley B. Achivivng better outcomes in pregnancies complicated by type 1 and type 2 diabetes mellitus // Clin. Ther. 2007. - Vol. 29. -P.153-160.

95. Kopcow H.D, Allan D.S, Chen X, Rybalov B, Andzelm M.M, Ge B, Strominger J.L. Human decidual NK cells form immature activating synapses and are not cytotoxic // Proc Natl. Acad. Sci. USA.- 2005. -Vol. 102, № 43. — P.15563-15568.

96. Kudo Y, Boyd CA. Human placental indoleamine 2,3-dioxygenase: cellular localization and characterization of an enzyme preventing fetal rejection.// Biochim Biophys Acta.- 2000.- Vol. 1500(1). P. 119-124.

97. Kwik M, Seeho S.K., Smith C, McElduff A, Morris J.M. Outcomes of pregnancies affected by impaired glucose tolerance // Diabetes Res.

98. Clin. Pract. 2007. - Vol. 77, № 2. - P.263-268.

99. Le Bouteiller P, El Costa H, Aguerre-Girr M, Tabiasco J. Immunity of pregnancy: novel concepts // Bull Acad Natl Med. 2009.- Vol. 193(5). P. 1029-1041

100. Lash G.E., Schiessl B, Kirkley M, Innes B.A., Cooper A, Searle R.F. Expression of angiogenic growth factors by uterine natural killer cells during early pregnancy // J. Leukoc. Biol. 2006.- Vol. 80. - P.572-580.

101. Li Y, Huang S.L., Wu Y.F. Effect of dendritic cells stimulated by different ways on cytotoxic activity of cord blood derived cytokine-induced killer cells and natural killer cells // Zhonghua. Er. Ke. Za. Zhi. — 2005. Vol. 43, № 3. p. 204-205

102. Majai G., Petrovski G., Fesus L. Inflammation and the apopto-phagocytic system // Immunol. Lett. 2006. - Vol. 104, №. 1-2. - P.94-101.

103. Manaster I, Mandelboim O.The unique properties of human NK cells in the uterine mucosa // Placenta. 2008. - Vol.29. - P.60-66.

104. Marx L., Arck P., Kapp M., Kieslich C., Dietl J. Leykocyte populations, hormone receptors and apoptosis in eutopic and ectopic first trimester human pregnancies // Hum. Reprod. — 1999. — Vol. 14. -P.1111-1117.

105. Matthiesen L., Berg G., Ernerudch J. et al. Immunology of preeclampsia // Immunology of Pregnancy. — 2005. Ed. U.R. Markert.Basel: Karger. -P.49-61. (Chem. Immunol. Allergy, V.89).

106. Mc Donald H.M., Chambers H.M. Intrauterine infection and spontaneous midgestation abortion: is the spectrum of microorganisms similar to that in preterm labor? // Infect Dis. Obstet. Gynecol. 2000. -Vol. 8, № 5-6. — P.220-227.

107. Mc Donald H.M., O'Loughlin J.A., Jolly P. Prenatalmicrobiological risk factors associated with preterm birth // Br. J. Obstet.

108. Gynecol. 1991. - Vol. 92, № 1. - P. 190-196.98

109. Meyer B, Calvert D, Moses R. Free fatty acids and gestational diabetes mellitus // Aust. N Z J Obstet. Gynaecol. 1996. - Vol. 36, №3. — P.255-257.

110. Moffett-King A. Natural killer cells and pregnancy // Nat Rev Immunol. 2002. - Vol. 2, № 9. - P.656-663.

111. Mor G, Abrahams VM. Potential role of macrophages as immunoregulators of pregnancy // Reprod. Biol, Endocrinol. — 2003. — Vol.12, №2.-P.l-119.

112. Moretta A. Natural killer cells and dendritic cells: rendezvous in abused tissues // Nat. Rev. Immunol. 2002. - Vol. 2. - P.957-964.

113. Nagamatsu T., Schust D.J. The immunomodulatory roles of macrophages at the maternal-fetal interface // Reprod. Sci. — 2010. Vol. 17(3). — P.209-218. .

114. Ozenci C.C., Korgun E.T., Demir R. Immunohistochemical detection of CD45+ CD56+ and CD 14+ cells in human deciduas during early pregnancy // Early Pregnancy. — 2001. Vol.5, №.3. - P.164-175.

115. Parmley T. Placental senescence. // Adv Exp Med Biol. -1984.-Vol. 176. P. 127-132.

116. Parr M.B., Parr E.L. Immunoglobulins in the female genital tract, in The Endocrinology of Pregnancy (Bazer FW, ed.) Blackwell Science, Cambridge, 1996. P. 275-308.

117. Pongcharoen S, Searle RF, Bulmer JN. Placental Fas and Fas ligand expression in normal early, term and molar pregnancy // Placenta. 2004-Vol.25. P.321-330.

118. Redline R.W. Macrophages in the basal plate of pre-eclampticplacenta. // Placenta. 2001. - Vol. 22, №10. - P. 890-892.99

119. Redline RW. Placental inflammation// Semin Neonatol. -2004.-vol.9(4). P.265-274.

120. Renaud SJ, Graham CH. The role of macrophages in uteroplacental interactions during normal and pathological pregnancy. // Immunol Invest. 2008- Vol.37(5). P.535-564.

121. Diabetes Mellitus and Pregnancy: View on age. Report of a WHO Consultation; WHO/NCD/NCS/1999.02. Geneve. 2003. 165 pp.

122. Sacks GP, Redman CW, Sargent IL. Monocytes are primed to produce the Thl cytokine IL-12 in normal human pregnancy: an intracellular flow cytometric analysis of peripheral blood mononuclear cells // Clin. Exp. Immunol. 2003. - Vol. 131. - P. 490-497.

123. Sands J., Dobbing J. Continuing growth and development of third trimester human placenta. // Placenta. 1985. - Vol. 6. - P. 13-22.

124. Singh U., Nicholson G., Urban B.C., Sargent I.L., Kishore U., Bernal A. L. Immunological properties of human decidual macrophages -a possible role in intrauterine immunity // Reproduction. 2005. -Vol.129, №.5.-P. 631-637.

125. Trundley A, Moffett A. Human uterine leukocytes and pregnancy. // Tissue Antigens. -2004. Vol. 63, №1. - P.l-12.

126. Vince G.S., Starkey P.M., Jackson M.C., Sargent I.L., Redman C.W.G. Flow cytometric characterization of cell populations in human pregnancy deciduas and isolation of decidual macrophages // J. Immunol. Methods. 1990. - Vol.132, №.2. - P. 181-189.

127. Watterberg K. Anti-inflammatory therapy in the neonatal intensive care unit: present and future // Semin. Fetal Neonatal Med. 2006. - Vol. 11, №5.-P. 378-84.

128. Winick M, Coscia A., Noble A. Cellular growth in human placenta. 1. Normal cellular growth // Pediatrics. 1967. -Vol. 39. - P. 248-251.

129. World Health Organization. Improving Access to Quality Care in Family Planning: Medical Eligibility Criteria for Contraceptive Use. Geneve. World Health Organization; 1996.

130. Yoon BH, Romero R, Park JS, Kim CJ, Kim SH, Choi JH, Han TR. Fetal exposure to an intra-amniotic inflammation and the development of cerebral palsy at the age of three years // Am J. Obstet. Gynecol. 2000. -Vol. 182, №3.-P. 675-681.

131. Zigic Z, Markovic S, Grbesa D, Ramie S, Halilovic A. Quantitative research of capillaries in terminal villi of mature placentae. / Bosn J Basic Med Sci. 2010. - Vol. 10. - P. 147-152.

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.30) на тему:Возрастные особенности иммунокомпетентных клеток плаценты человека при сахарном диабете

Автореферат диссертации по медицине на тему Возрастные особенности иммунокомпетентных клеток плаценты человека при сахарном диабете

Оглавление диссертации Дурнова, Анна Олеговна :: 2011 :: Санкт-Петербург

Введение диссертации по теме "Геронтология и гериатрия", Дурнова, Анна Олеговна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Возрастные особенности иммунокомпетентных клеток плаценты человека при сахарном диабете"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Дурнова, Анна Олеговна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций