Автореферат и диссертация по медицине (14.00.02) на тему:Возрастные изменения лимфоидных структур и лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны при хроническом деструктивном периодонтите

На правах рукописи

РГБ ОД

ВОЙТОВИЧ 2е АВПт

Алла Барьивна

ВОЗРАСТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЛИМФОИДНЫХ СТРУКТУР И ЛЕЙКОЦИТАРНЫХ ИНФИЛЬТРАТОВ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ДЕСНЫ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ДЕСТРУКТИВНОМ ПЕРИОДОНТИТЕ

14 00 02 - анатомия человека 14 00 15 - патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

"Ud44bB31

Барнаул - 2008

003445631

Работа выполнена в Институте химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (г Новосибирск) и Государственном образовательном учреждении высшею профессионального образования «Новосибирский государственный медицинский университет Росздрава»

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Майбородин Игорь Валентинович

доктор медицинских наук, профессор Машак Светлана Владимировна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Калачев Геннадий Анатольевич

доктор медицинских наук, профессор Ларионов Петр Михайлович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Омская государственная медицинская академия Росздрава»

Защита состоится "_"_ 2008 г в _часов на

заседании диссертационного совета Д 208 002 02 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Алтайский государственный медицинский университет Росздрава» (656038, г Барнаул, пр Ленина, 40)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Алтайский государственный медицинский университет Росздрава» (656017, г Барнаул, ул Папанинцев, 126)

Автореферат разослан "_"_" 2008 г

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

Е А. Цеймах

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы: Периодонтиты характеризуются воспалением поддерживающих тканей зубов и приводят к резорбции альвеолярного отростка челюсти, уменьшению степени прикрепления мяжих тканей к зубам и потере последних Изменения связаны с персистенцией лейкоцитов в гингивальной и периодо!ггалыюй соединительной ткани (Holland R et al, 1983, Sashima M et al, 1990, Wactawski-Wende J et al, 1996, Forna N et al, 1998, Sawa T et al, 1999, Wactawski-Wende J, 2001, Mitsuta T et al, 2002)

При изучении лейкоцитов в биопенях десны пациентов с пародонтитом иногда было найдено мною В-клеток (78-87%), Т-лимфоцитов и мононуклеаров (10%) Сделано заключение о роли дисбаланса иммунной регуляции в возникновении периодонтита (Syqanen S et al, 1984, Михалева J1 М и др , 2001, Hillmann G et al, 2001, Erciyas К et al, 2006) Тенденция к формированию обширных плазмоклеточных инфильтратов свидетельствует о невозможности противостоять периодонтопатогснным бактериям и о предрасположенности к периодонтиту (Kinane DF, 2000, Kinane DF, Lappin D F, 2001, Lappin D F et al, 2003) Дефицит Ig А приводит к продолжительной активации иммунокомпетентных клеток и индукции воспалительного процесса, сопровождающегося лимфонеогенезом (Lazarus N Н et al, 2003, Fagarasan S HonjoT , 2004, Fagarasan S, 2006, Suzuki K. et al, 2007)

Со1ласно данным R Gillett и соавт (1986) воспалительные инфильтраты десны при хроническом пародонтиге можно разделить на 2 группы из-за различной активности процесса Когда активность невысока, объем воспаленной соединительной ткани десны небольшой и здесь преобладают малые В-лимфоцигы В случае активации объем пораженных тканей возрастает, и большинство B-клеточной популяции трансформируется в плазматические клетки В В Гаврилова (2007) также сообщает о наличии в отдельных лейкоцитарных инфильтратах слизистой оболочки десны больных хроническим периодонтитом большого числа плазматических клеток

Таким образом, несмотря на большой объем литературных данных, посвященных изменениям тканей при различных периодонтитах, практически полностью отсутствуют результаты сравнительного изучения динамики численности плазматических клеток в слизистой оболочке десны при патологии периодонта у пациентов различного возраста Также в литературе нет сведений о возможное! и формировании лимфоидных фолликулов в десне при хроническом воспалении, хотя такие лимфоидные структуры образуются в слизистых оболочках других органов при хронических воспалительных процессах

Цель работы. Определить изменения численности плазматических клеток в воспалительных инфильтратах слизистой оболочке десны при деструктивном хроническом периодонтите у пациентов различного возраста

Задачи исследовании.

1 Методами световой микроскопии с применением моноклональных антител к антигену СБ38 изучить плазмоцитарную инфильтрацию слизистой оболочки десны здоровых людей различного возраста и пола

2 На основании использования и м м у н о ц ит о х и м и и и исследовагь численную плотность плазматических клеток в лейкоцитарных инфильтратах слизистой оболочки десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом

3 Установить особенности строения различных, в зависимости от количества плазмоцитов, воспалительных инфильтратов десны больных хроническим деструктивным периодонтитом

4 Изучить возрастную динамику морфологии различных типов лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом

Научная новизна. Впервые проведено исследование лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом с применением моноклональных ангигел к антигену СБЗВ Было обнаружено, что в десне присутствует 2 типа воспалительных инфильтратов инфильтраты с высокой численностью плазмоцитов (плазматические клетки составляют 10-30% от общего числа клеток с численной плотностью 80-220 плазмоцитов на 10^ мкм2 площади среза инфильтрата) и структуры с низким содержанием плазматических клеток (с относительной и абсолютной численностью данных клеточных элементов менее 2% и до 30 клеток на единицу площади среза структуры, соответственно) Различия средних величин количества плазматических клеток между инфильтратами с высоким и низким их содержанием в некоторых случаях достигают 100-кратных величин

Впервые доказано существование лимфоидных фолликулов с высоким числом плазматических клеток в слизистой оболочке десны при хроническом деструктивном периодонтите В лимфоидных фолликулах десны при визуальном наблюдении отсутствуют светлые центры, сами структуры сильно деформированы, крайне редко на срезе имеют овальную форму из-за малого объема слизистой оболочки, отсутствия подслизистой и склероза тканей вследствие хронического воспалительного процесса

Впервые продемонстрировано, что воспалительные инфильтраты с малым числом плазматических клеток содержат много нейтрофильных лейкоцитов (26-37% от общего числа клеток и 220-370 нейтрофилов на Ю5 мкм2 площади среза инфильтрата) и являются истинными лейкоцитарными инфильтратами, формирующимися в тканях в местах высокой концентрации антигенных веществ В клеточном составе инфильтратов с большим количеством плазмоцшов относительно мало нейтрофилов (3-12% от всех клеток и 23-95 лейкоцитов на единицу площади среза) и эти структуры являются лимфоидными фолликулами, образующимися в слизистой оболочке десны, как и в других органах, при хроническом воспалении

Впервые изучена возрастная динамика строения лейкоцитарных

инфильтратов слизистой оболочки десны нацистов с хроническим деструктивным периодонтитом Было найдено, что с возрастом больных уменьшается размер лейкоцитарных инфильтратов с низким содержанием плазматических клеток, в шггоархтектонике этих структур сокращается количество моноцитов и лимфоцитов, увеличивается число макрофагов и клеток с признаками деструкции Инфильтраты с высокой концентрацией плазматических клеток (лимфоидные фолликулы) имеют более стабильную структуру, практически не меняющуюся с возрастом обследованных

Впервые получены данные, что во всех лейкоцитарных инфильтратах слизистой оболочки десны, независимо от численности плазматических клеток в них, по мере увеличения возраста пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом увеличивается содержание макрофагов, что косвенно указывает на возрастание значения этих клеток в местном иммунитете

Впервые установлено, что С038+ клетки отсутствуют в эпителии десны пациентов всех возрастных групп с хроническим деструктивным периодонтитом

Теоретическая и практическая значимость. В результате проведенного исследования в слизистой оболочке десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом найдены лимфоидные фолликулы с большим количеством плазматических к теток Дифференциальная диагностика таких лимфоидных фолликулов и нейгрофильных лейкоцитарных инфильтратов должна включать иммуногистохимическое исследование для выявления истинной численности плазматических клеток В связи с тем, что в самой старшей возрастной группе пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом в лейкоцитарных инфильтратах выше численная плотность эритроцитов и макрофагов, целесообразно проводить лечение периодонтита и гингивита с учетом возраста пациенгов, у больных старших возрастных групп необходимы разработка и проведение методов лечения, направленных на стабилизацию стенки кровеносных сосудов и поддержание адекватной иммунной защиты в тканях десны

Основные положения, выносимые на защиту.

1 В слизистой оболочке десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом присутствует 2 типа воспалительных инфильтратов инфильтраты с высокой численностью плазмоцитов (лимфоидные фолликулы) и структуры с низким содержанием плазматических клеток (истинные лейкоцитарные инфильтраты)

2 С возрастом пациентов в цитоархитектонике лейкоцитарных инфильтратов с низким содержанием плазматических клеток сокращается количество моноцитов и лимфоцитов, увеличивается число макрофагов и клеток с признаками деструкции Лимфоидные фолликулы имеют более стабильную структуру, практически не меняющуюся с возрастом

3 Плазматические клетки отсутствуют в эпителии десны пациентов всех возрастных групп с хроническим деструктивным периодонтитом

Внедрение результатов исследования в практику. Результаты исследований внедрены в практику научно-исследовательской работы Центра новых медицинских технологий ГУ НИИ химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН и лечебную практику ООО «Дента» (Новосибирск)

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены на научно-практической конференции, посвященной 80-летию ГОУ ДПО «Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей Росздрава» и 20-летию кафедр стоматологического профиля НГИУВа «Актуальные вопросы стоматологии и челюстно-лицевой хирургии» (Новокузнецк, 2007), VIII Международном симпозиуме и IX Чуйской научно-практической конференции «Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма» (Бишкек, 2007), Международной гистологической конференции, посвященной 80-летию со дня рождения Заслуженного деятеля науки РФ профессора П В Дунаева «Морфогенезы в эвошоции, индивидуальном развитии и эксперименте» (Тюмень, 2008) и на объединенном заседании сотрудников кафедр ГОУ ВПО Новосибирского государственного медицинского университета Росздрава, практических врачей и научного персонала лабораторий ГУ НИИ химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск, 2008)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, 3 из которых в изданиях, рекомендованных ВАК № для публикации результатов диссертационных исследований

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных результатов с их обсуждением, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы Работа изложена на 150 страницах компьютерного текста, содержит 16 таблиц, иллюстрирована 29 многокомпонентными рисунками Список литературы включает 309 источников (50 отечественных и 259 иностранных) Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

С хроническим деструктивным пер подо (гтитом было обследовано 40 мужчин и 40 женщин Возраст больных был в промежутке от 18 до 58 лет 1830 лет - 24 пациента (12 мужчины и 12 женщин), 31-40 лет - 24 больных (12 мужчин и 12 женщины) 41-50 лет - 20 человек (10 мужчин и 10 женщин) и старше 51 года - 12 пациентов (6 мужчин и 6 женщин) Видимых признаков

воспаления тканей десны (гингивита) у пациентов данных групп не было

Для исследования была использована ткань десны премоляров верхней челюсти, полученная при хирургическом лечении заболеваний периодонта и биопгированная при удалении зубов но ортодонтическим показаниям Кроме того, для хорошей адгезии реставрационного пломбировочного материала к тканям зуба необходимо обеспечить сухость склеиваемых поверхностей А так как даже в норме из десны постоянно выделяется десневая жидкость, для обеспечения сухости десну резецируют или коагулируют до уровня пораженной ткани зуба

Биоптаты тканей десны фиксировали в 4% растворе параформальдегида на фосфатном буфере (рН 7,4) не менее 24 часов, обезвоживали в серии этанола возрастающей концентрации, просветляли в ксилоле и заключали в парафин Срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином и по Романовскому (Саркисов Д С, Перов 10 Л, 1996)

Кроме того, на срезах с лейкоцитарными инфильтратами проводили реакцию с- антH-CD38 антителами непрямым ичмунопероксидазным методом Экспрессия CD38 может быть найдена в некоторых незрелых гечатопоэгических и зрелых плазматических ктсгкач (Guilhano М J et al, 2001, Hubeau С et al, 2001, Katayama Y et al ,2001, Farstad IN et al, 2002, Dorn I et al, 2002 Medina F et al, 2003, 2004, 2007)

Для непрямого иммунопероксидазноло метода использовали стандартный протокол окраски и набор реагентов "Dako reagents kit" (Dako, Дания) Препараты, для более точного определения типа клеток докрашивали гемалауном Майера и после дегидратации заключали в полистирол

Все гистологические срезы изучали на световом микроскопе Tnton (Seti, Бельгия) при увеличении до 1200 раз.

Для определения структурной организации десны применяли квадратную тестовую систему, совмещаемую на экране компьютера с изображением, полученным при помощи цифровой видеокамеры микроскопа Для изучения показателей размеров инфильтратов (использование объектива с увеличением X 4) конечная площадь тестового квадрата была равна 14400 мкм2 (сторона квадрата 120 мкм), при подсчете цитограммы клеток (применение объектива с увеличением X 40) - 144 мкм2 (сторона квадрата 12 мкм) (Майбородин И В и др, 2005) Статистическую обработку результатов проводили на прикладной статистической программе MS Excel (Microsoft, USA), определяли среднее арифметическое и ошибку среднего арифметического Различия между средними считали достоверными при р<0,05

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Обоснование принципа разделения воспалительных инфильтратов слизистой оболочки десны пациентов с хроническим деструктивным

периодонтитом

Сравнение полученных данных численности плазмоцитов в слизистой оболочке десны с литературными данными При окрашивании тканей десны с использованием антител против CD38 антигена не были

найдены специфически реагирующие объекты в эпителии и между эпителиоцитов, хотя иногда большое количество CD38+ клеток присутствовало непосредственно под ба зальной мембраной

F Joachim с соавт (1989, 1990) исследовали биоптаты 20 нацистов с периодонтитом и 3 добровольцев В эпителии всех биопгатов не были найдены плазмоцигы Эти клетки встречались очень редко в соединительной ткани здоровых субъектов При периодонтитах большая часть плазмоцитов была расположена глубже линии нейтрофилов в базальной мембране

Даже при плазмоцитарном гингивите плазматические клетки присутствовали только в соединительной ткани под эпителием (Hedin С А et al, 1994, Marker Р, Krogdahl А, 2002, Velez I, Mintz S M, 2005, Aral S, 2007)

На основании высокоспецифического окрашивания плазмоцитов и анализа литературных данных можно заключить, что в эпителиальной выстилке десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом плазматические клетки отсутствуют Такое отсутствие плазмоцитов между эпителиоцитами, возможно, является общим для всех типов эпителия или, по крайней мере, эпителия слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта

После подсчета клеток, реагирующих с антителами против антигена CD38 в инфильтратах слизистой оболочки десны, были получены данные, свидетельствующие о довольно значительной численности таких клеточных элементов 9,88±10,6% от общего числа клеток в инфильтратах и 71,4±76 специфически окрашенных клеток на 10s мкм2 площади среза инфильтрата Следует отметить, что в некоторых случаях число окрашенных клеток было очень значительным до 30% и 212,76 клеток на Ю5 мкм

Плазматические клетки всегда присутствуют в участках хронического воспаления, включая периодонгальные процессы При изучении лейкоцитов в биопсиях десны пациентов с периодонтитом во всех наблюдениях было много B-клеток и плазмоцитов, их процент достигал 90% (Seymour G J et al, 1978, Syijanen S etal, 1984 Celenligil H etal, 1993, BsngL etal, 1997, GemmellE et al, 2001, Михалева Л M и др, 2001, Hillmann G et al, 2001)

Согласно данным S M Mallison и соавт (1991) при хроническом периодонтите происходит увеличение числа плазмоцитов до 10 клеток на мм2, но в некоторых случаях возможно возрастание количества таких клеточных форм до 80-150 клеток/мм2 По результатам исследований В В Гавриловой (2007) численность плазматических клеток в слизистой оболочке десны при периодонтите составляет 0,975±0,993% от всех клеток и 3,92+4,02 плазмоцитов на 10ч мкм2 площади среза слизистой оболочки И АПритчина (2006) в своих исследованиях слизистой оболочки десны при хроническом периодонтите получила данные, что относительное число плазматических клеток там равно 3,3+0,765% от всех клеток, а абсолютное количество - 13,7±3,7 плазмоцитов на Ю1 мкм" площади среза

Средние величины численной плотности плазматических клеток в наших исследованиях превышают представленные в литературе результаты Следует отметить, что S М Mallison с соавт (1991), И-АПригчина (2006) и В В Гаврилова (2007) исследовали число плазмоцитов во всей слизистой

оболочке десны без применения высокоспецифического реагирования с антителами против СБ38 Тогда как мы в данной работе предприняли изучение количества плазматических клеток только в лейкоцитарных инфильтратах, где их число на единицу площади среза инфильтрата значительно больше, чем в среднем по всей ткани Этим можно объяснить большее число плазмоцитов в наших иссчедованиях, чем в работах других ученых

Принцип разделения лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны на структуры с низким и высоким содержанием плазматических клеток. При изучении клеточного состава лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны пациешов с хроническим деструктивным периодонтитом обратили внимание на очень высокое значение ошибки средних величин некоторых показателей, в частности, относительного и абсолютного количества плазматических клеток Ошибка среднего арифметического в данном случае была даже несколько выше самого среднего арифметического Это указывает на значительную разнородность значений вариационного ряда

При анализе вариационного ряда процента плазматических клеток было обнаружено, что величины значений колебались от 0% до 30% Исследование частоты встречаемости каждого значения показало наличие нескольких максимумов Первый пик высокой частоты соответствует 0%-2% Происходит постепенное снижение частоты случаев до «0» Второй пик частоты встречаемости величин значений расположен в области 13%-17% и третий - на 23%-27%

При изучении распределения частоты встречаемости величин значений численной плотности плазмоцитов также были получены 3 максимума с плавным переходом между вторым и третьим один для инфильтратов с численностью плазматических клеток до 30 на 105 мкм" площади среза структуры, второй с количеством данных клеточных элементов 80-140 и т ретий - 150-220 клеток на той же площади

На основании этого было сделано предположение, что в слизистой оболочке десны пациешов с хроническим деструктивным периодонтитом одновременно присутствуют 2 типа лейкоцитарных инфильтратов с низким содержанием плазматических клеток и с высокой концентрацией данных клеточных элементов

Инфильтраты с низкой концентрацией плазмоцитов характеризуются их огносотельным количеством 0%-2% и численной плотностью до 30 клеток на 10^ мкм2 площади среза

В структурах с высокой пропорцией плазматических клеток эти клеточные элементы составляют не менее 10% от общего числа клеток и их абсолютное содержание - более 80 плазмоцитов на 105 мкм2 площади среза инфильтрата

Морфологическая характеристика различных лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны пациентов разного возраста с хроническим деструктивным периодонтитом Строение лейкоцитарных инфильтратов всех пациентов. Все

лейкоцитарные инфильтраты, присутствующие в слизистой оболочке десны практически всех пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом, разделили на инфильтраты с низким содержанием плазматических клеток и структуры с высоким содержанием плазмоцитов При изучении строения таких инфильтратов было найдено, что в структурах с высоким содержанием плазмоцитов относительное и абсолютное число этих клеток было больше в 40,4 и 32 раза, соответственно, чем в инфильтратах с низкой концентрацией плазматических клеток Кроме того, в инфильтратах с высоким содержанием плазмоцитов процент и численная плотность нейтрофилов были меньше в 4,2 и 5,2 раза, соответственно, относительно инфильтратов с низкой пропорцией плазматических клеток Следует отметить, что другие исследователи тоже отмечают более чем 10-кратное возрастание числа плазмоцитов в слизистой оболочке десны при некоторых особенностях развития хронического периодонтита (Malhson SM et al, 1991)

На основании полученных данных таких выраженных отличий численности плазмоцитов между двумя типами лейкоцитарных инфильтратов можно сделать заключение о том, что это не последовательные стадии развития и старения одних и тех же инфильтратов, а абсолютно разные по причинам и способам формирования структуры Об этом же свидетельствуют несколько пиков частоты распределения численности плазматических клеток, а не постепенное изменение их количества, что описано выше

Развитие периодонтита может быть связано с численностью плазматических клеток Тенденция к формированию обширных плазмоклеточных инфильтратов может свидетельствовать о невозможности противостоять периодонгопатогенным бактериям и о предрасположенности к периодонтиту (Kinane DF, 2000, Kinane D F, Lappin D F, 2001; Lappin D F et al, 2003)

R A. Reinhardt с соавт (1988) показали, что B-клетки преобладали в инфильтратах биопсий десны из активных мест периодонтального процесса, относительно неактивных регионов и биотатов здоровых людей Отношение Т/В-лимфоцитов было ниже при активном воспалении

При изучении воспалительных инфильтратов в десне пациентов с гингивитом и пародонтитом было найдено, что при гингивите у детей младшего возраста преобладают малые лимфоциты, при ювенильном периодонтите более половины клеток были плазмоцитами Образцы при хроническом пародошттге взрослых можно было разделить на 2 группы, возможно, из-за различной активности процесса Когда активность невысока, объем воспаленной соединительной ткани десны небольшой и здесь преобладают малые B-лимфоциты В случае активации объем пораженных тканей возрастает, и большинство B-клеточной популяции трансформируется в плазматические клетки (Gillett R et al, 1986)

Также в пользу существования двух типов лейкоцитарных инфильтратов указывают отсутствие значимых изменений количества лимфоцитов и очень выраженные различия численности нейтрофилов, а не постепенное изменение их количества

В данном случае в слизистои оболочке десны пациентов с деструктивным хроническим периодонтитом одновременно присутствуют воспалительные инфильтраты с очень малым числом плазматических клеток и высоким -не йтроф ильных лейкоцитов и структуры с большим содержанием плазмоцитов и малым - нейтрофилов

Скорее всего, в первом случае (мало плазмоцитов и много нейтрофилов) -это типичные лейкоцитарные инфильтраты, формирующиеся из нейтрофилов и лимфоцитов в десне в местах большой концентрации антигенных вещества

В другом случае (много плазматических клеток, иногда очень много - до 30% от всех клеток, и мало нейтрофилов), наиболее вероятно, мы имеем дело не с истинными лейкоцитарными инфильтратами, а с лимфоидными фолликулами, формирующимися в слизистой оболочке десны из В-клеток при хроническом воспалительном процессе Образование лимфоидных фолликулов в слизистых оболочках рахтичных органов, в том числе и желудочно-кишечного тракта, достаточно хорошо известно и достаточно полно описано в научной литературе

Сначала в тканях группируются В-лимфоциты, таким образом, формируется фолликул без светлого центра Недифференцированные В-лимфоциты не имеют антигенного комплекса, реагирующего с антителами против СБ38 Потом, довольно быстро, по мере пролиферации и дифференцировки В-клеток, в лимфоидных фоллик>лах формируется светлый центр Зрелые и незрелые плазматические клетки, а также часть плазмобластов уже имеют антигенный комплекс С038

Не исключено, что присутствие лимфоидных фолликулов без светлых центров (с незрелыми В-клетками) и появление герминативных центров (большого числа зрелых плазматических клеток) в фолликулах обусловливает появление второго и третьего пиков на графике распределения частоты встречаемости СБ38+ клеток в инфильтратах Можно предположить, что второй пик обусловлен иммуно- и плазмобластами (только малая часть которых содержит антигенный комплекс С038), а третий - плазматическими клетками каждая из которых является С038+

Огсутствис светлых цеш'ров в фолликупах в исследованных нам и препаратах, скорее всего, обусловлено значительной деформацией этих структур Слизистая оболочка десны имеет незначительный объем, в десне отсутствует подслизистая Формирование фолликулов в тканях десны ограничено с одной стороны эпителием, с другой стороны - надкостницей альвеолярного отростка челюсти

Сведений о возможности формирования лимфоидных фолликулов в десне при хроническом периодонтите в доступной литературе найдено не было Возможно, что такие лимфоидные фолликулы в десне из-за их деформации ранее расценивались как обычные лейкоцитарные инфильтраты

О том, что в десне при хроническом периодонтите могут присутствовать лимфоидные фочликулы косвенно свидетельствуют результаты исследований S М Mallison и соавт (1991), показавших, что при совместном действии антигена и адъюванта резко возрастает число плазматических клеток с 10 до 80-150 клеток/мм2 Другие исследователи также отмечают большое число В-клеток и плазматических клеток в лейкоцитарных инфильтратах стромы десны при быстро прогрессирующем периодонтите (Seymour G J etal, 1978, Celenligil H et al, 1993, Feng L et al, 1997, Gemmell E et al, 2001) A J Mime и соавт (1989) обнаружили, что в 60% случаев в лейкоцитарных инфильтратах преобладали плазмоциты, в 20% - было много этих клеток и 20% являлись смешанными воспалительными инфильтратами

Строение лейкоцитарных инфильтратов пациентов 18-30 лет. При разделении лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны только пациентов возрастной группы 18-30 лет на структуры с низким и.-высоким содержанием плазматических клеток было обнаружено, что в инфильтратах с высоким содержанием этих клеток относительное и абсолютное число плазмоцитов было больше в 27,4 и 21,7 раза, соответственно, чем в структурах с их низкой концентрацией Точно так же, как и во всей выборке пациентов, в инфильтратах с высоким содержанием плазмоцитов процент и численная плотность нейтрофилов были меньше в 4,3 и 5,5 раза, также соответственно, относительно инфильтратов с низкой пропорцией плазматических клеток

В данном случае также наблюдается довольно значительное (более чем 10-кратное) различие численности плазматических клеток и обратное отличие количества нейтрофилов между лейкоцитарными инфильтратами с высоким и низким содержанием плазмоцитов То есть в тех структурах, где много плазматических клеток, было обнаружено небольшое число нейтрофилов, и наоборот

Строение лейкоцитарных инфильтратов пациентов 31-40 лет. В десне пациентов 31-40 лет с хроническим деструктивным периодонтитом, в воспалительных инфильтратах с высоким содержанием плазматических клеток относительное и абсолютное их число было больше в 49,9 и 40,1 раза, соответственно, чем в структурах с низкой концентрацией этих клеток По-прежнему в инфильтратах с высоким содержанием плазмоцитов процент и численная плотность нейтрофилов были меньше в 3,6 и 4,3 раза, также соответственно, относительно инфильтратов с низкой пропорцией плазматических клеток

Следует отметить, что в данной возрастной группе между инфильтратами с разной концентрацией плазмоцитов было отмечено достоверное различие еще одного показателя В структурах с высоким содержанием плазматических клеток было в 5,1 раза больше относительное число иммуно- и плазмобластов

Строение лейкоцитарных инфильтратов пациентов 41-50 лет. У пациентов 41-50 лет с периодонтитом в слизистой оболочке десны в воспалительных инфильтратах с высоким содержанием плазматических клеток относительное и абсолютное число данных клеточных элементов было бочьше в 94,1 и 74,7 раза, соответственно, чем в структурах с низкой концентрацией

плазмоцигов В инфильтратах с высоким содержанием плазмоцитов процент и численная плотность нейтрофилов были меньше в 4,3 и 5,2 раза, также соответственно, относительно инфильтратов с низкой пропорцией плазматических клеток

В этой возрастной группе между инфильтратами с разной концентрацией плазмоцитов было отмечено достоверное различие уже и относительного и абсолютного количества иммуно- и плазмобластов В структурах с высоким содержанием плазматических клеток величины значений этих показателей численности бластов были в 5,7 и 4,8 раза, соответственно, больше Появление достоверных различий относительного и абсолютного количества иммуно- и плазмобластов в данной группе пациентов совпадает с тенденцией, проявившейся в более молодой возрастной группе (31-40 лет), когда различался только процент этих незрелых кчеток

Необходимо обратить внимание еще и на то, что у пациентов 41-50 лет сам размер (площадь) инфильтратов с малым содержанием плазмоцитов был достоверно меньше в 2,2 раза, чем размер структур с высокой концентрацией таких клеточных форм Это также лишний раз свидетельствует о существовании 2 указанных типов инфильтратов

Если наше предположение о том, что инфильтраты с высоким содержанием плазмоцитов являются лимфоидными фолликулами верно, то различия пощади самих инфильтратов можно достаточно хорошо объяснить Как мы уже отмечали, при хронической воспалительной реакции в десне одновременно присутствуют инфильтраты, сформировавшиеся в различные сроки Истинные лейкоцитарные инфильтраты, образующиеся в различных тканях из нейтрофилов и лимфоцитов имеют различные размеры У более старых пациентов, в связи с возрастным снижением показателей иммунной защиты, падает число нейтрофилов и лимфоцитов в тканях при воспалительной реакции, в том числе и в слизистой оболочке десны при хроническом деструктивном периодонтите, что приводит к меньшему размеру лейкоцитарных инфильтратов

Строение лейкоцитарных инфильтратов пациентов старше 51 года. В старшей возрастной группе при периодонтите в слизистой оболочке десны в воспалительных инфильтратах с высоким содержанием плазматических клеток относительное и абсолютное их число было больше в 23,9 и 18,5 раза, соответственно, по сравнению со структурами с низкой концентрацией плазмоцитов В инфильтратах с высоким содержанием плазмоцитов процент и численная плотность нейтрофилов были меньше в 5,3 и 6,4 раза, также соответственно, относительно инфильтратов с низкой пропорцией плазматических клеток

Величины показателей относительного и абсолютного количества иммуно- и плазмобластов ме>кду сравниваемыми типами лейкоцитарных инфильтратов у данной возрастной категории пациентов достоверно не различались

В данной возрастной группе площадь инфильтратов с малым содержанием плазмоцитов была достоверно ниже в 2,6 раза, относительно

размеров структур с высокой концеотрацией таких клеточных форм

Только у больных этой группы абсолютное число эритроцитов в инфильтратах с низкой пропорцией плазматических клеток было достоверно больше в 4,3 раза, чем в инфильтратах с большим содержанием плазмоцитов Следует отметить, что в тканях слизистой оболочки десны при хроническом периодонтите не было обнаружено кровоизлияний Эритроциты был расположены в инфильтратах поодиночке и попали в ткани, скорее всего, вследствие диапедеза

Видимо, с увеличением возраста пациентов облегчается проницаемость сосудистой стенки В настоящих лейкоцитарных инфильтратах (мало плазматических клеток и много нейгрофилов) действует сочетание нескольких факторов усиления сосудистой проницаемости ослабление сосудистой стенки с возрастом и влияние воспалительного процесса, что приводит к появлению большого числа форменных элементов крови в тканях

В лимфоидных фолликулах (много плазматических клеток и мало нейгрофилов) действует только один фактор - возрастные изменения, острота воспалительной реакции в таких участках слабо выражена, на что указывает минимальное количество нейгрофилов Это сопровождается проникновением меньшего числа эритроцитов в ткани слизистой оболочки десны

Таким образом, между лейкоцитарными инфильтратами с большим и малым количеством плазматических клеток во всех возрастных группах достоверно различается число нейгрофилов с четко выраженной закономерностью в структурах с большим количеством плазмоцитов - мало нейгрофилов, в инфильтратах с малой концентрацией плазматических клеток -много нейгрофилов Отличия численности плазмоцитов и нейгрофилов нарастают до возрастной группы 41-50 лет, но в более старшем возрасте выраженность различий меньше К 31-40 и 41-50 годам в инфильтратах с высоким содержанием плазматических клеток достоверно больше иммуно- и плазмобчастов, но эти изменения также нивелируются после 51 года В самой старшей возрастной группе в цитограмме лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны достоверно больше эритроцитов

Возрастные изменения различных типов воспалительных инфильтратов слизистой оболочки десны пациентов с хроническим деструктивным

периодонтитом

Строение всех лейкоцитарных инфильтратов у пациентов различных возрастных трупа При исследовании строения всех лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны пациентов различных возрастных групп было обнаружено достоверное различие величин значений показателей численности макрофагов Относительное количество этих клеток у пациентов старше 51 года было больше, чем у больных 18-30 и 31-40 лет в 2,1 и 2 раза, соответственно. Абсолютное число макрофагов также в самой старшей возрастной группе было выше на 86,9%, 88,7% и 57,3%, также соответственно, по сравнению с больными 18-30, 31-40 и 41-50 лет

Такие возрастные различия численности макрофагов в лейкоцитарных

инфильтратах слизистой оболочки десны при хроническом деструктивном периодонтите однонаправлены с возрастными различиями числа этих клеток в слизистой десны вне инфильтратов (Гаврилова SB, 2007) RDRaffamello и М Roy (1990) при изучении нормальных тканей десны мышей различного возраста также обнаружили, что число макрофагов в соединительной ткани десневых сосочков увеличивалось с возрастом

Это может свидетельствовать, что по мере увеличения возраста людей функции местного клеточного иммунитета в тканях десны от нейтрофилов и лимфоцитов постепенно переходят к макрофагам

Строение лейкоцитарных инфильтратов с низким содержанием плазматических клеток у пациентов различных возрастных групп. С увеличением возраста пациентов с деструктивным хроническим периодонтитом размер таких лейкоцитарных инфильтратов в слизистой оболочке десны постепенно уменьшается В группе 18-30 лет площадь инфильтратов была больше в 2,5 и 3,5 раза, соответственно, чем в группах 41-50 и старше 50 лет

Относительное число лимфоцитов в инфильтратах с низким содержанием плазматических клеток у пациентов самой старшей возрастной группы было достоверно меньше на 21,5%, 17% и 17%, соответственно, по сравнению с больными 18-30, 31-40 и 41-50 лет

Численная плотность моноцитов достоверно различалась только между самой младшей и самой старшей возрастными группами в последней меньше в 2,7 раза

Процент макрофагов в подобных структурах у пациентов старше 51 года был выше на 97,1%, в 2,1 раза и на 72,57с, соответственно, относительно больных 18-30, 31-40 и 41-50 лет Абсолютное количество таких клеток у пациентов старшей возрастной группы было больше на 72%, 86,2%, 98,7% и 70,2%, также соответственно, чем во всех инфильтратах и отдельно у обследованных 18-30, 31-40 и 41-50 лет

Относительное число и численная плотность клеток с признаками деструктивных изменений в группе старше 51 года были выше в 10 и 9,3 раза, соответственно, но только по сравнению с пациентами самой младшей группы

В данном разделе отмечено постепенное, по мере увеличения возраста обследованных, сокращение площади лейкоцитарных инфильтратов с малым содержанием плазматических клеток В таких инфильтратах, вместе с изменением их размеров, уменьшается число лимфоцитов и моноцитов, но растет количество макрофагов и клеток с признаками деструкции

Все изменения таких инфильтратов полностью укладываются в теорию возрастного изменения иммунитета По мере истощения различных ростков красного костного мозга, возрастной инволюции тимуса, селеэгнки и лимфатических узлов в кровеносном русле уменьшается численность различных типов лейкоцитов Соответственно этому, при попадании (образовании) антигенов в ткани лейкоцитарная реакция в старшем возрасте менее выражена, чем у молодых людей

Срок жизни макрофагов очень значителен, в связи с этим, возрастные колебания численности этих клеток не так заметны Видимо, в связи с этим и со

снижением числа других лейкоцитов, величины значений показателей количества макрофагов возрастают по мере увеличения возраста пациентов Кроме того не исключено, что необходимость удаления антигенов из тканей десны при недостатке других клеточных элементов иммунной защиты вызывает миграцию туда макрофагов из других тканей

Строение лейкоцитарных инфильтратов с высоким содержанием плазматических клеток у пациентов различных возрастных групп. В воспалительных инфильтратах с высоким содержанием плазматических клеток (лимфоидных фолликулах) в слизистой оболочке десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом в зависимости от возраста достоверно отличались только показатели численности макрофагов Относительное число макрофагов в лимфоидных фолликулах с высокой концентрацией илазмоцитов у пациентов старше 51 года был выше на 79,5%, 79,9% и 44,6%, соответственно, относительно больных 18-30, 31-40 и 41-50 лет Абсолютное количество макрофагов у пациентов старшей возрастной группы было больше на 77,9% и 73,7%, также соответственно, чем у больных 18-30 и 31-40 лет

Такие изменения численности макрофагов в лимфоидных фолликулах слизистой оболочки десны, несомненно, повторяют общие тенденции возрастной динамики этих клеток в лейкоцитарных инфильтратах и непосредственно в тканях десны, отмеченные в данном исследовании и в других работах (Raffamello R D, Roy М, 1990, Гаврилова В В , 2007)

Практически отсутствующие возрастные изменения строения инфильтратов с высоким содержанием плазматических клеток, постоянство их размеров и клеточного состава в различных возрастных группах, по нашему мнению свидетельствует о формировании этих структур не для кратковременной элиминации антигенных веществ из тканей, а для длительного функционирования и выработки антител в тканях с участками хронического воспаления

Таким образом, на основании вышеизложенного можно заключть, что в слизистой оболочке десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом присутствует 2 типа лейкоцитарных инфильтратов инфильтраты с низким содержанием плазматических клеток и большим -нейгрофилов и структуры с высокой численностью плазмоцитов и низкой -нейтрофильных лейкоцитов Инфильтраты с малым числом плазматических клеток являются истинными лейкоцитарными инфильтратами, тогда как инфильтраты с большим количеством плазмоцитов - это, скорее всего, лимфоидные фолликулы, образующиеся в слизистых оболочках различных органов при хроническом воспалении Сведений о возможности формирования лимфоидных фолликулов в десне при периодонтите в литературе нет

С возрастом пациентов уменьшается размер лейкоцитарных инфильтратов с низким содержанием плазматических клеток, в цитоархитектонике этих структур сокращается количество моноцитов и лимфоцитов, а увеличивается - число макрофагов и клеток с признаками деструктивных изменений Инфильтраты с высокой концентрацией

плазматических клеток (лимфоидные фолликулы) имеют более стабильную структуру, практически не меняющуюся с возрастом

При исследовании строения лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны было обнаружено, что, независимо от численности плазматических клеток, с увеличением возраста обследованных увеличивается содержание макрофагов По-видимому, постепенно возрастает роль макрофагального звена в местном иммунитете по мере старения пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом

ВЫВОДЫ

1 В слизистой оболочке десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом присутствует 2 типа воспалительных инфильтратов инфильтраты с высокой численностью плазматических клеток (10-30% от общего числа клеток с численной плотностью 80-220 плазмоцитов на 10ч мкм2 площади среза инфильтрата) и структуры с низким содержанием плазматических клеток (с относительной и абсолютной численностью данных клеточных элементов менее 2% и до 30 клеток на единицу площади среза структуры, соответственно)

2 Инфильтраты с малым числом плазматических клеток содержат много нейтрофильных лейкоцитов (26-37% от общего числа клеток и 220-370 нейтрофилов на 10ч мкм2 площади среза инфильтрата) и являются ист инными лейкоцитарными инфильтратами, формирующимися в тканях в местах большой концентрации антигенных веществ

3 В клеточном составе инфильтратов с большим количеством плазмоцитов относительно мало нейтрофилов (3-12% от общего числа клеток и 23-95 лейкоцитов на 10' мкм2 площади среза) и эти структуры являются лимфовдными фолликулами, образующимися в слизистой оболочке десны, как и в других органах, при хроническом воспалении

4 В лимфоидных фолликулах десны визуально отсутствуют светлые центры, сами структуры сильно деформированы крайне редко на срезе имеют овальную форму из-за малого объема слизистой оболочки, отсутствия подслизистой и склероза тканей вследствие хронического воспалительного процесса Дифференциальная диагностика таких структур должна включать им м у но гист ох им ичес кое исследование для выявления истинной численности плазматических клеток

5 С возрастом пациентов уменьшается размер лейкоцитарных инфильтратов с низким содержанием плазматических клеток, в цигоархитекгонике этих структур сокращается количество моноцитов и лимфоцитов, увеличивается число макрофагов и клеток с признаками деструкции Инфильтраты с высокой концентрацией плазматических клеток (лимфоидные фолликулы) имеют более стабильную структуру, практически не меняющуюся с возрастом больных

6 Во всех лейкоцитарных инфильтратах слизистой оболочки десны, независимо от численности плазматических клеток, по мере увеличения возраста пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом

увеличивается содержание макрофагов, что может свидетельствовать о возрастании значения этих клеток в местном иммунитете

7 CD38+ клетки отсутствуют в эпителии десны пациентов всех возрастных групп с хроническим деструктивным периодонтитом

8 В слизистой оболочке десны здоровых людей обоего всех возрастных и половых групп плазмоцитарные инфильтраты отсутствуют

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Целесообразно проводить лечение периодонтита и гингивита с учетом возраста пациентов, у больных старших возрастных групп необходимы разработка и проведение методов лечения, направленных на стабилизацию стенки кровеносных сосудов и поддержание адекватной иммунной защиты в тканях десны

2 Дифференциальная диагностика деформированных лимфоидных фолликулов и нейгрофильных лейкоцитарных инфильтратов, формирующихся при хроническом деструктивном периодонтите в десне, из-за малого объема ее слизистой оболочки, отсутствия подслизистой и склероза тканей вследствие хронического воспалительного процесса, должна включать им м у но гистохимическое исследование для выявления истинной численности плазматических клеток

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Войтович, А.Б Сравнительная характеристика современных методов обтурации каналов / А. Б. Войтович, О В Турбина // Хирургическая стоматология и челюстно-лицевая хирургия Новые технологии в стоматологии Мат IV Всеросс конгр и симп - Новосибирск, 2005 - С 2324

2 Войтович, А Б Роль медикаментозной обработки корневых каналов, способы повышения эффективности / А Б Войтович, Е В Козлова // Челюстно-лицевая хирургия и стоматология Новые технологии в стоматологии Мат Первого Сибирского конгр и Всеросс симп - Новосибирск, 2006 - С 47-48

3 Майбородин, И В Изменения микроциркуляции в десне при деструктивном хроническом периодонтите в зависимости от возраста и пола / ИВ Майбородин, А Б Войтович, В В Гаврилова, И.А Пригчина, RA Колмакова, Е В Козлова, Т М Рагимова // Актуальные вопросы стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Сб мат науч -прак конф, посвящ 80-легию ГОУ ДПО «Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей Росздрава» и 20-летию кафедр стоматол профиля НГИУВа '-Новокузнецк, 2007 -С 37-41

4 Майбородин, И В Микроциркуляция в десне в норме и при деструктивном хроническом периодонтите в зависимости от возраста и пола / ИВ Майбородин, В В Гаврилова, И А Притчина, И А Колмакова, А Б Войтович, ЕВ Козлова, Б В Шеплев, И С Колесников, ТМ Рагимова // Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма Мат VIII Международ симп и IX Чуйской

науч-практ конф Бишкек ОсОО «Алтынтамга», 2007 -С 118-124

5 Майбородин, ИВ Гранулематозное воспаление после применения препаратов фибрина / RB Майбородин, RC Колесников, КВ Шеплев, Т М Рагимова, А И. Шевела, АН Ковынцев, И. А Колмакова, И А. Притчина, Е В Козлова, А.Б Войтович, Д Н Ковынцев // Морфологические ведомости -2007 -№3-4 - С 116-118

6 Майбородин, И.В Слизистая оболочка десны в норме и при деструктивном хроническом периодотттге в зависимости от возраста и пола /ИВ Майбородин, В В Гаврилова, RA Притчина, RA Колмакова, А Б Войтович, Е В Козлова, Т М Рагимова // Морфология и хирургия Сб науч раб Вып 6 Новосибирск Сибмедиздат НГМУ, 2007 - С 109-120

7 Майбородин, RB Морфология десны после реконструктивных операций с применением препаратов фибрина / И.В Майбородин, И С Колесников, Б В Шеплев, Т М Рагимова, АН. Ковынцев, Д Н. Ковынцев, И А Колмакова, И А Притчина, Е В Козлова, AR Войтович // Морфология -2008 -Т 133 -№ 3 - С 68

8 Майбородин, RB Возрастные изменения эпителия десны здоровых людей и пациентов с деструктивным хроническим периодонтитом / RB Майбородин, И.А Колмакова, RA Притчина, ЕВ Козлова, AR Войтович, А Н Ковынцев, И С Колесников, Б В Шеплев, Т М Рагимова, Д R Ковынцев // Морфология -2008 -Т 133 -№3 - С 68-69

Автор искренне благодарен научным руководителям д м н , профессору И В Майбородину и д м н, профессору С В Машак за научно-методическую помощь, ценные замечания и консультации в ходе выполнения работы

Подписано к печати 28 07 2008 формат - 60x84 1/16, Уел печ л 1

Бумага офсетная Печать трафаретная Тираж 100 экз. Номер заказа № 746

Типография ООО "ЮГУС-ПРИНТ г Новосибирск, ул Залесского, 4

Актуальность темы:

Периодонтиты характеризуются воспалением поддерживающих тканей зубов и приводят к резорбции альвеолярного отростка челюсти, уменьшению степени прикрепления мягких тканей к зубам и потере последних. Изменения связаны с персистенцией лейкоцитов в гингивальной и периодонтальной соединительной ткани (Holland R. et al., 1983; Sashima M. et al., 1990; Wactawski-Wende J. et al., 1996; Forna N. et al., 1998; Sawa T. et al., 1999; Wactawski-Wende J., 2001; Mitsuta T. et al., 2002). Развитие периодонтита может быть связано с численностью плазматических клеток, тенденция к формированию обширных плазмоклеточных инфильтратов может свидетельствовать о невозможности противостоять периодонтопатогенным бактериям и о предрасположенности к периодонтиту (Kinane D.F., 2000; Kinane D.F., Lappin D.F., 2001; Lappin D.F. et al., 2003).

Плазматические клетки всегда присутствуют в участках хронического воспаления, включая периодонтальные процессы. Хронический периодонтит вызывает увеличение числа плазмоцитов до 10 клеток на мм2, при совместном действии антигена и активатора (адъюванта) - до 80-150 клеток/мм (Mallison S.M. et al., 1991).

По данным M.L.McGhee и соавт. (1989) при периодонтите в десне на всех стадиях преобладают моноциты/макрофаги, а число плазмоцитов возрастает только при тяжелых случаях болезни.

При изучении лейкоцитов в биопсиях десны пациентов с ювенильным па-родонтитом во всех наблюдениях было много В-клеток (78-87%), Т-лимфоцитов и мононуклеаров (10%). Сделано заключение о роли дисбаланса иммунной регуляции в возникновении ювенильного париодонтита (Syrjanen S. et al., 1984; Михалева J1.M. и др., 2001; Hillmann G. et al., 2001; Erciyas К. et al., 2006).

Развитие периодонтита связано с инфильтрацией пораженных тканей лимфоцитами, макрофагами и плазматическими клетками (Soydan N. et al., 1975; Carvel R.I., Carr R.F., 1982; Pignanelli M. et al., 1985; Schou S. et al., 1992, 1993a, 19936, 1993b, 1996; Chen T.L. et al, 1995; Milia E. et al., 1996; Feng L. et al., 1997), преобладают В-клетки, происходит поликлональная активация В-клеток и плазмоцитов, в том числе и бактериальными факторами (Tew J. et al., 1989; Topoll H.H., 1990). Активация и пролиферация В-клеток играет важную роль в патогенезе хронического периодонтита (Celenligil Н. et al., 1993).

IgA - главный элемент в гуморальном иммунном ответе слизистых оболочек против микробных антигенов. Ответ с участием данного типа антител инициируется в организованных структурах, таких как Пейеровы бляшки и ассоциированная со слизистой полости носа лимфоидная ткань. Участие в начале ответа принимают эффекторные ткани, например, собственная пластинка слизистой оболочки кишечника и назальная мукоза. Дефицит IgA приводит к продолжительной активации иммунокомпетентных клеток и индукции воспалительного процесса, сопровождающегося лимфонеогенезом (Lazarus N.H. et al., 2003; Fagarasan S., Honjo Т., 2004; Fagarasan S., 2006; Suzuki K. et al., 2007).

Плазмоциты и эозинофилы являются частыми находками в слизистой оболочке полости носа у пациентов с назальным полипозом, можно отметить высокую частоту апоптозных изменений в этих клетках (Melgarejo Moreno Р. et al., 19976; Uller L. et al., 2004; Yue J. et al., 2006; Polzehl D. et al., 2006). Возможно, что через процессы апогггоза происходит контроль выраженности локальных иммунных реакций и удаление части иммунокомпетентных клеток после их завершения (Uller L. et al., 2004, 2006а, 20066).

В эксперименте на крысах после пульпэктомии в периапикальной области сначала быстро возрастает число макрофагов с плато на 10-60 суток и затем постепенно снижается. Плазматические клетки появляются через 60 суток, клетки с IgG преобладают после 90 дней. Деструкция кости происходила до 60 суток, после 90 дней начинались процессы репарации. По результатам исследования сделано предположение, что макрофаги участвуют в деструктивных процессах, а плазмоциты - в процессах репарации тканей периапикальной области

Акагтпе А. й а1., 1994).

При изучении воспалительных инфильтратов в десне пациентов с гингивитом и пародонтитом было найдено, что при гингивите у детей младшего возраста преобладают малые лимфоциты, при ювенильном пародонтите более половины клеток были плазмоцитами. Образцы при хроническом периодонтите взрослых можно было разделить на 2 группы, возможно, из-за различной активности процесса. Когда активность невысока, объем воспаленной соединительной ткани десны небольшой и здесь преобладают малые В-лимфоциты. В случае активации объем пораженных тканей возрастает, и большинство В-клеточной популяции трансформируется в плазматические клетки (вШей: К. е1 а1., 1986). В.В.Гаврилова (2007) также сообщает о наличии в отдельных лейкоцитарных инфильтратах слизистой оболочки десны больных хроническим периодонтитом большого числа плазматических клеток.

Таким образом, несмотря на большой объем литературных данных, посвященных изменениям тканей при различных периодонтитах, практически полностью отсутствуют результаты сравнительного изучения динамики численности плазматических клеток в слизистой оболочке десны при патологии периодонта у пациентов различного возраста. Также в литературе нет сведений о возможности формировании лимфоидных фолликулов в десне при хроническом воспалении, хотя такие лимфоидные структуры образуются в слизистых оболочках других органов при хронических воспалительных процессах.

Цель работы. Определить изменения численности плазматических клеток в воспалительных инфильтратах слизистой оболочке десны при деструктивном хроническом периодонтите у пациентов различного возраста.

Задачи исследования.

1. Методами световой микроскопии с применением моноклональных антител к антигену СБ38 изучить плазмоцитарную инфильтрацию слизистой оболочки десны здоровых людей различного возраста и пола.

2. На основании использования иммуноцитохимиии исследовать численную плотность плазматических клеток в лейкоцитарных инфильтратах слизистой оболочки десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом.

3. Установить особенности строения различных, в зависимости от количества плазмоцитов, воспалительных инфильтратов десны больных хроническим деструктивным периодонтитом.

4. Изучить возрастную динамику морфологии различных типов лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом.

Научная новизна. Впервые проведено исследование лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом с применением моноклональных антител к антигену СБ38. Было обнаружено, что в десне присутствует 2 типа воспалительных инфильтратов: инфильтраты с высокой численностью плазмоцитов (плазматические клетки составляют 10-30% от общего числа клеток с численной плотностью 80-220 с плазмоцитов на 10 мкм площади среза инфильтрата) и структуры с низким содержанием плазматических клеток (с относительной и абсолютной численностью данных клеточных элементов менее 2% и до 30 клеток на единицу площади среза структуры, соответственно). Различия средних величин количества плазматических клеток между инфильтратами с высоким и низким их содержанием в некоторых случаях достигают 100-кратных величин.

Впервые доказано существование лимфоидных фолликулов с высоким числом плазматических клеток в слизистой оболочке десны при хроническом деструктивном периодонтите. В лимфоидных фолликулах десны при визуальном наблюдении отсутствуют светлые центры, сами структуры сильно деформированы, крайне редко на срезе имеют овальную форму из-за малого объема слизистой оболочки, отсутствия подслизистой и склероза тканей вследствие хронического воспалительного процесса.

Впервые продемонстрировано, что воспалительные инфильтраты с малым числом плазматических клеток содержат много нейтрофильных лейкоцитов с о

26-37% от общего числа клеток и 220-370 нейтрофилов на 10 мкм площади среза инфильтрата) и являются истинными лейкоцитарными инфильтратами, формирующимися в тканях в местах высокой концентрации антигенных веществ. В клеточном составе инфильтратов с большим количеством плазмоци-тов относительно мало нейтрофилов (3-12% от всех клеток и 23-95 лейкоцитов на единицу площади среза) и эти структуры являются лимфоидными фолликулами, образующимися в слизистой оболочке десны, как и в других органах, при хроническом воспалении.

Впервые изучена возрастная динамика строения лейкоцитарных инфильтратов слизистой оболочки десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом. Было найдено, что с возрастом больных уменьшается размер лейкоцитарных инфильтратов с низким содержанием плазматических клеток, в цитоархитектонике этих структур сокращается количество моноцитов и лимфоцитов, увеличивается число макрофагов и клеток с признаками деструкции. Инфильтраты с высокой концентрацией плазматических клеток (лимфоид-ные фолликулы) имеют более стабильную структуру, практически не меняющуюся с возрастом обследованных.

Впервые получены данные, что во всех лейкоцитарных инфильтратах слизистой оболочки десны, независимо от численности плазматических клеток в них, по мере увеличения возраста пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом увеличивается содержание макрофагов, что косвенно указывает на возрастание значения этих клеток в местном иммунитете.

Впервые установлено, что СБ38+ клетки отсутствуют в эпителии десны пациентов всех возрастных групп с хроническим деструктивным периодонтитом.

Теоретическая и практическая значимость. В результате проведенного исследования в слизистой оболочке десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом найдены лимфоидные фолликулы с большим количеством плазматических клеток. Дифференциальная диагностика таких лимфоид-ных фолликулов и нейтрофильных лейкоцитарных инфильтратов должна включать иммуногистохимическое исследование для выявления истинной численности плазматических клеток. В связи с тем, что в самой старшей возрастной группе пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом в лейкоцитарных инфильтратах выше численная плотность эритроцитов и макрофагов, целесообразно проводить лечение периодонтита и гингивита с учетом возраста пациентов, у больных старших возрастных групп необходимы разработка и проведение методов лечения, направленных на стабилизацию стенки кровеносных сосудов и поддержание адекватной иммунной защиты в тканях десны.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. В слизистой оболочке десны пациентов с хроническим деструктивным периодонтитом присутствует 2 типа воспалительных инфильтратов: инфильтраты с высокой численностью плазмоцитов (лимфоидные фолликулы) и структуры с низким содержанием плазматических клеток (истинные лейкоцитарные инфильтраты).

2. С возрастом пациентов в цитоархитектонике лейкоцитарных инфильтратов с низким содержанием плазматических клеток сокращается количество моноцитов и лимфоцитов, увеличивается число макрофагов и клеток с признаками деструкции. Лимфоидные фолликулы имеют более стабильную структуру, практически не меняющуюся с возрастом.

3. Плазматические клетки отсутствуют в эпителии десны пациентов всех возрастных групп с хроническим деструктивным периодонтитом.

Внедрение результатов исследования в практику. Результаты исследований внедрены в практику научно-исследовательской работы Центра новых медицинских технологий ГУ НИИ химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН и лечебную практику ООО «Дента» (Новосибирск).

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены на научно-практической конференции, посвященной 80-летию ГОУ ДПО «Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей Росздрава» и 20-летию кафедр стоматологического профиля НГИУВа «Актуальные вопросы стоматологии и четостно-лицевой хирургии» (Новокузнецк, 2007), VIII Международном симпозиуме и IX Чуйской научно-практической конференции «Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма» (Бишкек, 2007), Международной гистологической конференции, посвященной 80-летию со дня рождения Заслуженного деятеля науки РФ профессора П.В.Дунаева «Морфогенезы в эволюции, индивидуальном развитии и эксперименте» (Тюмень, 2008) и на объединенном заседании сотрудников кафедр ГОУ ВПО Новосибирского государственного медицинского университета Росздрава, практических врачей и научного персонала лабораторий ГУ НИИ химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, 3 из которых в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации результатов диссертационных исследований.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных результатов с их обсуждением, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 150 страницах компьютерного текста, содержит 16 таблиц, иллюстрирована 29 многокомпонентными рисунками. Список литературы включает 309 источников (50 отечественных и 259 иностранных).

1. В слизистой оболочке десны пациентов с хроническим деструктивным пе риодонтитом присутствует 2 типа воспалительных инфильтратов: инфильт раты с высокой численностью плазматических клеток (10-30% от общего числа клеток с численной плотностью 80-220 плазмоцитов на 105 мкм2 пло щади среза инфильтрата) и структуры с низким содержанием плазматических клеток (с относительной и абсолютной численностью данных клеточных элементов менее 2% и до 30 клеток на единицу площади среза структуры, со ответственно).2. Инфильтраты с малым числом плазматических клеток содержат много ней трофильных лейкоцитов (26-37% от общего числа клеток и 220-370 нейтро филов на 10 мкм площади среза инфильтрата) и являются истинными лей коцитарными инфильтратами, формирующимися в тканях в местах большой концентрации антигенных веществ.3. В клеточном составе инфильтратов с большим количеством плазмоцитов от носительно мало нейтрофилов (3-12% от общего числа клеток и 23-95 лейко цитов на 10 мкм площади среза) и эти структуры являются лимфоидными фолликулами, образующимися в слизистой оболочке десны, как и в других органах, при хроническом воспалении.4. В лимфоидных фолликулах десны визуально отсутствуют светлые центры, сами структуры сильно деформированы, крайне редко на срезе имеют оваль ную форму из-за малого объема слизистой оболочки, отсутствия подслизи стой и склероза тканей вследствие хронического воспалительного процесса.Дифференциальная диагностика таких структур должна включать иммуноги стохимическое исследование для выявления истинной численности плазма тических клеток.5. С возрастом пациентов уменьшается размер лейкоцитарных инфильтратов с низким содержанием плазматических клеток, в цитоархитектонике этих структур сокращается количество моноцитов и лимфоцитов, увеличивается число макрофагов и клеток с признаками деструкции. Инфильтраты с высо кой концентрацией плазматических клеток (лимфоидные фолликулы) имеют более стабильную структуру, практически не меняющуюся с возрастом боль ных.6. Во всех лейкоцитарных инфильтратах слизистой оболочки десны, независи мо от численности плазматических клеток, по мере увеличения возраста па циентов с хроническим деструктивным периодонтитом увеличивается со держание макрофагов, что может свидетельствовать о возрастании значения этих клеток в местном иммунитете.7. CD38+ клетки отсутствуют в эпителии десны пациентов всех возрастных групп с хроническим деструктивным периодонтитом.8. В слизистой оболочке десны здоровых людей обоего всех возрастных и по ловых групп плазмоцитарные инфильтраты отсутствуют.ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Целесообразно проводить лечение периодонтита и гингивита с учетом воз раста пациентов, у больных старших возрастных групп необходимы разра ботка и проведение методов лечения, направленных на стабилизацию стенки кровеносных сосудов и поддержание адекватной иммунной защиты в тканях десны.2. Дифференциальная диагностика деформированных лимфоидных фолликулов и нейтрофильных лейкоцитарных инфильтратов, формирующихся при хрони ческом деструктивном периодонтите в десне, из-за малого объема ее слизи стой оболочки, отсутствия подслизистой и склероза тканей вследствие хро нического воспалительного процесса, должна включать иммуногистохимиче ское исследование для выявления истинной численности плазматических кле ток.