Автореферат и диссертация по медицине (14.00.08) на тему:Возможность применения отечественного препарата "Фотосенс" при флюоресцентной диагностике и фотодинамической терапии опухолевых и псевдоопухолевых заболеваний глаз (экспериментальное исследование)
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.08
Оглавление диссертации Будзинская, Мария Викторовна :: 2004 :: Москва
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1 Механизмы действия фотодинамической 10 терапиии флуоресцентной диагностики
1.2 ФДТ в офтальмологии
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования
2.1 Разработка экспериментальных моделей
2.1.1 Разработка экспериментальной модели псевдоопухоли/ 2 8 субретинальной неоваскулярной мембраны
2.1.2 Разработка экспериментальной модели 31 увеальной меланомы.
2.1.3 Разработка экспериментальной модели 35 меланомы В16 субконьюнктивальной локализации.
2.2 Офтальмологические методы обследования
2.3 Методика обработки результатов ФД
2.4 Условия проведения фотодинамической терапии
2.4.1 Адаптация лазерно-спектроскопического 43 комплекса для ФД и ФДТ
2.4.2 Условия проведения ФДТ
2.4.3 Характеристика фотосенсибилизатора «Фотосенс» 47 2.5. Методы оценки эффективности ФДТ с применением ФС
2.6 Гистологические методы исследований
2.7 Методы статистического анализа полученных результатов
ГЛАВА 3. Флуоресцентная диагностика с препаратом
Фотосенс» псевдоопухолей и опухолей хориоидальной и эпибульбарной локализации
3.1 Изучение накопления препарата «Фотосенс» в тканях глаза 51 мышей
3.2 Исследование накопления препарата «Фотосенс» в сосудах 55 глазного дна кролика в норме и патологии
3.3 Флуоресцентная диагностика с препаратом «Фотосенс» 58 при меланомах эпибульбарной локализации
3.4. Флуоресцентная диагностика с препаратом «Фотосенс» 64 опухолей хориоидальной локализации
3.5.Исследование токсического влияния отечественного препарата 65 «Фотосенс» и ФД на ткани глаза кролика
ГЛАВА 4.Фотодинамическая терапия с препаратом
Фотосенс» опухолей и псевдоопухолей хориоидальной и эпибульбарной локализации
4.1 Фотодинамическая терапия псевдоопухолевых образований
4.2 Фотодинамическая терапия опухолей эпибульбарной 74 локализации
4.3 Фотодинамическая терапия опухолей хориодальной локализации 84 Заключение 92 Выводы 104 Список литературы
Введение диссертации по теме "Глазные болезни", Будзинская, Мария Викторовна, автореферат
Актуальность проблемы.
Арсенал методов лечения офтальмопатологических процессов, в основе которых лежит клеточная пролиферация и неоваскуляризация, достаточно широк [23,41,124,160]. Он включает хирургические, лучевые и терапевтические способы лечения. При этом хирургические операции устраняют следствие, а не саму причину заболевания и потому носят временный паллиативный характер [2,3,56]. Лучевое воздействие ассоциируются с широким спектром постлучевых осложнений, приводящих к длительной реабилитации, а порой и к инвалидизирующей потере зрения [38,42,47,148]. При этом, некоторые виды лучевого воздействия сами вызывают пролиферативные процессы на глазном дне [124,125,150]. Терапевтическое (антиангиогенное) лечение на сегодняшний день мало эффективно и нуждается в совершенствовании [131]. Таким образом, в целом проблема далека от разрешения, и поиск новых методов лечения, наряду с совершенствованием старых, остается актуальной задачей.
Среди современных методов лечения наиболее перспективной признана фотодинамическая терапия (ФДТ) с применением фотосенсибилизаторов (ФС). ФДТ основана на достижениях квантовой физики, фотобиологии и фотохимии [14,129].
ФДТ обусловлена способностью фотосенсибилизатора избирательно накапливаться в делящихся клетках и при воздействии света с длиной волны, соответствующей пику поглощения ФС, генерировать синглетный кислород и другие активные радикалы, оказывающие цитотоксический эффект. Кроме того, ФДТ вызывает фотодинамическую окклюзию новообразованных сосудов, с сохранением окружающих тканей (сетчатки, пигментного эпителия, хориокалилляров) [13,40,79]. Метод выгодно отличается избирательностью поражения только патологической ткани, что повышает эффективность лечения и создаёт перспективу для зрительных функций [19,64,92].
Эффективность ФДТ зависит от правильно подобранной дозы ФС, его локализации на микроуровне, от световой дозы и степени проникновения света вглубь патологических тканей [139,151].
Залогом успешного применения ФДТ в клинике является возможность контроля эффективности фотодинамического воздействия в реальном масштабе времени благодаря флуоресцентной диагностике (ФД) с использованием ФС.
Целью настоящей работы явиляется экспериментальное обоснование возможности применения отечественного ФС "Фотосенс" в ФД и ФДТ опухолевых и псевдоопухолевых заболеваний глаза.
Задачи исследования
1. Изучить в эксперименте динамику накопления препарата «Фотосенс» в тканях глаза для обоснования его расчетной дозы.
2. Определить временные параметры для максимальной интенсивности флуоресценции препарата «Фотосенс» в патологическом очаге и нормальных сосудах глаза, а также градиента контрастности между ними с целью определения сроков проведения ФДТ.
3. Осуществить подбор рабочего режима ФДТ с препаратом «Фотосенс» на экспериментальных моделях опухолей эпибульбарной и хориоидальной локализации.
4. Осуществить подбор рабочего режима ФДТ с препаратом «Фотосенс» на экспериментальной модели субретинальной неоваскулярной мембраны.
5. Провести анализ эффективности ФДТ с ФС «Фотосенс» псевдоопухолевых и опухолевых заболеваний глаз в эксперименте.
6. Изучить возможную токсичность и побочные эффекты ФДТ с ФС «Фотосенс» для органа зрения на функциональном и гистоморфологическом уровне.
Научная новизна
• Впервые представлены данные о динамике накопления препарата «Фотосенс» в нормальных и патологических тканях глаза животных.
• Определены возможности и перспективы применения препарата «Фотосенс» в ФД опухолевых и псевдоопухолевых заболеваний глаза.
• Экспериментально обоснованы дозы препарата «Фотосенс» для ФД и доказана их безопасность для тканей глаза.
• Впервые разработаны режимы проведения ФДТ с фотосенсибилизатором «Фотосенс» при опухолевых и псевдоопухолевых заболеваниях глаз в эксперименте.
• Экспериментально обоснованы и доказаны избирательность действия и эффективность препарата «Фотосенс» в ФДТ опухолевых и псевдоопухолевых заболеваний глаза.
Практическая значимость
Экспериментально обосновано и раскрыты возможности применения фотосенсибилизирующего препарата «Фотосенс» в ФД, отработаны подходы и представлены практические рекомендации по проведению клинических испытаний препарата при опухолевых и псевдоопухолевых заболеваниях глаза.
Отработан алгоритм проведения ФДТ с препаратом «Фотосенс» при опухолевых и псевдоопухолевых заболеваниях глаза.
Доказана в эксперименте эффективность препарата «Фотосенс» в ФДТ опухолевых и псевдоопухолевых заболеваний глаз.
Положения, выносимые на защиту
Представленные данные являются экспериментальным обоснованием подходов к клиническому применению фотосенсибилизирующего препарата «Фотосенс» в ФД и ФДТ опухолевых и псевдоопухолевых заболеваний глаза и доказательством его эффективности.
Эффективность ФДТ с препаратом «Фотосенс» определяется дозой введенного ФС, его градиентом контрастности на момент проведения облучения и параметрами лазерного излучения.
Селективное накопление в активно пролиферирующих тканях препарата «Фотосенс», имеющего поглощение в спектральном диапазоне волн длиной 0,65-0,70 мкм, обеспечивает высокий контраст патологического очага по сравнению с непораженными участками глаза, позволяет произвести точную маркировку его границ, включая верификацию зоны скрытого роста при ФД, и обеспечивает избирательность фотодинамического воздействия при ФДТ.
Кинетика и свойства препарата «Фотосенс», позволяют в различные временные интервалы изучить особенности микроциркуляции сосудистой системы глаза, новообразованных сосудов патологического очага, а длительная персистенция препарата в этом очаге открывает широкие возможности к флуоресцентному мониторингу в ходе ФДТ.
Препарат «Фотосенс» не оказывает токсического воздействия на здоровые окружающие ткани животных и может применяться в флуоресцентной диагностике методом ФАГ офтальмопатологических процессов, в генезе которых лежит активная пролиферация и неоваскуляризация.
Апробация работы Основные положения работы доложены на:
Международной конференции «Лазерные технологии в медицине XXI века» (г. Санкт-Петербург, Россия, 2001);
Научно-практической конференции российских учёных «Актуальные проблемы лазерной медицины» (г. Москва-Калуга, Россия, 2002);
Научной сессии МИФИ (г. Москва, Россия, 2003);
На 9-ом Всемирном Конгрессе Международной Фотодинамической Ассоциации (Miyazaki, Japan, 2003);
Международной конференции и симпозиуме (ILLA/LTL 2003) «Лазерные технологии и лазеры» (г. Пловдив, Болгария, 2003);
III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (г. Москва, Россия, 2004).
Публикации
По теме диссертации опубликованы 10 работ.
Имеется одно положительное решение на по заявке на изобретение.
Заключение диссертационного исследования на тему "Возможность применения отечественного препарата "Фотосенс" при флюоресцентной диагностике и фотодинамической терапии опухолевых и псевдоопухолевых заболеваний глаз (экспериментальное исследование)"
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
На сегодняшний день ФД и ФДТ с применением фотосенсибилизаторов признаны перспективными направлениями в онкологии [41]. Открытие препаратов, избирательно накапливающихся в активно пролиферирующих тканях, флуоресцирующих и индуцирующих цитофототоксические реакции при поглощении спектра определенной длины волны, имело колоссальное значение для медицины. Свойства ФС легли в основу двух параллельно развивающихся направлений - ФД и ФДТ. ФД злокачественных опухолей основана на разнице в интенсивности флуоресценции здоровой и опухолевой ткани при возбуждении лазерным излучением в инфракрасном и видимом диапазонах длин волн света. Причем, если перспективность применения ФДТ и ФД в онкологии уже не вызывает сомнений, то спектр офтальмоонкологических проблем, которые можно решить с помощью этих методов до сих пор не определен. Между тем, даже на нынешнем этапе знаний теоретически можно предположить, что ФД может оказать неоценимую помощь в дифференцировании сосудистых, опухолевых и псевдоопухолевых заболеваний глаз, а ФДТ - в их лечении [67,70,97,114,126,127,132,155,156,166].
К настоящему моменту, в России имеются лишь единичные публикации, посвященные ФДТ, и отсутствуют работы по ФД с применением ФС [9,21]. Сдерживающим моментом, безусловно, является высокая себестоимость зарубежных ФС и лазерных установок к ним, недоступных как для частных офтальмологических клиник, так и для крупных исследовательских учреждений офтальмологического профиля.
Между тем, именно Россия находится на передовой линии по производству таких препаратов. Среди 14 ФС последнего поколения, находящихся на различных стадиях клинических испытаний — 7 отечественного производства [16, 17]. Наше внимание привлек отечественный ФС второго поколения - «Фотосенс». Первые доклинические исследования показали, что по своим свойствам, этот препарат не только не уступает, но в ряде случаев превышает известные зарубежные аналоги. Кроме того, он представляет собой сравнительно дешевый, синтетический краситель, технология получения которого позволяет осуществить его наработку в любых требуемых количествах на доступном оборудовании. Благодаря особенностям молекулярной структуры, его поглощение смещено в красную область спектра, где прозрачность биологических тканей выше. Это расширяет терапевтические возможности метода ФДТ. Глубина разрушительного действия ФДТ с «Фотосенсом» в биологических (опухолевых) тканях в эксперименте достигала 5 мм. Высокая избирательность накопления обеспечивает сохранность здоровых тканей и строгую целенаправленность лучевого воздействия.
Фотосенс» (производства ФГУП «ГНУ НИОПИК»), разрешён для медицинского применения при проведении ФДТ и ФД злокачественных онкологических заболеваний. (Регистрационное удостоверение Р №000199/02 - 2001 от 25.07.2001).
Спектр общих онкологических заболеваний, при которых ФДТ с «Фотосенсом» может быть эффективен, еще изучается. Возможности метода определяются. Идет наработка клинических данных. В офтальмологии вообще, и в офтальмоонкологии, в частности, в России и за рубежом этот ФС до сих пор не применялся.
В связи с этим, цель нашей работы заключалась в экспериментальном обосновании возможности применения отечественного ФС "Фотосенс" в ФД и ФДТ опухолевых и псевдоопухолевых заболеваний глаза.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить в эксперименте динамику накопления препарата «Фотосенс» в тканях глаза для обоснования его расчетной дозы.
2. Определить временные параметры для максимальной интенсивности флуоресценции препарата «Фотосенс» в патологическом очаге и нормальных сосудах глаза, а также градиента контрастности между ними с целью определения сроков проведения ФДТ.
3. Осуществить подбор рабочего режима ФДТ с препаратом «Фотосенс» на экспериментальных моделях опухолей эпибульбарной и хориоидальной локализации.
4. Осуществить подбор рабочего режима ФДТ с препаратом «Фотосенс» на экспериментальной модели субретинальной неоваскулярной мембраны.
5. Провести анализ эффективности ФДТ с ФС «Фотосенс» псевдоопухолевых и опухолевых заболеваний глаз в эксперименте.
6. Изучить возможную токсичность и побочные эффекты ФДТ с ФС «Фотосенс» для органа зрения на функциональном и гистоморфологическом уровне.
Выбор спектра офтальмопатологических процессов (опухоли и СНМ), при которых мы планировали провести ФДТ, определялся уже известными свойствами фотосенсибилизатора - «Фотосенс» и первичными показаниями к применению метода ФДТ. Немаловажную роль здесь играли появившиеся сведения о том, что в основе СНМ лежит пролиферация различных клеточных элементов и неоваскуляризация, то есть патологические процессы, для борьбы с которыми предназначена ФДТ.
На первоначальном этапе мы создавали на экспериментальных животных (кроликах) классическую модель СНМ с помощью лазерной коагуляции сетчатки, которая служила моделью псевдоопухоли, а также модель опухолей эпибульбарной и хориоидальной локализации. Роль последней играла меланома В16, перевитая из-под кожи мыши BDF1 в глаз кролику породы Шиншилла.
Далее, для выбора оптимального режима ФД и ФДТ, мы изучали особенности циркуляции, накопления и флуоресценции ФС «Фотосенс» в тканях глаза мышей (30 мышей) и кроликов (120).
Динамику накопления ФС в заднем отрезке здорового глаза in vivo исследовали транссклерально, регистрируя спектры флуоресценции. Для этого «Фотосенс» вводили внутривенно, однократно, в дозах 0,05 — 0,1 - 0,2 -0,5 - 1,0 мг/кг. Таким образом, формировали пять групп животных - по одной на каждую исследуемую дозу. Спектроскопическое исследование проводили на отечественной установке «Lesa 01 BioSpec».
Изучали динамику накопления ФС в заднем отрезке глаза, устанавливая на склеру волоконно-оптический катетер для регистрации спектров флуоресценции. Установлено, что сроки появления «Фотосенса» в тканях здорового глаза не зависели от дозы. Он появлялся на 10-й секунде после введения и достигал пика концентрации через 7-15 минут. Амплитуда вызванных спектров флуоресценции находилась в прямо пропорциональной зависимости от дозы вводимого препарата. Концентрация ФС в исследуемых тканях глаза уменьшалась в 3 раза по сравнению с максимальной к 12-м суткам с момента введения.
По завершении эксперимента проводили гистологические исследования энуклеированных глаз на световом уровне. Отсутствие патологических изменений на тканевом уровне указывало на отсутствие токсичности анализируемых доз препарата «Фотосенса».
Вторым этапом исследовали накопление препарата «Фотосенс» в сосудах глазного дна нормальных кроликов и животных с моделью СНМ и опухолей эпибульбарной и хориоидальной локализации. С помощью лазерной электронно-спектральной Установки для флуоресцентной диагностики опухолей и контроля фотодинамической терапии ЛЭСА-01-«Биоспек» проводили ФД с препаратом «Фотосенс». При этом опирались на данные, полученные при работе с мышами.
Поскольку максимальные уровни «Фотосенса» в тканях здорового глаза мышей зарегистрированы после внутривенного введения препарата в дозах 0.5 и 1.0 мг/кг, именно эти дозы и были перенесены на кроликов после соответствующего пересчёта.
ФД СНМ проводили с препаратом «Фотосенс», введенным в дозах 0.1 и 0.3 мг/кг. ФД проводили лазерным излучением с длиной волны 0,675 нм, плотностью мощности 20 мВт/см (Положительное решение на заявку на изобретение №2003126738. от 3.09.2003 «Устройство и способ диагностики и фото динамической терапии заболеваний глаз». Будзинская М.В., Ворожцов Г.Н. Ермакова Н.А., Кузьмин С.Г., Лощёнов В.Б., Лужков Ю.М., Шевчик С.А.).
Данные, полученные в обеих группах, сопоставляли.
Было установлено, что через 5 секунд с момента введения препарата имела место флуоресценция хориоидальных сосудов, которая исчезала только через 72 часа. Кроме того, отмечалось избирательное накопление препарата в зоне трифокального отека и локальной отслойки пигментного эпителия, появляющееся с 5 секунды и продолжающееся 120 часов с момента введения. Депо препарата «Фотосенс» формировалось за счет экстравазального выхода через стенки патологически измененных сосудов. Причём, концентрация препарата практически не убывает со временем, поскольку он находится за пределами сосудистой системы.
Интенсивность наблюдаемой флуоресценции зависела от дозы вводимого ФС. Регистрация ангиографического изображения глазного дна обретала высокую котрастность и широкие диагностические возможности уже при введении дозы 0.3 мг\кг веса животного. При этом проявлялись все преимущества применения ФС «Фотосенс» в ФАГД перед другими известными красителями - Флуоресцеином натрия и Индоцианином зеленым. Так, если Флуоресцеин натрия позволял детально изучить особенности архитектоники сосудов сетчатки [5] без визуализации сосудистого сплетения хориоидеи (из-за совпадения спектра поглощения этого красителя со спектром поглощения РПЭ), а Индоцианин зелёный циркулировал в хориоидальных сосудах и визуализировал по большей части их, то «Фотосенс» решал обе поставленные задачи в различные интервалы времени с момента его введения. Кроме того, избирательное накопление препарата, имеющего значительное поглощение в спектральном диапазоне 0,650-0,700 мкм, обеспечивало не только высокий контраст патологического очага по сравнению с нормальными тканями глазного дна, предоставляло возможность точного определения уровня поражения и границ очага, включая зону скрытого роста, что, повышало избирательность ФДТ при лазерном воздействии в терапевтическом режиме.
Наряду с этим, продолжительная персистенция однократно введённого препарата, раскрывала возможности для проведения флуоресцентного мониторинга в ходе ФДТ при оценке её эффективности.
Аналогичные исследования ФД с ФС мы провели на экспериментальных моделях меланом В16 эпибульбарной и хориоидальной локализации. Для этих опухолей оптимальной при проведении ФД оказалась эмпирически подобранная доза 0,7 мг/кг веса кролика. Необходимость введения большей дозы ФС по сравнению с той, которую применяли при СНМ, мы объясняли большей степенью пигментации экспериментальных меланом и большими исходными размерами опухоли.
Динамику накопления «Фотосенса» при эпибульбарной меланоме изучали непосредственно в опухолевой и нормальной ткани - конъюнктиве глаза. Для этого в зоне эпибульбарной меланомы, а также в симметричных участках в зоне здоровой конъюнктивы регистрировали спектры флуоресценции. При внутривенном введении указанных доз «Фотосенса», препарат регистрировали в конъюнктиве и эпибульбарной меланоме на 10-й секунде, достигая максимума концентрации через 7-15 минут. Градиент контрастности между конъюнктивой и опухолью достигал пика (2.3+0.02) на 3 сутки, главным образом, за счет экстравазального выхода препарата через стенки патологически измененных сосудов и его депонирования в опухоли. Концентрация ФС в течение недели практически не убывала, поскольку он находился за пределами сосудистой системы. Таким образом, избирательное накопление «Фотосенса», имеющее значительное поглощение в спектральном диапазоне 0,650-700 мкм, обеспечивало высокую контрастность патологического очага по сравнению с окружающими тканями глаза и позволяло точно определить границы очага поражения, а при лазерном терапевтическом облучении, теоретически, могло обеспечить избирательность ФДТ.
Динамика препарата в патологическом очаге не зависела от вводимых доз (0,1 мг/кг или 0.7 мг/кг). Так, на 12-е сутки после введения «Фотосенса» его концентрация в опухолевой ткани уменьшилась в 14 раз по сравнению с максимальной (р<0,05). Вместе с тем, амплитуда спектров флуоресценции, полученных у животных, находилась в прямо пропорциональной зависимости от дозы вводимого «Фотосенса». Ангиографическое изображение глазного дна достигало максимальной контрастности при дозе «Фотосенса» 0.7 мг/кг. Флуоресценция опухоли на фоне этой дозы соответствовала флуоресценции тест-образца с объемной концентрацией ФС 1.5 мг/мл. Это означало, что доза 0.7 мг/кг адекватна для развития фотоцитохимического эффекта в опухоли.
Накопление препарата «Фотосенс» в сосудах глазного дна (ретинальных и хориоидальных) и в опухоли хориоидалъной локализации изучали на 12 кроликах аналогично предыдущему эксперименту. В I группе (4 глаза) «Фотосенс» вводили в дозе 0,1 мг/кг, во II группе (4 глаза) - в дозе 0,7 мг/кг.
Флуоресценция, соответствующая флуоресценции стандартного образца, была получена при введении той же дозы ФС - 0.7 мг/кг.
Флуоресценция ретинальных сосудов глазного дна появлялась на первой минуте и длилась 72 часа. В этот промежуток времени ангиографическое изображение глазного дна достигала максимальной контрастности и наибольшей информативности.
Экстравазальный выход ФС из новообразованных сосудов в ткань меланомы начинался с 15 минуты с момента введения препарата. Через 72 часа препарат избирательно накапливался в опухоли, исчезая из крупных ретинальных сосудов. В последующие 120 часов наблюдали флуоресценцию опухоли.
Таким образом, проведенный этап исследования показал, что оптимальной дозой «Фотосенса» при проведении ФД опухолей эпибульбарной и хориоидальной локализации следует считать 0,7 мг/кг веса. Высокая избирательность и длительная персистенция в опухоли «Фотосенса» обеспечивали высокую контрастность патологического очага по сравнению с окружающими тканями глаза, расширяли диагностические возможности ФД. Создавались условия для точной маркировки границ опухоли, включающей зону скрытого роста, а также условия для дозированного лучевого воздействия (ФДТ) на патологический очаг.
После эмпирического определения сроков накопления и градиента контрастности во временном интервале, переходили к третьему этапу -отработке условий проведения ФДТ на экспериментальных моделях.
Для проведения фотодинамической терапии СНМ и меланом эпибульбарной и хориоидальной локализации использовали лазерную установку для фотодинамической терапии ЛФТ-630/675-01 «Биоспек» ГОСТ Р 50460-92 (Регистрационное удостоверение № 29/05020400/0616-00 от 27.07.2000).
ФДТ с препаратом «Фотосенс», введенным в дозах 0.1 и 0.3 мг/кг проводили в двух группах экспериментальных животных с моделью СНМ. На 3 сутки после введения препарата, согласно пику накопления и максимальному градиенту контрастности, использовали лазерное излучение А с длиной волны 0,675 мкм, плотностью мощности 500 мВт/см , световой дозой 150 Дж/см . Продолжительность сеанса облучения составила 5 минут.
При выборе параметров облучения ориентировались на параметры лазерного воздействия, используемые в экспериментальных работах различных авторов с другими ФС.
Контролем служили животные, которым вводили «Фотосенс» в дозе 0.3 мг/кг и не проводили ФДТ, и кролики, которым проводили облучение глазного дна в том же режиме без введения «Фотосенса». Данные, полученные во всех 4 группах, сопоставляли
Нами было установлено, что поражение новообразованных сосудов в зоне активных пролиферативных псевдоопухолевых процессов (СНМ) фокусируется строго в зоне воздействия ФДТ и селективного накопления ФС «Фотосенс». Степень этого воздействия находится в прямой зависимости от дозы вводимого препарата. Оптимальными условиями при выбранном режиме облучения для ФДТ с «Фотосенсом» СНМ являются доза ФС - 0.3 мг/кг.
Аналогичный подход для отработки условий ФДТ с препаратом «Фотосенс» был применен при меланомах эпибульбарной и хориоидальной локализации.
ФДТ опухолей эпибульбарной локализации проводили лазером с длиной волны 0,675 мкм, плотностью мощности 200 и 500 мВт/см, экспозицией 5 минут, с препаратом «Фотосенс», введенным в дозах 0.1 и 0.7 мг/кг. При выборе исходных параметров ФДТ ориентировались на дозы, используемые в эксперименте с опухолями хориоидальной локализации [41] и с опухолями, развивающимися в слизистых оболочках [22, 25, 26, 29]. При выборе доз фотосенсибилизатора исходили из данных, полученных на II этапе исследований (пик накопления и максимальный градиент контрастности препарата «Фотосенс», см. выше). ФС вводили внутривенно. ФДТ проводили также на 3 сутки после введения препарата, ориентируясь на временные параметры пика накопления и максимального градиента контрастности ФС.
Контролем служили две группы животных. В I контрольной группе вводили «Фотосенс» в дозе 0.7 мг/кг. Во П контрольной группе проводили облучение глаз лазерным излучением с плотностью мощности 500 мВт/см экспозицией 5 минут, без введения «Фотосенса».
Данные, полученные во всех шести группах (4-х экспериментальных и 2-х контрольных), сопоставляли.
Оптимизация эффекта ФДТ при эпибульбарной меланоме отмечалась при использовании расчетной дозы «Фотосенса» - 0.7 мг/кг, продолжительности сеанса - 5 минут, плотности мощности лазерного
J "У облучения - 500 мВт/см и световой дозе - 150 Дж/см .
ФДТ с препаратом «Фотосенс» опухолей хориоидальной локализации ФДТ проводили в 2-х группах животных. Доза вводимого препарата в I группе составляла - 0.1 мг/кг (4 глаза), во II - 0.7 мг/кг (4 глаза). Препарат вводили внутривенно. ФДТ также проводили на 3-е сутки после введения препарата. Режимы ФДТ в обеих группах совпадали: плотность мощности
2 2 составляла 500 мВт/см , экспозиция - 5 минут, световая доза - 150 Дж/см .
Опирались на параметры лучевого воздействия, при которых в предыдущем эксперименте достигли оптимального эффекта.
Контролем служили 2 группы животных. В I контрольной группе (4 глаза) вводили 0.7 мг/кг «Фотосенса», не проводя ФДТ. Во П контрольной группе (4 глаза) проводили облучение с плотностью мощности 500 мВт/см , экспозицией 5 минут, световой дозой 150 Дж/см , не вводя «Фотосенс».
Оптимизация ФДТ при меланоме хориоидеи происходила при плотности мощности 500 мВт/см , экспозиции - 5 минут, световой дозе - 150
Дж/см . и разрешающей дозе ФС - 0,7 мг/кг веса.
В ходе экспериментальной работы была проведена оценка токсического воздействия препарата «Фотосенс» на ткани глаза на функциональном и гистоморфологическом уровне. Доказано, что дозы препарата, и режимы, применяемые при ФД, являются безопасными для тканей глаза.
Поражение новообразованных сосудов в ткани собственно меланомы при терапевтическом режиме облучения возникало только в зоне сфокусированного лазерного воздействия после предварительного введения терапевтической дозы фотосенсибилизатора «Фотосенс». Степень этого поражения зависела от дозы введенного фотосенсибилизатора и режима облучения.
Гистологические исследования на клеточном уровне позволили расширить представления о действии ФДТ с ФС. Были выявлены фотоцитотоксические эффекты ФДТ с ФС в виде разрушения липидсодержащих клеточных структур (цитоплазматических и ядерных мембран, крипт митохондрий и т.д.) перекисными радикалами и синглетным кислородом.
Если классическими гистоморфологическими проявлениями фотоцитотоксического эффекта ФДТ с любым ФС является некроз II типа, то избирательной и первоочередной точкой приложения ФДТ с препаратом «Фотосенс» служил - эндотелий кровеносных капилляров. Его повреждение приводило к деваскуляризации объекта воздействия - опухоли с последующим развитием ишемического апоптоза/некроза и параапоптотического некроза.
Гистоморфологическими признаками апоптоза считали пристеночное распределение хроматина в ядре с последующим выходом фрагментов ядерного вещества в цитоплазму, вакуолизацию клетки, формирование апоптических телец [19, 25].
Не меньший вклад в деструкцию опухоли, на наш взгляд, вносил выход эритроцитов и макрофагов в паравазальное пространство из-за нарушения целостности сосудистой стенки. Это сопровождалось дегрануляцией макрофагов с выбросом вазоактивных медиаторов. Впоследствии в области патологического очага развивалось асептическое воспаление с макрофагальным рассасыванием некротически изменённых клеток и эритроцитов. Позднее наблюдали врастание фибробластов с образованием рыхлой соединительной ткани. Участки опухолевого некроза подвергались также и жировому замещению.
Выявленные факты в целом не противоречат данным, полученным другими исследователями при ФДТ с использованием других фотосенсибилизаторов [51,91,133,164].
Полученные результаты позволяют считать, что ФДТ с препаратом «Фотосенс» является эффективным методом лечения опухолей и псевдоопухолей хориоидальной и эпибульбарной локализации.
Метод обладает избирательностью воздействия на патологический очаг и безопасен для здоровых окружающих тканей глаза. Проведенные исследования являются экспериментальным обоснованием к клиническим испытаниям отечественного препарата «Фотосенс» при ФД и ФДТ при изученной патологии.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Будзинская, Мария Викторовна
1. Баллюка Ф.В., Морозова С.И., Самойлова К.А. Медицинская лазерология. Санкт-Петербург: НПО «Мир и семья-95», ООО «Интерлайн», - 2000. — 166с.
2. Бровкина А.Ф., Гундорова Р.А. Результаты органосохранного лечения при опухолях иридоцилиарной области и показания к их применению // Офтальм.журн. 1978 — Т.6. - С.426-431.
3. Бровкина А.Ф., Зарубей Г.Д. Об эффективности брахитерапии при увеальных меланомах. // Офтальм.журн. — 1993. N.1. - С.1- 4.
4. Вакуловская Е.Г., Шенталь В.В. Фотодинамическая терапия опухолей головы и шей с использованием фотосенса. // Материалы Ш всероссийского симпозиума. "Фотодинамическая терапия".- 1999. -С. 26-32.
5. Кацнельсон Л.А.,.Форофонова Т.И., Макарская Н.В., Балишанская Т.И // Вест. Офтальмол. 1985 - №4. - С.33-36.
6. Кацнельсон Л.А, Форофонова Т.И., Бунин А.Я. Сосудистые заболевания глаза. Москва:Медицина, 1990. - 179с.
7. Кацнельсон Л.А., Лысенко B.C., Балишанская Т.И. Клинический атлас патологии глазного дна — Москва:ГЭОТАР Медицина. — 1997. 198с.
8. Киселев Г.Л., В.Б. Лощенов. Распределение лазерного излучения в биологической ткани при фотодинамической терапии и диагностике". // Российский химический журнал. 1998. - т. XLII. -С.53 - 64.
9. Копаева В.Г.,. Андреев Ю.В,. Пономарев Г.В,. Странадко Е.Ф. Первый опыт лечения неоваскуляризации роговичного трансплантата методом фотохимической деструкции сосудов // Актуальные проблемы офтальмологии. Сб. Научных трудов. Уфа. -1996.-С. 40-4
10. Ю.Коган Е.А.,. Невольских А.А,. Жаркова Н.Н, Лощенов В.Б. // Морфо- и патогенез повреждений злокачественных опухолей при фото динамической терапии. Архив патологии . — 1993. — N. 6.
11. Красновский А.А. Итоги науки и техники. // Сер. соврем. Проблемы лазерной физики. ВНИТИ. -1990. -N.3. С. 63-135.
12. З.Кузнецова Н.А, Калия О.Л. Фотокаталитическая генерация активных форм кислорода в биологических средах в методе фотодинамической терапии. // Рос. Химический журнал. 1995. - t.XLII. — N.5. - С.36-49.
13. Лощёнов В.Б., Стратонников А.А., Волкова А.И., Прохоров A.M. Портативная спектроскопическая система для флюоресцентной диагностики опухолей и контроля за фотодинамической терапией. // Российский химический Журнал. 1998. - T.XII. - N.5. - С.50-53.
14. Лужков Ю.М. Ворожцов Г.Н. // Город против рака: история, результаты, перспективы. Российский химический журнал. 1998. — t.XLII.- N.5. С.3-4.
15. Лукьянец Е.А. Новые сенсибилизаторы для фотодинамической терапии. // Рос. Химический журнал. 1995. - т. XLII. -N.5. - С.9-16.
16. Лукьянец Е.А. Новые сенсибилизаторы для фотодинамической терапии. // Фотодинамическая терапия Материалы 111 всероссийского симпозиума.- 1999. С.117-128.
17. Мепггер Е., Козма Л., Дудаш В., Нитраи А., Деклен А. Влияние лазерного излучения на фагоцитарную активность лейкоцитов. // Докл.АН БССР. 1976. - Т.23 - N.8. - С.749-752.
18. Родин А.С., Болыпунов А.В. Результаты фотодинамической терапии при субретинальных неоваскулярных мембранах по данным флюоресцентной ангиографии и оптической когерентной томографии. // Вестник офтальмол. 2003. - №2. - С.11-13.
19. Рябов М.В.Странадко Е.Ф. Опыт фотодинамической терапии базальноклеточного рака кожи размерами, соответствующими символу Т-2. // Фотодинамическая терапия Материалы 111 всероссийского симпозиума. 1999. - С.56-65.
20. Саакян С.В. Функциональные расстройства и меры их предупреждения после хирургического лечения опухолей иридоцилиарной зоны // Дисс.канд. мед. Наук, - М., 1987.
21. Соболев А.С., Розенкрац., Ахлынина Т.В. Направленный внутриклеточный транспорт фотосенсибилизаторов. // Российский химический Журн. 1998.- T.XLII. - С.84-88.
22. Странадко Е.Ф. Механизмы действия фотодинамической терапии. // Фотодинамическая терапия Материалы 111 всероссийского симпозиума. — 1999. СJ3-15.
23. Странадко Е.Ф.,. Маркичев Н.А, Рябов М.В. Роль фотодинамической терапии в лечении злокачественных опухолей головы и шеи. // Фотодинамическая терапия Материалы 111 всероссийского симпозиума. 1999. - С.92-95.
24. Чиссов В.И. Соколов В.В. Филоненко Е.В. Фотодинамическая терапия злокачественных опухолей. Краткий очерк развития и опытклинического применения в России. // Российский химический журнал. 1998. - т.ХЬП. - N.5.- С.5-9.
25. Чиссов В .И,. Казачкина Н.И, Фомина Г.И. Хлорин рб и его производные как новые фотосенсебилизаторы для фотодинамической терапии рака. // Российский онкологический журнал. 1999. - N.5. - С.22-25.
26. Харнас С.С. Кузин Н.М, Лощенов В.Б, Заводнов В.Я, Склянская О.А.Левкин В.В. Торшина Н.Л.,. Волкова А.И. Посыпанова А.М. Фотодинамическая терапия рака желудка. // Материалы 11 всероссийского симпозиума с международным участием. — 1997. -С.26-29.
27. Шевченко Ю.Л., Харнас С.С., Лощенов В.Б., Коган Е.А., Аблицов Ю.А., Заводнов В.Я., Завражина И.Н., Патока Е.Ю. Флюоресцентная диагностика хирургических заболеваний легких с использованием препарата Аласенс. // Анналы хирургии. 2003. - N.2. - С.57.
28. Шевчук И.Н, Чекулаева Л.В.,. Чекулаев В.А. Влияние рН и введения глюкозы на фототоксичность хлорина — Е6 по отношению к клеткам карциномы Эрлиха. // Экспериментальная онкология. 2002. -N. 24. - С.135-141.
29. Adamis А.Р., Shima D.T., Yeo К-Т, et al. Synthesis and secretion of vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor by human retinal pigment epithelial cells. // Biochem Biophys Res Commun.- 1993.-Vol. 193.-P. 631-638.
30. Amin R, Puklin J.E., Frank R.N. Growth factor localization in chorioidal neovascular membranes of age-related macular degeneration. // Invest. Ophthalmol and Visual Scienc. 1994.- Vol. 31.- P.3178 - 3188.
31. Anand R. Photodynamic therapy for diffuse choroidal hemangioma associated with Sturge Weber syndrome. // Am J Ophthalmol. 2003. -Vol.136.-P.758-760.
32. Atebara N.H. Retinal capillary hemangioma treated with verteporfin photodynamic therapy. //Am J Ophthalmol. 2002. - Vol. 134(5). -P.788-790.
33. Archer D., Gardiner T. Ionizing radiation and the retina. // Curr Opin Ophthalmol. 1994. - Vol.5. - P.59-65.
34. Baffi J., Byrnes G., Chan C-C., Csaky K.G. Chroidal neovascularization in the rat induced by adenovirus mediated expression of vascular endothelial growth factor. // Invest. Ophthalmol and Visual Scienc.-2000.- Vol. 41.- P. 3582-3589.
35. Barbazetto I, Schmidt-Erfurth U. Photodynamic therapy of choroidal hemangioma: two case reports. // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. -2000. Vol. 238. - P.214-221.
36. Barbazetto I.A., LeeT.C., Rollins I.S., ChangS., Abramson D.H. Treatment of choroidal melanoma using photodynamic therapy. // Am. J Ophthalmol. 2003. - Vol.135. - P.898-899.
37. Ватт C.C., Norton E.W. Recurrence of choroidal melanoma after photocoagulation therapy. // Arch Ophthalmol. 1983. - Vol.101. -P. 1737-1740.
38. BarrH., Kendall С., Reyes-Goddard J., Stone N. Clinical aspects of photodynamic therapy. // Sci .Prog. 2002. - Vol.85. - P. 131-150.
39. Battaglia ParodiM, Da Pozzo S, TotoL, Saviano S, RavalicoG. Photodynamic therapy for choroidal neovascularization associated with choroidal osteoma. // Retina. 2001. - Vol. 21. - P.660-671.
40. Berger J.W., Yoken J. Computer-assisted quantitation of choroidal neovascularization for clinical trials. // Invest. Jphthalmol and Visual Scienc.- 2000.- Vol. 41.- P. 2286-2295.
41. Bischoff P.M., Flower R.W. Indocyanin green fluorescent angiography. // Arch Ophthalmol. 1980. - Vol.58. - P.528-538.
42. Bressler S.B., Bressler NM., Fine S.L. et al Natural course of choroidal neovascular membranes within the foveal avascular zone in senile macular degeneration. // Am J Ophthalmol. -1982. -Vol. 93 P. 157-163.
43. Bressler S.B., Bressler ИД. Preventative ophthalmology: age-related macular degeneration. // Ophtalmology. -1995. Vol.102.- P. 1296-1211.
44. Cantrill H.L., Folk J.C. Multifocal choroiditis associated with progressive subretinal fibrosis. // Am J Ophthalmol. -1986. -Vol. 101. P. 170-180.
45. Castellani A., Pace G.P., Concioli M. Photodynamic effect of hematoporphyrin on blood microcirculation. // J Pathol Bacteriol. — 1963. Vol.86.-P.99-102.
46. Ciulla ТА., Danis R.P., Harris A. Age-related macular degeneration: a review of experimental treatments. // Surv Ophthalmol. 1998. - Vol. 43. -P. 134-146.
47. Clarkson JG. Altman RD. Angioid streaks. // Surv Ophthalmol. -1982. -Vol.26. -P.235-246.
48. Coleman DJ, Silverman RH, Iwamoto T. Histopathological effects of ultrasonically induced hyperthermia in intraocular malignant melanoma. // Ophthalmology. 1988. - Vol.95. -P. 970-981.
49. Curtin BJ The posterior staphiloma of pathologic myopia. // Trans. Am. Ophthalmol Soc. -1977. -Vol.75. P. 68-86.
50. Damato BE, Foulds WS. Surgical resection of uveal melanomas. In: Ryan S, ed. Retina.St Louis: Mosby. 1994. - P.795-807.
51. D'Amore P.A., Smith S.R., Growth factor effects on cells of the vascular wall: Survey. // Growht Factors. -1993. -Vol.8. -P. 61-75.
52. D'Amore Patricia, Mechanisms of retinal and choroidal neovascularization. // IO&VR.-1994.- Vol. 35.- P.3974-3979.
53. Das A., Puklin J.E., Frank R.N., Zhang N.I. Ultrastructural immunocytochemistry of subretinal neovascular membranes in age-related macular degeneration. // Ophthalmology. 1992. -Vol. 99. -P.1368-1376.
54. DeRosa M.C., Crutchley R.J. Photosensitized singlet oxygen and its applications // Coord. Chem. Rev. — 2002. Vol.233-234.— P. 351-371.
55. Destero M., Puliafito С A. Indocyanin green videoangiography of choroidal neovascularization. // Ophthalmology. 1989. Vol. — 96. — P.846-853.
56. Doirion D.R., Gomer C.J. Foote CS In Porphyrin Localization and Treatment of Tumors. // Eds. New York. 1984. - P. 3-18.
57. Domato В., Grochewald C., McGalliard J., Wong D. Endoresection of choroidal melanoma. // Br.J.Ophthalmol. - 1998. - Vol.83. - P.213-218.
58. Dougherty T.J. Use of hematoporphyrin in photodynamic therapy. // Photochem Photobiol. 1993. - Vol.58. - P.895-900.
59. Dreyer RF, Gass JDM: Multifocal choroiditis and panuveitis: A syndrome that mimics ocular histoplasmosis.// Arch Ophthalmol 1984 - Vol.102 -P.l 176-1184.
60. Dugan M, Crawford E, Nscyo U. Photodynamic therapy after transurethal resection for superficial papillary bladder carcinoma; a randomized trial. // Proc ASCO. 1991. - Vol.10. - P.173.
61. Edell ES, Cortese DA, Photodynamic therapy in the management of early superficial sqamous cell carcinoma as an alternative to surgical resection .// Chest. 1992. - Vol.102. - P. 1319-1322.
62. Ergun et al. Photodynamic Therapy With Verteporfin in Subfoveal Choroidal Neovascularization Secondary to Central Serous Chorioretinopathy. / /Arch Ophthalmol. 2004. - Vol. 122. - P.37-41.
63. Foote C.S. In Porphyrin Localization and Treatment of Tumors. Eds. D.R. Doirion, C.J. Gomer. // New YorkiAlan R.Liss. 1984. - P. 3-18.
64. Fossarello M., Peiretti E., Zucca I., Serra A. Photodynamic therapy of corneal neovascularization with verteporfin. // Cornea. 2003. - Vol.22. -P.485-488.
65. Franc R.N., Amin R.H., Eliott D., Puklin J.E., Abrams G.W. Basic fibroblast growth factor and vascular endothelial growth factor are present in epiretinal and chorioidal neovascular membranes. // Am.J.Ophthalmol. -1996. -Vol.122. -P.393-403.
66. Frederck, Morley, Topping, Peterson, Wilson. The apperence of stippled retinal pigment epithelial detachment: a sign of occult chorioidal neovascularization in age-related macular degeneration. // Retina. 1993. - Vol 13. - P.3-7.
67. Gass J.D.M. Pathogenesis of disciform detachment of the neuroepithelium: I :General concepts and classification. // Am J Ophthalmol. 1967. -Vol. 63.- P.573-585.
68. Gass JDM. Pathogenesis of disciform detachment of the neuroepithelium : П : Senile disciform macular degeneration. . // Am J Ophthalmol. -1967.-Vol. 63.- P.617-644.
69. Girotti A.W. Photodynamic lipid peroxidation in biological systems. // Photochem. Photobiol. 1990. - Vol. 51. - N4. - P. 497-509.
70. Gohto Y., Obana A., Kaneda K., Nakajima S., Takemura Т., Miki T. Accumulation of photosensitizer ATX-S10 (Na) in experimental corneal neovascularization. // Jpn J Ophthalmol. 2000. - Vol.44. - P.348-353.
71. Gollnick S.O., Vaughan L., Henderson B.W. Generation of effective antitumor vaccines using photodynamic therapy. // Cancer Res. 2002. -Vol.62.-P.1604-1608.
72. Gomer C.J., Rucker N., Ferrario A. Properties and applications of photodynamic therapy. // RadiatRes. 1989. - Vol.120. - P. 1-18.
73. Gonzalez V.H., Hu L.K., Theodossiadis P.C., et al. Photodynamic therapy of pigmented choroidal melanomas. // Invest Ophthalmol Vis Sci.- 1995.-Vol.36.-P.871-878.
74. Gragoudas E.S., Egan KM., Seddon J.M., et al. Intraocular recurrence of uveal melanoma after proton beam irradiation. // Ophthalmology. -1992. Vol.99. - P.760-766.
75. Grossniklaus H.E., Martinez J.A., Brown V.B., et al. Immunohistochemical and histochemikal properties of surgically excisedsubretinal neovascular membranes in age-related macular degeneration. // Am J Ophthalmol. 1992. - Vol.114. - P.464-472.
76. Grossniklaus H. E., Clinicopathologic features of submacular neovascularization. // Ophthalmol Clin North Am. 1993. - Vol. 6. -P.359-374.
77. Grossniklaus H. E., Hutchinson A.K., Capone A. Jr., Wolfson J., Lambert H. M. Clinicopathologic features surgically excised choroidal neovascular membranes. // Ophthalmology. 1994. -Vol.101. - P. 1094-1 111.
78. Grossniklaus H.E., Gass J.D.M., Clinicopathologic correlation of surgically excised type 1 and 2 submacular choroidal neovascular membranes. // Am J Ophthalmol 1998. - Vol. 126. - P.59-69.
79. Grossniklaus H.E., Green R., Histopathologic and ultrastructural findings of surgically excised choroidal neovascularization. Submacular Surgery Trials Research Group. // Arch Ophthalmol. 1998. - Vol. 116. - P 745749.
80. Gtinduz K., Shields C.L., Shields J.F., Cater J., Freire J.E., Brady L.W. Plaque radiotherapy of uveal melanoma with predominant ciliary body involvement. // Arch Ophthalmol. 1999. -Vol.117. - P.170-177.
81. Hayashi K., DeLaey J.J. Indocyanin green fluorescent angiography of neovascular membranes. // Ophthalmologica. 1985. - Vol.190. - P.30-39.
82. Hayashi K., Hasegawa Y., Tokoro Т., DeLaey J.J. Value indocyanin green fluorescent angiography in the diagnosis of occult choroidal neovascular membrane. // Jpn J Ophthalmol. 1988. Vol. 42. - P.827-829.
83. Hayashi K, Hasegawa Y, Tokoro T, DeLaey JJ. Clinical application of indocyanin green angiography to choroidal neovascularization . // Jpn J Ophthalmol. 1989. Vol.33. -P.57-68.
84. Henderson B.W., Donovan J.M. Release of proslaglandin E2 from cells by photodynamic treatment. // Cancer Res. 1989. - Vol.49. - P.6896-6790.
85. Henderson B.W., Sumlin A.B., Owczarczak B.L., Dougherty T.J. Bacteriochlorophyll-a as photosensitizer for photodynamic treatment of transplantable murine tumors // J. Photochem. Photobiol., B; Biol. — 1991. —Vol. 10. -N.6.— P. 303-312.
86. B. W. Henderson, Th. J. Dougherty. Photodynamic therapy. // Eds. New York: Dekker. 1992.
87. Hillesberg R van, Kost WJ., Wilson JHP Current Status of Photodynamic Therapy in Oncology. // Drugs. -1994. Vd.48. - N4. - P. 510-524.
88. Hochheimer B.F., D'Anna S.A. Angiography with the new dye. // Exp Eye Res. 1978. - Vol.27. - P.l-16.
89. Holz et al. Exudative Complications After Photodynamic Therapy. // Arch Ophthalmol. 2003. - Vol.121. - P.1649-1652.
90. Holzer M.P., Solomon K.D., Vroman D.T. Photodynamic Therapy with Verteporfin in a Rabbit Model of Corneal Neovascularization. // Investigative Ophthalmology and Visual Science. 2003. - Vol.44. -P.2954-2958.
91. Horsman M.R., Winther J. Vascular effects of photodynamic therapy in an intraocular retinoblastoma like tumor. // Acta Oncol. - 1989. — Vol.28.-P.693-697.
92. Hotchkiss ML., Fine SL:Pathologic myopia and choroidal neovascularization. // Am J Ophthalmol. 1981. -Vol.91. - P. 177-183.
93. Hsu J.K., Thomas M. A., Ibanez H., Green W. R., Clinicopathologic studies of an eye after submacular membranectomy for choroidal neovascularization. // Retina. -1995. -Vol. 15. -P.43-52.
94. Hu L., Wu X., Song Y., Young L.H., Gragoudas E.S. Photodynamic therapy of pigmented choroidal melanomas in rabbits. // Zhonghua Yan Ke Za Zhi. 2002. -Vol.38. - P.491-494.
95. Ivanov I.V., Reshetnikov A.V, Ponomarev A.G., // In: Optical Methods for Tumor Treatment and Detection: Mechanisms and Techniques in Photodynamic Therapy DC.-T.J.Dougherty, ed. 2000. -Vol. 3909. - P.131-137.
96. Journee-de-Korver H.G., Verburg-van der Marel E.H., Oosterhuis J.A., et al. Tumoricidal effect of hyperthermia by near infrared irradiation on pigmented hamster melanoma. // Lasers Light Ophthalmol. 1992. Vol.4.-P.175-180.
97. Jurklies В., Anastassiou G., Ortmans S., Schuler A., Schilling H., Schmidt-Erfurth U., Bornfeld N. Photodynamic therapy using verteporfin in circumscribed choroidal haemangioma. // Br J Ophthalmol. 2003. -Vol.87.-Vol.84-89.
98. Kaiserman I., Anteby I., Chowers I, Blumenthal EZ, Kliers I, Pe'er J Changes in ultrasound findings in posterior uveal melanoma after Ruthenium 106 brachytherapy. // Ophthalmology. 2002. - Vol.109. -1137-1141.
99. Kim I., Ryan A.M., Rohan R., et al. Constitutive expression of VEGF, VEGFR-1, and VEGFR-2 in normal eyes. // Invest. Jphthalmol and Visual Scienc.- 1999. Vol. 40. - P. 2115-2121.
100. Kim M.K., Char D.H., Castro J.L., et al. Neovascular glaucoma after helium ion irradiation for uveal melanoma. // Ophthalmology. -1986.-Vol.93.-P.189-193.
101. Kim R.Y., Hu L.K., Foster B.S., et al. Photodynamic therapy of pigmented choroidal melanomas of greater than 3-mm thickness. // Ophthalmology. 1996. - Vol.103. -P.2029-2036.
102. Klein M.L., Fine S.L., Knox D.L, Patz A: Follow-up study in eyes with choroidal neovascularization caused by presumed ocular histoplasmosis. // Am J Ophthalmol. -1977.-Vol. 83. P.830-835.
103. Kogure K, Choromokos E. Infrared absorbcion angiography. // J Appl Physiol. 1969. - Vol.26 - P.154-157.
104. Kurohane K., Tominaga A., Sato K., North J.R., Namba Y., Oku N. Photodynamic therapy targeted to tumor-induced angiogenic vessels. //Cancer Lett. 2001. - Vol.10. - P.49-56.
105. Landau I.M., Steen В., Seregard S. Photodynamic therapy for circumscribed choroidal haemangioma. // Acta Ophthalmol Scand. 2002. - Vol.80.-P.531-536.
106. Levy J.G., Waterfield E., Richter A. Photodynamic therapy of malignancies with benzoporphyrin derivative monoacid ring A. // Proc Soc Photo Optical Instr Eng. 1994. - Vol.2078. - P.91-101.
107. Loschenov V.B., Konov V.I., and Prokhorov A.M Photodynamic Therapy and Fluorescence Diagnostics. // Laser Physics. 2000. - Vol. 10. - P.l 188-1207.
108. Lumbroso L., Desjardins L., Levy C., Plancher C., Frau E., DHermies F., Schlienger P., Mammar H., Delacroix S., Nauraye C.,
109. Ferrand R., Desblancs C., Mazal A., Asselain B. // Intraocular inflammation after proton beam irradiation for uveal melanoma. Br J Ophthalmol. 2001. -Vol.85. - P.1305-1308.
110. Macular Photocoagulation Study Group. Argon laser photocoagulation of neovascular lesion of ARMD : result of randomized clinical trial. // Arch Ophthalmol. 1982. - Vol.100. - P. 912-918.
111. Macular Photocoagulation Study Group . Argon laser photocoagulation for neovascular maculopathy: five- year result from randomized clinical trial. // Arch Ophthalmol. 1991. -Vol.109. -P.1109-1114.
112. Macular Photocoagulation Study Group. Subfoveolar neovascular lesion in ARMD : guidelines for evaluation and treatment in the macular photocoagulation study. // Arch Ophthalmol. 1991. - Vol.109. -P. 1242-1257.
113. Macular Photocoagulation Study Gr oup. Laser photocoagulation of subfoveolar neovascular lesion in ARMD: result of randomized clinical trial. // Arch Ophthalmol. 1991. - Vol.109. - P.I220-1231.
114. Madreperla S.A. Choroidal hemangioma treated with photodynamic therapy using verteporfin. // Arch Ophthalmol. — 2001. Vol.119. -P.1606-1610.
115. Meyer-Schwickerath G, Vogel M. Treatment of malignant melanomas of the choroids by photocoagulation. // Trans Ophthalmol SocUK.- 1977.-Vol.97.-P.416-420.
116. Miller H., Miller В., Ishibashi Т., Ryan S.J. Pathogenesis of laser-induced choroidal subretinal neovascularization. // Invest. Ophthalmol and Visual Scienc. 1990. - Vol.31 - P.899-908.
117. Miller J.W., Stinson W.G., Gregory W.A., el-Koumy HA., Puliafito C.A. Phthalocyanine photodynamic therapy of experimental iris neovascularization. // Ophthalmology. 1991. - Vol.98. - P. 1711-1719.
118. Mironov A.F., Nizhnik A.N., Nocke A.Y . Hematoporphyrin derivatives: an oligomeric composition study. // J. Photochem. Photobiol.-1990.-Vol. 4.-P. 297-306.
119. Moan J., Berg K. Photochemolherapy of cancer: experimental research. // Photochem Photobiol. 1992. - Vol. 55. - P.931-948.
120. Morgan C.M., Schatz H: Recurrent multifocal choroiditis. // Ophthalmology. 1986. - Vol. 93 - P. 1138-1147.
121. Munzenrider J.E. Uveal melanomas. Conservation treatment. // Hematol Oncol Clin North Am. 2001. - Vol.15. - P.389-402.
122. Nelson J.S., Liaw L.H., Orenstein A. Mechanism of tumor destruction following photodynamic therapy with hematoporphyrin derivative, chlorin and phthalocyanine. // J Nad Cancer Inst. 1988. -Vol.80. -P.1599-1605.
123. Obana A., Gohto Y., Kanai M., Nakajima S., Kaneda K., Miki T. Selective photodynamic effects of the new photosensitizer ATX-S10(Na) on choroidal neovascularization in monkeys. // Arch Ophthalmol. 2000. — Vol. 118. - P.650-658.
124. Oosterhuis J.A., Journee-de-Korver HG, Kakebeeke-Kemme H.M., BleekerJC. Transpupillary thermothcrapy in choroidal melanoma. // Arch Ophthalmol. 1995. - Vol.13. - P.315—332.
125. Overholt B.F., Panjehpour M. Photodynamic therapy for Barrett's esophagus. // Gastrointest Endose Clin N Am. 1997 . - Vol.7. - P.207-220.
126. Palestine A.G., Nussenblatt R.B., Parver L.M., Knox D.L: Progressive subretinal fibrosis and uveitis. // Br J Ophthalmol. -1984. -Vol. 68-P. 667-673.
127. Pandey K., Shiau F.-Y. Dougherty T.J., Smith K.M. Synthesis of new Bacteriochlorins and their Antitumor Activity // Bioorg. Med. Chem. Lett. — 1994. — Vol.4. N.10.— P. 1253-1257.
128. Pass H.I. Photodynamic Therapy in Oncology. Mechanism and Clinical Use // J. Natl. Cancer Inst. -1993. Vol.85. - N6. - P. 443^156.
129. Patz A., Flower R.W., Klein M.L., et al. Clinical applications of indocyanin green angiography. // Docum Ophthalmol Proc Ser. 1976. -Vol.9.-P.245-251.
130. Photodynamic Therapy Stady Group. Photodynamic Therapy of Subfoveal Choroidal Neovascularization in Age-related Macular Degeneration With Verteporfin. // Arch.Ophthalmology. 1999. -Vol.117.-P.1329-1345.
131. Porrini G., Giovannini A., Amato G., Ioni A., Pantanetti M. Photodynamic therapy of circumscribed choroidal hemangioma. // Ophthalmology. 2003. -Vol.110. - P.674-680.
132. Richter A.M., Jain A.K., Canaan A.J., et al. Photosensitizing efficiency of two regioisomers of the benzoporphyrin derivative monoacid ring A. // Biochem Pharmacol. 1992. - Vol.43. -P.2349-2358.
133. Robertson D.M. Photodynamic therapy for choroidal hemangioma associated with serous retinal detachment. // Arch Ophthalmol. 2002. -Vol.120.-P.l 155-1161.
134. Rosenbach-Belkin V., Chun L., Feodor L. et al. Serine Conjugates of Chlorophyll and Bacteriochlorophyll :Photocytotoxicity in vitro and Tissue Distribution in Mice Bearing Melanoma Tumors // Photochem. Photobiol. 1996.— Vol. 64. N. 1. — P. 174-181.
135. Ruiz-Moreno Jose M, de la Vega Concepcion. Surgical removal of subfoveal choroidal neovascularization in highly myopic patient. // Br.J.Ophthalmol 2001. - Vol.85. - P.1041-1043.
136. Saornil M.A., Egan K.M., Gragoudas E.S., et al. Histopathology of proton beam-irradiated vs. enucleated uveal melanomas. // Arch Ophthalmol. 1992. - Vol.110. - P.l 112-1118.
137. Schats H., Burton T.C., Yannuzzi L.A., Rabb M.F. Interpretation of fundus fluorescent angiography. MOSBY. 1978. - 631 p.
138. Shields C.L., Shields J.A., Cater J., GundOz K., Miyamoto C., Micaily В., Brady L.W. Plaque radiotherapy for uveal melanoma: long-term visual outcome in 1106 consecutive patients. // Arch Ophthalmol. -2000.-Vol.118.-P.1219-1228.
139. Schmidt U; Birngruber R; Hasan T. Selektiver Verschluss okularer Neovaskularisationen durch photodynamische Therapie. // Ophthalmologe. 1992. - Vol 89. - S.391-394.
140. Schmidt-Erfiirth U., Bauman W., Gragoudas E., et al. Photodynamic therapy of experimental choroidal melanoma usinglipoprotein-delivered benzoporphyrin. // Ophthalmology. 1994. -Vol.101.-P.89-99.
141. Schmidt Erfursh U., Hasan Т., Gragoudas E., Michaud N., Flotte Т., Bringruber R. Vascular targeting in photodynamic occlusion of subretinal vessels. // Ophthalmology. - 1994. - Vol. 101. - P. 1953-1961.
142. Schmidt-Erfurth ILM., Michels S., Kusserow C., Jurklies В., Augustin A.J. Photodynamic therapy for symptomatic choroidal hemangioma: visual and anatomic results. // Ophthalmology. 2002. -Vol.109.-P.2284-2294.
143. Seddon J.M., Gragoudas E.S., Egan K.M., et al. Uveal melanomas near the optic disc or fovea, visual results after proton beam irradiation. // Ophthalmol. 1987. - Vol.94. - P.354-361.
144. Shields J.A., Shields C.L., Shah P., Sivalingam V. Partial lamellar sclerouvectomy for ciliarybody and choroidal tumors. // Ophthalmology. 1991.- Vol.98. -P.971-983.
145. Takehana Y., Kurokawa Т., Kitamura Т., et al. Suppression of laser-induced choroidal neovascularization by oral tranilast in the rat. // Invest. Ophthalmol and Visual Scienc. -1999. -Vol. 40 -P.459-466.
146. Tappciner H, Jodlbauer A. Uber die Wirkung der photodynamischen StofFe auf Protozoen und Enzyme. // Deutsches Arch Klin Med. 1904. - Vol.39. - P.427-487.
147. Thomas M.A., Kaplan H.J. Surgical removal of subfoveal neovascularization in the presumed ocular histoplasmosis syndrome. // Am J Ophthalmol.-1991.-Vol. lll.-P.l.
148. VanGeel I.P., Oppelaar H., Oussoren Y.G., Stewart F.A. Changes in perfusion of mouse tumours after photodynamic therapy .// Int J Cancer. 1994. - Vol.56. - P.224—228.
149. Weishaupt K., Gomer C.J., Dougherty T. Identification of singlet oxygen as the cytotoxic agent in photoactivation of a murine tumor. // Cancer Res. 1976. - Vol.36. - P.2326-2329.
150. Winther J. Porphyrin photodynamic therapy in an experimental retinoblastoma model. // Ophthalmic Paediatr Genet. 1987. - Vol.8. -P.49-52.
151. Yannuzzi L.A, Slakter J.S., Sorenson J.A., Guyer D.R., Oriok D.A. Digital indocyanine green videoangiography and choroidal neovascularization. // Retina -1992. Vol.12. - N.3 - P. 123-134.
152. Young L.H.Y., Howard M.A., Hu L.K., Gragoudas ES. Photodynamic therapy of pigmented choroidal melanoma using a liposomal preparation of benzoporphyrin derivative. // Arch. Ophthalmol. 1996. - Vol.114. - P.186-192.