Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Влияние воды с модифицированным изотопным составом на показатели свободнорадикального окисления при эндогенной интоксикации различного генеза

На правах рукописи

БАРЫШЕВА

Екатерина Владимировна

ВЛИЯНИЕ ВОДЫ С МОДИФИЦИРОВАННЫМ ИЗОТОПНЫМ СОСТАВОМ НА ПОКАЗАТЕЛИ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ ПРИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА (экспериментальное исследование)

14.03.03 - патологическая физиология

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

03.01.04 - биохимия

Автореферат

9 СЕН 2015

Краснодар-2015

005562136

005562136

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России)

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

Каде Азамат Халндович;

доктор медицинских наук Басов Александр Александрович

Официальные оппоненты:

Кожин Александр Алексеевич, доктор медицинских наук, профессор, федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Южный федеральный университет» (ФГАОУ ВПО ЮФУ), кафедра биофизики и биокибернетики физического факультета, профессор кафедры;

Бондарь Татьяна Петровна, доктор медицинских наук, профессор, федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Северо-Кавказский федеральный университет» (ФГАОУ ВПО «Северо-Кавказский федеральный университет»), Институт живых систем, директор; кафедра медицинской биохимии, клинической лабораторной диагностики и фармации, заведующая кафедрой.

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России).

Защита состоится 2015 г. в /3 часов на заседании диссертаци-

онного совета Д208.038.02 на базе ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России (350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4, тел. (861) 262-73-75).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на официальном сайте (http://www.ksma.ru) ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России.

Автореферат разослан «,-£■/» СФНСС- 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д208.038.02,

доктор медицинских наук, доцент Лапина Наталья Викторовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Значительный вклад в развитие и прогресси-рование многих патологических состояний вносит повышение интенсивности свободнорадикального окисления (СРО) в клетках. Это может быть обусловлено действием на организм различных экологически неблагоприятных факторов, в том числе поступлением и накоплением ионов тяжелых металлов, содержание которых нередко повышено в промышленных регионах с развитой транспортной инфраструктурой. Усиленное образование свободных радикалов и реактивных молекул приводит к повреждению всех клеточных структур, а также структуры нуклеиновых кислот. Это вызывает деформацию мембранных липопротеиновых комплексов клеточных мембран, изменение физико-химических свойств и активности мембраносвязанных ферментов, нарушая работу ионных каналов и приводя к необратимым изменениям в тканях и органах [Т.Н. Крыжановский, 2002; Н.К. Зенков, 2004; Ю.А. Владимиров, 2004; T.R. Dean et al., 2007].

Одной из главных составляющих неспецифической защиты организма является антиоксидантная система (АОС), представленная ферментным и низкомолекулярным звеньями и участвующая в поддержании физиологического баланса прооксидантных и антиоксидантных факторов в организме [И.А. Збровская, 1995; В.К. Казимирко и соавт., 2004; Е.Б. Меньшикова и соавт., 2008].

Усиление свободнорадикальных процессов в условиях патологии приводит к нарушению существующего в физиологических условиях баланса между активностью прооксидантной и антиоксидантной систем с преобладанием первой. Это становится причиной возникновения повреждения на молекулярном и клеточном уровне и сопровождается комплексом типовых патологических процессов в органах и тканях, обозначаемым как «окислительный стресс» (ОС) [O.A. Гомазков, 2003]. Развитие окислительного стресса всегда сопровождается накоплением в биологических жидкостях продуктов окислительной модификации, представляющих собой пул эндотоксических субстанций, что ведет к формированию синдрома эндогенной интоксикации (СЭИ) и существенно ухудшает течение большинства заболеваний.

Моделирование на животных СЭИ, позволяет выявить реакцию основных систем организма на накопление эндотоксических субстанций в биологических жидкостях и определить ведущие патобиохимические изменения в организме. Такой подход обеспечивает эффективность разрабатываемых и применяемых в дальнейшем способов коррекции нарушений метаболизма при СЭИ, в том числе позволяет индивидуализировать лечебные и профилактические мероприятия в зависимости от первичного механизма развития СЭИ. Одним из перспективных способов коррекции деятельности антиоксидантного потенциала организма является потребление воды с модифицированным изотопным D/H составом (ВМИС) со сниженным содержанием дейтерия (ССД). ВМИС ССД в условиях развития в

организме ОС и СЭИ способна уменьшить интоксикацию и повысить антиокси-дантный потенциал органов и тканей [L. Olariu et al., 2010]. Введение в пищевой рацион больных с эндогенной интоксикацией ВМИС ССД может ускорять реакции изотопного обмена, стимулируя тем самым органы функциональной системы детоксикации (печень, почки) за счет влияния на термодинамические и термокинетические показатели макромолекул (прежде всего, белков, нуклеиновых кислот), изменения скорости биохимических процессов в клетке.

Таким образом, изучение динамики функциональной активности проок-сидантно-антиоксидантной системы при формировании в организме синдрома эндогенной интоксикации с различным первичным механизмом развития (продукционным, резорбционным и ретенционным) позволит расширить представления о роли нарушений окислительного метаболизма в патогенезе СЭИ, а также позволит изучить эффективность корригирующих мероприятий, осуществляемых с помощью реакций изотопного D/H обмена, при моделируемых патологических процессах.

Цель исследования - оценить влияние воды с модифицированным изотопным D/H составом с пониженным содержанием дейтерия на состояние про-оксидантно-антиоксидантной системы и определить оптимальные концентрации дейтерия для повышения антиоксидантного потенциала организма у лабораторных животных.

В соответствии с целью были определены задачи исследования:

1. Определить интенсивность изотопного обмена дейтерия и протия в тканях внутренних органов функциональной системы детоксикации при приеме воды с модифицированным изотопным D/H составом со сниженным содержанием дейтерия.

2. Установить сравнительную динамику биохимических показателей при окислительном стрессе, сопровождающем эндогенную интоксикацию с разным первичным механизмом развития: продукционным, резорбционным, ретенционным.

3. Изучить влияние воды с модифицированным изотопным D/H составом со сниженным содержанием дейтерия на показатели прооксидантно-антиоксидантной системы у животных в физиологических условиях.

4. Изучить характер влияния воды с модифицированным изотопным D/H составом со сниженным содержанием дейтерия на показатели прооксидантно-антиоксидантного баланса организма лабораторных животных при моделировании эндогенной интоксикации с продукционным, резорбционным и ретенционным первичным механизмом развития.

5. Установить оптимальное содержание воды с модифицированным изотопным D/H составом с пониженным содержанием дейтерия в питьевом рационе животных, необходимое для повышения антиоксидантного потенциала ор-

ганизма при эндогенной интоксикации с продукционным, резорбционным и ре-тенционным первичным механизмом развития.

6. Выявить возможное влияние воды с модифицированным изотопным D/H составом со сниженным содержанием дейтерия на антимутагенный потенциал лимфоцитов.

Научная новизна исследования

Впервые показано, что в физиологических условиях содержание дейтерия в крови превосходит его концентрацию (максимальное значение 3,9 ррш) в тканях внутренних органов (печени, почке, сердце). При введении в питьевой рацион крыс ВМИС ССД (40 и 100 ррш) происходит изменение направления изотопного D/H градиента «плазма крови - ткани». Его максимальное значение при использовании воды 40 ррш составило 42,6 ррт, а при использовании воды 100 ррш -26,0 ррт с достижением устойчивого равновесия на 30 день эксперимента.

Впервые продемонстрированы различия в эффективности питьевого рациона, включающего воду с пониженным содержанием дейтерия (40 ррш), для коррекции нарушений в работе прооксидантно-антиоксидантной и детоксицирующей систем при моделировании у животных эндогенной интоксикации с разным первичным механизмом развития эндотоксикоза. Продемонстрировано более существенное влияние реакций изотопного обмена на состояние функциональной системы детоксикации при резорбционном первичном механизме развития эндотоксикоза (индекс эндогенной интоксикации (ИЭИ) снижался на 36,8 %). Наиболее значимая коррекция нарушений в работе прооксидантно-антиоксидантной системы, с помощью воды с пониженным содержанием дейтерия, отмечена при эндо-токсикозе гепато-ренального генеза (коэффициент окислительной модификации биомолекул эритроцитов (КОМБэр) уменьшался на 26,6 %).

Впервые показано, что при использовании ВМИС с пониженным содержанием дейтерия происходит уменьшение количества однонитевых разрывов ДНК лимфоцитов человека и животных при индукции апоптоза (in vitro).

Практическая значимость

В эксперименте продемонстрирована перспективность нутриционной коррекции показателей прооксидантно-антиоксидантной системы и функциональной системы детоксикации организма при использовании воды с пониженным содержанием дейтерия в условиях эндогенной интоксикации с разным первичным механизмом развития эндотоксикоза.

Положения выносимые на защиту:

— при использовании в питьевом рационе воды с пониженным содержанием дейтерия устанавливается изотопное D/H равновесие между тканями и кровью («плазма крови - ткани»), которое при употреблении воды с концентрацией дейтерия 40 ррш составляет от 33,0 ррш («плазма крови - ткань почки») до 42,6 ррш («плазма крови — ткань печени»),

- имеются различия в эффективности питьевого рациона, включающего воду с модифицированным изотопным D/H составом с концентрацией дейтерия 40 ррш, для коррекции нарушений в работе прооксидантно-антиоксидантной и детоксицирующей систем в зависимости от первичного механизма развития эн-дотоксикоза.

- продемонстрировано более выраженное влияние воды с модифицированным изотопным D/H составом с концентрацией дейтерия 40 ррт на состояние функциональной системы детоксикации при резорбционном первичном механизме развития эндотоксикоза (ИЭИ снижался на 36,8 %) и эндотоксикозе гепаторе-нального генеза (ИЭИ снижался на 32,8 %). Наиболее значимая коррекция нарушений в работе прооксидантно-антиоксидантной системы при использовании в питьевом рационе воды с пониженным содержанием дейтерия отмечена при эндотоксикозе гепато-ренального генеза (КОМБэр уменьшался на 26,6 %).

- показано уменьшение количества однонитевых разрывов ДНК лимфоцитов человека и животных при индукции апоптоза (in vitro) в условиях инкубации лимфоцитов в среде с водой с модифицированным изотопным составом со сниженным содержанием дейтерия.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы представлены на конференциях: «Актуальные проблемы биологии, нанотехно-логий и медицины», Ростов-на-Дону, октябрь 2011; XXIV Всероссийской научно-технической конференции студентов, молодых ученых и специалистов «Биотехнические, медицинские и экологические системы и комплексы» Рязань 2012; XXI Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» 5-15 июня 2013 г., Украина, Крым, Ялта-Гурзуф; XI научно-практической конференции молодых ученых и студентов юга России «Медицинская наука и здравоохранение» г. Краснодар, 24-26 апреля 2013 г; XXIII Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» 2-12 июня 2015 г., Крым, Ялта-Гурзуф.

Внедрение результатов. Результаты диссертационной работы внедрены на кафедре общей и клинической патофизиологии, кафедре фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России и кафедре технологии продуктов питания животного происхождения Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Кубанский государственный технологический университет» (г. Краснодар).

Публикации результатов исследования. По материалам диссертационного исследования опубликовано 13 работ, из них 5 в журналах, включенных в перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертации.

Личный вклад автора

Автором сформулирована основная идея и разработан алгоритм получения и обработки результатов экспериментального исследования. Автор самостоятельно провел анализ современной литературы о роли свободнорадикаль-ного окисления в формировании синдрома эндогенной интоксикации. Им проведено моделирование эндогенной интоксикации с продукционным, резорбци-онным и ретенционным первичными механизмами развития. Автор самостоятельно курировал условия содержания животных в виварии, производил забор биологического материала и участвовал в проведении морфологических, биохимических, биофизических исследований. Автором разработаны протоколы исследования для сбора и статистической обработки данных. На основании проведенных исследований им сделаны достоверные, обоснованные выводы и разработаны практические рекомендации. Авторский вклад в выполнении работы 90 % и написание научных работ по теме диссертации 70 %.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста, который включает 10 таблиц и 24 рисунка. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав, отражающих результаты собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы, содержащего 90 отечественных и 108 иностранных источников и приложения.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Эксперименты были выполнены на 167 крысах-самцах линии Вистар в возрасте 4-6 месяцев (с массой тела 240 ± 50 г). Содержание животных и постановка экспериментов были проведены в соответствии с требованиями Приказа МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г. «Об утверждении правил лабораторной практики», требованиями Приказа МЗ СССР № 742 от 13.11.84 г. «Об утверждении правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» и № 48 от 23.01.85 г. «О контроле за проведением работ с использованием экспериментальных животных». Были проведены эксперименты по формированию окислительного стресса с различным первичным механизмом развития (экспериментальный аллоксановый диабет (продукционный), экспериментальное моделирование хронического абсцесса (резорбционный), хронический эндотокси-коз гепаторенального генеза (ретенционный), а также инкубация лимфоцитов человека и животных в разных средах с индукцией апоптоза (in vitro).

Животные были разделены на 8 групп.

1 группа (и = 21) - контрольная - интактные крысы, потреблявшие дистиллированную минерализованную воду 150 ррш;

1* группа (п = 6) — интактные крысы, потреблявшие дистиллированную минерализованную воду (150 ррш), у которых производили забор крови для дальнейшей инкубации лимфоцитов в разных средах;

7

2а подгруппа (и = 21) - интактные крысы, потреблявшие дистиллированную минерализованную воду 100 ррт, эвтаназию проводили по 7 животных в начале эксперимента, на 15 и 30 сутки;

26 подгруппа (п = 21) — интактные крысы, потреблявшие дистиллированную минерализованную воду 40 ррт, эвтаназию проводили по 7 животных в начале эксперимента, на 15 и 30 сутки;

3 группа (п = 15) - крысы, потреблявшие дистиллированную минерализованную воду (150 ррт), у которых путем введения аллоксана (в дозе 17 мг/100 г внутрибрюшинно однократно) была создана модель экспериментального сахарного диабета (продукционный первичный механизм развития эндогенной интоксикации), забор крови и органов проводили на 30 сутки;

4 группа (и = 15) - крысы, потреблявшие дистиллированную минерализованную воду с пониженным содержанием дейтерия (40 ррт), у которых была создана модель продукционного механизма развития эндотоксикоза, забор крови и органов проводили на 30 сутки;

5 группа (п = 15) - крысы, потреблявшие дистиллированную минерализованную воду (150 ррт), у которых была создана модель экспериментального хронического абсцесса (резорбционный первичный механизм развития эндогенной интоксикации), забор крови и органов проводили на 15 сутки;

5* группа (и = 6) — крысы, потреблявшие дистиллированную минерализованную воду (150 ррт), у которых была создана модель резорбционного механизма развития эндотоксикоза и производился забор крови для дальнейшей инкубации лимфоцитов в разных средах;

6 группа (л = 15) - крысы, потреблявшие дистиллированную минерализованную воду с пониженным содержанием дейтерия (40 ррт), у которых была создана модель резорбционного механизма развития эндотоксикоза, забор крови и органов проводили на 15 сутки;

7 группа (л = 16) — крысы, потреблявшие дистиллированную минерализованную воду (150 ррт), у которых путем введения водного раствора хлорида кадмия 200 мкг/100 г/сутки была создана модель хронического эндотоксикоза гепаторенального генеза (ретенционный первичный механизм развития эндогенной интоксикации), забор крови и органов проводили на 21 сутки;

8 группа (л = 16) - крысы, потребляющие дистиллированную минерализованную воду с пониженным содержанием дейтерия (40 ррт), у которых была создана модель ретенционного механизма развития эндотоксикоза, забор крови и органов проводили на 21 сутки.

Перед забором биосубстратов животных оглушали в камере для эвтаназии фирмы VetTech с помощью углекислого газа. После чего производили забор крови из желудочков сердца для исследований и выполняли патологоанатомическое вскрытие крыс с визуальным осмотром внутренних органов. После этого осуществляли изучение изотопного (D/H) состава в плазме крови и лиофилизирован-

8

ных органах и определяли показатели прооксидантно-антиоксидантного баланса (спонтанная и Н202-индуцированная хемилюминесценция, суммарная антиокислительная емкость крови, ТБК-реактивные продукты (малоновый диальдегид, диеновые конъюгаты), SH-группы) и функциональной системы детоксикации (молекулы средней и низкой массы, ACT, AJIT, альбумин, билирубин, креатинин).

Воду с пониженным содержанием дейтерия получали на установке, разработанной в Кубанском государственном университете по методике [В.Ю. Фролов и соавт., 2011] с исходной концентрацией дейтерия в получаемой воде 100 ррш и 40 ррт (по дейтерию). Минерализацию полученной воды, производили путем добавления минеральных солей для получения физиологически полноценного минерального состава (минерализация 314-382 мг/л).

Определение изотопного (D/H) состава крови и тканей органов систем детоксикации у лабораторных животных было проведено на базе «Центра коллективного пользования диагностики структур и свойств наноматериалов» ФГБО ВПО КубГУ. Определение концентрации дейтерия в плазме крови - на импульсном ЯМР-спектрометре JEOL JNM-ECA 400MHz [С.Н. Болотин и соавт., 2011]. Определение изотопного состава лиофилизированных органов лабораторных животных проводили на масс-спектрометре «DELTA plus» (Finnigan, Германия) по методике [U. Zimermann, U. Cegla, 1973], в модификации [С.С. Джимак и соавт., 2012].

Оценку прооксидантно-антиоксидантного статуса биологического материала проводили на базе лаборатории кафедры фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России. Люминол-зависимая Н202-индуцированная хемилюминесценция плазмы крови измерялась на хеми-люминотестере ЛТ-1 производства СП «ХОРОС» (г. Ростов- на-Дону) по методике НИИБИ в модификации [И.И. Павлюченко и соавт., 2006]. Определение суммарной антиоксидантной активности (САОА) плазмы крови амперометри-ческим способом проводилось на анализаторе антиоксидантной активности «Яуза-01-AAA», производства ОАО НПО «Химавтоматика» по методу [А.Я. Яшин и соавт., 2003] в модификации [A.A. Басов и соавт., 2007].

Количество свободных SH-групп определяли по методике G.L. Ellman [1959]; определение базального количества ТБК-реактивных продуктов проводили по методике В.Н. Орехович [1977]; определение количества молекул средней и низкой массы (МСиНМ) в эритроцитах и плазме проводили на основании методики C.B. Оболенского [1991]. Биохимические исследования проводили на полуавтоматическом биохимическом анализаторе BioChem SA (USA), используя наборы реактивов High Technology (USA).

Интегральную оценку выраженности эндотоксикоза проводили на основании способа [И.И. Павлюченко и соавт., 2003], основанного на суммарной оценке уровня молекул средней и низкой массы (МСиНМ) и тиобарбитурового числа (ТБЧ) эритроцитов и плазмы, с определением индекса эндогенной инток-

9

сикации (ИЭИ). Интегральную оценку состояния низкомолекулярного звена прооксидантно-антиоксидантной системы проводили по способу [И.И. Павлю-ченко и соавт., 2004], основанному на количественном определении продуктов, реагирующих с ТБК, и тиоловых групп в эритроцитах.

Полученные данные исследований накапливали в таблицах Micrisoft Office Excel 2003. Их статистическую обработку осуществляли методами непараметрической статистики с использованием программного обеспечения «Statistica 6.0 for Windows» фирмы «Stat Soft Inc.». Полученные результаты исследуемых групп после статистической обработки выражали в виде средних значений (М) и ошибки среднего (ш). Сравнение выборок проводилось по непараметрическому критерию Манна-Уитни, с установлением уровня значимости *р < 0,05. Величины средних значений в таблицах указаны в границах М± т.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ОС представляет собой универсальный механизм повреждения тканей организма, в результате действия свободных радикалов и других субстанций, имеющих высокий окислительный потенциал. В клетках постоянно протекают процессы образования и утилизации активных форм кислорода (АФК), синергично работают мембранные системы транспорта различных типов окислителей и восстановителей, что приводит к установлению динамического равновесия между проок-сидантными и антиоксидантными системами [A. Grosicki, В. Kowalski, 2002; Г.Н. Крыжановский, 2002; Н.К. Зенков, Е.Б. Меньшикова, 2004; Ю.А. Владимиров, 2004; T.R. Dean et al., 2007]. При развитии ОС в организме часто имеет место усиление распада биологических субстратов, приводящее к накоплению эндоток-сических субстанций и формированию СЭИ.

Учитывая высокую распространенность СЭИ и ОС в клинической практике, их значительную роль в патогенезе многих заболеваний, участие в формировании возникающих осложнений, которыми нередко обусловлено развитие неблагоприятных исходов, необходима разработка эффективных способов коррекции антиоксидантного потенциала в организме, в том числе нутриционным путем. В связи с этим, экспериментальное изучение динамики функциональной активности прооксидантно-антиоксидантной системы при формировании в организме эндогенной интоксикации с различным первичным механизмом развития (продукционным, резорбционным и ретенционным) расширяет представления о роли нарушений окислительного метаболизма в их патогенезе, а также позволяет изучить эффективность корригирующих мероприятий, осуществляемых с помощью реакций изотопного D/H обмена.

При введении в пищевой рацион животных ВМИС ССД, начиная с 15 суток, происходило достоверное снижение концентрации дейтерия в плазме крови и тканях органов системы детоксикации, наиболее выраженное при употреб-

лении воды с остаточным содержанием дейтерия 40 рргп. Наиболее низкий уровень дейтерия наблюдался в плазме крови (98,2 ррш, т.е. был достоверно ниже исходной величины на 35,9 %) и ткани почки (131,2 ррш - на 13,6 %).

При этом, если в физиологических условиях содержание дейтерия в плазме крови превышало его содержание в тканях органов (градиент D/H «плазма - ткань печени» составлял до 3,9 ррш) , то с введением в питьевой рацион крыс ВМИС ССД, происходило увеличение и изменение направленности изотопного градиента D/H, в сторону повышения его концентрации в тканях. Градиент D/H «плазма — ткань сердца» при использовании воды 100 ррш на 30 день эксперимента составил 26,0 ррш с достижением устойчивого равновесия на 30 день эксперимента. Градиент D/H «плазма — ткань печени», при использовании воды 40 ррш, составил 42,6 ррш с достижением устойчивого равновесия на 30 день эксперимента.

Это связано с небольшой скоростью реакций обмена изотопов водорода в тканях, а также влиянием на него не только воды, но и потребляемой пищи, которая обеспечивает поступление питательных веществ с естественным изотопным D/H составом. [В.И. Лобышев и соавт., 1982; Е.С. Северин, 2003; A.L. Buchachenko et al., 2012; A.A. Киркина с соавт., 2014].

При использовании в пищевом рационе крыс ВМИС ССД 100 и 40 ррш динамическое равновесие в прооксидантно-антиоксидантной системе в интактных группах животных не нарушалось. Однако наблюдалось достоверное (р < 0,05) уменьшение амплитуды вспышки хемилюминесценции на 27,9 % при использовании воды с концентрацией дейтерия 100 ррш. Это свидетельствует об адаптивном снижении интенсивности СРО, без изменения антиоксидантной активности (АОА) плазмы крови. В результате исследования не выявлено повышения уровня эндотоксических субстанций и отрицательного влияния ВМИС ССД на состояние функциональной системы детоксикации. Это позволяет сделать вывод об отсутствии токсического эффекта при ее применении. Кроме того, отмеченное у животных 26 подгруппы достоверное (р < 0,05) снижение ИЭИ до -4,87 % ГК указывает на увеличение функциональной активности детоксицирующей системы.

Для изучения влияния ВМИС ССД на показатели активности прооксидантно-антиоксидантной системы и состояние органов функциональной системы детоксикации при эндогенной интоксикации были созданы экспериментальные модели эндотоксикоза с ретенционным, резорбционным и продукционным первичными механизмами развития.

При моделировании аллоксанового диабета на фоне выраженных метаболических нарушений у крыс группы 3 наблюдалось повышение уровня СРО, более выраженное в плазме крови (ВХЛмакс выросла на 73,2 %, ХЛпл - на 99,3 %), чем в органах (печень - на 32,9 %; почки - на 9,3 %; сердце - на 58,4 %). Это характерно для развития ОС в организме (рис. 1).

У животных с аллоксановым диабетом, не получавших ВМИС ССД, кроме того выявлен значительный дисбаланс в функционировании прооксидантно-

11

антиоксидантной системы. Он характеризовался повышением: количества продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой, в плазме крови на 81,2 %; базального количества продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой, в эритроцитах на 35,7 %; количества продуктов окислительной модификации (Ре2+-индуцированных) в эритроцитах на 64,0 %. В то же время отмечалось снижение САОА на 33,5 % и количества тиоловых групп на 32,1 %, что указывает на уменьшение потенциала низкомолекулярного звена АОС и на существенный дисбаланс в соотношении прооксидантных и антиоксидантных факторов. Это сопровождалось резким увеличением интегрального показателя КОМБэр с 0,08 до 15,51 ОЕА.

У животных, употреблявших ВМИС ССД (группа 4), происходило достоверное снижение уровня СРО. Так по сравнению с группой 3 (животные с агт-локсановым диабетом, не получавшие ВМИС ССД), ХЛ в сердце была ниже на 15,1 %, в почках - на 7,9 %. Отмечалось достоверное снижение ВХЛмакс на 11,9 % и ХЛпл на 11,4 % (рис. 1).

гр

о

3

а ч 8

»Группа3-животные с аллоксан диабетом

Группа4 - животные с аллоксан

диабетом, принимавшие ВМИС ССД

ХЛ (почка) ХЛ (сердце) ВХЛмакс

ХЛпл

Рис. 1. Влияние воды с модифицированным изотопным составом со сниженным содержанием дейтерия на интенсивность процессов евободнорадикального окисления у животных с продукционным первичным механизмом развития эндотоксикоза.

Примечание: ХЛ — хемилюминесценция; ВХЛмакс - максимум вспышки хемилюминесценции; ХЛпл - площадь вспышки хемилюминесценции; * - достоверность различия по сравнению с животными 1 группы (контроль); # - достоверность различия по сравнению с животными 3 группы

При использовании в питьевом рационе ВМИС ССД (группа 4) показатели, отражающие выраженность процессов пероксидации, были снижены по сравнению с животными группы 3 (ТБЧпл на 11,3 %, ТБЧэр на 7,1 %). Кроме того САОА возросла на 11,7 %, что свидетельствует об уменьшении дисбаланса прооксидантных и антиоксидантных факторов у животных с аллоксановым диабетом, получавших воду с пониженным содержанием дейтерия (40 ррт).

Показатель КОМБэр у животных группы 4 был на 15,2 % ниже, чем в группе животных, получавших природную воду 150 ррш, что свидетельствует о вполне определенном протективном эффекте снижения концентрации дейтерия в питьевой воде при аллоксановом диабете. Одновременно наблюдалось уменьшение индекса эндогенной интоксикации в группе крыс, получающих ВМИС ССД, на 27,1 % в сравнении с показателями группы крыс с аллоксановым диабетом, получавших воду 150 ррт, что указывает на повышение функциональной активности органов детоксицирующей системы. Указанные эффекты позволяют рекомендовать использование реакций изотопного обмена для комплексной коррекции нарушений метаболизма, связанных с недостаточностью инсулина.

При моделировании хронического эндотоксикоза (ХЭТ) резорбционного генеза наблюдалось увеличение XJ1 тканей внутренних органов (группа 5) по сравнению с интактными животными: показатель XJ1 печени был увеличен на 23,3 %, почек — на 7,4 % (рис. 2). Наиболее существенные изменения в печени свидетельствуют об ее активном участии в обезвреживании токсических субстанций, образующихся при гнойно-воспалительных процессах. В результате этого в гепатоцитах происходит увеличение образования АФК и формирование ОС на тканевом и органном уровнях. Выявлено увеличение ВХЛмакс на 53,4 % и ХЛпл на 84,5 %. Уменьшение активности низкомолекулярного звена АОС подтверждалось снижением САОА на 23,8 %, а также тиоловых групп на 14,6 %.

Группа 1 - контроль I Группа 5 I Группа б

ХЛ (печень) ХЛ (почка) ВХЛмакс ХЛпл

Рис. 2. Влияние воды с модифицированным изотопным составом со сниженным содержанием дейтерия на интенсивность процессов свободнорадикального окисления у животных с резорбционным первичным механизмом развития эндотоксикоза.

Примечание: ХЛ - хемилюминесценция: ВХЛмакс - максимум вспышки хемилюминесценции; ХЛпл — площадь вспышки хемилюминесценции; * - достоверность различия по сравнению с животными 1 группы (контроль); # - достоверность различия по сравнению с животными 5 группы

В то время как у животных (группа 6), получавших ВМИС ССД (40 ррт), значения XJ1 были достоверно (р < 0,05) ниже. Так уровень XJI печени был увеличен только на 10,0 %, а ВХЛмакс и ХЛпл плазмы на 36,6 % и 60,7 % соответственно по сравнению с контролем (рис. 2).

Увеличение потенциала низкомолекулярного звена АОС подтверждалось увеличением С АО А на 19,9 % по сравнению с животными 5 группы.

В целом потребление ВМИС ССД у животных 6 группы приводит к уменьшению интегральных показателей в большей степени ИЭИ (на 36,8 %), который был достоверно (р < 0,05) повышен у животных 5 группы (получавшей воду 150 ррт) до 90,59 % ГК. КОМБэр в 6 группе животных (40 ррт) также достоверно (р < 0,05) снижался, в сравнении с 5 группой (150 ррт), на 10,6 %, что подчеркивает тесную взаимосвязь прооксидантно-антиоксидантного и детоксицирующего звеньев системы неспецифической защиты [В.И. Коржов и соавт. 2007; В.В. Ко-стюшов и соавт. 2010; Ю.И. Губский и соавт. 2005; L.P. Liang et al., 2008].

У крыс с ретенционным механизмом эндотоксикоза за счет введения в пищевой рацион хлорида кадмия наблюдалось развитие токсического повреждения органов функциональной системы детоксикации. При этом выявлено значительное нарушение функции печени. В 7 группе животных, получавших воду 150 ррт активность AJ1T достоверно (р < 0,05) повысилась на 176,6 % и ACT - на 105,2 % в сравнении с контролем, содержание билирубина в крови также было на 123,9 % больше, чем у интактных животных. В то же время у животных 8 группы, получавших воду 40 ррт, активность цитолитических ферментов в сравнении с животными группы 7 была достоверно (р < 0,05) менее выражена: AJIT - на 45,7 % и ACT на 18,3 %, содержание билирубина ниже на 19,6 %. Это свидетельствует о мембранопротективном эффекте ВМИС ССД (40 ррт) при включении ее в питьевой рацион.

Нефротоксическое действие Cd2+ вызывало снижение скорости клубочко-вой фильтрации, что подтверждалось достоверным (р < 0,05) повышением уровня креатинина в плазме крови крыс, получавших воду 150 ррт, на 72,3 %, а у получавших воду 40 ррт - на 18,1 %.

Значительное превышение образования токсических продуктов над их элиминацией подтверждалось достоверным (р < 0,05) увеличением у животных 7 и 8 группы количества МСиНМ в плазме на 47,7 % и 28,7 % соответственно. При анализе показателей АОС, был выявлен значительный дисбаланс в сторону преобладания прооксидантных факторов. В результате токсического воздействия на организм накопившихся патологических субстратов наблюдалось развитие ОС и усиление мембранодеструктивных процессов, что проявлялось достоверным (р < 0,05) повышением у животных 7 группы (вода 150 ррт) ТБЧ плазмы на 78,1 %, индуцированного ТБЧ эритроцитов на 75,0 % (рис. 3). У животных, потреблявших ВМИС ССД (группа 8), наблюдалось достоверное (р < 0,05) уменьшение содержания продуктов окислительной модификации в плазме крови на 19,65 % и достоверное (р < 0,05) уменьшение количества продуктов окислительной модификации на клеточном уровне (ТБЧэр Ре2+-индуцированных) на 13,8 % (рис. 3).

%

180 170 160 150 140 130 120

-а но 8

I Группа 1 - контроль

Группа 7 I Группа 8

МСиНМпл

ТБЧпл ТБЧэр.-инд

Рис. 3. Изменение ирооксидантных факторов и эндотоксических субстанций в крови крыс с гепаторенальным эндотоксикозом при потреблении воды с модифицированным изотопным составом со сниженным содержанием дейтерия.

Примечание: МСиНМ - молекулы средней и низкой массы;

ТБЧпл - тиобарбитуровое число плазмы;

ТБЧэр.-инд. - тиобарбитуровое число эритроцитов индуцированное: * - достоверность различия по сравнению с животными 1 группы (контроль); # - достоверность различия по сравнению с животными 7 группы

Об интенсификации реакций СРО свидетельствовало и повышение ХЛпл плазмы крови у животных 7 группы на 99,2 %, ВХЛмакс — на 50,0 %. Также отмечено повышение уровня прооксидантной нагрузки тканей органов: так в печени у животных 7 группы показатель ХЛ был достоверно (р < 0,05) выше на 39,6 %, в сердце — на 83,7 % по сравнению с контролем. У животных группы 8, употреблявших ВМИС ССД (40 ррт), наблюдалось достоверное (р < 0,05) снижение ХЛпл плазмы крови на 14,8 %, ВХЛмакс - на 8,9 %, ХЛ сердца на 34,2 %, печени — на 20,5 % по сравнению с животными с ретенционным первичным механизмом эндотоксикоза, употреблявших воду 150 ррт (рис. 4).

Снижение функциональной активности СНЗ подтверждалось достоверным (р < 0,05) уменьшением САОА у животных группы 7 на 33,6 % и количества тио-ловых групп на 43,5 %. Кроме того, выявлено протективное влияние ВМИС ССД и на низкомолекулярное звено АОС: отмечено достоверное {р < 0,05) повышение САОА на 28,8 % и увеличение количества БН-групп на 13,6 % (рис. 5).

Установлено, что наибольшее корригирующее влияние ВМИС ССД отмечено при нарушениях в работе прооксидантно-антиоксидантной системы. В 8 группе животных, получавших воду 40 ррт, КОМБэр был достоверно (р<0,05) ниже на 26,6 %, чем в группе животных, получавших воду 150 ррт. Это превосходило интенсивность корригирующего воздействия ВМИС ССД при эндо-токсикозе с продукционным (на 15,1 %) и резорбционным первичным механизмом развития (на 10,6 %).

ХЛпл

ВХЛмакс ХЛ (сердце) ХЛ (печень)

Группа 7 ■ Группа 8

Рис. 4. Влияние воды с модифицированным изотопным составом со сниженным содержанием дейтерия на интенсивность процессов свободнорадикального окисления у животных с эндотоксикозом гепаторенального генеза.

Примечание: ХЛ - хемилюминесценция; ВХЛмакс - максимум вспышки хемилюминесценции; ХЛпл - площадь вспышки хемилюминесценции; * — достоверность различия по сравнению с животными 1группьт (контроль); # - достоверность различия по сравнению с животными 7 группы

■ Группа 1 - контроль

■ Группа 7

■ Группа 8

С АОА

БН-группы

Рис. 5. Влияние воды с модифицированным изотопным составом со сниженным содержанием дейтерия на низкомолекулярное звено антиоксидантной системы у животных с эндотоксикозом гепаторенального генеза.

Примечание: САОА - суммарная антиоксидантная активность; * - достоверность различия по сравнению с животными 1 группы (контроль); # - достоверность различия по сравнению с животными 7 группы

В достаточной мере выражено корригирующее воздействие питьевого рациона с ВМИС ССД (40 ррт) и на показатели функциональной системы деток-сикации. При этом выявлено достоверное (р < 0,05) уменьшение ИЭИ на 32,8 % у животных в группе 8, получавшей воду 40 ррт, в сравнении с группой 7, получавшей воду 150 ррт.

Таким образом, следует отметить, что изменение интегральных показателей продемонстрировало более существенное влияние реакций изотопного обмена на состояние функциональной системы детоксикации при резорбционном первичном механизме развития эндотоксикоза (ИЭИ снижался на 36,8 %) и эн-дотоксикозе гепаторенального генеза (ИЭИ снижался на 32,8 %).

Изменения изотопного (Э\Н) состава в плазме крови и тканях органов у животных, принимавших ВМИС ССД (группы 4, 6, 8) приводило к достоверному (р < 0,05) уменьшению интенсивности процессов СРО в результате усиления функциональной активности системы неспецифической защиты. В результате реакций изотопного обмена дейтерия на протай в активных и аллостерических центрах ферментов уменьшается энергия активации субстрат-ферментных комплексов в катализируемых ими реакциях. Изменяются термодинамические и термокинетические характеристики макромолекул, что приводит к количественному и структурному изменению гидратной оболочки макромолекул и субмолекулярных образований [М. Бендер с соавт., 1987].

Кроме того, использование воды с пониженным содержанием дейтерия в питьевом рационе крыс позволяет повысить функциональную активность анти-оксидантного звена системы неспецифической защиты организма, приводя, в том числе, и к росту антиоксидантной активности низкомолекулярных компонентов системы антирадикальной зашиты. Это может быть обусловлено более быстрой заменой легкодиссоциирующих атомов водорода в функциональных группах (-ОН, -БН и других) соединений с антиоксидантной направленностью [М.И. Равич-Щербо 1968; С.И. Лебедев 1988.]. Все это в дальнейшем ведет к уменьшению повреждающего действия процессов свободнорадикапьного окисления, интенсификация которых была отмечена в различной степени у всех экспериментальных групп.

Одним из дополнительных фактов, подтверждающих способность различных концентраций дейтерия влиять на процессы репарации биомолекул, является более выраженная способность иммунокомпетентных клеток, при инкубации в средах с пониженным содержанием дейтерия, восстанавливать поврежденные участки молекулы ДНК, что подтверждается достоверным (р < 0,05) уменьшением количества однонитевых разрывов молекулы ДНК в лимфоцитах при эндотокси-козе с резорбционным первичным механизмом развития с 86,2 % ± 6,9 % до 43,5 % ± 3,6 % после их инкубации в ВМИС ССД (40 ррт).

Кроме того, при инкубации лимфоцитов, выделенных из крови здоровых животных, в присутствии ФНО-а выявлено прогрессивное накопление однони-

тевых разрывов ДНК в клетках 26,4 ± 2,8 %, которое достоверно (р < 0,05) снижалось до 3,1 % ± 0,8 % при инкубации в течение 16 часов на воде с содержанием дейтерия 40 рргп. Таким образом, в ходе выполнения эксперимента показано, что реакции изотопного D/H обмена не только уменьшают повреждающее действие АФК на молекулу ДНК при формировании окислительного стресса [U. Nair et al., 2007], но и активируют ДНК-репарирующие системы иммуно-компетентных клеток, предотвращая их неконтролируемый массовый апоптоз.

При изучении влияния ВМИС ССД на количество однонитевых разрывов ДНК в лимфоцитах, полученных из крови людей с врожденными пороками развития челюстно-лицевой области, обнаружено уменьшение количества однонитевых разрывов ДНК по сравнению с исходным с 60,7 ± 5,2 % до 38,1 ± 2,3 % при инкубации лимфоцитов в ВМИС с содержанием дейтерия 40 рргп в течение 16 часов. Инкубация лимфоцитов здоровых людей в течение 16 часов в ВМИС ССД в присутствии ФНО-а приводила к прогрессивному накоплению однонитевых разрывов ДНК в клетках до 19,7 ± 2,9 % с последующим снижением до 2,9 % ± 0,4 %.

Необходимо отметить, что нуклеиновые кислоты обладают высокой способностью к сольватации в результате чего происходит изотопный обмен между диссонирующими группами в макромолекуле и ее гидратационной оболочке. Это приводит к уменьшению энергии активации и изменению скорости внутримолекулярных конформационных перестроек (фермент-субстрат, фермент-кофактор). В результате сокращается время отдельных этапов биокаталитических превращений или ускоряется восстановление фермента в активную форму при окончании отдельного каталитического цикла, что приводит к повышению активности биохимических процессов [М. Бендер и соавт., 1987; АЛ. Бучаченко, 2007]. Проведенные исследования подтверждают тот факт, что вода с пониженным содержанием дейтерия активирует репаративные системы клеток, тем самым, предотвращая их апоптоз.

Таким образом, в результате проведенных исследований выявлено положительное корригирующее влияние ВМИС ССД на состояние прооксидантно-антиоксидантной и детоксицирующих систем организма лабораторных животных в условиях эндогенной интоксикации с разным первичным механизмом возникновения, что проявлялось в увеличении активности экстрацеллюлярных и интрацел-люлярных мембрано- и цитопротективных механизмов, снижении накопления эн-дотоксических субстанций в плазме крови. Данные эффекты были достигнуты на фоне уменьшения содержания дейтерия относительно его природного уровня в тканях и биологических жидкостях, что позволяет рекомендовать использование реакций изотопного обмена для комплексной коррекции нарушений метаболизма, связанных с синдромом эндогенной интоксикации различного генеза. Кроме того, активизация репаративных процессов в клетке открывает перспективы для использования ВМИС ССД с целью коррекции повреждений на генетическом уровне, а также для предотвращения неконтролируемой массовой гибели имму-нокомпетентных клеток и повышения резистентности организма.

18

выводы

1. Наиболее существенное уменьшение содержания дейтерия на 5,4-10,3 % в тканях внутренних органов функциональной системы детоксикации происходит в первые 15 дней после введения в питьевой рацион воды с модифицированным изотопным составом и сниженным содержанием дейтерия (40 ррт). Наименьшая его концентрация отмечена в ткани почки (136,3 ррт), что отражает наиболее высокую интенсивность реакций изотопного D\H обмена.

2. Окислительный стресс более выражен у животных с первичным продукционным (аллоксановый диабет) и ретенционным механизмом развития эндоток-сикоза. Это подтверждалось более значительным достоверным (р < 0,05) повышением содержания ТБК-активных продуктов (на 81,2 % и 78,1 %), максимума (на 73,1 % и 50,0 %) и площади вспышки хемилюминесценции (на 99,3 % и 99,2 %), снижением суммарной антиокислительной активности (на 33,5 % и 33,6 %) и содержания SH-групп (на 32,1 % и 43,5 %). На тканевом уровне наибольшая интенсивность свободнорадикального окисления отмечена у животных при развитии эндотоксикоза с первичным ретенционным механизмом (гепаторенальная недостаточность).

3. Влияние воды с модифицированным изотопным составом и сниженным содержанием дейтерия на прооксидантно-антиоксидантное и детоксицирующее звенья системы неспецифической защиты в физиологических условиях характеризуется преобладанием антирадикального эффекта (вспышка хемилюминесценции достоверно (р < 0,05) уменьшалась на 27,9 %) при использовании воды с концентрацией дейтерия 100 ррт. Вода с концентрацией дейтерия 40 ррт, кроме этого, еще оказывала более выраженное стимулирующее влияние на органы функциональной системы детоксикации (показатель ИЭИ достоверно (р < 0,05) снижается до —4,87 % ГК без уменьшения АОА плазмы крови).

4. Применение воды с модифицированным изотопным D/H составом с пониженным содержанием дейтерия у крыс (40 ррт) при моделировании эндотоксикоза позволяет повысить антиоксидантный потенциал в большей мере при ретенционном первичном механизме его развития за счет достоверного (р < 0,05) повышения суммарной антиокислительной активности на 28,8 % и содержания SH-групп на 13,6 %, и в наименьшей степени — при продукционном первичном механизме развития (суммарная антиокислительная активность повысилась на 11,8 % и содержание SH-групп на 4,1 %). При этом достоверно уменьшалась выраженность дисбаланса низкомолекулярного звена проокси-дантно-антиоксидантной системы в крови - наиболее значительно при ретенционном первичном механизме развития эндотоксикоза (коэффициент окислительной модификации биомолекул эритроцитов достоверно (р < 0,05) снижался на 26,6 %) и наименее значимо при резорбционном первичном механизме развития эндотоксикоза (коэффициент достоверно (р < 0,05) снижался на 10,6 %).

5. Потребление воды с модифицированным изотопным D/H составом с пониженным содержанием дейтерия у крыс в объеме от 40,9 до 63,6 миллилитров на килограмм массы тела является достаточным для достижения устойчивого изотопного равновесия (D «ткань-плазма»), которое позволяет повысить активность функциональных систем неспецифической защиты организма.

6. Вода с модифицированным изотопным D/H составом с пониженным содержанием дейтерия, активируя репаративные системы клеток, тем самым, уменьшает количество однонитевых разрывов ДНК лимфоцитов человека и животных, предотвращая их апоптоз (in vitro).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Проведенное исследование свидетельствует о целесообразности использования в пищевом рационе воды с пониженным содержанием дейтерия для нутриционной коррекции показателей прооксидантно-антиоксидантной системы и функциональной системы детоксикации организма в условиях эндогенной интоксикации с различным первичным механизмом развития.

2. Использование в пищевом рационе воды с пониженным содержанием дейтерия позволит снизить неконтролируемый апоптоз иммунокомпетентных клеток, повысить резистентность организма.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Барышева, Е.В. Влияние воды с пониженным содержанием дейтерия на показатели прооксидантно-антиоксидантной системы у лабораторных животных / Е.В. Барышева, A.A. Басов, С.Н. Болотин, С.С. Джимак, С.Р. Федосов, М.А. Долгов, К.А. Попов, И.О. Гисс // Материалы IV Международной конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины». - Ростов-на-Дону, 2011.-С. 136.

2. Барышева, Е.В. О влиянии воды с пониженным содержанием дейтерия на показатели прооксидантно-антиоксидантной системы у лабораторных животных / М.Г. Барышев, Е.В. Барышева, A.A. Басов, С.Н. Болотин, С.С. Джимак, М.А. Долгов, С.Р. Федосов // Материалы XXIV Всероссийской научно-технической конференции студентов, молодых ученых и специалистов «Биотехнические, медицинские и экологические системы и комплексы». - Рязань, 2012.-С. 143-149.

3. Барышева, Е.В. Оценка антирадикальной активности воды с модифицированным изотопным составом / О.М. Арцыбашева, Е.В. Барышева, A.A. Басов, С.С. Джимак // Труды XXI Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии». -Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 2013. - С. 205-206.

4. Барышева, Е.В. Изменение системы неспецифической защиты организма у лабораторных животных при введении в пищевой рацион воды с мо-

20

дифицированным изотопным составом / Р.В. Власов, С.С. Джимак, Е.В. Бары-шева, Д.И. Шашков // Материалы XI научно-практической конференции молодых ученых и студентов юга России «Медицинская наука и здравоохранение» -Краснодар, 2013.- С. 16-18.

5.* Барышева, Е.В. Влияние воды с модифицированным изотопным составом на метаболические показатели у экспериментальных животных при кадмиевой интоксикации / Е.В. Барышева, И.М. Быков, О.М. Арцыбашева, А.А Басов // Вопросы питания. - 2014. - Т. 83. - № 3. - С. 253-254.

6.* Барышева, Е.В. Воздействие воды со сниженным содержанием дейтерия на организм лабораторных животных при различном функциональном состоянии неспецифических защитных систем / А.Б. Лисицын, М.Г. Барышев, A.A. Басов, Е.В. Барышева, И.М. Быков, A.C. Дыдыкин, Е.Е. Текуцкая, A.A. Тимаков, Л.В. Федулова, И.М. Чернуха, С.С. Джимак // Биофизика. -2014. - Т. 59. - № 4. - С. 757-765.

7* Барышева, Е.В. Изучение эффективности метаболической коррекции свободнорадикального окисления с помощью реакций изотопного обмена в организме лабораторных животных при интоксикации, вызванной введением в пищевой рацион хлорида кадмия / Е.В. Барышева, А.Х. Каде, A.A. Басов, О.М. Арцыбашева // Вестник новых медицинских технологий. - 2014. - Т. 21. -№3.-С. 58-62.

8. Barysheva, E.V. Changes of oxidation during use the food diet with deuterium depleted water in laboratory animals with purulent inflammation / O.M. Artsybasheva, E.V. Barysheva, D.I. Shashkov, R.V. Vlasov, E.E. Tekutskaya // Russian Open Medical Journal. - 2014. - V. 3. — Is. 2. - P. 1-6.

9.* Барышева, Е.В. Влияние воды с пониженным содержанием дейтерия на состояние ДНК лимфоцитов человека в норме и патологии / Е.Е. Текуцкая, Е.В. Барышева, А.Х. Каде // Современные проблемы науки и образования. -2014. -№ 6. -URL : www.science-education.ru/120-1544.

10. Барышева, Е.В. О возможности коррекции окислительного стресса, вызванного введением в пищевой рацион лабораторных животных хлорида кадмия с помощью реакций изотопного D/H обмена / Е.В. Барышева, A.A. Басов, О.М. Арцыбашева// Евразийский Союз Ученых. -2015. -№ 3.- С. 8-11.

11 .* Барышева, Е.В. Изменение показателей прооксидантно-антиоксидантной системы при снижении концентрации дейтерия в организме лабораторных животных с аллоксановым диабетом / Е.В. Барышева // Фундаментальные исследования. - 2015. - № 1-3. - С. 457-461.

12. Барышева, Е.В. Состояние прооксидантно-антиоксидантной системы у крыс при моделировании и коррекции эндотоксикоза различного генеза / Е.В. Барышева // Журнал фундаментальной медицины и биологии. - 2015. -№ 1,-С. 21-30.

13. Барышева, Е.В. Воздействие воды со сниженным содержанием дейтерия на организм лабораторных животных при эндотоксикозе / Е.В. Барышева,

21

С.С. Джимак, О.М. Арцыбашева, А.А. Басов // Труды XXIII Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии». - Крым, Ялта-Гурзуф, 2-12 июня 2015 г. - С. 49-53.

* - опубликовано в журналах, входящих в перечень изданий, рекомендуемых ВАК РФ для опубликования материалов докторских и кандидатских диссертаций.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АОА - антиоксидантная активность АОС - антиоксидантная система АФК - активные формы кислорода

ВМИС ССД - вода с модифицированным изотопным составом со сниженным

содержанием дейтерия ВХЛмякс - максимум вспышки хемилюминесценции ГК - гиперкатаболизм ИЭИ - индекс эндогенной интоксикации

КОМБэр - коэффициент окислительной модификации биомолекул эритроцитов

МСиНМпл — молекулы средней и низкой массы в плазме

МСиНМэр — молекулы средней и низкой массы эритроцитов

ОЕА - окислительные единицы активности

ОС — окислительный стресс

САОА - суммарная антиоксидантная активность

СР - свободные радикалы

СРО - свободнорадикальное окисление

СЭИ - синдром эндогенной интоксикации

ТБК - тиобарбитуровая кислота

ТБЧпл - тиобарбитуровое число плазмы

ТБЧэр - тиобарбитуровое число эритроцитов

ТБЧэр .-инд. — тиобарбитуровое число эритроцитов индуцированное

ФНО-а — фактор некроза опухоли а

ХЛпл - площадь хемилюминесценции

ХЭТ - хронический эндотоксикоз

ЯМР- ядерный магнитный резонанс

БАРЫШЕВА Екатерина Владимировна

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Сдано в набор 16.07.15. Подписано в печать 16.07.15. Формат 60x84 1/1Б Бумага офсетная. Печать офсетная. Гарнитура Times. Усл. печ. 1,0. Заказ 1417. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ООО «Издательский Дом-Юг» 350072, г. Краснодар, ул. Московская, 2, корп. «В», оф. В-122, тел. +7(918)41-50-571 http://id-yug.com oIfomenko@yandex.ru