Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Влияние В-лимфоцитов различного органного происхождения и продуцируемых ими медиаторов на образование кроветворных колоний и направление дифференцировки фракции кроветворных стволовых клеток костного мозга

мшшсОДРсОДо здрллоохрл1шшшгосоип®гойФндЕРлцш1 институт иммунологам

На правах рукописи

ГУСЁ11Л Олм а ЛнприаНовка

влияние в-лимфоцитои различного органного происхождения и продуцируемых ими медиаторов па образование кроветворных колоний и направление дишерешщговки фракции кроветворных стволовых клеток костного мозга.

14.00.36, -'аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени канлидата биологических наук

Москва, 1993

/О-*

//>'

(✓v ■

' л

БИБЛИОТЕКА ' т •

Раоота выполнена в Институте иммунологи» Министерств» здрааоохраисния РФ

; Научныйруководите ль: ' доктор биологических наук В.М. Мшшсо •. Н а у ч и ы й к о н с у л ь т а н т: шдшш; АЛИ РФ. профессор, дретермедишшем« тук АЛ. Ярилип

О ф и ц и а л ьп ы е оп и о л с и т ы:

члеш-корр. ЛЕИ РФ, профессор, {доктор мелчщшсии наук ИМ. Земскоа профессор, доктор биолошнеешх шус А.М. Повсрешшй

Ведущая организация - Гематологический наутыЛ центр РЛМТ1

Защита диссертации состриться «,.,»......................... 1993 г,

в.... часоз на заседании спгшшшзлроиишого совеч-а Д074.С9.01.при Институте иммунологии Минздрава РФ 115478, Мосоа, Каширскос шоссе, 24, корп.2.

С диссертацией иоапюоз11агоы1гп£я в библиотеке института.

Автореферат разослан «.....»'................199 Г.

Ученый секретарь

специализированного совета,

доктор медицинских наук Л.С. Сеслздниа

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Кроветворение, являющееся важнейшим физиологическим процессом, чувствительно к воздействию разнообразных повреждающих фактора, в частности, облучения. Его нарушение лежит в основе многочисленных наследственных и приобретенных заболеваний. Поэтому изучение регуляции кроветворения в норме и патологии представляет актуальную проблему. Существенное регулнториос действие па функционирование регул яторных клеток оказывает система иммунитета. Установлено, что лимфоциты, взаимодействуя с кроветворными стволовыми клетками (КСК) (Р.В.Петров, Л.С. Ссславина, 1967), инактивируют генетически чужеродные КСК (Р.В.Петров, 1969, 1972, 1986, Р.М.Хаитов, 1972, П.М.Мапько и пр., 1978,1983) и изменяют характер цшрфереипировки генетически тождественных (В.М.Мапько 1987, Ii.II.Швеи 1979, У.Шйтига е1.а|. ,1973).

Многочисленными исследованями, выполненными с использованием различных экспериментальных систем показано, что процессы пролиферации и ди<р<рерспцировки КСК находится иод контролем Т-систсмы иммунитета (П.М.Мапько и цр.,1975,1983, Р.В.Петров и пр., 1976,1979, А.МЛовсренныЯ и др., 1978, БЛ^ЬагЫз сЫ.,1978, ЛЛ.Ярилин и др., 1984.). Установлено такасс, что в регуляции этих процессов необходимы В-лимсрошгш, выполняющие вспомогательную (хелпериую) функцию по отношению с Т-клеткам. 1$ отсутствие В-лим<роцитов как ш[активирующая, так и дифференцирующая способность 'Г-лимфошттоз резко снижается (В.М.Манько и др.,. 1978,1987,1991). Разделение популяции Т-лимсроцитов методом препаративного электросрореза позволило обнаружить две фракции Т-клсток, одна из которых' оказывает влияние на КСК без иомоши В-лимфощггов, функционирование другой требует присутствие В-хслнсров (Р.В.Петров и пр.,1983, В.ММаиько и др.,1987,1991).

Значимость вспомогательного действия В-лим<роцитов в регуляции функций КСК Т-лимфошгтами, а также малая изученность свойств В-хелперол и особенностей их функционирования, включая взаимодействие с 'Г-клетсами разных стадия созревания, обосновали необходимость проведения данной экспериментальной работы и определяют се. актуальность.

Цель и запачи иссдснокчщя. Цель исследования состояла в изучении регуляторного влияния В-лимфошпо» различного органного происхождения и вырабатываемых ими медиаторов 1и образование

кроветворных колоний и направление ци<{хрсреицировки КСК костного мозга СИНГСНЦЫХ мышей.

О соответствии с целью были определены следующие задачи:

- получить обогащенные популяции, В-лимфоиитов костного моли, лимфатических узлов и селезенки;

- изучить влияние В-клетос различной органной локализации ш колописобразуюшую способность <рракции КСК костного мозга в организме легально облученного сингенного и несингенного реципиента:

- провести сравнительное изучение влияния I1TJ1 на сингснныс и нссипгеиныс КСК;

- определить влияние В-лимфошпов различной органной локализации на взаимодействие КСК и ПТЛ;

- оценить роль гуморальных <ракгоров. секрет ирусмих В-лим<роцитами разного органного происхождения, в процессах пролиферации и дшр<рере нцировки КСК;

- изучить влияние продуктов клеток мышиной мнеломы Х63. Ag8,653 (Х-653) и гибридом, полученных на ее основе и имевших в качестве второго родителя И-лммфоциты различной оргашюй локализации на процесс колонисобриовапин. ч

Изучит новизна. работы. Впервые показано, что формирование кроветворных колоний а селезенке летально облученных реципиентов стволовыми клетками костного мозга индуцируется под влиянием келперного действия • костномозговых IÍ-лимфоцитов, аналогичною действию Ш'Л, Впервые обнаружено, что помимо хелнерного пействия В-jíiiMíf/ouinu костного мозга проявляют контрсумрессорпую активность, отменяющую тормозящее действие костномозговых В-сунрессоров на сингенпые КСК. Впервые установлено, что В-лим<роиигы разного органного происхождения характеризуются различной регуляторной активностью по агиошшию к сингенным КСК. В отличие от В-лим<роцитоа костного мозга и лимфатических узлов, проявляющих разный уровень хелиерной, супрсссориой и контрсулрессорной активности, Н-лимфониты селезенки характеризуются только супрсссориой активностью. В-лимфошпы разного органного происхождения опосредуют проявляемые регуляторпые пункции через вырабатываемые ими гуморальные факторы.

Установлено, что ПТЛ нроявляхуг хслпсрн)ю пункцию но отношению к КСК не только к сингенным, но и аллогенным. фракции ПТЛ (SC-14) содержит клетки фенотипа СШЧЛ'М+И.'ЗК*.

Практическая значимость. Работа является исследованием в области фундаментальной иммунологии, обеспечиваемым более полное понимание механизмов регуляции кроветворения "клетками системы иммунитета на уровне КСК-иснтральных клеток кроветворной системы и субпопуляций лимфоцитов • центральных клеток системы иммунитета. Установление возможности использования субпопуляиий В-лимфопитов и ГП'Л, а также вырабатываемых ими гуморальных факторов в регуляции гемопозза создаст необходимые основы для разработки подходов к коррекции нарушений процесса кроветворения.

1. В-лимфоцкты различного органного происхождения при взаимодействии с сингсгшыми КСК влияют на их способность формировать колонии в селезенке скитами* облученных реципиентов. В-клетки костного мозга и лимфатических узлов стимулируют колониеобразование при взаимодействии с КСК и тормозят его при взаимодействии со смесью КСК и 1Ш1, В-лимфоциты селезенки при взаимодействии с цапкой клеточной смесью проявляют резко выраженпог супрсссорное действие.

2. В-клстки разного органного происхождения обладают контрсупрессорной активностью, проявляющейся после их удаления из суспензии клеток, взаимодействующих с КСК и 1ГТЛ.

3. При взаимодействии с иссиигешшми КСК хелперпый эффект В-лимфоцитов костного мозга и лимфатических узлов значительно снижается, но усиливается их супрсссорное действие при взаимодействии со смесью КСК и П'Ш. Эффект мало зависит от сипгеник ИТ Л с регуляторными В-слетками. .

, 4. Хслпсрнос действие В-клетох костного мозга и лимфатических узлов, а также супрессоронос действие В-клеток селезенки на колониеобразование опосредуется сскретирусмыми ими гуморальными факторами.

Апробация раУуугы. Основные положения работы обсуждены на конференции молодых ученых (Институт иммунологии, Москва, ! 9*321) и изложены в 4-х публикациях: 3-х журнальных статьях и 1-х тезисах докладов.

Объем и структура пигскрпнпщ. Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, изложенных в 4-х главах, обсуждения ,7 выеодов и указателя литературы, оключающего 149 работ, в том числе 71 отчестпснных авторов. Диссертация иллюстрирована 14 рисунками и 12 таблицами.

МАТЕРИАЛЫ It МЕТОДЫ.

U работе использовали мышей лшшЛ С1!Д, C57UIV6J и гибриды (СВА х CS7IIL/6J)I'i обоего иола массой 18-20 г из питомников "Столбовая" РАМП и "Центральный" РАЛ.

Ашгисыворотку к IgM и IgG получали иммунизацией кроликов мышиными иммуноглобулинами. Антисыворотки (АС) к антигенам (АГ) ТЬу-1 (маркер Т-клеток) и SC-1( маркер 1Ш1) получали иммунизацией ■ кроликов головным мозгом мышей с нос л снующим истощением клетками мышиной печени, а затем либо клетками костного мозга, либо тимоцитами мышей соответственно. Из полученных АС выделяли фракцию IgG с помощью трехкратного высаливания (N1(4)2804 30% насыщения. Поверхностные маркеры клеток определяли с помощью специфических АС с использованием иммунскрлуорссцентного и комнлсментзааисимого шпотоксического тестов. Для этих же целей применяли моноклоиальные антитела ( мопЛТ) к антигенам: L3T4, Lyt-2 и Thy-1,2 (фирма "Ikctca Dickinson", к рецептору для 11.-21! (гибридома 7Д4, Институт канцерогенеза. Москва) и СЦЗ ( гибридома G4).

фракционирование клеток костного мозга осуществляли в 3 этапа: 1. разделение методом испиш а па чашках, покрытых антителами (AT) к fg мыши; 2. разделение [¿"-фракции методом пенниша на чашках, покрытых • А'Г к АГ' Ь'С-1; 3. дополнительное удаление '1Ъу-Ги SC-l+-клеток из Ig+ и ig'SC-i" ерракций методом лизиса с помощью А'!' к названным ЛГ и комплемента. П результате получали 3 фракции клеток: 1£+(В-клетки), ' j£\SC-l+(irn[) и Ig'SC-lThy-Г (смесь клеток, содержания КС К).

Жизнеспособность к'лскж во все* полученных фракциях составляла 9095%.

Принципиальная схема опытов пренс гавлена на рис.1.

II опытах получали вышеуказанные фракции клеток, а также Ig+-фракции клеток селезенки и лимфатических узлов. Эти клетки ( в от целы i ости или в различных комбинациях) трансплантировали реципиентам, через 24 ч после их 7-06лучения (

в позе 8.5 Гр.

Количество кроветворных колоний а селезенке реципиентов подсчитывали на 9-е сутки, используя метод Till и McCuiiocb (1961). Дозы введения клеток на мышь рассчитывали в соответствии с их выходом а процессе фракционировании 10^ клеток костного мозга и составляли: шш М-клс'юк -4-5x104 . дли ШИ - 3-4x104 , дли КСК - 2-ЗхЮ4. Для того чтобы показать, <гго зарегистрированные нами эффекты связаны с действием Ц-Лимфопитов. последние обрабатывали АС к АГ МШ.А (Институт микробиологии и

-93

о

Э §

с

3 §

э

о г

со г

о 5.

с»

5

£ о

-I СО со

1 р о + ЛЛ + I

5 ¿1

I

<5

3 с

£

1 п>

1»

о т :>

8 ь

го ы <о

I §

о

5

I

»—4

Г

3 +

ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ КЛЕТОК

и—« Ь—I Г Г, (Г\

(ГО «Эк «О. >Ц о -+ + + I III

ТРАНСПЛАНТАЦИЯ КЛЕТОК РЕЦИПИЕНТАМ

со 2 л'

2 + >

X

5

о

—I

сл

3 +1

со

2 ++

X £

о т

А

со

о

X

«о. 2

8

+

со о

р; 2

5

•со о

£ ■я

¿Г

СО

2 + '

<л О

со

о

|> |> > >

ч /ч <3 (Ч 14 .< о 14 1^5

<5Ь <23>

еэ

е£2> СО

умет числа колонии и характера их диФФеренцировки

И

а а я

О"

5

о •

Е и

а

а

5?

о

о р<

т

ь

эпидемиологии им. Г.Н.Ггбрцчсвского, Москва) из расчета 1 мл сыворотки в рабочем разведении на 10? клеток.

О üanpasíiciiíüí дк.рференциропки КОЕс судили но отношению числа эрнтроидных колоний к числу граиулошггарных (отношение ЗГГ), полученному в результате микроскопического анализа колоний на гистологических срезах селезенки легально облученных реципиентов. Для получения продуктов, вырабатываемых и-лнифоцнтьмн костного мозга и селезенки, выделенные в асептических условиях клетки культивировали в концентрации 1С/1 /мл среды 195 без сыаорогкн в течении 1Ö-20 часов при 37° С в атмосфере 5% СО в 1 ил/на чашку Петри диаметром 40 мм. По окончании культивирования паиосэдочпую жидкость вместе с клетками центрифугировали при 5000 об/мнн в течении 15 мин и нроцускали через фильтр фирмы "Владипор" (г.С.-Штербург) с диаметром пор 35 мкм в целях избавления от иеосешшх слеток.

Полученные рузульташ обрабатывали методами вариационной статистки с использованием критерия Стькжснта.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОВСУЙШШШЕ Цзацылаа^ехш'; „ е_разлиашмн

Задачей -xpioro этапа нашей [»боты было фракционирование клеток кистнеда мозга кшшей на отдельные ^.рдкции клеток с помощью антител к кг мо!сриюгтным шрхерш, как описано шит, опенка степени очистки намучышых фракций м их колопиеобразуюшей способности. Результаты определения Hß&jicraäJECiiu s таблице !.

Из таблицы агемугт, что удаление слеток фенотипа lg+Thy-l+ и SC-1+ 1ми!»и:том и лизисом с помощью соответствующих ЛС в присутствии комш1ш.ипа «гриюимт к практически полной отмене колоинсибразуюшей снюеобиости клеток костного мозга. ;íro могло свидетельствооать или об утрата колониеоЬргзующих клеток в процессе фракционирования костного Moirs mjsm о том. что и;»: (рракционироЕашш удаляются вспомогательные клеткм. необходимые для реализации колониеобрззуюшей способности КСК, роль которых, но данным A.A. Ярнлина и пр. (1985) могут выполнять 1ГШ. :Jro предположение было подтверждено в нашей работе. Так, после переноса клеток фенотипа SC-Г колонии в селезенка легально облученных

ЧЙЯШЙЙ&СрМАМШСНтоп отсутствонали, при переносе.¡слеток фенотипа БС-Г*" колебалось от 0,5 по 1.

' Таблица 1

Срай'йП'йлтая характеристика отельных фракций костного мозга по Иоййркйсстным маркерам и способности образовывать колонии в селезенке 'сйпт&пшх летально облученных реципиентов._

N фракции Сопсржшше клеток, несущих Колопие- 1>

н/п костпсго мозга маркеры (%) образуютаи

(КМ) активность

Ч тьу-1 ЙС-1 КОЕс

1 Цсфракциопир. 20(10- . 10(8-12) 7(3-12) 10.7+0.7(22)**

КМ 30)*

2 Гв" 5(2-10) 25(25-30) 1~П(7-15) 8.0+0.5(21) >0.05

3 18-ТЪу-Г ■ 0.2(0.1-0.5) 4(2-8) 10(7-14) 4.5+0.2(18) <0.01

4 0.2(0.1- . 0.4) 4(2-6) 4(2-6) 0.2+0.2(16) <0.01

5 |{>+-11^-1^-1- 70(50-«2) 3(1-5) НН) ... 0.2+0.2(16) <0.0!

6 0.1(0-0.!) 23(20-26) 28(25-31) 0.1+0.1(17) <0.01

Примечание:* - срстшс значения, минимальные и максимальные показатели;

** - Б скобках - КОЛИЧЕСТВО [ХПИПИС1П ОО, При смешивании этих фрикций наблюдалось резкое возрастание 'колонисобразующсЯ активности КСК - «о 6,5+0,3 (табл.2).

Таблица 2

Колоцисобразуклцал активность костномозговых фракций фенотипов БС-Ги 5С-1+ н их смеси до и после обработки фракции фенотипа ЯС-1+ различными монЛТ.___

фракции Колонисобразуюшая 1 активность, КОГ.с Р

ЭС-Г_____ __ ____________1______ 0(22)*__________ 5С-1+ " " "" " Г 0,5Ю,1(25) <0.001 ■<!о;сда1

5С-Г+5С-1 + 6.5±0.3(16) 5СГ+(5С-1+, обработанные ЛТкЛГГ.ЗТ4) 0.51-0.1(19)

ЯС-Г+рС-1+, обработанные ЛТкЛГСОЗ) | 5.710.4(25) ХС"-1'+(ЯС-1+,обработанные ЛТк П.-2К) ! О.4±0.1(1й) «оже •<Й!Ш 1

Примечание: * - в скобках количество реципиентов.

С целью дальнейшего анализа фенотипа клеток-хелперов, фракпш SC-f1" - клеток подвергали пополнительной обработке монА'Г к A L3T4 i CD3, а также к рецептору для II.-2 (IL-2R), которую осуществляли пере трансплантацией мышам-решшимггам клеточкой смеси фенотипов SC-1" i SC-1"1". Оказалось, что обработка SC-l+- популяции монЛТ к ЛГ' L3T4 или IL 2К приводила к отмене хелперного действия клеток. Обработка клеток АС Al' CD3 не оказывала существенного влияния на колониеобразутошу! способность КСК (та6л.2). Поскольку антиген СОЗ несут зрелые клетки можно заключить, что хелнерную активность проявляют незрели лимониты (ПТЛ) фенотипа SC-1^ L3T4+1L-2R.+CU3". И связи с тем, чп трансплантация реципиентам только ПТЛ не приводит i колонлеобразованию, моасно заключить, что колонии, регистрируемые селезенке облученных ьшшеЯ после переноса смеси фракций КСК и ПТЛ сформируются за счет КСК экзогенного, но не эндогенного происхоасдсния.

На следующем этапе исследований в разработанной системе определял! влияние ка шлониеобразуюшую активность фракции SC'-клсток косшоп мозга шла их смеси с SC-i ^клетками очшпспчоЛ фракции костюмозгош) IS-jsKivîijoîiKiToo (фенотип IgK['by-l"S'C-r), лишенных прилипающих t пдг.стмху sflcroec. Э га серии опытов пли последующих исследований явнлаа ключевой, поскольку a iicil били получены д<11 mue о наличии у В яиын^оцитов хелиерпой активности в отношении кроветворения. В этш опытах было установлено, что в случае фракционирования слеток костиогс мозге, совместная трансплантация В-клеток (|£+-лимфошгты) i 3g~Tiiy-i"SC-t" и б меньшей степени с другими нсслсдовзниыми фракциям! костиого мозг®, ¡содержащими а своем состаае КСК, сопровождаете) стимушшией кологшеобрааовапня (рис.2). Следует отмстить, однако, чп при атом уровень колонисобразоаания не достигал такового npi использовании нсфракцпонирооанных клеток костного мозга (фракция 1 рис.2). ' Эте может быть связано с клеточными пот ерями iipi фрахцколироэдищ костного мозга, участием в реализацш ЕОЯоакеобргзоБания других клеток костного мозга в качеств! гсдомогятельиых клеток или другими причинами. В связи с этик представляя интерес сопоставления кол ониеобразуюшеи способности ®{жхиий клеток, содержащих помимо КСК иные клеточные компоненты ■ (фрггхщш 4,5; рис.2).

СОЕс

10у

3В-7

«

1

о-- ■■'. ---

1 2 •. 3 г«3 4 4*3 5 5*3

Рисунок 2. Взаимодействие ^-клеток костного мозга с отельными силгснными костномозговыми фракциями.

1 - нирракционированиый костный мозг

2 - 1в"-фракция

3-^'-фракция (очишепиая от примссей) :

4 - 1£1Ъу-1 "-фракция

5 - ^ТЪу-1"$С-1"-фржш1Я

Заштриховало - стимуляция колониеобразования. Использомцш мыши (СВАхС57В1У61) Р1

Так, клетки фракции S (КСК) характеризовались минимальным колониеобразованием (0.2±0.2). Клетки фракции 4, содержащей КСК и клетки фенотипа SC-1+ (ПТЛ) формировали 4.5+0.2 колоний. Это может свидетельствовать о том, что в реализации колоииеобразующей способности КСК, помимо ПТЛ и В-хслперов, участвуют и другие клеточные компоненты костного мозга, взаимодействие которых с В-лимфоцитами может сущеегвсшшм образом сказываться на иролиферативпой активности КСК, Однако, вне зависимости от механизмов регистрируемых эффектов, является очевидным, что В-лимфоциты необходимы в качестве вспомогательных клеток для пролиферации КСК и формирования ими колоний в селезенке облучешшх сингетшх животных. При этом U-лимфоцигы-хелперы могут замещать хелперцос действие ПТЛ. Эти факты явились основанием для дальнейших исследований по определению роли В-лимфоцитов в кооперативном эффекте КСК и ПТЛ и изучения характера действия га КСК В-хелперов в зависимости от их органной локализации.

Влияние Н-лим<ронктов разного оргапнецо происхожиения_Ш

формирование колоний сштгрппыми кроветворными стволовыми клетками костного мозга и на взаимодействие костномозговых гемопоптических клсугоу-прс.ишестпспникоз и предшественников Т-лимфонитов.

Поскольку, как было показало ранее, В-лимф<щигы разного органного происхождения могут проявлять в различных тест-системах различную ' регулягориую активность, в дальнейших опытах сравнивали влияние на t голоииеобразующую способность фракции КСК костного мозга сингснных D-лимфоцитов, выделенных из косгного мозга, лимфатических узлов и селезенки. Результаты опытов показаны на рис.3. Из рисунка видно, что трансплантация реципиентам (CBAxC57BU6Jyi;i только фракций КСК (фенотип SC-Г) или В-лимфоцитов (Ig+-клетки) из костного мозга, лимфатических узлов и селезенки не сопровождается образованием селезеночных колоний (группы 1,3,4,5). Однако, при трансплантации . реципиентам КСК в смеси с В-лимфоцигами из костного мозга или лимфатических узлов (группы 1+3; 1+4), ио не селезенки (группа t+5) наблюдали образование 'колоний. Следовательно, можно заключить, что хелиерной активностью для КСК обладают В-лимфоциты костного мозга и лимфатических узлов но не П-лимфОциты селезенки. Сравнение хелперной активности В-лимфоцитов разного органного происхождения с таковой сингснных ПТЛ показывает, что стимулирующая способность, убывала в ряду: 11ТЛ (группа 1+2), В-лимфоциты Костного мозга (группа 1+3),

и

76

54

3--

г i-

о-

ы

M

[♦5 1»3* 1*4* 1*5«

группы

РиснокЗ. Влияние D-лимфоцитов мышей (CBAxC57BL/6J)Fj разного органного происхождения и обработки В-клеток антисывороткой к антигену МШ.Л и комплементом на колониеобразующую активность сингешшх КСК костного мозга. /

1. SC-1"-фракция (источник КСК) '

2. смесь фракций SC-1"(KCK) и SC-t+(nTJI) костного мозга

3. Ig+ - фракция В-лимфоцитов костного мозга ,/

4. Ig+- фракция В-лимфоцитов лимфатических узлов

5.1g+- фракция В-лимфоци roi селезенки

* - В-лимфошггы. обработанные антисывороткой к антигену MBLA и комплементом.

3

5

В-лимсроииты лимфатических узлов (группа 1+4), В-лимфОциты селезенки колонмеобразовашга не стимулируют (группа 1+5).

Известно, что антиген МП! А является маркером В-лимфоцитов мышей и не зкепрессируется на мышиных лимфоцитах Т-ряда. Были поставлены опыты с отменой хелпериого эффекта 1£+-клсток костного моага и лимфатических узлов в результате их 'цитолиза АТ к В-клеточпому АГ МВ1.Л в присутствии комплемента. Из рисунка 3 видно, что ^+-лимфоциты костного мозга (1+3*) и лимфатических узлов (1+4*) после обработки АС утрачивали способность стимулировать колонмеобразованис. В результате смешивания обработанных АТ к комплементом фракций с КСК хелпериый эффект, обеспечиваемый - клетками костного мозга и лимфатических узлов отменялся. Неожиданный результат был зарегистрирован яри добавлении !ц+ - клеток селезенки, обработанных ЛС к АГ МВ1А И комплементом к КСК (1+5*). В этом случае в селезенке облученных реципиентов вырастало З.ОЮ.2 колонии.

Таким образом, можно заключить, что хелпериый Эффект В-лимфоцитов костного мозга и лимфатических узлов опосредован клетками, несущими на мембране антиген МШЛ. М1П.Л"1-клетки селезенки обладают сунрсссорной, а МВ1~А"-клетки ■ ^-фракции селезенки хелнерной активностью пля КСК, которая проявляется после удаления МВЬА^-клеток и характеризуется промежуточной активность между таковой В-лимфонитов костного мозга и лимфатических узлов. Природа МВЬА -клеток остается неизвестной. Они могут представлять собой фракцию В-лимфоиитов, не зкспрессирующих на мембране ангиген МВЬА, или являться клетками не В-лим<роиитарной природы, присутствующими во фракция В-лимроцнтов в виде примеси.

Специальному изучению был подвергнут эффект В-лимфоцитов разного оргашого происхождения на КСК, проявляемый в присутствие 1ГГЛ-хелнерм колониеобраэоваиия. В опытных группах к смеси КСК (5С-Г) и ПТЛ (!>С-1+) добадляли 11-лимфоцяты (1%*) разного органного происхождения, обработанных АС к ЛГ МВ1.А и комплементом, или нсобрабошшых и взвесь клеток трансплантировали летально облученным сингсшшм реципиентам. Оказалось, что при добавлении ^-клеток из всех трех источников (костный мозг, лимфатические узлы и селезенка) к смеси КСК и 1ПЛ (рис.4) наблюдалось снижение колониеобраэующей способност* КСК. При этом в случае костномозговых 1£+-клеток ингибирующий эффект носил недостоверный характер (группа 1+2а).

а

КОЕс

в 7

6-

5 4-

3

1

о -------

1 1*2» 1'2в 1*2« 1*2а* И2С" 1»2а"

Ъкунок 4. Влияние клеток костного мозш, лимфатических узлов и селезенки и обработки В-лимцюцитов аитисивороткой к анти.сну МШ-Л и комплементом на взаимодействие сишснных колонисобразуюших слеток костного мозге и предшественников Т-лимфоцитов,

1 - смесь фракция БС-Г (КСК) и БС-1+ (И ГЛ) костного мозга

2 - ^-клетки (В-лим<уоциты) тканей: а - костного иоэга

6 - лимфатических узлов в - селезенки

* - В-Лиыкроцкты, обработанные штисывороткой к антигену М01Д (( комплементом

Добавление к смеси КСК Ч ПТЛ В-Лимфоцитов лимфатических узлов (группа 1+26) вызывало более сильное ингибирующео действие. Смешивание КСК и ПТЛ с ^-клетками селезенки (группа 1+2в) приводило к полной отмене образовывать селезеночные колонии.

На том же рисунке показан эффект удаления М1!ЬЛ+- клеток из Фракций костного мозга, лимфатических узлов и селезенки. При добавлении к смеси клеток КСК и ПТЛ ^-лимфоцитов костного мозга ( группа 1+2* ) и лимфатических узлов (группа 1+26* ), отмеченный ранее ингибируюший Зфхрскт усиливался, з при испытании ^-фракции спленопитов, лишенных МШ-А"-клеток - отменялся (группа 1+2в*).

Таким образом, регистрируемый нами супрессируюший эффект В-лимфоцитов селезенки в смеси с КСК (рис.3) и КСК и ПТЛ (рис.4) обусловлен действием только клеток, несущих на поверхности аптипен МШ.Л. Клетки [¡>+-фракции фенотипа МШ.А' проявляют вспомогательную активность для КСК как при трансплантации реципиентам в смеси только с КСК (рис.3), так и в смеси с КСК и ПТЛ (рис.4), В то же время клетки такого фенотипа не проявляют хелперпого действия при совместной трансплантации реципиентам с КСК (рис.3) и подавляют образование колоний в случае их переноса реципиентам в смеси с КСК и ПТЛ (рис.4) (а случае ^-фракции костного мозге и лимфатических узлов. Воасможно, такие клетки непосредственно не проявляют супрессороной активности, а действуют на КСК опосредовано, стимулируя образование клеток-сунрессоров в популяции ПТЛ. МВЫ'-лимфониты, выделенные из костного мозга и лимфатических узлов, по-видимому, не участвуют в подавлении гсмопоэтической активности' КСК при их совместной трансплантации реципиентам с ПТЛ, а их удаление из ^-фракции костного мозга и лимфатических узлов усиливает супрессию колонисобразования. Следовательно, клетки костного мозга и лимфатических узлов фенотипа МША+ проявляют контреупрессорную активность по отношению к нейдентифицированным супрессориым клеткам.

Влияние гуморя^ниг факторов, ссгретируемих П-лимфопитям> разного органного проигхо-А-пения на колонисобразуюшую способноси сишснных крогаугворццц стппгюиых клеток костного мозга.

С целью определения роли продуктов 1в+-клсток в регуляториок действии В-лимфоцитов на колонисобразуюшую активность КСК ^+-кпетк1 костного мозга, лимфатических узлов и селезенки заменял! соответствующей падосадочной жидкостью (ПЖ) и вводили ее облученньн

реципиентам в отдельности, совместно с КСК или совместно с КС К и ГГГЛ (табл.З). !

Таблица 3 ;

. Влияние надосадо'шой жидкости (НЖ) клеток фенотипа разного органного происхожде1шя мышей (СВАхС57В1У61)1|, клеток миедомы Х63 Лg8,653 (Х-б53),ги6ридом I99-1F.11 и МИК-7 Д8 на кодониеобразуюшую <рункцию КСК и на взаимодействие сингенных КСК и 1ГП1.

Источник 11Ж Число колоний в селезенке 1гри введении НЖ

без клеток совместно с КСК Р совместно с КСК и ПТЛ 1>

ЛЖ не вводили 0,2±0.1(1й) 6,010,5(18) >0,05 <0,001

^+-клстки костного мозга 0,210,1(14) 5,5±0,7(27) <0,001 5,0±0,5(17)

15+-клстки селезенки 0.1±0.1(14) 0,2±0,2(18) >0.05 0,5±0,2(19)

1§+-клетки лимфатических узлов 0.1+0,1(17) 4,5±0,5(16) <0,001 3.4+0,4(18) <0,01

Клетки миеломы Х-653 0(15) 0,5±0,2(16) >0,05 >0,05 0,6+0.2(15) 0.6+0,2(19) <0,001 <0,001

Клетки гиЬридо-мы 199-1ЕИ 0(16) 0,2±0.1(16)

Клетки гибридо-мы МИК-7Д8 0(17) 2,4±0,5(17) <0,001 3,2±0,5(16) <0,01

В скобках указано количество мышей.

Из таблицы видио, что при введении облученным животным НЖ В-клетоки костномозговой фракции КСК; колоний в селезенке реципиентов № регистрируется. Колониеобраэование наблюдалось в результате совместного переноса облученным мытам фракции КСК и НЖ В-^имфоцитов костного мозге или НЖ В-клсток лим<ратичеких узлов. 11Ж Селезенки колониеобразование фракции КСК не индуцировала. При переносе облученным мышам НЖ В-лим<роиигов ¿смеси с КСК и 1ТТЛ, гуморальные Продукты П-клеток всех исследованных органов оказывали супрсссирующсс Действие па колониеобразование. Наибольшую супрсссориую активность проявляла НЖ В-клсток селезенки, наименьшую - НЖ В-клсток костного Чозга. 11Ж В-лимфопитов лимфатических узлов характеризовалась •ромежуточной активностью (табл.З). Таким образом, В-клетки различной

органной локализации опосредуют действие на колопиеобразующую Функции КСК через сскретируемые ими гуморальные факторы.

Для дальнейшего исследования роли гуморальных факторов, регулирующих колоцисобразование, использовали 11Ж миеломных мышиных клеток несекретирующих (Х-63. Л&8) (Х-653) и клеток, гибридомы 199-1Е11 (Х-653 + В-лимфоциты селезенки) или гибридомы МИК-7 Д8 (Х-653 + [¡-лимфоциты лимфатических узлов). Из таблицы 3 видно, что НЖ использованных клеток не индуцировали 'образование колоний в селезенке облученных мышей. НЖ клеток мышиной миеломы и гибридомы 199-1Е11 /трАПСЦлалтируемис облученным животным совместно с КСК также не- «¿Мутировали формирование кроветворных селезеночных колоний.

При анализе действин'ПЖ Миеломных и шбридомных клеток 199 1Е11 па взаимодействие сиЛгешгьйс ;КС!К И ИГЛ установлено (табл.3), что добавление йх к'колокНсббразуюиМЙ'смссИ клеток фенотипов 5С-Г и 5С-1 + приводит к значительному угнетению колониеобразования. Число селсЬеночных'колониЯ падало'сб.ЙО.э до 0,6±0,2. Этот эффект аналогичен действию на процесс формирования зкзоколоний НЖ ^'-клеток селезенки.

!И Отличие от гибридомы 199-1F.11, НЖ гибридомнык клеток МИК-7 Ц8 сТимуМрует колопиеобразующую фенкцию КСК. Однако, стимулирующий эффект в данном случае проявлялся слабее, гю сравнению с действием НЖ 1«+-клеток- лимфатических узлов. Имеете с тем, обе 11Ж по действию на образование колоний смесью клетокфенотипов 5рС-Г и5С-1+ существенно не различались. И в том. и в другом случае наблюдали умеренно выраженное угнетение колониеобразования.

Таким образом, продукты гибридам, созданных с использованием В-клеток селезенки и лимфатических узлов воспроизводят регуляторные эффекты И-лимфонитов эт их органов и сскретиругмых ими ^моральных факторов па процесс колониеобразования.

Пишите В-лимфРнитм. 1ГГЛ..и.сскрстируемнх ими гумдралына

Известно, что при транешшггапии. летально облученым животным псфракционировашшх костномозговых клеток в селезенке реципиентов формируются колонии преимущественно эритроидного тина. Отношение числа эритроидных колоний к гранулопитарным (3/Г) составляет 2,0-2,3. Такой же тин дифферошмровки КСК наблюдается (табл.4) при . трансплантации облученным реципиентам сингенных КСК (БС-Г) в смеси с IIIЛ (ЬС-1+)-(груш1аЗ),. с Ц-лимфоцитами (^-клетки) костного мозга-

(группаб), или с ПТЛ и костномозговыми В-лимфоцитами (группа 11). Отношение 3/Г равнялось 2,3-3,1.

Таблица 4.

Характер дтрферешшровки костномозговых КСК пол влиянием сиш'снны*. ПТЛ и В-клсток костного мозга или селезенки, а также их надосадков при трансплантации клеточной смеси легально облученным сипгенным реципиентам (С1!ЛхС57ШУ6}1'1.

N группы Трансплантируемые 1 клетки Среднее число макроколоний в Число проанализированных проб ■ .ношение а/г

' 1 селезенке зрит-роид-ных грану-лоци-тарных

1 5С-Г 0.210,1(8)* А 5 0,8(6)*

2 БС-1 + 0,210,1(7) й 15 0,5(6)

3 5С-Г+ЗС-1+ 5,410.5(7) 38 16 2.3(6)

4 5С-1"+н/о5С-1 + 5,210,5(7) 19 29 0,6(6)

5 1е+ КМ 0,210,1(5) 1 4 ,9-т

6 БС-Г-а^КМ 4,910,5(8) 25 8

7 ЯС-Г+и'Ыг^' км 5,010,7(6) 2.5 8 2,8(5)

8 1Й+СЕЛ 0,110,1(7) 2 4 0,5(6)

9 ХС-1Ч1Й+СЕЛ 0,210,2(7) 2 10

10 КС-1Чн/о1к+СНЛ 0,210,1(6) 1 7

■11 4,510.3(11) 29 12 2.4(7)

12 5С-1-+5С-1++н/о1к+КМ 4.010,3(10) 31 12 2.5.(7)

13 8С-1чЯС-1++1г+СЕЛ 1,010.2(8} 9 13

14 БС-Г+ЯС-^+нЫц+СЕЛ 0,510.2(7) 7 18 1М(2Ь

Условные обозначения: 5С-Г - КСК костного мол а; $С-1+ - ПТЛ костного мозга; ^ КМ - В-Лимфошгш костного мозга; 1|>+СЕЛ - В-лим^циты селезенки;0 ц/о - надосапок:

* в скобках количество реципиентов.

Видение 11Ж костномозговых В-клеток облученным реципиентам в смеси с КСК также сопровождалось их лиффсреннировкой в сторону зритронозза (группа 7). Онишапк 3/1' составляло 2Д Однако, при использовании 1Г/К И ГЛ, введенной облученным животным вместе с КСК

э

(группа 4) наблюдали сдвиг диффсреннировки стволовых клеток и сторону грапулонозза (:УГ-0,6). Возможно, наличие регулиторпых лнмфоилпых Ълеток для шкр<реренциро»ки КСК в сторону оритроиозза является определяющим, ибо замена ГГГЛ 11Ж сощювождается изменением аМфференцировки клсток-прсцшсствсшшков в сторону грэпулолоэза. Р&Ядйфровка механизмов этого факта требует дальнейшего накопления ЛсКср^мешальных данных. В случае переноса реципиентам КСК в смеси с В-Яимфоцигами селезенки (группа 9) или КСК в смеси с сянгеИными Ш'Л и селезеночными В-лнщаинпши (группа 13) о селезенке облученных рсцгнгйспгов вырастало минимальное количество колоний преимущественно ^¿йу^ошп'ариого тина (1УГ-0,2-0,6). Замена селезеночных В-ЛиЛ^Мп'оп ]1Ж (группы 11,И) не изменила ни числа вырастающих ко'й'й им отношение Э/Г. Это показывает, что резкое стгл-енис чйс'ЛА '^орУЛрусмих колоний при трансплантациях облученным реципиентам КСК в смеси с НТЛ и Б-димфодитами селезеночного происхождения обусловлено действием супрессирующих лимфоцитов подавляющих колопиеобразование,- но не сдвигом диф<рсренцировки КСК I сторону гранулонозза и формированием в толще селезенки мели» гранулоцитарных колоний не поддающихся макроучету.

Для определения' роли генотипа во взаимодействии КСК регулнторными клетками <рснотипов 5С-1+ и использовали сочетали: 'линий: С11Л+СНЛ+СВ\—>Г5: '

С57ВиЫ+С57ВШ+С57В1-/Ы--->Г1: СИЛ+С57ВГЛУ+С57ВШ—>1Г1; С57В1ЛЗ^СВЛ+СВЛ-->1').

В контрольных опытах в качестве доноров клеток и реципиенте использовали мышей Г[. Результаты опытов показаны в таблице 5. I' таблицы видно, что взаимодействие КСК и сингенных Ш'Л мышей СИ; С57В1761 и Г[ не загисило от сочетания донор-реципиент и o6ecпeчивaJ сходный уровень колониеобразования (6,6; 5,5 и 6,8 соответственно) сслсзсикс сЬлучсных мышей. Однако, при взаимодействии КСК НССШ1ГС1ШЫМИ ГГГЛ (СВА+С57ВЬ/61 или С57ВибГ+СВЛ) формировалось два раза меньше колоний, по сравнению с сингенными комбинация* (СВ\+СВЛ и С57!ШШ-С57Ш61). и составляло 3,2 и 2,8 соответственно. •> может свидетельствовать о том, что хслпернос действие И ГЛ в зпачитель:

Большей степени зависит от сипгепии с попоров КСК, чем от сингении с реципиентом клеточного трансплантата. Пцкрсп' снижения числа колоний при взаимодействии нееннгеппых КСК и ПТЛ но сравнению с сингенными может быть связан с ииактивирующим действием ПТЛ па аллогенпые КСК, с худшим заимопе(1стсием аллогенпых клеток, по сравнению с сингспными, проявлением Эффекта аллогеппоЯ ипгибиции или с другими механизмами.

Таблица 5.

Колопиеобразующая способность КСК костного мозга (фенотип 5С-Г) поя влиянием сингепных или аллогашых ПТЛ (фенотип 5С-1+), В-лимропитов (фенотип 15+) костного мозга (КМ) или селезенки (СИЛ) при трансплантации клеточпоЯ смеси летально облученным реципиентам (С1ШС57ВШ)Г1-

| Дсцори ) тредсяшгауусмих [ клетот^-гдашноя Число колоний при трансплантации КСК в смеси с клетками фенотипов

15С-1" -КМ ХС-1+ и 1?+ -КМ 5С-1 + и 1Е+-СКЛ

Р, - ша.5 €»»> 6,410.5 (17). 0.510.3 (17)

Г1 6.310.5 0.510.2

Д7)..... ('<■'!} . .

С1!Л СВЛ - 6.610.5 (17) 2.010.3 (19) 0.510.2 (18)

СВЛ СВЛ С!!Л ~ - 2.8+0.4 (18) 0.5Ю.2

Ш. 5.510.5 (17) 1.9Ю.З (Ш) 0.410.1 ~1 (18). -

1!1, иь Ш. 2.5+0.4 (12).......... 0.510.2

ХВЛ 3.2Ю.4 1.710.2 0.(10.1

"сил ;1 т. В1- 1. ил ВЬ Л»)___ ОД.... М±0.2 {'.<)) 0.110.1 2.2±ЬТЗ~~ (18) 0.1 ЮЛ II

СИЛ."" С ВЛ ~ -О»} (121____ (19)________ 2.2103 108}___ к 6. но. Г "1: .(121_______11

Примечание: * - доноры клеток - пиши линий: Г] - гибриды (СВЛхС57ВШ)Р|.

сил-сил

Щ.-С57Ш61

» СКГ&ах - количества реципиентов.

Из таблицы 5 следует также, что. в отличие от взаимодействия КСК и 11ТЛ, взаимодеиствие КСК и П-лимфопитое приводит к максимальному образованию колоний только в случае сингении допоров клеток и реципиентов (1;1+1'1—>?[). Во всех остальных вариантах опытов число формируемых селезеночных колоний было в 3-4 раза меньшим. По-видимому, в отличие от НТЛ. хелперпое действие В-лимфоцитов костного мозга в большей степени зависит от сингении с реципиентом, чем от сингении с КСК. Селезеночные В-лимфоциты не оказывали 'хелперного действия ни на сингашые КСК, ни на аллогениые вне зависимости от генотипа реципиента.

В случае трансплантации облученным реципиентам смеси КСК, 1ТТД и В-лимфоцитов костного мозга, как и при трансплантации облученным мышам КСК в смеси с В-лимфСЦитами, максимальный уровень колониеобраэования регистрировали в опытах с сипгснией донорских клеток и реципиентов (6,3). Во всех иных случаях число колоний снижалось в 2-3 раза и составляло 2,2-2,8. Поскольку переносы гибридным реципиентам КСК и сингепных ИГЛ родительского происхождения (СИА+СВА или С57ИибЛ+С57ЦиЫ) сопровождались образование "существенно большего числа колоний (5,5-6,6), можно заключить, что включение в трансплантируемую смесь клеток сингепньгх В-лимфоцитов приводит к супрессии селезеночного колопиеобразовапия. Однако, возможно, что клетки костного мозга осуществляют, в данных условиях опыта хелперпую функцию по отношению к клеткам ¡»С-^-популяции, помагая ей формировать супрессоры. действие которых и обуславливает ипгибицию колониеобраэования.

Сравнение уровня колонисобразования в группах г трансплантацией реципиентам

КСК и НТЛ в сочетаниях:

СВА 4- С57Виб1 —> 1-х: СЫПиЫ + СВА —> Г)

и в группах с сочетанием:

СВА + С57ВиЫ + С57В1УЫ-> С57В1 /6.1 + СВА+СНА —> I-), показали, что костномозговые В-лимфоциты в данных условиях опы та практически не оказывают дополнительного ни хелперного ни супрсссорпою действия. Во всех случаях регистрировали примерно одинаковое количество колоний (2,8-3,2 или 2,2 соответственно. Одно из предположений, объясняющих этот факт может заключаться в том, что в трансплантате присутствуют только предшественники супрсссирующих клеток, но отсутствуют эффекторпые супрессорные клетки. Последние

»разуются I организме' реципиента после трансплантации клеточной 1сси. По-видимому, для их образования обязательной является сишения исток трансплантата.

Вамсна костномозговых-, В-лнькроцитов селезеночными 11-клетками асспечивала практически - полное подавление процесса олонисобразоинияБО всех группах опыта незачисимо от сочетания сподьзошшых генотипов (табл.5).

Полученные данные показывают, что образование колоний является ножным процессом, регулируемым клетками Г- и В-ряда, в котором иксимапьный эффект наблюдается при сингснии взаимодействующих леток и клеток транспланта и реципиента.

Таким образом, костномозговые В-лимфоциты стимулируют >бразованис колоний гемопоэтичсскими предшественниками костного юзга. При наличии же во взаимодействующей смеси клеток ПТЛ, .•остномозгоаыг В-лимфоциты оказывают супрессирующсе действие на .олониеобразоналис. Уго может отражать функциональную активность (азличных субпопуляций В-Лимфоцитов (хелперного и супрсссируютего [сйствия). Другое предположение можег заключаться в том, что в костном юзгу, лимфатических узлах и Селезенке содержатся В-лимфоциты хелперного типа, обеспечивающие при наличии ПТЛ образование :упрсссорпых клеток Т-ряи» или имеющие в своем составе (селезеночные слетки) супрессорц не И-типа. Наконец, нельзя исключить и то. чго одни и ге же клетки в различных условиях опига могут проявлять различную рункциональную активность. Однако, вне зависимости от механизмов регуляторного действия, является очевидным, что Н-клетки реализуют рункциональную активность через продуцируемые ими медиаторы.

выводи

1. Колониеобразуюнмя способность выделенной фракции кроветворных стволовых клеток костного мозга реализуется в результате их взаимодействия с сиш синими Н-лимфоцигами костного мозга, проявляющими хелнерпую активность и способными замешать вспомогательную активность сингснных костномозговых [П'Л. I!-лимфоциты лимфатических узлов характеризовались меньшей всномога1елыюй активностью но сравнении с В-лимфоцитами костит о мозга. В-лимфонкты селезенки хслпсрноН активнехпы» не обладали.

2. При добаиленил В-Лнмфоцитов к колонисобразу/опаи смеси костномозговых КСК и ПТЛ рс1истр>1]хэвалось подавление

колонне образования, Наибольшую супрсссорную активность проявляли В лимфоциты сслсзснки, наименьшую - В-лиМфОдиты костного мозга. В клетки лимфатических узлов характеризовались промежуточпо{ активностью.

3. Хелпсрпая активность В-клсток костного мозга и лимфатичеекш узлов отменялась с помощью антисыворотки к антигену МВ1^Л и комплемента при взаимодействии В-лимфоцитов и КСК. В случае совместной трансплантации мышам КСК, ГП'Л и обработанных антисывороткой к антигену МВ1.Л и комплементам В-лимфоцитов костногс мозга, лимфатических узлов й селезенки супрессорпая активность В-клето» резко возрастала, демонстрируя проявление конгрсупрессорпой активности В-лимфоцитов костного мозга и лимфатических узлов и супрессорной активности В-клсток селезенки.

4. П-лимфОциты и ИГЛ костного мозга взаимодействуют в процессах образования колоиий с пссин генными КСК менее эффективно по сравнению с сингснными. В организме иесшиеиного облученного реципиента реализация колониеобразующей способности смеси КСК и ПТЛ под влиянием В-лимфоцитов также протекает менее эффективно.

5. Хелпсрпая активность В-лимфодитов костного мозга и лимфатических узлов и супрессорпая активность В-лимфоцитов селезенки на колониеобразующую способность КСК опосредуется через сскрстируемые ими растворимые факторы.

6. Налосадочные жидкости не сскрстируюшей иммуноглобулины мышиной миеломы Х-653 и сскрстируюшей иммуноглобулины гибридомы 199-1П11. полученной на основе миеломы Х-653 и В-клеток сслсзснки подавляли образование колоний колонисобразутощей смесью КСК и ПТЛ. Под влиянием надосадочпой жидкости гибридомы МИК-7 Ш, получепной на основе миеломы Х-653 и В-клеток лимфатических узлов, регистрировали стимуляцию колопиеобразовапия при взаимодействии с КСК и его подавление при совместном введении КСК и ПТЛ.

7. Взаимодействие КСК и ПТЛ, а также КСК и В-лимфодитов костного мозга сопровождается ростом колоний преимущественно эритрошшого тина. Такое же направление диффсренцировки КСК регистрировали под влиянием вводимого облученным сингешшм реципиентам вместе с КСК п ад осадка В-лимфодитов, над осадок ПТЛ обеспечивал сдвиг Ш1ффсрс1 (цировки КСК в сторону грацулопозза.

1. Гусева СЛ., Мирошниченко И.В., Манько U.M., Ярилип А.Л."Шшиние гуморальных факторов, продуцируемых В-лим<роцитами па селезеночное колониеобразование и их взаимоотношение с лим^о кипами, продуцируемыми 11ТЛ",- Иммунологии, 1992,N6, С.

2. Х'уссва O.A., Мирошниченко И.Н., Ярилип A.A., Маш,ко Н.М.Тазличное влияние Ц-лим<роцитов из разных органов па селезеночное колонисо6разованкс".-Тезисы докладов 1 съезда иммунологов России, г.Поюсибирск, 23-25 июня, 1992, С.127.

3. Манько U.M., Гусева O.A., Мирошниченко И.Н., Ярилин A.A. "Влияние И-лим<ропитов разного органного происхождения на формирование кроветворных колоний в селезенке клетками костного мозга\-БЗБМ, 1992.N2.C. 170-172.

4. Мирошниченко II,П., Гусева О,Л., Манько В.М., Ярилип Л.Л. "Участие клеток костного мозга, несущих мембранные иммуноглобулины, в формировании кроветворных колоний в селезспке".-Иммунология, 1992.N4.C. 1S-21.

УЧАСТОК UH 0 * И Т ЕЛЬ НОЙ *ТЕХ Н И К Н они РАМН П О ДП . К П ЕЧАТ И JAK.10 ТИРА« 00 эк J.