Влияние церулоплазмина на фагоцитарные механизмы иммунной защиты и оксидативный стресс в условиях физической нагрузки (экспериментальное исследование)

Тевдорадзе, Светлана Ивановна

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Влияние церулоплазмина на фагоцитарные механизмы иммунной защиты и оксидативный стресс в условиях физической нагрузки (экспериментальное исследование)

ДИССЕРТАЦИЯ

Влияние церулоплазмина на фагоцитарные механизмы иммунной защиты и оксидативный стресс в условиях физической нагрузки (экспериментальное исследование) - диссертация, тема по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Тевдорадзе, Светлана Ивановна Уфа 2007 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему Влияние церулоплазмина на фагоцитарные механизмы иммунной защиты и оксидативный стресс в условиях физической нагрузки (экспериментальное исследование)

На правах рукописи

ТЕВДОРАДЗЕ ООЗОВТБЭ8 СВЕТЛАНА ИВАНОВНА ---------

ВЛИЯНИЕ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА НА ФАГОЦИТАРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ИММУННОЙ ЗАЩИТЫ И ОКСИДАТИВНЫЙ СТРЕСС В УСЛОВИЯХ ФИЗИЧЕСКОЙ НАГРУЗКИ (Экспериментальное исследование)

14.00.36 - «Аллергология и иммунология» 14.00.16 - «Патологическая физиология»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа - 2006

003067698

Работа выполнена в Центральной научно-исследовательской лаборатории Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации.

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

Медведев Юрий Анатольевич; доктор медицинских наук, профессор Фархутдинов Рафагат Равильевич.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Алсынбаев Махамат Махаматуллович; доктор медицинских наук, профессор Мышкин Владимир Александрович.

Ведущая организация - Институт иммунологии и физиологии Уральского отделения Российской Академии наук.

Защита состоится «[Р » 2007 г. в 14 часов на

заседании Регионального диссерт£(цион<Гого совета КМ 002.124.01 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан по адресу: 450014, г. Уфа, ул. Новороссийская, 105.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке филиала «Иммунопрепарат» Федерального государственного унитарного предприятия «Научно-производственное объединение по производству медицинских иммунобиологических препаратов «Микроген» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 450014, г. Уфа, ул. Новороссийская, 105.

Автореферат разослан <JJ7^/£¿2^/2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Лукманова К. А.

Об"!«1! Х2р2!С1£рИСТКК2 работы Актуальность проблемы

Согласно современным представлениям, физические нагрузки, в зависимости от их характера и продолжительности, ведут к изменению иммунитета. В целом, умеренные физические нагрузки его стимулируют, в то время как интенсивные и длительные - угнетают [Shephard R.J. et al., 1994, 1998; Shinkai S. et al., 1997; Nieman D.C. et al., 2003; Mac Kinnon L.T. et al., 2000; Jeurissen A. et al., 2003]. Реакция иммунной системы на физическое перенапряжение имеет черты классического системного воспалительного ответа, сопровождается высвобождением медиаторов воспаления, активацией комплемента, выбросом провоспалительных цитокинов и выработкой других реактивных гуморальных факторов, морфо-функциональными изменениями клеток крови и т.д. [Pyne D.B. et al., 1998; Shek P.N. et al., 1998]. Механизмы, запускающие иммунный ответ при физической нагрузке и влияющие на него, недостаточно изучены.

В работах последних лет показано изменение при физической нагрузке свободнорадикального окисления - одного из фундаментальных биологических процессов, обеспечивающих нормальную жизнедеятельность [Pedersen В.К. et al., 1999; Cooper С.Е. et al., 2002; Reichhart M. et al., 2003].

При физическом перенапряжении в организме изменяются основные процессы свободнорадикального окисления - генерация активных форм кислорода и перекисное окисление липидов. В крови, опекающей от работающей мышцы, обнаружено увеличение количества свободных радикалов, перекисей липидов, инициаторов свободнорадикального окисления и т.д. [Bailey D.M., 2003, 2004; Orhan Н., 2004] Поддержание окислительных процессов на оптимальном уровне играет исключительную роль в профилактике, лечении и реабилитации лиц, подвергшихся физическим перегрузкам. В этой связи возрастает внимание к антиоксидантам - препаратам, регулирующим процессы

свободнорадикального окисления. Имеются данные о влиянии антиоксидантов на механизмы иммунных нарушений при физических нагрузках. Такие антиоксиданты, как витамины Е и С, увеличивали уровень интерлейкинов-1 и -6, содержание CD4-, CD8-, Т-клеток и киллеров в сокращающейся мышце [Nieman D.C., 2001; Petersen E.W., 2001; Fischer С.Р., 2004]. Однако, эффективность использования антиоксидантов при физической нагрузке разными авторами оценивается неоднозначно [Меньшикова Е.Б. и др., 1992; Хаитов P.M. и др., 1996; Lachance Р.А., 2001]. Весьма перспективным представляется применение натуральных антиоксидантов, обладающих иммунотропными свойствами, к которым относятся препараты крови, в частности, церулоплазмин - медьсодержащий фермент си-глобулиновой фракции сыворотки крови. Препарат стимулирует гемопоэз, уменьшает интоксикацию и иммунодепрессию, связывает супероксидные радикалы и препятствует перекисному окислению липидов клеточных мембран [Васильев В.Б., 1988; Асельдерова А.Ш., 1992; Исрафилов А.Г., 1993; Бердинских, Н.К., 1994]. В то же время, комплексные исследования влияния церулоплазмина на различные звенья иммунитета и процессы свободнорадикального окисления при физической нагрузке не проводились.

Большое значение имеет разработка экспресс-методов оценки состояния лиц, подвергнутых физическим нагрузкам. Некоторые авторы предлагают в этих целях определение продуктов свободнорадикального окисления, в частности, пропанола, бутанола, пентанала, гексанала, гептанала, октанала, МДА и ацетона в моче [Orhan Н. et at., 2004; Chen C.Y. et al., 2005]. Однако, эти методы трудоемки, требуют специальных лабораторных условий, больших затрат времени. Для оценки состояния свободнорадикального окисления применяется регистрация хемилюминесценции - свечения, возникающего при взаимодействии радикалов [Афонин Г.Б. и др., 1990; Владимиров Ю.А., 1999; Васильева Р.Ф.,

2004; Фархутдинов P.P., 2005], но данные о возможности использования хемилюминесцентных методов исследования для анализа адекватности физических нагрузок малочисленны. Хемилюминесцентные методы также дают возможность судить об антиокислительной активности лекарственных средств. Так, в экспериментах in vitro можно по изменению интенсивности хемилюминесценции при добавлении медицинских препаратов в модельные системы, имитирующие наиболее распространенные в организме реакции свободнорадикального окисления, изучить механизм их действия и активность. При введении этих препаратов подопытным животным по изменению хемилюминесценции гомогенатов органов, сыворотки и цельной крови удается оценить возможность коррекции свободнорадикального окисления [Фархутдинов P.P. и др., 1995, 2003]. Поиск средств, регулирующих свободнорадикальное окисление и иммунный ответ при физической нагрузке, разработка и внедрение экспресс-методов контроля адекватности нагрузки являются актуальной проблемой, представляющей научный и практический интерес.

Цель исследования

Исследовать влияние церулоплазмина на фагоцитарные механизмы иммунной защиты и оксидативный стресс при физической нагрузке у подопытных животных, оценить возможность его применения как средства профилактики выявленных нарушений.

Задачи исследования

1 Оценить влияние различных концентраций препарата церулоплазмина на процессы свободнорадикального окисления in vitro в модельных системах, в которых протекают реакции перекисного окисления липидов и генерация активных форм кислорода.

2 Исследовать in vitro влияние церулоплазмина на функционально-метаболическую активность разных видов клеток фагоцитарного звена

иммунной системы (интактные и активированные полиморфноядерные и мононуклеарные фагоциты).

3 Изучить в эксперименте на животных влияние физической нагрузки и церулоплазмина на морфологический состав периферической крови, функционально-метаболическую активность фагоцитов.

4 Оценить возможность применения препарата церулоплазмина для профилактики оксидативного стресса и нарушений деятельности фагоцитарного звена иммунной системы при многократной интенсивной физической нагрузке.

Научная новизна

Впервые проведена сравнительная оценка влияния церулоплазмина на процессы свободнорадикального окисления в модельных системах in vitro и при физических нагрузках у подопытных животных in vivo. Определено влияние церулоплазмина на уровень спонтанной и индуцированной активации кислородзависимого метаболизма интактных и активированных полиморфноядерных и мононуклеарных фагоцитов, позволившее уточнить механизмы иммунотропного действия препарата.

В условиях интенсивной физической нагрузки, сопровождающейся оксидативным стрессом, изменяется состав и функционально-метаболическая активность фагоцитов крови. Показана возможность предупреждения выявленных нарушений введением препарата церулоплазмина.

Обоснована возможность применения хемилюминесцентных методов для экспресс-оценки состояния свободнорадикального окисления и кислородзависимого метаболизма фагоцитов при оксидативном стрессе.

Научно-практическая значимость работы

Исследование хемилюминесиенции крови позволяет контролировать состояние свободнорадикального окисления в организме при физической нагрузке и введении препарата церулоплазмина.

Внедрение результатов исследования в практику Результаты исследования внедрены в практическую деятельность иммунологической лаборатории городской клинической больницы № 18 г. Уфы и Центральной научно-исследовательской лаборатории Башкирского государственного медицинского университета.

Материалы диссертации используются в учебном процессе при проведении занятий на кафедрах общей химии и нормальной физиологии Башкирского государственного медицинского университета. Основные положения, выносимые на защиту

1 Церулоплазмин в модельных системах, в которых протекают реакции перекисного окисления липидов и генерации активных форм кислорода, подавляет хемилюминесценцию, проявляет антиоксидантные свойства.

2 Церулоплазмин in vitro в концентрациях, соответствующих нормальному содержанию его в крови, стимулирует функционально-метаболическую активность интактных поли- и мононуклеарных фагоцитов. У активированных поли- и мононуклеарных фагоцитов церулоплазмин, в дозах, близких к лечебным, снижает избыточную спонтанную генерацию активных форм кислорода, но не угнетает индуцированную объектами фагоцитоза.

3 Интенсивная многократная физическая нагрузка у подопытных животных сопровождается стрессовой реакцией (увеличением массы надпочечников, лейкоцитозом, изменением поведенческих реакций) и усилением процессов свободнорадикального окисления в мозге и печени, цельной крови. Введение препарата церулоплазмина уменьшает негативное влияние стресса, снижает уровень изменений интегральных показателей

общего состояния к способствует нормализации свобоанорадикального окисления.

4 Под влиянием интенсивной физической нагрузки возникают нарушения функционально-метаболической активности фагоцитов; церулоплазмин оказывает нормализующее влияние на деятельность клеток фагоцитарного звена иммунной системы.

5 Результаты исследования, проведенного на подопытных животных, позволяют рассмотреть возможность использования препарата церулоплазмина для коррекции окислительных процессов и деятельности клеток фагоцитарного звена иммунной системы в условиях оксидативного стресса, вызванного интенсивной физической нагрузкой.

Апробация работы

Материалы исследований доложены на научно-практической конференции с международным участием «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека» (Смоленск, 2005); научно-практическом семинаре «Методы оценки антиокислительной активности биологически активных веществ лечебного и профилактического назначения» (Москва, 2004); VII Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 2006).

Обсуждение диссертации проведено на расширенном заседании научно-технического совета Центральной научно-исследовательской лаборатории Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации (протокол от 20.10.06 г. № 5).

Апробация диссертации проведена на заседании Регионального диссертационного совета КМ 002.124.01 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан (протокол от 23.11.2006 г. № 54)

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ.

Лйч лк it n'rmrKTimn лтлпотлтаиии

v/vroviTi n vi |яj (\i j pu MIIWV|> i ици*!

Диссертация изложена на 123 страницах, состоит из введения, обзора литературы (5 глав), собственных исследований (7 глав), заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа содержит 16 таблиц, 13 рисунков, 1 схему. Список литературы включает 199 источников (111 отечественных и 88 зарубежных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В данной работе применен комплексный подход к изучению влияния церулоплазмина (ЦП) на функциональную и метаболическую активность фагоцитов in vitro, на процессы свободнорадикального окисления (СРО) в модельных системах и в эксперименте на животных при оксидативном стрессе, вызванном дозированной физической нагрузкой (ФН), оценивались перспективы использования хемилюминесцентных (XJI) методов исследования. В работе был использован препарат «Церулоплазмин» производства филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ.

На первом этапе изучалась антиокислительная активность (АОА) ЦП in vitro. Второй этап работы состоял в изучении влияния ЦП на функциональную и метаболическую активность ингактных полиморфно-ядерных фагоцитов (ПМФ) крови и «спровоцированных» введением пептона в брюшную полость ПМФ перитонеальной жидкости. На третьем и четвертом этапах работы изучалось влияние однократной и многократной ФН и ЦП на физиологические и метаболические процессы в организме подопытных животных.

Регистрацию XJ1 крови, клеток и гомогенатов органов проводили на приборе «ХЛМ-003». В качестве наиболее информативных показателей XJI взяты светосумма излучения - S и максимальная амплитуда медленной

вспышки - !max [Фархутдинов Р.Р , Тенпорадзе С.И.. 2005].

Антиоксидантные свойства ЦП in vitro оценивали в простых модельных системах, имитирующих наиболее распространенные реакции СРО в организме, и сравнивали с действием мексидола - традиционно используемого антиоксиданта. Препараты вносили в среды, где генерировалось образование активных форм кислорода (АФК) [Фархутдинов P.P. и др., 1995, 2005] и протекали реакции перекисного окисления липидов (ПОЛ) [Клебанов Г.И. и др., 1988; Харитонов В.В. и др., 2004]. Антиокислительную активность препаратов определяли по угнетению XJI модельных систем и пересчитывали в процентах от контроля.

Действие ЦП на интактные полиморфно-ядерные и мононуклеарные фагоциты тестировалось по изменению значений функционально-метаболических показателей клеток периферической венозной крови (ПМФ) и промывной перитонеальной жидкости (резидентные неактивированные тканевые макрофаги - МФ) интактных животных. Предварительно активированные фагоцитирующие клетки получали отбором перитонеального экссудата крыс из очага асептического воспаления, вызванного внутрибрюшинным введением 10 мл стерильного 4 % пептона, через сутки ("спровоцированные " ПМФ) и двое суток ("спровоцированные " МФ) после инъекции [Маянский А.Н. и др., 1989]. Препарат ЦП вносили в клеточную суспензию в дозах 0,5 мкг/мл ("физиологическая доза", соответствующая концентрации препарата в крови при возникновении в организме острофазовой реакции) и 50 мкг/мл ("лечебная доза", соответствующая концентрации препарата при его лечебном применении). После предварительной инкубации при температуре 37 °С в течение 30 минут проводилась оценка поглотительной способности и активации кислородзависимого метаболизма фагоцитирующих клеток, определяли спонтанную активацию по восстановлению нитросинего тетразолия (спонтанный НСТ-тест) после 15-минутной инкубации общепринятыми

методами [Новиков Д.К и ДР j 19961 Интенсивность генерации АФК фагоцитами исследовали методом регистрации люминолзависимой хемилюминесценции (JI3XJI) [Фархутдинов P.P. и др., 2005].

Для изучения влияния ЦП на индуцированную активность фагоцитирующих клеток использовали суспензии микросфер латекса, частиц зимозана, живых клеток из культуры стафилококка по 0,01 мл суспензии в концентрации 1010 частиц/л на 0,1 мл образца. Вычисляли фагоцитарный индекс и фагоцитарное число [Петров Р.В. и др., 1992; Новиков Д.К. и др., 1996]. Для оценки индуцированной активации кислородзависимого метаболизма и генерации фагоцитами биоокислителей применялись JI3XJI и НСТ-тест.

Следующим этапом работы было исследование влияния однократной и многократной ФН на лабораторных животных. Опыты проведены на 50 крысах массой 180-200 г, содержащихся на стандартном лабораторном рационе. Крысы были разделены на 5 групп по 10 животных. Первая группа служила контролем. Животные остальных групп подвергались однократной и многократной плавательной ФН по методике, предложенной M.JL Рыловой (1964), которая используется как удобная модель для создания в эксперименте у животных состояния напряжения и оксидативного стресса. Животные второй группы получали однократную нагрузку в течение 20 минут. В третьей группе крысам за 24 часа до нагрузки внутрибрюшинно вводили ЦП в дозе 30 мг/кг. В четвертой группе крысы ежедневно в течение месяца получали дозированную ФН, а в пятой группе та же нагрузка давалась на фоне семикратного с интервалом 72 часа введения ЦП в дозе 10 мг/кг (суммарно 70 мг/кг) [Кривохижина JI.B. и др., 2002; Осиков М.В., 2003].

Индивидуальные поведенческие реакции животных оценивались в тесте «открытое поле» Щодшивалов В.П. и др., 1986; Антрошенко О.Н. и др., 1999]. Главным критерием являлась интенсивность ориентировочно-исследовательской активности животных, дополнительными критериями -

коэффициент подвижности и эмоциональная тревожность.

В конце эксперимента животных декапитировали с соблюдением правил эвтаназии, согласно Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным, правилам проведения работ с подопытными животными и методическим рекомендациям по их выведению из эксперимента и эвтаназии.

Определяли массу надпочечников. Производился подсчет количества лейкоцитов, определялся клеточный состав периферической крови, исследовалась функциональная и метаболическая активность фагоцитов по общепринятым методам [Караулов A.B. и др., 2002]. Генерацию АФК в крови оценивали по изменению спонтанной и индуцированной люминолзависимой хемилюминесценции. Резервные возможности фагоцитирующих клеток определяли по разнице между максимальной интенсивностью спонтанного и индуцированного свечения крови [Фролов В.М. и др., 1993].

Было исследовано состояние СРО в мозге и печени подопытных животных в норме, при ФН и на фоне введения ЦП методом регистрации XJI [Фархутдинов P.P. и др., 2005] и по накоплению конечных продуктов ПОЛ (ТБК - активных продуктов) [Владимиров Ю.А., 1972].

Полученные данные обработаны статистически с помощью пакета компьютерных программ "Statistica for Windows (release 5.0)". На основании величины t-критерия Стьюдента и степени свободы п' по таблице распределения t находили вероятность различия р. Статистически значимыми считали различия при р<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

При введении в модельную систему, в которой инициировалось образование АФК, церулоплазмина до концентраций препарата 0,01, 0,10 и 0,50 мг/мл, уменьшались максимальная амплитуда и светосумма свечения. С увеличением концентрации ЦП угнетение XJI усиливалось (рисунок 1).

В следующей серии опытов изучено влияние ЦП на процессы ПОЛ в модельной системе, которая содержит липидно-белковые комплексы из гомогенизированного куриного желтка (рисунок 2). Добавление ЦП в данную систему так же вызывало снижение интенсивности хемилюминесценции.

J sfii

¿А

hf*

Рисунок 1 - Влияние церулоплазмина на хемилюминесценцию модельной системы, генерирующей активные формы кислорода 1 - контроль; 2 - контроль + ЦП (0,01 мг/мл); 3- контроль + ЦП (0,1 мг/мл), 4 - контроль + ЦП (0,5 мг/мл)

Рисунок 2 - Влияние церулоплазмина

на хемилюминесценцию желточных

липопротеидов

1 - контроль; 2 - контроль + ЦП (0,01 мг/мл), 3 - контроль + ЦП (0,05 мг/мл); 4 - контроль + ЦП (0,1 мг/мл), 5 - контроль + ЦП (0,5 мг/мл)

Сравнительный анализ результатов исследования на двух модельных системах позволил отметить, что в целом воздействие ЦП в равной мере направлено как на подавление продукции АФК, так и процессов липопероксидации.

Интерес представляет изучение влияния ЦП на генерацию АФК в крови. Известно [Allen R.G., 2000], что ЛЗХЛ крови в основном обусловлена свечением нейтрофильных гранулоцитов, в которых в результате ферментативного окисления возникают активные метаболиты кислорода, определяющие их микробицидную активность. При инкубации крови с различными объектами фагоцитоза интенсивность ХЛ резко возрастает, что свидетельствует о выделении фагоцитами активных форм кислорода.

Церулоплазмин в концентрациях, близких к физиологическим (от 1

до 10 мкг/мл), стимулировал кислородзависимый взрыв в фагоцитах. И лишь

высокие концентрации ЦП, соответствующие терапевтическим (более 50 мкг/мл), несколько снижали ХЛ крови.

4 /П*

1е в

Рисунок 3 - Влияние церулоплазмина на хемилюминесценцию крови

1 - контроль; 2 - контроль + ЦП (1 мкг/мл); 3 - контроль + ЦП (10 мкг/мл), 4 - контроль + ЦП (50 мкг/мл); 5 - контроль + ЦП (100 мкг/мл).

Было изучено влияние ЦП на функционально-метаболическую активность разных видов фагоцитирующих клеток, отличающихся начальным уровнем активации (таблица 1).

Таблица 1 - Изменение спонтанной активности кислородзависимого метаболизма интактных и "спровоцированных" фагоцитов при добавлении церулоплазмина____

Клетки ЦП, мкг/мл светосумма ЛЗХЛ, у.е НСТ спонтанный

% индекс активации

ПМФ интактаые из крови контроль 1,10+0,04 1,1+0,2 0,12+0,03

0,5 1,70+0,14 1,2+0,2 0,13+0,04

50,0 0,60+0,09 0,8±0,1 0,06+0,02

МФ перитонеальные резидентные контроль 2,00+0,50 2,2+0,3 0,36+0,26

0,5 2,60+0,20 2,4+0,4 0,39+0,18

50,0 1,20+0,20 1,9+0,3 0,36+0,26

ПМФ "спровоцированные" из перитонеального экссудата контроль 3,30+0,05 86,3+7,6 2,16+0,18

0,5 3,10+0,08 82,1+4,5 1,84+0,09

50,0 2,20+0,16* 62,1+6,5* 1,16+0,32* **

МФ активированные контроль 8,20+1,20 92,1+13,1 2,02+0,24

0,5 7,20+0,40 75,1+11,6 1,44+0,24

50,0 2,40+0,40* ** 42,1+9,3* ** 1,23+0,17*

Примечания приведены средние значения 10 измерений, * - различие с контролем статистически значимо (р<0,05), ** - различие с неактивированными клетками статистически значимо (р< 0,1)5$.

Полиморфно-ядерные фагоциты из крови интактных животных и неактивированные "резидентные" перитонеальные МФ характеризовались низким уровнем активности кислородзависимого метаболизма. У предварительно "спровоцированных" внутрибрюшинным введением пептона перитонеальных ПМФ, полученных через одни сутки, и МФ, полученных через двое суток, она была повышена. Это касалось как показателей спонтанной ХЛ, так и НСТ- теста.

У неактивированных фагоцитов крови и клеток перитонеального экссудата 30 - минутная инкубация клеток с ЦП в "физиологических" концентрациях, соответствующих достигаемым в условиях островоспалительной реакции, сопровождалась тенденцией к повышению интенсивности хемилюминесценции. Более высокие, "лечебные" концентрации препарата снижали интенсивность хемилюминесценции. У предварительно активированных клеток это снижение под влиянием «лечебных» доз ЦП оказалось еще более выраженным. Оно в меньшей степени касалось числа активированных фагоцитов (% НСТ-позитивных фагоцитов), и в большей - интенсивности активации в клетках (индекс активации).

При добавлении латекса к интактным клеткам, инкубированным с физиологической дозой ЦП, происходило увеличение значения фагоцитарного числа, индекса активации клеток и величины хемилюминесценции. При этом количество активированных фагоцитов и число клеток с активацией кислородзависимого метаболизма (фагоцитарный индекс; % клеток, проявляющих активность в НСТ-тесте) не возрастало. При инкубации интактных клеток с более высокими концентрациями ЦП добавление латекса не оказывали статистически значимого выраженного действия (таблица 2). Функционально-метаболическая активность спровоцированных мононуклеарных фагоцитов, инкубированных с различными дозами ЦП, при добавлении латекса практически не менялась.

Таблица 2 - Изменение функционально-метаболической активности индуцированных латексом интактных и спровоцированных фагоцитирующих клеток

Клетки ЦП, Фагоци- Фагоци- нет НСТ- лзхл,

м кг/мл тарный тарное индуциро- индекс у.е

индекс число ванный, % активации

Интактные фагоциты ПМФ контроль 45,7±1,8 3,8±0,3 64,7±2,6 0,90±0,10 6,1+1,1

0,5 49,6±2,1 5,1±0,3* 65,3±4,6 1,30±0,10* 12,1±1,7*

50,0 44,7±2,3 4,6±0,4 62,3±4,6 1,08±0,10 10,1+2,3

МФ контроль 51,1±2,6 4,1±0,4 48,4±3,5 0,18±0,03 0,6+0,1

0,5 55,2±3,2 5,2±0,3* 52,3±3,2 0,25+0,02* 1,0+0,1*

50,0 49,б±3,7 4,8±0,5 50,1±3,1 0,19+0,06 1,1+0,1*

Спровоцированные ПМФ контроль 77,6±8,6 б,1±0,3 91,2*16,8 2,20+0,10 5,6+0,2

0,5 7б,2±2,1 6,6±0.4 85,3±4,6 2,10±0,10 5,8+0,6

50,0 64,7+2,2 5,7±0,4 82,3±4,6 2,10+0,20 5,8±0,8

МФ контроль 86,7±12,6 6,5±0,2 88,1±12,3 2,30±0,30 21,2+5,5

0,5 84,3± 11,3 5,8±0,6 85Д±12,1 2,06+0,20 22,1 ±4,3

50,0 87,3±8,7 6,2±0,3 87,7±18,1 2,20±0,10 20,7+3,5

Примечания, приведены средние значения 10 измерений; * - различие с контролем статистически значимо (р<0,05).

Влияние ЦП на функционально-метаболическую активность фагоцитов при их стимуляции различными объектами фагоцитоза также отличалось (таблица 3).

Таблица 3 - Изменение хемилюминесценции интактных и "спровоцированных" фагоцитов при воздействии разных индукторов в присутствии церулоплазмина_

Фагоциты ЦП, мкг/мл Светосумма ЛЗХЛ (у.е.) при индукции

латексом зимозаном стафилококком

Полиморфно-ядерные фагоциты интактные из крови контроль 6,10+3,10 1,10+0,10 9,5+1,6

0,5 12,10+1,70* 2,40+0,20* 20,1±5,3*

50,0 10,10+2,30 2,10+0,40 15,2±4,2

Полиморфно-ядерные фагоциты активированные из перитонеального экссудата контроль 5,60+0,90 1,20±0,10 33,9±6,1

0,5 5,90+0,60 1,20±0,10 31,4±4,3

50,0 5,80+0,70 1,20±0,40* 27,1 ±4,1

Макрофаги резидентные контроль 0,50+0,10 0,38+0,10 2,2±0,2

0,5 0,90+0,02* 0,59+0,05* 4,7±1,1*

50,0 1,10+0,40 0,42+0,13 3,1±0,9

Макрофаги активированные контроль 21,20+5,50 13,40+2,40 28,2±3,1

0,5 12,10+0,80 8,20+1,10 26,1±2,3

50,0 20,70+3,50 6,90+2,10* 24,1±3,3

Примечания приведены средние значения 10 измерений; * - различие с контролем статистически значимо (р<0,05).

При стимуляции фагоцитов через СЗЬ - рецепторы (комплемент-зависимая активация фагоцитоза зимозаном) стимулирующее влияние ЦП на активированные фагоциты проявлялось у "физиологических" доз препарата, а по отношению к "спровоцированным" макрофагам - у "лечебных" доз, вызывавших подавление хемилюминесценции. При взаимодействии с живыми культурами стафилококка воздействие препарата в "физиологических" дозах на неактивированные фагоциты увеличивало их способность к генерации биооксидантов, но не влияло на активированные фагоциты.

Приведенные материалы позволяют заключить, что ЦП в концентрациях, соответствующих физиологическим, ' оказывает стимулирующее влияние на функционально-метаболическую активность как ГГМФ, так и мононуклеарных фагоцитирующих клеток. В концентрациях, используемых при лечебном применении, ЦП снижает самопроизвольную продукцию биоокислителей, но не влияет на микробицидную активность данных клеток. Эта особенность ЦП выгодно отличает его от антиоксидантов синтетического происхождения, подавляющих микробицидную активность фагоцитов, что может быть нежелательным при при ряде патологических процессов.

Изучалось влияние однократной и многократной физической нагрузки и церулоплазмина на подопытных животных (таблица 4).

Таблица 4 - Изменение количества лейкоцитов в периферической крови и массы надпочечников на фоне однократной и многократной физической нагрузки и введения церулоплазмина__

Группы животных Лейкоциты, -Ю'/л Масса надпочечников, мг

Контроль (п=10) 7,95+0,96 0,021±0,002

Однократная ФН (п=10) 12,20±2,10* 0,023+0,005

Однократная ФН+ЦП(п^!0) 8,90±1,20 0,020+0,004

Многократная ФН(п=10) 14,50±1,70* 0,03 5±0,001*

Многократная ФН+ЦП (п=10) 9,20+1,80 0,024±0,003

* - различие с контролем статистически значимо (р<0,05)

плавание, как насильственная для крыс процедура, являющаяся стрессорным фактором, вызывала неспецифическую реакцию организма. При однократной нагрузке статистически значимо повышалось содержание в крови лейкоцитов.

При продолжительной нагрузке эти изменения усиливались, что, видимо, было обусловлено раздражением органов кроветворения продуктами белкового обмена, сдвигом кислотно-щелочного равновесия в сторону кислых ионов, сопровождающихся так называемым «миогенным лейкоцитозом».

Длительные нагрузки не только вызывали лейкоцитоз, но и отмечалось увеличение массы надпочечников подопытных животных по сравнению с контролем, свидетельствующее об активации функций надпочечника. Введение ЦП препятствовало увеличению количества лейкоцитов при однократной и длительной ФН и повышению массы надпочечников при продолжительных нагрузках, сохранив эти показатели на уровне контрольной группы.

Изучение поведенческих (ориентировочных) реакций проводилось с помощью метода «открытое поле». Результаты исследования приведены в таблице 5.

Таблица 5 - Интегральные критерии изменений индивидуального поведения подопытных животных на фоне физической нагрузки и введения церулоплазмина ___

Группы животных Коэффициент Ориентировочная Эмоциональная

подвижности, % активность, % тревожность, %

Контроль 100 100 • 100

Однократная ФН 64,6±4,8* 56,5±7,1* 141,8±10,6*

Однократная ФН+ЦП 90,9±б,1 91,44:4,9 106,5±7,4

Многократная ФН 71,5±8,8* 87,5±5,7* 132,9±9,8*

Многократная ФН+ЦП 112,4±5,8* !!0,С±7,1 92,4±3,6*

Примечания

1 Приведены средние значения 10 измерений в каждой группе

2 * - различие с контролем статистически значимо (р<0,05).

Под воздействием однократной и многократной ФН у подопытных животных статистически значимо понижался «норковый» рефлекс и уменьшались горизонтальный и вертикальный компоненты спонтанно-двигательной активности. Нарушалась ориентировочно-исследовательская активность, снижался коэффициент подвижности, а эмоциональная тревожность, наоборот, возрастала. При длительных нагрузках эти изменения были менее выражены по сравнению с однократной. По-видимому, это было связано с адаптацией к физическим нагрузкам.

При сочетании однократной физической нагрузки с введением ЦП поведенческие реакции также несколько нарушались. В то же время ЦП предохранял животных от торможения поведенческих реакций, вызванных многократной физической нагрузкой. Эмоциональная тревожность несколько снизилась, а коэффициент подвижности возрос. Животные активно перемещались по горизонтальной плоскости. Увеличились количество заглядываний в норки, длина пробега.

Влияние препарата на процессы СРО при ФН оценивали по изменению ХЛ гомогенатов печени и мозга, а также концентрации одного из конечных продуктов ПОЛ - ТБК активных продуктов (таблица 6).

Таблица 6 - Влияние многократной физической нагрузки и церулоплазмина на хемилюминесценцию и содержание ТБК-активных продуктов в гомогенатах мозга и печени при физической нагрузке__

Группы ХЛ гомогената печени, ТБК - ХЛ гомогената мозга, % ТБК-

живот- % активные активные

ных Б I шах продукты в печени, % 1 шах продукты в мозге, %

Контроль 100 100 100 100 100 100

Много- Ш,5±5,1* 1 !2,9±5,2* 139,1+8,6* 128,4±4,9* 112,2±5,7* 132,5±7,5*

кратная ФН

ФН + ЦП 73,4±8,4** 81,6+8,4« 86,8+6,2** 114,9±4,0** 117,5±2,4 102,8±5Д**

*- различия с контрольной группой животных статистически значимы,

** - различия с группой животных, испытавших длительную физическую нагрузку,

статистически значимы (р<

Параметры ХЛ гомогенатов органов и плазмы крови животных

контрольной группы идентичны описанным в литературных источниках [Владимиров Ю.А., 2000; Фархутдинов P.P. и др., 2005]. Физическая нагрузка усиливала XJI гомогенатов мозга крыс. Введение ЦП, наоборот, снизило её интенсивность. В ткани печени наблюдались похожие изменения. Уровень содержания ТБК-активных продуктов в тканях мозга и печени у животных, длительно получавших ФН, повышался. Введение ЦП способствовало сохранению значений этого показателя на уровне контроля. Церулоплазмин обладает способностью нейтрализовать перекисные лйпидные радикалы в ткани мозга и печени при физической нагрузке.

Длительная физическая нагрузка повлияла и на процентное соотношение клеток крови подопытных животных (таблица 7).

Таблица 7 - Изменения морфологического состава периферической крови животных на фоне многократной физической нагрузки и введения церулоплазмина_

Группы животных Лейкоциты, %

нейтрофилы эозино-фильг моноциты лимфоциты

палочко-ядерные сегменто-ядерные

Контроль 0,80±0,09 18,5±1,7 4,5±0,6 2,8±0,6 74,3±4,1

Многократная ФН 4,30±2,20 13,7±4,3 5,7±0,1 3,9+0,9 89,8±6,3*

Многократная ФН+ЦП 0,90±ft08. 15,4±4,6 3,8±1,9 2,2±1,1 80,2±2,6

Примечание - см. таблицу 5.

Возросло количество палочкоядерных нейтрофилов и лимфоцитов. Количество сегментоядерных нейтрофилов изменилось незначительно. Также осталось почти без изменений число эозинофильных лейкоцитов. Введение ЦП оказывало нивелирующее влияние на количественные изменения состава лейкоцитов крови, вызванные длительной физической нагрузкой. ,

При оценке функционально-метабрлической активности фагоцитирующих клеток крови (нейтрофилы, моноциты) проводилось определение их поглотительной способности и уровня активации

кислородзависимого метаболизма в НСТ-тесте (таблица 8).

Таблица 8 - Изменения интенсивности фагоцитоза и кислородзависимого метаболизма клеток крови у животных на фоне многократной физической нагрузки и введения церулопдазмина__

• Группы Поглотительная активность Спонтанный НСТ-тест

животных фагоцитарный фагоцитарное % индекс

индекс, % число активации

Контроль 39,8±5,3 3,4±0,3 13,8±2,3 0,16±0,06

Многократная ФН 24,5±4,1* 2,2±0,2* 5,2±0,5* 0,07±0,01*

ФН+церулоплазмин 43,5±7,1 3,6±0,3 12,7*3,1 0,15±0,02

Примечание - см. таблицу 5

Как следует из таблицы 10, многократная ФН вызывала у животных как снижение числа активно фагоцитирующих клеток крови, так и интенсивности фагоцитоза, что свидетельствует об угнетении кислородзависимого метаболизма и генерации АФК фагоцитами крови. Введение ЦП нормализовало поглотительную активность фагоцитов крови, обеспечивало сохранение окислительной активности фагоцитов.

При исследовании спонтанной и индуцированной ЛЗХЛ цельной крови у животных, длительно получавших ФН, выявлено уменьшение крутизны нарастания ХЛ, максимальной интенсивности свечения и её светосуммы. Введение ЦП предупреждало эти нарушения (таблица 9).

Таблица 9 - Изменение хемилюминесценции цельной крови у подопытных животных на фоне многократной физической нагрузки и введения церулоплазмина _

Группы животных ХЛ цельной крови, %

спонтанная индуцированная

светосумма свечения максимальное свечение светосумма свечения максимальное свечение

Контроль 100 100 100 100

Многократная ФН 81,3±5,2* 42,9±1,2* 14,4±0,9* 16,6±0,8*

ФН + ЦП 94,9±6,5 89,9±9,3 82,5±9,7 96,7±2,3

Примечание - см. таблицу 5.

Как следует из таблицы 5 0, относительная емкость резерва функциональной активности фагоцитов крови на фоне многократной физической нагрузки значительно снизилась (почти на 80 %). При введении ЦП она сохранялась.

Таблица 10 - Сравнительная оценка изменений относительной емкости функционального резерва фагоцитов крови при многократной физической нагрузке и на фоне введения церулоплазмина__

Группы животных Imax ind ^max sp i у. е. ^max md Imax sp Imax so Относительная емкость резерва фагоцитов крови, %

Контроль 5,60±0,70 4,80±0Д0 100

Многократная ФН 0,37±0,050* 0,90±0,03» 17,5*

ФН+ЦП 4,90±0,30 4,60±0,40 94,9

Примечание - см. таблицу 5

В целом, приведенные данные указывают, что, несмотря на увеличение количества лейкоцитов, при многократных интенсивных ФН происходит угнетение скорости активации кислородзависимого метаболизма фагоцитов крови, их АФК-продуцирующей способности. Введение ЦП предупреждает эти изменения.

Подводя итоги проведенного исследования, можно сделать следующее заключение. Церулоплазмин обладает антиоксидантными свойствами, способен взаимодействовать с АФК и подавлять ПОЛ in vitro. Уникальность препарата заключается в том, что наряду с АОА он может модулировать образование активных метаболитов кислорода в фагоцитах in vitro и in vivo. Продукция кислородных радикалов активированными фагоцитами (супероксидный анион радикал, синглетная форма кислорода, перекись водорода, гипохлорит, оксид азота и др.) имеет микробицидное и цитотоксическое, а также иммунорегуляторное действие. Препарат оказывает подавляющее влияние только на процессы спонтанного синтеза биоокислителей, не вызывая его нарушения при осуществлении фагоцитами защитных реакций.

Церулоплазмин сдерживает развитие оксидативного стресса при физической нагрузке, при его применении снижается интенсивность ХЛ и содержание ТБК-активных продуктов в гомогенатах мозга и печени. Природные биоантиоксиданты, к которым относится ЦП, обладают рядом преимуществ перед синтетическими антиоксидантами. Имея сродство к живому организму, они нетоксичны, практически не имеют побочных эффектов.

Применение метода регистрации ХЛ клеточных систем дает возможность оценить иммуномодулирующне свойства ЦП в норме и при патологии, расширить область использования препарата. Хемилюминесцентные методы помогают своевременно выявить нарушение процессов СРО в организме при экстремальных воздействиях, выбрать тактику лечения и контролировать её эффективность. Регистрация ХЛ позволяет при минимальных затратах времени и средств определить влияние препарата на СРО, вести поиск биологически активных веществ с антиоксидантными свойствами.

Выводы

1 Церулоплазмин in vitro в модельных системах, в которых инициируются реакции образования радикалов кислорода и свободнорадикального перекисного окисления липидов, снижает интенсивность хемилюминесценции, подавляет продукцию активных форм кислорода и липопероксидацию.

2 Церулоплазмин in vitro при воздействии на интактные фагоцитирующие клетки - полиморфноядерные фагоциты и резидентные тканевые макрофаги в концентрациях, соответствующих физиологическим (0,5 мкг/мл), стимулирует функционально-метаболическую активность клеток: отмечается возрастание фагоцитарного показателя, уровня активации

кислородзависимого м^аиолизма к хсми л юм ¡шссцсшеин клеток, индуцированных объектами фагоцитоза.

3 При воздействии на активированные полиморфно-ядерные фагоциты и резидентные тканевые макрофаги церулоплазмин в концентрации 0,5 мкг/мл, и в большей степени - 50 мкг/мл, подавляет спонтанную активацию кислородзависимого метаболизма фагоцитов, но не угнетает функционально-метаболическую активность, индуцированную объектами фагоцитоза.

4 Интенсивная физическая нагрузка у животных сопровождается лейкоцитозом, которому сопутствует снижение функционально-метаболической активности и снижение функционального резерва фагоцитов крови. Введение церулоплазмина на фоне физической нагрузки уменьшает негативное влияние оксидативного стресса на фагоцитарные механизмы иммунной защиты.

5 Введение церулоплазмина предупреждает нарушение поведенческих реакций, ускорение процессов свободнорадикального окисления в гомогенатах мозга и печени крыс, подвергнутых интенсивным физическим нагрузкам.

Практические рекомендации

1 Церулоплазмин, как иммуномодулятор, может рассматриваться в качестве потенциального средства профилактики иммуносупрессии, сопровождающей интенсивные физические на1рузки, в частности, для коррекции функций фагоцитарного звена иммунной системы.

2 Антиоксидантные свойства церулоплазмина позволяют рекомендовать использование данного препарата для профилактики и коррекции нарушений процессов свободнорадикального окисления при физических нагрузках, сопровождающихся оксидативным стрессом.

3 Рекомендуется использование регистрации

хемилюминесценции клеточных систем для оценки иммуномодулирующих свойств церулоплазмина в норме и при патологии, а для определения антиокислительной активности препарата рекомендуется использовать модельные системы, генерирующие активные формы кислорода и в которых протекают реакции перекисного окисления липидов. Исследование хемилюминесценции крови может быть использовано для контроля состояния свободнорадикального окисления при назначении церулоплазмина.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Тевдорадзе С.И., Фархутдинов P.P., Медведев Ю.А. Физическая нагрузка, оксидативный стресс и коррекция церулоплазмином // Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека : сборник трудов 4-й национальной научно-практической конференции с международным участием. - Смоленск, 2005. - С. 373-374.

2 Фархутдинов P.P., Тевдорадзе С.И., Баймурзина Ю.Л., Фархугдинова JI.B., Азнабаева Ю.Г., Колпикова Ю.С., Абдрахманова Л.М., Габитова Д.М. Определение антиокислительной активности методом регистрации хемилюминесценции // Методы оценки антиоксидантной активности биологически активных веществ лечебного и профилактического назначения : сборник докладов научно-практического семинара. - М., 2005. -С. 98-146.

3 Фархутдинов P.P., Тевдорадзе С.И. Методики исследования хемилюминесценции биологического материала на хемилюминометре ХЛ -003 //Тамже.-С. 147-154.

4 Тевдорадзе С.И., Медведев Ю.А., Фархутдинов P.P. Влияние церулоплазмина на оксидативный стресс при физической нагрузке // Здравоохранение Башкортостана. - 2005. - № 7. - С. 200-201.

5 ТуЙ1 унов М.М., Фархутдинов P.P., Медведев Ю.А., Тевдорадзе С.И., Друх В.М., Лиховских В.А. Хемилюминесцентные методы исследования крови в клинической и экспериментальной иммунологии // Медицинская иммунология. - 2006. - Т. 8, № 2/3. - С. 427-428.

6 Тевдорадзе С.И., Туйгунов М.М., Медведев Ю.А., Фархутдинов P.P. Оксидативный стресс, функционально-метаболическая активность фагоцитов при физических нагрузках и коррекция церулоплазмином // Актуальные вопросы биологии и медицины : Сборник научных трудов. - Москва - Уфа, 2006. - С. 90-94.

7 Тевдорадзе С.И., Медведев Ю.А., Фархутдинов P.P. Влияние физической нагрузки на процессы свободнорадикального окисления и коррекция церулоплазмином // Медицинский вестник Башкортостана. -2006.-Т. 1, № 1.-С. 134-135.

8 Тевдорадзе С.И., Фархутдинов P.P., Медведев Ю.А., Туйгунов М.М. Коррекция оксидативного стресса церулоплазмином // Биоантиоксидант : тезисы докладов VII Международной конференции. - М., 2006. - С. 253-255.

Тевдорадзе Светлана Ивановна

Влияние церулоплазмина на фагоцитарные механизмы иммунной защиты и оксидативный стресс в условиях физической нагрузки (Экспериментальное исследование)

14.00.36 - «Аллергология и иммунология» 14.00.16 - «Патологическая физиология»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Отпечатано Экспресс-полиграфия «ALBA» 450000, РБ, г. Уфа, ул. Пушкина, 96, тел. (347) 274-80-85 Подписано к печати 21.12.2006 г.

Формат 60x84. 1/16 Гарнитура Times New Roman Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Тираж 100. Заказ № 194/06

Оглавление диссертации Тевдорадзе, Светлана Ивановна :: 2007 :: Уфа

Список сокращений и условных обозначений.

Введение

Обзор литературы.

Глава 1 Общее представление о свободнорадикальном окислении

Глава 2 Свободнорадикапьное окисление при физических нагрузках

Глава 3 Нарушение иммунитета при физических нагрузках

Глава 4 Хемилюминесцентный метод исследования свободнорадикального окисления в фагоцитирующих клетках

Глава 5 Церулоплазмин- иммуномодулирующие и е свойства.

Собственные исследования.—

Глава 6 Материалы и методы исследований.

Глава 7 Исследование влияния церулоплазмина на процессы свободнорадикального окисления и хемилюминесценцию модельных систем----------------------------------------------------------------—

Глава 8 Влияние церулоплазмина на функционально-метаболическую активность фагоцитирующих клеток разных видов in vitro

Глава 9 Влияние однократной и многократной физической нагрузки и церулоплазмина на развитие стресса.

Глава 10 Влияние однократной и многократной физической нагрузки и церулоплазмина на поведенческие реакции подопытных животных

Глава 11 Влияние многократной физической нагрузки и церулоплазмина на лейкоциты крови подопытных »

Глава 12 Влияние многократной физической нагрузки и введения церулоплазмина на процессы свободнорадикапьного окисления в организме подопытных животных.

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Тевдорадзе, Светлана Ивановна, автореферат

Актуальность проблемы

Согласно современным представлениям, физические нагрузки приводят к существенному изменению процессов иммунитета, варьирующему в зависимости от характера нагрузки, её продолжительности и интенсивности. В целом, интенсивные и длительные физические нагрузки угнетают иммунную систему, в то время как умеренные нагрузки её стимулируют. Высокие физические нагрузки способны обусловливать возникновение различных заболеваний и, ввиду этого, могут рассматриваться как модель иммунопатологии [160,166,169,187,188, 189, 190,195].

Ряд авторов [179, 186] считают, что реакция иммунной системы на физическую нагрузку напоминает нарушение иммунитета при патологических процессах, таких как травма, сепсис, ожоги, и имеет черты классического системного воспалительного ответа; сопровождается высвобождением медиаторов воспаления и, соответственно, включением активной фазы воспалительной реакции, обеспечивающейся активацией комплемента, выбросом провоспапительных цитокинов и выработкой других реактивных гуморальных факторов. Это, в конечном итоге, приводит к изменениям функциональной активности разных видов клеток, и в том числе фагоцитов. В то же время, механизмы, запускающие и влияющие на иммунный ответ при физической нагрузке, изучены недостаточно.

В работах последних лет [117,130, 181] показано изменение процессов свободнорадикального окисления (СРО) при физических нагрузках. Свободно-радикальное окисление - один из фундаментальных биологических процессов, обеспечивающих нормальную жизнедеятельность организма [17, 26, 101, 102, 134]. Свободные радикалы участвуют во многих химических, биохимических и биологических процессах, в обмене веществ, обеспечивают защитные реакции, разрушение чужеродных соединений, как поступающих извне, так и образующихся в организме [25]. Наиболее распространенные процессы СРО в организме - это образование активных форм кислорода (АФК) и перекисное окисление липидов (ПОЛ).

При действии многих неблагоприятных факторов - облучении, введении в организм некоторых лекарственных препаратов, стрессе, физическом перенапряжении - скорость СРО и количество свободных радикалов в живой системе меняются [11, 12, 80, 100]. Образующиеся в избыточном количестве свободные радикалы непосредственно взаимодействуют с органическими соединениями, что ведет к потере биологической активности белков, ферментов, нуклеиновых кислот и т.д. [38, 78]. Кроме того, продукты перекисного окисления липидов токсичны, ингибируют пролиферацию и созревание клеток, обладают канцерогенными свойствами [13].

Механизмы нарушения СРО при физических нагрузках многообразны и не до конца изучены. Так, например, отмечается, что при физических нагрузках возрастает потребление энергии и кислорода. Электрон-транспортная цепь митохондрий становится источником активных форм кислорода за счет усиления потока электронов [124]. Роль митохондрий в оксидативном стрессе доказывает факт их повреждения после длительных и интенсивных нагрузок [19,124]. Кроме того, избыточное образование активных форм кислорода может быть связано с выбросом нейтрофилов в кровь при физических нагрузках, их активацией на фоне снижения антиокислительной активности плазмы [194].

Показано, что при физических нагрузках в крови происходит увеличение количества инициаторов свободнорадикального окисления [117]. С помощью ЭПР было обнаружено увеличение оттока от работающей мышцы свободных радикалов активных форм кислорода, перекисей липидов, продуктов редокс-цепи, адреналина, миоглобина и других инициаторов СРО [117,130,131].

Поддержание СРО на оптимальном уровне играет исключительную роль в профилактике, лечении и реабилитации лиц, подвергшихся значительным физическим и психоэмоциональным нагрузкам. В этой связи возрастает внимание к антиоксидантам (АО) - препаратам, сдерживающим процессы свободнорадикального окисления.

В частности, изучалось влияние антиоксидантов на механизмы иммунных нарушений и свободнорадикальное окисление при физических нагрузках разной интенсивности и продолжительности. Такие антиоксиданты, как витамины Е и С, увеличивали уровень интерлейкинов-1 и -6, содержание CD4-, CD8-, Т-клеток и киллеров, ингибировали высвобождение интерлейкина-12 в сокращающейся мышце [128, 170, 191]. Прямым доказательством взаимосвязи между иммунной системой и изменениями СРО служит увеличение продукции радикала оксида азота в макрофагах при экспериментальных физических нагрузках у мышей [147].

Хотя нарушение свободнорадикального окисления при физической нагрузке можно считать доказанным, тем не менее, эффективность использования антиоксидантов различными исследователями расценивается неоднозначно [3, 30, 106, 116]. В этой связи, поиск средств, регулирующих процессы СРО и иммунный ответ, является актуальной проблемой.

Весьма перспективным представляется применение натуральных антиоксидантов, к тому же обладающих иммунотропными свойствами, к которым относятся препараты крови, в частности, церулоплазмин (ЦП). Церулоплаз-мин представляет собой медьсодержащий фермент альфа-глобулиновой фракции сыворотки крови. Препарат стимулирует гемопоэз, уменьшает интоксикацию и иммунодепрессию, связывает супероксидные радикалы и препятствует перекисному окислению липидов клеточных мембран [7, 14, 18, 51]. В тоже время, комплексные исследования влияния ЦП на различные механизмы иммунитета, в частности, фагоцитарные, и процессы свободнорадикального окисления при физических нагрузках не проводились.

Большое значение для правильного построения тренировочного процесса имеет разработка экспресс-методов оценки состояния лиц, подвергнутых физической нагрузке, и определение восстановления после окончания нагрузки. Авторы некоторых работ предлагают в этих целях определение продуктов СРО, в частности, продуктов перекисного окисления липидов в моче - пропанола, бутанола, пентанала, гексанала, гептанала, октанала, МДА и ацетона [132, 150]. Однако, эти методы трудоемки, требуют специальных лабораторных условий и больших затрат времени.

Для оценки процессов СРО перспективной является регистрация хеми-люминесценции (ХЛ) - свечения, возникающего при взаимодействии радикалов [8, 20, 23, 94, 101, 102, 103, 108]. Данные о возможности использования хемилюминесцентных методов исследования при рациональном построении тренировочного процесса и оценки адекватности физических нагрузок малочисленны [102]. Указывается на различную степень изменения ХЛ мочи у спортсменов и нетренированных лиц при интенсивной и умеренной нагрузке.

Хемилюминесцентные методы дают возможность не только выявить нарушение процессов СРО в организме, но и судить о про- или антиокислительной активности (АОА) препаратов. Так. в экспериментах in vitro можно по изменению интенсивности ХЛ при добавлении препаратов в модельные системы, имитирующие наиболее распространенные в организме реакции СРО - образование активных форм кислорода и перекисное окисление липидов изучить механизм их действия и активность. При введении препаратов in vivo - по изменению свечения гомогенатов органов, сыворотки и цельной крови подопытных животных в норме и при патологии оценить возможность коррекции СРО [94, 102].

С учетом вышеизложенного, изучение состояния фагоцитарного звена иммунной системы и свободнорадикального окисления при физической нагрузке, разработка экспресс-методов выявления их нарушений, оценка возможности использования с целью профилактики и коррекции таких нарушений церулоплазмином представляет научный и практический интерес.

Цель исследования

Оценить влияние церулоплазмина на фагоцитарные механизмы иммунной защиты и оксидативный стресс при физической нагрузке у подопытных животных и возможность его применения как средства профилактики выявленных нарушений.

Задачи исследования

1 Оценить влияние препарата церулоплазмина на процессы свободно-радикального окисления in vitro в модельных системах, в которых протекают реакции перекисного окисления липидов и генерация активных форм кислорода.

2 Исследовать in vitro влияние церулоплазмина на функционально-метаболическую активность разных видов клеток фагоцитарного звена иммунной системы (интактные и активированные полиморфноядерные и моно-нуклеарные фагоциты).

Научная новизна

Впервые проведена сравнительная оценка влияния церулоплазмина на процессы свободнорадикального окисления в модельных системах in vitro и при физических нагрузках у подопытных животных in vivo. Определено влияние церулоплазмина на уровень спонтанной и индуцированной активации кислородзависимого метаболизма интактных и активированных поли-морфноядерных и мононуклеарных фагоцитов, позволившее уточнить механизмы иммунотропного действия препарата.

В условиях интенсивной физической нагрузки, сопровождающейся ок-сидативным стрессом, изменяется состав и функционально-метаболическая активность фагоцитов крови. Показана возможность предупреждения выявленных нарушений введением препарата церулоплазмина.

Обоснована возможность применения хемилюминесцентных методов для экспресс-оценки состояния свободнорадикального окисления и кислород-зависимого метаболизма фагоцитов при оксидативном стрессе.

Научно-практическая значимость работы

Полученные результаты исследования расширяют представление о влиянии церулоплазмина на фагоцитарные механизмы иммунной защиты и процессы свободнорадикального окисления при физической нагрузке. Исследование хемилюминесценции крови позволяет контролировать состояние свободнорадикального окисления в организме при физической нагрузке и введении препарата церулоплазмина.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты исследования внедрены в практическую деятельность иммунологической лаборатории городской клинической больницы № 18 г. Уфы и Центральной научно-исследовательской лаборатории Башкирского государственного медицинского университета.

Основные положения, выносимые на защиту

1 Церулоплазмин в модельных системах, в которых протекают реакции перекисного окисления липидов и генерации активных форм кислорода, проявляет антиоксидантные свойства.

2 Церулоплазмин in vitro в концентрациях, соответствующих нормальному содержанию его в крови, стимулирует функционально- метаболическую активность интактных поли- и мононуклеарных фагоцитов, а в дозах. близких к лечебным. - снижает у активированных поли- и мононуклеарных фагоцитов способность к генерации активных форм кислорода.

3 Интенсивная многократная физическая нагрузка у подопытных животных сопровождается стрессовой реакцией (увеличением массы надпочечников. лейкоцитозом, изменением поведенческих реакций) и усилением процессов свободнорадикального окисления в мозге и печени, цельной крови. Введение препарата церулоплазмина уменьшает негативное влияние стресса, снижает уровень изменений интегральных показателей общего состояния и способствует нормализации свободнорадикального окисления.

Апробация работы

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации (протокол от 20.10.06 г. № 5).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 122 страницах, состоит из введения, обзора литературы (5 глав), собственных исследований (7 глав), заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа содержит 16 таблиц, 13 рисунков, 1 схему. Список литературы включает 199 источников (111 отечественных и 88 зарубежных).

Заключение диссертационного исследования на тему "Влияние церулоплазмина на фагоцитарные механизмы иммунной защиты и оксидативный стресс в условиях физической нагрузки (экспериментальное исследование)"

Выводы

1 Церулоплазмин in vitro в модельных системах, в которых инициируются реакции образования радикалов кислорода и свободнорадикального пе-рекисного окисления липидов, снижает интенсивность хемилюминесценции, подавляет продукцию активных форм кислорода и липопероксидацию.

2 Церулоплазмин in vitro при воздействии на интактные фагоцитирующие клетки - полиморфноядерные фагоциты и резидентные тканевые макрофаги в концентрациях, соответствующих физиологическим (0,5 мкг/мл) стимулирует функционально-метаболическую активность клеток: отмечается возрастание фагоцитарного показателя, уровня активации кислородзависи-мого метаболизма и хемилюминесценции клеток, индуцированных объектами фагоцитоза.

5 Введение церулоплазмина предупреждает нарушение поведенческих реакций, ускорение процессов свободнорадикального окисления в гомогена-тах мозга и печени крыс, подвергнутых интенсивным физическим нагрузкам.

100

Практические рекомендации

1 Церулоплазмин, как иммуномодулятор, может рассматриваться в качестве потенциального средства профилактики иммуносупрессии, сопровождающей интенсивные физические нагрузки, в частности, для коррекции функций фагоцитарного звена иммунной системы.

2 Антиоксидантные свойства церулоплазмина позволяют рекомендовать использование данного препарата для профилактики и коррекции нарушений процессов свободнорадикапьного окисления при физических нагрузках, сопровождающихся оксидативным стрессом.

3 Рекомендуется использование регистрации хемилюминесценции клеточных систем для оценки иммуномодулирующих свойств церулоплазмина в норме и при патологии, а для определения антиокислительной активности препарата рекомендуется использовать модельные системы, генерирующие активные формы кислорода и в которых протекают реакции пере-кисного окисления липидов. Исследование хемилюминесценции крови может быть использовано для контроля состояния свободнорадикапьного окисления при назначении церулоплазмина.

101

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2007 года, Тевдорадзе, Светлана Ивановна

1. Абрамов, В.В. Взаимодействие иммунной и нервной систем. Новосибирск : Наука, 1988. - 166 с.

2. Азнабаева, Ю.Г. Влияние фитосборов и физической нагрузки на сво-боднорадикальное окисление / Ю.Г. Азнабаева, P.P. Фархутдинов, Г.Г. Максимов // Эфферентная терапия. 2002. - Т. 8, № 2. - С. 53-56.

3. Активированные кислородные метаболиты в биологических окислительных реакциях: влияние фитопрепаратов / Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков, Н.И. Микичур и др. // Бюллетень СО РАМН. 1992. - № 4. -С. 112-117.

4. Александровский, Ю.А. Перекисное окисление липидов при неврозах / Ю.А. Александровский, М.В. Поюровский, Г.Г. Незнамов. М. : Наука, 1991,- 170 с.

5. Алехин, Е.К. Иммунотропные свойства лекарственных средств / Е.К. Алехин, Д.Н. Лазарева, C.B. Сибиряк. Уфа, 1993. - 208 с.

6. Араратян, Э.А. Влияние адреналина на перекисное окисление липидов у интактных крыс / Э.А. Араратян // Журнал экспериментальной и клинической медицины. 1984. - Т. 21, № 5. - С. 482-487.

7. Асельдерова, А.Ш. Иммунопротекторный эффект церулоплазмина в остром периоде у больных, перенесших критические состояния различного генеза / А.Ш. Асельдерова // Анестезиология и реаниматология. 1992. - № 2. - С. 43.

8. Афонин, Г.Б. Клинические аспекты применения хемилюминесцентного анализа / Г.Б. Афонин, В.К. Мойданник // Врачебное дело. 1990. - № 9.-С. 73-76.

9. Баймурзина, Ю.Л. Влияние продуктов пчеловодства на процессы сво-боднорадикального окисления в норме и в экстремальных условиях : автореф. дис. канд. биол. наук: 14.00.16/БГМУ. -Уфа, 2002.-22 с.

10. Барабой. В.А. Механизмы стресса и перекисное окисление липидов / В.А. Барабой // Успехи соврем, биологии. 1991. - Т. 111, № 6. -С. 923-931.

11. Барабой. В.А. Окислительно-антиоксидантный гомеостаз в норме и патологии / В.А. Барабой, Д.А. Сутковой. Киев: Чернобыльинтерин-форм, 1997.-413 с.

12. Барабой, В.А. Роль и место перекисного окисления в механизме стресса / В.А. Барабой // Стресс и иммунитет. JL, 1989. - 221 с.

13. Барабой, В.А. Роль перекисного окисления в механизме стресса /

14. B.А. Барабой // Физиол. журн. 1989. - Т. 35, № 5. - С. 85-97.

15. Берлинских, Н.К. Антиоксидантное и иммуномодулирующее воздействие церулоплазмина при экспериментальной гриппозной инфекции / Н.К. Берлинских, З.Д. Савцова, O.A. Санина // Бюл. экспер. биол. -1994. Т. 118, № 9. - С. 285-287.

16. Бизюкин, A.B. Новый методический подход к изучению окислительного метаболизма фагоцитирующих клеток / A.B. Бизюкин,

17. C.К. Соодааева // Пульмонология. 1995. - № 1. - С. 46-49.

18. Болдырев, A.A. Окислительный стресс и мозг / A.A. Болдырев // Соро-совский образовательный журнал. 2001. - № 4. - С. 21-28.

19. Бурлакова, Е.Б. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты / Е.Б. Бурлакова, Н.Г. Храпов // Успехи химии. 1985. -Т. 54, №9.-С. 1540-1558.

20. Васильев, В.Б. Дисмутирование супероксидных радикалов церуло-плазмином детали механизма / В.Б. Васильев, A.M. Качурин, Н.В. Сорока // Биохимия. - 1988. - Т. 53, № 12. - С. 2051.

21. Величковский, Б.Т. Свободнорадикальное окисление как звено срочной и долговременной адаптации организма к факторам окружающей среды / Б.Т. Величковский // Вестник РАМН. 2001. - № 6. - С. 45-52.

22. Владимиров, Ю.А. Оценка антиокислительной и антирадикальной активности веществ и биологических объектов с помощью железоинициированной хемилюминесценции / Ю.А. Владимиров, МП. Шерст-нев, Т.К. Азимбаев // Биофизика. 1992. - Т. 37, № 6. - С. 1041-1047.

23. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, A.M. Арачков. М. : Наука, 1972. - С. 252.

24. Владимиров, Ю.А. Роль нарушений свойств липидного слоя мембран в развитии патологического процесса / Ю.А. Владимиров // Патол. фи-зиол. и эксперим. терапия. 1989. - № 4. - С. 7-19.

25. Владимиров, Ю.А. Свечение, сопровождающее биохимические реакции / Ю.А. Владимиров // Соросовский образовательный журнал. -1999,-№6.-С. 25-32.

26. Владимиров, Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран // Биофизика. 1987. - Т. 32, № 5. - С. 830-844.

27. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах / Ю.А. Владимиров // Соросовский образовательный журнал. 2000. - № 12.-С. 13-19.

28. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю.А. Владимиров // Вестн. РАМН. 1998. - № 7. - С. 43-51.

29. Владимиров, Ю.А. Хемилюминесценция клеток животных / Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнев. М., 1989. - 176 с. - (Итоги науки и техники. Сер. Биофизика; Т. 24).

30. Владимиров, Ю.А. Электронный парамагнитный резонанс и хемилюминесценция прямые методы исследования свободных радикалов и реакций, в которых они участвуют / Ю.А. Владимиров // Эфферентная терапия. - 1999. - № 4. - С. 18-27.

31. Влияние бемитила, этомерзола и тиетазола на индивидуальное поведение мышей / О.Н. Антрошенко, А.Н. Лосев, Р Ф. Садыков и др. // Здравоохранение Башкортостана. 1999. - № 2. - С. 53-54.

32. Влияние лекарственных средств на процессы свободно-радикального окисления / Е.К. Алехин, А.Ш. Богданова, В.В. Плечев, P.P. Фархутди-нов. Уфа, 2002. - 288 с.

33. Влияние церулоплазмина на количественный состав и функциональную активность лейкоцитов у интактных животных / С.А. Кантюков, В.И. Сергиенко, J1.B. Кривохижина, М.В. Осиков // Эфферентная терапия. 2003. - № 2. - С. 56-59.

34. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз / Н.К. Зенков, Е.Б. Меньшикова, H.H. Вольский и др. // Успехи современной биологии. -1999. № 5. - С. 440.

35. Воскресенский, О.Н. Биоантиоксиданты / О.Н. Воскресенский, В.Н. Бобырев // Вопросы мед. химии. -1992. Т. 38, № 4. - С. 21.

36. Голиков, А.ГТ. Механизмы активации перекисного окисления липидов и мобилизации эндогенного антиоксиданта а-токоферола при стрессе / А.П. Голиков, Б.В. Давыдов, С.Б. Матвеев // Вопросы медицинской химии. 1987. - № 1. - С. 47-50.

37. Добротина, H.A. Влияние полиоксидония и нативных иммуномодуля-торов на иммунологические реакции in vitro / H.A. Добротина, M.B. Прохорова, Ж.А. Казацкая // Иммунология. 2005. - № 26. - С. 152156.

38. Добротина, H.A. Иммуномодулирующая активность и полифункциональность церулоплазмина / H.A. Добротина, А.Ю. Ругницкй, Е.И. Кузьмина // Иммунология. 1998. - № 5. - С. 49-50.

39. Дубинина, Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса / Е.Е. Дубинина // Вопросы медицинской химии. 2001. - Т. 47, № 6. - С. 561 -681.

40. Дюмаев, K.M. Антиоксиданты в терапии и профилактике патологии ЦНС / K.M. Дюмаев, Т.А. Воронина, Л.Д. Смирнов. М. : Изд. Ин-та биомедхимии, 1995. - 271 с.

41. Ерин, А.Н. Свободнорадикальные механизмы в церебральных патологиях / А.Н. Ерин, Н.В. Гуляева, Е.В. Никушкин // Бюл. эксперим. биологии. -1994. № 10. - С. 343-348.

42. Журавлев, А.И. Теоретические и методические основы биохемилюми-несценции / А.И.Журавлев. М., 1986. - 310 с.

43. Завалишин, И.А. Оксидантный стресс общий механизм повреждения при заболеваниях нервной системы / И.А. Завалишин, М.Н. Захарова // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. - 1996. - № 2. -С. 111-114.

44. Зайцев, В.Г. Модельные системы перекисного окисления липидов и их применение для оценки антиоксидантного действия препаратов : авто-реф. дис. . канд. мед. наук : 14.00.16 / ВГМУ. Волгоград, 2001. -24 с.

45. Западнюк, И.П. Лабораторные животные, их разведение, содержание и использование в эксперименте / И.П. Западнюк, В.И. Западнюк, Е.А. Захария. Киев, 1984. - 56 с.

46. Зборовская, И.А. Антиоксидантная система организма, ее значение в метаболизме, клинические аспекты / И.А. Зборовская, М.В. Банникова // Вестн. РАМН. 1995. - № 6. - С. 53-60.

47. Зенков, Н.К. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах / Н.К. Зенков, Е.Б. Меньшикова // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, № 3. - С. 286-296.

48. Зенков, Н.К. Окислительный стресс. Диагностика, терапия, профилактика / Н.К. Зенков, Е.Б. Меньшикова, С.М. Шергин. Новосибирск, 1993. - 181 с.

49. Зенков, Н.К. Практические замечания по регистрации хемилюминесценции фагоцитирующих клеток / Н.К. Зенков, Е.Б. Меньшикова // Бюл. СО АМН СССР. 1990. - № 2. - С. 72-77.

50. Зозуля, Ю.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита при патологии головного мозга / Ю.А. Зозуля, В.А. Барабой, Д.А. Сутковой. М. : Знание-М, 2000. - 344 с.

51. Иммунодиагностика и иммунокоррекция в клинической практике / под ред. И.Д. Столярова. СПб. : СОТИС, 1999. - 176 с.

52. Иммуномодуляторы: справочник для врачей / C.B. Сибиряк, Р.Ф. Са-дыков, Р.Ш. Магазов, С.А. Сергеева. Уфа : РИО ГУП «Иммунопрепа-рат», 1999.- 145 с.

53. Исрафилов, А.Г. Получение церулоплазмина из отходов производства препаратов крови (Экспериментально-техническое исследование): Дис. в виде науч. докл. . канд. мед. наук : 14.00.36 / Уфимский НИИВС. -М., 1993.-22 с.

54. Кетлинский, С.А. Эндогенные иммуностимуляторы f С.А. Кетлинский, A.C. Симбирцев, A.A. Воробьев. СПб. : Гиппократ, 1992. - 186 с.

55. Клебанов, Г.И. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов / Г.И. Клебанов, И.В. Баба-бенкова, Ю.О. Тесемин // Лаб. дело. 1988. - № 5. - С. 59-62.

56. Клиническая иммунология и аллергология : учеб. пособие для системы послевуз. подгот. врачей / A.B. Караулов, А.М. Земсков, В.М. Земсков; под ред. A.B. Караулова. М. : Мед. информ. агентство, 2002. - 650 с.

57. Контроль перекисного окисления липидов / В.Н. Ушкалова, Н.В. Иоа-нидис, Г.Д. Кадочникова и др.. Новосибирск : Изд-во Новосиб. унта, 1993.- 179 с.

58. Корнева, Е.А. Физиологические механизмы влияния стресса на иммунную систему / Е.А. Корнева, Е.К. Шхинек // Вестн. АМН СССР. 1985. - № 8. - С. 44-50.

59. Куликов, В.Ю. Реакция перекисного окисления липидов в процессах адаптации и патологии / В.Ю. Куликов // Бюл. СО АМН СССР. 1985. -№5.-С. 58.

60. Лапач, С.Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях / С.Н. Лапач, A.B. Чубенко, П.Н. Бабич. Киев : Морион, 2000. -320 с.

61. Малышев, И.Ю. Стресс, адаптация и оксид азота / И.Ю. Малышев, Е.Б. Манухина // Биохимия. 1998. - Т. 63, № 7. - С. 992 - 1006.

62. Маянский, А.Н. Клинические аспекты фагоцитоза / А.Н. Маянский, О.И. Пикуза. Казань, 1993. - 192 с.

63. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск : Наука, 1989. - 344 с.

64. Маянский, А.Н. Реактивная хемилюминесценция в системе фагоцитоза / А.Н. Маянский, А.Л. Невмятуллин, И.В. Чеботарь // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1987. - № 7. - С. 109 -115.

65. Медведев, В.В. Клиническая лабораторная диагностика : справочник для врачей / В.В. Медведев, Ю.З. Волчек. СПб. : Гиппократ, 1997. -200 с.

66. Медведев, Ю.А. Неспецифические механизмы и факторы иммунитета / Ю.А. Медведев, В.В. Сперанский, С.Н. Хунафин. Уфа. 1994. - 32 с.

67. Медведев, Ю.А. Иммунные основы патогенеза, иммунодиагностика и иммунотерапия при аллергической патологии легких / Ю.А. Медведев, Ш.З. Загидуллин, М.М. Алсынбаев. Уфа : РИО ГУП «Иммунопрепа-рат», 1999. - 124 с.

68. Медведев, Ю.А. Основы иммунных и иммунонаправленных методов терапии и профилактики / Ю.А. Медведев, М.М. Алсынбаев. Уфа : Иммунопрепарат, 2000. - 84 с.

69. Меерсон, Ф.З. Предупреждение стрессорных повреждений организма антиоксидантами и ß-блокатором индералом / Ф.З. Меерсон, В.И. Павлов, Э.Н. Коробейникова // Вопр. мед. химии. 1980. - № 6. - С. 827832.

70. Меерсон, Ф.З. Адаптация к стрессорным ситуациям и стресс-лимитирующие системы / Ф.З. Меерсон // Физиология адаптационных процессов. М.: Наука, 1986. - С. 521-631.

71. Меерсон, Ф.З. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам / Ф.З. Меерсон, М.Г. Пшенникова. М. : Медицина, 1988. -253 с.

72. Меерсон, Ф.З. Адаптационная медицина: механизмы и защитные эффекты адаптации. М.: Hypoxia Medical LTD, 1993. - 331 с.

73. Меньшикова, Е.Б. Антиоксиданты и ингибиторы окислительных процессов / Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, № 4. - С. 442-445.

74. Мерзляк, М.Н. Активированный кислород и окислительные процессы в мембранах растительной клетки / М.Н. Мерзляк // Итоги науки и техники. Сер. Физиология растений. 1989. - Т. 6 - 168 с.

75. Мешкова, Р.Я. Иммунопрофилактика (руководство для врачей) / Р.Я. Мешкова. Смоленск, 1999. - 256 с.

76. Мид, Дж. Свободнорадикальные механизмы повреждения липидов и их значение для клеточных мембран / Дж. Мид // Свободные радикалы в биологии : пер. с англ. / под ред. У. Прайора. М. : Мир, 1979. -Т. 2. - С. 68-87.

77. Новиков, Д.К. Оценка иммунного статуса / Д.К. Новиков, В.И. Новикова. Москва - Витебск, 1996. - 281 с.

78. Осиков, М.В. Патофизиологическая роль церулоплазмина при лейкоцитозах и лейкопениях : автореф. дис. . канд. мед. наук : 14.00.16 / ЧелГМУ. Челябинск, 2003. - 22 с.

79. Осипов, А.Н. Активированные формы кислорода и их роль в организме / А.Н. Осипов, O.A. Азизова, Ю.А. Владимиров // Успехи биол. химии. 1990.-Т. 31.-С. 180-208.

80. Панин, JI.E. Биохимические механизмы стресса / Л.Е.Панин. Новосибирск : Наука, 1983. - 233 с.

81. Перекисное окисление и стресс / В.А. Барабой, И.И. Брехман, В.Г. То-лотин, Ю.Б. Кудряшов. СПб.: Наука, 1992. - 148 с.

82. Петров, Р.В. Оценка иммунного статуса человека при массовых обследованиях : Методические рекомендации для научных работников и врачей практического здравоохранения / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 1992. - № 6. - С. 51-52.

83. Пикуза, О.И. Клинические аспекты применения хемилюминесцентного анализа / О.И. Пикуза, Е.И. Адо, В.Ю. Делян // Казан, мед. журнал. -1996,- №4. -С. 298-300.

84. Подшивалов, В.П. Экспериментальная психофармакология агрессивного поведения / В.П. Подшивалов. Л., 1986. - 174 с.

85. Применение хемилюминесценции для прогнозирования гнойно-воспалительных осложнений при роже и ангине / В.М. Фролов, H.A. Пересадин, Г.М. Ларионов и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 1993. - № 3. - С. 29-31.

86. Пшенникова, М.Г. Адаптация к физическим нагрузкам / М.Г. Пшенни-кова // Руководство по физиологии. Физиология адаптационных процессов.-М. : Наука, 1986.-С. 124-221.

87. Пшенникова, М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии / М.Г. Пшенникова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2000. - № 2. - С. 24-31.

88. Пшенникова, М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии (продолжение) / М.Г. Пшенникова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2000.- № 3.- С. 20-26.

89. Пшенникова, М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии (продолжение) / М.Г. Пшенникова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2000. - № 4,- С. 21-31.

90. Пшенникова, М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии (продолжение) / М.Г. Пшенникова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2001. - № 1.- С. 26-31.

91. Пшенникова, М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии (продолжение) / М.Г. Пшенникова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2001. - № 2. - С. 28-32.

92. Рылова, M.J1. Методы исследования хронического действия вредных факторов среды в эксперименте / М.Л. Рылова. — М. : Медицина, 1964. -230 с.

93. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров, O.A. Ази-зова, А.И. Деев и др.. — М., 1991. 249 с. - (Итоги науки и техники. Сер. Биофизика; Т. 29).

94. Скулачев, В.П. Кислород в живой клетке: добро или зло / В.П. Скула-чев // Соросовский образовательный журнал. 1996. - № 3. - С. 4-10.

95. Стальная, И.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии. М., 1977. - С. 66.

96. Стефани, Д.В. Иммунология и иммунопатология детского возраста / Д.В. Стефани, Ю.Е. Вельтищев. М.: Медицина, 1996. - 384 с.

97. Туркин, В.В. Иммуноферментный анализ церулоплазмина / В В. Тур-кин, И.В. Дробот // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиологии. -1991.-№7.-С. 66-69.

98. Условия оптимальной продукции активных форм кислорода поли-морфноядерными лейкоцитами / М.М. Поцелуева, И.А. Чухлова, Б.И. Медведев, Ю.В. Евтодиенко // Биофизика. 1995. - № 6. - С. 1259-1264.

99. Фархутдинов, P.P. Хемилюминесценция крови и мочи при типовых патологических процессах: автореф. дис. . д-ра мед наук. Казань, 1988.-38 с.

100. Фархутдинов, P.P. Хемшпоминисцентные методы исследования свободнорадикального окисления в биологии и медицине / P.P. Фархутдинов, В.А. Лиховских. Уфа, 1995. - 92 с.

101. Фархутдинов, P.P. Биоантиоксиданты и проблемы их применения в клинической практике / P.P. Фархутдинов, Ш.З. Загидуллин, Н.Ф Абдрашитова // Здравоохранение Башкортостана. 1996. - № 1 - С. 4148.

102. Федин, А.И. Оксидантный стресс и применение антиоксидан-тов в неврологии / А.И. Федин // Нервные болезни. 2002. - № 1. - С. 15-18.

103. Хаитов, P.M. Иммуномодуляторы и некоторые аспекты их клинического применения / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Клиническая медицина. -1996. № 8. - С. 7-12.

104. Хаитов, P.M. Иммунодиагностика и иммунотерапия нарушений иммунной системы / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Практикующий врач.- 1997,-№9.-С. 5-13.

105. Храпова, Н.Г. Токоферолы и убихиноны как природные анти-оксиданты / Н.Г. Храпова // Методы оценки антиоксидантной активности биологически активных веществ лечебного и профилактического назначения : сб. докл. М., 2004. - С. 51-75.

106. Церулоплазмин : влияние на функции нейтрофилов, пролиферацию лимфоцитов и продукцию цитокинов / А.В. Полевщиков, М.А. Медведский, Е.Т. Захарова, М.М. Шавловский // Медицинская иммунология. 2001. - № 2. - С. 128-129.

107. Allen, R.G. Oxidative stress and gene regulation / R.G. Allen, M. Tresini // Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol. 28. - P. 463 - 499.

108. Antioxidant supplementation and tapering exercise improve exercise-induced antioxidant response /1. Margaritis, S. Palazzetti, A.S. Rousseau etal. // Journal of the American College of Nutrition. 2003. - Vol. 22, № 2. -P. 147-156.

109. Antioxidant supplementation does not attenuate oxidative stress at high altitude I A.W. Subudhi, K.A. Jacobs, I.A. Hagobian et al. II Aviation, space, and environmental medicine. 2004. - Vol. 75, № 10. - P. 881888.

110. Antioxidant supplementation prevents exercise-induced lipid peroxidation, but not inflammation, in ultramarathon runners / A. Mastaloudis, J.D. Morrow, D.W. Hopkins et al. // Free radical biology & medicine. 2004. -Vol.36, № 10.-P. 1329- 1341.

111. Antioxidants: an integrative approach / P.A. Lachance, Z. Nakat, W.S. Jeong//Nutrition.-2001. Vol. 17, № 10. - P. 835-838.

112. Bailey, D.M. Regulation of free radical outflow from an isolated muscle bed in exercising humans / D.M. Bailey, I.S. Young, J. McEneny et al. //Am. J. Physiology.-2004. Vol.287, №4.-P. 1689-1699.

113. Bejma, J. Free radical generation and oxidative stress with ageing and exercise: differential effects in the myocardium and liver / J. Bejma, P. Ramires, L.L. Ji // Acta physiologica Scandinavica. 2000. - Vol. 169, № 4. -P. 343-351.

114. Binding and inhibition of myeloperoxidase (MPO): a major function of ceruloplasmin? / M. Segelmark, B. Persson, T. Hellmark, J. Wieslander // Clin. Exp. Immunol. 1997. - Vol. 108, № 1. - P. 167-174.

115. Braun. W.A. Influence of carbohydrate delivery on the immune response during exercise and recovery from exercise / W.A. Braun, S.P. von Duvillard // Nutrition. 2004. - Vol. 20, № 7-8. - P. 645-650.

116. Burgin R. Repeated swim stress and peripheral; benzodiazepines receptors / R. Burgin, R. Weizman, M. Gavish //Neuropsychobiology. 1996. - Vol. 33.-P. 28-31.

117. Davies, K.J. An overview of oxidative stress / K.J. Davies // IUBMB life. 2000. - Vol. 50, № 4-5. - P. 241-244.

118. Di Meo, S. Mitochondria in exercise-induced oxidative stress / S. Di Meo, P. Venditti // Biological signals and receptors. 2001. - Vol. 10, № 1/2.-P. 125-140.

119. Effect of a herbal yeast food supplement and long-distance running on immunological parameters / P.W. Joller, H.I. Joller-Jemelka, B. Bechler et al. // Brit. J. Sports Medicine. 1990. - Vol. 24, № 2. - P. 103-112.

120. Effect of vitamin supplementation on cytokine response and on muscle damage after strenuous exercise / E.W. Petersen, K. Ostrowski, T. Ibfelt et al. // Am. J. Physiology. 2001. - Vol. 280, № 6. - P. 1570-1575.

121. Endurance exercise results in DNA damage as detected by the comet assay / A. Mastaloudis, T.W. Yu, R.P. O'Donnell et al. // Free radical biology & medicine. 2004. - Vol. 36, № 8. - P. 966-975.

122. EPR spectroscopic detection of free radical outflow from an isolated muscle bed in exercising humans / D.M. Bailey, B. Davies, I.S. Young et al. // J. Appl. Physiol. -2003. Vol. 94, № 5. - P. 1714-1718.

123. Evaluation of autoantibodies against oxidized LDL (oLAB) and blood antioxidant status in professional soccer players / K. Kempa, A. Sobczak, E. Sadowska-Krepa et al. // Int. J. of sports medicine. 2005. - Vol. 26, № 1. -P. 71-78.

124. Exercise and immune function: effect of ageing and nutrition / B.K. Pedersen, H. Bruunsgaard, M. Jensen et al. // The Proceedings of the Nutrition Society. 1999. - Vol. 58, № 3. - P. 733-742.

125. Exercise and the immune system—influence of nutrition and ageing / B.K. Pedersen, H. Bruunsgaard, M. Jensen et al. // J. science and medicine in sport. 1999. - Vol. 2, № 3. - P. 234-252.

126. Exercise, free radicals and oxidative stress / C.E. Cooper, N.B. Vol-laard, T. Choueiri, M.T. Wilson // Biochemical Society transactions. 2002. -Vol. 30, №2.-P. 280-285.

127. Exercise-induced endotoxemia: the effect of ascorbic acid supplementation / T. Ashton, I.S. Young, G.W. Davison et al. // Free Radie. Biol. Med. 2003. - Vol. 35, № 3. - P. 284-291.

128. Extreme running competition decreases blood antioxidant defense capacity / G. Mâchefer, C. Groussard, F. Rannou-Bekono et al. // J. Amer. College of Nutrition. 2004. - Vol. 23, № 4. - P. 358-364.

129. Fehrenbach, E. Free radicals, exercise, apoptosis, and heat shock proteins / E. Fehrenbach, H. Northoff // Exercise immunology review. 2001. -Vol. 7.-P. 66-89.

130. Flavanol-rich cocoa drink lowers plasma F(2)-isoprostane concentrations in humans /1. Wiswedel, D. Hirsch, S. Kropf et al. // Free radical biology & medicine. 2004. - Vol. 37, № 3. - P. 411-421.

131. Gleeson, M. Elite athlete immunology: importance of nutrition / M. Gleeson, N.C. Bishop // International journal of sports medicine. 2000. -Vol.21, Suppl. l.-P. 44-50.

132. Halliwell B. Reactive oxygen species in living systems source, biochemistry and role in human disease/B. Hallivell// Amer. J. Med. - 1991. — Vol. 91, Suppl. 3.-P. 14-22.

133. Hiscock, N. Exercise-induced immunodepression- plasma glutamine is not the link / N. Hiscock, B.K. Pedersen // Journal of applied physiology. -2002. Vol. 93, № 3. - P. 813-822.

134. Hoffman-Goetz, L. Commentary on exercise and neuroendocrine regulation of immune responses / L. Hoffman-Goetz // Int. J. sports medicine. 2000. - Vol. 21, Suppl. 1. - P. 31 -32.

135. Immune responses to training: how critical is training volume? / S. Shore, S. Shinkai, S. Rhind, R.J. Shephard // J. sports medicine and physical fitness. 1999. - Vol. 39, № 1. - P. 1-11.

136. Immunomodulation by 8-week voluntary exercise in mice / H. Sugi-ura, H. Nishida, R. Inaba et al. // Acta Physiol. Scand. 2000. - Vol. 168, №3.- P. 413-420.

137. In vivo cell-mediated immunity and vaccination response following prolonged, intense exercise / H. Bruunsgaard, A. Hartkopp, T. Mohr et al. // Medicine and science in sports and exercise. 1997. - Vol. 29, № 9. - P. 1176-1181.

138. Influence of carbohydrate ingestion on oxidative stress and plasma antioxidant potential following a 3 h run / S.R. McAnulty, L.S. McAnulty, D.C. Nieman et al. // Free radical research. 2003. - Vol. 37, № 8. - P. 835-840.

139. Karlic, H. Supplementation of L-camitine in athletes: does it make sense? / H. Karlic, A. Lohninger // Nutrition. 2004. - Vol. 20, № 7-8. - P. 709-715.

140. Katz, A.M. Lipid membrane interactions and the pathogenesis of ischemic damage in the myocardium /A.M. Katz, F.C. Messineo // Circ. Res. -1981.-Vol.48,№ l.-P. 1-16.

141. Keast, D. Exercise and the immune response / D. Keast, K. Cameron, A.R. Morton // Sports medicine. 1988. - Vol. 5, № 4. - P. 248-267.

142. Knowles, R.G. Nitric oxide sinthetases in mammals / R.G. Knowles, S. Moncada // Biochem. J. 1994. - Vol. 298. - P. 249-258.

143. Kohut, M.L. Reversing age-associated immunosenescence via exercise / M.L. Kohut, D. Senchina // Exercise immunology review. 2004. -Vol. 10.-P. 6-41.

144. Lakier, S.L. Overtraining, excessive exercise, and altered immunity: is this a T helper-1 versus T helper-2 lymphocyte response? / S.L. Lakier // Sports Med. 2003. - Vol. 33, № 5. - P. 347-364.

145. L-Carnitine L-tartrate supplementation favorably affects markers of recovery from exercise stress / J.S. Volek, W.J. Kraemer, M.R. Rubin et al. // Am. J. Physiology. 2002. - Vol. 282, № 2. - P. E474 - E482.

146. Leeuwenburgh, C. Oxidative stress and antioxidants in exercise / C. Leeuwenburgh, J.W. Heinecke II Current medicinal chemistry. 2001. -Vol. 8, № 7. - P. 829-838.

147. Lipid oxidation in fit young adults during postexercise recovery / C.C. Kuo, J.A. Fattor, G.C. Henderson, G.A. Brooks // J. Applied Physiology. -2005. Vol. 99, № 1. - P. 349-356.

148. Mackinnon L.T. Special feature for the Olympics: effects of exercise on the immune system: overtraining effects on immunity and performance in athletes / L.T. Mackinnon // Immunology and cell biology. 2000. - Vol. 78, № 5. - P. 502-509.

149. Mackinnon, L.T. Chronic exercise training effects on immune function / L.T. Mackinnon // Medicine and science in sports and exercise. Suppl. 2000. - Vol. 32, № 7. - P. S369 - S376.

150. Mackinnon, L.T. Future directions in exercise and immunology: regulation and integration / L.T. Mackinnon // Int. J. Sports Medicine. 1998. -Vol. 19, Suppl. 3.-P. 205-211.

151. Mackinnon, L.T. Immunity in athletes / L.T. Mackinnon // Int. J. sports medicine. 1997. - Vol. 18. - Suppl. 1. - P. 62-68.

152. McArdle, A. Exercise, oxidative stress and ageing / A. McArdle, M.J. Jackson // J. anatomy. 2000. - Vol. 197. - Pt. 4. - P. 539-541.

153. Mechanism of free radical production in exhaustive exercise in humans and rats; role of xanthine oxidase and protection by allopurinol / A. Gimeno, J. Sastre, C. Desco et al. IIIUBMB life. 2000. - Vol. 49, № 6. -P. 539-544.

154. Nieman, D.C. Current perspective on exercise immunology / D.C. Nieman // Current sports medicine reports. 2003. - Vol. 2, № 5. - P. 239242.

155. Nieman, D.C. Exercise and immune function. Recent developments / D.C. Nieman, B.K. Pedersen // Sports Med. 1999. - Vol. 27, № 2. - P. 73

156. Nieman, D.C. The immune response to exercise / D.C. Nieman, S.L. Nehlsen-Cannarella // Seminars in hematology. 1994. - Vol. 31, № 2. - P. 166-179.

157. Nieman, D.C. Exercise immunology: practical applications / D.C. Nieman // Int. J. Sports Medicine. 1997. - Vol. 18, Suppl. 1. - P. S91 -SI 00.

158. Nieman, D.C. Exercise, immunology and nutrition / D.C. Nieman // World review of nutrition and dietetics. 2001. - Vol. 90. - P. 89-101.

159. Nutrition antioxidant status and oxidative stress in professional basketball players: effects of a three compound antioxidative supplement / H. Schrder, E. Navarro, A. Tramullas et al. // Int. J. Sports Medicine. 2000. -Vol. 21, №2.-P. 146-150.

160. Oxidant, antioxidant and physical exercise / A.K. Banerjee. A. Man-dal, D. Chanda, S. Chakraborti II Molecular and cellular biochemistry. -2003. Vol. 253, № 1-2. - P. 307-312.

161. Oxidative DNA damage in human peripheral leukocytes induced by massive aerobic exercise / K. Tsai, T.G. Hsu, K.M. Hsu et al. // Free radical biology & medicine. 2001. - Vol. 31, № 11. - P. 1465-1472.

162. Oxidative stress and antioxidant status of athletes and untrained persons / M. Reichhart, K.H. Wagner, D. Kunig et al. // Forum of nutrition.2003. Vol. 56. - P. 303-304.

163. Oxidative stress responses in older men during endurance training and detraining / I.G. Fatouros, A.Z. Jamurtas, V. Villiotou et al. // Medicine and science in sports and exercise. 2004. - Vol. 36, № 12. - P. 2065-2072.

164. Possible involvement of plasma antioxidant defences in training-associated decrease of platelet responsiveness in humans / C. di Massimo, P. Scarpelli, M. Penco, M.G. Tozzi-Ciancarelli // Eur. J. Applied Physiology.2004. Vol. 91, № 4. - P. 406-412.

165. Post-exercise increase of lipid oxidation after a moderate exercise bout in untrained healthy obese men / F. Marion-Latard, F. Crampes, A. Zakaroff-Girard et al. // Hormone and metabolic research. 2003. - Vol. 35, №2.-P. 97-103.

166. Powers, S.K. Analysis of cellular responses to free radicals: focus on exercise and skeletal muscle / S.K. Powers, S.L. Lennon // The Proceedings of the Nutrition Society. 1999. - Vol. 58, № 4. - P. 1025-1033.

167. Pyne, D.B. Effects of intensive exercise training on immunity in athletes / D.B. Pyne, M. Gleeson // Int. J. Sports Medicine. 1998. - Vol. 19. -Suppl. 3. - P. 183-194.

168. Ramel, A. Plasma antioxidants and lipid oxidation after submaximal resistance exercise in men / A. Ramel, K.H. Wagner, I. Elmadfa // Eur. J. Nutrition. 2004. - Vol. 43, № 1. - P. 2-6.

169. Regulation of free radical outflow from an isolated muscle bed in exercising humans / D.M. Bailey, I.S. Young, J. McEneny et al. // Am. J. Physiol. 2004. - Vol. 287, № 4. - P. 1689-1699.

170. Reid, M.B. Nitric oxide, reactive oxygen species, and skeletal muscle contraction / M.B. Reid // Medicine and science in sports and exercise. -2001. Vol. 33, № 3. - P. 371-376.

171. Resistance exercise training attenuates exercise-induced lipid peroxidation in the elderly / K.R. Vincent, H.K. Vincent. R.W. Braith et al. // Eur. J. Applied Physiology. 2002. - Vol. 87, № 4-5. - P. 416-423.

172. Role of exercise and ascorbate on plasma antioxidant capacity in thoroughbred race horses / A. White, M. Estrada, K. Walker et al. // Comparative biochemistry and physiology. 2001. - Vol. 128, № 1. - P. 99-104.

173. Schultz, B. Role of nitric oxide in neurodegenerative disease / B. Schultz, R.T. Matthews, M. Beal // Curr. Opin. Neurol. 1995. - № 8. - P. 480-496.

174. Shek, P.N. Physical exercise as a human model of limited inflammatory response / P.N. Shek, R.J. Shephard // Canad. J. Physiology and Pharmacology. 1998. - Vol. 76, № 5. - P. 5895-5897.

175. Shephard, R.J. Acute and chronic over-exertion: do depressed immune responses provide useful markers? / R.J. Shephard, P.N. Shek // Int. J. Sports Medicine. 1998. - Vol. 19, № 3. - P. 159-171.

176. Shephard, R.J. Immune changes induced by exercise in an adverse environment / R.J. Shephard // Canad. J. Physiology and Pharmacology. -1998. Vol. 76, № 5. - P. 539-546.

177. Shephard, R.J. Potential impact of physical activity and sport on the immune system—a brief review / R.J. Shephard, P.N. Shek // Brit. J. Sports Medicine. 1994. - Vol. 28, № 4. - P. 247-255.

178. Shinkai, S. Aging, exercise, training, and the immune system / S. Shinkai, M. Konishi, R.J. Shephard // Exercise immunology review. 1997. - Vol. 3. - P. 68-95.

179. Supplementation with vitamins C and E inhibits the release of inter-leukin-6 from contracting human skeletal muscle / C.P. Fischer, N.J. His-cock, M. Penkowa et al. // J. Physiology. 2004. - Vol. 558. - Pt. 2. - P 633-645.

180. The effect of swimming exercise on lipid peroxidation in the rat brain, liver and heart / G. Turgut, S. Demir, O. Genu et al. // Acta physi-ologica et pharmacologica Bulgarica. 2003. - Vol. 27, № 2-3. - P. 43-45.

181. The effect of vitamin E treatment on oxidative stress generated in trained rats / G. Metin, P. Atukeren, A. Belce, A. Kayserilioglu // Tohoku J. Experimental medicine. 2002. - Vol. 198, № 1. - P. 47-53.

182. The effects of acute exercise on neutrophils and plasma oxidative stress / J.C. Quindry, W.L. Stone, J. King, C.E. Broeder// Medicine and science in sports and exercise. 2003. - Vol. 35, № 7. - P. 1139-1145.

183. The effects of physical exercise on the immune system / A. Jeurissen, X. Bossuyt, J.L. Ceuppens, P. Hespel // Nederlands tijdschrift voor geneeskunde. 2003. - Vol. 147, № 28. - P. 1347-1351.

184. Training and natural immunity: effects of diets rich in fat or carbohydrate / B.K. Pedersen, J.W. Helge, E.A. Richter et al. // Eur. J. Applied Physiology. 2000. - Vol. 82, № 1-2. - P. 98-102.

185. Viitala, P. Vitamin E supplementation, exercise and lipid peroxidation in human participants / P. Viitala, I.J. Newhouse // Eur. J. Applied Physiology. 2004. - Vol. 93, № 1-2. - P. 108-115.

186. Vitamin E supplementation does not increase the vitamin C radical concentration at rest and after exhaustive exercise in healthy male subjects / M. Schneider, A.M. Niess, F. Rozario et al. // Eur. J. Nutrition. 2003. -Vol.42,№4.-P. 195-200.

Оглавление диссертации Тевдорадзе, Светлана Ивановна :: 2007 :: Уфа

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Тевдорадзе, Светлана Ивановна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2007 года, Тевдорадзе, Светлана Ивановна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций