Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Влияние щелочных полипептидов - цитомединов - из ткани почки на иммунитет, гемостаз и на течение экспериментального нефрита мазуги

0 и'2, 9 О

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР НОВОСИБИРСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ МВДИЦИНСМ ИНСТИТУТ

На правах рукописи УДК: 616.61-0.8+612.017.1

КОЛБИНА Наталья Анатольевна

ВЛИЯНИЕ ЩЕЛОЧНЫХ ПОЛИПЕПЩОВ - ЦИТОМЕДИНОВ - ИЗ ТКАНИ ПОЧКИ НА ИММУНИТЕТ, ГЕМОСТАЗ И НА ТЕЧЕНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО НЕФРИТА МАЗУГИ

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

НОВОСИБИРСК - 1990

'Ой///г

Работа выполнена в Читинском государственном медицинском институте.

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор,

член-корреспондент АНН СССР В.Н.Иванов, доктор медицинских наук, профессор

Н.Н.Цыбиков

I

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Г.С.Якобсон

кандидат медицинских наук И.Н.Забелло.

Ведущее учреждение:

Всесоюзный гематологический научный центр АМН СССР (г.Москва).

Защита состоится "...." ...................19... года в .....

часов на заседании специализированного совета К.074.42.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата медицинских наук в Новосибирском ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте по адресу: 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан "...."....................19...года.

Ученый секретарь специализированного совета,

кандидат медицинских наук В.И.ШАРАПОВ

0Б1ЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТУ

Актуальность проблемы. Несмотря на обширные исследования в области изучения этиологии и механизмов развития гломерулонеф-рита (Б.Б.Серов, В.А.ВарЕавский, 1983; Э.Н.Ченчикоза, I975-B0; З.Т.Самойлова, 1978; И.Н.Поталона, 1985; П.Ф.Карпов, Т.С.Силь-ченко, 1986; Г.Н.Дралник, 1989), в иммунопатогенезе почек еще много неясного. Требует уточнения механизм образования и элиминации иммунных комплексов (Г.Н.Дранник, 1989), роль клеточных реакций в развитии и хронизации процесса в почках (П.Ф.Карпов, 1986). Чрезвычайно важным является вопрос эффективности имму-нотропной терапии.

В последние годы интенсивно изучается роль биологически активных регуляторных пептидов в функционировании органов и систем (И.П. Ашмарин, 1979-88; Б.В.Конюхов, 1973; Е. il. Харчено к, В.П, Иванова, 1987). В.Г.Морозов и, В.Х.Хавинсон (1983-85) установили, что в организме человека и животных существует новый класс регуляторных пептидов - цитомедины. Последние представляют собой совокупность основных полипептидов с молекулярной массой ЮкД, обладают тканеспецифичностыо и ответственны за передачу информации в популяции специализированных клеток (В.Г.Морозов, В.Х. Хавинсон, 1983). Работами С.Г.Калашникова, Б.И.Кузника и H.H. Цыбикова (1986-88) установлена зависимость функциональной активности щелочных пептидов в тканях от состояния иммунной системы организма.

В патогенезе нефротоксического нефрита и дальнейшей хронизации процесса ваяную роль игракт иммунологические и гемоста-тические нарушения (В.В.Серов, 1978; Е.М.Тареев, 1981). В

связи с этим представляется интересным выяснить вопрос о биологических эффектах полипептидов из почек, оценить меру их участия в патогенезе нефрита, в частности - влияние на систему свертывания крови, фибринолиза, на содержание аутоантител к активным ({акторам свертывания и к почке; и изучить возможности коррекции данной патологии этими веществами.

Цели и задачи исследования. Основной целью наших исследований явилось изучение свойств и роли щелочных полипептидов из почки в патогенезе нефротоксического не.фрита и возможности лечения данного страдания путем воздействия на иимунитет и гемостаз основными пептидами из почечной ткани.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Выделить из почек крыс полипептиды основной природы и изучить их действие на уровень Т и В лимфоцитов и систему свертывания крови.

2. Установить, возникают ли при развитии нефротоксического нефрита изменения в системе основных полипептидов почки и насколько они отличаются от биологических эффектов полипептидов, выделенных из почек здоровых животных.

Исследовать возможности применения иммуномодулятора реиили> в терапии нефротоксического нефрита в эксперименте.

Научная новизна. Из почечной ткани выделены полипептиды основного характера, обладающие свойством активировать Т лимфоциты, замедлять свертываемость крови, активировать фибрино-лиз in vivo . Впервые установлено, что на фоне патологического процесса в почках у крас возникает функциональная недостаточность основных полипептидов, проявляющаяся утратой способ-

;ти активировать Т и В лимфоциты, полученные из крови боль-с с ологовой болезнью. Введение ренилина из почек телят крыл с нефритом Мазуги ликвидировало эти нарушения в системе по-1ептидов. Зарегистрировано, что ренилин из почек телят спо-5ен частично нормализовать нарушения в системе свертывания ови, возникас.цие после удаления вилочковой железы у крыс, кмекение ренилина с терапевтической целью для купирования неф-та Мазути в эксперименте показало, что у крыс, получавших епарат из почек телят, нормализовались показатели гошунитета, [еньаались сдзиги в системе свертывания крови, уменьшалась ■епень выраженности патологического процесса. Наметилась лерс-!ктива разработки новых подходов к лечению заболеваний почек ¡муномодуляторои пептидной природы.

Практическая ценность работы состоит в той, что из почек ла-эраторных животных (крыс) выделено вещество пептидной природа, зучекы его свойства. Впервые установлено, что препарат из по-зк телят (ренилин) оказывает терапевтический эффект при экспе-иментальноы нефрите Ыазуги у крыс. В связи с полученными дан-ыми представлены перспективы поиска высокоэффективных икмуно-одуляторов пептидной природы, обладающих органотрогпгш дейст-иеи. Результаты работы внедрены в лекционных курсах кафедр иологической химии и патологической физиологии Читинского ме-ицинского института. Оформлено I рационализаторское предло-ение "Способ количественного определения аутоантител к факто->ам свертывания в плазме крови". По теие диссертации опублико-1ано 4 печатных работы.

Положения, выносимые на защиту:

1. Из почечной ткани интактных крыс выделены полипептиды щелочного характера, обладающие свойством активировать экспре< сию рецепторов на Т-лимфоцитах, полученных из крови больных с ожоговой болезнью Н-Ы степени; обладающие слабым антикоагуляи' иьш действием.

2. При нсфротоксическом нефрите у крыс возникает дефект 01 новных полипептидов почки. При лечении этих животных ренилино! интактных телят ( 1иг/кг массы крысы в течение 5 дней) частич] ликвидируются пептидные нарушения, нормализуются показатели с« держания аутоантител ;< протромбиновому комплексу и Ха-фактору уменьшаются сдвиги в системе свертывания крови, знергетическо! обмене, уыеныпается степень выраженности патологического процесса.

Апробация р-чйоты. Материалы диссертации долоиены на X меж вузовской научной конференции студентов и молодых ученых "Ада1 тация человека и жнвотных к различным экстремальным факторам" (Чита, 1937), на итоговой межвузовской научной конференции, посвященной 70-летию Великого Октября (Винница, 1987), на X межвузовской конференДии молодых ученых по проблеме "Физиолог и патология иммуногенеза и гемостаза" (Чита, 1988), на научной конференции "Экспериментальная и клиническая иммунология Востоке Страны" (Красноярск, 1988), на -итоговой научно-практ ческой конференции молодых ученых Дагестана (Махачкала, 1988) на объединенном заседании Читинского отделения Всесоюзного фи экологического и биохимического общества (Чита, 1989).

Объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы о материалах и методах исследования, главы со

¡иных наблюдений, обсуждения полученных данных, выводов, ука-1.теля литературы и приложений; текст изложен на ПО страницах ¡.шинописи, иллюстрирован 18 таблицами и 16 рисунками. Био'лиог-1фия 193 источника.

материмы и методд исследования

Исследования были выполнены на 453 беспородных белых кры-ах, Юкроликах, крови 40 здоровых доноров, 30 больных с ожого-эй болезнью (ожог П-Ш степени, 15-30$ поверхности тела). Экспе-именты проводились как на интактных, так и на животных с экспе-иментально вызванным иммунодефектом, который достигался уда-ением зилочковой железы. Тимэктомия производилась у крыс весом 00-180 гр. в возрасте 4-6 недель. Животные после операции со-.ержались в общем виварии на обычном рационе питания. В опытах ыли использованы крысы с нефритом Мазуги, который воспроизводи по методу Мазуги (1933) введением антипочечной сыворотки.

Объектами исследования служили кровь, пзазма, форменные цементы крови опытных крыс и доноров, а также ткани экспери-¡ентальных животных.

В экспериментах использовали комплекс полипептидов, выде-[енный из почек и условно названный "ренилин", который применя-1и с лечебной целью для купирования нефрита Мазуги, а также как >бъект для исследований; ренилин выделяли методой уксусно-кислой экстракции на холоду (В.Г.Морозов, В.Х.Хавинсон, 1974). Препарат растворяли в стерильном физиологическом растворе хлорида натрия и вводили по схеме: I мг вещества на I кг массы животного на одну инъекцию в течение 5 суток. Кроне того, в экспериментах in vitro изучали вдияние различных концентраций ренилина -

0.01. 0,1; 1,0; 10,0; 100,0; 500,0; 1000,0 мкг/мл на некоторые показатели гемостаза и фибринолиза. Состояние свертывающей системы крови оценивали по следующий методам:

1. Время рекальцификации плазмы (li.D.Sorgcrhof, L.Hoka, 1954)

2. Кефалиновое время с использованием гемолизата ( M.Larrien, C.V/oillurd, 1957)

3. Протромбиновое время (Э.Сирмаи, 1957)

4. Активированное частичное тромбопластиновое время ( Clot окоп 1975).

Фибринолитическую активность крови определяли по скорости растворения фибринового сгустка зуглобудиновым методом (H.Kowe nyk, X.Buluk, 1У54J.

Иммунологическую реактивность организма оценивали по общему количеству лимфоцитов, а также по содержанию Т и В лимфоцитов. Содержание Т и Т"активных" лим{юцитов определяли методом розеткообразования с эритроцитами барана ( ¡.i.Gondnl, 1972, вл шап,197()). Количество В лимфоцитов оценивали по методу EAK-FW (liinno, 1973 ). Экспрессию рецепторов на Т и В лимфоци-

тах оценивали обычюа» способом, инкубируя лимфоцитарную взвес! полученную из крови здоровых людей и ожоговых больных, в течение 120 минут при Т 37 С с ренилином различной концентрации следующих видов: полученного из почек интактных крыс, животнъп с нефритом Мазуги, получавших и не получавших ренилин телят.

Методы биохимических исследований. Концентрацию АТФ, АДФ, Akt, пировиноградной кислоты (ПВК) определяли в свежей цельно! крови на холоду, используя методику и наборы реактивов фирмы •Soohringor Manheim GmbH Dlagnostica (ФРГ). Потребление

лорода тканью почек исследовали методом Варбурга. Активность вдрогенаа цикла трикарбоновых кислот и пируватдзгндрогеназы ■чали в гомогенатах ткани почек на холоду по методике В.А. [иыова (1967).

Специальные методы исследования пептидов. Качественный ана-» полипептидов из почек интактных и опытных крыс осуществля-методом двумерной распределительной тонкослойной хроматогра-1 (ТСХ) на силикагелевых пластинах ^tlufoi (ЧСФР) в фас изопропанол-бутанол и аымиачно-уксусная вода, согласно опилив Hott, üovotty (1986). После проявления пластин растром нингидрина сопоставляли состав цитомединов по наличию ли-отсутствию пептидных пятен. Высокоэффективную жидкостную хро-тографию (ВЖХ) изучаемых соединений проводили методом обра-нных фаз на хроматографе IHICA (Япония) с колонкой 4x25 , заполненной силикагелем марки Lioho-jorb НР-18Г по мето-,ке :''.Lottspüich, з.Иорре-г». (19SO) . Детекцию осуществим на химическом анализаторе в режиме окисления.

Гистология. Патологоанатомическое исследование ткани почек юизводили с целью выявления морфологических изменений при гфрите Мазуги. Для этого животных забивали, забирали почки и шсировали 10% раствором нейтрального формалина. Гистологи-зские целлоидиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином по Ван-Гизону?

В специальном фрагменте работы регистрировали аутоантитела ротив протромбинового комплекса, Ха-фактора и суммарного по-ечного антигена крыс иммуноферментним методом ( ^lisa )

Автор выражает благодарность дсценту А.И.Юрьеву за проведение морфологические исследования.

по способу Durot (1976) в модификации М.П.Рудник и соав' (1980). Для количественного определения концентрации аутоан' тел строили калибровочную кривую, сенсибилизируя лунки плат tob иммуноглобулином 2 крысы (по данному способу оформлено ] ционализаторскее предложение №723).

Полученные результаты обработаны методом вариационной с тистики и вычислен показатель достоверности различий (крите] Стыодента) на программируемом микрокалькуляторе "Электроник; МК 61/м " с заданной программой.

результаты исследования I. Характеристика полипептидов из интактных и пораженных по1

Методом высокоэффективной обратнофазовой жидкостной xpoi тографии (ВНХ) исследовали полипептидные факторы из почек и; тактных крыс, животных с нефритом Ыазуги, получавших и не п чавших ренилин телят. Образцы из почек интактных крыс на хр тограмме давали 4 пика: А,В,С,Д. При анализе препарата, пол; ченного из почек крыс с нефритом Мазуги регистрировали появ ние пика £, площадь которого составила 30^ от суммарной пло: пиков. Полипептиды из почек крыс с нефритом Мазуги, получав ренилин давали 3 пика: А,С,Д. Пики В и Е не регистрировалис Это свидетельствовало об изменении соотношения анализируемы пептидов в препаратах, а также об отсутствии отдельных соед нений и появлении новых в составе пептидных комплексов. Мет дом двумерной тонкослойной распределительной хроматографии (ТСХ) установлено различие в количестве и топографии ыингид положительных пятен у образцов полипептидов из почек интакт ных крыс и крыс с нефритом Мазуги. Хроматографическал карти

в

спарата, полученного из почек крыс с Мазуги-нефритом, полу-.вших ренилин, сходна с хроматографической картиной пептидов I интактных почек.

Таким образом, экспериментальными исследованиями устаноз-¡но, что в ночках содержится комплекс полипептидных факторов, шественкый состав которых зависит от функционального состоя-!я органа. Развитие патологического процесса ведет к изменена состава продуцируемых пептидов.

. Влияние полшептидов из интактных и пораженных почек на податели содержания Т и В клеток.

В результате изучения влияния полинептидов на экспрессию ре-зпторов на лимфоцитах '■'хЬго нами установлено, что разли-ия в качественном составе соединений отражаются на ж фнзиоло-ических свойствах, в частности на способность влиять н£. пока-атели клеточного иммунитета. Установлено, что ренилин из по-ек интактных крыс увеличивает экспрессию рецепторов чх Т"а:с-ивных" лимфоцитах здоровых людей. Ренилин из почек интактных рыс не стимулирует образования "розеток" среди Т и В клеток рови здоровых доноров. Полипептиды из почек крыс с нефритом азуги, получавших и не получавших ренилин телят в низких' до-ах (Юмкг/ыл) не вызывают экспрессии рецепторов на всех видах леток. В высоких концентрациях (100, 1000 мкг/мл) действие ука-анных препаратов аналогично ренилину из почек интактных крыс.

В следующей серии использовали лимфоциты, выделенные из ■рови больных с ожоговой болезнью Л-Ш степени. Количество Т [имфоцитов от больных с ожогами было в 2,6 раза ниже по сравнению со здоровыми. Число Т "активных" было уменьшено в 2,8 раза,

У

В лимфоцитов в 1,8 раза. Инкубация лимфоцитов с полипептидами из почек интактных крыс и почек крыс с Маэуги нефритом, получавших ренилин телят, активировала Т, Т "активные" и В лимфоциты иммунодефектных больных. Нолипептидные факторы из поче крыс с нефритом Мазуги повышали количество только Т "активных лимфоцитов, тогда как число Т и В клеток оставалось на исходном уровне. Можно предположить, что при развитии патологичесн го процесса в органе продуцировался комплекс полипептидов с измененной функциональной способностью. Введение ренилина тел крысам с нефритом Ыазуги восстанавливало активность иммунокок петентных пептидов в почках крыс.

3. Влияние полипептидов из почек телят на свертываемость кров и фибринолиз.

Установлено, что полипептиды из почек телят удлиняли время рекальцификации плазмы и протромбиновое время в дозах 10, 500 и 1000 мкг/мл. Кефалиновое-время удлинялось при добавлен? 1000 мкг/мл препарата. Остальные показатели коагулограммы не претерпевали существенных отклонений. Скорость эуглобулиновох фибринолиза на изменялась.

¡1а основании полученных данных можно предположить, что рс нилин, в отличие от других щелочных полипептидов (тималин, вг зонин, зпиталамин, бурсилин и др.), не обладает высокой анти-протеазной активностью в отношении ферментов системы свертывг ния крови у здоровых доноров при добавлении vitro.

При изучении влияния полипептидов из почек телят на состс яние системы гемостаза у интактных крыс выявлено, что однокрг нос внутривенное введение ренилина телят приводило к удлинсш

лени рекальцификации, протромбинового и кефалинового време-Было зарегистрировано значительное увеличение скорости оу-5улинового фибринолиза.

Таким образом, ренилин у интактных животных оказывает слабое действие на систему свертывания крови, но активирует фибрино-. При регистрации уровня аутоантител к фактора!.! свертывания ви было установлено, что введение ренилина приводило к сниже-концентрации аутоантител к активному протромбинозому ко:/п-:су крыс и фактору Стгарт-Прауэра. Следовательно, продуцируемне почками полипелтвдше факторы оказывают существенного влияния на гемостаз у здороЕ'лс людей и •актних крыс. При внутривенном введении крысам обнаружена акация процесса фибринолиза.

Влияние полипептидоз из почки на гемостаз у "гпмэктсмированных зотних.

Обнаружено, что через 3 месяца г.осле тглэктомин у крыс умень-юсь врямя рекальцификации плазмы, протрлг.биновоя, тромбиновое элиновое и кефалииовое время, Наступала депрессия тотального глобулинового фибринолиза (Рис. I). Этаноловый тест оказался рицательным, что свидетельствовало об отсутствии Енутрисосудис-го свертывания крови. Количество аутоантител к факторам сверты-ния было достоверно снижено в обеих опытных группах (получав-х и не получавших ренилин телят), что свидетельствовало о пст-блении аутоантител при развивающейся гиперкоагуляции я актива-и ферментов коагулологического каскада.

Введение ренилина телят тимэктомированным крысам через 3 ме-:ца после операции приводило к удлинению времени рекальцифика-

ции, протромбинового, тромбинового, кефалинового времени (Рис Следует, однако, отметить, что изучаемые показатели не достиг! нормы, характерной для ложнооперированных и интактных крыс. Т< не менес^ под влиянием ренилина имелась тенденция к увеличению концентрации аутоантител к ферментам системы гемостаза. У животных, получавших полипептиды из почек активировался фибрино. причем скорость растворения сгустка превышала время, регистрируемое у контрольных крыс.

Таким образом, у тимэктомированных крыс под влиянием полипептидов из почек телят частично нормализовывалось состояние системы гемостаза.

5. Влияние полипептидов из почек телят на течение эксперимент! но го нефрита Мазуги у крыс.

На модели экспериментального нефротоксического нефрита Мазута решено было выяснить влияние основных полипептидоЕ из по' ки на течение патологического процесса в органе, а тзкже уста новить, в какой мере развитие заболевания отражается на функциональной способности пептидов пораженного органа.

В результате проведенных экспериментов установлено, что у животных не получавших ренилин, в гетерологичную фазу нефрита удлинялось время рекальцификации плазмы, протромбиновое, кефа линовое время; наблюдалась незначительная депрессия эуглобули нового фибринолиза. В 25% случаев выпадал положительный тест на этанол. Этот факт свидетельствовал о развитии у части крыс синдрома диссеыинированного внутрисосудистого свертывания. Пр дальнейшем прогрессировали« нефрита (аутологичная фаза) наблюдали еще большее удлинение времени лизиса фибринового сгуст

Рис. I. Влияние полипептидов из почки на свертываемость крови и фибринолиз у тимэктомированных животных. Примечание: К - контрольные крысы, К1 - ложнооперированньге крысы,

01 - тимэктомированные не получавшие ренилин,

02 - тимэктомированные получавшие ренилин,

1 - время рекальцификации,

2 - протромбиновое время,

3 - тромбиновое время,

4 - каолиновое время,

5 - кефалиновое время,

6 - скорость эуглобулинового фибринолиза.

13

ка, на фоне частичной нормализации показателей коагуляционного теста.

У крыс, получавших решшш, также развивался нефротоксичес-кий нефрит, но сдвиги в системе свертывания нивелировались. Следует особо отметить активизацию процесса фибринолиза, ка:; в первую, так и во вторую фазу заболевания.

При регистрации уровня аутоантител обнаружено, чго у животных, не получавших ренилин количество аутоантител к суммарному почечному антигену было достоверно выше, чем у крыс, получавсш препарат. По сравнению с контролем содержание аутоантител к почечному антигену повилалось в обеих исследуемых группах. Уровень аутоантител к протромйпнопому комплексу снижался более выраженью у животных с нефритом. Концентрация аутоантител к активному фактору Стлшрт-Прауэра у крыс с нефритом уменьшалась, тогда как в группе, получаваих ренилин их содерданг.е возросло по сравнению с контролем (Рис. 2). Эти факты свидетельствовали о том, что вьедение полипептидных факторов на фоне заболевания снижает выраженность аутоагрессивных процессов, нивелирует сдв: ги в системе гемостаза. Уменьшение количества аутоантител к почечной ткани является благоприятным признаком, препятствующим хронизации патологического процесса.

Изучение показателей энергетического обмена свидетельствовало об угнетении тканевого дыхания в почках при нефрите, падении активности пируватдегидрогеназы, сукцинатдегидрогеназы и 2-оксоглутаратдегидрогеназы. Активность малатдегидрогеназы, напротив, возрастала. Снижалась также концентрация пировиног-радной кислоты в крови, почти в 2 раза уменьшалось количество

,ТФ и АМФ, содержание ЛДФ увеличивалось в 1,9 раза (Рис. 3). В :ачестве одной из характеристик энергетического состояния кле-ок мы использовали коэффициент Аткинсона. У интактнъгх животных нергстический заряд клеток крови был равен 0,92. У крыс, полу-авших ренилин, использование кислорода нормализовывалось, но охранялся нарушенным энергетический заряд. Кроме того, нарас-ала активность 2-оксоглутаратдегидрогеназы, при сохраненной по-ышенной активности фермента катализирующего окисление яблоч-ой кислоты. Повышение активности малатдегидрогеназы при нефрите азуги, вероятно связано с нарушением иалат-аспартатной чел-очной системы, активно действующей в митохондриях почек.

При морфологическом исследовании картина почек в опыте ха-актеризовалась развитием острого серозно-пролиферативного гло-ерулонефрита. Клубочки почек были увеличены в объёме за счет ролиферации мезангиальных клеток и накопления в мезангиуме и олости капсулы Шумлянского-Боумена серозного экссудата с клет-ами слуденного эпителия. В извитых канальцах нарастала зернис-ая, а в отдельных участках баллонная гидропическал дистрофия, эторая протекала с сужением просвета канальцев. У крыс, поучавших ренилин, также развивался острый серозно-продуктив-чй гломерулонефрит, который характеризовался меньшей пролифе-ацией мезангиальных клеток и отсутствием дистрофических изме-5Ш1Й в клубочках.

Объективно у крыс, получавших полипептиды из почек телят гмечали отсутствие алопеции, нормальную двигательную актив-эсть и снижение летальности до 10$ ( в опытной группе, не полу-тзей препарат - 45%).

мкгЛу1

и и 1\ 13 15 ¡2 Ч 6 3

тЬ"

Ш"

И

Г/1 ЬТ

[ГП^Т

........Ч/

ы........ш

| г",'

^ . ; ,• : .......Г

щ,

М'.'Д

'! ■ Л! Г-

К6",Л

У2

Рис. 2. Влияние полипептидов из почек телят на уроке аутоантител у крыс с нефритом Мазуги. Примечание: К - интактные крысы, 02п - крысы с нефритом Мазуги не получавшие ренилин 02- крысы с нефритом Мазуги получавшие ренилин Нопп1 - аутоантитела к суммарному почечному антиге! РТК - аутоантитела к протромбиновому комплексу Ха - аутоантитела к активному Стюарт-фактору.

16

ад т

320 250 2« т

120 30 40

г______________„.„,„..,„_______ , ИТЭ ~

г* :•:. __________________________________ ' ...... ___________с „._„_ —^—

......................""' !" | •'■;■■' ........." ''¡//У: р*1Ч »тп щ «ы» 1РЧ ИМ

......»»ч!...................'с ............"Ь"'. «¡Н ^ т.: .'1 Ц .': ц,,.,. ,...¿.и е..г, ■■■1Г./. _____Г-*- •'■••»■:■.■:<__р." _>•"' -' I.?<>'• —' 'I ** ■ ■ Ч' :.,—■ ■ . К-«* ;,?:>.:):■« ! _Г .Т.о

1 1 1

2®

МО

Рис.32. Влияние полипептидов из почки на показатели энергетического обмена у крыс с нефритом Мазуги. Примечание: К - интактные крысы,

01п - крысы с нефритом не получавшие ренилин

01р - крысы с нефритом получавшие ренилин

Р7К-(1и _ пируватдегидрогеназа

зто - сукцинатдегидрогенаэа

2-осва _ 2-оксоглутаратдегидрогеназа

мое - малатдегидрогеназа.

Вышеизложенные факты позволяют сформулировать следующее: в почках имеется группа щелочных полипептидов, обладающая про-тективным действием на орган. При развитии патологического процесса введение этих веществ уменьшает патологоанатомические изм< нения в почках, нивелирует сдвиги в системе свертывания крови и фибринолиза, нормализует энергетический обмен, тем самым уменьшается выраженность патологического процесса. Введение основ-\

ных полипептидов почки препятствует хронизации процесса, снижает летальность.

6. Влияние полипептидов из почек телят на течение нефрита Ма-зуги у тимэктомированных крыс.

У тимэктомированных крыс с нефритом Мазуги, не получавших ренилин, развивалась выраженная гиперкоагуляция и депрессия тотального эуглобулинового фибринолиза, о чем свидетельствовало сокращение времени рекальцификации плазмы, каолинового, протроы бинового, кефалинового времени и замедление скорости растворения фибринового сгустка. В 40% случаев выпадал положительный этаноловый тест. Вместе с тем, наблюдали снижение уровня ауто-антител к активному протромбиновому комплексу а фактору Стюарт-Прауэра, при повышении количества аутоантител к суммарному почечному антигену. Параллельно с описанными изменениями у всех животных выявлялась протеинурия. Объективно тимэктомированные крысы с Мазуги-нефритом были вялые, малоподвижные, шерсть становилась тусклой и грязной. К концу второй недели от введения антисыворотки тотальная алопеция наблюдалась у 80% крыс. Летальность в этой группе составила 50$.

Введение ренилина приводило к следующим положительным сдви

м: животные не лысели, имели нормальную двигательную актив->сть, шерсть была гладкой и блестящей, летальность составила Но сохранялась гиперкоагуляция, так как оставались сокра-:нны!ли время рекальцификации, протромбиновое и кефалиновое юмя, в 25% случаев отмечали положительный тест на этанол. ;нако, возрастала скорость эуглобулинового фибринолиза, а као-щовое и тромбиновое время приближались к показателям, регист-фуемым у ложнооперированных животных. Кроне того, снижение >нцент рации аутоантител к суммарному почечному антигену сви-тельствовало об уменьшении аутоагрессивных процессов. Увели-:нке уровня аутоантител к протронбиновому комплексу и Ха-фак->ру дают основания предполагать, что введение полипептидных 1кторов ослабляет сдвиги в системе свертывания крови, норма-1зуя ку.мунное звено регуляции гемостаза.

В приведенных данных обращает на себя внимание высокая сте-¡нь активации фибринолиза. Это, по нашему мнению, является, ¡сомненно, положительным признаком, так как в генезе нефрита ¡маловажную роль играет отложение фибрина в почечных клубоч-IX и нарушение фибриноразрушающей функции. Таким образом, :корение фибринолитических процессов в присутствии ренилина юсобствует очищению почечных клубочков от образующихся сгуст-зв и'ведет к быстрейшей нормализации функций пораженного оргаНа основании вышеизложенного можно сформулировать слсдую-;е: в отсутствии тимуса патологический процесс в перифери-грическом органе протекает крайне неблагоприятно. Введение :новных пептидоз, полученных из данного органа, уменьшает сте-

пень выраженности патологического процесса, вследствие нормализации иммунных механизмов регуляции гемостаза и снижения а;, агрессивных процессов по отношению к пораженному органу.

Таблица I

Уровень летальности у животных с нефритом Мазуги, получавших и не получавших ренилин телят.

Группы животных Уровень летальности {%)

Крысы с нефритом Мазуги,

не получавшие ренилин 45

Крысы с нефритом Мазуги,

получавшие ренилин 10

Тимэктомированные крысы с нефритом Мазуги, не

получавшие ренилин 50

Тимэктомированные крысы с нефритом ¡¿азуги получавшие ренилин 20

ВЫВОДЫ

1. В почке имеется группа основных полипептидов, способ] активировать Т лимфоциты здоровых людей и больных со вгорич имыунодефицитами; а также обладающие невысокой антипротеазн активностью и свойством стимулировать процесс фибринолиза.

2. Щелочные полипептиды, выделенные из почек крыс, пора женных нефритом отличаются от полипептидов, выделенных из п чек интактных животных количеством пиков на хроматограмме Е и обеднением площади нингидринположительных пятен при ТСХ,

1ижением способности экспрессировать рецепторы на Т и В лим-)цитах.

3. При экспериментальном нефрите ¡¿лзуги регистрируются сдви-1 в системе свертывания крови, ингибируется эуглобулиновый фиб-шолиз, уменьшается содержание аутоантител к активным протром-шовому комплексу и Ха- фактору, развивается дисбаланс в сис-!ме энергетического обмена. Приведенные нарушения углубляются

иммунодефектных - тимэктомированных крыс.

4. Инъекции ренилина, полученного из почек телят, крысам с зфритом Мазуги нормализуют состав и свойства полипептидов, вы-гленньгх из пораженных почек, что проявляется восстановлением эоматографической картины при ВКХ и ТСХ и способности экспрес-1ровать рецепторы на Т и В лимфоцитах.

5. Введение ренилина телят животным с нефритом Мазуги при-)дит к частичной ликвидации коагулопатии, ускорению фибриноли-1, нормализации энергетического метаболизма, снижению уровня ,гтоантител к суммарному почечному антигену и уменьшению патоло-эанатомических изменений ъ почках.

6. Ренилин является перспективным препаратом для разработки та применения в клинической практике для лечения аутоиммунных *болеваний почек.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

I. Колбина H.A., Макковеева Н.Б. Влияние щелочных полипеп-вдов - цитомединов - из почки на иммунитет, гемостаз и на те-зние экспериментального нефрита // Тез. докл. итоговой объе-инеиной наунно-практической конференции молодых ученых, спе-,1а.:.1стов и студентов Дагестана по медицине. - Махачкала.- 1988. . 31-33.

2. Иванов В.Н., Цибиков H.H., Колбина H.A., Юрьев А.М. Влияние щелочных полипептвдов - цитоыединов - из ткани почки нг иммунитет, гемостаз и на течение нефрита Мазуги // Бюллетень экспериы. биологии и медицины. - 1989. - №1,- С. 13-15.

3. Колбина H.A., Иванов В.Н., Цыбиков H.H. Некоторые своИс ■а щелочных полипептидов из почечной ткани // Поиск новых лека венных средств и их использование в клинике. - Чита, 1990. -С. 27-28.

4. Колбина H.A. Влияние щелочных полипептидов из почки на состояние системы гемостаза при почечной патологии // Поиск новых лекарственных средств и их использование в клинике. -Чита, 1990. - С. I6I-I62.