Автореферат и диссертация по медицине (14.00.27) на тему:Влияние регуляторных пептидов на активность ферментов липолиза и устойчивость эритроцитов к гемолизу приразличных формах острого панкреатита (Экспериментально-клиническое исследование)



ижстерсгш здраюохраекия российской фвдещ1и иоаюкикй орда трудового красного зшшги

■ ЦЩШШ1Й СТОМАТОЛОГИ'ШШЛ МСТИТУТ nuemi Н.А.СЕНАПКО

lia правах рукописи ' уда: 616.37-002-00

8АИМ ГЕОРГИЙ АЛШЗДДРОШЧ

ВЖШШ'РВДЛЯГОРШХ ПЕПТИДОВ 11Д А!ПШЮСТЬ ФЕПШГГОВ

ЛИГОЯЙЗА. И УСТОЙЧИВОСТЬ ЭРШ-iljfTOB К ГЕМОЛИЗУ при различных формах острою гкг/укреа>та/гн?

(Эксноримекталько - клиническое исследование )

.14.00.27 - " йфургкя " 14.00.15 - " Гктологическая ■еттоыия"

Автореферат

: дисеетаании. '• ' на соисканйэ ученой сзпеш каццэдата медицинских наук

Москва 1993

Работа выполнена в ЬЬсковском Ордена Трудового Красного Знамени медицинском стоматологическом институте имени Е А. Семашко '

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕ®!:

доктор медицинских наук, профессор Б. Д. Пятт доктор шдищшеких наук, вед.н.с. В. И.. Сороковой

ОШЩАЛЬШЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор шдодшских наук, профессор А. II Георгадзе доктор ыеднщлискш: наук, профессор Г. Ц, Титова

ВЕДУЩЕЕ УЧРВДЕШЕ: РосснГелаШ Ушасрсихех* йруябы Народа

г .

Вздета состоится « /«5 » ¿/АрЛУйЗОЗ г., В <■*%> СО часов на заседании Специализированного Ученого совета & 034,03.03 при Московском Ордена Трудового Красного Бнааэнл ыедщшском стоматологическом институте ум. Е А. Семошсо (Москва, 103473, ул. Делегатская, д. 20/1). ..'.'•

С диссертацией мехно ознакомиться а библиотеке института (Шсква ул. Еучетича, д. 9а).

Автореферет разослан « /V » ма^г 1593 г.

Ученый се!сретарь Специализированного совэта доктор медицинских наук,

профессор И.8.Я&юиа

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ:

Проблема острого панкреатита является одной из актуальных в уирургии, поскольку, до настоящего времени, летальность остается высокой и по данный разных авторов оценивается от 20 до 50% (Савельев и соавг., 1983, Емельянов C.ll, 1S91, Георгадзе А. К. и соавг., 1992).

В настоящее время не вызывает сошп«ия, что тяжзсть течения острого панкреатита зависит от уровня- активности и количества пашсреатогегшьас иротеолггических и лшолитических ферментов в крови, что приводит к массивному повреждению мембран клеток многих органов к определяет острый панкреатит как общепатологичес-ккй процесс. Этш объясняется полиморфизм клинические проявлений и сложности в диагностик ( в том числе дифференциальной ) и лечении. До сих пор неясно является ли повреждение мембран клеток результатом действия только панкреатических гидролаз или в патогенезе заболевания играет определбнную роль в!сасчеш:е собственных клеточных мехавизмоз аутоляза, в частности эндогенных фссфо-лилаз и' перекданого окисления яилвдов мембран. Последнее обстоятельство диктует■необходимость более детального изучения особенностей иовреяяекия клеточных мембран г.рм дайной патологии. Наиболее доступным объектом 'Поучения мембранных струтаур при ягани являются эритроцита. Мембраны эритроцитов представляют собой типичную ¡w-сточнуа структуру организма и на ней, как на модели, возможно изучать закономерности патогенеза мембранных повре.тде-ниЛ при остром панкреатите и использовать их в клинических условиях с цельи диагностики различных клинико-морфологических Форм этого заболевания.

Определение уровня активности эндогенных фосфолипаз и способности лстидоэ к перескислению в эритроцитах мояю проводить с помощь» непрямых методов измерения устойчивости их к гемолизу, индухэдюваняому факторам активации фершнтативного я нефермен-татизного катаболизма липидов мембран.

Существенным дсститежм! последних лет является внедрение в клияическую практику для лечения острого панкреатита синтетических аналогов энкефалинов, в частности даларгина Известно, что лечебный эффект даларгияа обусловлен те», что он является хонку-рентой за места связывания на рецепториом аппарате мембран с хо-лецистокинином-панкреозимииом и поэтому резко угнетает базальиую панкреатическую секрецию аиияарных клеток. Однако, вероятно, данный эффект ве является единственным, а частности интересным

представляется выяснить - обладает ли даларпш ыэыйраностабили-эирувщиы действием, т. е. влияет ли он на основное анзко патогенеза острого панкреатита - разрушение мембран ацанарных клеток поджелудочной железы

Все вышеизложенное предопределило направление настоящего исследования.

ЦЕЛЬ ЯССШОШЖ:

Изучение липолитической активности плавны крови и устойчивости эритроцитов к гемолизу, индутрованноыу различными гемолитическими агента},а; при экспериментальном остром жиргвом и геморрагическом пашреаипе до и после лечения дадаргиноы.

ЗАДАЧИ ИОСМтВЛНШ:

1. Изучить изменения уровне? свободных "жирных кислот и эндосубстратшй липолитической активности в плазме крови при экспериментальном остром жировом и геморагическои панкреатите у крыс до и после парентерального введения даларгина.

2. Изучить изменения уровня зндосубстратшй фосфолипазной активности ыэмбран эритроцитов с помошь» определения степени ге-иодиза, индуцированного ионами кальция в присутствии кальциевого ионофора калиыицина при экспериментально« остром жировом н ге-шррагическоы панкреатите у крыс до и после парентерального введения даларгина

3. Изучить изменения способности липидов мембран зрцтроци-тое к перекисноыу окислению путем определена степени гешлизоз, индуцированных перекисью водорода или Твша-20 при экспериментальном остром жировом и "еиорагическоы панкреатите у крыс до и после паре;: -ерального введения далчргина

4. Провести парно-корреляционный анализ между изучаемыми параметрами для определения их диагностической ценности,

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТШЕС.Ш ЗНАЧИМОСТЬ:

В работе показано, что метаболизм липидов плазмы и эритроцитов при экспериментальном остром жировом и геморрагическом

4

панкреатите модифицируется неодинаково, в частности при зкспери ..»италыюм острой жировом панкреатите в болызей ыере активируется ферментативный катаболизм, а при экспериментальном остром ге-морзгическоы панкреатите неферцзнтативньй катаболизм (перекисное окисление липвдов ).

Показано, что применение даларгина приводит к торможению развития изменений ферментативного и неферментативного ката-болизыа липидов плазш крови и эритроцитов при экспериментальной остром панкреатите; при этом лочебньй эффект даларгина более выражен яри экспериментальном остром жировой панкреатите.

Шрно-корредяцюкныцЯ анализ иезду показателями уровня катаболизма липвдов и с!соростяш гешяиаоз , индуцированных раа-лз>чзшш гешлитичестш агентами покгзап наличие сильной корреляционной зависимости.

Пояучгшшэ результаты позволяет предложить методы определения устойчивости эритроцитов к гемолизам, индуцированным Сэ2+ + катацздшем, перекислю годорода и Теином-20 в сочетании для дифференциальной диагностики различных идшшко-шрфоло-I лчгских форм острого панкреатита Вшеуказаннш положения вносятся на защиту,

АПЮВЛЦИЯ РАБОТЫ:

Основные пологвши диссертации иэлокены на ыехкафедральной научно-прашпестой конференции кафедр хирургических болезней ШЗЯ ям, II Л. Сеишю и коллектива ПФ 1! 33 им. проф. А. II Остроумова 28.12.1992 года

ПУБЛИКАЦИИ:

По теме дкссертатгл опуйлишвано 4 научных работы. ' ВБЕЛРЕ1Ш В ПРЖШ: ''

Ыэтод. дифференциальной диагностики жирового и геморрагического паякреокекроаа, основанный на изучении устойчивости эритроцитов периферической; крови к иьдуцированноыу гемолизу в клинических условиях опробован на базе ГШЗ Н 33 им. проф. А. Л Остроумна. ■ ' ■... • „•'. '.-. . '.'.-'' '."-'ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАЮТУ:

Работа носит зксперименталыю-клшиче-кий характер. Экспериментальная часть включает анализ результатов исследований на 400 беспородных белых крысах обоего пола Б клинических исследованиях представлены результаты обследования 64 человек, в том числе 20 - практически здоровых, 23 - Сольна лшрогым панкрео-некрозоы и смешанным панкреоиакрозои о преобладанием мирового и 21 - больных геморрагическим панкреонекрозом и смешанны),! лгчкре-онекрозом с преобладанием геморрагического. Диссертация состоит из введения, четырех глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателг литература Материал диссертация излозкьл на /^страницах машинописного текста, включает 1 схему, 23 таблицы и 23 рисунка. Библиография содержит 234 названий, из ннх 127 отечественных и 107 иностранных авторов.

ХАРАКТЕРИСТИКА ЗКСПЕРШНТАЛЬШХ И ШШЯЕС1Ш 11СШЖ>ВЖ1Й:

Исходя из поставленной цели и задач предпринятого исследования, в экспериментальной и клинической части работы выполнялись комплексные биохкшчесше исследования, направленные на установление уровня устойчивости эритроцитов периферической крови к гемолизу, индуцированному кальцием + капишщином (КГ), перекисью водорода (ПГ) л Твином-20 (ТГ), и измерение зндосубстрат-ной лшгалитической активности плазмы крови, которая измерялась как разность ыедду количеством свободных жирных кислот (СЖК) в точке, ссогветствухщгй определенного времени инкубации плазмы и исходным количеством СЕК. У подопытных животных эти исследования дополнялись изучением морфэлогических изменения в ткани поджелудочной лелезы, ее эндокринной и экзокршшой паренхимы, и изучением морфологических изменений со стороны эритроцитов периферической крови с поиощьв сканирующей электронной микроскопии.

Экспериментальная модель жирового и геморрагического панк-реонекроза создавалась по несколько модифицированной ыетодике Кэуо1а1пеп 1.3. а1 а!., 1980г. на беспородных белых крысах обоего пола Через 2 часа после шгарадуктального введения ¡нглчи медицинской консервированной иди оливкового масла развивалась морфологическая картина тотального геморрагического или жирового паякреснекроза соответственно.

При изучении в этот и последушие сроки эвдосуОстратной ли-

яолитической активности плазмы крови и устойчивости эритроцитов <

периферический крови к различный вндаи индуцированного гемолиза выявлена следувдая картина:

1) При экспериментальном зшроаом паякреоиекроае (Э1П) ужа через 2 часа после создания модели ЭШ1 количество СЯК в плазш крови возрастает в 1,72 раза по стшшешга к контроля при 30 минутной инкубации и в 1,63 раза при 60 минутной инкубации (33,1 и 37.В Ниодь/кст белка соответственно ). Через 4 часа от создания модели количество СЕК ута почти в 2 раза больше, че:л у контрольной гр."чпи животных С здоровью яивотяш). Через 12 часов от создания модели прирост СЯК продолжается и доходит до максимальной отметки через 24 часа от создшш иодэли. Количество CSK равно при 30 и 60 минутной инкубации 65,3 и 76» 1 нмоль/ мг белка соответственно л достигает макевдкз 120 минутной инкубации плазш крови С ЮЗ. О нмоль/мг балка), что в 3,4 - 3,9 раза больше контрольных цифр ( рис, 1). Липолитическая эндосубстратная активность пдазыы крови при ЭЖП через 2 и 4 часа, при 60 и 120 минутной инкубации составила 10.6 и 14,9 соответственно, что в 1,6 и 1,2 газа больше контрольных цифр, К 24 часам от создания модели липолитичесгая эндосубстратная активность плазш крови резко возрастает, увеличиваясь по отношению к контролю в 2,2 и 3,9 раза при 60 и 120 мзшутной инкубации соответственно.

Исходя из вьшеизло«энного, иок.о сделать' вывод о выраженной функциональной аихшюсги ферментов липолиза при ЭШ.

При исследовании эритрощггорв периферической крови с помощью скаиирущзй электронной мгсгроскопии у крыс с ЭЖП нами было показано, что.осповльм морфологическим фэноыэном является нараа-тгкщая в процессе заболевания трансформация иор^оцитов в эхино-циты различного порядка. Так, через 2 часа после создания модели ЭШ количество эхшюмтов 1 и 2 порядка возрастает примерно с 10 -15Х в яорые до 40-502 Через 4 часа несколько возрастает степень эхиноцигсза, появляется зхинощггы 3 порядка и встречаются эхино-циты в состоянии гемолиза. Через 12 часов, кроме вышеуказанных явлений появляется зхииоциты 4 порядка. Через 24 часа все указанные феномены также имелч место, при этом отмечали увеличение количества эхнноцитсв 3 и 4 порядка и очагов спонтанного гемоли-ва. '

Расчет степени Са"+ +1ллкмицин индуцированного гемолиза эритроцитов (КГ) проводился в различное время инкубации суспензии исследуемых эритроцитов: 15; 30; 45; 60 ыинут. В результате исследований выявлено, что у крыс с ЭЯ1 степень КГ у первой

группы животных равняется 43,6 и 52,31 л; и 15 и 30 минутной инкубации соответственно, что больше по отношения к контроля й 1,44 и 1,27 раза соответственно. Яри 60 и 45 минутной инкубации эта тенденция сохраняется; Через 4 часа при 15 минутной инкубации суспензии эритроцитов степень 1СГ составляла 45%, что в 1,5 раза больше ю отноиению к контролю. При 30 минутной инкубации степень гемолиза составила 53,831, что а 1,3 раза бодьке контрольного значения. У третьей группы животных степень КГ при 1С и 30 минутной инкубация составила 52,6 и 60,5% соответственно, что в 1,74 я 1,5 раза болызе, чем у контрольных животный Шшаш«-ное иовышэниэ степени НГ при ЗЖП наблюдалось через 24 часа от создания модели. Так при 30 минутной штубйшт егепэнь КГ составила 63%, а при 30 • минутной Р6„1%, что в 2,1 и 1,6, раза соответственна больше контроля (рис. 2).

Количества СЖК в плазме кровгг ]Г)ые с^ЖП в разные периоды ее инкубащш

100

I

3"

| во

§ 40

г

в

20

В

1

J

1

. ш,

кашпроль 4 часа 24 часа

2 чаш 12 часов

срока зкшераметш

фон ^30"

ттшфйшдя

Рио.1

»

Скорость КГ у !фыс с ЭЖП в различные сроки шпсуоации суспензии эритроцитов

00

контроль

4 часа часа

» 12 часов

__cpotcu якспергшсттт

mm 15' М 30' ЕМ 45' шт 60' шшубаиМП

Pic .2

Расчет степени гемолиза эритроцитов, индуцированной перекисью водорода (ПГ) проводили в двух временных точках: при 60 минутной инкубации суспензии эритроцитов и при 120 минутной инкубации. В результате исследований выяснено, что через 2 часа степень ПГ незначительно снижена (3,92 при контроле 4,2 7.) и приближается к контрольным значениям через 4 часа после создания модели Э2Ш. Чер^з 12 часов степень ПГ нарастает и при 120 минутной инкубации равна 8%, что в 1,6 раза больше контроля. Чарез 24 часа степень ПГ составляет 9,ЗЯ , что в 1,8В раза больше контрольных цифр (рис. 3).

Скорость ПГ у 1фыс с ЭЖП в различные роки инкубации суспензии эритроцитов

»еонтроль2 часа 4 часа 1% часоь24 часа сроки эксперимента

ЕШ СО' ^^ 120'

шогубация

Рис.3

Определение степени гемолиза эритроцитов, индуцированной раствором Тсина-20 (ТГ) проводили при различных возрастающих концентрациях раствора Твина-20, добазляекого в суспензию исследуемых эритроцитов во время инкубации последних. В результате исследования было выяснено, что через 2 часа от создания модели степень ТГ при концентрации Твина-20 разной 0.0047. составила 29,41, что практически равняется степени ТГ через 4 часа (ЗО.ЗХ). Это в 1,52 раза больше, чей у швотных контрольной группа Через 12 часов степень ТГ при 0,004% растворе Твина -20 увеличивается до 48,72, что в 2,43 раза выше контрольных значений. К 24 часам от создания модели ЭГО степень ТГ возрастает до 62,82, что в 3, 14 раза больше, чем в контрольной группе.

2) При экспериментальном геморрагическом панкреонекрозе (ЭГП) через 2 часа от созданная модели количество СЯК в плазме

10

крови при 20 и 60 минутной инкубации последней составило соответственно 28,0 и 33,4 ниоль/ыг бедка, что в 1,46 раза больше контроля, ib. сравнивая эти данные с количеством СйК при ЗЖП. обнаруживаем, что они меньше в 1,17 и 1,12 раза соответственно. Эта «е закономерность выявляется и через 4 часа от создания модели. Имеющее место сшиение количества СЖК при ЭТИ сравнительно с ЗЖП говорит о преимтеэствешгей активации фермелтов протеолиза в ответ на введение в протоки ПЖ желчи, а активация ферментов липолитической группы имеет вторичный характер и происходит в результате активирукадэго влияния на них протеолитической группы ферментов. Через 12 и 24 часа количество СЯК непрерывно нарастало, составляя при 60 минутной иш-yfeii';'-: плазмы 39,0 и 68,3 нмоль /мг белка, что больие контрольных п:фр в 1,7 и 3,0 раза соответственно, но при этом оно било меньше, чем у животных этих же групп с ЗЖ1 в 1,13 и 1,11 раза соответственно. Особенно это различие выявляется через 24 часа от создания модели При 120 минутной инкубации плазмы. Бри этом количество СЯК при ЭЯ1 в 1,26 pasa больше, чем при ЭГП Это лишний раз подчеркивает, что а патогенезе ЭГП активация ферментов липолиза происходит, имеет определенное зизчение, но определяюцим фактором является все ш активация протеолитической группы ферментов и раавитие связанных с этим ссло.тнэ1шП (рис.4).

¿«политическая эндосубстратнан активность плазмы крови у крыс с ЭГП через 2 и 4 часа от создания модели незначительно вы-' та контрольных цифр и в 1,4 и 1,3 раа меньше таковой у .тавотных с 3S31 Ib ■ через 12 часов липолдаическая эндосубстратная активность плазмы крови резко снижается и становиться нияв контрольной в 1,3 раза Напомним, что подобный эффект мы наблюдали и при ЭМ, но прч экспериментальной «фобом панкреатите липолнтическая эндосубстратная аетизность плазмы не снижалась ниже контрольных цифр, а' да1© была незначительно вьш их. При ЭГП мы наблюдаем выраженное снижение липолитической эндосубстратной активности через 12 часов после создания модели. Это снижение мозою объяснить более выраженным действием на ферменты липолиза собственных репарационных систем при ЭГП, чем при ЭШ Но, как в случае ЭЕП. при ЭГП через 24 часа от создания модели липолнтическая эндосубстратная активность плазмы крови резко повышается, нарастая по отношению к контроля в 2.3 раза.

Количество СЖК в плазме кровикрыс с ЭГП в разные периоды ее шшуоаиии

90-

контроль' 4 часа 24 часа

2 часа 12 часоэ

сроки эксперимента

фонЩ%Ж ^Ir^Wl шкубаидя

Рнс.4

В серии опытов по изучении ультраструкгурных изменений эоитроцитов у крыс с ЭГП наш наблюдались как сходные морфзлоги-ческие феномены с фешиенами у крыс с ЭЖП, так и отличающиеся. А именно: наряду с нарастанием эхиноцитоза по ходу опыта мы наблюдали также нарастание стокатоцитоза эритроцитов периферической крови. Так, через 2 часа от создания модели возрастает в 2-3 pasa количество эхиноцятов 1-2 порядка. Через 4 часа после создания «одели ЭГП наблюдалось увеличение количества эхиноцитов 3-4 порядка, появления стоиатощгтов 1-3 порядка Через 12 и 24 часа эксперимента все вышеуказанные феномены сохраняются;отмечается тенденция к увеличения стоыатодагоза

Расчет степени КГ проводился у крыс с ЭТИ в группах, аналогичных таковым с ЭЖП в тете временные интервалы инкубации суспензии яретрощггов (15; 30; 45; 60 минуть В результате иссле-

T¿

дований выявлено следующее: через 2 часа от создания модели степень КГ повышается по отнопэнию к контролю незначительно (43,32 при контроле 41,32 при 30 минутной инкубации суспензии). Через 4 часа после создания модели ЗИЛ (вторая группа животных ) степень КГ увеличивается до 45X, что в 1,1 раза выше контрольных цифр. Через 12 часов степень КГ нарастает еще больше, достигая 45% при 15 минутной инкубации суспензии эритроцитов, что в 1,5 раза больше контрольного значения, через 24 часа наблюдается максимальная степень КГ. достигая 52,12 при 15 минутной инкубации суспензии, что в 1.71 раза больше контрольных цифр (рис.5).

Изучая данные степени гемолиза, индуцированного перекисью водорода, ми отметили следующие закономерности: степень гемолиза при ЭГП через 2 часа резко возрастал?, достигая 7,77. при 120 минутной ишсубации, что в 1,54 раза больше контроля. Через 4 часа при 120 минутной инкубации степень ПГ увеличивалась на 0,67., Но через 12 часов от создаmm модели степень ИГ достигала 10,4% при 120 ьялутноЯ ин!?убацйи, что в два раза больше контрольных значений. Через 24 часа степень ПГ была максимальной. достигал при 120 минутной шкубации 12,5%, что в 2,5 раза выше контрольных цифр (рис. 6).

Данные, полученные при изучении степени гемолиза, индуцированной различными концентрациям: раствора Твина-20 пахот на таковые, полученные при гемолизе, индуцированном перекисью водорода, что отражает их сходные патогенетические механизмы, заклин чаюпдаеся в активации процессов ПОЛ клеточных. мембранных структур, что в конечном итоге дестабилизирует последние и приводят к увеличению степени гемолиза эритроцитов. Череа 2 часа после создания модели ЭГП степень ТГ при 0.004Z растворе Тайна-20 составила 29,9%, что в 1, '.4 раза больше, чем у контрольных животных. Через 4 часа степень ТГ увеличилась незначительно и составила 32,3%, что в 1,62 раза болы® контрольных значений, через 12 ча-сйв степень ТГ резко возросла до 54,5%, что а 2,72 раза болыиэ, чем у животных контрольной группа Через 24 часа степень ТГ достигла при 0,0042 концентрации раствора Твина-20 75,6%, что в 3,8 раза больше контроля.

и

Скорость КГ у крыс с ЭГП в различные сроки инкубации суспензии эритроцитов во-

кш пароль

4 часа

2 чага» 12 часов

срока »кЕпериг<етгаа

24 часа

Рис. 5

Скорость ПГ у крыс с ЗГИ в различные сроки инкубации суспензии эритроцитов и-г

контроль 2 часе 4 часа 12 часов 24 «газа сроки эшасрдоввпа

от Е31ИГ

иш^зщдв

Рис. 6

Подводя тоги результатов наших исследований, полою сделать стедущгэ обобщение: липолигическая зндосубстратная активность плазмы крови, уровень свободных жирных кислот в плазме крови у крда, а такте степень гемолиза эритроцитов, индуцированная Са2+ + (салшицином вше у животных с 35П чем, с ЭГП. Однако степень гемолиза , индуцированная перекисью водорода и Теином-20 выше у крис с ЭШ, чем с ЗШ Дашше результаты юям объяснить теы, что при ЗШ в большей мере псвшязются процессы ферментативного гидролиза липидов •плазш и клеточных мембран, обусловленных функционированием группы лилолитических Ферментов, а при ЭГП в больсей мере повшаюгея процесса нефермэнтативного гидролиза, а именно: процессы ЛОЛ плазмы и ллазмалешы. Снижение липолитичес-l'.of: зндосубстратной активности плазка кргви у третьей группы животных, как с ЭЗЕП так и с ЗГИ,. а затем резкое ее повышение у четвертой группа можно обменить наличием эндогенных репарационных. систем, включающихся при развитии острого панкреатита, ко имеющих недостаточную напряженность для полного прекращения патологического процесса, причем большего эффекта функционирование ЭП1Х систем достигает у крыс с ЭГП.

При изучении диполитической зндосубстратной активности плазш. крови л устойчивости эритроцитов к различным видам индуцированного гемолиза при экспериментальном остром панкреатите у крыс после лечения его даларгикоы выявлены следующие закономерности: 1) Яри экспериментальном гзгровоы нанкраонекрезе у крыс,' которым г.осле создания модели 3231 через 2 часа внутривенно вводили раствор дсларпгаа из.расчета 0,1 мкг/кг выявлено, что через 2 часа от введения даларйша уровень свободных мриых кислот а плазме не только не лревшает контрольных мфр, ю п а 1,7 раза иигэ их я з 3 раза кегыге, чем у животных той лз группы, которым лечения даларгино« не проводилось. Этот факт свидетельствует о том, что применение даларгина блокирует не только ферменты липо-лпза панкреатического происхождения, но и собственную ыембранс-вязаннуга фссфодипаву клеток отдалению: органов и, прежде всего, эритроцитов, так как после активации ыенбрансвязашш фосфэлипа-за катализирует процесс гидролиза фосфолипидов плазмалеюгы и теп coj.uj повкзает уровень пула СЕК плазмы, с которым липиды плаэма-лешгы находятся в тесном вашшсдействии. Снижение уровня СЕК плазш крови у крыс с ЭНП. а так® снижение дшолитическоя зндосубстратной активности плазма крови после лечения даларгинои просяега!вается у всех исследуемых групп ятотных и приближается

к контрольным значениям лишь через 24 часа после парентерального введения препарата.

При лечении крыс с Э5Ш даларгином нами было выявлено, что патоморфологические изменения эритроцитов менее выражены, чем у нелеченных крыс. Так. соответственно через 2 часа после введения даларгина. через 4 часа от начала эксперимента практически не наблюдается изменений со стороны морфологии эритроцитов периферической крови. Однако к б часам эксперимента отмечается эхино-цитоз 1-4. стоматоцитоз. Через 12 часов после введения даларгина (14 часов от начала эксперимента) наблюдается тенденция к уменьшению степени эхкноцитоза, а к 24 часа}.! от введения препарата (26 часов от начала эксперимента) эхикоцитоз практически отсутствует, при этом увеличивается количество стоматоцитоз и набухших дискоцитов, отмечается спонтанный геюлиз.

Таким образом, в результате введения даларгина крысам с ЗЖП наблюдается пролонгирование процесса развития эхшоцитоза, а при сроках заболевания превышающих сутки - трансформация зхиноцитов в стоматоциты.

Проведение лечения даларгином животных с ЭдП привело к снижению степени всех видов индуцированных геколизов эритроцитов. Так степень гемолиза, индуцироваягого Са2+ + кадшдодшшм через 2 часа от введения даларгина снизилась по отковешго к контролю в три раза (11,41 при 30 минутной инкубации суспензии эритроцитов), а по относешш к негеченньш яивогнкм той ке группы в 4,4 раза. Через 4 часа после введения препарата степень гемолиза практически не увеличилась. Чэрез 12 часов степень КГ возрасла незначительно (15,2 при 30 минутной инкубации суспензии) и приблизилась к контрольный значениям лит через 24 часа Инетересно отметить, что закономерности снижения степени КГ практически повторяют таковые при сшяйний СНК в плззке у крыс с зш после лечения даларгияоы (рис. 7).

Выраженное снижение степени КГ у крыс с ЭЕП, которым был парентерально введен раствор даларгина подтверждает предположение о шкбраностабилиэирувдэы действии даларпша за счет сшиээ-ния активности панкреатической и мембрансвязанной собственной фосфолипазы А2 эритроцитов. активация которых приводит к гидролизу липидов плазмалемш, дестабилизирующему ее, а следовательно, и к увеличению степени гемолиза

Скорость КГ у крыс с ЭЖП в различные сроки инкубации суспензии эритроцитов

60-

контроль 4 часа 24 часа

2 часа 12 часов

сроки эксперимента

С^З 15* Е23 30' ^ 45' ^ 60' инкубация

Рис.?

Изучая степень гемолиза эритроцитов крыс с ЭЖП, индуцированную перекисью водорода, ш выяснили следующее: через 2 и 4 часа после введения даларгина степень ПГ незначительно 'снижается по отношению к контролю (3,4 и 3,81 соответственно, при контрольном значении - 4,27.). Через 12 часов степень гемолиза эритроцитов, индуцируемая перекисью водорода практически равняется контрольному значению и только незначительно повывается к 24 часам после введния даларгина.

Степень гемолиза эритроцитов крыс с ЭШ1, индуцированную возрастаниями концентрациями Твина-20, после внутривенного введения раствора даларгина снижается примерно с теми же закономерностями, что и степень гемолиза эритроцитов, индуцированная

раствором перекиси водорода, что обусловлено схожими патогенетическими механизмами влияния этих гемолитических агентов на мембрану эритроцитов, а именно: активацией процессов ПОЛ. Однако имеются и особенности. После введения крысам раствора даларпша степень гемолиза эритроцитов, индуцированная возрастающими концентрациями Твина-20 снижается по сравнешш с животные: с ЗЕП, которым даларгин не вводился, однако она остается все же вше, чем у контрольной группы. Так, через 2 часа после внутривенного введения далргина, 4 часа после создания модели ЭНП степень ТГ состав!!ла 262 ( при концентрации раствора Твина-20 равной 0,0042). что в 3,13 раза мешке чем у шлеченпых животных, но в 1,3 раза больше контрольного значения. Через 4 часа отмечалось незначительное возрастание степени ТГ. Только , чепез 12 часов после введения препарата степень ТГ возрастает достаточно заметно (382. что а 1,33 раза меньше, чем у нелеченных аанютпых и в 1,9 раз больше, чем в контрольной группе). Через 24 часа после , ведения раствора даларгина степень гемолиза эритроцит, индуцированная Твин-20 повышается еще больие. достигая 26,22, что в 2,8 раз больше контрольна значений м всего в в 1,2 раза ыеььсе, чеы у животных с ЭЗШ. которым даларгин не вводился.

2) При экспериментальном геморраггчесютм ганкреонекрозе у крыс введение даларпша влачлтелыю улучшало клиннческу» и лато-биохимичаскую картушу заболевания. Интересно отметить, что через 2 часа после введения раствора даларгина содеряыше СНК плазме крови снижалось по отношению к контрольны?-' значениям почти в 2 раза, а по огяоианя» к группе животных, которым даларгин не вводился в 3 раза. Сравнивая уровень СЕК у животных с ЭГЛ, которым внутривенно вводили раствор даларпша, с группой животных с модель» ЭЖП, также леченных даларгшгам, видно, что при ЭГП количество СКК в плазме в первые 2 часа после введения даларгина ии-гк, чем у животных с ЭКП 1Ь в дальнейшем количество СЖ в плазж начинает возрастать и повышается через 24 часа после введаяия даларпша по лгношешш к контрольным значениям приблизительно в 1,3 раза. Во, несмотря на относительное пошшаиие количества сйк, оно все да не достигает того уровня, который имеют животные с ЭГП, нелеченные даяаргиноы. Уровень С1К в плазме крови у крыс ниже после лечения приблизительно в 2.4 раза

В эксперименте по изучению действия даларгина на течение ЭГЛ у крыс было выявлено, что па-гошрфологические изменения со стороны эритроцитов существенно менее выражены, чем у животных с

ЭРП, которым лечения не проводилось. Так, через 2 часа после введения дгларпша морфологическая картина мало отличается от ьормы, также гля и л случае ^ кркеаш с лечеииымч даларги-iiou. Через 4 часа от введения препарата латоморфологическая картина эритроцитов периферической крови сводилась преимущественно к стоматощ'тозу 1-4 порядка, количество зхиноцктов не возрастало. встречались единичные спонииныэ гемолизы. Через 12 часоз появляется значительное количество э;:г.ноцитоз 1-3 порядка, количество стомагоцитоз уменьшается. .Через 24 часа после введения даларпша отмелется умеренный зхкноцитоз 1-4 порядка и стомато-цитоз 1-2 порядка, пойкилощггоэ и единичные спонтанные гемолизы. Тасгм образом, такто как и в случае с жировым панкреонекрозом, леченным даларгииом даже однократное введения препарата крысам с ЭГП приводит к замедлению по времени и степени выратенности па-томорфологических изменений оригроцитов периферической крови.

Изучая» как и в предыдущее сериях опытов, степень КГ у крыс с ЭГП посла лечения их даларгииом, было отмечено, что через 2 часа после введения препарата степень КГ игаэ, чем у контрольной группы, яшотеых в 2,5 раза, а по отношению к ответных! с ЭГП, которым лечения не проводилось з атог жз период заболевания в 2.75 раза Через .4 часа после введения яаларгияа замедление степени КГ несколько снижается » но это сшшзние незначительное и его нельзя признать статистической достоверным. Через 12 часов после введения далзргина степень КГ постепенно повивается, но все та точти в 2 раза меньше, * эм у контрольной группы зшвотных и в 2.7 раза ызныпе, чем у келеченных крис. Данный факт еввде-тельствует о значительном скитании. кембранодестабилизирущэго действия факторов паякреатогенной интоксикации под действием даларгика Дальнейшее динамическое наблюдение за степенью КГ при ЭГП после введения даларпша позволяет выявить нарастание ее к 24 часам от времени введения препарата, причем степень станосит-ся больпе по отяопени» к контролю в 1,15 раз, но меныэе, чем у нелечешшх животных в 1,16 раз.

Из вьазеиа тзжэнного югно сделать важный, на наш взгляд, вывод: при ЭГП одним на лечебных эффектов даларпша является пролонгирование инициального периода заболевания, что позволяет проводить на фоне лечения даларгинои массированные комплексные лечебные мероприятия в первые 24 часа заболевания, направленные на прерывание цепной реакции патобиояииачееккк процессов и переведение острого прогрессирующего панкреатита в абортивную, аату-

хаюшую форму.

Изучая степень гемолиза эритроцитов, индуцированную раствором перекиси водорода у крыс с ЭГП после введения даларгина, ш получили следующие результаты. Через 2 часа после введения препарата степень ПГ снизилась в 1,23 раза по отношению к контролю и в 1,6 раз по отношению к нелеченной группе животных. Через 4 часа после введения препарата степень БГ практически не увеличилась и достоверно выросла лишь к 12 часам от введения да-ларгина, составляя 3,9% при 60 минутной инкубации суспензии эритроцитов, что практически равняется контрольным значениям. ГЬ отношению к нелеченным животным эта степень меньше в 1,9 раза. У четвертой изучаемой группы мшотиьк дальнейшего прироста степени гемолиза эритроцитов» индуцированной раствором перекиси водорода практически не наблюдалось (рис.8).

Скорость ПГ у крыс с ЭШ в раэлишгеш сро>си инкубации суспензии эритроцитов

контроле часа 4 часа 12 часов24 часа срозси эксперимента

60'

инкубация

Рко.Й

Послэ' внутривенного введения даларгина крысам с ЭГП степень гемолиза эритроцитов, индуцированная возрастающими концентрациями Твина-20 несколько снизилась, но все же не достигла контрольных цифр : так, через 2 часа после введения даларгина стьлень ТГ при концентрации Твина-20 0,004% была равна 24,62, что в 1,23 раза больше контрольных значений (202), через 4 часа гриросг степени гемолиза эритро-даов был незначительным. Через 12 часов степень ТГ равнялась 31.32, что больше контроля в 1,56 раза, но меньше, чем у излеченных зптотих в 1,74 раза Через 24 часа от введенния даларгинга степень ТГ возросла до 50,72, что в 2,5 раза больше, чем у контрольных животных и в 1,5 раза меньше, чем у крьк с ЭГП, которым даларгин не вводился.

Нами проведен парно-корреляционный анализ между уровнем содержания СЯК в плазме и липолитической г.ндосубстратной активностью с одной стороны и степенью гемолиза эритроцитов, индуцированных различными гемолитическими агентами с другой стороны до . и п^сле внутривенного введегия раствора даларгина Выявлена сильная корреляционная зависимость между исследуемыми параметрами (р > 0,88).

Исходя из вышеизложенного мозсю сделать следующее обобпрние:

1. При ЭГП у крыс до введения даларгина степень гемолиза зрот-роадтов, индуцированная Са2+ + калимицшо» ягов, чем при ЗЕП, а после введения препарата степень КГ при ЭГП выше, чем при Э5П.

2. Степень гемолиза эритроцитов, индуцированная растворами воз-расташей ганцентрации Твкн-20 к раствором перекиси водорода у крыс с ЭГП до введения даларгина выие, чем при ЗЖП, а послэ введения препарата степень гемолизов эритроцитов при ЭГП яигзз, чем при ЭЗП

3. Уровень свободных жирных кислот и липолитическая эндосубс-тратная активность плазмы крови при ЭЖП до введения даларгиа выше, чем при ЭГП, а послэ введения препарата уровень СЕК и липолитической эндосубстратной плазмы крови при ЭйП ниже, чем при ЭГП,

Выявленные нами закономерности чрезвычайно важны, так как позволяют использовать этот еие ни кем не описанный биохимический тест для дифференциальной диагностики жирового и геморрагического панкреатита

Для выяснения наличия у даларгина регуляториого действия в

отношении патологически измененных мембран эритроцитов, как у здоровых животных, так и у крыс с ЗГД и ЭЯП, нами была проведена следующая серия опытов: у здоровых крыс из сердца забиралась кровь и проводилось измерение степени гемолиза эритроцитов, индуцированной Са"+ + калимицином. В процессе инкубации в суспензию эритроцитов добавлялся in vitro раствор дала^гина. В процессе опыта изучалось действие различных концентраций раствора далар-пша : 1 мкг/мл; 0,1 мкг/мл; 0,01 мкг/мл; 0,001 мкг/мл. Контрольным значением являлась степень КГ эритроцитов, в суспензию которых в процессе инкубации даларгин не вводился. В результате проведенного нами опыта было выяснено, что эффектом стабилизации мембран (повышение устойчивости эритроцитов к индуцированному гемолизу) обладают растворы даларпша с концентрациями 1 и 0,1 мкг/мл. Растворы даларпша меньшей концентрации эффектом стабилизации мембран эритроцитов не обладали. Кроме того было выяснено, что биологическое действие даларпша ограничено 15-30 минутами с момента введенная его в суспензию эритроцитов, что скорее всего связано с малым сроком казни дала'рпша из-за действия на него пептидаз.

Интересным для час представлялся.вопрос- обладает ли далар-гин эффектом кумуляции в отношении его мембраностабилизирующего действия при многократном его введении. Для ответа на этот вопрос мы провели следующий опыт: здоровым крысам под эфирным наркозом внутривенно вводился раствор даларпша из расчета 10 мкг/100 грамм веса, через 2 часа после введения препарата животнге выводились из опыта путем забора крови из сердца, эритроциты отмывались и проводилось измерение у них КГ, при этом в суспензию эритроцитов добавлялся in vitro раствор даларпыа в концентрациях 1ыкг/ид; 0.1 мкг/мл; 0,01 мкг/мл. Полученные значения сравнивались со значением степени КГ здоровой крысы, которой внутривенно даларгин не вводился и со значением степени КГ у здоровых животных, которым внутривенно даларгин был введен, но в суспензию эритроцитов in viti j растьор даларпша не вводился. В результат-! опыта было выявлено, что у здоровых крыс, которым внутривенно выл введен раствор даларгина степень КГ меньше по сравнении со степенью КГ у здоровых крыс, которым даларгин не вводился. Отсвда можно сделать вывод, что даларгин обладает некоторым меыСраностабилизируюдам действием на здоровые, неповрежденные эритроциты, по-видимому снижая активность собственных мембрансвязанньн фосфоАИлаз. Но дальнейшее введение раствора да-

лзргина in'vitro в различных (больших и малых) концентрациях это действие не усилило.

Исходя из результатов опыта, можно сделать вывод, что раствор дадаршна обладает свойством увеличивать устойчивость здоровых, неповрежденных эритроцитов к индуцированному Са2+ + калими-цгоюм гемолизу, но при дальнейшем введении препарата эффекта кумуляции в отношения к&мбраносгсбшширующэго действия не наблюдается. Однако, при тех хе исследованиях, проведенных с эритроцитами кгкзви крыс, которым предварительно выполнялась модель ЗЖП и ЭГЯ и через 2 часа был введен даларгин было показано, что повторное введение раствора даларглна в суспензию патологически измененных эритроцитов в концентрации 1 мкг/мл и 0,1 мкг/мд ведет к выраженному кумулятивному эффекту в отношении его мембраноста-билизирувдего действия, что проявляется снижением степени КГ эритроцитов данной группы животных по сравнению со степенью КГ эритроцитов здоровых животных, которым внутривенно предварительно был введен раствор даларгша. Кроме того было выяснено, что этот эф$С1гг вырази больше у крыс с ЗИП по сравнению с крысами с зга

Выявленные нами закономерности, при изучении устойчивости эритроцитов периферической крови к кндуированнону гемолизу при ЭЖП и ЗГП у крыс, позволяющие проводить дифференциальную диагностику мирового и геморрагического яавкреонекроза в ранние сроки заболевания предопределили направление наших дальнейших клинических исследований, которые заключались в апробации, предложенного нами метода дифференциальной диагностики с целью внедрения его в клинику.

Дяз гшжеграцяи возможности использования данного теста мы провели исследование устойчквочти эритроцитов периферической крови к различным видам индуцированного гемолиза у 64 человек. Исследуемые были распределены на 3 группы. В контрольную группу вошли 20 человек (были практически здоровы) Во втору» группу вошли 23 больных жировым панкреонекрозом (ЕГО и в треть» группу 21 больных геморрагическим панкреонекрозом (ГП).

Кровь для исследований бралась у здоровых людей на станции переливания крови сразу после ее забора у доноров.

Кровь для исследований у больных КП и ГП бралась в хирургическом отделении ГКБ Н 33 чм. Остроумова в следувеие временные интервалы: 1) через в - 10 часов от начала заболевания, до начала специального лечения, 2) через 2 часа после первого введения да-

ларгина Сольным. 3) через сутки от начала специального лечения даларгином, 4) через 5 суток, Б) через 12 суток и 6). череа 25 суток от начала лечения даларгином.

При исследовачии крови Сольных ЖП выявлено, что количество СЖК и липолитическая эндосубстратная активность плазмы крови резко возрастают в начале заболевания приблизительно в 2 - 2,5 раза, особенно увеличивается показатели ^политической активности плазмы. Через 2 часа после введения даларгина в терапевтической концентрации нарастание липолитической активности и количества СЖК в плазме продолжается, однако, через 24 часа от момента введения препарата прирост СКК уменьшается, несколько снижается липолитическая активность. Фрез 5 суток от начала лечения количество СЯК и липолитическая активность практически снижаются до нормальных значений. К двенадцатым суткам уровень содержания СЯК снижается еще больне, а липолитическая аютивность плазмы уменьшается в 1,5 - 2 раза г.о отношению к контрольным, цьфрам. Это свидетельствует о значительном снижения даларгином процессов липолиза триглицервдов как за счет действия на ПЖ, угнетающего синтез ПЛ и панкреатических фосфолипаз, так и за счет прямого ингибирдаего влияния непосредственно на лмполитическую группу ферментов. К 25 суткам от начала лечения больных ШП уровень содержания СЖК в плазме крови практически стабилизируется на контрольных цифрах, а липолитическая активность плазмы крови умеренно повышена

Анализируя данные, подученные при изучении степени КГ эритроцитов у больных Ш ыолшо сделать вывод, что лечение больных ЖП даларгином приводит к быстрому снижению степени КГ уже череа 24 часа от начала лечения, далее ( к пятым суткам от начала лечения даларгином ) степень КГ уменьшается дане ниже контрольных цыфр и нормализуется лишь к 25 суткам. Динамика степени КГ практическеи повторяет динамику изменения уровня липолитической активности плазмы крови, что лишний раз доказывает ил тесную взаимозависимость, наличие причинно-следственной связи между ними.

Из подученных данных об устойчивости эритроцитов крови к гемолизу, индуцированному перекисью водорода следует, что степень ПГ у больных ЖП, которым проводи ;оеь лечение даларгином, изменяется отлило от степени« КГ. Так, в первые часы заболевания, до введения больным даларгина, степень ПГ увеличилась незначительно, по отношению к контрольным значениям ( в 1,1 - 1,3

раза ), че'рел 2 часа после введения препарата степень ПГ продолжает лари гать и ото нарастали» прослеживается и через 24 часа с-? момента введения яаларгича Лишь к пятым суткам непрерывного лечения аналогами дейциг-эпкефалша степень ПГ сшмаетия до суб-яег малыш, а ¡с двенадцатым суткам до нормальных цыфр. Через 25 суток от начала лечения степень ПГ у больных жи практичесга не отличается от контрольных значении.

Динамика сг.пзии ГГ практически повторяет изменения степени и ПГ у Сольных I'll Зто свидетельствует о том, что степени как ПГ, так и ТТ являются отображением аналогичных процессов, а именно - процессов ЛОЛ

Отсюда, можо сделать вывод, подтверждающий наши каблщения, а именно:' влияние дзларгина более вкрааено з отношении ферментативного катаболизма ( за счет снижения активности лшюлитическоП группы ферментов ) >i менее выражено в отношении неферментататив-иого катаболизма С процессы ПОЛ ) лшидов.

Прч исследовании крови бодмш ГП выявлено, что уровень сяк а липолигичьская активность ялазш крови у больных ГП по сравнена с теми жз показателями больь-шс Ш1 значительно кеньие изменяются как до, так и поело лечения, даларгином, что свидетельствует о различиях з пагогс.'гезо НЯ и ГЕ В сдуча? ГЛ на первое .»«сто выступает активизация ' процессов ПОЛ, этим объясняется меньпая а>,ял!туда изменений 'уровня СЖК и липолитичэской активности плазмы крови, связанных 'с аотизацкэй, преимуивствекно, лилолитичес- . клх Ферментов. Так, в начале заболевания уровень СЯК в плазме крови больных ГЛ ¿оставил 8,2 кшль/кг белка, что только в 1,6 раза больше, чем у здоровых людей., Через 24 часа от качала лечения даларгином уровень СШ повышается в 2,3 раза, серез 5 суток снижается до исходного уровня и нормализуется к 12 суткам от начала лечения даяаргшом.

При анализе дачных КГ эритроцитов, выявлено, что показатели изменения степени КГ свидетельствуют о меньших колебаниях ее у больных ГП до и после лечения даяарпюоы, по сравнению с аналогичными параметрами у больных Ш Так, в начале заболевания степень КГ эритроцитов больных ГП равняется 74%, что толы® в 1,1 раза больше контрольных значений, через сутки.от начала лечения больных даларгином степень КГ в 1,2 раза больше, черев 5 суток степень КГ возврадается к исходному уровню и нормализуется к 26 суткам от начала лечения больных даларгином.

Обратная картина выявляется при анализе дакных ПГ и ?Г

Z5

эритроцитов: степень ПГ у Сольных ГП , в отличии от больных Ш реако повышается уже в первые часы заболевания, но через 24 часа после лечения даларгиноц Содьньк ГП степень ПГ снижается и на пятые сутки от начала лечения становится практически нормальной, при том, что у больных Ш степень ПГ медленно нарастает, и также медленно снижается в ответ на лечение даларпшом. Эта тенденция сохраняется и при сравнении степени ТГ у больных ГП, и KL

Таким образом, нам представляется возможным предложить новый метод диагностики н дифференциальной диагностики жирового и геморрагического панкреатита, основанный на изучении динамики изменения устойчивости эритроцитов к индуцированному гемолизу. Cyi-ь метода заключается в том, что при Ш быстро и значительно повышается степень КГ, а при ГП степень ПГ и ТГ, одновременно при лечении ОП даларгином быстрее снижается степень КГ при Ш и степень ПГ и ТГ при TIL Измерение уровня содержат. СЖК и липо-литической активности плазмы крови не обязательно. Ценность предлагаемого нами метода состоит еие и в том, что технологически он не сложен» относительно бысто в исполнений.

В ц В О д И

3. Содержание СК в плазме возрастает в 3 - 4 раза при обоих форме л экспериментального острого панкреатита, а эндосубс-трагная лкподитическая активность плазш крови возрастав: в 1,5 - 2 раза при ЭГП и в 2 - 4 раза при ЭЖ Это свидетельствует о • той, что интенсивность ферментативного катаболизма липидов при 8®П в 2 раза выше, чем при ЭПТ

2. Собственная эндосубстратная фосфолкпазная активность мембран эритроцитов при ЗОП увенличивается - при ЭШ в 2 раза, при ЭГП в 1,5.

3. Шклеано, что степень Н202 и Твин-20 индуцироваьлых ге-шдиаов эритроцитов крыс возрастает при ЭГП в 2,5, а при 8ЯП в 1,7 р£.за. Это свидетельствует о том, что способность липидов меыЗран эритроцитов к перекисному окислению возрастает в больней мере при ЗГП, чем при ЭШ

4. Показано, что однократное внут; ивеиное введение даларги-на в доее 0,1мг/"г веса животного приводит к торможению развития изменений ферментативного катаСояигча липидов: при моделировании острого панкреатита у крыс содержание СЖК и уроьень андосубс-

гь

тратной липолитической активности плазмы крови снижается ниже ' контрольных цифр и только при ЭГП через 24 часа от начала эксперимента превышает нормальны^ значения. Это свидетельствует о том, что лечебный эффект даларгина более выражен при ЗЖП, об этил лее говорит и выраженное уменьшение эхиноцитоза

5. Показано, что однократное внутривенное введение даларги-га в дозе ОД мг/кг вэ.а животного приводит к нормализации степени Са2+ + калммицин, Н202 и Твин-20 индуцированных гемолизов эритроцитов крьге, что свидетельствуем о .торможении развития процессов ферментативного и неферментативного гидролиза липидов мембран эритроцитов при создании ЗЖП и ЗГП.

6. В оnurах in vitro по изучению действия даларгина на изолированные эритроциты контрольных и экспериментальных крыс показано, что даларгии в концентрациях 1,0 -С,1 мкг/мл среды снижает ка 20 - 40Х степень Са2+ + калимвдин индуцированного гемолиза, причем наиболее выраженный мембраностабшшзируюший зффект наблюдается в :лучае ЗЖП.

7. Парной корреляционный анализ между двумя группа1.« показателей - уровнем est и зндосубстратной липолитической активности плазш крови'крыс с одной стороны и степекнью различных видов индуцированных гемолизов с другой стороны показал наличие сильной корреляционной зависимости между яиш ( г > 0,88).

,8. Шлучеяныа результаты позволяют предложить применение этих видов шдуцированных гемолизов в комплексной дифференциальной диагностике различных клииико-шр^логических Форм острого панкреатита.

яршшкшие тийсадаида

Одним из объективных показателей, который зависит от выраженности ферментной токсемии при остром деструктивном панкреатите и позволяет проводить дифференциальную диагностику геморрагического и жирового панкреояекреза является устойчивость эритроцитов периферической крови к индуцированному гемолизу.

Наиболее достоверные показатели устойчивости эритроцитов к индуцированному гемолизу с целью дифференциальной диагностики жирового и геморрагического панкреонекроза у больных можно подучить в первые трое суток от начала заболевания, в фазу ферментной токсемии, что позволяет определять дальнейшую тактику лечения и прогноз в ранние сроки заболевания.

Использование дапаргина яля лечения острого панкреатита не только улучкает состояние больных, но и повышает диагностическую ценность показателя степени устойчивости эритроцитов к индуцированному гемолизу.

Диагностика абортивного панкреатита на основе изучения устойчивости эритроцитов к индуцированному гемолизу не' представляется возможной из-за невыраээиносга синдрома ферметаной интоксикации.

Для дифференциальной диагностики жирового и геморрагического панкреонекроза с помощью метода изучения'устойчивости эритроцитов периферической 1фови к индуцированному гемолизу необходимо проводить минимум три вида шдударовашюго гемолиза- 1) Кальций + калимицин индуцированный гемолиз. 2) Тнин-20 индуцированный гемолиз. 3) Гемолиз, индуцированный перекисью водорода. Исследо-. вания проводятся до и после качала леченая даларгкним.

Представляется возиозшьш использовать экспериментальные мб- , дели ЭЖП и ЭГП у коыс по методу Науо1атеп Т. ,1. ,1Ь60 для определения устойчивости эритроцитов к индуцированному гемолизу.

С5ШЖ ГАБОТ. ШУБШОВШЫХ !Ю ТЕ®

1) ЭЭДегаивнрсть использования дадаргина в лечении различных форм острого панкреатита // Вопросы частной хирургии и лим-фологии. сборник научных статей. Ы. 1922 год. С. 61-63. в соавторстве с В. А. Борисовой, о. в. Отлыгшшм, Е Л Катаевым, А. & Карташевой. •

2) Изменение скорости гемолиза, индуцированного перекисью водорода, ТВШ1-20 и кальцием + калшицином при экспериментальном остром панкреонекрозе у крыс и лечении его даларгином. // Вопросы частной хирургии и диыфодога;. Сборник научных статей. М. 1902. С. <58-71. В соавторстве с Е А. Шншшм. Е Л. Сороковым, А. Ф. Картзаевой.

з; Изменение скорости гемолиза, индуцированного перекисью водорода, тв1ш-20, и Са 2+ + кашмициноы при экспериментальном остром панкреатите у крыс и лечение его даларгином с использованием микровеаикул из плазмалеыыы эритроцитов как новой транспортной формы ле'тарственных средств // Основные аспекты гисто- и цитопатологии, Ы.1993. Ежегодн. гборн. научн. трудов АШ РАШ, С. 112-119. Соавторы: Пении В А., Сороковой Е Е , ларташева А. Ф.

28 ' ' •:';■ ■ -'. ..:! ; 4

4) Изменение ' ультраструктурц эритроцитов и липолитичэског. активности плззш крови криз при этперикентап&яон острой панкреатите и лечении его даяаргаюм // Основные аспекты гисто- и цитопатологки, II 1293. Ежегсдн. сборя. научп. трудов АШ5 РЛШ10. 105-110. Соавторы : Ссроксвоа Е И.. Гаворпоков Л. Л., Ш-ченова- К К , Кзркшава Л. & , Никитина Г. II