Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Влияние различных температурно-временных режимов криовоздействия на опухоли в эксперименте

ДИССЕРТАЦИЯ
Влияние различных температурно-временных режимов криовоздействия на опухоли в эксперименте - диссертация, тема по медицине
Трушина, Валентина Анатольевна Киев 1984 г.
Ученая степень
кандидата биологических наук
ВАК РФ
14.00.14
 
 

Оглавление диссертации Трушина, Валентина Анатольевна :: 1984 :: Киев

Введение

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Возможности использования криохирургии в онкологии

1.2. Механизмы и факторы криодеструкции опухолей

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3. ЭФФЕКТИВНОСТЬ КРИ0В03ДЕЙСТВШ НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ

ОПУХОЛИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ УСЛОВИИ ИХ ОХЛАЖДЕНИЯ И ОТОГРЕВА

3.1. Влияние скорости отогрева на эффективность криодеструкции

3.2. Влияние скорости охлаждения на эффективность криодеструкции

3.3. Зависимость эффективности криодеструкции от температуры на границе опухоли со здоровой тканью.

3.4. Эффективность криодеструкции при использовании многократных циклов криовоздействия

4. ВЛИЯНИЕ УСЛОВИИ ТЕПЛОВОГО КОНТАКТА НА ЭФФЕКТ КРИОВОЗДЕЙСТВИЯ

5. ЗАВИСИМОСТЬ ЭФФЕКТИВНОСТИ НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ ОТ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ ОПУХОЛЕЙ

5.1. Зависимость эффективности низкотемпературного воздействия на опухоли от их размера

5.2. Эффективность криовоздействия на различные штаммы перевивных опухолей крыс

3 а к л ю ч е ни е

- з

В ы в о д ы

Внедрение результатов исследований в практику

 
 

Введение диссертации по теме "Онкология", Трушина, Валентина Анатольевна, автореферат

Актуальность теш. Одной из важных задач современного здравоохранения является совершенствование известных и разработка новых методов лечения онкологических больных. Используемые в настоящее время традиционные методы лечения опухолевой болезни (хирургический, лучевой, химио-терапевтический) не всегда достаточно эффективны и не во всех случаях могут быть применены. Поэтому поиск новых способов воздействия на опухоль с учетом современных достижений науки и техники остается актуальной проблемой онкологии.

В последние годы для деструкции первичной опухоли в онкологической практике все шире используется локальное низкотемпературное воздействие. Накопленный к настоящему времени практический опыт использования криохирургии свидетельствует о ее высокой эффективности при лечении многих видов патологически процессов /~6, 8, 13, 30, 45, Ю27,. в том числе ряда доброкачественных и злокачественных опухолей ¿"18, 41, 43, 103, 126, 1357.

Однако при этом, результаты криовоздействия на злокачественные опухоли не всегда оказываются удовлетворительными вследствие появления локальных рецидивов, в особенности в случаях распространенного опухолевого процесса /""60, 64, 94, 96/. Указанное обстоятельство обусловливает необходимость дальнейшего совершенствования применяемых методов криотерапии.

Согласно данным криобиологических исследований,эффективность криовоздействия зависит от его температурно-временных режимов, в

- 5 частности, от следующих параметров: скоростей изменения температуры в процессе охлаждения и отогрева объекта, достигаемых температур, времени воздействия на объект низкими температурами, числа циклов криовоздействия /16, 59, 121, 1427.При этом вероятность выживания или гибели клеток определяется количественными значениями перечисленных температурно-временных параметров и определенными их сочетаниями. Исходя из этого, одним из путей повышения эффективности криовоздействия в онкологии представляется выбор рациональных вариантов температурно-временных режимов.

Однако, несмотря на широкое применение метода локального криовоздействия в онкологической практике, объем исследований в области экспериментальной криохирургии, которые могут дать исходную научную информацию, необходимую для оптимизации температурно-временных режимов воздействия, уточнения механизмов криоповрежде-ния опухолей, а также для разработки на этой основе способов управления эффектом криодеструкции и его прогнозирования, недостаточен. Имеющиеся данные разрознены и часто трудно сопоставимы. Это обусловливает неполное использование потенциальных возможностей криогенного лечебного метода в клинике.

Поэтому исследования, направленные на изучение закономерностей криоповрежденш опухолей в эксперименте при различных режимах криовоздействия, а также в зависимости от индивидуальных особенностей опухолей, являются актуальными.

Цель и задачи исследования. Изучить возможности управления эффектом низкотемпературного воздействия на опухоли на основании использования различных вариантов температурно-временных режимов для повышения эффективности лечения злокачественных новообразований.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи исследования:

1. Изучить тепловой режим опухолевой ткани при различных условиях криовозде йствия.

2. Оценить степень выживания опухолевых клеток в пределах зон криовоздействия при различных режимах.

3. Оценить эффективность различных режимов криовоздействия в зависимости от скорости охлаждения и отогрева, уровня температуры на границе опухолевой и здоровой ткани, условий теплового контакта,числа циклов криовоздействия, размеров опухолей.

4. Оценить эффективность криовоздействия на опухоли различного генеза.

Научная новизна и практическая значимость результатов. Впервые проведены сравнительные комплексные исследования по изучению влияния на экспериментальные опухоли ряда режимов криовоздействия, включающих наиболее существенные для повреждающего эффекта параметры: скоростей охлаждения и последующего отогрева температуры, достигаемой на границе опухолевой и здоровой ткани, числа циклов замораживания-отогрева и т.д., что позволило оценить значимость каждого из них в эффекте криоразрушения и обосновать пути оптимизации температурно-временных условий для обеспечения максимальной деструкции опухолей.

На основании результатов комплексных морфологических, гис-тоавторадиографических исследований и теста ретрансплантации доказана возможность выживания функционально полноценных опухолевых клеток в пределах зон замораживания; установлено, что их количество зависит от температурно-временных условий криовоздействия.

- 7

Показано, что увеличение скорости охлаждения на периферии опухолевого узла в пределах от 2-3 град/мин до 12-15 град/мин, а также снижение температуры в диапазоне от 268 до 228°К ( от -5 до -45°С) сопровождается достоверным усилением деструктивного эффекта (в 2-3 раза). Впервые оценено влияние скорости отогрева при криовоздействии на опухоли в условиях in vivo. Установлено, что ускорение отогрева в 2-3 раза, по сравнению с самопроизвольным, обусловливает достоверное ослабление повреждающего эффекта криовоздействия. Получена количественная оценка значимости условий теплового контакта криоинструмента с поверхностью замораживаемой опухоли в эффекте криоповреждения.

Выявлены отличия в повреждающем действии низких температур при одинаковых условиях для различающихся по генезу перевивных опухолей крыс.

Полученные результаты создают экспериментальные предпосылки для практического улучшения методик криогенного лечения больных онкологическими заболеваниями, а также совершенствования применяемых и разработки новых образцов специализированной криогенной аппаратуры для онкологических клиник.

На основании полученных данных обоснован ряд рекомендаций по методикам эксплуатации криогенной медицинской техники, которые используются в клинической практике в отделении опухолей головы и шеи КНИРРОИ МЗ УССР, на кафедре акушерства и гинекологии Одесского медицинского института им. Н.И. Пирогова, на кафедре онкологии КГИУВ при чтении лекций и проведении практических занятий на курсах повышения квалификации врачей-онкологов. Полученные данные использованы при написании учебного пособия "Комбинированное лечение рака желудка и прямой кишки с использовани

- 8 ем низких температур" (М. ЦОЛИУВ, 1982 г.).

Результаты диссертационной работы используются также в Специальном конструкторско-технологическом бюро физического приборостроения Института физики АН УССР с опытным производством, а также НИИ "Сатурн" при проведении опытно-конструкторских работ по разработке и освоению новых образцов криогенной медицинской аппаратуры онкологического назначения.

Результаты исследований опубликованы в 12 научных работах. Основные положения диссертации обсуждены на всесоюзных и республиканских научных конференциях.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Влияние различных температурно-временных режимов криовоздействия на опухоли в эксперименте"

ВЫВОДЫ

1. На основании результатов комплексных гистоавторадиогра-фических и морфологических исследований, а также данных по ре-трансплантации клеток опухоли установлено, что в пределах зон замораживания могут сохраняться жизнеспособные опухолевые метки, количество которых зависит от температурно-временных условий криовоздействия.

2. Показано, что повреждающий эффект криовоздействия существенно зависит от скорости охлаждения. Увеличение скорости охлаждения на периферии опухолевого узла с 2-3 град/мин до 12-15 град/ мин приводит к усилению деструктивного действия низких температур, что выражается в возрастании степени и распространенности необратимых повреждений опухолевой ткани и обусловливает повышение количества полностью рассосавшихся опухолей у крыс с 23 до 61%.

3. Установлено, что ускоренный в 2-3 раза по сравнению с самопроизвольным отогрев подвергнутых замораживанию опухолей приводит к выраженному ослаблению разрушающего эффекта криовоздействия. Число крыс-опухоленосителей с полностью рассосавшимися опухолями снижается при этом с 82 до 66%.

4. Показано, что при фиксированных условиях охлаждения и отогрева эффект криоповреждения опухолей в значительной мере зависит от достигаемой температуры на границе опухолевой и здоровой ткани. Снижение температуры в указанной области в диапазоне от 268° до 228°К (от -5° до -45°С) приводит к усилению противоопухолевого эффекта низкотемпературного воздействия на 65-70%.

5. Результативность криовоздействия существенно зависит от условий теплового контакта с замораживаемой тканью. Несоблюдение условий адгезии криоинструмента с поверхностью замораживаемой опухоли приводит к выраженному ослаблению степени ее повреждения, что обусловливает уменьшение количества полностью рассосавшихся опухолей у крыс в 2 раза (с 47 до 23%).

6.При всех изученных режимах противоопухолеый эффект низких температур снижается с увеличением размера опухолей, подвергаемых воздействию, и может изменяться при этом от 100% до 0. Для всех размеров опухолей (за исключением больших - свыше 30 мм в диаметре) действенны методические приемы, способствующие повышению эффективности процедуры: ускорение охлаждения, замедление отогрева, реализация адгезии криоинструмента с замораживаемой тканью.

7. Показано, что использование повторных циклов замораживания-отогрева сопровождается достоверным возрастанием противоопухолевого эффекта криовоздействия (в том числе при опухолях большого размера). Количество полностью рассосавшихся опухолей у крыс возрастает с 15% при однократном воздействии до 36% при двукратном и до 80% при использовании трех циклов замораживания-отогрева .

8. Выявлено, что перевивные опухоли различного гене за существенно отличаются по степени повреждения при идентичных условиях криовоздействия. Эффект полной регрессии опухолей составил 20% при саркоме-45, 30% при карциносаркоме Уокера, 46% при карциноме Герена, 50% при эритромиелозе Швеца, 75% при саркоме ССК.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ В ПРАКТИКУ

Проведенные исследования послужили основой для разработки рекомендаций по совершенствованию методик клинического применения локального низкотемпературного воздействия для лечения больных онкологическими заболеваниями, также для улучшения существующих и разработки новых типов криогенных приборов для онкологии.

1. Результаты, полученные в ходе выполнения диссертационной работы, внедрены в клинике КНИРРОИ МЗ УССР при лечении ряда опухолевых заболеваний головы и шеи, на кафедре акушерства и гинекологии Одесского медицинского института им. Н.И. Пирогова при лечении ряда предопухолевых и опухолевых заболеваний гениталий. Отмечен существенный клинический эффект внедрения.

2. Полученные экспериментальные данные нашли применение при разработке криогенной аппаратуры исследовательского и практического назначения для онкологии. Результаты диссертационной работы использованы отделом медицинского приборостроения Специального конструкторского технологического бюро физического приборостроения Института физики АН УССР с Опытным производством при проведении опытно-конструкторских работ по темам: "Криоультразвуковые устройства для гинекологии", "Комплекс криоультразвуковых средств для исследований в области экспериментальной хирургии", "Криоэн-доскопические инструменты для гинекологии". Обоснованные в результате проведенных исследований рекомендации по выбору оптимальных, с точки зрения обеспечения максимальной деструкции патологических образований, режимов криовоздействия использованы при разработке медико-технических требований на новые типы криогенных и криоультразвуковых приборов.

Результаты диссертационной работы использованы также Научно-исследовательским институтом "Сатурн" при проведении опытно-конструкторских работ по разработке криохирургической аппаратуры типа "Криоэлектроника-2", выпускаемой серийно с 1980 г.

В 1981 г. на смотре "Криохирургическая аппаратура" в павильоне "Здравоохранение СССР" на ВДНХ СССР экспонировался крио-эндоскопический деструктор, в разработке которого принимала участие В.А. Трушина.

3. Результаты исследований, полученные в ходе выполнения диссертации, систематически используются при чтении лекций и проведении практических занятий на курсах повышения квалификации на цикле специализации по онкологии Киевского государственного института усовершенствования врачей. Издано учебное пособие "Использование низких температур в комбинированном лечении рака желудка и прямой кишки" (М., ЦОЛИУВ, 1982, с. 22) ( в соавторстве с Д.В. Мясоедовым, О.Ф. Киневским). яьао

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Накопленный к настоящему времени практический опыт применения криохирургии свидетельствует о ее высокой эффективности при лечении многих видов патологических процессов, в том числе ряда доброкачественных и злокачественных опухолей /~3, 8, 13, 43, 457- Однако, при этом, по данным ряда клинических работ, результаты использования низкотемпературного воздействия при лечении злокачественных опухолей не всегда оказываются удовлетворительными вследствие появления локальных рецидивов, в особенности в случаях распространенных опухолевых процессов /"60, 647-Указанное обстоятельство обусловливает необходимость поиска путей совершенствования криохирургического метода в онкологии.

По данным криобиологических исследований повреждающий эффект низких температур существенно зависит от температурно-вре-менных режимов криовоздействия, в частности от следующих параметров: скорости изменения температуры в процессе охлаждения и отогрева объекта, уровня применяемых температур, времени воздействия на объект низкими температурами, числа циклов криовоздействия.

При этом вероятность выживания или гибели клеток определяется количественными значениями перечисленных температурно-времен-ных параметров и определенными их сочетаниями. Исходя из этого, одним из путей повышения эффективности криовоздействия в онкологии представляется выбор рациональных вариантов температурно-временных режимов.

Однако, несмотря на применение метода локального криовоз-действия в онкологической практике, объем исследований в области экспериментальной криохирургии, способных дать исходную научную информацию, необходимую для обоснования оптимизации темпера-турно-временных режимов воздействия, недостаточен. Это обусловливает неполное использование потенциальных возможностей криогенного лечебного метода в клинике.

Поэтому исследования, направленные на изучение закономерностей криоповреждения опухолей в эксперименте при различных режимах криовоздействия, а также в зависимости от их индивидуальных биологических особенностей, являются актуальными.

В качестве биологических объектов исследования нами выбраны опухолевые штаммы крыс: карцинома Герена, карциносаркома Уокера, саркома ССК, саркома-45, эритромиелоз Швеца. Изучено влияние ряда режимов и термических приемов, включающих наиболее существенные для повреждающего эффекта параметры при однократном криовоздействии, а также при использовании двух и трех циклов замораживание-отогрев. Основными показателями, по которым оценивали противоопухолевую эффективность локального низкотемпературного воздействия, служат: процент излечения животных-опухоленосителей, частота и сроки появления рецидивов, продолжительность жизни леченых животных по сравнению с контролем. Наряду с показателями терапевтической эффективности при всех вариантах режимов мы изучали структурно-метаболические характеристики опухолевой ткани в пределах зоны криовоздействия по морфологическим и радиоавтографическим показателям, а также по тесту ретрансплантации.

Тепловой режим опухолевой ткани при различных условиях криовоздействия, а также его воспроизводимость оценивали посредством термометрических измерений с помощью медь-константановых термопар, вмонтированных в инъекционные иглы. Регистрацию температуры производили самопишущим потенциометром КСП-4.

Нами изучена эффективность криовоздействия на карциному Герена в зависимости от скорости ее охлаждения. Изменение скорости охлаждения в пределах всей зоны криовоздействия достигалось при использовании одного и того же криоинструмента (крио-зонд с диаметром рабочего наконечника 4 мм) при двух различных уровнях хладопроизводительности: в максимальном режиме (быстрое охлаждение) и в режиме меньшей хладопроизводительности (замедленное охлаждение). В первом случае минимальная температура на охлаждающем наконечнике достигала значений ЮЗ*98°К (-170-=--175°С), во втором - 133т123°К (-140- -150°С), что обусловливало выраженное отличие реализующихся в пределах всей зоны замораживания скоростей охлаждения (при одинаковых температурах 258-г253°К ( -15* -20°С) на границе опухоли). Средняя скорость изменения температуры в пределах зоны замораживания при быстром охлаждении составила П-15°К/мин, при замедленном 3-5 град/мин. Наиболее выраженные различия в скорости охлаждения имели место на периферии опухолевого узла (на границе со здоровой тканью). При быстром охлаждении скорость изменения температуры составляла 12-15°К/мин, при замедленном - 2-3°К/мин. Снижение темпа охлаждения обусловило увеличение экспозиции криовоздействия примерно в 2 раза (для опухолей одинакового размера).

Проведенные исследования показали, что ускорение охлаждения опухолевого узла приводит к достоверному усилению повреждающего эффекта низких температур. Морфологическими и гистоавтора-диографическими исследованиями установлено, что степень выраженности деструктивных изменений в опухолевых клетках и строме опухоли, распространенность необратимых повреждений во все изученные сроки были большими после криовоздействия с быстрым охлаждением. По данным радиоавтографических исследований количество морфологически неизмененных опухолевых клеток, а также ДНК-синтезирующих клеток среди них после быстрого охлаждения, по сравнению с замедленным, достоверно уменьшалось. Так, на третьи сутки после криовоздействия с быстрым охлаждением в препаратах насчитывалось 43,6+7,3 структурно неизмененных клетки, из них 9,6+3,7 содержали метку, в то время как при замедленном охлаждении эти показатели составляли соответственно 61,2+10,5 и 10,0+2,5.

Отмеченное снижение содержания жизнеспособных клеток в препаратах опухолевой ткани коррелировало с данными теста ретранс-плантации, свидетельствующими о пролиферативной способности выживших клеток. После криовоздействия с быстрым охлаждением положительные перевивки опухолей отмечены у 24$ крыс-реципиентов, в то время как после замедленного - у 55$ (Р <0,05). При этом после криовоздействия с быстрым охлаждением (по сравнению с замедленным) удлинялся латентный период образования пальпируемого опухолевого узла: 22,8+2,9 дн по сравнению с 9,6+0,6 дн, что также подтверждает данные радиоавтографических исследований о выживании после быстрого охлаждения существенно меньшего числа функционально полноценных опухолевых клеток. Полученные данные радиоавтографических исследований и теста ретрансплантации позволяют думать, что возобновление роста опухоли, отмечаемое в ряде случаев по истечении определенного времени после криовоздействия, обусловлено, по-видимому, размножением сохранивших жизнеспособность опухолевых клеток в пределах зон замораживания. Этим могут быть объяснены выявленные отличия в терапевтической эффективности криовоздействия с различными скоростями охлаждения: 61$ крыс с полностью рассосавшимися опухолям^! после быстрого охлаждения по сравнению с 2Ъ% после замедленного (Р<0,05).

Термические условия постановки опытов (стабильность отогрева и температуры на границе опухолевой и здоровой ткани) позво-, различия ляют свя:ШТь^"вТерапевтическом эффекте с влиянием скоростей охлаждения. Согласно полученным данным, для общего эффекта криовоздействия, вероятно, более значимо повышение скорости охлаждения, нежели увеличение экспозиции при меньшей скорости. Полученные данные свидетельствуют также о недостаточности достижения определенной температуры на периферии опухолевого узла так прогностического показателя лечения. Из этого можно заключить, что в онкологической практике целесообразно использование крио-инструментов с максимальной хладопроизводительностью, которые могут обеспечить высокие скорости охлаждения опухоли, в том числе на ее периферии.

Было изучено также влияние условий отогрева на эффект кри-одеструкции карциномы Герена. Охлаждение опухолей производилось при максимальной хладопроизводительности криозонда диаметром 2,5 мм с последующим самопроизвольным (под действием теплоподвода от окружающей ткани) либо ускоренным (потоком теплого воздуха) отогревом. По данным термометрических измерений скорость принудительного отогрева по сравнению с самопроизвольным повышалась в 5-10 раз в центре зоны криовоздействия и в 2-3 раза - в периферических областях.

Результаты проведенных морфофункциональных исследований

- 135 показали существенное ослабление степени повреждения опухолевых клеток при ускорении отогрева, выражающееся в снижении количества необратимо поврежденных клеток опухоли и возрастании доли выживших клеток по сравнению с самопроизвольным. Такая закономерность сохранялась по всей зоне криовоздействия, включая периферию .

По данным морфологических и радиоавтографических исследований абсолютное количество неизмененных ¡теток в 100 полях зрения микроскопа с 3 по 10-е сутки наблюдения возрастало при ускоренном отогреве с 67,2+16,3 до 153,5+11,8. Доля клеток,вклюо чавших Н-тимидин, увеличивалась при этом с 11,4+3,2 до 45,7+ 5,7 клеток. При самопроизвольном отогреве эти показатели были существенно ниже. Количество структурно неизмененных клеток повышалось с 36,2+14,4 клеток на 3 сутки до 109,0+16,3 клеток на 10-е, доля меченых клеток возрастала с 7,4+2,2 до 26,5+5,0.

По данным теста ретрансплантации при ускорении отогрева наблюдался более высокий процент положительных перевивок: в 48$ случаев по сравнению с 20$ при самопроизвольном отогреве (р < 0,05) при более коротком латентном периоде образования опухолевого узла 17,8+1,3 дн по сравнению с 22,8+2,9 дн при самопроизвольном (р <0,05), что подтверждает данные гисторадиоав-тографических исследований о выливании после ускоренного отогрева достоверно большего количества опухолевых клеток и свидетельствует о ' их способности к размножению.

Результаты терапевтических опытов подтвердили отмеченные закономерности. Количество животных с полностью рассосавшимися опухолями после криовоздействия с ускоренным отогревом снизилось с 82$ до 67$ (р <0,05).

Таким образом, даже незначительное ускорение отогрева (в

- 136

2-3 раза) обусловило достоверное ослабление повреждающего эффекта при криовоздействии (в пределах всей зоны замораживания). Полученные результаты подтверждают применимость закономерностей установленных в криобиологических исследованиях для прогнозирования результата низкотемпературного воздействия на опухоли в условиях in vivo.

Данные о влиянии скоростей охлаждения и отогрева являются экспериментальным обоснованием целесообразности ускорения охлаждения и замедления отогрева в онкологической практике, что ложно быть учтено при конструировании и эксплуатации криоинструмен-тов с нагревателями.

Важным параметром, определяющим эффект криовоздействия, такие является уровень температуры, до которой должно быть произведено охлаждение периферических участков опухолевого узла (на границе со здоровой тканью). Имеющиеся данные в литературе по этому вопросу противоречивы /~П7, 1247. Существует мнение о так называемой "критической" температуре (-15 * -20°С) для гибели биологической ткани /~13, 99, 104, 180/. Однако полученные нами результаты о выживаемости опухолевых клеток на периферии зоны криовоздействия при температуре 258-253°К (-15* 20°С) свидетельствуют о неубедительности подобных утверждений применительно к опухолям, что обусловило целесообразность проведения исследований в этом направлении. В проведенных опытах показано, что изменение достигаемой температуры в диапазоне от 268°К (-5°С) до 228°К (-45°С) на границе опухолевой и здоровой ткани сопровождается усилением криоповреждения опухолевой ткани и приводит к увеличению числа животных с полной регрессией опухоли с 25 до 100$.

Нами изучена эффективность криовоздействия в зависимости от условий теплового контакта криоинструмента с поверхностью замораживаемой опухоли. Для этого в одной серии опытов в контакт с поверхностью опухоли приводили теплый криоинструмент ( с температурой рабочей поверхности 293°К (+ 20°С), после чего начинали подачу хладоагента; во второй серии опытов в контакт с опухолью приводили предварительно охлажденный на воздухе до -180°С рабочий наконечник инструмента. В первом случае адгезия реализовалась, во втором примерзания зонда к ткани не происходило, что соответствует данным /~9, 137> несмотря на одинаковую конечную температуру на наконечнике криоаппликатора 93-88°К (-180* -185°С).

Эффективность криовоздействия существенно различалась в зависимости от того тлело место примерзания зонда к ткани или адгезия отсутствовала. Количество полностью рассосавшихся опухолей у крыс после криовоздействия в условия адгезии составило 47$, в условиях ее отсутствия - лишь 23,5$. Терапевтические результаты подтвердились структурно-фушщиональными исследованиями опухолевых клеток по морфологическим и радиоавтографическим показателям. В условиях отсутствия адгезии количественное содержание жизнеспособных опухолевых клеток было более высоким.

Таким образом, в результате проведенных исследований впервые получена количественная оценка значимости условий теплового контакта при криодеструкции опухолей. Эффект криовоздействия в значительной мере зависит от конкретных методических условий эксплуатации криоинструментов, с целью совершенствования которых представляется целесообразным провести исследования, направленные на поиск средств контроля теплового контакта и методов его восстановления при нарушении.

Известно, что результаты лечения злокачественных опухолей

- 138 в значительной мере зависят от стадии процесса. Одним из параметров, определяющих стадию опухолевой болезни, является размер первичной опухоли. Нами изучена зависимость разрушающего эффекта при различных режимах криовоздействия от размера опухолей. В опытах были использованы крысы с опухолями размером от 20 до 32 мм. Установлено, что при каждом из изученных режимов криовоздействия,количество животных с полностью рассосавшимися опухолями с увеличением размеров опухолевых узлов снижается и может изменяться от 100/;? до 0. При всех размерах опухолей действенны методические приемы, направленные на повышение эффективности процедуры: ускорение охлаждения, замедление отогрева, соблюдение условий теплового контакта криоинструмента с замораживаемой тканью и т.д. При распространении опухолевого процесса, когда опухоль достигала 30-32 мм в диаметре, результаты использования однократного криовоздействия при всех режимах оказались неудовлетворительными. Оптимизация условий воздействия в одиночном цикле не приводила к существенному улучшению результата.

Полученные результаты определили интерес к поиску методических приемов, которые могли бы обеспечить повышение эффективности криовоздействия на опухоли большого размера. Одним из таких приемов ,на основании полученных каш данных, представляется достижение достаточно низких температур (ниже 243°К (-30°С) на периферии опухолевого узла. Однако в этом случае для обеспечения криоповреждения опухолей, больших по объему, необходимо использование длительных экспозиций, что приводило к повышению частоты осложнений, связанных с повреждением окружающих опухоль тканей. Это побудило нас к изучению эффективности многократных циклов криовоздействия на опухоли размером 28-32 мм.

- 139

Изучена эффективность криовоздействия при использовании одного, двух и трех щитов замораживания-о тогреза. Криовоздействие в каждом цикле проводили аппликационно, в режиме адгезии криоин-струтлента с поверхностью опухоли, в оптимизированном варианте (быстрое охлаждение, самопроизвольный отогрев) до температур 258-253°К (-15* -20°С) на границе опухолевого роста. Установлено, что при однократном криовоздействии регрессия опухоли достигнута у 15$ животных, при двукратном криовоздействии этот показатель повышался до 36$, при трехкратном регрессия опухолевого очага отмечена у 80$ крыс. В ранее проведенных совместно с Л.И. Трушкевич /~67J исследованиях использованием трехкратного криовоздействия при опухолях до 20 мм в диаметре получена их полная регрессия. Вместе с тем, при опухолях больших размеров (2832 мм) абсолютного повреждающего эффекта не достигается. Следовательно, выбор числа циклов криовоздействия в каждом случае должен осуществляться с учетом конкретных характеристик опухоли, в частности, размера.

Результаты криовоздействия зависят не только от параметров и методических приемов, но и от биологических особенностей опухолей.

По данным криобиологических исследований различные клетки и ткани специфично реагируют на низкотемпературный фактор. Вопрос о криочувствительности опухолевых клеток изучен недостаточно. В сравнительном аспекте изучалась реакция клеток различных опухолей лишь в условиях in vitro применительно к задачам кри-оконсервации. Полученные результаты противоречивы. В аспекте требовании к криохирургии, как в эксперименте так и в клинике, такого рода исследования не проводились.

- 140

Нами изучена результативность криовоздействия при одинаковых условиях на пять шташов перевивных опухолей крыс: сарко-му-45, карциносаркому Уокера, эритромиелоз Швеца, фибросаркому ССК, карциному Герена. Все опухоли перевивали подкожно в область бедра белым беспородным крысам и подвергали криовоздейст-вию при достижении шли размеров 22-28 мм. Использован одиночный цикл криовоздействия в оптимизированном варианте (быстрое охлаждение, самопроизвольный отогрев опухоли, в условиях адгезии кри-оинструмента с поверхностью опухоли). Охлаждение производили до температур 258-253°К (-15 * -20°С) на границе опухоли со здоровой тканью.

На основании результатов проведенных опытов впервые выявлены существенные различия в повреждающем эффекте при идентичных условиях низкотемпературного воздействия для опухолей, отличающихся по гистогенезу. Количество полностью рассосавшихся опухолей у крыс с саркомой-45 составило 20%, с карциносаркомой Уокера - 30$, с карциномой Герена - 46%, с солидной формой эрит-ромиелоза Швеца - 50%, с фкбросаркомой ССК - 75%. Полученные данные позволяют заключить, что эффект криовоздействия при стабильных параметрах в значительной мере зависит от индивидуальных биологических особенностей опухолей. Учитывая определяющие механизмы повреждающего действия низкотемпературного фактора, можно полагать, что существенными в реализации деструктивного эффекта могут быть гетерогенность клеточного состава опухолей, соотношение элементов паренхимы и стромы, содержанке, жидкости, васкуляризация, особенности окружающих тканей и т.д. Изыскание решении данных проблем может быть задачей перспективной работы.

Таким образом, в результате проведенных исследований впервые получены данные об особенностях криоповредцения опухолей в эксперименте: прямыми методами подтверждена возможность сохранения жизнеспособности опухолевых клеток в пределах зон замораживания; доказана применимость криобиологических закономерностей для прогнозирования результата низкотемпературного воздействия на опухоли в условиях in vivo ; изучены возможности направленного влияния на эффект криовоздействия посредством варьирования температурно-временных режимов; показана существенная зависимость результата криовоздействия от особенностей использованных методических приемов, от размера и гистогенеза опухолей.

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 1984 года, Трушина, Валентина Анатольевна

1. Белоус A.M., Бондаренко Т.П., Бондаренко В.А. Молекулярные механизмы криоповреждения мембранных структур. В сб.: Криобиология и криомедицина. Киев: Наукова думка, 1979, вып. 5, с. 3-18.

2. Боженков Ю.Г. Использование криогенного метода в клинической онкологии. Клиническая хирургия, 1980, $ 5, с. 57-59.

3. Боженков Ю.Г. Криохирургическое лечение рака желудка. В кн.: Развитие и применение криогенной техники в медицине: Материалы Всесоюзной конференции. Москва, 1980, с. 81-82.

4. Бреславский A.C., Вартапет Б.А., Гладкова А.И. Морфологические изменения в простате после криодеструкции. В сб.: Криобиология и криомедицина. Киев: Наукова думка, 1975,вып.о, с. 90-92.

5. Всесоюзная конференция по холоду (Ташкент, 25-27 октября 1977 г.): Тез. докл. Секция 7. Криобиология. Криохирургия. Вопросы холодильной техники. Ташкент, 1977. - 88 с.

6. Гойхберг М.К., Запарин В.К., Клименко И.А., Киневркий O.Q., Рикберг А.Б. Криохирургия некоторых онкоурологических заболеваний. У съезд онкологов УССР (Запорожье, 28-30 мая 1975 г.): Тез. дом. - Запорожье, 1975, с. 240-241.

7. Грищенко В.И. Гипотермия и криохирургия в акушерстве и гинекологии. М.: Медицина, 1974. - 280 с.

8. Долецкий A.C., Быкова H.A., Войтипа C.B., Писаревский A.A., Акопян В.Г. Локальное замораживание пищевода, желудка и сосудов в экся. хирургии. Эксп. хир. и а не с тез кол. j" I, 1976, с. 35-39.

9. Запорожан В.II. Эффект криовакуумного воздействия. В кн.: Материалы Всесоюзной конференции "Развитие и применение криогенной техники в медицине", гл., 1980, с. 46-48.

10. Запорожан В.Н. Криогенный метод лечения некоторых заболеваний шейки матки.: Дис. . канд. мед. наук. Одесса,1976.- 130 с.

11. Запорожан B.II. Комбинированное криогенное лечение гиперпластических процессов матки: Дис. . докт. мед. назгк. -Харьков, 1982. 390 с.

12. Кандель Э.И. Криохирургия. М*: Медицина,1974. - 303 с.

13. Кандель Э.И., Биезинь O.A. Криохирургия опухолей головного мозга. Вопросы нейрохирургии, 1971, .; I, с. 3-9.

14. Кандель Э.М., Биезинь O.A. Опыт применения криохирургического метода для деструкции опухолей головного мозга.

15. В кн.: Материалы 2-й конференции нейрохирургов Прибалтийских республик. Тарту, 1969, с. 70-71.

16. Кандель Э.И., Викторова Н.Д., Биезинь O.A. Основные данные о воздействии низких температур на биологические объекты. В кн.: Криохирургия. М.: Медицина, 1974, с.37-70.

17. Кандель Э.И., Чирешкин Д.Р., Шальников А.И. Итоги развития криохирургии и перспективы дальнйших исследований.- Вестн. АН СССР, 1980, J" I ,с 3-13.

18. Кандель Э.И., Яворский В.В. Криохирургический метод в общейонкологии. В кн.: Криохирургия. М.: Медицина, 1974, с. 290302.

19. Киндзельский Л.П., Курлянд В.А. Экспериментальное обоснование комбинированного применения криогенного и лучевого методов лечения опухолей. В сб.: Криобиология и криомедицина, 1980, вып. 6, с. 22-25.

20. Киселева Н.С. Глубокое замораживание опухолевой ткани как метод длительного ее хранения. Вопросы онкологии, 1962, УШ, № 10, с. I04-115.

21. Киселева Н.С. Влияние скорости замораживания и оттаивания опухолевой ткани на рост опухоли при перевивке. Бюл.эксп. биол. и мед., 1961, 4, с. 98-102.

22. Кшочарев Б.В., Кузьмин В.Г., Черняк О.В. Применение криодест-рукции при раке предстательной железы. Вестн. хирургии. -1980, т. 125, в. 9, с. 34-36.

23. Кондрацкая Р.Н., Трушкевич Л.И., Патоморфоз опухолей Герена при различных режимах криовоздействия. В кн.: Второй съезд патологоанатомов УССР, Черновцы, 1976, с. 154-156.

24. Кравец А.И. Непосредственные результаты внедрения криогенного метода лечения больных со злокачественными опухолями кожи, губы, языка. Днепропетровск, 1979, с. 306-308.

25. Краевский H.A. Проблема патоморфоза опухолей. Вестн. АМН

26. СССР, 1976, Jf! 6, с. 3-4.

27. Креджи Д. Сохранение живой опухолевой ткани в замороженном состояний. В кн.: Успехи в изучении рака, 1956, с.375-411.

28. Криворотько В.Ф. Криовоздействие на опухоли предстательной железы в условиях инфильтрации новокаином и защиты окружающих тканей и органов растворами криопротекторов. В сб.: Криобиология и криомедицина. Киев: Наукова думка, 1981, вып. 9, с. 91-95.

29. Криворотько В.Ф. Развитие и современное использование криогенного метода лечения опухолей предстательной железы.Препринт. Физ.-техн. ин-т низк. температур АН УССР, 1982,с. 62.

30. Лапоногов O.A., Птуха Т.П., Пушкарь Н.С., Рикберг A.B., Рудько Ю.М., Сандомирский Б.П., Трушкевич Л.14., Шенталь В.В., Зубашич В.И. Состояние и перспективы развития криохирургии.-I съезд ВНМТО (19-21 ноября 1975 г.): Тез. докл. M., 1975,

31. Л1вшиць В.Л. Анаб10тична консерващя шк1ри i гомопластика ïï при oniKax. Khïb: Здоров"я, 1970. - 196 с.

32. Лозина-Лозинский Л.К. Мультификаторная теория криоповрежде-ния. В сб.: Криобиология и криомедицина, Киев: Наукова думка. - 1980, в. 2, с. 3-8.

33. Лозина-Лозинекий Л.К. Очерки по криобиологии. Л.: Наука, 1972. - 288 с.

34. Луценко C.B., Хрипунов В.М., Гарбуз М.И. Действие на карциному Герена излучения неодимового лазера и замораживания.- В сб.: Онкология. Киев: Наукова думка, 1977, вып.8, с. 7880.

35. Лушников Е.Ф. Терапевтический патоморфоз опухолей человекав практическом и теоретическом аспектах. Докл. Всесоюзн. сим-поз. "Морфология злокачественных опухолей человека после лучевого и комбинированного воздействия", Обнинск, JS II, с.4-10.

36. Материалы Всесоюзной конференции "Развитие'и применение криогенной техники в медицине". М., -1980. - 112 с.

37. Мацуй В.И., Ткачев Н.Ф. Криохирургия рака предстательной железы и мочевого пузыря с учетом морфологических гисто- и эн-зимогистохимических критериев. В сб.: Новые приборы и устройства в медицине. Киев, 1977, с. 10-12.

38. Муратходжаев Н.К., Романова P.P., Кузнецов В.Н. Комбинированное криоультразвуковое воздействие на злокачественные опухоли в эксперименте. В кн.: Материалы Всесоюзной конференции "Развитие и применение криогенной техники в медицине". М., 1980, с. 44-45.

39. Мясоедов Д.В. 0 показаниях к криодеструкции рака прямой кишки, Клин, хирургия, 1975, .' 3, с. 5-8.

40. Пачес А.И., Птуха Г.П., Шенталь В.В. Криогенное воздействие и лечение больных с опухолями головы и шеи. Вестн. АМН СССР, 1974, 4, с. 27-31.

41. Пачес А.И., Шенталь В.В., Птуха Т.П. Криоультразвуковоевоздействие при лечении опухолей головы и шеи. Вестник АМН СССР, 1978, 15 5, с. 37-40.

42. Пачес А.И., Шенталь В.В., Птуха Т.П., Рикберг A.B., Трушке-вич Л.И. Криогенный метод лечения опухолей головы и шеи. -М.: Медицина, 1978. 168 с.

43. Погосянц Е.Е., Киселева Н.С. Опухолевые штаммы, поддерживаемые в институте экспериментальной и клинической онкологии АМН СССР. Вопросы онкологии, 1963, т.9, 8, с. I03-II6.

44. Потапов И.И., Рудня П.Г., Тарлычева JI.C. Криохирургия в отоларингологии. М.: Медицина, 1975. - 167 с.

45. Пушкарь Н.С., Белоус A.M. Введение в криобиологию. Киев: Наукова думка, 1975. - 244 с.

46. Пушкарь Н.С., Белоус A.M. Актуальные проблемы криобиологии.-Киев: Наукова душа, 1981. 608 с.

47. Пушкарь Н.С., Белоус A.M., Иткин Ю.А., Вишневский В.И., Розанов Л.Ф. Низкотемпературная кристаллизация в биологических системах. Киев: Наукова думка, 1977. - 242 с.

48. Пушкарь Н.С. О некоторых достижениях и проблемах криобиологии и криомедицины. В сб.: Криобиология и криомедицина. Киев: Наукова думка, 1975, в.1, с. 3-8.

49. Рапопорт Я.Л. Проблема патоморфоза в онкологии. Вестн. АМН СССР, 1976, № 6, с. 4-7.

50. Рикберг А.Б. Усиление криоповреждения опухолей с помощью ультразвука малой интенсивности. Дис. . канд. биол. наук, Киев, 1982. - 143 с.

51. Рикберг А.Б., Андрейченко В.И., Бакай Э.А., Карась А.Ф., Мельников О.Ф. К вопросу об использовании сочетайного воздействия низких температур и ультразвука в онкологии.

52. В кн.: Ультразвук в физиологии и медицине: Тез. П Всесоюзной научной конференции. Ульяновск, 1975, с. 92-95.

53. Рикберг A.B., Кузьменко А.П., Запорожан В.Н., Карась А.Ф., Бакай Э.А., Карась Г.А., Марченко А.Т. Предпосьшки криоульт-развуковой терапии. В кн.: Развитие и применение криогенной техники в медицине: Материалы Всесоюзной конференции.М., 1980, с. 42-44.

54. Рикберг A.B., Кузьменко А.П., Мосиенко B.C. Сравнительная эффективность крио- и криоультразвуковой терапии опухолей в эксперименте. В сб.:Онкология, 1979, Киев: Наукова думка, вып. 13, с. 73-75.

55. Рикберг А.Б., Трушкевич Л.И. 0 возможности усиления криопов-реждения. В сб.: Механизмы крио повреждения и крио протекции биологических структур. Киев: Наукова думка, 1976, с.116-118.

56. Ромоданов А.П., Зозуля Ю.А., Лапоногов O.A. и др. Криохирургическое лечение злокачественных опухолей глубоких отделов мозга в сочетании с химиотерапией. Вопросы нейрохирургии, 1971, }Ь 6, с. 24-29.

57. Сандомирский Б.П. Деструктивное и защитное действие низких температур на кожу. Дис. . докт. мед. наук. - Харьков, 1983. -351с.

58. Сладкович С.Е. Лечение твердой углекислотой некоторых заболеваний кожи и слизистых. М.: Медгиз, I960.- 115 с.

59. Смит 0. Биологическое действие замораживания и переохлаждения. М.: ИЛ, 1963. - 503 с.

60. Соловьев М.М., Васильев A.B., Хавинсон В.Х., Морозов В.Г.

61. Сильварес О.М., Кравало Е.Г., Тоскано В.М., Хаггинс С.Е. Термодинамика процесса потери внутриклеточной воды при замораживании клеток. Теплопередача, 1975, т. 97, № 4, с.93-102.

62. Тиглен Г.Е., Венделовский И.И. Совместное использование сверхнизких температур и лазерного излучения в лоронкологии. В кн.: Новые приборы и устройства в биологии и медицине. Киев, 1975, с. 15-16.

63. ТроянВ.И., Покотленко А.К. Экспериментальное обоснование применения криоультразвукового метода в ЛОР-онкологии.

64. В кн.: Материалы к совещанию проблемной комиссии по отоларингологии Ученого Медицинского Совета Мин. здравоохранения РСФСР и Республ. научно-практической конференции отоларингологов техн. сообщений. Иркутск, 1980, с. 199.

65. Трушкевич Л.И. Оценка эффективности криохирургии злокачественных опухолей челюстно-лицевой локализации. В кн.: Специальные методы исследования, диагностики и лечения злокачественных опухолей: Тез. докл. Респ. конф. Днепропетровск, 1979,с. 294-296.

66. Трушкевич Л.И., Кондрацкая Р.Н., Птуха Т.П., Рикберг А.Б., ■ Киневский О.Ф., Трушина В.А. Применение криохирургии в онкологии. В кн.: Новая медицинская техника. Медицинские изделия и их испытания. Криогенная медицинская техника. М., 1976, с. 70-81.

67. Трушкевич Л.И., Кондрацкая Р.Н., Рикберг А.Б., Трушина В.А. К вопросу о возможности усиления криодеструкции после предварительной химиотерапии препаратом ТИО-ТЭФ. В кн.: Новые приборы и устройства в биологии и медицине. Киев, 1975, с. 5-6.

68. Трушкевич Л.И., Коцдрацкая Р.Н., Рикберг А.Б., Трушина В.А. К вопросу о выборе наиболее рациональных методик криохирургии. I съезд онкологов УССР (28-30 мая 1975 г.): Тез. докл. -Запорожье, 1975, с. 251-252.

69. Трушкевич Л.И., Кондрацкая Р.Н., Трушина В.А. Методика и непосредственные результаты криохирургии рака губы. Стоматология, 1976, т. 55, К I, с. 37-40.

70. Трушкевич Л.И., Птуха Т.П., Рикберг А.Б. Криохирургия опухолей кожи. В сб.: Онкология. - Киев: Здоров"я, 1973, с. 149151.

71. Трушкевич Л.И., Трушина В.А., Кондрацкая Р.Н., Рикберг А.Б.

72. К механизмам криоповреждения при криохирургии. В кн.: Механизмы криоповреждения и криопротекции биологических структур. - Киев: Наукова думка, 1976, с. 122-126.

73. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1975. 295 с.

74. Филиппов Ю.Н. Исследование криогенных систем для локального криовоздействия на биологические ткани: Дис. . канд. физ.-мат. наук, Москва, 1979. 152 с.

75. Черешкин Д.Г., Шустер М.А., Резницкий В.Г. Некоторые актуальные вопросы криохирургии. Вестник оториноларингологии.1976, .Г> 6, с. 100-101.

76. Чернышов В.П. Клеточные и гуморальные факторы в иммунологическом ответе на криодеструкцию предстательной железы в экслерименте. В кн.: Новые приборы и устройства в биологии и медицине. Киев, 1975, с. 7-8.

77. Шенталь В.В. Криодеструкция опухолей головы и шеи. Дис. . докт. мед. наук, Москва, 1980. - с. 452.

78. Шенталь В.В., Трушкевич Л.И., Птуха Т.П., Рикберг А.Б., Чернышов В.П. Криогенный метод лечения в онкологии. В кн.:

79. Состояние и перспективы развития медицинской техники: Тез. докл. I съезда ВНМТО. М., 1975, с. 70-8Г

80. Эммануэль Н.М. Кинетика экспериментальных опухолевых процессов. М.: Наука, 1977. - 416 с.

81. Эпштейн В.Г., Вишневский В.И., Сандомирский В.П. О воспроизводимости температурного поля, создаваемого криохирургическим аппликатором. Медицинская техника, 1978, }£ I, с. 14-16,

82. Эпштейн В.Г., Вишневский В.И. Особенности криохирургического метода при воздействии на поверхности органов и тканей.

83. В сб.: Вопросы криоконсервирования биологических объектов, Киев: Наукова думка, 1978, с. 117—118.

84. Яцкив А.И. Стоматоскопия и криохирургия предраковых заболеваний и доброкачественных опухолей челюстно-лицевой локализации: Дис. . канд. мед. наук. К., 1982. 210 с.

85. Asahina Е. Freezing process and injury in isolated animal cells. Fed. Proc., 1965, v.24, n.2, pt.3, p.I83~I87.

86. Bank H., Mazur P. Vizualization of freezing damage. J. Cell Biol., 1973, v.57, n.3, p.729~742.

87. Bellows J.G. Cryosurgical instruments. Theoretical and clinical considerations. Int. Surg., 1967, v.47, p.4l6~424.

88. Benson J.W. Regional chemotherapy and local cryotherapy for cancer. Oncology, 1972, v.26, n.2~3, p.I34""l5I.

89. Benson J.W. Combined chemotherapy and cryosurgery for oral cancer. Am. J. Surg., 1975, v.130, p.596-600.

90. Cahan YT.G. Five years of cryosurgical experience: benign and malignant tumors with hemorrhagic conditions. In: Cryosurgery . Springfield, 1968, p.388-410.

91. Cahan W.G. Cryosurgery of malignant and benign tumors. Fed. Proc., 1965, v.24, p.241-248.

92. Chilla R., Ilse H. Möglichkeiten und Erfolge der Kryotherapie im HNO-Bereich. HNO, 1978, N 26, S.I9I-I97.

93. Coe Y., Rockoff S,= Ommaya A. The effects of extreme cold on major extracranial arteries and veins. Acta Neurochir., 1965, v.12, p.778-790.

94. Cooper J.S. Cryogenic surgery for cancer» Fed. Proc., 1965, v.2, pt.3» p.237-240.

95. Cooper J.S. Cryogenic surgery in the geriatric patient. J. Am. Geriatr. Soc., 1964, v. 12:, p.814-856.

96. Cooper J.S., Gioino G. Temperature gradients during cooling and freezing in the human brain. Cryobiology, 1965, v.I, n.5, p.341-344.

97. Cooper J.S., Stellar S. Cryogenic freezing of brain tumorsfor excision or destruction in situ. J. Neurosurg., 1963» v.20, p.921-930.

98. Cryogenics in Surgery. / H.V.Leden, W.G.Cahan, eds. New York« Med. Examinat. Publ., 1971. - 190 p.

99. Cryosurgery. / R.W.Rand, A.P. Rinfret, H.V.Leden, eds. -Springfield: Thomas, 1968. 417 p.

100. De Santo L.B. The curative palliative and adjunctive uses of cryosurgery in the head and neck. Laryngoscope, 1972, v.82, n.7, p.I282-I29I.

101. Dinep M. Cold injury* a review of current theories & their application to treatment. Connecticut. Med., 1975, v.39, n.I, p-8-9.

102. Dissard P. Cryosurgery in proctology. A survey of 280 cases. -Lyon Med., 1980, v.243, n.IO, p.615-619.

103. Dow J.A. Effects of cryosurgical capsular temperature on cryosurgery of the prostate. J. Urol., 1968, v.100, n.I, p.66-71.

104. Farrant J. Cryobiology for basis for cryosurgery. Cryogenics, 1972, v. 12, n.I, p• 3~7.

105. Farrant J. Some mechanisms of frezing injury. Proc. Int. Congr. Cryosurg., 1972, p.23"32.

106. Farrant J. Water transport and cell survival in cryobiologi-cal procedures. Proc. Roy Soc. Lon., 1977, v.278, p.l9l-205.

107. Favard A., Dauplat J., Girand B. Cryosurgery and vulval cancer. J. Gynec. Obst. Biol. Reproduc., 1982, v.II, n.6,p.745-751.

108. Feifel G., Beutel V., Zamerz R. Cryotherapy for palliationin rectal carcinoma. Front. Gastrointest. Res., 1979* n.5, p. 195-201.

109. Frazer J. Cryosurgery. Progr. Surg., 1975, v.14, p.136-159.

110. Frazer J., Gill W. Observations on ultra-frozen tissue. -Brit. J. Surg., 1967, v.54, n.9, p.770-776.

111. Gage A.A. Cryotherapy for cancer. In» Cryosurgery. Springfield, 1968, p.376-387.

112. Gage A.A. Five-year survival following cryosurgery for oral cancer. Arch. Surg., 1976, v.II, p.990~994.

113. Gage A.A. Experimental cryogenic injury of the palate; observations pertinent to cryosurgical destruction of tumors. Cryobiology, 1978, v.15, n.4, p.4l5~425.

114. Gill W., Frazer Y. A look at cryosurgery. Scot. Med. J«, 1968, v.I3, p.268-273.

115. Gill W., Frazer Y., Carter D.C. Repeated freeze-thaw cycles in cryosurgery. Nature, 1968, v.219, n.27, p.410-413.

116. Gill W., Frazer Y., da Costa J., Beazley R. The cryosurgical lesion. Amer. Surg., 1970, v.36, p.437-445.123* Gill W., Long W.B. A critical look at cryosurgery. Int. Surg., 1971, v.56, p.344-351.

117. Gill W., Long W., Frazer Y., Lee P. Cryosurgery for neoplasia. Brit. J. Surg., 1970, v.57, n.7, p.494-502.

118. Heard B.E. The histological appearance of some normal tissue at low temperatures. Brit. J. Surg., 1955, v.42, p.430-437.

119. Holden H.B. Practical cryosurgery. London, 1975. " 260 p.

120. Hrycak P., Levy M.J., Najjar T., Wilchins S.A. Cryosurgical time temperature experiments in vivo. - In: Proc. 32nd Annu. Conf. Eng. Med.-Biol., Denver, 1979, v.21, p.226.

121. Jones L.W. Cryosurgery for prostatic carcinoma. " Urology, 1974, v.4, n.5, p.499-503.

122. Kettelkamp D.B., Walker M. Radioaktive albumin red blood cells and sodium as indicators of tissue damage after frostbite. Cryobiology, 197I, n.8, p.79"83.

123. Kreyberg L. Stases and neckrosis. Scand. J. Clin. Lab. Invest., 1963, v. 15, Suppl.7I, p.2-26.

124. Largiader .?., Uhlschmid G., Gattiker H.H. Kryochirurgie von Lungenmetastasen. Ihoraxchirurgie, 1975, v.23, p.515-522.

125. Lenz H., Goetz W., Preussler H. Mindesgefriertemperature fur Hautnecrose. Arch. Oto-Rhino-Laryng., 1975, Bd.209, S.2I7" 221.

126. Leopard P.J. Cryosurgery and its application to oral surgery. -Brit. J. Oral Surg., 1975, v.13, p.128-152.

127. Le Pivert P., Binder P. Anasthesiques in situ et cryotumor-ectomies experimentales. -Bull. Cancer, 1977, v.64, n.3, p.451-460.

128. Levitt J. Winter hardiness in plants. In: Cryobiology, New York, 1966, p.485-563.

129. Lovelock J.E. The mechanism of the protective action of glycerol against haemolysis by freezing and thawing. Biochim. Biophys. Acta, 1953, v.II, p.28-36.

130. Lovelock J.E. The denaturation of lipid-protein complexes as a cause of damage by freezing. Proc. Roy. Soc. Lond. B., 1957, v.147, p.427-433.

131. Lozina-Lozinsky L.K. Survival of some insects and cells following intracellular ice formation. Ped. Proc., 1965, v.24, n.2, pt.3» p.206-212.

132. Matthäus W. Stand and Entwicklungstendenzen der Kryomedizin. Luft- und Kältetechnick, 1976, N 6, S.283-286.

133. Mazur P. Physical-chemical factors underlying cell injury in cryosurgical treezing. In» Cryosurgery. Springfield, 1968, p.32-51.

134. Mazur P. Cryobiology* the freezing of biological systems. -Science, 1970, v.160, n.3943, p.939-949.

135. Mazur P. Kinetics of water loss from cells at subzero temperatures and the likelyhood of intracellular freezing. J. Gen. Physiol., 1963» v.47, n.2, p.347-369.

136. Mazur P. The role of intracellular freezing in the death of cells cooled at supraoptimal rates. Cryobiology, 1977, v.I4, n.3, p.251-272.

137. Mazur P., Leibo S.P., Chu E.H.Y. A two-factor hypothesis of freezing injury. Evidence from chinesa hamster tissue culture cells. Exp. Cell. Res., 1972, v.71, n.2, p.345-355.

138. Mc Gann L.E., Kruuv S., Prey H.E. Effect of hypertonic it yand freezing on survival of anprotected synchronized mammalian cells. Cryobiology, 1972, v.9, n.2, p.I07-III.

139. Mc Grath J.J., Cravalho E.G., Huggins C.E. Heba cell freezing injury« intracellular in formatton and survival as function of cooling velocity. Cryobiology, 1974, n.II, p.549.

140. Mc Grath J.J., Cravalho E.G., Huggins C.E. An experimental comparison of intracellular ice formation and freeze-than survival of HeLa S~3 cells. Cryobiology, 1975, v. 12, n.6, p.540-550.

141. Meryman H.C. Freezing injury and its prevention in living cells. Annu. Rev. Biophys. Bioeng., 1974, v.3, p.341-363.

142. Miehlke A., Chilla H., Vollrath M. Die Kryo- und Laserchirurgie zur Behandlung maligner und benigner Kuhlkopfprozesse. -НШ0, 1980, N 28, S.357~364.

143. Heel H.B., De Santo L.W. Cryosurgery for tumors of the head and neck. Minnesota Med., 1972, v.55, p.886-890.

144. Neel H.B., Faxrell K.H., Payne W.S., De Santo L.W. Cryosurgery of respiratore structures. Il.Cryonecrosis of the lung. -Laryngoscope, 1973,n.2, p. 417-436.

145. Neel H.B., Ketcham A.S., Hammond W.G. Comparison of tumor immunity after complete excision, cryonecrosis and in the presence of persistent tumor. Surg. Forum, 1970, v.21,p.120.

146. Neel H.B., Ketcham A.S., Hammond W.G. Cryonecrosis of normal and tumor bearing rat liver potentiated by unflow occlusion. Cancer, 197I, v.28, n.5, p.I2II-I2I8.

147. Neel H.B., Ketcham A.S., Hammond W.G. Requisits for successful cryogenics surgery of cancer. Arch. Surg., 1971, v.102, n.I, p.45-48.

148. Neel H.B., Ketcham A.S., Hammond W.G. Ischemia potentiating cryosurgery of primate liver. Ann. Surg., 1971, v. 174,p.309-318.

149. Neel H.B., Ketcham A.S. Cryosurgery of SV-40 prostatic transplant at tumors: tumor control, biochemical correlates and immunity. Int. Surg., 1972, v.57, p.61-66.

150. Neel H.B., Ritts P.E. Immunotherapeutic effect of tumor necrosis after cryosurgery, electrocoagulation and ligation. -J. Surg., Oncol., 1979, v.II, n.I, p.45~52.

151. Neel H.B., Ritts R.E. Immunotherapeutic effect of tumor necrosis in situ. Trans. Amer. Acad. Ophthalmol., Otolaryngol., 1977, v.84, n.2, p.285-290.

152. Nei T. Mechanism of the haemolysis of erythrocytes by freezing with special reference to freezing at hear zero temperatures. In« The Frozen Cell. Ciba Foundation Symposium. London, 1970, p.213-217.

153. Posv/illo D.E. Comparison of cryosurgery and electrocoagulation in the treatment of experimental oral carcinoma. Brit. Dental. J., 197I, v.131, n.8, p.347-352.

154. Qudran L., Sebestova V., Drozdova A., Feit J. A contribution to cryosurgery of experimental tumors. Scr. Med., 1980, v.53, n.8, p.517-520.

155. Rabb J.M., Renaua M.L., Brandt P.A., Witt C.W. Effect of freezing and thawing on the microcirculation and capillary endothelium of the hamster cheek pouch. Cryobiology, 1974, v.II, n.6, p.508-518.

156. Renzichausen K.f Schroder M., Kraft W., Kleinschmidt R. Immunologische Aspekte in Zuzammenhang mit der Kryotherapie. -Dtsch. Gesund., 1975, Bd.30, N 14, S.629-634.

157. Rinfret A.P. Cryobiology* some fundamentals in surgical context. In« Cryosurgery. Sprinfield, 1968, p.19-31.169« Rothenborg H.W. Cutaneus circulation in rabbits and humans before, during and after cryosurgical procedures measured by

158. Xenon-133 clearance. Cryobiology, 1970, v.6 p.507~5II.125

159. Rothenborg H.W. J-serum albumin assay of edema in rat skin with and without vasoconstriction after cryosurgery-tine free' zing. Cryobiology, 1972, v.9, p. 1-8.

160. Rothenborg H.W. Predictability of cryolesions. Cryobiology, 1974, v.II, p.576.

161. Schrott K.M., Sigel A., Schmidt Ih. Das Verhältnis zwischen Sindergroße, Befriwegeschwindigkeit und Zelltod in der Kryo-therapy. Urologe, 1969, Bd.8, N 3, S.I64~I67.

162. Sherman J.K. Survival of higher animal cells after the formation and dissolution of intracellular ice. Anat. Res., 1962, v. 144, n.3, p.I7I-I89.

163. Shulman S., Yantorno C., Bronson P. Cryo-iramunology: a method of immunization to autologous tissue. Proc. Soc. E:q?. Biol. Med., 1967, v. 124, p.65Q-66l.

164. Shulman S., Zappi E. Cryoimmunologyj as aspect of cryobiolo-gy. Ini Cryogenics in surgery. New York, 1971» p.47-79.

165. Sigel A., Goldenberg D.M., Schrott K.M., Ward V. Kryotherapie des heterotransplantierten menschlichen Krebses. Nachweis der Letalität der Krebszelle. 22 lagung der deutschen Gesellschaft für Urologie am 25.10.1968 in Berlin.

166. Smith J., Frazer Y. An estimation of tissue damage and termal history in the cryolesion. Cryobiology, 1974, v.II, p.139-147.

167. Soanes W.A., Abiin R.J., Gonder M.J. Remission of metastatic lesions following cryosurgery in prostatic cancer* immunologic considerations. J. Urol., 1970, v.104, p.164-169.

168. Torre D. Cryosurgery of skin. J. Cryosurg., 1968, v.I, n.3, p.47-56.

169. Townsend D.E., Elinor J.M. Cryosurgery and the COg laser. -Cancer, 1981, v.48, p. 632- 637.

170. Walder H. Experimental cryosurgery. In: Cryosurgery.

171. Springfield, 1968, p.II3"I86. 187« Whittaker D.K. Repeat freeze cycles in cryosurgery of oral tissues. Brit. Dent. J., 1975, v. 139, n.I2, p.459~465.

172. Whittaker D.K. Low temperature surgery of the oral mucosa:a review of the biological factors and clinical applications. J. Dent., 1974, v.2, n.3, p.92-100.

173. Whittaker D.K. Ice crystals formed in tissue during cryosurgery. I.Light microscopy. Criobiology, 1974-, v.II, p.I92-201.

174. Whittaker D.K. Ice crystals formed in tissue during cryosurgery. II.Electron microscopy. Cryobiology, 1974, v. II,p.202-217.

175. Whittaker D.K. Mecanismes d'action de la cryochirurgie. Med. et Hygiene, 1973, Bd.3I, n.I073, &.I488-I490.

176. Withrow S.J. Application of cryosurgery to primary malignant bone tumors in dogs. J. Amer. Amin. Hosp. Assoc., 1980,v. 16, n.4, p.493-495.

177. Zacarian S.A., Adham M.J. Cryogenic temperature studies of human skin. Invest. Derm., 1967, v.48, n.I, p.7"* 10.

178. Zacarian S.A., Stone D., Clater M. Effects of cryogenic temperatures on microcirculation in the golden hamster cheek pouch. Cryobiology, 1970, v.7, n.I, p.27"39.

179. Zappi E., Shulman S. in the target tissue Cryobiology, 1971,

180. Cryo-immunization. The cold propagation and the resulting volume of the lesion. v.8, p.235-243.