Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Влияние прогестерона на антенатальное развитие вилочковои железы белых крыс

На правах рукописи

РГБ ОД 3 0 СЕН Ш)

ЧУРИЛОВА Наталия Ильинична

Влияние прогестерона на антенатальное развитие вилочковой железы белых крыс

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Санкт-Петербург 1999

Работа выполнена в Сакт-Петербургской Государственной педиатрической медицинской

академии.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

заслуженный деятель высшей школы, доктор медицинских наук профессор ВАЛЬКОВИЧ Э.И.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

Чл.-кор. Российской Академии Естественных Наук, доктор медицинских наук профессор БЫКОВ В.Л., доктор медицинских наук профессор ПУЧКОВ В.Ф. Ведущая организация:

Самарский Государственный медицинский университет

Защита состоится cAStfjij/ij 1999 г в "¿¿"часов на заседании диссертационного совета Д 106.03.07 в Военно-медицинской академии по адресу:

194044, Санкт-Петербург, ул. Лебедева, д.6.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальное библиотеке

Военно-медицинской академии. Автореферат разослан " 1999г.

Учёный секретарь диссертационного совета:

доктор медицинских наук доцент Сидорин B.C.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Продолжение ухудшения экологической обстановки сопровождается изменением иммунологического статуса и здоровья населения. Все чаще в акушерской практике наблюдаются различные нарушения течения беременности, периодически приводящие к преждевременным родам (выкидышам) и к рождению потомства с функциональными нарушениями иммунной системы от незначительных латентных форм до ярко выраженных клинических проявлений. Наиболее распространенным и доступным методом сохранения беременности до сих пор является использование внутримышечного введения прогестерона начиная с момента угрозы прерывания беременности, а при необходимости, в течение всей срока беременности. В случае, когда угроза прерывания беременности обусловлена нарушением синтеза прогестерона яичником в начале беременности, или плацентой в более поздние сроки, этот метод будет компенсировать недостаток этого гормона. В тоже время точный подбор дозы и продолжительности лечения достаточно труден, что может привести к передозировке гормона, и, как следствие, к увеличению его концентрации в системе мать-плацента-плод. В свою очередь изменение уровня прогестерона в организме плода может вызвать нарушение эмбриогенеза вилочковой железы. По данным Бодяжиной В.И. и Рогано-вой К.Г. (1966) применение прогестерона в период формирования плаценты не оказывает токсического влияния на формирование плода, но в то же время при введении стероидных гормонов в систему мать-плацента-плод вызывает уменьшение массы вилочковой железы и количества лимфоцитов в периферической крови у новорожденных животных (Павлова И.Г. 1989, Тор-

бэк В.Э. 1992, Anderval L. ,1964,1965; Fein A., Ornoy A. 1974 и др.). Изменения структуры и клеточного состава вилочковой железы отмечено при использовании гидрокортизона, кортизола и других глюкокортикоидов в неонатальный период и у половозрелых животных (Алимходжаева П.Р. с соавторами, 1991; Ами-нова Г.Г., 1983; Кабалова З.А.,1968; Branceni D.,1966; Dougerty T.F.,1964).

Применение половых гормонов в постнатальный период вызывает изменения массы вилочковой железы, структуры долек и клеточного состава коркового и мозгового вещества (Grossman C.J.,1985; Pereira L.N.,1969; Windmill K.F., 1993). Цель исследования: Изучить структурные изменения и особенности лимфопоэза в вилочковой железе в пренатальном и раннем постнатальном периодах развития животных при воздействии прогестероном через систему мать-плацента-плод. Задачи исследования:

1. Изучить действие различных доз прогестерона на развитие вилочковой железы у потомства крыс, получавших гормон во время беременности.

2. Исследовать влияние кратковременного введения прогестерона в разные сроки беременности на морфогенез вилочковой железы в эмбриональном и раннем постнатальном периодах развития.

3. Изучить влияние гормона на морфогенез вилочковой железы в раннем постнатальном периоде развития в условиях введения прогестерона в течение всей беременности.

4. Оценить обратимость обнаруженных морфологических изменений в вилочковой железе.

Научная новизна. Впервые проанализировано влияние различных доз прогестерона на развитие вилочковой железы и лимфопоэз в эмбриональном и раннем постнатальном периодах в зависимости от сроков беременности и продолжительности введения гормона через систему мать-плацента-плод.

Изучено действие прогестерона как лекарственного препарата и степень его токсичности по отношению к вилочковой железе, как центральному органу иммунной системы. Научно-практическая значимость. Установлено неблагоприятное влияние прогестерона на развитие вилочковой железы в эмбриональном и раннем постнатальном периодах онтогенеза, а также дозозависимость воздействия прогестерона на её клеточный состав. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости осторожного применения этого гормона и улучшении способов контроля за его уровнем при использовании в акушерской практике. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Прогестерон, вводимый беременным самкам, оказывает влияние на строение и клеточный состав вилочковой железы потомства. Изменения лимфопоэза в железе зависят от:

1 - сроков беременности, в которые вводится гормон;

2 - продолжительности применения прогестерона;

3 - дозы гормона.

2. Нарушения лимфопоэза, возникающие в вилочковой железе при введении прогестерона в ранние сроки беременности, восстанавливаются к концу первой недели постнатально-го развития. Длительное введение прогестерона вызывает нарушения лимфопоэза, восстанавливающиеся только к кон-

3

цу второй недели жизни животного.

3. Токсическая доза гормона вызывает задержку родов и гибель плодов, сопровождающиеся развитием тяжёлых изменений лимфопоэза в виде снижения митотической активности и торможения процессов дифференцировки лимфоидных клеток.

Апробация работы. Материалы исследования доложены и обсуждены на заседаниях научного совещания "Гистологические аспекты медико-биологических проблем" Ленинград, 1985; X Всесоюзного съезда АГЭ. Винница. 1986, VII Всесоюзного совещания эмбриологов "Закономерности индивидуального развития" Ленинград, 1986, Baltic Confer. Gynaecology and Obstetrics. Gdansk,1989, II Белорусском съезде АГЭ. Минск, 1994, Научного общества АГЭ. в Санкт-Петербурге, 1994. Публикации по теме диссертации. По теме диссертации опубликовано 8 работ, из них 2 журнальные статьи. Внедрение результатов. Полученные данные используются при чтении лекций на кафедрах гистологии, цитологии и эмбриологии, нормальной анатомии, патологической физиологии детской гинекологии ФУВ СПбГПМА.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена нг 127 страницах машинописного текста и состоит из введения обзора литературы, описания материала и методоЕ исследования, результатов исследования и их обсуждения выводов и списка цитируемой литературы. Работе иллюстрирована 9 таблицами и 8 рисунками. Списо! литературы содержит 65 отечественных и 150 иностранны) источников. Весь материал, представленный в диссертации получен, обработан и проанализирован лично автором.

Автор выражает сердечную благодарность доценту кафедры гистологии и эмбриологии СПбГПМА Л.В.Суворовой за консультативную помощь и всем сотрудникам кафедры гистологии и эмбриологии СПбГПМА за помощь в работе, а так же заведующему отдела морфологии человека ИЭМ чл.-кор. РАМН засл. деятелю науки РФ профессору ВАОтеллину за возможность работать на приборе МОП-11.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Работа выполнена на беспородных белых крысах. В работе использованы 16- и 20- суточные плоды крыс, новорождённые, 7- и 14- суточные животные, полученные от белых беспородных крыс массой 160 - 200 грамм (питомник Рапполово). Всего использовано 133 самки, от которых получено 121 плод и 221 новорождённый, 7- и 14-суточные животные. Все животные содержались в одинаковых условиях в виварии СПбГПМА, а все эксперименты проводились в весенне-летний период. Получение животных с датированным сроком беременности производилось без предварительного учета стадии эстраль-ного цикла. Для этого половозрелых самок в возрасте 2-х месяцев подсаживали к самцам ( из расчета 5:1) с 17 часов вечера до 10 часов утра. День обнаружения сперматозоидов в утренних вагинальных мазках считался первым днём беременности.

Беременные самки разделены на три группы: I группа - ин-тактные животные; II группа - контрольные животные, получавшие растворитель прогестерона абрикосовое масло; III группа -экспериментальные животные, получавшие прогестерон. Животные III группы делились на три подгруппы в зависимости от сроков и продолжительности введения прогестерона. Животные

5

подгруппы №1 и №2 получали прогестерон в течение трёх дней. При этом животные подгруппы №1 получали прогестерон ежедневно с 10-х по 12-е сутки беременности, подгруппы №2 - с 15-х по 17-е сутки беременности и животные подгруппы №3 -прогестерон вводился длительно - ежедневно с 10-х по 20-е сутки беременности.

Сроки введения прогестерона выбраны с учётом стадий развития вилочковой железы и сроков формирования плаценты (М.А.Долгова с соавторами, 1982; Д.Миллер, 1967; З.С.Хлыстова, 1987; М.НаМапс!, 1940). Животные подгруппы №1 получали прогестерон во время формирования плаценты и в период образования эпителиального зачатка вилочковой железы. У животных подгруппы №2 процесс формирования плаценты был уже завершён, а в вилочковой железе происходило заселение эпителиального зачатка клетками-предшественниками Т-лимфоцитов. Длительное введение прогестерона (подгруппа №3) осуществлялось в период с начала формирования плаценты и образования эпителиального зачатка вилочковой железы до предпоследних суток нормально протекающей беременности.

В работе использовали 0,25% и 2,5% масляный раствор прогестерона, который вводили подкожно, всегда в утренние часы из расчета 0,12 мл на 100 грамм массы животного. Указанный объём 0,25% раствора прогестерона соответствует дозе 0,3 мг на 100 грамм массы животного, а 2,5% раствора - дозе 3,0 мг на 100 грамм массы животного (10-кратная доза).

Доза 0,3 мг на 100 гр. массы животного соответствует терапевтической дозе прогестерона, применяемой в акушерской

практике, и рассчитана для животных по формуле: а = а, (Р/ Р0)2 /3

где:

а - терапевтическая доза прогестерона для животного

а0 - терапевтическая доза прогестерона для человека (М.Д.Машковский, 1993)

Р0 - средняя масса человека

Р - средняя масса животных, использованных в эксперименте.

Все животные умерщвлялись декапитацией в 11 - 12 часов, т. е. в период минимальной митотической активности клеток ви-лочковой железы (Н.Д.Чхолария, 1975). Полученный материал (16-суточные плоды и вилочковая железа более старших животных) фиксировали в 10% нейтральном формалине, жидкости Буэна и Карнуа и подвергали общепринятой гистологической обработке с заливкой в парафин-целлоидин. Срединные срезы вилочковой железы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилин-эозином и азур Н-эозином.

На срезах, окрашенных гематоксилин-эозином, определяли площадь коркового и мозгового вещества их доли, а также доли соединительной ткани капсулы и перегородок, для чего использовали: рисовальный аппарат, прибор МОР-11 и сетку Г.Г.Автандилова. Измерения проводились при малом увеличении микроскопа (окуляр 7х, объектив 8х). В дольках вилочковой железы выделяли субкапсулярную зону, собственно корковое вещество и мозговое вещество. Поскольку граница между суб-капсулярной зоной и собственно корковым веществом при малом увеличении светового микроскопа выражена плохо, то долю

площади, занимаемой субкапсулярной зоной, отдельно определить не удавалось. На этих же срезах подсчитывали количество эпителиальных тимических телец. Вся площадь среза принималась за единицу.

Митотическую активность, плотность расположения клеток и клеточный состав определяли на препаратах окрашенных азур Н-эозином при увеличении окуляр 10х, объектив 90х. Для подсчета использовали окулярную сетку из 25 квадратов со стороной квадрата 9 мкм. В каждой зоне железы подсчитывали все клетки в 10-и полях зрения и определяли долю каждого типа клеток в %. Кроме того, определяли долю каждого типа клеток лимфоидного ряда дифференцировки от их общего количества, принятого за 100%. Плотность расположения клеток расчитывали на площади 2025 мкм2 (25 квадратов сетки).

Для всех подсчётов использовали по 7 срединных срезов от каждого объекта исследования. Все полученные данные обрабатывали статистически с учётом индивидуальной и групповой изменчивости с использованием компьютерной программы Statgraphics версия 3.0 секция Anova and regression analysis (Analysis of variance) (Г.С.Катинас, 1969).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

В работе имеется два контроля: l-ый - интактные животные и ll-ой -физиологический контроль, т.е. животные получавшие абрикосовое масло (растворитель прогестерона) в те же сроки и в том же объёме, эквивалентном объёму прогестерона. Во всех случаях у животных ll-ой группы морфологические изменения в вилочковой железе не обнаружены. Аналогичные данные получены Г.Г.Аминовой и Л.М.Ерофеевой (1983) в экспериментах на кры-

сах, посвящённых изучению влияния внутримышечных уколов на структуру и клеточный состав вилочковой железы. Поскольку процедура введения препарата не является фактором, вызывающим изменения в структуре и клеточном составе железы крыс, был сделан вывод, что абрикосовое масло не оказывает влияния на развитие и клеточный состав вилочковой железы, так как у всех контрольных животных не обнаружены изменения клеточного состава и структуры долек. Следовательно, изменения в вилочковой железе экспериментальных животных являются результатом повышения концентрации гормона в системе мать-плацента-плод, а не процедуры введения и действия растворителя, т.к. известно, что прогестерон свободно проходит через гематоплацентарный барьер.

Формирование долек, коркового и мозгового вещества вилочковой железы в поздний эмбриональный и ранний постнатальный периоды развития.

У интактных животных в поздний эмбриональный и ранний

постнатальный период наблюдается увеличение размеров долек и уменьшение доли коркового вещества за счет разрастания мозгового. В этот же период в мозговом веществе появляются и формируются эпителиальные тимические тельца, происходит постепенное увеличение их размеров и количества в дольках. Эти процессы заканчиваются к концу первой недели. Доля соединительной ткани в долях вилочковой железы в поздний эмбриональный и ранний постнатальный период практически не изменяется.

Введение прогестерона в терапевтической дозе не оказывает влияние на формирование соединительнотканных структур в вилочковой железе, так как доля соединительной ткани в ней не

отличается от контрольных показателей и при кратковременном

9

введении вызывает ускорение формирования мозгового вещества и эпителиальных тимических телец, что сопровождается увеличением их числа, а так же количества клеток ретикулоэпи-телия в их составе. Эти изменения наиболее выражены при применении дозы 3,0 мг/100 гр.и обусловлены дозозависимым эффектом характерным для всех стероидных гормонов. У новорождённых животных доля мозгового вещества выше, чем у новорождённых крыс интактной группы. На 7-е сутки показатели долей коркового и мозгового вещества выравниваются и соответствуют в грунне контрольных животных показателям 14-суточных животных. Эти результаты подтверждают ускорение процесса дифференцировки клеток ретикулоэпителия в мозговом веществе. Уменьшение доли коркового вещества при введении гидрокортизона взрослым крысам самцам Т.Р.Оодег1у (1964), Т.Но (1962) объясняют массовой гибелью лимфоцитов, которая не наблюдается у экспериментальных животных. Следовательно уменьшение доли корко-вого вещества в дольках вилочковой железы обусловлено не гибелью лимфоцитов, а ускорением формирования мозгового вещества.

Введение 10-кратной дозы прогестерона с 10-х по 20-е сутки беременности вызывает задержку родов на 5-6 суток и внутриутробную гибель плодов или рождение мертворожденных животных вероятнее всего обусловленную дистрофическими изменениями в стареющей плаценте. В вилочковой железе мертворождённых животных и погибших плодов формируются дольки самых различных размеров. Доли коркового и мозгового вещества в них сильно варьируют. Так встпечаются дольки со значительным преобладанием мозгового вещества над корковым. Этот феномен свидетельствует о том, что длительное

введение прогестерона способно вызывать более значительное воздействие на развитие вилочковой железы.

Становление клеточного состава вилочковой железы у животных интактной и контрольной ГРУППЫ.

У животных интактной и контрольной группы зачаток вилочковой железы на 16-е сутки внутриутробного развития представлен двумя симметрично расположенными долями, не имеющих разделения на корковое и мозговое вещество, так как немногочисленные лимфобласты и фигуры митоза располагаются достаточно равномерно среди клеток ретикулоэпителия.

К 20-м суткам внутриутробного развития зачаток вилочковой железы уже имеет дольчатое строение. В дольках преобладает корковое вещество и граница между корковым и мозговым веществом выражена отчётливо. Клеточный состав коркового вещества характеризуется преобладанием клеток лимфоидного ряда дифференцировки, среди которых содержится: лимфобла-стов - 26,8 ± 3,1%, средних лимфоцитов - 35,7 ± 3,2% и малых лимфоцитов - 14,3 ± 2,1%. В мозговом веществе несколько преобладают клетки ретикулоэпителия (50,6 ± 3,5%) и кое-где встречаются немногочисленные тимические эпителиальные тельца, состоящие из 1 - 2-х клеток ретикулоэпителия.

В постнатальном периоде в вилочковой железе животных интактной и контрольной групп наблюдается разрастание мозгового вещества и увеличение в нём количества тимических эпителиальных телец, в которых возрастает количество ретикулоэпи-телиальных клеток. В дольках имеется чёткая граница между корковым и мозговым веществом. Сразу под капсулой располагается хорошо сформированная субкапсулярная зона. В клеточном составе как коркового, так и в мозгового вещества преобладают клетки лимфоидного ряда, а среди них малые лимфоци-

11

ты (Табл. 1). В постнатальном периоде происходит постепенное уменьшение доли лимфобластов и средних лимфоцитов во всех зонах вилочковой железы с одновременным увеличением доли малых лимфоцитов. Аналогичные изменения в строении вилочковой железы описаны, М.Наг!ап<3 (1940), И.А.Стельмах (1990) и др.

аблица 1.

КЛЕТОЧНЫЙ СОСТАВ вилочковой ИНТАКТНОЙ ГРУППЫ(Х ± ) ЖЕЛЕЗЫ ЖИВОТНЫХ

Возраст новорожденные 7- суточные 14 - суточные

Зоны тимуса С К М С К М С К М

количество клеток на 2025 мкм2 53,7 ±1,9 64,8 ±2,4 38,8 ±2.0 64,1 ±1,7 75,3 ±1,3 40,5 ±1,9 59,8 ±1,9 69,3 ±1,6 40,8 ±1,8

Д ретикулоэпи-телиоциты 23,0 ±1,8 14,9 ±1,5 21,3 ±1.7 19,3 ±1.8 13,7 1,6 25,8 ±1,7 17,6 ±1,9 12,8 ±1,5 31,3 ±1,7

о фигуры митоза 2,8 ±1,2 0,9 ±0,3 0,40 ±0,09 2,3 ±0,7 1,4 ±0,4 0,9 ±0,1 1.7 ±0,7 1,0 ±0,5 0,5 ±0,2

л дегенерирующие клетки 9,2 ±2,7 4,3 ±1,9 4,0 ±1,7 6,3 ±1.6 2,9 ±1,5 2,1 ±1,5 4,1 ±1,6 2,7 ±1.5 0,9 ±0,3

я лимфоидные клетки 71,3 ±1,7 83.4 ±1.9 69,0 ±1.6 79.3 ±1,4 81,4 ±1,5 64,3 ±1,7 81,6 ±1,7 89,4 ±1,5 60,7 ±1,2

в бластные формы 11.6 ±1,5 4,2 ±1.4 6,3 ±1,2 7,3 ±1,7 2,1 ±1,3 1,3 ±0,5 6,4 ±1,4 1,9 ±0,4 0,7 ±0,3

средние лимфоциты 9,9 ±0,9 10,4 +1,3 12,7 ±1,2 7,9 ±1,6 8,1 ±1,7 4,7 ±1,6 6,9 +1,7 5,4 ±1,5 4,8 ±1,5

% малые лимфоциты 53,8 ±1,7 65,4 ±1,6 55,4 ±1,5 65,4 ±1,7 71,3 ±1,6 59,8 ±1,7 79,3 ±1,8 86,4 ±1,2 56,7 ±1.5

С - субкапсулярная зона коркового вещества, К - собственно корковое вещество, М - мозговое вещество.

Введение прогестерона в период эпителиального зачатка вилочковой железы.

Прогестерон, так же как и другие стероидные гормоны, свободно проникает через гематоплацентарный барьер, вызывая увеличение концентрации гормона в крови и тканях плода. Вве-

дение прогестерона в период эпителиального зачатка вилочко-вой железы тормозит процесс заселения его клетками-предшественниками Т-лимфоцитов. Так, при введении терапевтической дозы на 16-е сутки эмбрионального развития в железе у плодов наблюдается резкое уменьшение количества лимфоб-ластов и фигур митоза, а при введении 10-кратной дозы зачаток состоит только из эпителиальных клеток, в связи с полным отсутствием в нём лимфобластов. Это вероятнее всего обусловлено нарушением процесса заселения зачатка вилочковой железы клетками-предшественниками Т-лимфоцитов, которое стимулируется тимотаксином (хемотаксическим фактором), сек-ретируемым клетками ретикулоэпителия (Joterian F., Heuze F., Salomon-Vie V., 1987). Повидимому прогестерон, рецепторы к которому имеются в клетках ретикулоэпителия, нарушает секреторную активность клеток стромы, что возможно является причиной торможения процессов заселения эпителиального зачатка (Pearce Р.Т. е! а!., 1983).

К 20-м суткам внутриутробного развития в вилочковой железе плодов наблюдается уменьшение доли лимфоидных клеток, наиболее выраженное при введении 10-кратной дозы прогестерона. При этом происходит уменьшение количества лимфобластов, средних и малых лимфоцитов, что подтверждает замедление процесса заселения зачатка. Известно, что клетки-предшественники Т-лимфоцитов готовы к заселению вилочковой железы ещё до начала секреции хемотаксического фактора ретикулоэпителиоцитами зачатка (Champion S. Imhof В.А.,1986). Следовательно, торможение миграции клеток-предшествен-ников Т-лимфоцитов в зачаток железы обусловлено нарушением секреторной активности клеток стромы, что связано с ускорением их

дифференцировки, о чём свидетельствует увеличение количества клеток ритикулоэпителия в тимических эпителиальных тельцах в вилочковой железе 20-суточных плодов и новорождённых животных.

В субкапсулярной зоне коркового вещества экспериментальных животных наблюдается увеличение плотности расположения клеток, общего количества лимфоидных клеток и доли малых лимфоцитов, с одновременным уменьшением доли лимфобластов и количества фигур митоза (рис.1).

90 80 Н 70 60 50 40 30 Н 20 ю И о

ша..

Митоз

Лимф.кл

Бласты

Средние

Малые

□ Контроль 0Опыт

Рис.1. - Клеточный состав субкапсулярной зоны коркового вещества вилочковой железы новорождённых животных, родившихся от самок, получавших прогестерон с 10-х по 12-е сутки беременности в дозе 0,3 их! 100 г массы животного.

Эти изменения могут быть обусловлены усилением дифференцировки клеток лимфоидного ряда и подавлением пролиферации (уменьшение доли лимфобластов с одновременным увеличением доли малых лимфоцитов). Подобное явление наблюдала В.Э.Торбэк (1992) при введении гидрокортизона на поздних сроках развития эмбриона курицы. Кроме того, увеличение количества малых лимфоцитов может быть обусловлено

и миграцией в вилочковую железу клеток-предшественников Т-лимфоцитов, сходных по форме с малыми лимфоцитами. В пользу этого факта говорит увеличение плотности расположения клеток при уменьшенном количестве фигур митоза. Однако усиление процесса заселения зачатка клетками предшественниками Т-лимфоцитов не может объяснить уменьшение доли лимфобластов. На этом основании сделано заключение, что после рождения у животных происходит усиление дифференци-ровки лимфоцитов. В то же время, увеличение количества малых лимфоцитов не может быть следствием замедления их миграции, так как в работе И.Г.Павловой (1989) достоверно продемонстрировано уменьшение количества лимфоцитов в периферической крови новорожденных при введении глюкокорти-коидов на последних сроках беременности.

Введение 10-кратной дозы прогестерона в период эпителиального зачатка вилочковой железы вызывает торможение процессов антигеннезависимой дифференцироки Т-лимфоцитов у новорождённых животных. В субкапсулярной зоне долек вилочковой железы наблюдается увеличение доли лимфобластов с одновременным уменьшением доли малых лимфоцитов, и при этом не наблюдается изменения митотической активности. В корковом веществе на фоне неизменившегося общего количества клеток лимфоидного ряда отмечается достоверное увеличение доли малых лимфоцитов, фигур митоза и незначительное (недостоверное) увеличение доли лимфобластов, которое можно объяснить увеличением их митотической активности. Однако известно, что введение глюкокортикоидов вызывает уменьшение количества малых лимфоцитов и снижение митотической активности при введении гормонов в поздние сроки беременности или в постнатальный период. По-видимому, наблюдаемые изменения связаны в основном с влиянием прогестерона на

дифференцировку эпителия, в отличие от гормонов коры надпочечника, которые, как известно, подавляют дифференцировку и пролиферацию лимфоцитов (М.Р.Сапин, Л.Е.Этинген, 1996). Увеличение доли малых лимфоцитов в корковом веществе может быть обусловлено усилением их миграции из субкапсуляр-ной зоны в собственно корковое вещество, что подтверждается уменьшением их доли в ней (Табл. 2).

Таблица 2

КЛЕТОЧНЫЙ СОСТАВ ВИЛОЧКОВОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ ПРОГЕСТЕРОНА В ДОЗЕ 3,0мг на ЮОг МАССЫ С 10-Х ПО 12-Е СУТКИ БЕРЕМЕННОСТИ (X ± )

Возраст новорожденные 7- суточные 14- суточные

Зоны тимуса С К М С К М С К М

количество клеток на 2025 мкм2 57,3 ±1,2 63,2 ±1,4 40,1 +1,6 62,4 ±1,9 70,3* ±1,6 41,2 ±1,8 63,7 ±1,6 70,1 +1.4 34,0 ±1.5

д ретикуло-эпителиоциты 34,7* ±1,0 18,7* ±1,2 29,3* ±1,1 18,2 ±1,1 14,3 ±1,5 24,9 ±1,6 15,8 ±0,7 13,2 ±1,0 32,4 ±1.3

о фигуры митоза 2,1 ±0,4 1,5* ±0,3 1,0* ±0,2 1.3* ±0,3 1,0 ±0,2 0,7 ±0,07 1,5 ±0,2 1.2 ±0,3 0,8 +0,1

Л Дегенерирующие клетки 6,3 ±0,9 2,9* ±0,7 1,8' ±0,7 5.4 ±0,9 3,2 ±0,7 1,5 ±0,8 3,9 ±0,7 2,6 +0,6 1,1 ±0,4

я лимфоидные клетки 64,6* ±1,3 81,5 +2,0 67,6 ±1,6 76,5 ±2,1 83,6 ±1,5 67,3 ±1,4 80.4 ±0.9 87,5 ±1,6 61,3 ±1,5

в властные формы 15,4* ±1,7 6,3 ±1,2 4,9 +0,9 7,5 ±1,2 3,5 ±0,7 2,0 ±0,8 5,9 ±1,2 2,0 ±0,7 1,1 ±0,4

средние лимфоциты 12,7 ±1,3 9,4 ±0,8 10,6 ±1,4 6,9 ±0,9 8,7 ±1,5 5,3 ±1,2 6,3 ±1,0 6,1 ±0,9 5,0 ±1.1

% малые лимфоциты 46,5* ±1,6 73,2* ±1,4 50,3* ±1,9 60,3* ±1,4 71,4 ±1,2 63,4 ±1,6 71,8 ±1.9 81,2 ±1.6 53,8 ±1,4

Примечание: * - различие значимое при р <0,05 с контрольной группой; С -субкапсулярная зона, К - корковое вещество, М - мозговое вещество.

При введении терапевтической дозы прогестерона в период эпителиального зачатка вилочковой железы нормализация

16

лимфопоэза в ней происходит к концу первой недели. Нарушения лимфопоэза после введения 10-кратной дозы прогестерона сохраняются до конца второй недели. В вилочковой железе 7-суточных животных в субкапсулярной зоне наблюдается усиление процессов пролиферации Т-лимфоцитов и ускорение миграции, подтверждающееся уменьшением доли малых лимфоцитов в субкапсулярной зоне коркового вещества и уменьшением количества клеток лимфоидного ряда в собственно корковом веществе.

У 14-суточных животных этой группы в субкапсулярной зоне и корковом веществе наблюдается уменьшение доли малых лимфоцитов без изменений других показателей, что возможно обусловлено усилением процессов миграции Т-лимфоцитов.

Введение прогестерона в период заселения эпителиального зачатка клетками-предшественниками Т-лимфоцитов.

Введение прогестерона с 15-х по 17-е сутки беременности

совпадает с периодом заселения эпителиального зачатка вилочковой железы клетками-предшественниками Т-лимфоцитов. У новорождённых животных после использования терапевтической дозы прогестерона в субкапсулярной зоне доля лимфобла-стов почти в два раза меньше аналогичного показателя животных интактной группы, в то же время не наблюдается изменения долей средних и малых лимфоцитов. В корковом веществе происходит достоверное уменьшение доли малых лимфоцитов, доля же лимфобластов и средних лимфоцитов в этом случае не отличаются от таковой в интактной группе. Установленные изменения возникли в связи с нарушением процесса заселения вилочковой железы, которое может быть обусловлено прежде всего угнетением миграции стволовых клеток из красного костного мозга.

Аналогичное явление описано в вилочковой железе у половозрелых животных после введения адренокортикотропного гормона и гидрокортизона (М.М.Сотрк)п, 1_.А.М.Сагол, 1987). Введение 10-кратной дозы прогестерона вызывает подавление пролиферация Т-лимфоцитов в субкапсулярной зоне коркового вещества вилочковой железы и увеличение доли малых лимфоцитов в субкапсулярной зоне и в собственно корковом веществе (рис. 2).

70п

Бл.СК Бл.К Ср.СК Ср.К Мал.СК Мал.К

□ Контроль йОпыт

Рис.2. - Клеточный состав субкапсулярной зоны и собственно коркового вещества вилочковой железы новорождённых животных, родившихся от самок, получавших прогестерон с 15-х по 17-е сутки беременности в дозе 3,0 мг/100 г массы животно-го.СК ~ субкапсулярная зона, К - собственно корковое вещество, Бл. - лимфоб-ласты, Ср. - средние лимфоциты, Мал. - малые лимфоциты.

При введении прогестерона в период заселения эпителиального зачатка вилочковой железы клетками-предшественниками Т-лимфо-цитов не зависимо от дозы гормона нормализация лимфопоэза происходит только к концу второй недели по-стнатального развития.

Длительное введение прогестерона (10-е - 20-е сутки беременности).

Установленная R.T.Lee (1962) задержка родов на 2 - 3-е суток при введении прогестерона с 17-х по 21-е сутки беременности, была подтверждена нашими результатами после введения прогестерона самкам в течение почти всей беременности.

У новорождённых животных количество фигур митоза в субкапсулярной зоне уменьшается, хотя при этом увеличилось общее количество клеток лимфоидного ряда и почти в два раза увеличилась доля средних лимфоцитов. Рост количества всех лимфоцитов при снижении митотической активности можно объясниться только увеличением количества вселяющихся клеток. В корковом веществе в этот период общее количество клеток и малых лимфоцитов уменьшилось, а количество средних лимфоцитов увеличилось. Увеличение доли средних лимфоцитов с одновременным уменьшением малых лимфоцитов говорит о замедлении дифференцировки средних лимфоцитов.

Значительные сдвиги в клеточном составе вилочковой железы были обнаружены у 7-суточных животных. В субкапсулярной зоне уменьшалась плотность расположения клеток, количество всех лимфоцитов, властных форм, малых лимфоцитов, так и делящихся клеток. Эти изменения были расценены как следствие торможения дифференцировки лимфоцитов, подтверждающиеся изменениями в корковом и мозговом веществе, снижением общего количества клеток и увеличением доли средних лимфоцитов по сравнению с интактными животными. Торможение процессов дифференцировки наблюдается и при воздействии глюкокортикоидов в период эмбриогенеза вилочковой железы, так как после введения гормона в эмбриональный период у новорожденных крыс наблюдается уменьшение количества малых лимфоцитов и фигур митоза (Табл. 3). Установлено, что процесс лимфопоэза нормализуется к 14-ым суткам.

19

Об этом свидетельствуют все изученные показатели. Лишь незначительное уменьшение количества малых лимфоцитов в корковом веществе может быть доказательством ускорения их миграции.

Таблица 3.

КЛЕТОЧНЫЙ СОСТАВ ВИЛОЧКОВОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ ПРОГЕСТЕРОНА В ДОЗЕ 0,3мг на ЮОг МАССЫ С 10-Х ПО 20-Е СУТКИ БЕРЕМЕННОСТИ (X ± S¡}

Возраст новорожденные 7- суточные 14- суточные

Зоны тимуса С К М С К М С К М

количество клеток на 2025 мкм2 50,1 ±1,5 54,3* ±1,2 25,3* ±1,7 51,7* ±1,9 59,4* ±1,4 36,2 ±1,6 69,1* ±2.0 72,5 ±1,7 40,4 ±2,1

А ретикулоэпи-телиоциты 18,5* ±0,9 17,3* ±1,2 26,3* ±1,0 23,7 ±2,1 19,6* ±1,7 39,6* ±1,5 18,0 ±1,8 14,3 ±1,7 35,6 ±1,4

о фигуры митоза 1,0* ±0,3 0,9 ±0,4 0,7* ±0,1 1.3* ±0,2 0,9* ±0,3 0,8 ±0,2 1,5 ±0,5 0,6 ±0,1 0,3 ±0,08

л дегенерирующие клетки 10,3 ±2,1 6,4 ±1,3 2,9 ±0,8 10,0* ±1,5 5,6* ±1,0 3,1 ±1.1 3,9 ±1,2 3,0 ±0,9 1,5 ±0,7

я лимфоидные клетки 81,2* ±1,8 85,3 ±1.7 73,6* ±1,6 65,4* ±1,4 73,8* ±1,5 59,9* ±1,4 80,6 ±1,9 87,5 ±1,7 61,4 ±1,8

в бластные формы 10,5 ±0,7 5,6 ±0,6 6,8 ±0,8 5,0* ±0,5 3,7* ±0,6 0,6* ±0,1 5,8 ±0,7 2,0 ±0,3 0,6 ±0,08

средние лимфоциты 18,3' ±0,9 15,6* ±0,8 16,3* +0,9 10,3* ±1,2 15,4* ±1,1 9,6* ±1,0 6,3 ±1,2 5,9 ±1,0 5,0 ±0,9

% малые лимфоциты 53,6 ±1,5 61,2 ±1,6 51,4 ±1,7 51,7* ±1,4 61,2* ±1,5 43,4* ±1,8 71,7* ±1,7 80,4* ±1,9 56,3 ±1,8

Примечание: * - различие значимое при р (0,05 с контрольной группой; С -субкапсулярная зона, К - корковое вещество, М - мозговое вещество.

Введение прогестерона в течение почти всей беременности вызывает задержку родов до 26-х суток и более, сопровождающееся мертворождением животных. В том случае, когда роды не наступали на 26-е сутки беременности, животные забивались и извлечённые плоды всегда оказывались мертвыми. При-

миной их гибели возможно является переношенная беременность и задержка родов, при которых происходят патологические изменения в плаценте.

В вилочковой железе этих животных обнаруживается резкое уменьшение доли лимфобластов и малых лимфоцитов в субкапсулярной зоне и собственно корковом веществе, а также значительное увеличение доли средних лимфоцитов. В мозговом веществе отмечается сильное увеличение митотической активности лимфоидных клеток. Усиление пролиферации лимфоцитов в мозговом веществе у новорождённых животных уже было описано после введения преднизолона в течение всей беременности (Р.Т.А.РИграМск, В.О.Сгееп$1ет, 1987). Резкое уменьшение доли малых лимфоцитов нельзя объяснить их гибелью, так как при этом наблюдается уменьшение доли лимфоцитов с пикнотизированными ядрами.

Изменения клеточного состава вилочковой железы вероятнее всего можно расценить как следствие нарушения лимфопо-эза. Возможно, что происходит ускорение процессов диффе-ренцировки лимфобластов в средние лимфоциты и торможение их дифференцировки в малые лимфоциты. Аналогичные изменения не описаны в доступных нам работах, посвященных изучению лимфопоэза в вилочковой железе при различных воздействиях на организм экспериментальных животных.

Следует признать, что однозначная трактовка полученных данных в этой экспериментальной группе затруднительна, так как не представляется возможным точно установить момент гибели плода. При введении преднизолона в течение всей беременности также отмечалась антенатальная смерть плодов, в вилочковой железе которых происходила массовая гибель лимфоцитов, сопровождавшаяся уменьшением их количества в кор-

ковом веществе.

Таким образом, длительное введение 10-кратной дозы гормона в отличие от действия терапевтической дозы прогестерона вызывает гибель плодов и разнонаправленные изменения лимфопоэза в вилочковой железе.

ВЫВОДЫ

1. Повышение уровня прогестерона в функциональной системе мать-плацента-плод вызывает изменения в морфогенезе вилочковой железы, степень которых зависит от дозы, сроков и продолжительности введения гормона.

2. Прогестерон стимулирует дифференцировку ретикуло-эпителиоцитов и нарушает процессы заселения органа кпетка-ми-пред-шественниками Т-лимфоцитов в период эпителиального зачатка вилочковой железы. Доза 0,3 мг на 100 г массы животного тормозит заселение, а доза 3,0 мг на ЮОг вызывает прекращение процесса заселения зачатка Т-лимфоцитами. У новорождённых животных доза 0,3 мг прогестерона стимулирует дифференцировку Т-лимфоцитов, тогда как 3,0 мг гормона вызывает эффект торможения дифференцировки Т-лимфоцитов.

3. Введение терапевтической дозы (0,3 мг)прогестерона в период заселения эпителиального зачатка клетками-предшественниками Т-лимфоцитов подавляет дифференцировку Т-лимфоцитов в вилочковой железе, а применение 10-кратной дозы ускоряет дифференцировку Т-лимфоцитов до конца первой недели постнатального развития.

4. Нормализация лимфопоэза в вилочковой железе при кратковременном введении прогестерона в дозе 0,3 мг на 100 г массы животного происходит к концу второй недели постна-

тальной жизни независимо от сроков введения гормона.

5. Введение прогестерона в дозе 0,3 мг с 10-х по 20-е сутки беременности вызывает в вилочковой железе торможение дифференцировки Т-лимфоцитов у новорождённых и 7-ми суточных крыс и продлевает течение беременности на 2-3-е суток. Нормализация лимфопоэза в этом случае происходит только к концу второй недели.

6. Длительное введение (с 10-х по 20-е сут.) прогестерона в дозе 3,0 мг на 100 г массы вызывает ускорение дифференцировки лимфобластов в средние лимфоциты и торможение дифференцировки средних лимфоцитов в малые, а также продлевает течение беременности до 26-х суток, сопровождающееся внутриутробной гибелью плодов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Н.И.Чурилова Соотношение коркового и мозгового вещества тимуса в ходе эмбриогенеза в норме и при воздействии прогестерона на систему мать-плод. Тезисы докладов научного совещания "Гистологические аспекты медико-биологических проблем", Ленинград 1985 г., С.13.

2.Н.И.Чурилова Влияние прогестерона на антенатальное развитие вилочковой железы. Сборник трудов молодых учёных ЛПМИ, 1986.

З.Э.И.Валькович, Т.Д.Батюто, Н.И.Чурилова Развитие тимуса в условиях воздействия на систему "мать-плод" олеандомицина и прогестерона. Тезисы докладов X Всесоюзного съезда АГЭ. Винница. 1986, С.86

4.Э.И Валькович., Н.И. Чурилова Гистологическая и мор-

фометрическая характеристика реактивности тимуса эмбрионов и новорождённых крыс под действием прогестерона. Тезисы докладов VII Всесоюзного совещания эмбриологов "Закономерности индивидуального развития" Ленинград,1986, С.66

5.E.I.Valcovitch, T.D.Batjuto, N.I.Churilova Microscopic and ultramicroscopic changes in rat's embrionic thymus under the influence of some of the antibiotics and female hormon progesteron used during pregnancy II Baltic Confer. Gynaecology and Obstetrics. Gdansk,1989, P.250-253.

6.Т.Д.Батюто, С.Грифф, А.Л.Раковщик, Н.И.Чурилова Эмбриональный гистогенез иммунной системы крыс в норме и при воздействии некоторых лекарственных веществ во время беременности. Тезисы докладов I! Белорусского Съезда АГЭ, Минск, 1994, С.56

7.Н.И.Чурилова Развитие вилочковой железы в эмбриогенезе крыс при введении прогестерона. Морфология 1994 т,107, вып.7 - 12, с.82 - 88

8.Н.И.Чурилова, Э.И.Валькович Изменения лимфопоэза в вилочковой железе у потомства крыс,получавших прогестерон. Морфология, 1996,т. 110, вып. 5, с. 76-81.