Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Влияние полиморфизма генов антиоксидантных ферментов на развитие рестеноза после стентирования коронарных артерий

На правах рукописи

V

Шувалова Юлия Андреевна

ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ АНТИОКСИДАНТНЫХ ФЕРМЕНТОВ НА РАЗВИТИЕ РЕСТЕНОЗА ПОСЛЕ СТЕНТИРОВАНИЯ КОРОНАРНЫХ АРТЕРИЙ

14.00.06 - кардиология 03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

0 4

Москва - 2008

003445742

Работа выполнена в НИИ кардиологии им. А. Л. Мясникова ФГУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс

Росмедтехнологий»

Научный руководитель: Член-корреспондент РАМН

доктор медицинских наук, профессор Валерий Владимирович Кухарчук

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Давид Мейерович Аронов Доктор медицинских наук Антон Ювенальевич Постнов

Ведущая организация:

ГОУ ВПО Московский государственный медико-стоматологический университет Росздрава

Защита состоится «-30 » Ш^сЩЛ 2008 г. в 13 час. 30 мин на заседании диссертационного совета Д 208.073.05 по присуждению ученой степени кандидата медицинских наук в ФГУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс Росмедтехнологий» (121552 Москва, ул. 3-я Черепковская, д. 15а)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «РКНПК Росмедтехнологий»

Автореферат разослан «<Д» августа 2008 года

Ученый секретарь диссертационного

совета, к.м.н. Полевая Т. Ю.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы: Эндоваскулярные методы лечения, такие как стентирование коронарных артерий, в настоящее время широко применяются для лечения больных ишемической болезнью сердца (ИБС), однако рестенозирование в стенте является главным ограничением эффективности этого метода, и даже применение стентов с лекарственным покрытием не решило проблему окончательно (John A Spertus et al, Feb 2005) В связи с этим, несомненно, актуальным является поиск новых предикторов развития рестеноза в стенте, в том числе генетических Исследования влияния полиморфизма генов кодирующих различные ферменты и рецепторы на развитие рестеноза в стенте активно ведутся во всем мире В настоящее время в развитии рестеноза в стенте известна роль полиморфизмов генов системы гемостаза (Kastrati A et al, 2000, Ortlepp JR et al, 2001), системы воспаления (Kastrati A et al, 2000, Chiou KR et al,

2005), ренин-ангиотензиновой системы (Ryu SK et al, 2002, Wxjpkema JS et al,

2006), а также полиморфизмов Glu298Aps и -786T\C гена эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS) (Humphries et al, 2002, Suzuki T et al, 2002, Colombo A et al, 2008) Известно, что окислительный стресс в стенке сосуда развивается сразу после ее повреждения и его признаки сохраняются на всех стадиях развития рестеноза в стенте, в том числе и на стадии неоинтимальной гиперплазии (пролиферация и миграция гладкомышечных клеток (ГМК) и синтез экстрацеллюлярного матрикса) (Ialenti A et al, 2001, Konneh МК et al, 1995), которая является ведущим механизмом формирования рестеноза после коронарного стентирования (Hoffmann R et al, 2000) Активные формы кислорода (АФК) участвуют в процессах роста, пролиферации, апоптоза и миграции сосудистых ГМК и фибробластов, модуляции функции эндотелия, включая эндотелий-зависимую дилятацию, и в модификации внеклеточного матрикса (Ana Fortuno et al, 2005) Известно, что АФК модифицируют агрегационные свойства тромбоцитов и являются медиаторами воспаления

(Iuliano L et al 1997, Меньщикова Е.Б, Зенков H К, 1997, Robinson КА et al 1999), причем тромбоз и воспаление также играют важную роль в процессе рестенозирования До настоящего времени системного подхода к изучению влияния полиморфизмов генов кодирующих основные антиоксидантные ферменты на процесс рестенозирования не было, что приобретает особую актуальность, учитывая их важную роль в механизмах развития рестеноза. В тоже время показано влияние функциональных полиморфизмов генов, кодирующих такие антиоксидантные ферменты, как каталаза (CAT), параоксоназа-1 (PON-1), эндотелиальная синтаза оксида азота (eNOS), глутатионпероксидаза-1 (GPx-1), глутатион-8-трансфераза (GSTP), НАД/НАДФ-оксидаза (NAD(P)H) на развитие сердечно-сосудистых заболеваний и их осложнений (Zhou XF et al, Jan 2005, Bhattacharyya T et al, 2008, Thomas M Van Himbergen et al, 2005, Colombo MG et al, 2003, Schnabel R et al, 2005, Nemoto M et al, 2007, Fan M et al, 2006) Исходя из этого, в настоящей работе мы провели комплексную оценку влияния функциональных полиморфизмов генов антиоксидантных ферментов на частоту и степень рестенозирования после стентирования коронарных артерий с использованием непокрытых стентов, а также на интенсивность свободнорадикальных процессов в группах пациентов с рестенозом и без рестеноза

Цель исследования: Выявление ассоциации полиморфизма генов антиоксидантных ферментов с риском развития рестеноза у пациентов после стентирования коронарных артерий непокрытыми стентами.

Задачи исследования:

1 Оценить взаимосвязь различных клинических факторов с частотой и степенью рестенозирования у больных после стентирования коронарных артерий непокрытыми стентами с использованием ангиографического количественного компьютерного анализа.

2 Определить показатели свободнорадикального окисления липидов (лаг-фаза окисления липопротеидов низкой плотности (ЛНП), уровень липопероксидов и малонового диальдегида (МДА) в ЛНП), активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах крови (GPx, супероксиддисмутазы (SOD), CAT) и изучить их взаимосвязь с ангиографическими параметрами поражения коронарных артерий 3. Провести молекулярно-генетическую диагностику и определить частоту мутаций в генах CAT, PON-1, eNOS, GPx-1, GSTP, NAD(P)H в группе больных ИБС и проанализировать их распределение в группах пациентов с рестенозом в стенте и без рестеноза. 4 Сопоставить клинические, ангаографические и биохимические данные с результатами молекулярно-генетической диагностики

Научная новизна исследования: Впервые показано, что свободнорадикальные процессы в большей степени выражены у пациентов с рестенозом, развившимся через 6 месяцев после стентирования коронарных артерий с использованием непокрытых стентов Выявлены новые возможные факторы риска развития рестеноза в стенте у пациентов в российской популяции после стентирования коронарных артерий с использованием непокрытых стентов Так выявлено, что полиморфизм Glu298Aps гена eNOS как отдельно, так и в комбинации с полиморфизмом -786Т\С гена eNOS ассоциирован с риском развития рестеноза в стенте. Впервые показана ассоциация комбинации полиморфизмов L55M и Q192R гена PON-1 с риском развития рестеноза в стенте Впервые показано влияние полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1 на частоту и степень рестенозирования после стентирования коронарных артерий Выявлено влияние полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1 на активность эритроцитарной GPx у пациентов в российской популяции Впервые показано влияние полиморфизма Prol98Leu

гена ОРх-1 на степень выраженности процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ)

Практическая значимость работы:

1. Выявлено, что полиморфизм 01и298Арв гена еЫОБ отдельно и в комбинации с полиморфизмом -786Т\С гена еЫ08, полиморфизм Рго198Ьеи гена вРх-1, а также комбинация полиморфизмов Ь55М и С?192К гена РО№1 ассоциированы с риском развития рестеноза в стенте, что позволяет их рассматривать в качестве возможных маркеров развития рестеноза после стентирования коронарных артерий непокрытыми стентами 2 Показано, что несколько функциональных полиморфизмов в генах, кодирующих еМЭБ и РО>1-1, могут, как потенцировать, так и нивелировать действие друг друга, поэтому для оценки их суммарного действия необходимо определение влияния их сочетанного наследования у каждого пациента.

Внедрение результатов исследования: Результаты исследования используются в практической работе отдела проблем атеросклероза НИИ кардиологии им. А Л. Мясникова ФГУ «РКНПК Росмедтехнологий» Апробация работы и публикации: Апробация диссертации состоялась 26 июня 2008 года на заседании межотделенческой конференции НИИ кардиологии им А Л Мясникова ФГУ «РКНПК Росмедтехнологий» По теме диссертации опубликовано 4 научные статьи, все в журналах рекомендованных ВАК РФ

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 107 стр, состоит из 4 глав и разделов «Введение», «Выводы» и «Практические рекомендации», содержит 8 таблиц и 11 рисунков. Список использованной литературы содержит 149 источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В исследование включались пациенты мужского пола, с ИБС и стабильной стенокардией, имеющие ангиографически документированный стеноз одной или двух магистральных коронарных артерий выраженностью не менее 70%, перенесшие интракоронарное стентирование с использованием непокрытого стента и контрольную коронароангиографию (КАГ) через 6 месяцев

В исследование не включались пациенты с инфарктом миокарда (ИМ) и инсультом, перенесенными менее чем за 6 месяцев до начала исследования, тяжелой сердечной недостаточностью, тяжелыми нарушениями ритма и проводимости сердца (частыми политопными желудочковыми экстрасистолами, пароксизмами желудочковой тахикардии, мерцательной аритмией, с искусственным водителем сердечного ритма,

атриовентрикулярной блокадой II - III степени), семейными формами гиперхолестеринемии и гипертриглицеридемии, сахарным диабетом (СД) I типа или декомпенсированным СД II типа, онкологическими заболеваниями, печеночной и почечной недостаточностью, злоупотребляющие алкоголем, принимающие антиоксидантные препараты и имеющие атеросклеротическое поражение коронарных артерий типа С по классификации АСС/АНА (1988 г)

Больные до и после инвазивного вмешательства получали стандартную терапию Каждый пациент получал терапию аспирином, p-адреноблокатором и статинами, при наличии показаний назначались антагонисты кальция и ингибиторы ангиотензин превращающего фермента (АПФ) При проведении ангиопластики каждому пациенту интракоронарно вводилось 250 мкг нитроглицерина и внутриартериально 70 Ед/кг гепарина Пациенты получали плавике в течение 3-5 суток до и 6-12 месяцев после стентирования. Ангиографический анализ: Транслюминальную коронарную ангиопластику со стентированием проводили по стандартной методике с использованием аппаратуры «Axiom Artis» фирмы Siemens (Германия) Номинальный диаметр стента соответствовал должному диаметру артерии в стенозированном участке

После проведения последней дилятации и удаления из коронарной артерии баллонного катетера и коронарного проводника проводилось контрастирование стентированного участка со съемкой минимум в 2-х ортогональных проекциях для его лучшей визуализации Контрольная КАГ каждому пациенту была выполнена в среднем через 6 месяцев после стентирования с использованием той же аппаратуры, съемка проводилась в тех же проекциях Анализ полученных ангиограмм проводился с помощью системы количественного компьютерного анализа Axiom Artis (Simens, Германия) Ангиографический рестеноз определялся как сужение артерии > 50% в диаметре в месте стентирования через 6 месяцев после вмешательства Если у пациента было проведено стентирование двух сегментов коронарных артерий и при контрольной КАГ в одном из них определялся рестеноз, то пациента включали в группу рестеноза

Генетические методы исследования: Кровь собирали с ЭДТА в качестве антикоагулянта и хранили при -20°С Выделение ДНК из замороженной цельной крови проводили методом фенол-хлороформной экстракции с использованием протеиназы К Раствор ДНК доводили ТЕ-буфером до концентрации 200 нг\мкл Хранили ДНК на -20°С Полимеразную цепную реакцию (ПНР) проводили в термоциклере «Mastercycler» фирмы Eppendorf при следующих условиях денатурация (94°С, 5 мин) - 1 цикл, денатурация (94°С, 30 сек), отжиг (t° индивидуальная для каждой пары праймеров, 30 сек) и элонгация (72°С, 30 сек) - 36 циклов, элонгация (72°С, 5 мин) - 1 цикл. ПЦР проводили в объеме 30 мкл в растворе следующего состава- 100 мМ Tns-HCl, pH 8,3 (25°С), 50 мМ KCl, MgCl подбирался индивидуально для каждой пары праймеров, четыре дезоксинуклеозидтрифосфата (каждый в концентрации 100 мкМ), по 10 пмоль каждого праймера, 3 ед Tq-полимеразы и 1 мкг геномной ДНК (таблица 1)

Полиморфизм Праймеры ■pU отжига (°C) Длина продукта (нн.)

САТ -262 С/Т S 5'- AGA GCC TCG CCC CGC CGG ACC G-3' AS 5'- TAA GAG CTG AGA AAG CAT AGC T-3' 60 185

PON-1L55M S 5 '-GAA GAG TGA TGT ATA GCC CCA G-3 ' AS 5 '-TTT AAT CCA GAG СТА ATG AAA GCC-3 ' 60 170

PON-1 Q192R S 5'- TAT TGT TGC TGT GGG ACC TGA G-3' AS 5'- CAC GCT AAA CCC AAA TAC АТС TC-3' 60 99

eNOS G298T S 5'- CAT GAG GCT CAG CCC CAG AAC-3' AS 5'- AGT САА ТСС CTT TGG TGC TCA C-3' 60 206

eMAS'-786T/C 5'-ATG CTC CCA CCA GGG CAT CA-3' 5'-GTC CTT GAG TCT GAC ATT AGG G-3' 58 236

GPx-1 Prol98Leu 5'-TGT GCC CCT ACG CAG GTA CA-3 ' 5'-CCA AAT GAC AAT GAC АСА GG-3' 58 337

GSTP Ilel05Val 5'-GTA GTT TGC CCA AGG TCG AG-3' 5'-AGC CAC CTG AGG GGT AAG-3' 58 436

NAD(P)H C242T 5'-CTC TGT GTT GTC TTC AGT AAA GG-3' 5'-ACT CAC AGG AGA TGC AGG ACG-3' 62 509

Таблица 2 Показатели метода рестриктного анализа

Полиморфизм Длина продукта ПЦР(пн) Рестриктаза Длина фрагментов рестрикции (п н )

САТ -262 С/Т аллель С аллельТ 185 Smal 30 и 155 185

РОЫ-1 Ь55М аллель Ь аллельМ 170 Hinin 170 44 и 126

РОЛ-; <219211 аллель <3 аллель К 99 BspPI 99 33 и 66

йЖЖ С298Т аллель О аллель Т 206 Mbol 206 87 и 119

гШУ-786 Т/С аллель Т аллель С 236 MroNI 236 33 и 203

ОРх-1 Рго198Ьеи аллель Р аллель Ь 337 HaelII 79 и 258 337

С5ТР1\еШ\а\ аллель! аллель V 436 BstMAI 108 и 328 105,108 и 223

№Ш(?;ЯС242Т аллель С аллельТ 509 Rsal 113 и 396 80,113 и 316

Определение генотипа проводили методом анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов, который основан на создании в ходе ПЦР естественного сайта рестрикции в одном из аллелей После завершения ПЦР в пробирки добавляли по 3 мкл 10-кратного буфера для рестрикции и 2 ед фермента индивидуального для каждого полиморфизма и инкубировали в течение 14 часов Обработка ПЦР-продукта рестриктазой приводит к

образованию двух фрагментов в случае наличия сайта рестрикции, в то время как аллель, не содержащий сайта рестрикции, нечувствителен к рестриктазе Продукты рестрикции анализировали электрофорезом в 2,5% агарозном геле, содержащем 1 мкг/мл бромистого этидия Размер фрагментов определяли с помощью стандарта массы 50 bp.-Ladder фирмы Fermentas (таблица 2) Биохимические методы исследования: Образцы венозной крови отбирали натощак в присутствии 1 мг/мл ЭДТА натощак за 2-3 дня до проведения контрольной КАТ Для выделения ЛНП плазму крови больных подвергали двукратному центрифугированию в градиенте плотности NaBr в течение 2 час при 42000 об/мин в угловом роторе 50TÍ при 4° в рефрижераторной ультрацентрифуге Beckman L-8 (США) согласно методике Тертов В.В. с соавторами (1995) Окисление ЛНП инициировали при 37° введением в среду инкубации 30 мкМ CuS04 и через фиксированные интервалы времени измеряли кинетику накопления липогадропероксидов (конъюгированные диены) при 233 нм на спектрофотометре Hitachi 220А (Япония) (Панкин ВЗ, Михеева ЛП, 1975) Содержание липидных пероксидов в ЛНП, изолированных из плазмы крови больных, определяли специфичным колориметрическим методом, используя реакцию окисления ионов экзогенного Fe2+ липогидропероксидами и анализируя содержание стехиометрически образованного Fe3+ при помощи цветной реакции с ксиленолоранжем до и после специфичного восстановления органических (липидных) гидропероксидов трифенилфосфином (Nourooz-ZadehJ et al, 1994; Hermes-Luna M étal, 1994) Содержание МДА (продукты, реагирующие с 2-тиобарбитуровой кислотой) определяли, анализируя количество образовавшихся триметиновых комплексов на спектрофотометре Hitachi 220А (Япония) при 532 нм (Панкин ВЗ, Михеева ЛП, 1975).

Активность Se-содержащей глутатионпероксидазы (GPx) в эритроцитах человека определяли в сопряженной глутатионредуктазной системе по скорости окисления NADPH при 340 нм с гидропероксидом трет-бутила в качестве субстрата по модифицированному методу Ланкина В 3. и Гуревич

CM (1976), используя химический анализатор FP-900 Labsystems Oy (Финляндия) в кинетическом режиме работы Активность SOD в эритроцитах человека определяли по ингибированию восстановления синего нитротетразолия супероксидным радикалом, генерируемым в системе ксантин-ксантиноксидаза, определяя кинетику образования формазана на регистрирующем спектрофотометре Hitachi-557 (Япония) при 560 нм (Beauchamp С , Fridovich J, 1971) Активность CAT в эритроцитах определяли по скорости утилизации перекиси водорода (Панкин В.З , Гуревич С М ,1976). Исследование активности фермента выполняли при 20°С на спектрофотометре Hitachi 220А.

Статистический анализ: Статистическую обработку результатов исследований проводили с использованием пакета статистических программ STATISTICA 6 0 Соответствие полученных частот генотипов распределению Харди-Вайнберга определяли с помощью критерия Фишера При сравнении групп по количественному признаку использовались параметрический (t-критерий Стьюдента) и непараметрический (критерий Манна-Уитни) методы При сравнении групп по качественному признаку использовался критерий и точный критерий Фишера (для бинарных признаков) Для выявления взаимосвязи между показателями применяли непараметрический метод корреляционного анализа по Спирману Параметры, имеющие нормальное распределение признака, представлены в виде среднего значения и стандартного отклонения (Mean + SID), имеющие распределение признака отличное от нормального - в виде медианы и нижнего и верхнего квартилей (Med (LQ - HQ)). Статистически достоверными считали различия при р < 0,05

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Были обследованы две группы пациентов, перенесших стентирование коронарных артерий непокрытыми стентами и контрольную КАГ в среднем через 6 месяцев, группа с рестенозом (44 чел) и группа без рестеноза (57 чел)

По клиническим параметрам, таким как возраст, перенесенный ИМ, артериальная гипертония (АГ), СД II типа или другие нарушения углеводного обмена, а также по статусу курения пациенты в группах с рестенозом и без рестеноза были сопоставимы Показатели липидного профиля, общий холестерин (ХС), триглицериды (ТГ), ХС липопротеидов высокой плотности (ЛВП) и ХС ЛНП, - также достоверно не различались в обеих группах По ангиографическим характеристикам поражения коронарных артерий достоверных отличий между группами не было как до, так и непосредственно после вмешательства (таблица 3). Степень сужения в месте имплантации стента через 6 месяцев составила в среднем 71% в группе рестеноза и 30% в группе без рестеноза

Таблица 3 Клиническая характеристика больных и ангиографичесше параметры

поражения коронарных артерий.

Показатели Группа рестеноза Группа без (р) различия

(44 чел) рестеноза между

(57 чел) группами

Возраст 56,5 (47,5-62,5) 58(53-62) 0,4

ИМ в анамнезе 28(64%) 33 (58%) 0,68

АГ 25(57%) 34(60%) 0,84

-СД II типа 4(9%) 5 (9%)

- др. нарушения углеводного 4(9%) 8 (14%) 0,75

обмена

Курение -курит 9 (21%) 13 (23%)

-бросил 12 (27%) 12 (21%) 0,77

-не курит 23 (52%) 32 (56%)

ХС общ (ммоль/л) 4,83 + 1,09 4,95 + 0,81 0,29

ХС ЛНП (ммоль/л) 3,29 + 0,96 3,12 ±0,72 0,4

ХС ЛВП (моль/л) 1,08 + 0,32 1 Д8 + 0,33 0,25

ТГ (моль/л) 1,4(1,06- 1,97) 1,36(1,02-2,18) 0,85

Артерия -ПКА 14(32%) 21 (37%)

-ПНА 22 (50%) 30(53%) 0,53

-ОА 8(18%) 6 (10%)

Должный диаметр артерии (мм) 2,84 ±0,55 2,78 ±0,63 0,63

шш <1 исходно (мм) 0,93 ±0,55 1,13 + 0,44 од

Стеноз исходно (%) 86,5 +10 81 + 10 0,08

Длина стента (мм) 16(13-18) 13(9-18) 0,09

ш <1 после схентирования (мм) 2,5+0,52 2,43 ±0,54 0,44

Стеноз после стентирования (%) 9 + 6 10 + 4 0,96

ПКА - правая коронарная артерия, ПНА - передняя нисходящая артерия, ОА - огибающая артерия, min d - минимальный диаметр

При проведении корреляционного и многофакторного регрессионного анализа не было выявлено взаимосвязи перечисленных клинических факторов с частотой и степенью рестенозирования коронарных артерий, как и в ранее проведенных исследованиях. В нашей работе наличие у пациентов СД II типа не было ассоциировано с развитием рестеноза в стенте, хотя в предыдущих исследованиях убедительно доказано, что он является предиктором развития рестеноза в стенте (Harry С Lowe, 2002). Вероятно, это связано с малочисленностью пациентов с СД II типа, вошедших в наше исследование (4 человека в группе рестеноза и 5 человек в группе без рестеноза). Другие нарушения углеводного обмена, такие как гипергликемия натощак и нарушение толерантности к глюкозе, по-видимому, не оказывают такого выраженного влияния на развитие рестеноза в стенте как сахарный диабет.

Для изучения роли окислительного стресса в процессе рестенозирования сосудов у пациентов обеих групп были определены показатели свободнорадикапьного окисления липидов (лаг-фаза окисления ЛНП, уровень липопероксидов и МДА в ЛНП), активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах крови (GPx, SOD, CAT) и изучена их взаимосвязь с ангиографическими параметрами поражения коронарных артерий.

100% 80%

лаг-фаза липопероксиды МДА акт-ть GPx

р < 0,05

I рестеноз □ без рестеноза

Рисунок 1. Активность окислительных процессов в группах пациентов с рестенозом и без рестеноза.

Согласно нашим предположениям, окислительный стресс был более выражен в группе пациентов с развившимся рестенозом, чем в группе пациентов без рестеноза. Как следует из данных рисунка 1, продолжительность лаг-фазы в группе пациентов с рестенозом была на 56% меньше, чем в группе без рестеноза, содержания первичных продуктов ПОЛ выше на 72%, вторичных на 36% и активность эритроцитарной GPx ниже на 18%, причем эти показатели были взаимосвязаны с ангиографическими данными Так активность эритроцитарной GPx положительно коррелировала с минимальным диаметром артерии (г = 0,24; р < 0,05) и отрицательно со степенью сужения артерии через 6 месяцев после вмешательства (г = -0,39, р < 0,001) Продолжительность лаг-фазы окисления ЛНП также положительно коррелировала с минимальным диаметром артерии (г = 0,41, р < 0,002) и отрицательно со степенью сужения артерии через 6 месяцев (г = -0,38; р < 0,004) В тоже время уровень первичных продуктов ПОЛ имел отрицательную корреляцию с минимальным диаметром артерии (г = -0,33, р < 0,007) и положительную со степенью сужения артерии через 6 месяцев (г = 0,32, р < 0,009) Уровень вторичных продуктов ПОЛ также отрицательно коррелировал с минимальным диаметром артерии (г = -0,32, р < 0,008) и положительно со степенью сужения артерии через 6 месяцев (г = 0,37, р< 0,002)

Обнаруженная нами зависимость между изменениями просвета артерии и степенью стенозирования через 6 месяцев после интракоронарного стентирования и такими показателями, характеризующими антиоксидантный статус, как продолжительность лаг-фазы окисления ЛНП, уровень продуктов свободнорадикального окисления липидов в ЛНП и активность эритроцитарной GPx-1, еще раз убедительно доказывает важную патогенетическую роль окислительного стресса в процессе рестенозирования сосудов

У всех пациентов были определены генотипы полиморфизмов -262 С/Т гена CAT, L55M и Q192R гена PON-1, G298T и -786 Т/С гена eNOS, Prol98Leu гена GPx-1, Ilel05Val гена GSTP и С242Т гена NAD(P)H и проанализировано

распределение данных полиморфизмов в группах с рестенозом и без рестеноза. Распределение генотипов всех полиморфизмов во всех группах подчинялось закону Харди-Вайнберга. Учитывая, что число гомозигот по минорному аллелю в полиморфизмах Q192R гена PON-I, G298T гена eNOS, Prol98Leu гена GPx-1 и lie 105 Val гена GSTP было незначительным, для статистических расчетов этих полиморфизмов гомозиготы по минорному аллелю объединялись в одну группу с гетерозиготами. Достоверные различия между группами были получены по 2-м полиморфизмам: G298T гена eNOS и Prol98Leu гена GPx-1 (рисунок 2). Носители минорного аллеля полиморфизма G298T гена eNOS чаще встречались в группе пациентов с рестенозом 54,5% против 28 % в группе без рестеноза. Носители минорного аллеля полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1 также чаще встречались в группе рестеноза 61% против 35% в группе без рестеноза.

100%

Распределение генотипов полиморфизмов

Г*1 Г*1

7% 12% 11% 14% 2% 4% 9% 7% 7% 16% 5% 11% 13,5%14% 11% 5%

NAD(P)H 242

* ;----- - ------- - ------------- —------------------:

р < 0,01 гомозиготы по дикому аллелю S гетерозиготы □ гомозиготы по минорному аллелю

Рисунок 2. Распределение генотипов полиморфизмов в группах с рестенозом и без рестеноза.

В связи с этим мы проанализировали взаимосвязь генотипов данных полиморфизмов с клиническими параметрами, показателями ПОЛ, активностью антиоксидантных ферментов в эритроцитах (CAT, SOD, GPx) и ангиографическими характеристиками поражения коронарных артерий. При сравнении гомозигот по дикому аллелю (генотип РР) и носителей минорного аллеля (PL+LL) полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1 по клиническим параметрам достоверных различий между группами получено не было. У носителей минорного аллеля отмечалась большая степень выраженности свободнорадикальных процессов: продолжительность лаг-фазы окисления ЛНП в группе носителей минорного аллеля была на 63% ниже по сравнению с группой носителей дикого генотипа РР, а содержание липопероксидов и МДА в ЛНП в этой группе было выше на 74% и 27%, соответственно, активность эритроцитарной GPx ниже на 17% наряду с повышением степени рестенозирования на 21% (рисунок 3).

20%

лаг-фаза липопероксиды МДА

акт-ть GPx % стеноза

р <0,05

|ИРР QPL+LL

Рисунок 3. Активность окислительных процессов и степень рестенозирования в группах пациентов гомозигот по дикому аллелю и носителей минорного аллеля полиморфизма Рго198Ьеи гена ОРх-1.

80%

100%

Также у носителей минорного аллеля частота рестеноза была в 1,9 раза выше (59% против 31% в группе гомозигот по дикому аллелю) и минорный аллель полиморфизма Рго198Ьеи гена СРх-1 был ассоциирован с увеличением риска развития рестеноза в стенте (0111=3,2, 95% ДИ 1,4-7,21) В тоже время были выявлены корреляции между генотипами полиморфизма Рго198Ьеи гена ОРх-1 и показателями антиоксидантного статуса Минорный аллель был ассоциирован со снижением активности эритроцитарной ОРх (г = -0,4, р = 0,001). т.е средняя активность фермента была самая высокая у гомозигот по дикому аллелю, а самая низкая у гомозигот по минорному аллелю Также минорный аллель был ассоциирован с укорочением лаг-фазы окисления ЛНП (г = -0,42, р = 0,0012) и увеличением уровня первичных (г = 0,43, р = 0,0002) и вторичных продуктов ПОЛ (г = 0,29, р = 0,014) (рисунок 4)

липогидропероксидами (в) и МДА в ЛНП (г)

Исследований влияния данного полиморфизма на развитие рестеноза ранее не проводилось, однако полученные нами результаты согласуются с данными предыдущих исследований по влиянию полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1 на развитие сердечно-сосудистых заболеваний, где было показано, что у носителей минорного аллеля были выше показатели толщины комплекса интима-медиа общей сонной артерии (р=0,0028), распространенность сердечнососудистых заболеваний (р=0,035), заболеваний периферических сосудов (р=0,027) (Hamamshi Т et al, 2004) и индекс коронарного кальция по данным мультиспиральной компьютерной томографии (р=0,006) (Nemoto М et al, 2007) В тоже время, выявленное нами уменьшение активности эритроцитарной GPx у носителей минорного аллеля находит подтверждение в работах других авторов (Ravn-Haren G et al, 2006) Как известно GPx принимает участие в метаболизме пероксинитрита, а также разрушает органические перекиси в организме, в том числе липогидропероксиды (Ana Fortuno et al, 2005), которые являются цитотоксичными для макрофагов, эндотелиальных клеток и ГМК сосудов и приводят к их гибели (Beckman JS, 1996) В ряде исследований было показано увеличение риска сердечно-сосудистых осложнений у пациентов со сниженной каталитической активностью GPx и документированной ИБС (Blankenberg S et al, 2003, Schnabel R et al, 2005) Исходя из меньшей активности эритроцитарной GPx, большей выраженности свободнорадикального ПОЛ у носителей минорного аллеля полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1, и в тоже время повышения у них риска развития рестеноза после коронарного стентирования, вполне вероятным представляется предположение, что негативное влияние минорного аллеля полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1 реализуется через уменьшение активности фермента GPx

Что касается полиморфизма G298T гена eNOS, то различия между группами были выявлены только по частоте рестеноза У носителей минорного аллеля (генотип GT+TT) частота рестеноза была в 1,8 раза выше (60% против 33% в группе гомозигот по дикому аллелю (генотип GG)) и минорный аллель

полиморфизма G298T гена eNOS был ассоциирован с увеличением риска развития рестеноза в стенте (0111=1,9; 95% ДИ: 1,18-3,19). Аналогичные данные были получены в исследованиях Humphries (2002), Suzuki (2002), Colombo (2008). В тоже время, в отношении полиморфизма -786Т/С гена eNOS нами не было получено достоверных различий по распределению генотипов между группами, однако при дополнительном анализе сочетанного наследования генотипов полиморфизмов G298T и -786 Т/С гена eNOS у каждого пациента было выявлено, что сочетание генотипов GT/TC в 2,7 раза чаще встречалось в группе рестеноза (27% против 10% в группе без рестеноза) (рисунок 5) и сочетание генотипов GT/TC полиморфизмов G298T и -786Т/С гена eNOS было ассоциировано с увеличением риска развития рестеноза в стенте (0111=3,19; 95% ДИ: 1,09-9,34).

Рисунок 5. Распределение сочетания генотипов полиморфизмов еК08 Е298В и «ТУ05 -786 Т/С в группах пациентов с рестенозом и без рестеноза.

Это может свидетельствовать о том, что не только Т-аллель полиморфизма в298Т гена eNOS увеличивает риск развития рестеноза, но и присутствие С-аллеля полиморфизма -786 Т/С гена eNOS оказывает негативное влияние на процессы рестенозирования после стентирования коронарных артерий. Эти данные согласуются с полученными ранее. Так, в исследовании, проведенном у 226 пациентов с ИБС и коронарным стентированием риск развития рестеноза

Группа рестеноза

тт/тс тт/сс

7% 2%

GT/CC 5%

GG/TT

Группа без рестеноза

ТТ/ТС

GT/CC 4% TT/CC 7%

GT/TC 10%

GG/CC 5%

GT/TT 14%

GG/TC 20% GG/CC 0%

р < 0,05

был выше у носителей С-аллеля полиморфизма -786Т/С (0111=2,06, 95% ДИ-1,08-3,94; р=0,028) (АН. Gomma et al, 2002) Известно, что eNOS является одним из ключевых ферментов в продукции оксида азота (NO), который в свою очередь является вазодилятатором (Garg UC et al, 1989), ингибирует рост ГМК, предотвращает агрегацию тромбоцитов, ингибирует адгезию лейкоцитов к сосудистой стенке (Kathy К etal,2003), а также обладает антиоксидантным действием (Jain SK, Palmer M, 1997) В тоже время известно, что полиморфизм G298T гена eNOS ассоциирован с уменьшением уровня NO (Khalkhai-Ellis Z et al, 2003) и Т-аллель проводит к снижению активности фермента eNOS (Tesauro M et al, 2000), a С-аллель полиморфизма -786Т/С приводит к уменьшению промотерной активности гена eNOS и, соответственно, уменьшению уровня фермента в плазме (Nakayama M et al, 1999), что в итоге приводит к снижению продукции NO, и соответственно к уменьшению его протективной роли Возможно, этим может объясняться негативное влияние данных полиморфизмов гена eNOS на процессы развития рестеноза

Ассоциации полиморфизмов L55M и Q192R гена PON-1 с развитием рестеноза в нашей работе получено не было, однако при дополнительном анализе сочетания генотипов полиморфизмов L55M и Q192R гена PON-1 было выявлено, что сочетание генотипов LM/QQ встречалось в 2 раза чаще в группе с рестенозом (41% против 21% в группе без рестеноза) и сочетание генотипов LM/QQ полиморфизмов L55M и Q192R гена PON-1 было ассоциировано с увеличением риска развития рестеноза в стенте (0111=2,71 ; 95% ДИ 1,11 -6,62) Имелась также тенденция к повышению частоты сочетания генотипов LL/QR в группе без рестеноза (31% против 16%), однако данные различия не были статистически достоверными (рисунок 6). Это косвенно свидетельствует о негативном влиянии М55-аллеля на развитие рестеноза и, напротив, о возможном протективном эффекте R192-aллeля

Группа рестеноза

MM/QQ LL/QQ

11

LM/QR LL/RR

14%

LL/QR 16%

Гругспа без рестеноза

MM/QQ LL/QQ

р < 0,05

*

LM/QQ 41%

LL/QR

31%

LM/QR

13%

LL/RR 4%

Рисунок 6. Распределение сочетания генотипов полиморфизмов L55M и 0192R гена PON-1 в группах пациентов с рестенозом и без рестеноза.

В настоящее время остается неизвестным влияние этих полиморфизмов на развитие рестеноза после стентирования коронарных артерий. Наши предположения о негативном влиянии М-аллеля полиморфизма L55M гена PON-1 на развитие рестеноза косвенно подтверждаются полученными ранее данными об ассоциации М-аллеля с меньшей активностью фермента PON-1 (Agachan В et al, 2004; Flekac М et al, 2007) и более низким уровнем ЛВП в плазме (Van Himbergen TM et al, 2005). В свою очередь минорный R-аллель полиморфизма Q192R гена PON-1 по сравнению с носителями QQ генотипа был ассоциирован с увеличением активности PON-1 в плазме крови (Flekac М et al, 2007), более высоким уровнем ХС ЛВП (Rios DL et al, 2007), уменьшением уровня системного окислительного стресса, в том числе МДА в ЛНП (Bub A et al, 2005), и снижением общей смертности (ОШ-2,05; 95% ДИ; 3,32-3,18) (Bhattacharyya Т et al, 2008), что согласуется с нашими предположениями о его возможной протективной роли. Весьма показательной является и обратная связь - увеличение сердечно-сосудистых осложнений у пациентов с низким уровнем активности PON-1 (ОШ- 3,4; 95% ДИ: 2,1-5,5), что подтверждает роль активности PON-1 в риске развития сердечно-сосудистых осложнений (Bhattacharyya Т et al, 2008). Учитывая, что PON-1 тесно взаимосвязана с ЛВП, содержащими апопротеин A-I, и обеспечивает их антиоксидантные свойства

посредством предупреждения накопления липопероксидов в ЛНП (Аухгат М, БиИгтап В, 2008), полученные нами данные по увеличению риска развития рестеноза у носителей генотипа ЬМ/(2С> полиморфизмов Ь55М и 019211 гена РОЫ-1 могут быть объяснены уменьшением активности фермента РОЫ-1 и, соответственно, снижением его протективного эффекта на окисление ЛНП Таким образом, оба полиморфизма как Ь55М, так и СИ921?. оказывают влияние на активность фермента РОМ-1, причем наличие различных аллелей может, как потенцировать, так и нивелировать действие друг друга Следовательно, для оценки их суммарного действия, как на активность фермента, так и на процессы рестенозирования необходимо определение их сочетанного наследования у каждого пациента, что и было проделано в нашей работе

ВЫВОДЫ

1 Клинические факторы, такие как возраст, перенесенный инфаркт миокарда, артериальная гипертония, статус курения, уровень холестерина ЛНП и ЛВП не взаимосвязаны с частотой и степенью рестенозирования после агентирования коронарных артерий непокрытыми стентами

2 Через 6 месяцев после коронарного стентирования свободнорадикальные процессы более выражены у пациентов с рестенозом в стенте- активность эритроцитарной вРх ниже на 18%, продолжительность лаг-фазы окисления ЛНП ниже на 56%, содержание липопероксидов и МДА в ЛНП выше на 72% и 36% соответственно

3. Ь-аллель полиморфизма Рго198Ьеи гена вРх-1 (0111=3,2, 95% ДИ 1,4-7,21), Т-аллель полиморфизма в298Т гена еЫОБ (0111=1,9; 95% ДИ. 1,18-3,19), сочетание генотипов СТ/ТС полиморфизмов в298Т и -786 Т/С гена еЫОБ (0111=3,19, 95% ДИ 1,09-9,34) и генотипов ЬМ/С?С> полиморфизмов Ь55М и (219211 гена РОЫ-1 (ОШ=2,71, 95% ДИ- 1,11-6,62) ассоциированы с риском развития рестеноза в стенте

4 Носительство минорного аллеля полиморфизма Рго198Ьеи гена ОРх-1 не только сопровождается достоверным увеличением частоты и степени рестенозирования в стенте, но и сочетается с достоверным уменьшением на 17% активности эритроцитарной йРх и изменением показателей ПОЛ (уменьшением продолжительности лаг-фазы окисления ЛНП на 63% и увеличением содержания липопероксидов и МДА в ЛНП на 74% и 27%, соответственно).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Полиморфизмы Рго198Ьеи гена вРх-1,0298Т и -786 С/Т гена еНОЗ, ь55М и 019211 гена РОЫ-1 могут применяться как дополнительные маркеры развития рестеноза после стентирования коронарных артерий с использованием непокрытых стентов у лиц мужского пола в российской популяции

2 Для полиморфизмов в298Т и -786 С/Т гена еШ? и Ь55М и 019211 гена РО№1 при стратификации риска развития рестеноза после стентирования коронарных артерий непокрытыми стентами целесообразно определение их сочетанного наследования у каждого пациента

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ

1 Каминный А И., Ланкин В.З, Каминная В И, Перепелица Е И, Шувалова Ю А, Самко А Н., Кухарчук В В - Положительное влияние антиоксиданта пробукола на частоту и степень рестенозирования коронарных артерий после транслюминальной баллонной коронарной ангиопластики Кардиоваскулярная терапия и профилактика, 2006, № 5, с 32-35.

2 Ю А Шувалова, А Н. Мешков, А И. Каминный, Г Ф Пикета, В В Кухарчук - Патофизиологические механизмы и генетические маркеры рестеноза после чрезкожных коронарных вмешательств Кардиоваскулярная терапия и профилактика, 2007, № 5, с 107-114

3. ЮА Шувалова, А.Н Мешков, А И Каминный, АН Самко, РО Широков, ДВ Стамбольский, В.В Кухарчук Ассоциация полиморфизма генов ферментов антиоксидантной системы с процессом рестенозирования после коронарного стентирования Кардиоваскулярная терапия и профилактика, 2008, № 5, с

4 Каминный А И, Шувалова Ю А, Ланкин В 3., Широков Р О , Самко А Н, Кухарчук В.В. Антиоксидантный статус и рестеноз после стентирования коронарных артерий Кардиология, 2008, № , с

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АГ - артериальная гипертония

АФК - активные формы кислорода

ГМК - гладкомышечные клетки

ди - доверительный интервал

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИБС - ишемическая болезнь сердца

ИМ - инфаркт миокарда

КАТ - коронароангиография

ЛВП - липопротеиды высокой плотности

ЛНП - липопротеиды низкой плотности

МДА - малоновый диальдегид

НАД - никотинамидадениндинуклеотид

НАДФ - никотинамидадениндинуклеотидфосфат

ОШ - отношение шансов

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПЦР - полимеразная цепная реакция

сд - сахарный диабет

тг - триглицериды

хс - холестерин

CAT - каталаза

eNOS - эндотелиальная синтаза оксида азота

GPx - глутатионпероксидаза

GSTP - гдутатион-Б-трансфераза

NAD(P)H - НАД/НАДФ-оксидаза NO - оксид азота PON-1 - параоксоназа-1 SOD - супероксид дисмутаза

I

Подписано в печать 11 08 2008 г Печать трафаретная

Заказ № 615 Тираж 100 экз

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш, 36 (499) 788-78-56 www autoreferat ru

Ишемическая болезнь сердца (ИБС) - ведущая причина смертности и потери трудоспособности среди взрослого населения развитых стран. Восстановление коронарного кровотока является основным методом лечения ИБС, позволяющим эффективно улучшить качество жизни пациента и отдаленный прогноз заболевания. Эндоваскулярные коронарные вмешательства: чрезкожная транслюминальная коронарная ангиопластика (ЧТКА) и коронарное стентирование получили широкое распространение в лечении ИБС. Наряду с прогрессом в улучшении непосредственных результатов эндоваскулярного лечения применение коронарных стентов позволило значительно увеличить сохранность эффекта процедуры в отдаленные сроки. Однако даже применение стентов с лекарственным покрытием окончательно не решило проблему рестеноза, которая является основным фактором, лимитирующим эффективность этого метода. Учитывая широкое распространение стентирования коронарных артерий в лечении ИБС, особенно острым представляется вопрос профилактики рестенозирования в стенте. Несомненно, важным является поиск предикторов рестеноза, в том числе генетически обусловленных. Показана роль полиморфизма генов системы антиоксидантных ферментов (G298T, -786Т/С гена eNOS), системы гемостаза (Р1А 1/Р1А 2 гена GP Ilia), системы воспаления (VNTR интрон 2 гена IL-lra), ренин-ангиотензиновой системы (полиморфизма А1166С гена рецептора к ангиотензину II тип-1) и других (677 С>Т гена метилентетрагидрофолатредуктазы) в развитии рестеноза в стенте. Наименее изученной в этом отношении в настоящее время остается система антиоксидантных ферментов, хотя окислительный стресс в сосудистой стенке развивается сразу после ее повреждения, и его признаки сохраняются как на стадии тромбообразования и воспаления, так и на стадии пролиферации и миграции ГМК.

Цель исследования:

Выявление ассоциации полиморфизма генов антиоксидантных ферментов с риском развития рестеноза коронарных артерий у пациентов после стентирования коронарных артерий непокрытыми стентами.

Задачи исследования:

1. Оценить взаимосвязь различных клинических факторов с частотой и степенью рестенозирования у больных после стентирования коронарных артерий непокрытыми стентами с использованием ангиографического количественного компьютерного анализа.

2. Определить показатели свободнорадикального окисления липидов (лаг-фаза окисления ЛНП, уровень липопероксидов и МДА в ЛНП), активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах крови (глутатионпероксидазы-1 (GPx-1), супероксиддисмутазы (SOD), каталазы (CAT)) и изучить их взаимосвязь с ангиографическими параметрами поражения коронарных артерий.

3. Провести молекулярно-генетическую диагностику и определить частоту мутаций в генах каталазы, парооксаназы-1, эндотелиальной NO-синтазы, глутатионпероксидазы-1, глутатион-8-трансферазы, НАД/НАДФ-оксидазы, (CAT, PON-1, eNOS, GPx-1, GSTP, NAD(P)H) в группе больных ИБС и проанализировать их распределение в группах пациентов с рестенозом в стенте и без рестеноза.

4. Сопоставить клинические, ангиографические и биохимические данные с результатами молекулярно-генетической диагностики.

Научная новизна исследования:

Принципиальная новизна планируемой работы состоит в комплексной оценке влияния функциональных полиморфизмов генов антиоксидантных ферментов на параметры, характеризующие частоту и выраженность рестенозов, а также интенсивность процессов свободнорадикального окисления липидов в группах пациентов с рестенозом коронарных артерий и без рестеноза.

В проведенной работе впервые показано, что свободнорадикальные процессы более выражены у пациентов с рестенозом, развившимся через 6 месяцев после коронарного стентирования с использованием непокрытых стентов. Выявлены новые возможные факторы риска развития рестеноза в стенте у пациентов в российской популяции после стентирования коронарных артерий с использованием непокрытых стентов. Так выявлено, что полиморфизм Glu298Aps гена eNOS как отдельно, так и в комбинации с полиморфизмом -786Т\С гена eNOS ассоциирован с риском развития рестеноза в стенте. Впервые показана ассоциация комбинации полиморфизмов L55M и Q192R гена PON-1 с риском развития рестеноза в стенте. Впервые показано влияние полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1 на частоту и степень рестенозирования после стентирования коронарных артерий. Выявлено влияние полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1 на активность эритроцитарной GPx у пациентов в российской популяции. Впервые показано влияние полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1 на степень выраженности процессов свободнорадикального окисления липидов.

Практическая значимость работы:

1. Выявлено, что полиморфизм Glu298Aps гена eNOS отдельно и в комбинации с полиморфизмом -786Т\С гена eNOS, полиморфизм Prol98Leu гена GPx-1, а также комбинация полиморфизмов L55M и Q192R гена PON-1 ассоциированы с риском развития рестеноза в стенте, что позволяет их рассматривать в качестве возможных маркеров развития рестеноза после стентирования коронарных артерий непокрытыми стентами.

2. Показано, что несколько функциональных полиморфизмов в генах, кодирующих eNOS и PON-1 могут, как потенцировать, так и нивелировать действие друг друга, поэтоиу для оценки их суммарного действия необходимо определение их сочетанного наследования у каждого пациента.

выводы

1. Клинические факторы, таких как возраст, перенесенный инфаркт миокарда, артериальная гипертония, статус курения, уровень холестерина ЛНП и ЛВП не взаимосвязаны с частотой и степенью рестенозирования после стентирования коронарных артерий непокрытыми стентами.

2. Через б месяцев после коронарного стентирования свободнорадикальные процессы более выражены в организме пациентов с рестенозом в стенте: активность эритроцитарной GPx ниже на 18%, продолжительность лаг-фазы окисления ЛНП ниже на 56%, содержание липорероксидов и МДА в ЛНП выше на 72% и 36%, соответственно.

3. L-аллель полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1 (ОШ=3,2; 95% ДИ: 1,4-7,21), Т-аллель полиморфизма G298T гена eNOS (0111=1,9; 95% ДИ: 1,18-3,19), сочетание генотипов GT/TC полиморфизмов G298T и -786 Т/С гена eNOS (0111=3,19; 95% ДИ: 1,09-9,34) и генотипов LM/QQ полиморфизмов L55M и Q192R гена PON-1 (0111=2,71; 95% ДИ: 1,11-6,62) ассоциированы с риском развития рестеноза в стенте.

4. Носительство минорного аллеля полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1 не только сопровождается достоверным увеличением частоты и степени рестенозирования в стенте, но и сочетается с достоверным уменьшением на 17% активности эритроцитарной GPx и изменением показателей ПОЛ (уменьшением продолжительности лаг-фазы окисления ЛНП на 63% и увеличением содержания липопероксидов и МДА в ЛНП на 74% и 27%, соответственно).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полиморфизмы Prol98Leu гена GPx-1, G298T и -786 С/Т гена eNOS, L55M и Q192R гена PON-1 могут применяться как дополнительные маркеры развития рестеноза после стентирования коронарных артерий с использованием непокрытых стентов у лиц мужского пола в российской популяции.

2. Для полиморфизмов G298T и -786 С/Т гена eNOS и L55M и Q192R гена PON-1 при стратификации риска развития рестеноза после стентирования коронарных артерий непокрытыми стентами целесообразно определение их сочетанного наследования у каждого пациента.