Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Влияние пересадки культивированных островковых клеток поджелудочной железы на систему иммунитета при сахарном диабете в эксперименте

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН

ВТОРОЙ ТАШКЕНТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

?Г5 ОН

На правах рукописи

АХА1ЕДОВА РАИСА КАСЫМОВНЛ

УДК 616.379—008.64—092.18—089.843—097

ВЛИЯНИЕ ПЕРЕСАДКИ КУЛЬТИВИРОВАННЫХ ОСТРОВКОВЫХ КЛЕТОК ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ НА СИСТЕМУ ИММУНИТЕТА ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.00.36 Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА МЕДИЦИНСКИХ НАУК

Ташкент — 1996

Работа выполнена в Проблемной научно-исследовательской лаборатории по преодолению тканевой несовместимости Первого Ташкентского Государственного медицинского института.

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук, профессор

К. Г. У РАЗМЕТОВ

Научный консультант:

Доктор медицинских наук, профессор И. М. БАЙБЕКОВ

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор

Р. М. РУЗЫБАКИЕВ

Кандидат медицинских наук, доцент Н. В. ЕЛЕЦКАЯ

Ведущее учреждение, давшее отзыв о научно-практической ценности работы: Ташкентский педиатрический медицинский институт

Защита состоится «............» ...................................................... 1996 г.

в «............» часов на заседании специализированного Совета

Д.087.09.02 при Втором Ташкентском Государственном медицинском институте по адресу: 700109, Ташкент, ул. Фараби, 2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Второго Ташкентского Государственного медицинского института.

Автореферат разослан «^..У...» ........ 1996 г.

Ученый секретарь специализированного Совета доктор медицинских наук, профессор

ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Сахарный диабет (СД) является одной из актуальнейших проблем XX века, значимость которой определяется большой распространенностью этого заболевания. По лотальностп СД занижает третье место поело сердечно-сосудистых заболевания и злокачественных новообразований (A.C.Ефимов п др., 1903; В.Н.Блгмкин, 1984; М.И.Балаболкин, 1987).

В основа патогенеза СД леяит относительная или абсолютная инсу-линовая недостаточность в результате поражения островкового аппарата подаелудочкой аолеза (ПН) или se внепанкреатические причины, при-водяциз к различны;,! нарушения;.! обмена и изменениям в тканях и органах (А.Г.Мазовецкий и др., IS88; В.В.Полтарак, К.Д.Етох, 1989).

По современном представления;,! инсулинзависимый сахарный диабет (ЙЗСД) является аутоиммунным заболеванием с первичным поражением ß -клеток П2 и развитием абсолвтной кнеуликовой недостаточности (В. П.Комиссаренко, 1983; Е.Н.Злобина, I989;M.Ziop;ior,B.Zleglor, 1989) и протекает на фоне нарушения клеточно-опосредоваиного и гуг.горольного иммунитета (М.И.Балаболкин, 1909; Е.В.Васкльова и др., 1993; Ьэгпгмгк , 1985; VoysH st al.,1909).

Лечение ИЗСД до сих пор представляет огромниэ трудности. Традиционные методы лечения но предотвращая? возникновение и развитие характерных для СД осложнений (ангиопатий, ретинопатий,.полиневро-патий, нефропатий). 4

При инсулинотерапго: в периферической крови больных наблюдается увеличение .содердания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) и ан-тшшсулпновых антител, которые» нейтрализуют оффзкт вводимого экзогенного инсулина. Уровень отих показателей повышается с тялестыэ заболевания (Л.С.Ефимов, 1987; Е.А.Сакало, 1237).

В связи с этим в последние годы, наряду с созданием высококачественных видов инсулина с различной продолжительностью действия, ведется активный пелен iionux методов .точения данной формы заболевания. Разрябатываггся компьютерные устройства, имитирующие ГШ, совершенствуются методы nopscamcn дольной ПК л свободной трансплантации культур сстровковых ¿исток (ОКПЗ). Однако, органная трансплантация ГШ является касательством, сопряженным с большим риском для реципиентй (В.;Ы'йгма::ов и др., I97S; С.А.!Ьлпмов и др., 1982). Свободная трансплантация ОКПН позволяв? избегал?: осло:хиениЙ, нмзщих место при органной, приводит к нормаллэец-si углеводного обмена, кемпененруот недостаточность инсулгаа п способствует отмене пли замедлении развития поздних осло.-5лекиИ ПЗСД (В.И.Шумаков, В.Н.Елюм- .

кин, 1981; У.А.Аряпов и др., 1994).

В. 10 же время сложность а проблематичность получения ОКПЖ плодов человека в достаточном для пересадки количестве требует изыскания других источников получения ОКПК. Поэтому нами впервые било предяогено и начато изучение с этой целью 0КП2 ягнят каракульской породы.

О состоянии работы системы иммунитета у больных в основном судят по изменению субпспуляционного состава лимфоцитов в периферической крови. В то se время несомненный интерес представляет изучение ■»внеий К'-нгочшга состава лимфоидных органов, что возможно только в эксперименте на животных. Е этом плане сценка злияния пересаженных ОКПЖ на клеточный состав л^мфоидных органов животных с экспериментальным диабетом, на наш взгляд, является чрезвычайно важной ч актуальной, ибо полученные результаты окажутся полезными для оценки эффекта этого метолг. лечения у больных СД.

Работа выполнена по плану Первого ТапГосМИ (И государственной регистрации 01860046075 и 01910026899).

Цель исследования: на основании изучения морфологической и -функциональной характеристики алло- и ксеногенных ОКПЖ in vitro ц их влияния на имыунологичеасие параметры животных "с экспериментальным диабетом обосновать внедрение метода пересадки ОКПЖ в клиническую практику.

Задачи исследования:

1) дать в динамике морфологическую ы функциональную характеристику культур ОКПЖ ягнят, иенят, крысят, плодов человека, подвергнутых культивированию In vitro в течение 5-12 дней;

2) изучить в сравнительном аспекте с инсулинотерапией влияние трансплантированных культур аллогенных ОКНЕ на клеточный состав лимфоидных органов кр^с с аллоксановцм диабетом (АД);

3) изучить глияине пересаженных алло- и коеногенв{ос ОКПЖ на некоторые иммунологические параметры у апьотншс с экспериментальным СД (панкреатэктомированных собак).

Научная новизна. Епервые получены пригодные для применения у больных ИЗСД культуры ОКНЕ каракульских ягнят, дана их морфофункци-ональная характеристика в сравнительном аспекте с ОКПК плодов человека, щешгг, крысят. Трансплантация полученных культур ОШШ животным с экспериментальным диабетом, наряду с нормализацией уровня гликемии и удлинением срока выживаемости реципиентов, оказывает влияние, вааразленное на нормализацию нарушенных при СД Ещунологк-

гских параметров не только в периферической крови, но и нопосред-гвенно в лиыфоидных органах, являющихся структурной основой систе-i иммунитета.

Практическая значимость проведенной работы заключается в эк-зериментальном подтверждении способности культур аллогенных и ксе-эгенных ОКПЖ длительное время функционировать в организме подопыт-ах животных с экспериментальным диабетом и оказывать позитивное яиянно на нарушенные звенья в работе системы иммунитета. Получение в эксперименте результаты исследования послужили одним из ос-овных моментов в обосновашш внедрения метода трансплантации полу-енных от ягнят и поросят ксеногеппых 0К1Ш в комплексное лечение ольных ИЗСД в клинических условиях.

ролодения. выносимые на защиту.

1. Культивированные in vitro в течение 5-12 дней 0КП1 различ-ых видов яивотиых и плодов человека в определенной мере сохраняют вой морфофункционалышо характеристики и при трансплантации функ-ионируют в организме реципиента длительное время.

2. Диабет, индуцированный атлоксачом, вызывает выраженную пе-еотройку в клеточном составе ликвидных органов (тимус, селезенка, икфатические узлы). Трансплантирог-анные аллогенные ОКПЛ вызывают енденции к нормализации или сдвиг на более поздние сроки имеющих есто при АД нарушений в глоточном составе лимфоэдных органов.

3. Пересаленные оллогонныо и ксеногенные ОКПН у собак с экспе-шонталышм диабетом способствуют нормализации нарушенных показа-елей системы иммунптота.

Внедрение результатов исследования^. Результаты исследований шедренн в практику лочешст больных ИЗСД в Центре гепато-панкреато-(илиарной хирургии LQ РУз СРаспоряжение МЗ РУз И 1425 от 26.12.90 '.). Материалы работы отражены в методических рекомендациях "Лече-ше больных сахарным диабетом I типа путем трансплантации островко-1ыу клеток поджелудочной :г.слс?ип (Таакент, 1994).

Апробация работ». Основнио положения диссертации доложены на гаоговых научных конференциях Первого ТашГосШ (1988, 1992, 1993)» ЕЕ Всесоюзной. паучной конференции по трансплантации сердца, печена, юдаелудочной. железы я других органов (Львов, I9S0), 5-м съезде хирургов Средней Азии и Казахстана (IS9I), на заседании общества им-чгнологов и аллергологов г. Ташкента (1994), 1-м Международном конгрессе диабетологов Центральной Азги (Алматы, 1994). Апробация работы проведена на заседании научной конференция"кафедры факультетской

хирургии и ПНИЛ ткачввой несовместимости I ТашГосМИ (6 мая 1995 го-,да) к'ыежлаборадорной и мажкафедрашюй научной конференции I Таш ГосЬМ (ПНМ тканевой несовместимости, ЦНИЛ, кафедры факультетской хирургии; микробиологии, вирусологии с иммунологией (25 мая 1995 года); семинаре при научном Совете Д.087.09.02.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 164 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литература, описана материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 19 рисунками. Список использованной литературы включает 262 источника, из них на русском - 140, на иностранных языках - 122.

СОЛЕШНИЕ РАБОТЫ Материал и метода исследования

Исследования щ-.-годились на 27 беспородных собаках обоего пола с исходной массой тела 8-20 кг и 105 крысах-самцах породы Yiotar с исходной массой тела 140-250 г. Еивотные были распределены на следующие серии опытов.

Крысы:

1) Контрольная группа (15 крыс) - животным однократно подкожно инъецировали 1,0 мл физиологического раствора хлористого натрия;

2) аллоксановый диабет у крыс (30 крыс) - в опыт были включены животные со средней и тяжелой степенью АД, индуцированного однократны;»! подкожным введением 2% водного раствора аллоксана (фирма locho м • ЧССР) в дозе 200 кг/кг массы тела;

3) инсулинотерапия у крыс с АД (30 крыс) - животным с АД, начиная с 14 суток после индукции диабета, ежедневно однократно подкожно вводили инсулин в дозе 3 ед/100 г массы тела;

4) внутримышечная трансплантация аллогенных ОЫШ крысам с АД (30 крыс) - на 14 сутки после индукции диабета под феитанил-дропе-радоловым наркозом в прямую мысцу живота инъецировали специальной иглой по 1,0 мл культур ОКПЕ. Каадой крысе трансплантировали культуру клеток, полученных от 6-8 крысят.

Собаки:

1) контрольная группа - 9 собак (тотальная палкреатэктомия);

2) группа, в которой 9 собакам через 10-15 дней после тотального удаления ПЕ в прямые мыэды живота пересаживали культуру СКПЕ новорожденных щенят. Животных до пересадки ОКПЕ поддерживали ежедневным введением экзогенного инсулина в дозе 20-40 ЕД;

3) группа, включающая 9 собак, которым в день панкреатэктомии трансплантировали ксеногснные ОШШ, полученные от ягнят. Каждой панкреатзктоклрованной собаке трансплантировали культуры 0K1DS от I-2 ноЕороздениых ценят или ягнят.

Источником длч получения культур ОКПЖ служили НЕ трупов плодов человека сроком жизкн IG-26 недель с массой тела менее 1000 г, щенки, крысята и ягнята, срок аиэни которых составлял 1-2 дня. Культуры 0КПД приготавливали по методике, разработанной в НИИТ и И0 МЗ СССР (В.Й.Котлкин и др., 1985). Для сценки .глзнеспосоСиости культуры ОШШ на 3, 5, 7 и 10-12 сутки культивирования исследовали путем световой и трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ). При световом шкроскопировалии срезы толщиной 5 шсм окрашивали гематоксилином и эозином или альдегид фуксином по Гоморл (Л.И.Фалин, 1961).

Для ТЭМ полутонкие и ультратонкие срезы охраоивали метиловым синим и основным фуксином или ураниладетатом и цитратом свинца. ТЭМ проводили с помощью микроскопа "Н-вОО" (Хитачи, Япония). Функциональную активность ОКПК исследовали путем определения в полученных во время смены в культуральшк средах содержания инсулина, С-пептида :i глякагона на счетчике Rack Go хх (фирма LKB , Финляндия) методом радиоиммунологического анализа с помощью набора реактивов РЛО-ИНО-ПГ - 125-г ("Поли/л", Минек), Byic-San.ctoa (OFT), Sereno (Италия) соответственно.

Велось наблюдение за состоянием подопытных животных, определение массы тола. Собаки оставлялись для учета их выживаемости, крысы забивались путем декапнтацпи на 7, 14, 21, 28 и 60 сутки опыта. В крови у аивотши в необходима сроки определяли содержание сахара глхжозсНюрментатшяшм -зтодом.

Для ц!гтолог:поского исследования из лк.'.:ровдишс органов крыс после их извлечения готовили !,а-л;и-отпочгтгл ;:а обезжиренных стеклах, которые окрашивали по Нохту: в теченна 2-3 минут их заливали флг.с атером ^ай-Гртаваяьда для опрозалния ядер, а затем з течение 15 минут окршзтааля по Horry, В гяюхах-отлсчатгсах подсчитывала 500 клеточных элементов, спхссвке зоторнх производили по номенклатуре клеток, предложение;! H.H.Покровской п др. (I9S5).

В перифернчссгтоЯ крогл собак производили определение лейксцп-тов и лимхоцитов сй:;спр:п!ят:л:;1 моголам::, содержания Т- и В~клэток - методом спонтанного Е-розеткообразогзлия с эритроцитами барана и мшсй соответственно по -Tonda! ai al. (1972) и ciupta,Orleeo(IS75), фагоцитарной актлгпоста nefrrрейсов - по методу О.Г. Алексеевой п А.

П.Волковоп (1965), концентрации иммунных комплексов в сыворотке крови - по методу Haocowa ot al. (1977).

Цифровой материал обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия достоверности по Стьоденту-Фишеру (И.А.Оивян, 1950). Достоверны:,::: различиями считали те, при которых значение Р оыпо равно или меньае 0,05 (P¿0,05).

ЕЕЗУЛЬТАШ ИССЛЕДОВАНИЙ I. Ыорфофункциснадьная характеристика культуры ОКШ различных вадов млекопитающих

Дпк получения культур ОШН использовали методику "флотирующих культур", которая позволяет получить наиболее чистые культуры ОК с низкой иммуногенностью к значительной иисулинпродуцирукщей активностью (В.Н.Блюлшн г. др., 1285).

Во "флогируш.и культурах" ОКГЕ преобладают f. -клетки (до В процессе культнгшюванил клеточный состав ОКПМ и ультраструктура р -клеток претерпевает некоторые изменения. На 3 сутки культивирования большинство у -:-*„•; сток сохраняло свою структуру. Выявлялись ацинарные клетки, в цлюплазме которых накапливались липидн.

На 5-7 сутки культивирования оольепнство ашшарнкх клеток, лимфоцитов и лейкоцитов элиминироиалосъ, увеличивалось количество фибробластов. Строение j> -клеток свидетельствовало о нормальной функциональной активности.

В отделенные сроки культивирования (10-12 сутки) часть j> -клеток Оыла л^ена электронно-плотных гранул» отдельные клетки подвергались гвдрогояеекой дистрофия, гшражаицсйся в резкой вакуолизации ' и Фрагюзнтацш мембран цлтоклазуитпческих' органелл. В клетках выявлялось значительное количество f> -гранул.

Бри изучении функциональной активности культуры 0КП2 было установлено, что по мере удлинения сроков культивирования в культу-ральных сродах отмечалось снижение содержания инсулина. Тшс, в ку-льтуралъных средах плодов человека i;a 9-12 дни исследования содержание инсулина было снижено до 267*74,6 против 361*36,2 икед/ыл на 3 день. Содержание С-поитида на 3 суиси составляло 0,9*0,3, на 5 сутки отмечаюсь повышение до 1,45*0,39, а на 7 сутки - снижение до 0,5*0,07 пг/мл.

В культуральчых средах ОКПП ягнят содержание инсулина на 3 сутки составляло 461^5,7 со снижением его содержания к 7 и 9-12 суткам до 215*32,6 и 223*53,6 мкед/ш. Отмечалось повышение уровня

■?

С-пептпда с 0,25-0,03 на 3 сутки до 0,3-1=0,09 пг/мл па 7 сутшц

Б культуральных средах 01ШН ценят седерглашю инсулина с 3 по 7 день колебалось з пределах 430*91,1 - 403*61,2 со сличением его к 9-12 дня:.) культи^ярованил до 261*85,5 мкед/"-л» Содержание С-исптзда колебзлсо:. в пределах 0, iOAj, 04 0,44*0,19 пг/ыл.

В культуральных средах 0КШ крысят содзргкашз инсулина на 3 сут:сп сило ::а уровне 237-6,9, а на 7 суп::: - 253*57,9 ккед/гvi. Содерчалие С-пепптда па 7 сутки исследования оказалось больсе зпачсш'М на 3 сутки з 1,5 раза, Содоряалпо гл'-зкагола э культурз-лькои сродэ CIJE, независимо от их тот, та!'.ю пглгло тенденции к сшпеш:» по мзре увеличения сроков их культшпроЕання.

Так:::.! образе:-;, исследования покапали, что при культивировании in vitro ОКПН различных задов соз:раияст его:: порфо*ункцноиа-льгшо сшлстга. Снижение секреции плеул/гна, гл::::агона по мзрз увеличена ерэкоа культиварозашш мсг.сх быть связано гак с нарушением метаболических процессов, так а а гиболыэ части ОКПП.

В проведенных совмостпо с а.Х..'/дмадакичигл (1994) исследованиях акткпноа функциональное состояние культуры О.-СШ было псдт— вор::депо их спосойгостьз прп трансплантации крисач с АЛ сигать уровень гллкп.'лпи. Так, если у криз уровень сахара з перпфзрзче-ской крови з сроки 7-G0 дни поело индукция АД колебался в прэде-лах I2.7---I.C4 ❖ 17,9*2,13 против 3,1±0,03 3,В"~0,35 в контроле; (Р-0,05), то у кгпс ,'Д поело пересада 01ШЛ бил сяж:сн до 4,0* 0,32 5,5*0,3-3 гашь/л, 'в го зре.мя как при шюудштврапшг сяк-моплз урятя глякемпя баю иезнач'тгельтгл (10, ?•-£), 69 -г- 12,6*0,61 ммоль/л).

Необходимо отмстить, что r.rxoi'jriz "[¡'.'пепь сс"арг з крови кркс с АД, а таклю при инсулкнотсрзлил момот С-г:ь сглззл по только с поражением р -клето:с и подостг'го'ягостьп яясуляла, по л г.:перглг:-кемиз!;ру?г;-.;м п£>( егстсм глязпгепа, гi/paíav:л?аогпго аечугстзптзлья!*-глп к оллоксапу ¡¿-клзткамн.

Дополните ramn подтгзср:-д"гтгем -'/.унггг^оя^льпои актяглостл культуры OKIE якллоеь удлиненно epoxon лизни ссбск с скспг.ржонтадь-яыгл диабетом. Та;;, при пглкриг?и?с'-я:г п^эдосттолбксст:» ~яз;гя собак в среднем ссстаялгг-''. 7,7*1,73 дня, а траасшг-атгцпя дульту-ря ОЙГС'С коня? удлпшла срок- !•_•: до -ягнят - ло 43,5

~;4,45 дни.

Tokk¡: oópa'jcn, я«лу-:ант:з ?*оргя-:-у/!кц;юпйЛ1-ппэ даявкз сюцете-льегзум о тс;» что культура ¡утло- и -ссчогсглпг: OIuTJ сохраняя?

о

свое активность и при трансплантации дате при отсутствии иммуиосуп-.ресски эффективно функционируют в организме рещшиента длительное время.

2. Влияние пересадки ОШШ и инсулинотерашш на состав клеток лимфовдных органов крыс с аллоксановкм диабетом Изучение состояния системы иммунитета при СД представляет несомненный интерес, что связано с выяснением патологических механизмов его развития. Установлено, что б развитии СД н его осложнении участвуют как клеточные, так и гуморальные факторы иммунитета (Е.Б. Васильева и др., 1985; И.С.Халплоьа и др., 1993; Ьетиаг1с, 1385).

Исследования показали, что диабет, индуцированный аллоксаном, в структуре клеток лпмфоцдных органов вызывает определенные изменения. Так, на 7 с.утю; исследования в тимусе животных с АД и контроль них здоровых крыс не обнаруживались ретикулярные, плазматические и оелокдние клетки. . мечалось увеличение числа лкмфобластов в 3,5, а прол;1м$ющ;тов Б 5,5 раза при укеньыенш: лимфоцитов б 1,7 раза. В селезенке отмечалось снижение уровня ретжулярных, плазматическая и миелоидных клеток при исчезновении лимфобластов. Количество про-лимфоцитов и л.илфсцитов било незначительно увеличено. В лимфатических узлах отмечалось отсутствие ретикулярных и плазматических клеток, нарастание лимфобластов в 1,2, пролимфоцитов в 2,5 раза при уменьшении лимфоцитов в 6,6, мпеловдных клеток в 2 раза.

На 14 сутки исследования в тимусе выявлялись отсртствуюцие в . контроле ретикулярные и плазматические клетки в предалах соответственно 5,1-0,3 к 3,8^,3. Количество лимфобластов оставалось на уровне предыдущего срока исследования, а пролимфоцптов было резко пэвк^ено (в 11,6 раза) при уменьшении числа лимфоцитов почти в 9 раз. В селезенке отмечались снижение уровня ретикулярных и плазматических клеток, отсутствие лимфобластов, снижение числа лимфоцитов в 1,4 и миелоидных клеток в 8,7 раза при резком увеличении со-дерзанкя пролимфоцитов (в 1,6 раза). В лимфоузлах обнаруживались ретикулярные клетки (2,5^0,5), число плазматических клеток было снижено в 1,6 раза. Отмечалось увеличение содержания лимфсбластов в 3, пролимфоцитов в 2,4 раза при уменьшении числа зрелых лимфоцитов в 5,7 раза. Каелоздные клетки не обнаруживались.

На 21 сутки в тимусе ретикулярные клетки не выявлялись. По сравнению с предыдущим сроком отмечалось увеличение числа плазматических клеток и лимфобластов, резкое снижение числа пролимфоцптов (в 8,6 раза), при резком увеличении числа лимфоцитов (8,3 ра-

за). При этом последние два показателя приближались к контрольна'.) значениям. В селезенке отмечалось повнхение уровня ретикулярных клеток в 3,3, лимфобластов в 2 раза. Число пролимфоцитов било повезено в 1,7 раза при снижении числа лимфоцитов з 2,2 рзза. "дело-здных клеток било мепьае, чем в контроле, по больше значений на 14 сутки (в 6,4 раза). В лимфоузлах наблэдалось отсутствие ретикулярных клеток, по сравнении с 14 сутками число плазматических клеток было кепьшо з 3,4, лимфобластов в 2,8, пролпмЬицлтов в 1,8 ра?а, но последних было больше в 1,4 раза, чем в контроле, '[пело лимфоцитов ^о сравнению с 14 сутками было увеличено в 4,4 раза, ¡¡о оказалось иеньие значений контроля в 1,3 раза. В этот период отмечался резкий зодъем миелоздных клеток (в 8,8 раза).

Ка 28 сутки в тимуса выявлялись ретикулярные и плазматические :слоткп. Количество лимфобластов било увеличено в 1,5, пролпм^оцггов в 8,6 раза при снижении зрелых лимфоцитов в 2,8 раза. Обнаруживаюсь небольшое количество мпелоиднкх и тучных ¿слеток. В селезенке отмечалось снижение числа ;> !т;;куляр;;их, плазматических и маолозднкх слеток и лимфобластов. Количество пролим/хэцитов Сило поймано л 1,6 ;лза, а зрелых лимфоцитов снижено в 1,4 раза. В лимфоузлах отмечался резкий подъем клеток плазматического ряда (в 5,1 раза), лимфобластов (л 7,3 раза), пролифоцитов (в 1,7 раза) при уменьшении со-;ерг.:ишя ллмфоцитоз в 2,8 раза. .Мпеловдных шюток было меньше, чем ;а 21 день, но больше контроля з 2,4 ряза.

В конце эксперимента (60-1! день) в тимусе продолжало нарастать юраллельно с прол;смфоцктам!1 число ретикулярных клеток и лимфобластов при снижении числа зрелых лимфоцитов в 4,6 раза. В мазках в >тот период отсутствовали плазматические, мпелоидние и тучные клетей. В селезенке отмечалось резкое снихснио всех форм клеточных элементов, кроме пролимфоцитов и мполоидных клеток. Для лимфоузлов бы-;о характерно резкое увеличение ретикулярных клеток (21,7-0,3), фолимфоцптов (в 2 раза) и лимфобластов (в 4,5 раза), уменьшение ;исла плазматически:: клеток в 2,7, лимфоцитов в 2,9, млелопдных слеток з 1,3 раза.

Таким образом, исследования показали, что'диабет, вызванный илоксансм, з.клеточном репертуаре всех лимфонднш: органов крыс выдает сдвиги "влево", зь'ра-'.агглеся з резком увеличении числа моло-цсс форм лимфеидных клеток при снижении числа зрелых лимфоцитов, [ействптельно, ссл:: у кнтактиых г-лпотных соотнесение молодых.форм слеток (лимфсбласты -г пролнмфоциты) :: зрелы:.! лимфоцитам составило:

б тимусе - 0,03, i» селезенке - 0,78, ь лимфатических узлах 0,60, го у крыс с АД эти ссказатели е различнее сроки колебались соответственно в пределах 0,14-8,51, 0,72-3,88 и 1,06-9,97. Полученные данные свидетельствуют, во-первых, о нарушении процессов миграции, диффаренцировки и пролиферации лкмфоидных меток, во-вторых, об усилении клеточных факторов иммунитета, так как именно молодые фор-г-ы лнифовднкх ¡слеток, в первую очоредь лпмфобласты, обладает ша;лу-вокомпетентностыз ( , 1983; Е.Н.Горыиша, О.Ю.Чага,

1590).

Появление плазматически клеток в тимусе гложет быть обусловлено повреждение« органа с нарушением геыато-тимусного барьера и контакта тшоцитов-с аллоксачсм, так как развитие плазмоклеточной реакции в тимусе каблщается только при непосредственном вЕОдешш антигена в тпмус иди и^'упешш гемато-тимусного барьера и контакта тикоцитов с антигена:,,, в нем (Миллер, Дукор, 1967; Л.В.Белецкая и др., 1975; В.Л.Г.!азуренко, А.Ф.Федотова, 1981). Интересно отметить, что в неточном репертуаре лпмфовдних органов крыс с АД наблюдается два пика резких нарупений. Можно предположить, первый пик (7-21 дни) является следствие;/) прямого токсического действия ачлоксана на организм и образования одцоизыеннкх антигенов. втпппй пик (поело 21 дня) - следствизм хрзкизацли патологического процесса.

Суммируя полученные результаты, ыоано констатировать, что при /¡Д происходит сенсибилизация лимфоцитов видоизмененными под влиянием аллоксана антигенами р -клеток ПК, о чем свидетельствует резкое, увеличение числа лимфобластов и проликфоцитов. Сексибилизированниэ леуЛоцмы, в своп очередь, поддерглвает патологический процесс, переводя течение болезни ъ ее хроническую форму. В то же время гуморальные факторы иммунитета при АД, во всяком случае в начальный период, видимо существенной рода не играат. Так, tU.ch.sQl et а1. (1928) считают, что при СД I типа клеточные факторы иммунитета играют более важную роль, чем гуморальные.

Рядом авторов показано, что препараты арцннального инсулина у зкепзриментгльнкх животных оказывают иммзтюмодулпрукций эффект (Г. А-Еелокрылов и др., 1984; Ы.Г.Кшдов, 1535; Г.М.Созинова, 1989), в лимфоидных органах и периферической крови увеличивает число ядросо-дерваише клеток, усиливают иммуннкЗ ответ на тмуезавнеимый (эритроциты барана), но не т-ауавзазисимый антиген (VI-антиген) (Л.К. Петриева и др., 1982). Поскольку целью насей работы являлось изучение влияния пересадки еллогешше 0КПЕ на клеточный состав лимфоидных органов крыс с АН, мы-в качестве контроля сочли необходимым

изучить Елияние на эти показатели инсулина, основного препарата, применяемого в терапии больных СД I типа.

Исследования показали, что на 7 сутки пнсулинотерапил з тимусе выявлялось небольшое количество ретикулярных и плазматических клеток. Число лпмфоблглтов увеличено в 2,2 раза. Количество пролпмфоцл-тоз п лим.рсцтггов в пределах нормы. Число плазматических глоток, лпм-фобластов и прслямфзцитоз оказалось достоверно меньше, а лимфоцитов больше, чем у ливстных с АД, не получавших инсулин. В селезенке отмечалось отсутствие ретикулярных, небольшое число плазматических к.тагск и лимсГобластов. Число проллмфоцитов оказалось з 1,9 раза меии-с, а зрелых ла-.фцитоз з 2,6 раза больше, чем у крыс с АД. От-моча-юсь увеличение числа шелездинх меток, но ве до уровня контроля. В лимфатических узлах обнаруживались ретикулярные клетки, от-сутствушж в контроле и прл АД. Плазматических клеток было меныле, чем в контроле л при АД. Число пролимфоцитов баю меныие, чем в контроле (в 1,6 раза) и у крыс с АД (в 2,2 раза), а зрелых лимфоцитов - больае. Число г.::гело;отых клеток было на уровне контроля, но меньше, чем при АД в 8 раз.

Ка 14 сутки з тимусе отмечалось увеличение числа ретикулярных и плазматических клеток, лимфсбластоз л пролпмфоцитов, уменьшение числа лимфоцитов по сравнения с 7 сутками исследования. Появились миеловдные клетки, отсутствующие з контроле. Число ретикулярных клеток, пролимаоцнтоз было достоверно меньпэ, а лпмфобластов и зрелых лимфоцитов больше, чем у нелечеянш крыс с АД, В селезенке число ретикулярных, плазматических клеток п лшфобластов было на том :.*е уровне, что и у крыс с.ДД. Число праталфецзтоз было меньше в 1,5 раза, а лимфоцитов больше в 1,6 раза, чем у крыс с АД, т.е. эти показатели приближались а норме. !.йелоидных клеток оказалось меньше, чем в контролз и у крыс с АД. В лимфоузлах отмечалось снижение в (в 4,8 раза, чем у крыс с АД) плазматических клеток и лим-фоблгетов до уровня контроля. Количество пралдмфоцнтов и лимфоцитов оказалось несколько больно, а ггаелоиднкх клеток меньше, чем у крыс с АД.

Ка 21 суткл исследовали.! з тимусе уровень рзтикуляряых глоток был нпяе, чем в предыдущий срок, а плазматические и стелоид-н'лз клетки не обнаруживались. Число тг.:5областов оставалось па преанэм уровне, а пролголфоциты были увеличены до 308,3*0,8 при уменьшении числа зрелых лимфоцитов до 180,0-0,5. В селезенке на фене уменьшения по еравнешт с контролем ретикулярных и плазглатп-

ческих клеток отмечалось резкое увеличение лимфобластов, а также пролимфсцитов при уменьшении числа зрелых лимфоцитов и млелоидных клеток. Б мазках лимфатических узлов отмечались отсутствие ретикулярных к млелоидных клеток, резкое снижение числа плазматических (в 3 раза) при резком увеличении лимфобластов (в 21 раз) по сравнению с контролем. Количество пролямфоцитов било увеличено в 1,4 раза при уменьшении зрелых лимфоцитов также в 1,4 раза.

28 сутки исследования в мазках тимуса отмечалось отсутствие ретикулярных, плазматических, мяелоаднкх и' тучных клеток. По сравнений с контролем число лимфобластов было увеличено в 2,9, пролим-фоцлтов - в 6,3 раза, а число зрелых лимфоцитов оказалось меныле в 1,8 раза. В селезенке не обнаруживались ретикулярные и плазматические клетки. По сравнению с контролем' отмечалось снижение числа лимфобластов (в 2 раза) и миелоэдних клеток (в 4 раза). Количество пролпмсГхэцптов и зрелых лимфоцитов приближалось к контрольным значениям. В мазках лимфатических узлов не выявлялись ретикулярные и плазматические клетки, Лимфобластов по сравнению с 21 сутками было з 2,5 раза меньше, но больие значений контроля(в 8,5 раза). Про-лпмфоцктов и зрелых лимфоцитов было примерно столько не,- что и на 21 сутки. число нколопдеых глоток было увеличено по сравнении с контролем почт;: в 12 раз.

В конце эксперимента (60 сутки) в мазках тимуса обнаруживалось неСольаоз количество плазматических (3,2^0,3) и миелоидных (3,6^0,5) при отсутствии ретикулярных клеток. По сравнению с контроле;.! чхсло л::;.:фобластов бито увеличено в 1,7 раза, а пролимфоцп-тоа в 8,7 раза при сшженил зрелых лимфоцитов в 2,8 раза. В селезенке ^-игшялось небольшое количество плазматических клеток (1,70,3) и лпмфобластоз (2,7-0,3) пр:; отсутствии ретикулярных клеток. Зрелых лимфоцитов Сило достоверно меньше, а пролимфоцптов - больше контрольных значений. Ылелондных клеток при сравнении с предыдущим сроком бшю больше в 3,7 раза и их число приближалось к значен^.! контроля. В мазг.ах лимфатических уолов при отсутствии ретикулярных и плазматических клеток отмечалось увеличение числа лимфобластов против контроля в 3,5, млелоидных клеток - в 6,4 раза. Количество пролиыфоцитов и зрелых лимфоцитов приближалось к контрольным данным.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о том, что инсулинотерапия в клеточном составе лимфоидных органов крыс с Ад по сравнению с показателями нелеченных крыс вызывала

сшкение числа ретикулярных, плазматических клеток, молодых форм лимфоидных клеток, увеличение числа зрелых лимфоцитов, тем сами.! оказывая нормализующее влияние на систему иммунитета.

На 7 сутки исследования после трансплантации аллогенных СКШ; в тимусе отмечалось появление ретикулярных (9,6-0,3) и изелоадшх меток (9,3-0,5), отсутствующие з контроле и у крыс с АД. Число плазматических клеток и лимфобластов было на уровне показателей крыс с АЛ, а пролимфоцитов оказалось в 6,1 раза больше, числа зрелых лимфоцитов в 4,4 раза меньше по сравнении с ними. В селезенке по сравнению с показателями крыс с АД отмечалось снижение числа ретикулярных клеток з 8,6, лимфобластов в 8,2, пролпмфзцитов в 1,4 раза, увеличение числа зрелых лимфоцитов в 2 раза, появление плазматически клеток (4,8^0,8). В лимфатически узлах число лимфобластов," пролилйоцитов и зрелых лимфоцитов было примерно на том .те уровне, что и у крыс с АД, а число плазматпческгх меток оказалось в 2 раза бельме, а мпелоиднпх клеток в 4,9 раза меньше, чем у них.

На 14 сутки в мазках т:ьмуса отмечалось исчезновение ретикулярных и повышение уровня тучных меток. По сравнения с показателя:.::: крыс с АЛ отмечалось повышение уроьня меток плазматического ряда в 6,1, лимфобластов в 7,2, миелопдных клеток в 3,6 раза при достоверном снижении уровня пролимфоцитов и зрелых лимфоцитов. В селезенке число ретикулярных меток и пролимфоцитов было на том не'уровне, что и на 7 день, а плазмат:гческнх клеток было узеличе-но в 2,3, лимфобластов - почти в 7, миелоидных меток в 4 раза при уменьшении числа зрелых лимфоцитов почти' в 2 раза. В мазках лимфоузлоз отмечалось резкое нарастание по сравнена с предццу-дим сроком всех меточных элементов, такке при резком сникениц содержания зрелых лжфоцитов (в 3,3 раза).

На 21 сутки исследования в мазках тимуса отмечалось исчезновение плазматических и тучных меток, увеличение числа ретикулярных меток. По сравнении с прэгиудим сроком число лимфобластов было уменьшено в 3, миелондных метек в 4,5 раза при увел;1чен;ш числа пролимфоцитов в 1,3 раза и уменьшении зрелых лимфоцитов таме в 1,3 раза. В селезенке по сравнению с предыдущим сроком отмечалось уменьшение числа ретикулярных в 1,6, плазматических в 6,6, мнелоидных меток в 4, лимфобластов в 3,5 раза при увеличении числа пролтфоцитов в 1»2 и зрелых лимфоцитов в 1,6 раза. В мазках лимфоузлов по сравнению с предыдущим сроком отмечалось

резкое уменьшение числа всех клеточных элементов при увеличении числа зрелых лимфоцитов в 3,3 раза.

Ка 28 сутки в мазках тлмуса не было выявлено ретикулярных и плазматических плеток. По срапнении с •предццурпм сроком отмечалось увеличение числа лимфобластов в 2,4, пролимфсциюв в 1,1,м:10лоцщшх клеток в 2,1 раза пра уменьшении зрелых лимфоцитов в 1,8 раза. В селезенке ретикулярные и плазматические клетки не выявлялись. '1;с~ ло лимфобластов было на уровне,пролимфоцитов достоверно Сель-.:';, зрелых лимфоцитов меныле значеши: контроля: ¡.Иелоидных клеток оказалось в 2 раза больше значений контроля. В лимфоузлах отмечались* появление ретикулярных глето:;, по срашонио с контролем снижение числа плазматических «.-шток в 2,4, зрелых лимфоцитов к 3,3 раза при увеличении числа л::м'.об;:готов ь 5',7, пролимфоцитов в 2,2, а млелоздньп: кекх в 2 раза.

В конца зкепорнмоита, в мазках тимуса ретикулярные и плазматические клетки но ьиалкась, лпмфобластов бато на уровне, пролпм-фоцнтов в 1,4, млзло:^.иы!Х клеток в 1,4 раза меньше, а зрелых лимфоцитов в 3 раза Сольно, чем в продцпуцнй срок исследования. В мазках селезенки ретикулярных глаток но было, отмечалось достовор-ное по сравнения с контрзлам енгаение уровня плазматических клеток, зрелых лимфоцитов к.йислоздшх глоток при уисличошт лт-фзйчас-юп в 1,5, пролима.ецпто:! в 1,4 раза, в лпхроузлах отмечалось появление ретнкулярнхз: моток (Я,СР-0,32), резкое нарастанио по сравнении с контроле;,; всех клеточных элементов при уменьшении зрелых лимфоцитов в 1,5 раза.

Таким образом, исследования показали, что трансплантированные едл^генныз н структуре клеток лимфоидпнх органов крыс с АД вызывает определенный сдвиги, которые выражались л теп/'ршп.'н к их нормализации ол сдвиге на более позднио сроки .характерных дгл АЛ нарушений. Однако здесь необходимо учитывать, что, с одно;': стороны, пересагешшо островковыо мотки выделяют ряд гормонов, ока-зызаащях на кшиуниуа систему.противслологдий оффзкт. Так, если сулин на иммунную скотому оказывает стимулирующий (Г.Д.Билокришв к др., 1984; И.Л.Орлопская и др.,' 1285), то х'лвкагол - пдмуносуп-рессивный эффект, вызывая активации антигонспедафическях Т-сул-рессоров (Н.НЛСеворков и др., 1287, 1990). /> -глотки продуцирует такго Ю1-6, оказывающий костшлулнрувицгп зффокт ка аутореактивные Т- и В-клсткл при аутоиммунном диабета ( СаарЪЛ! оЪ о1. , 1989). С другой стороны, сами пересаженные клотгс;, являнсг. чукеродпим

антигеном, хотя их антигеиность в процессе культивирования in vitro снижается, на иммунную систему могут оказывать стимулнрущий эффекъ Резкое повышение на 14 день после пересадки ОШШ по сравнению с контролем, с показателями леченных и нелеченных инсулином крыс с АД уровня плазматических и мпелоидныХ клеток, а тагсхе лимфобластов' с последующим снижением и относительной стабилизацией гас уровня во всех лимфоцдных органах мелет быть следствием иммунного ответа организма на балластные белки, присутствундиэ в трансплантщуа,ш материале.

Резшлируя полученные данные, мо:*но сказагь, что трансплантированные аллогенные ОКГШ у крыс аллоксаиовым диабетом, вызывая в определенной мере нормализации уровня гликозы в крови, оказывают также влияние на процессы дптсеренцирохж! и пролиферации клеточных элементов в лимфеидных органах, что шляется результатом -сложных взаимоотношений мезду функционирующей /> -клетками и организмом реципиента.

3. Етияние пересадки алло- и ксеногенных ОКПЗ на некоторые показатели системы иммунитета у панкреатзктомпроваиных собак

При исследовании показателен системы иммунитета у панкреатэк-томированных собак, а такте при пересадке им культур ОИШ, полученных от Новорождённых ценят пли ягнят, бшо установлено, что в иммунной системе животных происходят определенные изменения.

Так, содержание лейкоцитов в периферической крови панкреатэк-томированных собак постепенно увеличивалось и к 7 суткам исследования достигало 12,1*1,19 против 7,2*0,57 тыз.кл/мкл исходных данных (Р<0,05). Наблвдалось'снижение относительного (достоверно) и абсолютного количества обаего пула лпг.фцнтоз. Относительное и абсолютов количество Т-клсток на 7 день нселедовазкш было снижено до 25,5*2,03 против 37,2*2,20^ (Р<0,Со) 409*85 против 671*81 кл/мкл (Р<0,05) исходных данных. Относительнее г абсолютное число В-клетоя, напротив, имело тенденция к повцлепшэ, но не в достоверных пределах.

При пересадке аллогенних ОКЕ поккреатэктемнроваяннм собакам уровень лейкоцитов до 35 дня спита колеба-ся на уровне исходных данных, на 60-3 день отмечалось, их достоверное повышение (13,2* 1,42 против 8,4*0,61 ткс.кдЛмкл, Р<0,01>). Относительное и абсолютное содержание лимфоцитов до 7 дня было недостоверно снижено, в дальнейшем отмечалось их повысеиле л эти показатели до 35 дня

включительно колебались в пределах контрольных значений. На 60 день опыта абсолютное, но не относительное количество лимфоцитов оказалось достоверно больсе исходных данных (2942*423 против 1540*162 кл/мкл, Р<0.05).

Относительное и абсолютное содержание Т-клеток в день пересадки оказалось сниженным до 24,8*1,84 против 32,5*3,5$ (Р>0,05) и 314*51 против 528*38 кл/мкл исходных данных (Р40.05). Б последующем эти показатели в течение всего периода наблюдения колебались на уровне исходных данных. Относительное и абсолютное содержание В-клеток в течение первых 3-х дней по сравнении с исходны/ли данными' было недостоверно снижено, в дальнейшем отмечалось их повышение и эти показатели в основном колебались в пределах исходных данных.

Необходимо отметить, что снижение уровня лимфоцитов, Т- В-кле-ток у .подопытных собак, получаших до трансплантации СКПН в течение 10-14 дпеД инсулин, в день пересадки, по-видимому, свидетельствует о неспособности инсулиногерашм поддерживать эти показатели в пределах исходных значений.

При пересадке ксеногенных ОЫШ от ягнят' количество лейкоцитов было на уровне контрольных значений во вое сроки исследования. Относительное и абсолютное содержание лимфоцитов до 7 дня исследования включительно было на уровне исходных данных. Процентное соде1>~ жание лимфоцитов оказалось достоверно повышенным с 14 по 35 день, а их абсолютное ко.личество - с 21 по 35 день. У остальных 4 собак, ввжлшлх длительное время, на 45 день исследования относительное ц абсолг/гное содержание лимфоцитов было в пределах исходных данных.

Относительное л абсолютное содержание Т-клеток во все сроки исследоьиния было больше, чем в контроле, однако достоиернои повышение их абсолютного количества наблюдалось только на 21 и 28 дни эксперимента. Процентное и абсолютное содержание В-клехок во все сроки исследования колебались на уровне исходных значений.

Исследование фагоцитарной реакции показало, что у здоровых собак процент фагоцитирующих нейтрофилов в среднем составлял 55,3 *3,07, а фагоцитарнни индекс, отражающий поглотительную способность подсчитанных клеток - 6,45*0,50. Пересадка ксеногенных ОКПа (ягнят) способствовала нормальному функционированию фагоцитарных клеток. Так, за исключением достоверного снижения процента фагоцитоза и фагоцитарного индекса на 23 день после пересади ОКПЖ, во все остальные сроки эти показатели колебались в пределах исходны:; значений.

При пересадке алло- и ксеногенных ОЫШ происходит постепенное повышение в сыворотке крови реципиентов уровня циркулирующих нммун-ных кошлексов (ЦИК). Так, если у здоровых собак концентрация ЦИК колебалась в пределах 32,6-34,0, то - реципиентов ОШШ ценят - 46,0 ¿4,8 + 53,8±7,5 ед (Р<0,05), а у реципиентов OKIE ягнят - 58,4±5,6 * 73,2*8,5 ед (Р.£0,05). Однако, несмотря на достоверное повышение, уровень ЦИК не достигал высоких цифровых значений и оставался примерно на одинаковом уровне, то есть наблюдалась'стабилизация их концентрации. Надо отметить, что уровень ЦИК у реципиентов 0К1Ш ягнят, чем ценят, был более высоким, однако это различие не носило достоверного характера.

Таким образом, пересадка алло- и ксеногенных 0ХП2 в определенной мере отменяет картину сахарного диабета у подопытных собак. В иммунной- систоме у реципиентов как аллогенных, так и ксеногенных ОШШ набладается тенденцм к нормализации ее работы, что выражалось в отсутствии резких колебаний в уровне лейкоцитов, лимфоцитов, Т- и В-клеток, фагоцитарной активности нейтрофллов и уровня ЦИК. В то 'ле время повышенно уровня изученных показателей иммунной системы в блккайпее время после пересадки (3-14 дни) монет быть связано с утилизацией балластных белков, присутствующих в трансплантируемом материале, а в более поздние сроки - с процессами отторжения ОКПН.

ВЫВОДЫ

• I. Культивированные ln vitro при 37°С в течение 5-10 дней ОКПН плодов человека сроком жизни I6-2S недель, новорожденных щенят, крысят и ягнят сохраняют своя жизнеспособность и гормонпроду-цирущую активность, что было подтверждено электронпомикроскспиче-екпми. и радиоиммунологическими методами исследования.

2. Трансплантации культуры СЮШ животным с экспериментатьным диабетом приводит к удлинении сроков их выживаемости и снижению содержит сахара в крови до уровня, близкого к нормальным значениям. Так, продолжительность ~изни панкреатэктомярованных собак составила 59,8*12,5 и 48,5*4,45 дня при пересадке ОКПН щенят и ягнят соответственно при контроле 7,7*1,73 дня.

3. Диабет, индуцированный аллоксаном,в клеточном составе лим-йсидных органов крыс вызывает качественные и количественные изме-нениягрезкое увеличение числа молодых форм меток лимфоиднего ряда (пролпмфоцитоз и лимфобластов) при невыраженном изменении числа плазматических клеток, что свидетельствует о преимущественной активации клеточных,- чем гуморальных факторов иммунитета.

4. Инсулинотерашш в клеточном репертуаре лимфоидных органов крыс с аллоксановым диабетом вызывает тенденцию к нормализации, что выражалось в увеличении числа зрелш: лимфоцитов при уменьшении молодых форм по сравнению с показателями диабетических крыс.

5. Трансплантированные аллогенные ОКПН на состав клеток лимфоидных органов крыс с аллоксановым диабетом в целом оказывают влияние, направленное на восстановление нормальных их соотношений.

6. Трансплантированные аллогенные (щенят) и ксеногенные (ягнят) ОКНЕ у панкрзатэктомированных собак дательное время поддершвают показатели иммунной системы в пределах, близких к нормальным значения:.!.

7. Полученные результаты явились одним из моментов экспериментального обоснования внедрения пересади! 0КП2 в клиническую практику при лечении больных сахарны:,! диабетом, которые показали перспективность разрабатываемого направления.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Арипов У.А., Уразметов К.Г., Исламов Б.Ф., Мамздалиев Ш.Х., Ахмедова Р.К. Влияние переоодки ксеногенных островковых клеток под-л-.елудочиой келезы на точение экспериментального диабета у собак// Докл.АН УзССР, - 1989. - Jí 7. - С.58-60.

2. Арипов У.А., Уразметов К.Г., Исламов Б.Ф., Надерханов O.P., Мамацалиов Ш.Х., Ахмедова Р.К., Константиноьская A.A., Пан В.Н., рузметоз У.А. Влияние пересадки аллогенных острошсовых клеток поджелудочной келези на течение экспериментального диабета //Мед.курн. Узбекистана. - 1990. - JÍ 3. С.60-63.

3. Арипов У.А., Уразметов К.Г., Исламов Б.Ф., Мамздалиев Ш.Х., Нздерханов O.P., 1ссмедова Р.К., Константиновская A.A., Пан В.К. Пересадка алло- и коекогенных островковых клеток у собак //Тез. докл. Л Всесоюзной научно!'; конф. по трансплантации сердца, печени, почки, поджелудочной г.олезы к др.органон - Львов, 1990. - С. I92-Ï93.

4. Ахмедова Р.К., Константиновская A.A. Функциональная активность островковых клеток подаелудачной аслезц в культуре In vitro и in vivo //Вопросы трансплантации и ишуиокоррекцгш: Сб.науч. тр. - Ташкент, 1991. - C.II-I5.

5. Уразметов К.Г., Ахмедова Р.К.» Исламов Б.Ф., Мамздалиев Ш.Х., Байбеков И.М., Леонов £.В. Морфофункциснальная характеристика культур клеток поджелудочной железы //йедлурн.Узбекистапа. -1992. - Л 8. - С.74-76.

6. Уразметов К.Г., Ахмедова Р.К., УразметоваМ.Д., Абаева Т. А. Влияние инсулинотерапии на состав клеток лпмфопдных органов крыс с аллоксановым диабетом //Актуальные допросы иммунологии и аллергологии: Сб.науч.тр. Т.6. - Ташкент, 1994. - С.246-248.

7. Уразметов К.Г., Ахмедова Р.К., Абаева Т.А. Влияние аллок-санового диабета на клеточный состав лимфоидных органов кркс // Там же. - С.249-251.

8. Уразметов К.Г., Исламов Б.Ф., Ыачадалиез И.X., Ахмедова Р.К., Байбеков И.Н.» Турсунов Х.З. Экспериментальное обоснование пересадки островковых клеток подаедудочной лелезы з лечении сахарного диабета //Мат.1-го конгресса диабетологоз Центр.Азии. - Атма-тн, Т994. - С.26.

9. Арипов У.А., Уразметов К.Г., Уразметова ;,1.Д., Исламов Б. Ф., АриПова З.У., Мамадалиез Ш.Х., Ахмедова Р.К., Гузмзтоза З.А. Лечение больных сахарным диабетом I типа путем тгасплачтацлл островковых клеток поджелудочной келезы: Методические рекомендации.-Ташкент, 1994. - 16 с.

10. Арипов У.А., Уразметов К.Г., Исламов Б.Ф., Уразметова Г,!. Д., Мамадатаев Ы.Х., Ахмедова Р.К., Арипова З.У. Способ лечения инсулинзависимого сахарного диабета // УзР давлат патент идораси. Расмий ахборотнома. - 1993. - 1& I. - С.9-10.

11. Уразметов К.Г., Ахмедова Р.К., Абаева Т.А. Динамика изменений в клеточном составе лимфоидных органов крнс с аллоксановым диабетом при переездке аллогенннх островковых клеток подзелудоч-ной железы //Итоги научных исследований по актуальным вопросам медицинской науки я здравоохранения: Сб.научн.тр. Вяп.З. -Ташкент, < • 1994. - С.25-28.

12. Уразметов К.Г., Ахмедова Р.К., Уразметова М.Д., Исламов Б.Ф., Цамадалиев 11.X. Влияние алло- и ксенотраясплантации островковых клеток поджелудочной яелезы на иммунологические показатели у собак с экспериментальным диабетом //Актуальные вопросы иммунологии и аллерголопш: Сб.науч.тр. Т.7.- Ташкент, 1995. - С.125-128.

Ахмедова Раиса Косимовна

. ТА5РИБАДАГИ КАНДЛИ ДИАЕШИ ЫЕЬДА 0СТ1! БЕЗИНШГ СУНЬЩ УСТИРШ1ГАН СРОЛЧА ХХШРАЛАРИНИ КУЧИРИБ ?ТКАЗУ1ЛГАЦДА ИММУНИТЕТ СИСТЕМАСИГА

ТАЪСИРИ

Илмий текиириинннг ыа^сади - тажрибацаги кандли циабетга плло-ва хсеноген меъда ости бези сролча хукайраларининг (МОБОХ)ишлатили1 ва унинг фаолиятини, хамда морфологик холатини ва ^ларни репиечтла] на иммунологии курсаткичига таъсири In vitro усулиаа урганиб, уни клиник амалиётга татбик этилишини асослаб бериш.

Тажрибалар Vioter насяли калаыушлар ва зотсиз итларда утказилд НОЕОХни сунъий усулда устириш В.Н.Елшкин ва боскалар(19В5)буйича бажарилди.

Траисплантациян сунг реципиентлар умрининг сезилапли даражада узайиши курсатилган, концагя канц микпорининг каыайиши vitro * латда сунъий усулда 5-10 кун мобайнида одам хомиласи ва хайвонлер (янги тугилган кучук, каламуп.кузичок) ЦОЕОХи узининр морфологик т, зилииини ва ropi/oH ишлаб чик.арис; холатини етарлича ях&и сакланима дир.

Аллоксанли диабет САД)каламусларда лимфоип. аъзоларидаги хукайр лар таркибида ёш иаклларни купайтириб, балогатга етган лимфоид ху-жайраларни камчйтиради, Су оса хукайра иммунитет факторларининг фа данивииак далолат берааи.

А Дли калиму::л(.'.рни инсулин Силан ианоланганда лимфоиц аъзолар и фаолиялинннг мссрлани^и кузатилади: балогатга етган лимфоид хужайр лар сс> • купайили, даволанмаган АДли колпмуаларга нисбатпн ёа шпкл паги лимфоиа хужайрялярнинг кампйнии ^узатилади.

АДли коламуилырга МОБОУни кучириб утказилганиаа лимфоид аъоола даги хужойралар таркибининг инсулин билан даволенган ёки АДда учра циган узгарииларнинг меёрланияи (нор мал холатга тушили), АДга хос Сулган узгаримар вул'унга келишини анча узок муцдатга езурилиши куз тилади.

Меъда остИ бези олиб таиаиган итларга алло- ва ксенотрансплан тация килинганда иммунитет системаси курсаткичлари (лейкоцит, лимфоцит, Т- за В-хужайрал&р, фагоцитар хужайралар *ампа кснда айланн юруичи иммунокомплекслар мицдори) меёрий холатпа саклани^ига ёрдам беради.

Олинган натижалар МОБОХни кучириб утказии усулини ичоулянга бо лик капели диабетли беморлерни даволулга татбик, отканинг асосл ар tifian бири булди.

- 21 -

Akhrsedovk .iaiss Kasysovna

Influence of cultured pancreatic islet cells (PIC) trsnc-

plantnticn on inanity la diabetes -ellitus in *s::irin3r.6

It is the purpoae of the invecti.-ntion to sufcrs tantinte the

introduction of ?1C transplantation in clir.ical prsctico on the basin of study of aorphologlcol and functional charocteris-tic of silo- and xcnor;enic PIC in vitro and their influence on ira. ;unity of cninalg with experimental diobeteo. ¿xporir-ento wore perforsad in rat3 .Vistar and outbreed do^a. Cultivation of PIC wbb carried out according to the method of V.ri.ElvinAin et al. (1985).

It .van established that husan and oninal (puppies, rots, l&afcs) PIC rasintain their morphological structure and horeone producing activity during cultivation in vitro for 5-^0 days, '¿hair trcnaplantation causes decrease of su-Qr level in recipient-blood and significantly prolor.rre duration of their life.

Alloxan diabetes (AD) incre&oec the nuaber of /our;- sr.d decreases ths nunfcer of ture lymphoid cells ir. l.-.iphoid or^ana (thymus, oplesc lyaph nodes) of rata indicating to prinary scti-vr.tion of cellular inr.une factors.

. Insulin thercpy results in tendency to norr-alim tion of cellular content of l.Tiph^id or(~ar.s: ou^en ta tion of tae r.ur.'cer of .intiira forca and decrezae of ths ¿lumber of yoims ones of lyaph:id colic iin conparison with indices of r'. tc v.'ith A3/.

-1C trmsplontntion to rata "it!i AD induccs tno -pro e^rrecoed tendency to normalization of cellular elements roir. tiano in lymphoid or^ana than in rate with AO or /.1th AD, treated vith ir.su-lin therapy. PIC trcncplsntatioa put3 off the development of disturb-?, nces typicrl of AD.

Alio- and xenotransplantation of ?IC caltare in do.^s witn pnr.creasecto.T.y contribute to supporting the iEiunolojical indices (level of circulating inrr.une co.T.plexos, phagocytes, leukocyteo, lynphocyteo, 1- and ¿-colls) wit Sin the r^n~o clcce to norml vnluet;.

The obtained date havo been served es one of tha ro:r.on3 for tho introduction of PIO trnnBpir.ntrtion in the trsntxent of patient with insulindere.-.dent diaboteo tnellitua.