Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние пектиновых веществ на биохимические процессы детоксикации при химической патологии печени

гг. од

МОСКАЛЕНКО Сергей Владимирович

ВЛИЯНИЕ ПЕКТИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ НА БИОХИМИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ ДЕТОКСИКАЦИИ ПРИ ХИМИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИИ ПЕЧЕНИ

14.00.25 — ФАРМАКОЛОГИЯ

А ВТО РЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ПЯТИГОРСК — 1996

од

МОСКАЛЕНКО Сергей Владимирович

ВЛИЯНИЕ ПЕКТИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ НА БИОХИМИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ ДЕТОКСИКАЦИИ ПРИ ХИМИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИИ ПЕЧЕНИ

14.00.25 — ФАРМАКОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ПЯТИГОРСК— 1996

МОСКАЛЕНКО Сергей Владимирович

ВЛИЯНИЕ ПЕКТИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ НА БИОХИМИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ ДЕТОКСИКАЦИИ ПРИ ХИМИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИИ ПЕЧЕНИ

14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

Пятигорск - 1996

Работа выполнена в Пятигорской государственной фармацевтической академии.

Научный руководитель - доктор медицинских наук,

профессор Василенко Ю.К.

Научный консультант - доктор фармацевтических наук,

профессор Степанова Э.Ф.

Официальные оппоненты - доктор медицинских наук,

профессор Гаевый М.Д.

доктор фармацевтических наук, профессор Молчанов Г.И.

Ведущая организация Научно-исследовательский институт

фармакологии РАМН

О 00

Защита состоится " 0,8 " ¡¿ЮН.9 1996 года в у часов на заседании диссертационного совета К 084.45.01 при Пятигорской государственной фармацевтической академии (357533, г.Пятигорск, пр.Калинина, 11).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорской государственной фармацевтической академии.

Автореферат разослан " 1996 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических

наук о^^пш^^ Гутенёва Г.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Изучение закономерностей формирования адаптационных и компенсаторных процессов при химической интоксикации, являющейся общебиологической проблемой в условиях участившихся экологических катастроф, представляется в настоящее время особенно актуальным.

Существенная роль в ускорении формирования этих процессов может принадлежать различным биологически активным соединениям растительного происхождения и, в частности, пектиновым веществам, которые пока ещё недостаточно изучены как в химическом, так и в биологическом отношении.

Лечебно-профилактическое действие пектинов объясняют, в основном, их комплексообразующими (адсорбционными) свойствами, которые и обусловливают применение пектиновых веществ для связывания и выведения из организма токсинов, тяжёлых металлов, радионуклидов, а также для пролонгирования действия различных лекарственных соединений.

В литературе упоминается о возможности применения пектинов в качестве крове- и плазмозаменителей (Абаева Р.Ш., 1985), но отсутствуют данные о возможности применения растворов пектинов в качестве детоксикантов при введении в сосудистое русло.

Пектины используют для лечения диспепсий, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, хронических колитов, применяют в качестве плазмозаменителя, антикоагулянта, гемостатическо-го средства, для снижения в крови уровня глюкозы и холестерина (З.Ш.Ашубаева и соавт., 1989; Л.В.Донченко и соавт., 1992; Т.И.Костюченко и соавт., 1992; В.Л.Рывкин, 1986; Б.В.Киркин и соавт., 1986). Однако лечебно-профилактическое применение пектинов нуждается в серьёзном экспериментальном и клиническом обосновании как в силу значительного разнообразия строения и свойств пектинов из различных растительных источников, так и в связи со слабой изученностью патогенетических механизмов лечебного действия пек-

тинов. Существенным недочётом в существующих знаниях о лечебно-профилактическом действии пектиновых веществ следует признать отсутствие сведений о характере изменений в функциональном состоянии печени при приёме пектинов, что недопустимо, учитывая роль печени в обезвреживании токсических веществ.

Ряд авторов (Спиридонов В.Н. и соавт., 1992; Максютина Н.П. и соавт., 1992; Исакова Т.И., 1980; Васина Т.М., 1993; Горин А.Г. и соавт.,1985) указывают на возможность "облагораживания" лекарственных препаратов с помощью пектина: сникать их токсичность и пролонгировать эффект. В то же время в известных способах снижения токсичности широко применяемого препарата парацетамола, имеющих очевидные недостатки, до сих пор не используются эти свойства пектинов(лекарственные препараты зарубежных фирм в России 1993; патент N 4307073).

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.Целью работы является:выявить особенности биохимических реакций при применении пектинов при токсическом поражении печени и на основании этого сформировать представление о целесообразности их применения в качестве гепатозащит-ного средства, а также обосновать эффективность использования пектинов для снижения гепатотоксичности официнальных препаратов.

Для решения поставленной цели в работе определены следующие задачи:

1. Выявить в опытах in vitro и in vivo способность пектинов сорбировать эндогенные вещества.

2. Изучить влияние пектинов в условиях токсического поражения печени-четырёххлористым углеродом на биохимические показатели, характеризующие функциональное состояние печени: активность ала-нинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, билирубина, триглицери-дов и холестерина, а также на гисто-морфологическую картину печени.

3.Установить некоторые стороны механизма действия пектинов: влияние на активность микросомальных монооксигеназ эндоплазмати-

ческой сети гепатоцитов, антиоксидантные и мембраностабилизирую-щие свойства пектинов, влияние пектинов на всасывание и поступление в ткани печени четырёххлористого углерода.

4. Изучить влияние совместного ведения пектина свекловичного с парацетамолом на острую токсичность и гепатотоксичность последнего.

5. Предложить состав и технологию лекарственных форм парацетамола с пектином свекловичным и изучить их основные технологические, биофармацевтические и фармакологические свойства.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые изучена в опытах in vitro и in vivo сорбционная способность различных пектинов по отношению к эндогенным веществам (аминокислотам, азотсодержащим небелковым веществам, белкам). Установлено, что сорбционная активность прямо пропорциональна количеству свободных карбоксильных групп в молекуле пектинов. Впервые изучена гепатозащитная активность пектинов по биохимическим и гисто-морфологическим показателям. Установлена зависимость степени гепатозащитного действия от степени зтерифи-кации и молекулярной массы пектинов.

Выявлены некоторые новые стороны в механизме действия пектинов: индуцирующее влияние на микросомальные монооксигеназы и способность оказывать антиоксидантное действие наряду со связыванием гепатотоксического вещества.

Выявлена способность пектина свекловичного при совместном введении снижать острую токсичность и гепатотоксичность парацетамола. Предложены лекарственные формы парацетамола с пектином (микрокапсулы и сироп) и доказаны экспериментально их пониженная гепатотоксичность и пролонгированность действия.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.Полученные результаты исследования являются экспериментальным обоснованием для применения пектиновых веществ при "химической патологии", сопровождающейся поражением печени.

Полученные результаты экспериментов позволяют предложить IX

раствор пектина свекловичного в качестве гемосорбента при интоксикации для дальнейших исследований.

Лекарственные формы сироп парацетамола с пектином и микрокапсулы парацетамола с пектином могут быть предложены для дальнейшего внедрения и использования.

РЕЗУЛЬТАТЫ ВНЕДРЕНИЯ. Разработанный способ снижения токсичности парацетамола находится на рассмотрении во ВНИИГПЭ (Всероссийском научно-исследовательском институте государственной патентной экспертизы) по заявке на изобретение N 95101240/14 (001960).

Результаты исследований используются в практической деятельности клиники Государственного научно-исследовательского института курортологии в процессе реабилитации детей из зон экологических катастроф, а также в научно-исследовательских работах кафедр технологии лекарств Пятигорской и Пермской государственных фармацевтических академий при разработке новых лекарственных форм, на что получены акты о внедрении.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫДВИГАЕМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Пектиновые вещества (пектин свекловичный, пектин и протопектин изревеня) способны к энтеросорбции, связывают азотсодержащие небелковые вещества и белки сыворотки крови, а также ферментные белки.

Сорбирующая способность пектинов увеличивается с увеличением количества свободных карбоксильных групп в молекуле пектина.

2. Пектиновые вещества обладают гепатозащитной активностью, степень проявления которой зависит от уровня этерификации и молекулярной массы пектинов.

3. В механизме гепатозащитного действия пектинов существенную роль играет способность пектинов к сорбции токсических веществ, к индукции микросомальных монооксигеназ гепатоцитов и антиоксидант-ной активности.

4. Совместное введение пектина свекловичного с парацетамолом

снижает острую токсичность и гепатотоксичность последнего.

5. Разработанные лекарственные формы парацетамола с пектином свекловичным(сироп и микрокапсулы) позволяют снизить гепатотоксичность парацетамола и обеспечить пролонгированность его действия.

6. Пектин свекловичный подавляет пероксидный гемолиз эритроцитов, что позволяет предложить для дальнейшего изучения его применение при интоксикации гемолитическими ядами.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертационной работы доложены: на 1-й научной конференции молодых учёных и студентов Ставропольского края в г.Ставрополе (Ставрополь, 1994 г.), на международном симпозиуме "Эндогенные интоксикации" в г.Санкт-Пе-тербурге (Санкт-Петербург, 1994), на 49-й региональной конференции по фармации и фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1994), на 50-й региональной конференции по фармации и фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1995).

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 5 работ.

СТРУКТУРА И ОБЪЁМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа изложена на 143 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (4 главы), обсуждения результатов, общих выводов и списка литературы. В тексте диссертации содержится И рисунков и 27 таблиц. Список цитируемой литературы содержит 112 литературных источников, 21 из которых принадлежат зарубежным авторам.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследований

Работа выполнена на 422 белых беспородных крысах-самцах весом 180-250 г, содержавшихся в виварии в обычных условиях. Часть опытов проведена с использованием человеческой сыворотки крови. В части опытов применялись растворы аминокислот.

В качестве исследуемых веществ использовались пектин и протопектин из ревеня огородного, пектин свекловичный. Пектин и прото-

пектин из надземной части ревеня огородного получены на кафедре неорганической химии Пятигорской государственной фармацевтической академии, а пектин свекловичный - на Краснодарской кондитерской фабрике. В ряде экспериментов взята субстанция парацетамола серии 90 91 93, полученная на Томском химфармэаводе.

Определение сорбционной способности пектиновых веществ по отношению к эндогенным веществам проводили in vitro путём определения в сыворотке крови изменения содержания аминоазота, остаточного азота и общего белка (Колб В.Г., Камышников B.C., 1982; ГФ-Х1) после добавления растворов пектинов в соотношении пектин-сыворотка 1:10. Дополнительно изучали изменение концентрации аминокислот («-аланина и глицина) в их растворах под влиянием пектина свекловичного, а также влияние пектина на активность ферментного белка - трипсина (ГФ-Х). Сорбционную способность пектина свекловичного изучали такие in vivo путём определения изменения содержания аминоазота, остаточного азота и изменения активности фермента - аланинаминотрансферазы после внутривенного введения 1% раствора пектина свекловичного в дозе 0,4 мл/100 г массы тела животного.

Изучение сорбционных свойств пектина свекловичного по отношению к экзогенным токсическим веществам изучаюсь in vivo. Контрольной группе животных вводили однократно четырёххлористый углерод в дозе 0,3 мл/100 г в виде 50% масляного раствора per os, опытной - предварительно (за час) per os пектин свекловичный 200 мг/кг. Животных забивали декапитацией, в крови и ткани печени определяли содержание CCI4 с помощью газожидкостной хроматографии (Мирука П., Бриж М., 1978).

Гепатопротекторное действие пектинов изучалось на белых крысах массой 180-200 г с экспериментальным токсическим гепатитом, индуцированном ССЦ. Крысам перорально вводили пектин ревенный, протопектин ревенный или пектин свекловичный в дозе 200 мг/кг в течение двух недель. На второй неделе введения животные получали

перорально четырёххлористый углерод в виде 50% раствора в вазелиновом масле в дозе 0,3 мл/100 г троекратно через день параллельно с введением пектиновых веществ. Крыс после 12-14 часов лишения корма забивали декапитацией и забирали кровь для биохимического анализа. Для оценки поражения печени использовали биохимические показатели, широко применяемые в клинической практике для диагностики заболеваний печени: активность аланинаминотрансферазы в сыворотке крови по методу Рейтмана и Френкеля (1957), активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови по методу Еоданского (1960), содержание общего билирубина в сыворотке крови (Лукьянов Л.Т.,' 1967), содержанке холестерина в сыворотке крови по методу Илька. (1960) и триглицеридов по методу Готфрида и Розенберга (1973) в сыворотке крови и печени. У части животных состояние печени исследовалось гисго-морфологически с использованием методов окраски: суданом-III, ШИК-реакции, гематоксилин-эозином. Определяли количество жировых клеток в поле зрения и характер жировой инфильтрации печени по Серову В.В. и Лапиш К. (1989). Характер распределения и накопления гликогена в печени оценивали в каждом гепатоците в поле зрения полуколичественным методом в баллах (Райхлин Н.Т., Романенко A.M., Опперман А., 1977).

Влияние пектина свекловичного (в дозе 200 мг/кг) на активность монооксигеназ эндоплазматической сети гепатоцитов исследовали по выведению метаболитов амидопирина (Строев Е.А., Макарова В.Г., 1986).

Дополнительно о влиянии пектинов на монооксигеназы печени судили по функциональному тесту - длительности пентабарбиталового сна (Гацура В.В., 1974). За сутки до введения пентабарбитала животным перорально вводили пектины в дозах 200 и 500 мг/кг.

Интенсивность аскорбатзависимого перекисного окисления липи-дов (ПОЛ) определяли как описано Владимировым Ю.А. и Арчако-вым А.И. (1972) в постъядерной фракции гомогенатов печени с экзогенным Fe2+. Постъядерную фракцию гомогенатов печени (ПСН1) полу-

чали по Лемешко В.В. (1981). Об интенсивности ПОЛ судили по скорости накопления малонового диальдегида (МЦА), определяемого с помощью тиобарбитуровой кислоты (ТБК) по методу Ohkawa et all. (1979). Исследуемые пектины вносились в среду в конечных концентрациях 500 и 1000 мкг/мл. Белок определяли по методу Лоури в модификации Миллера (1974). Антиоксидантные свойства пектина свекловичного дополнительно изучались по модели пероксидного гемолиза эритроцитов крыс (Огурцов Ю.А., Гаджиибрагимов Б.М., 1992).

Острую токсичность парацетамола изучали на белых крысах массой 180-200 г изучали по методу Кернберга (Беленький М.Л., 1963) без и в сочетании с пектином свекловичным (в соотношении пектин-парацетамол 1:4). Рассчитывали LDso для обеих групп.

Для исследования влияния пектина свекловичного на гепатоток-сичность парацетамола проводились опыты с различными лекарственными формами парацетамола, включавшими пектин свекловичный, в опытах на интактных животных и с токсическим гепатитом, индуцированным четырёххлористым углеродом. О состоянии печени судили путём определения в сыворотке крови аланинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы и билирубина указанными выше методами.

Гепатотоксичность суспензии парацетамола, сиропа и микрокапсул парацетамола с пектином исследовали на белых крысах путём измерения ректальной' температуры через 1, 2, 3, 4 и 5 часов после внутрибрюшинного введения пирогенала в дозе 1000 МДП. За 30 минут до введения пирогенала крысам вводилась суспензия парацетамола (контроль) или микрокапсулы парацетамола с пектином (в дозе 640 мг/кг по парацетамолу).

Лекарственные формы парацетамола с пектином (сироп и микрокапсулы) и методы их технологических и биофармацевтических исследований выполнялись согласно ГФ-Х, ГФ-XI изданий и методикам, разработанным на кафедре технологии лекарств ПГФА (Муравьёв И.А. и соавт., 1983).

Цифровые результаты опытов обрабатывались методами вариацион-

ной статистики (Беленький М.П., 1963) с использованием коэффициента распределения Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Наши исследования показали, что пектины способны к сорбции эндогенных веществ. Так, пектин свекловичный в виде 1% раствора в соотношении с сывороткой крови 1:10 связывал общий аминный азот на 50% (р<0,01), тогда как пектин ревенный и протопектин ревенный не оказывали заметного действия. Эти данные говорят о том, что пектин с высокой степенью содержания свободных карбоксильных групп, каковым является пектин свекловичный, обладает более выраженной сорбционной способностью по отношению к аминокислотам. Связывались преимущественно аминокислоты с неполярными радикалами: в опытах in vitro с растворами аминокислот в присутствии пектина концентрация «-аланина снизилась на 43,0% (р<0,05), тогда как концентрация глицина - на 23,2% (р<0,05). Подтверждением этих наблюдений послужили последующие опыты, где добавление 1% раствора пектина свекловичного уменьшало концентрацию остаточного азота в пробах интактной сыворотки крови на 50% по сравнению с контролем (р<0,01). Пектины также связывали общий белок сыворотки крови. Наиболее сильный сорбирующий эффект оказывал пектин свекловичный (концентрация белка в сыворотке крови снижалась на 23,1% (р<0,05), тогда как пектин и протопектин ревенный снижали концентрацию белка сыворотки крови статистически недостоверно.

О возможности пектинов связывать и ферментные белки и, тем самым ингибировать их активность, свидетельствовали опыты in vitro с определением активности трипсина: при введении в реакционную среду пектина свекловичного активность фермента понизилась на 38,6% (р<0,05).

Результаты опытов in vitro получили подтверждение в опытах in vivo на белых крысах: через сутки после введения 1% раствора пектина свекловичного концентрация аминоазота снизилась на 42,9% (р<0,001), остаточного азота - на 27,6% (р<0,05), активность

аланинаминотрансферазы - на 19,5% (р<0,05).

Проведённые исследования по сорбции эндогенных веществ позволяют полагать, что 1% раствор пектинов с высокой степенью содержания свободных карбоксильных групп, обладающих высоким уровнем сорбции (в нашем случае - пектин свекловичный), может быть использован для дальнейших исследований в качестве гемосорбента. Перспективность таких исследований очевидна, учитывая имеющиеся данные о внутривенном применении 1% раствора пектинов в качестве крове- и плазмозаменителей (Ашубаева З.Ж. и соавт.,1989).

Поскольку из исследованных пектинов наибольшую сорбционную активность проявил пектин свекловичный, можно было предположить, что именно этот пектин проявит высокую эффективность при токсическом поражении печени крыс четырёххлористым углеродом. Применение в этих условиях пектина свекловичного показало (таблица 1), что наиболее заметно в сыворотке крови снизились повышенные при гепатите активность щелочной фосфатазы (на 23,7%, р<0,05) и концентрация билирубина (на 56,0%, р<0,05) без существенного снижения активности аланинаминотрансферазы. В печени животных при гисто-морфологическом исследовании отмечалось уменьшение количества жировых клеток по сравнению с картиной у животных, не получавших пектин (контроль), отсутствовала жировая дистрофия в области светлых гепатоцитов и увеличивалось содержание гликогена в гепатоцитах, а также снижалось содержание триглицеридов в ткани печени на 16,5% (р>0,05). Всё это свидетельствовало о благоприятном влиянии пектина свекловичного на животных с экспериментальным гепатитом.

Как показали наши исследования с использованием газожидкостной хроматографии, важнейшим элементом гепатозащитного действия пектина свекловичного служило снижение содержания четырёххлорис-того углерода в крови и печени затравленных животных.По-видимому, способность к сорбции этого неполярного органического токсического агента являлась в условиях опыта ведущим механизмом антитокси-

ческого действия пектина.

В гепатозащитном действии пектина свекловичного определённую роль играла способность пектина индуцировать микросомальные моно-оксигеназы. Об этом свидетельствовали как результаты функциональной пробы - уменьшение продолжительности пентабарбиталового сна (на 64,8%, р<0,05), так и результаты амидопиринового теста (повышение относительной активности микросомальных монооксигеназ эн-доплазматического ретикулума гепатоцитов на 84,4%, р<0,01).

Значение антиоксидантного звена в механизме действия пектина свекловичного оказалось менее отчётливым. Изучение влияния пектина свекловичного на образование ТБК-активных продуктов в печени не выявило чёткой закономерности. Более определённые результаты были получены в опытах по изучению влияния пектина свекловичного на перекисный гемолиз эритроцитов. Согласно Y.Mizushima, S.Sokai and M.Yamaura (1970) постановка таких опытов позволяет судить как об антиоксидантном, так и о мембраностабилизирующем действии веществ. Пектин свекловичный в концентрации 1% снижал активность гемолиза на 49,5%. (р<0,05). Этот эффект понижался с понижением концентрации раствора пектина и исчезал при концентрации 0,125%. Полученные результаты свидетельствуют о способности пектина свекловичного в концентрациях, используемых при внутривенном введении пектинов в качестве плазмозаменителей (Абаева Р.Ш., 1985), тормозить пероксидный гемолиз и сказывать меыбраностабилизирующее действие. Эти дачные не только расширяют понимание механизма ге-патопротекторного действия пектина свекловичного, но и заслуживают внимания при разработке способов внутривенного применения пектинов в случаях интоксикаций гемолитическими агентами и при патологических состояниях, сопровождающихся гемолизом.

Столкнувшись с фактом сравнительно слабого гепатозащитного действия пектина свекловичного, обладавшего среди исследованных пектинов наибольшей сорбционной активностью,нельзя было не проследить за гепатозащитной активностью других пектиновых веществ -

пектина и протопектина из ревеня, отличавшихся отсутствием сорб-ционной способности по отношению к эндогенным веществам, значительно меньшей молекулярной массой и высокой степенью этерифика-ции. Оказалось, что эти вещества более эффективны как гепатопро-текторные средства (таблица 1). При этом наибольшую активность проявил протопектин и ревеня, имевший наименьшую молекулярную массу и наиболее высокую степень этерификации: активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови снизилась на 45,4% (р<0,01), а аланинаминотрансферазы - на 50,0% (р<0,05). Несколько меньшую активность проявил пектин ревенный, понизивший активность щелочной фосфатазы на 21,8% (р<0,05), а аланинаминотрансферазы - на 40,1% (1X0,05).

Поскольку уровень активности в крови щелочной фосфатазы и аланинаминотрансферазы рассматривался как показатели холестаза и цитолиза в печени (Логинов A.C. и соавт., 1990), можно прийти к заключению, что высокоэтерифицированным, низкомолекулярным пектинам свойственно благоприятно влиять на процессы холестаза и цитолиза в условиях токсического поражения печени.

Одновременно указанные пектиновые вещества у животных с токсическим гепатитом, как показали опыты, оказывают нормализующее влияние на показатели липидного обмена, существенно снижая содержание холестерина и триглицеридов в сыворотке крови: соответственно на 25,4% (р<0,05) и 36,5% (р<0,01) при введении пектина и на 35,4% (р<0,01) и 37,5% (р<0,01) при введении протопектина из ревеня, согласующиеся с наблюдениями Libermeister Hu Toluipur Н. (1980) о гипохолестеринемическом действии пектинов.

Отчётливый гепатозащитный эффект пектиновых веществ из ревеня, по-видимому, следует объяснить их значительно более заметным, по сравнению с пектином свекловичным, антиоксидантными свойствами, выразившимся в снижении уровня накопления ТБК-активных продуктов в постъядерной фракции гепатоцитов при введении пектина из ревеня на 38,5% (р<0,05), а также индуцирующим воздействием на

Таблица 1

Гепатопротекторные свойства пектинов

- группа животных АлТ крови (ммоль/ч.л.) ЩФ крови (ммоль/ч.л.) Холестерин крови (ммоль/л) Общий билирубин крови (ммоль/л) Триглицериды крови (ммоль/л) Триглицериды печени (мг/г сухой ткани)

М±ш,р,% изменения к конт. М±т,р,Х изменения к КОНТ. М±т,р,% изменения к конт. М±т,рД изменения к конт. М±ш,рД изменения к конт. М±ш,рД изменения к конт.

N1 0,41±0,028 1,60±0,16 1,19±0,1 12,5±0,96 0,8±0,11 -

N2 1,20+0,076 5,64+0,23 2,12+0,15 - 2,0±0,18 -

N3 0,78±0,026 р<0,001 -40,1 4,41±0,41 р<0,05 -21,8 1,58+0,20 р<0,05 -25,4 1,25+0,12 р<0,01 -37,0 -

N4 0,60+0,053 р<0,001 -50,0 3,08+0,71 р<0,01 -45,4 1,37+0,09 р<0,01 -35,9 1,27±0,04 р<0,01 -35,8 _

N5 2,27+0,18 11,19±1,1 - 28,6+3,5 - 5,08±0,29

N6 2,4.7+0,27 р<0,05 +8,8 8,53+1,1 р<0,05 -23,7 - 11,31+1,5 р<0,01 -54,2 - 4,24±0,38 р<0,05 -16,5

Примечание: N1 - интактные животные (норма), п=9; N2 - животные с гепатитом (контроль), п=8; N3 - животные с гепатитом, получавшие пектин из ревеня, п=9; N4 - животные с гепатитом, получавшие протопектин, п=8; N5 - животные с гепатитом (контроль к опытам с пектином свекловичным,

проведённых в другой временной период, п=8); N6 - животные с гепатитом, получавшие пектин свекловичный, п=10; п - число животных; р- достоверность различий по сравнению с контролем; АлТ - аланинаминотрансфераза; ЩФ - щелочная фосфатаза.

микросомальные монооксигеназы, выразившимися в снижении продолжительности пентабарбиталового сна на 64,8% (р<0,05) при пектине и на 48,9% (р<0,05) при протопектине из ревеня.

Таким образом, проведённые исследования показали, что что в отличие от пектина свекловичного, гепатопротекторное действие которого, в основном, связано с сорбционной активностью, гепатопро-текторная активность пектина и протопектина из ревеня, в основном связана с их антиоксидантными свойствами и способностью индуцировать микросомальные монооксигеназы печени. Характерные физико-химические свойства пектинов позволили использовать их в качестве вспомогательных веществ в лекарственных формах для снижения токсичности препаратов и повышения пролонгированное™ их действия (Компанцев В.А., 1993; Горин А.Г., 1985). Учитывая эти качества пектинов, была предпринята попытка улучшить фармакологические свойства парацетамола - препарата, широко применяемого, но обладающего побочными действиями (в частности, гепатотоксич-ностью) путём введения в его лекарственную форму пектина. Высокая сорбционная способность пектина свекловичного обусловила выбор его, как потенциально способного замедлить высвобождение парацетамола из лекарственной формы, снизить токсичность и повысить пролонгированность действия.

Проведённые исследования показали, что при сочетанном применении парацетамола с пектином свекловичным существенно снижается его токсичность (Шбо возросла в 1,4 раза по сравнению с приёмом чистого парацетамола). Эти результаты указывали на перспективность использования пектина свекловичного для разработки соответствующих лекарственных форм парацетамола.

Нами предложены составы и технология лекарственных форм парацетамола с пектином: сироп и микрокапсулы. Проведённые технологические исследования показали, что сироп парацетамола с пектином достаточно стабилен и без изменений может храниться в течение длительного времени.

Исследованы технологические свойства микрокапсул и составлена их технологическая схема. Биофармацевтические исследования показали, что по сравнению с таблетками парацетамола из микрокапсул происходит более медленное и плавное высвобождение субстанции. Это позволяет сделать вывод о пролонгации эффекта данной лекарственной формы. Пролонгированность действия микрокапсул получила подтверждение в опытах с измерением температуры тела животных, получавших пирогенал параллельно с суспензией парацетамола и микрокапсулами парацетамола с пектином. Микрокапсулы давали пролонгированный эффект, выразившийся в более плавном и длительном снижении температуры тела по сравнению с действием собственно парацетамола.

Полученные лекарственные формы оказались менее гепатотоксич-ными, чем суспензия парацетамола. При сравнительной оценке гепа-тотоксичности было установлено, что при однократном введении микрокапсул парацетамола с пектином явления холестаза были менее выражены, о чём свидетельствовало снижение активности щелочной фосфатазы на 12,6% (р<0,05) по сравнению с показателями опытов при введении суспензии парацетамола. Аналогичный эффект оказал сироп парацетамола с пектином: активность щелочной фосфатазы снизилась на 24,4% (р<0,05). Одновременно с явлением холестаза существенно уменьшался цитолиз, о чём свидетельствовало снижение активности аланинаминотрансферазы в крови: на 12,1% (р<0,05) при введении сиропа парацетамола и на 46,8% (р<0,001) при введении микрокапсул парацетамола с пектином.

Парацетамол - препарат симптоматической терапии. Зачастую возникает необходимость в его приёме у больных с печёночной патологией. Проведённая сравнительная оценка гепатотоксичности сиропа парацетамола с пектином и суспензии парацетамола показала, что на фоне токсического гепатита сироп обладал меньшим повреждающим действием на печень, чем чистый парацетамол. Это выразилось в снижении цитолиза (активность аланинаминотрансферазы была ниже на

19,2%, р<0,05) и холестаза (концентрация билирубина была меньше на 25,9%, р<0,05) по сравнению с опытом, где вводилась суспензия собственно парацетамола.

По наблюдениям Венгеровского А.И., Саратикова A.C. (1991), Шехтер О.Б. и Мойкина Д.Ю. (1994) парацетамол в печени животных и человека подвергается конъюгации с серной и глюкуроновой кислотами примерно на 60%. Лишь небольшая часть молекул парацетамола преобразуется в цитохром Р-450 - зависимыми оксидазами эндоплаз-матического ретикулума гепатоцитов в гепатотоксичный метаболит N-ацетат-п-бенахинонимин. Сам же парацетамол индуцирует перекис-ное окисление липидов. Сопоставляя эти наблюдения с экспериментальными данными, полученными по снижению токсичности парацетамола путём сочетания его в лекарственных формах с пектином свекловичным, можно полагать, что снижение токсичности парацетамола обуславливается сорбционным и антиоксидантным действием пектина свекловичного.

Изучение влияния пектинов на ряд биохимических показателей, позволившее установить их антитоксические свойства при химической патологии печени и разработке состава и технологии лекарственных форм парацетамола с пектинами, обладающих пониженной токсичностью, дают основание рекомендовать более активно использовать пектины для снижения различных видов интоксикаций и для создания лекарственных форм с пониженной токсичностью.

ВЫВОДЫ

1. Пектины обладают сорбционной способностью по отношению к эндогенным веществам. Уровень их сорбционной активности определяется содержанием свободных карбоксильных групп в молекуле пектина.

2. Пектины оказывают гепатопротекторное действие, причём степень гепатопротекторной активность прямо пропорциональна степени этерификации и обратно пропорциональна молекулярной массе пектинов.

3. В механизме гепатопротекторного действия пектинов сущест-

венную роль играет их способность сорбировать гепатотоксические вещества, индуцировать микросомашьные монооксигеназы печени и оказывать антиоксидантное действие.

4. Совместное введение пектина свекловичного с парацетамолом снижается токсичность последнего.

5. Разработанные лекарственные формы парацетамола с пектином свекловичным - сироп и микрокапсулы технологичны и обладают меньшей гепатотоксичностью, чем сам парацетамол.

6. Микрокапсулы парацетамола с пектином свекловичным обладают пролонгированным действием по сравнению с чистым парацетамолом.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Василенко Ю.К., Москаленко C.B., Фролова Л.М. Исследование антитоксических свойств пектинов. Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (49; 1994, Пятигорск): Материалы...- Пятигорск, 1994.- С.137.

2. Василенко Ю.К., Москаленко C.B. Исследование сорбции эндогенных и экзогенных веществ пектинами // Эндогенные интоксикации: Тез. докл. Международ, симпоз.- С.-Петербург, 1994.- С.211.

3. Москаленко C.B., Василенко Ю.К., Степанова Э.Ф. Новые способы снижения токсичности парацетамола. Актуальные проблемы фармации // Межвуз. науч. конф. (1994; Тюмень). Материалы...- Тюмень, 1994.- С.161-162.

4. Сравнительная оценка гепатопротекторного действия пектинов./ Москаленко C.B., Василенко Ю.К., Мокин Ю.Н., Кайшева Н.Ш.// Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (50; 1995, Пятигорск): Материалы...- Пятигорск, 1995.- С.161.

5. Василенко Ю.К., Москаленко C.B., Степанова Э.Ф. Использование пектинов для снижения токсичности и повышения пролонгиро-ванности действия лекарственных средств.// Человек и лекарство: Тез. докл. Всероссийского национального конгресса.- М., 1996.-С.257.