Автореферат и диссертация по медицине (14.00.21) на тему:Влияние паротидных полипептидов на течение острого паротита в эксперименте

РГ6 од

Министерство здравоохранения Российской Федерации г ^ ^Омский Ордена трудового Красного Знамени 1 9 государственный медицинский институт

имени М.И.Калинина.

На правах рукописи

Фефелов Александр Владимирович

Влияние паротидных полилептидов на течение острого паротита в эксперименте

14.00.21 - стоматология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Омск- 1993 год

Работа выполнена в Читинском государственном медицинском институте Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор И.С.Пинелис Официальные оппоненты:

заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор А.А.Левенец; лауреат Государственной премии, доктор медицинских наук, профессор П.Г.Сысолятик.

Ведущее учреждение - Московский ордена Трудового Красного знамеш: медицинский стоматологический институт имени Н.Л.Семашко.

Защита диссертации состоится" " ЙЛЬрЛлЛА' 199,3

10"

е /1/ часов на заседании специализированного сонета (Д. 084. 30.02.)

при Омском ордена Трудового Красного Знамени государственном медицинском ш.стнтуте по адресу: г.Омск, улЛенина, 12.

С днссертагиен можно ознакомиться в библиотеке Омского государственного медицинского институт;. (г.Омск, ул.Ленина, 12)

Автореферат разослан

МЛрТЧи 199 3

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук, профессор

В.Б. Недосеко.

г.

Актуальность проблемы. Воспалительные заболевания слюнных желез занимают одно из ведущих мест сред актуальных проблем современной стоматологии (А.В.Клементов, 1972-1975; В.В. Рогинский и соавт., 1983; О.В.Рыбалов 19801989 и др.). В их патогенезе важную роль играют нарушения протеолиза, гемостаза, иммунитет и др. (Н.М.Оглазова, 1981; В.11. Матина и соавт., 1986, П.И. Ивасешсо и соавт., 1991; С.Г.Безруков 1991; Г.А.Губерская, 1991; Т. КаШпаЬе а! а!., 1981; V. Ргапкоуа а! а1., 1987 и др.). Однако применяющиеся в клинической практихе методы лечения не позволяют достичь желаемого результата (Г.Н.Москаленко, 1973-1984; А.П. Щеглова, 1988; Г.М.Руман, 1990 и др.)

3 последние годы показана перспективность изучег я роли биологически активных веществ в патогенезе воспалительных заболеваний слюнных желез (Ю.К. Сахаров, 1977-1979; А.М. Солнцев и соавт., 1984; А.Ф.Коваленко, А.ПЛевицкий, 1980-1991; П.И.Ивасенко и соавт., 1991; 1.0. !?и<1пеу, 1У89идр.). Их исследованме в эксперименте позволяет установить эффективность воздействия на патологический процесс в тканях слюнных желез.

Сегодня доказано существование в организме человека и животных нового класса регуляторных пептидов-цитэмединов (В.Г.Морозов, В.Х.Хавинсон и соавт., 1974-1991; Б.И.Кузник и соавт., 1980-1991 и др.). Это полипептиды с молекулярной массой до 10 ООО Д, обладающие тканеспецифичностью и органотрппностью, ответ-т-венные за передачу информации в погуляции специализированных клеток. Цито-мелины восстанавливают утраченные функции органов, из котор IX они получены (Ю.А.Витковский, 1985-1989; О.Д.Аюшеев, 1987-19'>0; В.Д. Слспушкин, 1981-1991 и др.). Кроме того, функциональная активность пептидов в органах и тканях зависит от состояния основных систем гомеостаза (Б.И.Кузник и соавт., 1983 - 1991, Н.Н.Иыбиков и соавт., 1985 - 1991 и др.) Между тем, цитомециновая регуляция в челюстно-лицевой области практически не изучена (И.С.Пинелис, ДЛ. Тогарь, ] С 89-1992). В связи с вышеприведенными фактами проблема изучения бтлогических эффектов .юлипептидов из тканей слюнных желез представляется в настоящее время актуальной.

Цель и задачи исследования. Целью работы явилось улучшение результатов лечения острого паротита на основании изучения роли паротидных полипептидсв (ПП) в патогенезе заболевания и коррекции ими нарушении ряда систем гомеостаза.

Для достижении поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

¿.Выявить наличие в тканях слюнных желез полипептидов и изучить опосредуемые ими биологические эффекты.

2.Установить влияние ПП на процессы регенерации тканей полости рта.

3. Определить коррегирующее дейсгвие ПП на активность ряда защитных систем организма при экспериментальном паротите.

. Научная новизна. Впервые из тканей слюнных желез выделены полипептиды, являющиеся высокоактивными биорегуляторами. Установлено их стимулирующее влияние на регенерацию слизистой оболочки полости рта. Показана способность ПП воздействовать на протеолиз, гемостаз, фибринолиз, иммунитет и неспецифическую резистентность.

Впервые обнаружена роль ПП в регуляции деятельности тканей слюнных желез при воспалении. Доказано, что парентеральное введение ПП способствует купированию воспалительного процесса, нормализует сдвиги систем протеолиза, гемостаза, фибринолиза, иммунитета и неспецифической резистентности, имеющих место при остром паротите.

Практическая ценность работы. Предложен способ получения полипептидов из тканей слюнных желез (Заявка на изобретение N4853206/14(078902), положитетьное решение Государственной научно-технической экспертизы от 28 ноября 1991г.). Выделенные биологически активные соединения позволяют разработать способ лечения паротита с использованием ПП. Материалы о свойствах ПП легли в основу документации, представленной в Фармкомитет России для решения вопроса об его хлиническом испытании.

Положения, выносимые на защиту:

1. Ткани слюнных желез содержат полипептиды, входящие в комплекс защитных факторов полости рта.

2. Поллпептиды, выделенные из тканей слюнных желез, оказывают оптимизирующее действие на регенерацию и воспаление, а также обладают антипро-теазной, гемокоррегирующей, вммуномодулирующей активностью.

3. Применение биологически активных ПП ликвидирует нарушения защитных систем при остром паротите, улучшая клиническое течение заболевания.

Апробация и внедрение основных положений работы.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на межвузовской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов "Физиология и патология перекисного окисления липидов, гемостаз« и иммуногенеза"(Полтава, 1990), международной научно-практической конференции "Поиск новых лекарственных средств и их использование в клинике" (Чита, 1990), межобластной конференции стоматологов (Чита, 1991). III международной конференции "Экологическая патология и ее фармакоррекция" (Чита, 1991), Всесоюзной конференции "Физиология и патология гемостаза" (Полтава, 1991).

По материалам работы оформлено изобретение (Заявка на изобретение N<1853206/14 (078902), положительное решение Государственной научпо-техннчес-кой экспертизы от 28.11.91). Подготовлены документы в фармкомитет России для решения вопроса о клинической апробации паротндных полипептидов.

Результаты работы опубликованы в б статьях. Основные положения диссертации используются при чтении лекции и проведении практических занятий на кафедрах хирургической, терапевтической, детской стоматологии Читинского государственного медицинского института.

Объем работы. Настоящее исследование выполнено в Читинском государственном медицинской институте в рамках научно-технической программы "Разработка и внедрение эффективных методов и средств профилактики, диагностики и лечения основных стоматологических заболеваний" (номер государственно регистрации 093513 от 01.86, шифр 022(17).

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы о материалах и методах исследований, пяти глав собственных наблюдений, обсуждения полученных данных, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы.

Текст изложен на 108 страницах машинописи, иллюстрировал 10 таблицами, 9 рисунками и 23 фотографиями. Библиография 220 источников, из них 166 отечественных и 54 иностранных.

В обзоре литературы приведены современные представления о содергатш биологически активных веществ в слюнных железах и их роли в патогенезе воспя-

ления. Охарактеризовано участие пептидных регуляторов в деятельности различных систем организма.

Материалы и методы исследования

Для решения поставленных задач проведены эксперименты на 594 неинбред-ных крысах и исследована кровь 30 здоровых людей и 10 ожоговых больных. Объектами изучения стали плазма и сыворотка крови, слизистая оболочка языка и ткани слюнных желез. Биологически активные вещества из тканей околоушной слюнной железы крупного рогатого скота получены по разработанпму нами оригинальному способу (положительное решение Государственной научно-техни jcckoh экспертизы от 28.11.91г.)

Влияние паротидных полипептидов на процесс рспаративной регенерации изучали на модели "дозированный травматический дефект" (В.В.Паникаровский и со-авт., 1979). Для этого 90 крысам под тиоренталовым наркозом создавхти дефект слизистой оболочки языка круглой формы диаметром 5 мм и глубиной 2 мм. Животных разделили на 3 группы:

- 30 крыс, которым вводили физиологический раствор (контроль);

- 30 крыс, получавших солкосерил (So'co Basel, Швейцария);

- 30 крыс, получавших паротидные полипептиды.

Пептиды, солкосерил и физиологический раствор инъецировали внутримышечно 1 раз в сутки в дозе ' мг/кг веса в течение 7 дней после операции.

Для контроля за процессом заживления раневых дефектов ткани в зоне повреждения забирали на 1,3,7,10,14 и 21 сутки от начала эксперимента. Микропрепараты окрашивали гематоксилин - эозином, пикрофуксином по Ван Гизон и импрегнировали азотнокислым серебром по Фру*.

Эффективность использования ПП при остром паротите изучена у 227 крыс. Экспериментальный острый паротит создавали введением в околоушную слюнную железу 0,02 мл скипидара по методике Ю.К.Сахарова (1979). Вещество вводили внутримышечно в дозе 1 мг/кг веса на протяжении 5 дней 1 раз в сутки. Контрольную группу составили 227 крыс с аналогичным заболеванием, которым инъецировали физиологический раствор. Изменения, происходившие в крови и тканях околоушных желез исследуемых животных, сравнивали с результатами, полученными у 50 интактных животных. Клиническое течение острого паротита оценивали по величине

отека мягких тканей, интенсивности гиперемии кожи в околоушной областл, прекращению слюноотделения из протока воспаленной железы. Кроме того, диагноз "острый паротит" подтвержден гистологическими данными. Околоушные железы забирали через 1,3,7,10,14 суток после начала эксперимента. Срезы тканей окпашивали гематоксилин-эозином, пикрофуксином по Или Гизон, импрепшровали азотнокислым серебром по Футу*.

Влияние ПН на протсолиз исследовали в чистой субстрат-ферментной системе (T.Asinjp, S.Mullerts, 1952), Для чего к растворам трипсина, фибринолизина, стреп-токиназы добавляли пептиды в концентрации 1мг/мл.

Суммарную протеолитическую активность плазмы крови экспериментальных животных определяли по гидролизу протамина (К.Н.Веремеенко, 1971). Полученные в результате инкубации плазмы с 1% раствором протаминсульфата, пробы окрашивали с помощью реакции Сакагуши и фотометрировалн в кювете с толщиной слоя i см при длине волны 508 нм в спектрофотометре СФ-26. *

Активность сывороточных ингибиторов протеолиза оценивали на основании следующих тестов: общей антитриптической активности сыворотки (К.Н.Веремеенко и соавт., 1988), экспресс-метода определения ингибиторов трипсина в сыворотке крови (К.Н.Веремеенко н соавт., 1986), концентрации ингибиторов плазмина в плазме крови (К.Н.Веремеенко и соавт., 1980).

Воздействие ПП на состояние свертывающей системы крови и фибринолиэ определяли по следующим тестам: время рекальцификации плазмы по H.D.Bergerhov, L.Roca (1954), протромбиновое время по A.J.Quick (1966), тромбино-вое время по R.M, Biggs, R.G. Macfarlane (1962), кефалиновое время по MJ. Iarrieu, G.Weilland в модификации З.С.Баркатна (1975), количество фибриногена по Р.А.Рутберг (1961), этаноловый тест по Н.С. Codal в модификации В.ГЛычевз (1975), протаминсульфатный тест по B.Lipinskj at al. (1-68), время фибринолиза эуглобулиновой фракции плазмы по Н. Kowarzyk, L.Buluc (1954), активность компонентов фнбринолитической системы по T.Astrup, S.MulIertz (1952), описанные в современных руководствах по исследованию системы гемостаза (В.П.Балуда и соавт., 1980; Е.Д.Иванов, 1983 и др.) .

* - патоморфолигичлгние исследования выполнены совместно с доцентом Н-А-Чарторижсшм.

Для обнаружения действия ПП на экспрессию Т- и В- лимфоцитов применяли свежую гепаринизирошпшую кровь здоровых людей (B.II.Kerman al al., 1976; С. Bianco at at., 1973), для чего отмытые лимфоциты инкубировали с ПП в концентрации 0,02 ыг/мл.

Влияние ПП на гемолитическую активность комплемента оценивали по степени лизиса сенсибилизированных антителами эритроцитов барана (классический путь) н эритроцитов кролика (альтернативный путь) сывороткой человека (S.Tanaka et al., 1986)

Количество формазан- положительных клеток (НТС-теет) подсчитывали с помощью микрометода (М.Е.Виксман, А.Н.Маянский, 1977), добавляя ПП в концентрации 0,02 мг/мл.

Для оценки иммунного статуса определяли титр антител в реакции гемагт-лютинациин гемолизах ксеногенным эритроцитам (M J.Herbert, 1967;D.A.Be!l et al., 1972).

Активность лимфоцитов периферической крови у экспериментальных животных выявлена с помощью люминесцентной микроскопии. С этой целью фиксированный мазок клеток флуорохромировали в растворе акридинового оранжевого на юттратно-фосфатном буфере (А.В. Зеленин, 1967).

Матема .»ческая обработка результатов 1714 клинико-лабораторных исследований выполнена на компьютере Amstrad PC 1640 с использованием вариашюнно-статнстического анализа для связанных'to несвязанных между собой наблюдений с вычислением показателя достоверности различий Р по Стьюденту.

Результаты исследований и их обсуждение

Изучение морфогенеза заживления травматического дефекта слизистой оболочки языка показывает, что репаративная регенерация под действием ПП протекает весьма благоприятно и характеризуется заметным уменьшением гнойно-воспалительной реакции к 3-им суткам опыта. К 7-му дню преобладает картина преимущественно продуктивного воспаления с ограничением воспалительного процесса и ярко выраженной пролиферацией макрофагов, лимфоцитов, плазматических клеток (клеточных элементов нммунокомпетентной системы), а также эндотелия новообразованных кровеносных сосудов, адвентицнхтьных клеток м фибробластов, которые

продуцируют г регенерате волокнистое структуры (фибриллогенез-. В течение 14*. 1,5 суток наступает полная эпитслизацня язвенного дефекта и восстановление зоны повреждения, где еще видны слабовыраженные остаточные явления завершившейся воспалительной реакции. При этом очень демонстративно поведение регенерирующего плоского эпителия, обеспечивающего очищение очага от чужеродного материала в процессе воспалительной гиперплазии. В контрольной группе реституция дефекта заканчиваете* на 6*- 1,8 суток позже.

Сравнительная оценка морфогенеза репаративноА регенерации при применении паротндных полипептидов н широко применяемого стимулятора регенерации салкосерила, не выявила существенных отличий между ними. При этом установлено, что ПП оптимизируют регенераторные процессы слизистой оболочки полости рта в значительной степени за счет активизации клеточных элементов иммукокомпетент-ной системы и фибробластов.

Опыты in vitro показали, что ПП обладают выраженным ингибирующим действием на активность протео/.итических ферментов (трипсина, фибринолизина, стрептокиназы).

Изучение влияния ПП на протеолитическую активность плазмы крови у крыс с острым паротитом выявило следующие факты. Через 48 часов после введения скипидара в околоушную железу животных контрольной группы суммарная протеолитическая активность плазмы увеличилась почти в 5 раз. В последующие сутки она достигла максимума и превысила норму в 6 раз. В течение 5-7 суток протелнтнческая активность плазмы оставалась высокой. К 10-му дню она резко снизилась и сохранялась таковой до конца срока наблюдения. В опыте наибольшая протеолитическая активность плазмы отмечена на 2-е сутки, которая которая была в 2 раза меньше, чем у контрольных крыс (Р< 0,001). К 5-му дню она достигла нормы и в дальнейшем не отличалась от показателей здоровых животных (Р> 0,1).

Параллельное изучение аитиферментноб активности сыворотки и плазмы крови у крыс обеих групп показало, что она также подвергается существенным изменениям (таблица).

Через 48 часов после развития острого воспаления в контроле общая антитрилтнческая активность уменьшалась на 40* 1 % (Р< 0,001). В то время, как у животных, получавших ПГ1, она была достаточно высокой. На 3-й сутки or начала заболевания в обеих группах отмечено снижение анпггрнптической активностп.

Таблица

УРОВЕНЬ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ В КРОВИ У КРЫС С ОСТРЫМ ПАРОТИТОМ

Покд- |Статис- Здоро- Дни проведения исследований

мтсли | тичес-кие вые контроль опыт

показатели | 2 3 5 1 7 1 | 10 1 14 1 2 3 5 7 ю 14

Общая анти-тригтти- М В1 1.25 0,06 0,86 0,07 , 0,26 0,09 0.21 0.03 1 0,29 0,03 0,79 0,03 0,86 0,05 1,09 0,02 0,52 0,05 1.27 0,04 1,29 0,04 1,26 0,04 1.25 0,05

чегкаа АКТИВНОСТЬ сыворотки г/л Р2 <0,001 <0,001 ! <0,00' <0,001 <0,001 <0,.Х12 <0,02 <0,02 <0,002 <0.001 >0,1 <0.001 >0,1 <0,001 >0,1 <0,001 0 <0,002

Инги- М 1,05 0,41 0,30 034 0,54 0,85 0,95 0,83 0.71 0.95 1,05 1,01 1.13

биторы трипси- III 0,07 0,06 0,07 0.08 0.08 0,07 0,07 0,05 0,06 0.07 0.10 0,09 0.С7

на * сыворотке г/я Р| Р: <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 >0,1 <0,05 | <0,05 <0.001 | <0,001 1 >0.1 0.001 >0,1 <0,02 >0.1 >0,1 >0.1 >0,1

Инги- м 200 58,6 48.6 85,7 98,6 122,9 191,4 134,3 144.3 1743 184.3 195,7 198,6

битор^, плаз-мина ш Р| 4.33 3.20 <0,001 3,20 <0,001 4,53 <0,001 3,20 <0,001 -.96 <0,001 5.97 >0.1 3,48 | 4,53 <0,001 | <0.001 3.48 <0,02 4,53 >0,1 433 >0,1 4,79 >0.1

(услов- Р: <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 | <0,001 >0,1

ных

единиц ингибитора)

Р1 • достоверность различий между здоровыми и исследуемыми животными.

Однако наиболее существенным (3,5 рала; Р<0,00|) омо было у контрольных крыс. Между тем к i -му дню у животных опытной группы она полностью нормализовалась. Паление антиферментной активности и контроле продолжалось до 7-го дня я к концу срока наблюдения не достигла нормальных величин.

Количество иш-ибиторов плазмина снижалось через 2 суток после начала паротита (рис. I). Введение ЦП приостанавливало надснме их концентрации, в то время как в контроле содержание амтиплизминоа сократилось почти ч 4 раза (Р<0,001). Посте второй тпекиии полипептилол отмечена тенденция к восстановлению этих соединений, а в контроле антифибринолитическая активность продолжала снижаться. По окончании курса лечения уролень аншплпзминов а крови опытных крыс достиг нормы, а в контроле - на неделю позже.

Таким образом, введение П11 экспериментальным животным с острым паротитом способствует снижению суммарной протеолитической активности, повышению антипротсазной и антчфнбринолитической активности крови, быстрому восстановлению сдвигов, вызванных острым воспалением слюнной железы.

В результате проведенных экспериментов in vitro установлено, что ПП обладают выраженной антикоагулянтной активностью. На это указывает удлинение ня 2I4- 1% <Р< 0,001) времени рекальцификации, на 16 4- 2% (Р< 0,01) тромбииовою времени, на 25 1% (Р< 0,001) протромбинового времени при добавлении в плазму ПП.

При изучении влияния ПП на фибринолит эуглобулиновой фракции обняружс на его ингибиция на 63+.4% (Р< 0,001).

Исследования антикоагулянгных свойств ПП у крыс с острым паротитом выявило следующие факты. После в.юпроизведения паротита > контрольных животных отмечена гиперкоагуляция, которая достигла максимума на 3-й сутки. Об этом говорит значительное укорочение времени рекальцификации, . ромбиноаого, протромбинового, кефалимового времени (рис 2). К 7-му дню обнаружено замедление свертывания крови, сохранявшееся до конца эксперимента. У животных, получавши* ПП, показатели езертыь^ния крови практически не отличались от таковых у здо;.о вых крыс. Только на 5-е сутки отмечено укорочение тромбинового (Р<0,05> и на 7-е удлинение лротромбиноього времени (Р<0,05). В дальнейшем эти показатели нор мализовались.

Рис. I. Уровень ингибиторов плазмина в крови у крыс с острым паротитом под воздействием ПП.

У. Е. ингибитор«

здоровые

200

сутки

1 2 3 4 5 6 7 3 9 Ю и 12 /3 /4

контроль

ОПЫТ

достоверность различий между контролем и опытом

Рис. Динамика времени рскальцификации плазмы у крыс с острый плрсгитс'4 под воздействием ПГ>.

30 М 70 60 5Р

40

>

—

здоровые

N х-

•V

X

1 2 3 4 У б 7 в 9 10 II И И 14

сутки

X

контроль опыт

достооерность различий между осьггом в контролем

Рис. 3. Уровень фибриногена у крыс с острым паротитом под воздействием ПП.

МГ/%

здоровые

СУТКИ

1 2 Ъ 4 3 б 7 а Я 10 И п 1Ь н

X-

контроль опыт

достоверность различий между контролем и опытом

Возникновение ДВС-синдрома у контрольных животных подтверждалось следующими данными (рис. 3). Уровень фибриногена, начиная со 2-х суток, повышался и достиг максимума на 3-5-й день, превышая нормальные показатели в 2,7 раза (Р<0,001). На 7-14 сутки его концентрация снизилась и к концу наблюдения была до-jTOHepiio ниже в 1,8 раза (Р<0,002) таковых у здоровых животных. Положительные реакции этанолового и протаминсульфатного тестов подтвердили активизацию ьнутрисосудистого свертывания у «рыс с острым паротитом. Напротив, введение ПП полностью предотвращало развитие ДВС-синдрома.

Изучение фибринолитической активности плазмы крови крыс с острым паротитом выявило существенные изменения. Через 48 часов после развития острого воспаления у них возросла фибринолитическая активность плазмы крови. К 3-им суткам у контрольных животных она увеличилась на 49*.!,'9% (Р<0,001) в то время, как у животных, получавших ПП была довольно низкой и нормализовалась к 10-чу дню (Р>0,1). Между тем, в контроле фибринолитическая активность сохранялась высокой до 10 дня (Р<0,001), а к концу эксперимента была достоверно ниже, чем у здоровых крыс (Р<0,002) (рис. 4).

Показатели активности компонентов фибринслиза говорят об аналогичных сдвигах у крыс с острым паротитом. Существенное повышение уровня проактивато-ра, активатора плазминогена, плазминогена, плазмина наблюдалось до 7-го дня у животных контрольной группы. К концу наблюдения все показатели, кроме активатора плазминогена, были ниже, чем у здоровых крыс. В опыте уровень компонентов фнбринолиза повышался незначительно и к концу срока наблюдений существенно не превышал таковые у здоровых животных.

Вместе с тем, ингибиторы фиб^инолиза у контрольных крыс исчезали с 3-го до 10-го дня. В опыте они были на отрицательных цифрах только на 3-й сутки. Начйная с 5-х суток и до конца эксперимента, уровень ингибитороь ф>. ринолиза оставался высоким.

Анализ полученных результатов позволяет заключить, что ПП обладают антикоагулянтным и антифнбрииолитнческим действием. Введение ПП снижает гнперкоагуляцию, предотвращает развитие ДВС-синдрома, повышает антифибринолнтическую активность плазмы крови, тем самым положительно влияет на течение острого экспериментального паротита.

В серии экспериментов in vitro исследовано влияние ПП на культуры лимфоцитов, полученных от ожоговых больных. При инкубации лимфоцитов с иссле-

Рис. 4. Динамика фибриполиза »угдобуди.чснюй «декцим у крысе острым паротите»! вод юцсЛинки ГШ.

контроль опыт

достоверность различий между опытом и контролем

Х-

дуемыми полипептидамн установлено увеличение содержания Т-лнмфоцнтов m 17+-Ы% <Р<0,05), а В-лимфоцитов на 76+-Г% (Р<0,001). Последнее указывает на возможность ПГ1 влиять на днфференцировку предшественников Т- и особенно В-лимфоцитов, обеспечивать ускорение их созревания и приобретения функциональной зрелости.

Изучение влияния ПП на систему комплемента показало ее активацию по альтернативному пути на (Р<0,001) и значительную ингибицию по

классическому пути (в 5 раз; Р<0,000. Кроме того, под влияш. :м ПП увеличивается в 3,2 paja (Р<0,001) количество формазан-положнтельних клеток, что указывает на повышение фагоцитарной активности нейтрофилов.

Под действием ПП на 5-е сутки у контрольных животных титр гемолизинов к ксеногенным эритроцитам снижается на 30+-0,3% (Р<0,001), а гемагглютининов - га 39*- 0,9% (Р<0.001). В то же время у животных, получавших ПП, эти показатели достоверно не отличались (Р>0,1) от иммунизированных животных, которым паротит не воспроизводили.

Функциональная активность лимфоцчтов периферической крови у крыс с острым паротитом начиная со 2-х суток падает вплоть до 5 дня с начала заболевания (Р<0,001). Затем происходит некоторая стабилизация активности лимфоцитов, но к концу срока наблюдения она вновь снижается (Р<0,001). В опыте уменьшение этого показателя отмечено лишь на 3-и сутки (Р<0,05', в последующем активность лимфоцитов не отличалась от таковой у здоровых крыс (Р>0,1). Более того, на 7-е сутки она была выше (Р<0,05) (рис. 5).

Таким образом, ПП оказывают выраженное воздействие на функционирование иммунокомпетентных клеток, активность системы комплемента, титр "-ёмолизинов и гемагглютининов, т. е. влияют на иммунный отпет г но-спгцнфическую резистентность.

Клинические наблюдения показали, что через сутки после яоспро> ве.тснш паротита у животных обеих групп развивается отек околоушной области, умсньыас. ся слюноотделение. Гистологически отмечали отек тканей слюнной железы, картин, ярко выраженного фибринозно-гнойного воспаления, распространяющегося на ofp> жающую жировую клетчатку. Нейтрофильные гранулоцигы образовывали шир<- и лейкоцитарный воспалительный вал.

Рис. 5. Динамика функциональной активности лимфоцитов у крыс с эстык иротитом по воздействием ПП

(люминесценция).

тУ

здоровые

20

15

1 2 з ч 5 е 7 8 9 Ю ¡1 12. И :4

сутки

X -

контроль опыт

достоверность различий между контролем и опытом

Па 3-й сутки у животных обеих групп прекратилось счюноотделение, появился инфильтрат в области пораженной железы, кожа над ним покраснела. Па микропрепаратах отмечено дальнейшее прогрессировать гнойного воспаления в контрольной группе. Процесс распространялся на соединительнотканные прослойки железистых долек (концевых отделов) слюнной железы и прилежащих к ней поперечно-пол^ч-тых мышц по типу межмышечной флегмоны, а также периневралыю и на стенки кровеносных сосудов (развитие васкулитов).

У животных опытной группы к 3-му дню картина фибринозно-гнойного воспаления с расплавлением железистых долек проявлялась в виде обширных по; ей инфильтрации свежими и распада нкимися нейтрофилььымк лейкоцитами, но с примесью в инфильтрате макрофагальных клеток. Обращал на себя внимание значительный отек межуточной ткани и лимфостаз.

Через неделю в контроле сохранялась инфильтрация и гиперемия кожи п облаои воспаленной железы, гтек уменьшался. Из протока удалось получить скудное гнойное отделяемое. Морфологическое изучение показало, что гнойно-воспалительный процесс расплавляет железистые дольки. Они густо инфильтрованы частично распадающимися (кариорексис) полиморфно-ядерными лейкоцитами. П инфильтрате появлялась небольшая примесь мононуклеарпых макрофагов.

В этот срок у крыс, получавших ПП, отек значительно уменьшился, исчезла гиперемия кох:н, хотя небольшой инфильтрат в области железы сохранялся. Из протока выделялась мут.шя слюна с примесью гноя. Гистологически обнаружено заметное сокращение интенсивности гнойно-поспалк-ельной реакции. Вблизи некротических очаюв происходит пролиферация клеточных элементов типа мононуклеарпых макрофагов, лимфоцитов и плазмобластов. Наблюлатась пролиферация фибробластов, продуцирующих нежные коллагеновые волокна, а также рассасывание фибринозных масс макчофагами (фибринолиз). ;

К 10-му дню у контрольных крыс исчезали отек и гиперемия кожи. Желе> . ( ставалас, увеличенной, из протока выделялся скудный ссрозно-гнойный сегрег Гистологическое изучение вь явило отторжение гнойно-некротического детрита и ш. лость формирующихся абсцессов. В прилежащих к гнойному расплавлению участ» . ткани слюнной железы видна воспалительно-клеточная инфильтрация моионук.и... кмчи макрофагами и фибробла.тами. Умеренно выражены процессы ограним-", воспалительной реакции.

В опытной группе к этому сроку слюнная железа оставалась несколько увеличенной, из протока выделялась мутная слюна. На гистологических препаратах прежде всего обращала внимание ярко выраженная тенденция к ограничению воспалительного процесса. Гнойно-некротические очаги окружены широким поясом фнбробластов, продутгрующих (в виде густой концентрической сети) аргирофильние и коллагеновые волокна, инкапсулирующие и организующие некротические массы. Последние рассасывались макрофагами и подвергались аутолизу нейтрофильными гранулоцшами но периферии. В околоушной лимфатической железе происходили иммуноморфологические изменения в виде гиперплазии лимфоцнтных клеток и т. н. гистиоцитоза синусов. В них обнаруживали большое количество клеток макрофагальноготипа.

Через 2 недели от начала эксперимента в контрольной группе крыс железа оставалось увеличенной и плотной. Секрет выделялся в небольшом количестве и состоял из мутной слюны и некротических хлопьев. При морфологическом изучении отмечено формирование свежих фибринозно-гнонных воспалительных очагов с большим количеством распадающихся нейтрофпльных лейкоцитов (ядерный детрит), свидетельствующих о неуклонном прогрессировании процесса. Среди разрастающейся на периферии этих очагов грануляционной ткани видны новообразованные капилляры с набухшим эндотелием, а также диссоциированные дольки и междолько-вые протоки слюнной железы. Кроме тоге, происходила умеренно выраженная пролиферация макрофагов и фибробластов с образованием нежных келлагеновых волокон.

У животных опытнэн группы в это время клинические проявления паро-ита практически отсутствовали. Из протока выделялась чистая слюна, хотя и в меньшем количестве, чем из здоровой железы. Гистологически наблюдали значительное снижение интенсивности воспалительно-некротических изменений по сравнению с контролем. В зоне виспалени- преобладали имунокомпетентные элементы, образующие активные поля лимфоцитов, плазматических клеток рахчичного уровня диффе-рениировки и крупных мононуклеарных макрофагов. В очагах клеточной инфильтрации отмечали большое количество новообразованных капилляров с набухшим и пролифнлнрующим эндотелием. Небольшие участки некроза с распадающимися нейтрофильными гранулоцнтами по периферии находились в состоянии выраженной организации, с многочисленными аргирофил^ными, коллагеновыми во-

юкнам* и резорбции некротических масс макрофагами. Обращало на себя внимание 1вное преобладание репаративных г роцессов, в том числе и в эпителиальных сгрук-гурах ткани слюнной железы.

Таким образом, введение ПП оказывает существенное влияние на течете экс-1ериме|1тального гнойного паротита, вызывая значительное снижение интенсивности юспалителыю-некротических изменений, особенно в сроки 7-14 дней. Наряду с этим :ущественно оптимизируются репаративные процессы в зоне воспаления. Наблюда-гтся ярко выраженное новообразование фнбробластами волокнистых структур ^ибриллогенез). которые замещают некротические очаги соединительной тканью, а ■акже осуществляется репа^ативна" регенерация эпители; >ьных структур секретор-шх отделов слюнной железы.

Суммируя результаты наших исследований и анализируя современные пред-тавления о патогенезе паротита, можно предположить следующие точки приложения I пути реализации биологической активности ПП.

1. Коррекция нарушений системы протеолиза.

2. Коррекция нарушен,ш иммунитета и неспецифической резистентности.

3. Стабилизация гемокоагуляции и фибринолиза.

4. Ингибиция или активация системы комплеменга.

5. Стимуляция репаративной регенерации в слюнной железе и тканях полости

та.

6. Восстановление межклеточных взаимодеЙ1 гвий и клеточной кооперации.

Конечно, многие вопросы, связанные с структурой и функцией ПП, остаются

ерешеннымк. Однако представленная работа намечает возможные пути поиска, про-емонстрировав наличие в тканых слюнных желез высокоэффективных эндогенных иорегуляторов.

Выводы

1. Ткани слюннь.х желез содержат комплекс полипептидов, относящихся к лассу цитомединов и являющихся высокоактивными биорегуляторами. Они облгда-■т выраженными антипротеолитическими, антикоагулянтными и иммунокор-егирующими свойствами.

2. Паротидные полипептчды оптимизируют процессы репаративной регеие-зции слизистой оболочки полости рта и тканей слюнных желез путем

нигибирования избыточного действия ферментов, антикоагулянтной активности, стимуляции фибробластов и клеточных элементов иммунитета.

3. Положительный терапевтический эффект полипептидов из слюнных желез при остром паротите обусловлен снижением протеолитической активности ферментов в 1 фазу острого воспаления, тем самым снижая интенсивность деструктивных процессов.

4. Паротидные полипептиды предотвращают развитие ТГС-синдрома, что способствует восстановлению микроциркуляцин при остром воспалении слюнгой железы.

5. Полипептиды слюнных желез, являясь высокоактивными биорегуляторами,оказывают нормализующее влияние на иммунитет и неспецифическую резистентность организма при остром гнойном паротите.

6. Высокая эффективность паротидных полипептидов а поддержании гомеоста-за при паротите делает перспективнм их применение в клинической пракктике.

Практические рекомендации

1. Для ранней диагностики и прогнозирования течения воспалительных заболеваний слюнных желез рекомендуем определять показатели, характеризующие протеолиз, п-мостаз и фибринолиз, иммунитет и неспецифическую резистентность организма больного.

2. Применение органоспецифичйких полипептидов позволяет осуществлять одновременную коррекцию ряда защитных систем при остром паротите, что устраняет необходимость назначения ингибиторов протеолитических ферментов, иммуно- и гемокорректоров.

3. Предложенный способ выделения органотропного полипептида из слюнных желез крупного рогатого скота позволяет в перспективе полечить новое лекарственное средство, обладающее тканеспецифичностью и высокой эффективностью в регуляции гомеостаза.