Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Влияние опиоидных пептидов на функцию коры надпочечников в норме и при стрессе

ТОМСЮЙ ОРДЕ11А ТРУДОЮГО ¡ФАСНОГО ЗНАМЕНИ 1ТСУДАГ\ЛВЙШШ МВДИЩШСЮ1Й ИНСТИТУТ

На прпвак рукописи уда 615. 357: 612. 451: 616. 453 - 009

Ласукова Татьяна Викторовна

ВЛИЯНИЕ ОПИОВДННХ ПЕПТИДОВ НА ФУНКЦИЮ КОШ НАДПОЧЕЧНИКОВ В НОШЕ И ПРИ СТРЕССЕ

14.00,17. - Нормальная физиология 14.00.16. - Патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Томск - 1991

иигаллеяа в лаборатория лагофизлологии экстремальные состояний ШШ кардиологии Томского научного центра АЩ СССР

Научные руковагпгеди: доктор медицинских наук Г.К. Золсев доктор медицинских наук Ю.Б. Дшиланов

№штл.ьше оллоненты: профессор, доктор медицинских наук Л.М. Днгай

доктор биологических наук Г.Л. Докаина

Ведущее учреждение: Институт физиологии СО АШ СССР

Защита состоится 1991 г.

в /У*час. на заседании специализированного совета Томского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института ( 634050, Томск, Московский тракт, 2)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Томского медицинского института ( Томск, пр. Ленина, 107) .

Автореферат разослан "¡¿¿>" 1991 г.

Учоньй Секретарь сшцСализироЕэкного совета доктор медицинских наук, профессор

Т.С. Федорова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Стрессорная реакция занимает важное место в патогенезе многих заболеваний В реализации стресса ведущее значение принадлежит гормонам кора надпочечников (Селье Г., I960, 1972). Поэтолу проблема регуляции функциональной активности гипоталамо-гипофизарно-надпочечнпковой системы (ГГНС) при отрессз является достаточно актуальной. Определенный интерес в этом плане представляют энкефалины и эндср?,ины, удельный вес которых возрастает в условиях стресса (Ельскяй В.Н. и др., 1985; Лишманов Ю.Б.,1986).

Ряд эффектов, присущих опиовдным пептидам - высокая анальге-тическая активность, тормозное влияние на эндокринную систему, антистресоорноа действие дает возможность рассматривать их в качестве эндогенных регуляторов многих процессов жизнедеятельности организма (Медведев О.С. и др., 1981; Xutimura г, е. о., 1931 ). Опиоидные найропептвды оказывают определенное воздействие и на miC, хотя тлеющиеся по атому вопросу данные литературы отрывочны и противоречивы.

По сущесгвувдям сведениям, «адорфины при введении в организм активируют КРФ, А1СГГ и кортизол (Славнов В.Н. и др., 1983; Glaffe-nried в, е.а,, 1978 ) , хотя есть данные и противоположного характера ( gonaid е., 1976j Laaberta s., 1983).Неоднозначность результатов разных авторов объясняется, возможно, использованием разных доз ОН и различных способов введения препаратов, а также гетерогенностью опиатных редчпторов. Вместе с тем, в литературе практически отсутствуют сведо^я о роли той или иной популяции опиатных рецепторов в реализации действия ОН на ИБС.

Влияние ОП на цейтралъные звенья регуляции едренокортикаль-

ной .система, по всей видимости, обусловлены сходством иг первичной структуры с рядом гормонов гипоталамуса в гипофиза и наличием общего предшественника - цроошоыэланокортина (Акил X. и др., 1981; Варганян Ы.Е. и др., 1985). Секретируемый в гипоталамусе КРФ активирует продукцию аденогипофизоы проопиомеланокортина, производные которого метут через спинномозговую жидкость оказывать периферическое действие в том числе Я на адреналовые хелевы. Возможно, опиовдные пептиды выполняют функции местных регуляторов, поскольку энкефалинн в значительных количествах содержатся и в самих надпочечниках (Нехит, 1980). Таким образом, в . воздействии ОН на надпочечники не исключено их непосредственное влияние на процессы синтеза я секреции кортикоотеровдов.

Представленные данные, в совокупности о нмепцимися в литературе сведениями о значении ОП в регуляции ПВО (Не±аа и. , 1980 ) позволяет предположить участие последних в регуляции функции кори надпочечников в норме и при стреосе.

Цель исследования: изучить влияние опиоцдных пептцДов на функцию птофизарно-надпочечниковой системы в норме и при стреосе.

Зомш:

1. Изучить динамику глюко- и шнералокортикоидов в крови крыс под влиянием природных опмоидных пептидов и их синтетических аналогов в физиологических условиях.

2. Определить роль мю- и дельта-рецепторов в реализации действия ОН на функции коры надпочечников.

3. Оценить действие ОП на изменения уровня кортикоотеровдов в крови крыс в динамике развития отресс-реакции.

4. Исследовать отдеяьнне механизмы влияния ОП на функциональную активность корн надпочечников.

5. Провести исследования по изучению влияния ОП на вызванные

изЕбсишми регуляторами коргакоствроадогонеза (АКТГ, ШГ, Са2Ч катвхол&чкны, пептида Ештфкза) изменения глюгсо- и шноралокорти-коедной активности надпочечников.

Научная новизна. В работе впервые отмечен фазный характер изменений уровня глюсокортикоидов и АК1Т под воздействием природных ОП и 5пс синтетических аналогов. Показано, чи нейропептвдц ошоидного ряда оказньаюг тормозное агашше на процесса корткко-стероидогенеза в надпочечниках. Это Еыражается в снижении содор-гання в крови крыо уровня глюкокортияоидннх гормонов, уменьшении уровня ц-АМ5 и увеличении концентрации аскорбиновой кислоты в умей надпочечников. Полученные аффекты оказались более выраженными црз использовании синтетических энзимоуотойчишх аналогов OIL

В условиях различного по интенсивности и продолжительности

О С С

стрвсоа синтетический аналог энкефалинов Д-ала^-лей -арг -заксфа-лзш суцзстванно ограничивал активацию ГГНС, что особенно ярко проявлялось при наиболее тяжелых видах стресса (ишемия миокарда).

Впервые установлено, что супрессируицее действие 011 на глхь кокортикоидаун активность надпочечников реализуется через дельта-опиатныз рецепторы. Зто вырагаэтея в снижении уровня кортазола в крови 1фнс при введении селективного агониота дельта-рецецторов ДАДД и в отсутствия заметного влияния мю-агониста на глюкокортж-ксида.

В работе исследовано влияние ОН на йффекги известных регуляторов кортикостерокдогенвза - АКТГ, паратгормоп, кальиий, адреналин, пйптодн эпифиза. Получено, что синтетические аналоги зякефашшов способна ограничивать адрзнокортикотропнув стимуляции глшекортаковдяой активности надпочечников, достоверно снижая содержание коргазоля в крови и ц-AIffi в надпочечниках.

Поразчно такяэ, что ОН угнетают стидулярущээ дойствяе !ПТ

на глга^окортикояды. Действие энкэфалинов на вызванное Са2+ увеличение содержания коргизола и альдосгероне выражалось в снижении содержания минвралокорткковда. Опиоиднне пептиды ограничивали стимулированную адреналином активацию ГГНС. Это выражалось в снижении содержания коргизола при совместном введении ОП о адреналином.

Научно-практическая значимость.Результаты о влиянии опиовд-ных пептидов и их синтетических аналогов на эффекты известных регуляторов кортикостероидогенеза могут быть использованы для создания препаратов пептидной структуры, регулирующих гомеоотаь организма в экстремальных условиях. Полученные данные позволяют вскрыть новые механизмы нарушения функции коры надпочечников цри эндокринной патологии паращитовиднкх желез, эпифиза, опиоидной системы.

Практическая реализация.Новые сведения о роли опиоидных пе-пгвдов в регуляции кортикостероидогенеза используются в курсах лекций на кафедре биологической химии МИ> ТШ, на кафедрах анатомии и физиологии человека и животных ПУ и ТГПИ. В процессе выполнения работы получено удостоверение на рационализаторское предложение Я 158/10-87, которое в настоящее время используется в НИИ фармакологии и НИИ онкологии ТЩ АШ СССР.

Апообашия работы. Материалы диссертации доложены на I Всесоюзной конференции "Нейропептиды: их роль в физиологии и патологии" (Томск, 1985), на совещании "Цитомедины" (Томск, 1986).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ; среди них - 3 в журналах, I в зарубежной печати, 6 в материалах конференций.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах и включает следующие разделы: введение, обзор литерату-

ры, главу "Материал и методы исследования, две главы результатов собственных исследований, заключение, вывода, список литературы. Диссертация иллюстрирована 10 таблицами и 8 рисунками.

ОБЪЕКТ И МЕТОД! ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на беспородных крысах-самцах массой 140180 г. До начала эксперимента подопытных животных выдерживали в виварии в течение 7 дней на обычном нищавом рационе по 8-10 особей в пластиковых клетках.

В качестве экспериментальных моделей стресса использовали подвешивание животных за шейную складку в течение 3,5 часов; голодание на протяжении 72 часов; сочетание этих воздействий, а также острую ишемия миокарда.

Исследуемые препараты вводили внутрибршинно, однократно.

о

Ониоидные пептида (лей-, ыат-энкофалин, гамма-эндорфин, Д-ала -лей5-арг6-энкефалин, налоксон, ДАГО и ДАДД) применяли в дозах 100 и 500 мкг/кг, паратиреовдин и АКТГ - 10 ВД/кг, эпигалаюга -I мг/кг.

Для оценки влияния опиоидных пептидов на гипофизарно-надпо-чечниковую систему в крови крыс исследовали концентрацию АКТГ, кортикостерона, кортизола, альдосгерона через 15, 30, 60, 120 минут после инъекции црепаратов. Концентрацию гормонов измеряли с помощью стандартных коммерческих РИА-наборов. Радиоконкурентному определению ц-А® в надпочечниках крыс предшествовала процедура экстракции анализируемого образца согласно прилагаемой к набору инструкции.

Интенсивность биосинтеза ксртикостероидов в надпочечниках оценивали по уровню аскорбиновой кислоты в них, которую определяли методом Роз и Катер (1963) и выражали в мкг/л в пересчет*)

на I г ткани надпочечника.

В плазме крови измеряли концентрация суммарных П-ОКС по ш флюоресценции в серноспиртовом реактиве (Колб В.Г., 1976) на спектрофлюориметре фирмы ЧШазМ " (Япония); активность креатин-фосфоюшазы (КФК) - наборами фирмы " Б1гоег1пеег" (ФРГ) на спектрофотометре Ю-26; концентрации ионизированного калыщя - с помощью ионоселоктпвншс электродов на анализаторе электролитов " ауъ" (Австрия),

Цифровой материал подвергали статистической обработке методами вариационной статистики с использованием *-критерия Стъю-дента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССШ0ВА1ШЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Вдиядид опиоилных пептидов на глдко- и мияэралокортикокдную активность надпочечников в нотата. Экзогенное введение интактяыы крысам лей-, мет-энкефалина и гамма-эвдорфина в дозе 500 мкг/кг внутрибршинно способствовало достоверному снижению уровня корти-костерона в крови спустя 120 минут после инъекции (табл. I). Дяя более ранних сроков наблюдения характерным явилось повышение уровня глшокортикоидов под воздействием лей-энкефалина и гакма-эн-дорфина (табл. I).

Изучение елкяния синтетического энзимоустойчивого аналога эакефалинов - Д-ала*"~лей^-арг®-эикефалина на уровень кортикосте-ровдов в крови крыс показало, что динамика показателей глжокор-тикоидных тормонов (П-ОКС и кортизола) имеет аналогичный 2-х фазный характер с той разницей, что под воздействием даларгина фаза уменьшения глюкоксртиковдной активности развивалась в более ранние сроки - уже через 60 минут после введения препарата.

Динамика уровня альдостерона не претерпевала сущоственннх

lfa¿TEya I

Влияние лей-, мет-внкефалана и jf-эвдорфина на содержание ксртЕкостерсна и кортизола в крови крае (М -w).

¡ Группы ЖИВОТНЫХ

Из7Чааше| í Интаквше + ЛЭ ! ИнтактЕне +~МЭ j йнтакпше + ГЭ

параметры; Контроль;-1-1-¡ ; ■,-¡-,-,-

i j30 мин (60 мин j 120 М2ш;30 шн ; 60 ыин;120 ianr¡30 мин ¡60 шш ¡120 иин

Кортикоо-

терон 5I,4±I,7 58,3±1^2 48,4±3 35,5±í" S0,4±2,6 48,3±2 42,2±4,1*50,6±2 53,7^0,9 37,614,9* (том/л) {12) (9) {9) (9) (9) (9) (9) (9) (3) (9)

Ксртивол

(нмоль/л) 9,6±2,24 22,I±4,f I3,3±4 7,7±I I0,3±I,5 П,2±3 10,2±3,2 П,8±2,2 18,6±2* 13,3±2,5 (12) (9) (9) (9) (9) (9) (9) (9) (S) (9)

Примечание: * обозначено Р<0,05 по отношении к контролю, *•*- Р ¿ 0,01;

ЛЭ - лей-энкефалин, ЦЭ - мет-энкефалин, ГЭ - гаииа-эндорфин.

изменений во всех сериях экспериментов.

Причиной возрастания глшокортикоидной активности на начальных сроках эксперимента могла Сыть энкефалинергическая стимуляция секции ШГ ( Славнов В.Н. и др., 1983; Reina R.1980 ). Дальнейшее снижение концентрации кортикосгерона и II-0KC в крови могло быть следствием угнетения энкефалинами кортшсостероадогенеза в надпочечниках, в пользу чего свидетельствуют литературные данные (Ельский В.Н. и др., 1985; Кошссаренко В.П.,1983).

Таким образом, как природные опиовднне пептида, так и их синтетические энзимоустойчивые аналоги оказывают в общем сходное влияние на содержание глшокортикоидных гормонов в крови интакт-ньа крыс: период кратковременного подъема сменяется снижением их концентрации. Поскольку синтетические энзимоустойчивые аналоги внкефалинов более стабильны в крови, чем природные ОП, их действие на глвкокортикоиды является более выраженным.

Действие одиоидшос пептидов на изменения уровня крртикоотв-роидов в динамике развития огоесс-пеакпии. В качества моделей стресса использовали подвешивание животных за шейную складку, голодание, сочетание этих воздействий, а также острую ишемию миокарда. Подвешивание крио за шейную складку в течение 3,5 часов не вызывало достоверных изменений уровня II-0KC и кортиаола (табл.2). Введение Д-вла2-лей5-арге-внкефалина в этом случае способствовало достоверному увеличению в крови содержания кортизола и II-0KC, что может быть следствием перехода организма на новый уровень адаптации. Голодание животных в течение 72 часов также не вызывало существенных изменений глшокортиковдной активности надпочечников (табл. 2), а введение энкефалина в этих условиях способствовало, вероятно, повышению компенсаторных резервов организма, так как достоверных изменений изучаемых Парамонов в крови мы не

Таблица 2

Я А

Влияние Д-вла**-ле5г-арг -анкефалина на содержание кортизола и П-ОКС в крови крыс при различных по тяжести видах стресса (М ±т).

Условия эксперимента Шортизол (ымольУд)

11-0КС (имоль/л)

Контроль (12) 9,?7±0,69 612,9±9,4

Подвешивание (8) 12,99±1,58 677,8^56,2

Подвешивание + даларгин 14,67±1,46 888,9±74*

Голодание (6) 9,5^0,89 702,2^42,3

Голода+ подвешивание 20,84±1,67" 734,0±48,7'

Голодание + даларгин (8) 8,48±1,0Э 1980^120,7

Голодание + подвешивание + даларгин (8) 19,74^0,79* 856^98,7*

Ишемия миокарда Зч (10) 21,48^2,11 2073^75,8

Ишемия миокарда Зч 4- даларгин (9) 20,77^1,39* 1270*80,7*

Ишемия миокарда 6ч (8) 30,9^3,5* 2890±80,8*

Ишемия миокарда 6ч даларгин (9) 19,6-2,2* 750,7±42,5*

Примечание: ^обозначено Р^.0,01 по отношению к контролю; в скобках указано количество ипвотннх.

обнаружили. Подвешивание крыс на 3,5 часа после 72-часового голодания выявило наличие неиспользованных резервов в кортикосте-ровдвсй системе, так как уровень глюкокортикоидннх гормонов при этом существенно повышался (табл. 2). Введение энкефалина в данном случае способствовало достоверному - в 2,5 раза снжжению уровня суммарных: II-0KC по сравнению с соответствующим контролем (табл. 2). Однако, на уровень кортазола пептид не оказывал существенного влияния. Возможно, супрессирупций эффект лиганда ОР обусловлен ингибированием стероидогенеза в надпочечниках (Керее-ва Д.Н. и др., IS85; Оразбаева Л.К. и др., 1985). При наиболее сильных экстремальных воздействиях - остром инфаркте миокарда, когда уровень кортизола в 5 раз превышал соответствующие показатели в контроле (табл. 2), введение даларгина органичивало стрессовую стимуляцию глхжокортикоидной функции надпочечников (табл. 2).

Таким образом, результаты работы позволяют говорить о моду-лирупцем влияния энкефалинов на гормональные механизмы адаптации в экстремальных состояниях, в частности, od'их способности уменьшать глюкокортикоидяую активность при стрессе.

Поскольку одним из пусковых механизмов стресс-реакции является активация симпато-адреналовой системы, а опиоидные пептиды угнетают секрецию и периферические эффекты кагехоламинов (Медведев О.С. я др., 1981; Саксон М.Е. и др., 1983), мы исследовали влияние опиовдных пептидов на стимулированную адреналином Функцию надпочечников. При стимуляции глюкокортикоидов о помощью введения интакгянм крысам адреналина через 30 минут происходило 3-х кратное увеличение в крови содержания иммунореактивного кортизола (£¿0,01). Введение адреналина на фоне опиовдных пептидов не вызывало существенных изменений уровня кортизола, концентра-

ция которого достоверно не отличалась от соответствующих величии в контроле (Р<£.0,5).

Таким образом, влияние ОП на стимулированную адреналином активацию глюкокортикоидной функции надпочечников сводится к снижению в крови уровня кортизола.

Роль мю- и дельта-рецопторов опиоидяшг пептидов в реализа-шш их действия иа коргикостероидн. Поскольку исследуемые нага опиоиднне нейропептиды являются смешенными мю- и дельта-агонис-тами (Шитин А.Г., 1987), выяснить роль тех или иных ОР в реализации действия опиовдов на функцию надпочечников явилось дальнейшим этапом наших исследований.

Интакгннм крысам вводили мю- и дельта-агснисты ДАГО и ДАДЛ и налоксон - блокатор опиатннх рецепторов.

Было показано, что дельга-агонист ДАД1 способствует достоверному снижению содержания кортизола в крови на 58$ (?< 0,01) по сравнению с контролем, а шьагоняст ДАГО не влияет на глзоко-кортикоиды, но увеличивает в крови уровень альдостерона (Р<0,05).

Это позволило предположить,' что угнетающее действие ОП на глЕКОКоргикоида обусловлено их влиянием на дельта-рецепторы. Очевидно, даларгин, являющийся в большей степени дельта-агонис-том (Шитин А.Г., 1987) реализует свой супрессирупций аффект на глюкокортикояды через дельта-рецепторы.

Подтверждением вышеизложенных данных поодужили эксперименты с применением налоксона, избирательно блокирующего ОР: в дозе 500 мкг/кг - мю-рецепторы (Wei J Л., 1984), в дозе I мг/кг - де-льта-рецепгоры (Faden /.J. 1984).

Кал видно из рис.1, даларгин способствует достоверному снижению содержания кортизола в крови CP < 0,05); совместное введение пептида о налоксоном в дозе 500 мкг/кг пе устраняло этот эф-

100

Рис. I Влияние налоксоца и его совместного введения с даларгином на концентрацию кортизола в крови крыс (в % от контрольных величин)

| | - ингактные + физиологический раствор

- интакгаые + даларгин

- иятактные + налоксон (1000 мкг/кг) + даларгин

- интактные + нялоксон (500 икг/кг) + даларгин

if - 13 -

фект. При совместном введении синтетического аналога с налоксо-ном в д086 I мг/кг концентрация кортнзола статистически достоверно не отличалась от контроля (Р<0,5).

Следовательно, есть все основания полагать, что оупрессиру-пдий эффект ОП на глюкокортикоидн реализуется через дельта-опиа-тнне рецепторы, локализованные в надпочечниках.

Исследование механизмов влияния опиощгних пептидов на функциональною активноогь кош надпочечников. В экспериментах на ин-такгных крысах изучалось воздействие стабильного аналога знкефа-Я&ов - даларгина на содержание аскорбиновой кислоты и ц-АШ в надпочечниках. По концентрации аскорбиновой кислоты судили об интенсивности кортнкостэроидотагева, по уровню ц-AI© - о механизм влияния ОП на кортикостероидн.

Энкефалин доотоверно снижал содержание ц-AI® в 2 раза по сравнению о контролем и увеличивал концентрацию аскорбиновой кислоты в надпочечниках на 30% (Р<С0,05).

Полученные результаты дают основание полагать, что ОП угнетают процесса биосинтеза кортикоотеровдов в надпочечниках, так как повышение содержания аскорбиновой кислоты л них служит показателем снижения кортикостероидогенеза. Механизм отмеченного явления, по-видимому, овязан оо снижением уровня ц-АШ в надпочечниках, так как процессы синтеза глпкокортиковдов являются ц-АШ-зависимыми (Щвев H.A., 1976).

Действие ОП на эффекта известных регуляторов кортикоотеоои-догенеза (АКТГ. ЩТ. Ca2*. пептиян эпифиза).

I. Изучение опиоидергичеокого влияния на адренокортикотр'оп-ную регуляцию функции корн надпочечников.

Ключевое значение в регуляции Кортикостероидогенеза принадлежит АКТГ (Комиссаренко В.П.,1977; Робу A.M., 1979; Транквилиа-

чш Н.И., 1973). Поэтому в своих дальнейших экспериментах ми изучала динамику кортикотропного гормона через 15, 30 и 60 шнут

р С Л

после введения Д-ала -лей -арг -энкеЗалина.

Показано, что пептид способствует быстрому, но кратковременному повшпению концентрации АКТГ в 1фова крыс: через 15 шпут после начала эксперимента уровень кортикогрсгаша повышался на 60?, а спустя 30 ж 60 шкут уже статистически достоверно не отличался от контроля (Р>0,5). По-ввдшому, отмеченные наш ранее повышенные значения глюкокортиксидов под действием 011 через 15 и 30 шну? после инъекции моасно объяснить опосредованным через АКТГ влиянием ошгоидннх пептвдов. Однако, снижение концентрации П-ОКС и кортизола в крови, наблвдаемое на последующа: сроках эксперимента - 60 и 120 минут после введения исследуемых лиган-дов ОР, нельзя трактовать как следствие изменения активности АКТГ, поскольку содержание его в этот период наблвдения достоверно не отличалось от контроля.

. Для исследования возможных механизмов опиоидергического влияния на АКТГ-з^висимую регуляцию короткоегероадогенеза проведены эксперименты с введением ОП на фоне АКТГ. В крови крыс определяли уровень кортизола, в надпочечниках - циклического А®.

Результаты опытов показали, что используемые аналоги опиои-даых "пептидов (ДАГО и ДАДИ) при совместном введении с АКТГ достоверно снижают уровень кортизола на 30? в крови и ц-А!й на 4755 в надпочечниках по сравнению с соответствупцшг значениями в группа крыс, получавших АКТГ.

Таким образои, ыогно заключить, что ОП способны угнетать действиа АКТГ на клетки-мишеня в коре надпочечников ж геы самым предупреждать влияние адренокортшсстропного гормона на биосинтез -глюкокортиковдов.

2. Влияние опиоидных пептидов на кальций-ппратстресилннЯ ...аханизм регуляции функции коры надпочечников.

В данном разделе работы мы изучали влияние ОН на уровень ГОТ и кальция в крови крнс, а также па вызываемые последними изменения глюко- и минералокортикозщной активнеети надпочечников.

В наших экспериментах аналоги энкефалинов (диларгин, ДОТ, ДАДЛ) не-влияли па интенсивность секреции ПТГ, но обладали внра-ражвнннм гипокальщемичвеким действием: уже через 30 минут после начала инъекции ОБ в крови наблццалссь статистически достоверное снижение уровня Са2+ (P¿0,05).

В последующих сериях опытов проведено комплексное исследование характера влияния Д-ала2-лей5-арг6-энкефалина на вызванные введением ПТГ изменения уровня АКТГ, кортизола и альдостерона в крови, ц-АЖ в надпочечниках. Установлено, что при инъекции пара-тиреоидина концентрация АКТГ уже на 15-Й минуте статистически достоверно возрастала и оставалась повышенной спустя 30 л 60 минут (табл. 3). Даларгин с ПТГ также существенно увеличивал содержание кортикотропного гормона в крови крнс, хотя пик нарастания его концентрации наблвдался несколько позднее - на 30-й минуте эксперимента показатель АКТГ почти в 5 раз превышал контроль (табл. 3), тогда как к 60-й минуте уровень ~АКГГ понижался по сравнению с предыдущими значениями, оставаясь достоверно выше соответствующих величин в контроле (табл. 3).

Содержание кортизола под влиянием паратиреоццина возрастало уже с 15-й минуты от начала опыта на 64$ и оставалось достоверно повышенным спустя 30, 60 и 120 минут после инъекции ПТГ (табл. 3). При совместном введении ПТГ с даларгином достоверных изменений уровня кортизола- относительно интактных животных мн не зарегистрировали (табл. 3). Иными словами, в данной серии наблюдалось

Таблица 3

Влияние Д-ала^-лей^-арг^-энкефалина с шратиреоидином на уровень АКГГ, кортязола з альдостерона в крови крае Ш^т).

Изучаем^ _ Группы животных_

; ; Интактные. + ПТГ ; Интактные + ПТГ + даларпш

параметры (Контроль ; | I 1 1 | | |--1-!-

" 15 мин ; 30 мин ; 60 мин ; 120 мин; 15 мин ; 30 мин ; 60 мин ¡120 мие

' ! 1

!

АК1Г 188±65 706±88* 4Э4±97* 727±П5* - 259±56 976±82** 651±97 * (пг/мд) (10) (9) ' (9) (9) (9) (9) (9)

Кортизоя П,8±2,4 22,6*7,^47,7*8,5* 20,6±3,6*25,6±6,5*13,7±8:,3 15,7±Э,3'"' Л,5±4,5 Ю,5±5,Б (нмоль/л) (10) - (9) (9) (9) (9) (9) (9) (9) . (9)

Альдостерон ^ '

(пг/мп) 621+79 683±45 1074±97 631±40 1018259 908±Ю 773±77 П87±98 852±59 ■ (10) (9) (9) (9) (9) (9) (9) (9) (9)

Цримечание: »обозначено Р¿0,05 по отношению к контролю,** - Рс0,01; в скобках - число наблюдений.

явление энкефалинергической блокаш стимулирущего эффекта па-ратгормона в отношении глпкокортаковдной функции надпочечников.

Уровень алъдостэрот при введении ЛТГ претерпевал фазные изменения: к 30-Я минуто - возрастание, через 60 минут - возвращение к исходному уровню н вновь статистически достоверное нови--шекие спустя 120 минут от начала инъекции ПТТ (табл. 3). Совмес тное введение ПТГ с даларгином индуцировало подъем мияерзлокор-тикодцной активнооти ужо на 15-й минуте эксперимента; через 30 минут - снижение до контрольных величин, а на 50-й и 120-й минутах после введения изучаемых биорегуляторов (1ТГГ и даларгин) отмечалось повторное увеличение концентрации альдостерона. Анализируя представленнне результата, можно сказать, что иод влиянием энкефалина произошло смещение минералокортнкоидной реакции во времени, то есть изменения концентрации альдостерона , принципиально не отличаясь от серии о введением только ПТГ, наступали и завершались несколько бнсгрее.

В дальнейшем мы оценивали динамику уровня ц-МВ> в надпочечниках при введении даларгина на фоне ПТГ. Паратгормон стимулировал подъем концентрации циклического аденозинмонофосфата уже к 15-й минуте, затем происходило снижение его уровня до соответст-вупцих показателей в контроле. Инъекция даларгина совместно с паратиреоидином предупреждала вызванный последним подъем уровня Ц--АШ в надпочечниках.

На основании вышеизложенных результатов можно заключать, что о1шоидны9 пептиды подавляют стимулированную паратгормоном активацию глшокортлкоидной функции надпочечников и ускоряют • стимулирупцее действие параггормона на мшералокортикоиды.

Для изучения воздействия ОН на стимулированную Са2+ глюко-и кинералокортикоддную функцию надпочечников проведены экспери-

- Id -

мелты по совместному введении хлорида кальция и днларгина.

№С12 стимулировал глюко- и минералокортикоидную активность кадиочвчников: уровеиь кортизола возрастал на 58$, альдосторока ~ на 4Са ио отношению к соответствуйте показателям в контроле При введении хлорида кальция с даларгнном содержание кортизола оставалось достоверно повышенным по сравнению с контролем, а уровень альдостерона статистически достоверно на отличался от показателей шнералокортякоидной активности у интактных крыс с инъекцией фи-аеологичэокого раствора (Р >0,5).

Таким образом, влияние даларгина на вызванное Са2+ увеличение уровня кортизона и альдостерона выражалось в снижении содержания альдостерона. На вызванные СаС12 изменения уровня кортизола дала-ргин существенно не влиял.Возможно, стимулирующее влияние ионов Са2+ на глюкокортикоидную функцию надпочечников происходило за счет увеличения в крови содержания АКТТ (Hetua н,158о). Даларгин, как ужо отмечалось, также повышал уровень кортикотропика в крови, поэтому при совместном введении Са с даларгином згмотпых изменений глюкокоргикчидпой активности не происходило. Регуляция ык-кералокортиксидной функции почта не зависит от АКГГ, поэтому, вероятно, в наших экспериментах проявилось' угаетапдее влияние энке-фагаша на симулированный Ca2t подъем уровня альдостерона.

3. Шляние ошаоидншс. пептидов на виявашше введением эш-талашна измеаения глотю- и мииералокортикоидной активности надпочечников.

В данной раздело изучали динамику АКТГ, fl-OKC, кортизола, альдостерона в крови через 15, 30, 60 и 120 минут после введения Д-ал;.''-л{.'йй-аргй-эпкв<|ампа на фона эпиталамшо.

Олиталамин способствовал достоверному снижению уровня АКТГ в 3 pasa спустя 30 и ('>0 минут поело инъекции. Совместное с далар-

гином введение эпифизарного экстракта ивдуцировало кратксвремеп-ный подъем содержания коргикотропина к 15-й минуте эксперимента, в дальнейшем — через 30, 60 и 120 минут не отмечено достоверных изменений концентрации АКТГ в крови крыс. Уровень глюкокоргикоя-дных гормонов (II—ОКС и кортизол) на всех сроках наблюдения не претерпевал существенных изменений, несмотря на существенное снижение концентрации ЖЕГ, отмеченное спустя 30 и 60 минут после введения апиталамина. Совместное введение эпиталамина с дачарги-ном также не вызывало существенных изменений глюкокортикоидной активности надпочечников на всех сроках наблюдения.

Эпифизарный экстракт стимулировал минералокортикоидную активность надпочечников: уровень альдостерона возрастал на 15-й минуте и оставался повывэнным в течение всех последуших сроков наблвдения. Совместное воздействие апиталамина с энкефалином способствовало достоверному снижению содержания альдостерона через 60 и 120 минут по сравнению с" соответствувдими значениями в группе крыс, получавших эпиталамин и приближалось к уровню мине-ралокортикоида в контроле.

Таким образом, ошговдные пептиды способствуют подавлению стимулированной эпифизом минералокортиковдной функции надпочечников.

ВЫЕЗД

1. Под влиянием опиоидных пептидов и их синтетических аналогов динамика уровня глюкокортикоидов в крови претерпевает 2-х фазные изменения: период кратковременного подъема концентрации гормонов сменяется фазой снижения их уровня у интактных крыс.

2. Реализация супрессивного эффекта опиоидных пептидов на кортЕКостброидогеггеэ осуществляется преимущественно через дельта-

- 20 -опкатные рецептори.

3. Опиоцщше пептида ограничивают индуцированную стрессом активацию глшоксртикоидной функции надпочечников.

4. Б механизмах действия ошоидных пептидов на функцию коры надпочечников имеет значение их ингибируицее влияние на ц-АШ>-завксимые процессы биосинтеза гллкокортикоидов.

5. Опиоидаые пептиды окааывают ыодулирупцее действие на аффекты известных регуляторов функции коры надпочечников (АКТГ, ГПТ, Са2+, эпифиз).

СШСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. О роли энкефалинов в регуляции функции надпочечников// Бейропептиды: их роль в физиологии и патологи, - Томск. - 1985.-С. 90-91.

2. Энкефалины и гормонально-метаболические реакции при различных во тяжести видах стресса в эксперименте// Билл, эксперта. Йиол. и мед. - 1985. - КЗ. - С. 286-289 (с Ю.Б. Лишмановым, Л.А. Адекшнской)

. 3. О роли опиатного торможения функции гилоталамо-гипофизар-во-падпочечшшовсй системы при стрессе// Бшд. эксгор. биол. и мед. - 1985. - Ш. - С. 638 {с Ю.Б. Лишмановым, Б.Д. Слепушкшшм и др.)

4. Влияете датомединов эпифиза, сердца и сосудов на активность гипофизарно-надпочечниковой системы у крыс// Цигомеданы. -Томск. - Г986. - С. 91.

5. Влияние некоторых эндогенных пептидов на пролиферативную активность лимфоцитов// Сб. трудов Читинского медицинского института. - Чита. - 1985. - С. 47.

6. Влияние адигалачика на изменения некоторых параметров

психофизической активности и содержание гормоном у jji.tкф-?р1тч~с--ко Л кропи здоровых ладей// Тез. докл. конф. - Лечяи град. - КЗ'.'. •0. 37. (с Бриоши A.A., АлекмянскоЯ Л.А. и др.)

7. Измонопия биояяяпоских параметров при агстргг;авьннх состояниях под действием оплоидннх пептидов// Тез. докл. кс??Т>. "Биохимия - медзщяпэ". - Ленинград. - 1383. - С. 176. (со Слепу-пткиншл В.Д., ЗолоеЕКм Г.К. и др.)

8.The role оГ enJtephnlins In the ppthoceneni.s cf soute my^cp-rdiel Infrare 11on//Exp erin ont al patholosy»-1983.-T.35.-H 2.- V. )?ч -131 (mlth Slepuahkln V.D., Pavlsnko V.S., Zoloev O.K. е. n.)

9. Блокада энкофалинаш стимулирутщего влияния пяратгормо-на на функции кори надпочечников// Фиэиол. яурн. СССР. - I9P0. -№3. - с.

Заказ 213.Тира* 100. Ротапринт ТИАСУРа.