Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на Т-клеточное звено иммунитета и фетоплацентарный комплекс в эксперименте у крыс

Р М ' ! '."С"}

^ ! 1" На правах рукописи

ЛАГОВСКАЯ Ирина Вячеславовна

УДК 618.39—08:615.831.7

ВЛИЯНИЕ НИЗКОИНТЕНСИВНОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА Т-КЛЕТОЧНОЕ ЗВЕНО ИММУНИТЕТА И ФЕТОПЛАЦЕНТАРНЫЙ КОМПЛЕКС В ЭКСПЕРИМЕНТЕ У КРЫС

14.00.36 — Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1997

Работа выполнена п Ивановском научно-исследовательском институте материнства и детства имени В. Н. Городко-ва МЗ РФ.

Научный руководитель —

доктор медицинских наук, профессор Н. Ю. Сотникова.

Научны й консультант —

кандидат медицинских паук Л. П. Перетятко.

Официальные оппоненты:

академик РАЕН, доктор биологических паук, профессор В. Я. .Аркан,

доктор медицинских наук В. Ф. Семенков.

Ведущее учр е.ж д е н и е —

Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологин РАМН.

Защита диссертации состоится « . . . » . . . 1997 г.

в ... часов на заседании диссертационного совета Д 084.14.06 Российского государственного медицинского университета по адресу: 117437, Москва, ул. Островитянова, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ. Автореферат разослан « ^. » . 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доцент

Т. Е. КУЗНЕЦОВА

Актуальность работы

Выживание плодного аллотрансплантата в организме матери обеспечивается комплексом анатомических, гормональных и иммунных факторов. большинство из которых действует на уровне маточно-плацентарного барьера (Говалло В.И., 1987). Иммунный ответ материнского организма характеризуется сбалансированностью разнонаправленных иммунологических реакций как на системном уровне, так и в зоне разделения кровотока матери и плода в плаценте (Ломакин М.С., 1991; Clark D.A., 1984). Нарушения во взаимодействии звеньев иммунной системы мать-плацента-плод в ряде случаев являются непосредственной причиной акушерской патологии. Вполне очевидно, что в этих условиях развивающийся плод не может оставаться интактным.

Одним из перспективных немедикаментозных методов лечения осложненной беременности является воздействие на биологически активные точки инфракрасным излучением малой мощности.

Несмотря на довольно значительное количество исследований, механизмы влияния лазерных лучей на организм до настоящего времени не объяснены. Предпринимаются только первые шаги использования низкоинтенсивных лазеров инфракрасного диапазона (НИЛИ ИК) в акушерстве для лечения внутриутробной гипоксии плода (Любимова А.И., 1974; Городков В.Н., Посисеева Л.В., Перетятко Л.П., 1989; Орджоникидзе Н.В., 1994). Работы, предпринятые в этом направлении, не позволяют в полной мере судить об эффективности этих методов и определяют необходимость проведения экспериментальных исследований на животных по изучению механизмов воздействия "мягких" лазеров на иммунную, гормональную системы у беременных крыс в норме и при патологии. Необходим поиск объективных критериев, подтверждающих терапевтический эффект безмедикаментозной рефлексотерапии.

Это и определило основную цель нашей работы.

Цель работы

Установить патогенетические особенности воздействия ннзкоинтен-с ивы о го лазерного излучения (НИЛИ) на Т-клеточное звено иммунитета и феюплацентарный комплекс в эксперименте для обоснования возможности практического применения.

Задачи исследовакнмя

1. Выявить особенности влияния инфракрасного лазерного излучения на Т-клеточное звено иммунитета и гормональный фон у крыс с физиологически протекающей беременностью и беременностью, осложненной экспериментально созданной гипоксией.

2. Установить особенности структурных перестроек в последе при гипоксии и под влиянием низкоинтенсивного лазерного излучения у лабораторных животных в эксперименте.

3. Оценить физиологическое развитие и состояние иммунного и гормонального статуса потомства, родившегося от крыс, подвергшихся влиянию лазеротерапии во время осложненной беременности.

Научная новизна исследования

■ I. Впервые установлены в эксперименте особенности влияния лазеротерапии, основанной на активации кожи в зоне проекции тимуса инфракрасным излучением, на гормональный фон, Т-звено иммунной системы и сосюяние фетоплацентарного комплекса у беременных крыс.

2. Выявлены особенности влияния низкоинтенсивного лазерного излучения при беременности на фоне искусственно создаваемой гипоксии на ' морфофункционалыюе состояние плаценты, антропометрические параметры плодов, состояние иммунной и гормональной систем у самостоятельно родившихся крысят.

3. Ошечено положительное влияние ИК-лазерного излучения на течение осложненной беременности, донашивание до срока с рождением плодов, физиологическое развитие которых соответствует сроку гестации.

4. Выявлен выраженный лечебный эффект НИЛИ ИК-диапазона экспериментально созданной гипоксии у крыс, не оказывающий отрицатель-

ного воздействия на плод и новорожденного при крайне низкой терапевтической дозе 0,9 Дж/см2, 300 сек, 6 сеансов.

Практическая значимость работы

1.Получены новые данные, свидетельствующие об определенном им-мунокорригируюшем влиянии ИК-лазерного излучения при воздействии на кожу в зоне проекции тимуса у беременных крыс с внутриутробной гипоксией плодов, и разработаны подходы к управлению этим процессом.

2. На основании экспериментального изучения влияния НИЛИ на параметры иммунного статуса, гормональный фон и состояние фетопла-иентарного комплекса обоснована возможность использования маломощных "красных" лазеров в акушерской практике, как эффективного немедикаментозного метода лечения внутриутробной гипоксии плода, исключающего тератогенное действие фармакологических препаратов на плод.

3. Получены новые данные, свидетельствующие о развитии компенсаторно-приспособительных процессов на тканевом и структурном уровнях (гиперплазия сосудов со стороны плодового кровотока, изменения со стороны трофобласта) под влиянием НИЛИ ИК-дпапазона с длиной волны 920 им за счет накопления липидных капель в клетках третьего слоя трофобласта. приводящего к усилению стероидогенеза.

4. Разработана модель, позволяющая дальнейшее изучение механизмов влияния полупроводниковых инфракрасных лазеров на развивающийся эмбрион и новорожденного в постнатальном периоде.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практическом обществе иммунологов (Иваново, 1995 г.), на Российской паучпо-практической конференции социал-гигиенистов и организаторов здравоохранения (Иваново, 1995 г.), на научно-практической конференции Коллегии УЗО '•Организация иммунолог ической службы в Иванове и Ивановской области" (Иваново, 3 июня 1996 г.). на Республиканском семинаре "Здоровье семьи и репродуктивный период" (Иваново, Х-9 октября 1996 I.). па юбилейной конференции, посвященной 40-леиио и (учении и ирактиче-

ского применения в России и странах СНГ диагностического и лечебного метода традиционной Восточной медицины чжень-цзю (Нижний Новгород, 24-26 декабря 1996 г.).

Апробация работы проведена на совместной научно-практической конференции Ивановского НИИ Материнства и детства им. В. Н. Город-кова МЗ РФ и кафедры иммунологии Мед. Академии (протокол от 4 февраля 1997 г.).

По материалам диссертации опубликовано 3 работы.

Получена приоритетная справка на изобретение: "Способ лечения невынашивания ранних сроков" (приоритетная справка N95100592 от' 27.01.1995).

Основные положения, выносимые на защиту

Ннзкоинтенсивное излучение ИК-днапазона стимулирует Т-звено иммунной системы, способствует компенсаторной перестройке в тканях плаценты, увеличению массы, улучшению функционального состояния плода, восстановлению иммунного и гормонального статуса у самки и новорожденных, вследствие чего являегся эффективным немедикаментозным методом лечения хронической внутриутробной гипоксии плода при беременности, не оказывающим вредного воздействия на потомство у крыс. Следствием этого являются увеличение массы и улучшение функционального состояния плода, восстановление иммунологических показателей и гормонального статуса у новорожденных.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 154 страницах машинописного текста, со-сю1П из введения, 3 разделов обзора литературы, материалов и методов исследования, шести глав собственных исследований, обсуждения, основных выводов, практических рекомендаций и библиографического списка использованной литературы. Последний включает 118 работ на русском и 73 на иностранных языках. Диссертация иллюстрирована 29 рисунками и 13 кшлицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Эксперимент проводился на 70 лабораторных белых беспородных крысах массой тела 150-240 грамм и 254 крысятах, родившихся от этих самок. Исследование полового цикла самки грызунов проводили методом изучения влагалищных мазков (Кабак Я.М., 1958). Для спаривания к каждой самке (44 крысы), у которой определяли стадию проэструса или эстру-са. вечером подсаживали самцов в соотношении 4:1. Первый день беременности устанавливали на основании обнаружения сперматозоидов в вагинальном мазке нормально циклируюших самок. Первоначально изучали влияние НИЛ И на иммунную систему у здоровых беременных и небеременных крыс (42 самки). 28 беременных крыс, согласно условиям эксперимента. были разделены на 3 группы:

1 группа - 9 крыс,'у которых беременность протекала в физиологических условиях и закончилась нормальными родами в сроке 24 дня. (контроль);

2 группа - 11 беременным крысам создали модель плацентарной недостаточности с Помощью гипоксии в барокамере по методу, предложенному Савченковым И.Ю. и Лобынцевой К.С. (1980). Двухчасовую гипоксию животным создавали в барокамере, начиная с 7-8 дня беременности на протяжении 6 дней. В первый день животных поднимали на "высоту" 2 тыс. м. во второй - на 4 тыс. м, а начиная с третьего дня - на б л ыс. м над уровнем -моря.

3 группа - 8 беременным крысам воздействовали низкоинтенсивным излучением инфракрасного диапазона на область грудины в зоне проекции тимуса на фоне искусственно создаваемой гипоксии в течение 5 минут г те же сроки по топ же схеме, что и во второй группе.

За сутки до предполагаемых родов у 4.животных в каждой группе под эфирным наркозом извлекали плоды и последы. У 16 крыс, которые рожали самостоятельно, оценивали продолжительность беременности, количество потомства, среднюю плодовитость крыса, массу новорожденных

крысят, взвешивание которых проводили в 2 и 4 месяца.

Материалом для исследования служили плаценты и периферическая кровь из хвостовой вены у крыс и крысят.

Рефлексотерапию проводили полупроводниковым низкоинтенсивным излучателем инфракрасного диапазона и длиной волны 920 нм на область грудины крысы в зоне проекции тимуса. В эксперименте ежедневно использовали минимальную мощность излучения 11)% от 30 мВт, которая составила 0,9 Дж/см2 (курс - 6 дней по 5 минут).

Для Ьценки состояния иммунной системы применяли стандартные методы. Мононуклеарные клетки выделяли из периферической крови крысы скоростным центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографин (d-1.078) по методу Boyum А. (1968). Количество Т-, Т-активных лимфоцитов в крови определяли методом спонтанного розетко-образования (Е-РОК) и (Еа-РОК) с эритроцитами барана (ЭБ) по Gondal М. (1972). Животных предварительно иммушппровалп взвесью ЭБ в дозе 25':;> по 0,3 мл. внутрибрюшинно (Чередеев А.Н., 1976). Количество В-лимфоцитов определяли методом ЕАС-розеткообразования (ЕАС-РОК) по Mendes M.F. (1973); для оценки функциональной активности Т-лимфоцитов использовали прямую реакцию торможения миграции лейкоцитов (PTMJ1) rio George М. и Vaughan L. (1962) в модификации Новикова Д.К. (1986). Клетки стимулировали ФГА-Р Болгарской фирмы "Maimex" в дозе 2 мкг/мл. Результаты реакции оценивали по миграционному индексу (МИ), который.расчитывали по формуле:

длина зоны Min рации в присутствии митогеиа

ММ";,-..........................................................-.......х 100%

длина зоны миграции в контроле

Для определения количества зрелых Т-лимфоцитов использовали маркер CD3+. который входит в антиген-распознающий комплекс зрелых 'Г-к.теюк. Количество зрелых Т-хелперов/индукторов (Th) определяли по наличию поверхностных CD4+ антигенов (АГ). Количество клеток, имеющих ют пли иной маркер, определяли методом непрямой иммуноперокси-

датой реакции с МАТ на препаратах лимфоцитов типа "высушенной капли" (Глузман Д.Ф., Барышников А.10., 1986; Сандова О.М., 1993). В работе использовали моноклональные антитела (МАТ) серии И КО 101 и И КО 111 фирмы ТОО "Диагно Тех" г. Москва: для определения CD3+ клеток -MAT DT-anti-T против антигена Т-клеток крысы, для CD4+ - MAT DT-anti-CD4R против антигена CD4 крысы (Сандова О.М., Барышников А.Ю.. 1993).

Критериями оценки морфофункцнонального состояния плаценты явились органометрические. гистохимические, гистостереометрические и ультраструктурные стандартные морфологические методы (Пирс Э.. 1962; Лиллн Р., 1969; Меркулов Г.А., 1969; Уикли Б., 1975;Кононский А.И.. 1976; Аитапднлов Г.Г.. 1990).

Количественное содержание эстрадиола, прогестерона, трийодтиро-нина (ТЗ), тироксина (Т4). тиротропина (ТТГ) в сыворотке крови у крыс определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) на фотофлюо-риметре фирмы "Wallac" (Финляндия). Для работы использовали реактивы фирмы "Déifia".

Всего проведено 795 иммунологических исследований, 195 гормональных анализов. 321 - органометрическнх, 1284 - гистологических, 1070 -гистохимических. 749 - ультраструктурных.

Статистическую обработку данных проводили на персональном компьютере марки IBM-386 с помощью набора стандартных математических программ для статистической обработки "Статтраф".

Результаты исследований и их обсуждение

В результате проведенных исследований выявили сезонные изменения иммунологических показателей у небеременных крыс. У животных в шмппй период наблюдалось достоверное снижение функциональной ак-шштсти Т-лимфоцитов (р<0.02), количества Ç-POK (р<0.05) н П-активных лимфоцитов (р<0.()1). В то же время достоверных различий и содержании В-клеток по сеаднам не отмечалось (р>0.05).

Было усыновлено, ню в группе здоровых как нсберемепных, так и

беременных самок низкоинтенсивное лазерное облучение области грудины н дозе 0,9 Дж/см", 300 сек в течение 6 дней не оказывает ни стимулирующего, ни ингибируюицего эффекта на иммунную систему и не вызывает суще-стенных изменений в иммунологических параметрах. Наблюдавшееся у небеременных крыс достоверное увеличение количества Е-активных лимфоцитов (р<0.05), возможно, было связано не с дополнительным выходом из тимуса в кровеносное русло Т-лнмфоцитов, а с усилением экспрессии Е-рецеитора на этих клетках.

Исследование иммунной системы иммунизированных эритроцитами барана крыс показало, что на 7-8 день беременности общее количество Е-РОК составило 36,5±1,74%, Е-активных-РОК - 25,13±1,46%, CD3+ -45,38±1,58%, CD4+ - 26,88±0,87%, миграционный индекс - 77,63±4,32%; на 13-14 день ^беременности: Е-РОК - 36,13+0,99%, Е-активных-'РОК -24,00±0,91%, CD3+ - 46,00±0,71 %, CD4+ - 26,00±0,38%, МИ - 75,34±4,89%. Перед родами (19-20 дней беременности) содержание Е-РОК в периферической крови у крыс было 38,25+0,77%, Е-активных-РОК - 27,25±1,39%, CD3+ - 44,25±1,79%, CD4+ - 30,75±0,98%, МИ - 76,00+6,28%.

Таким образом, нам не удалось выявить количественных изменений в содержании Т-лимфоцитов, за исключением повышения CD4+ хелпе-ров/индукторов перед родами (р<0.01).

В эксперименте на однократное воздействие 2 часовой гипоксией на "высоте" 2000 метров В группе крыс в сроке 7-8 дней беременности проис-. ходило достоверное снижение Е-РОК на 16% (р<0.05), Е-активных-РОК на 17% (р<0.05), CD3+ на 25% (р<0.001), CD4+ на 14% (р<0.05) относительно показателей контрольной группы. Достоверных различий в выработке МИФ у животных 1 и 2 групп не отмечалось (р>0.05). Резкое снижение иммунологических показателей у животных 2 группы после первого гипокси-ческого воздействия, возможно было связано и с реакцией организма крысы па стресс.

Окончание последнего сеанса барокамерной гипоксии с возрастаю-

шей динамикой воздействия приходило на 13-14 день беременности. Забор крови производили через 24 часа после окончания гипоксического воздействия. В наших опытах дефицит Т-клеточного звена иммунитета при баро-камерной гипоксии в течение 6-ти дней сопровождался угнетением функциональной активности Т-лимфоиитов по показателям выработки МИФ в ответ на стимуляцию ФГА (р<0.001). Содержание Е-РОК, Е-активиых лимфоцитов, CD.V у крыс 2 группы было значительно ниже показателей, чем в контрольной группе животных в теже сроки беременности (р<0.00!, во всех случаях). Однако прослеживалась тенденция к повышению содержания CD4+ лимфоцитов с хелперной активностью у крыс, перенесших длительную гипоксию во время беременности (р>0.05). Сниженные показатели Т-эвена иммунитета у крыс этой группы сохранялись до самых родов.

Таким образом, периодическое действие барокамерной гипоксии в течение 6 дней у беременных крыс приводило к снижению функциональной активности и количественных показателей Т-звена иммунитета.

При анализе показателей иммунитета у крысят, перенесших внутриутробную гипоксию, отмечали достоверное снижение Е-РОК (р<0.0()1), Е-акгивных-РОК (р<0.001), отсутствие выработки МИФ (р<0.001), по сравнению с параметрами контрольной группы потомства, родившегося от крыс, беременность у которых протекала в физиологических условиях. В тоже время содержание CD3+, CD4+ было аналогично показателям в контрольной группе крысят (р>0.05).

Следовательно, наиболее чувствительной к дефициту кислорода оказалась популяция розеткообразующих клеток, несущих Е-адгезивный рецептор к эритроцитам барана, играющий важную роль в межклеточном взаимодействии.

При проведении первого сеанса лазеротерапии в течение 5 минут после 2 часовой барокамерной гипоксии на "высоте" 2000 метров в 3 группе беременных крыс происходило повышение иммунологических пока кислей по сравнению с таковыми но 2 группе животных. Содержание Е-РОК уне-

личилось с 31,73±1,40% до 33,5±1,74% (р>0.05), Е-активных-РОК - с 20,82±1,49% до 26,33±1,20% (р<0.01), СТО* - с 36,00±1,45% до 47,33+3,27% (р<0.()2), СЭ4+ - с 23,91+1,01% до 25,22±0,74% (р>0.05), МИ - с 92,60±6,49% до 74,43±4,58% (р<0.05).

После 6 сеансов лечения произошло полное восстановление иммунологических показателей до таковых и контрольной группе, которое сохранялось до самых родов.

Можно предположить, что стимуляция грудины в зоне проекции тимуса в эти группе крыс приводит к резервному выбросу в кровь СЭЗ+ лимфоцитов или изменению физико-химического состояния мембран лим-' фонтов и в особенности их примембранных слоев с усилением экспрессии рецензора к ЭБ и СОЗ АГ, по-видимому, за счет рефлексогенного воздействия.

После проведения лечения гипоксии у самок инфракрасным лазерным излучением, в периферической крови их потомства выработка МИФ и содержание Е-РОК, Е-активных-РОК, СЭ4+ было значительно выше, чем у крысят 2 группы (р<0.001, во всех случаях). Однако не наблюдалось достоверных различий в содержании СОЗ+ Т-лимфоцитов по сравнению с контрольной группой крысят (р>0.05 ).

Таким образом, низкоинтенсивное лазерное излучение ИК-диапазона способствовало иммунокоррекции Т-звена иммунитета.

В целостном организме иммунный ответ не может быть реализован только в рамках системы иммунокомпетентных клеток и находится под контролем эндокринной системы (Корнева Е.А., Шхинек Э.К., 1988).

У животных с экспериментально созданной внутриутробной гипоксией плода (2 группа) содержание эстрадиола значительно снижалось по сравнению с таковым в контрольной группе с 0,124±0,006 пто1/Ь до 0.102±0,009 пто1/Ь (р<0.05). Наблюдалась тенденция к снижению прогестерона с 276,29± 10,97 ппю1/Ь до 261,49±20,88 пто1/Ь (р>0.05). По-видимому, это было связано с морфологическими изменениями в самой

плаценте. Низкий уровень эстрадиола и прогестерона в периферической крови может свидетельствовать о плацентарной недостаточности и позволяет оценить функциональное состояние плода (Посисеева Л.В., Иоников А.П., Ломыга А.А., Брагпиа И.К., 1985).

Известно, что при беременности происходят не только структурные, но и функциональные изменения щитовидной железы (Беспалова В.А., 1985; Бережапская С.Б., Андреева Н.Б., 1985).

Во второй группе животных отмечалось достоверное снижение тироксина (Т4) и трийодтнронина (ТЗ) по сравнению с таковыми в контрольной группе (р<0.001, во всех случаях), достоверных изменений в секреции IT Г при этом не наблюдалось (р>0.05).

После проведении лечения НИЛИ на фоне гипоксии у беременных самок (3 группа) содержание эстрадиола повышалось с 0,102+0.009 nmol/L до 0,2()9±0.016 nmol/L (р<0.001) и отмечалась тенденция к повышению содержания прогестерона с 261,49±20,88 nmol/L до 278,7I±6,24 nmol/L (р>0.05).

Что касается гормонов системы гипофиз-щитоипдная железа, то после шести сеансов НИЛИ отмечалось достоверное повышение концентрации трийодтнронина на 7% (р<0.05) и тироксина на 20% (р<0.05) в периферической крови беременных самок относительно показателей 2 группы животных, в то время как содержание ТТГ существенно не изменялось (р>0.05).

Таким образом, воздействие НИЛИ ИК-диапазона приводило к нормализации уровня гормонов фетоплацептарного комплекса и тиреоид-ных гормонов у беременных самок с внутриутробной гипоксией плода.

У новорожденных крысят, перенесших внутриутробную гипоксию, отмечалось достоверное снижение трийодтнронина по сравнению с контрольной группой крысят (2,45±0,13 nmol/L и 2,84±0,09 nmol/L, соответственно. р<0.02), а также наблюдалась тенденция к снижению i нроксина (34,93±1,34 nmol/L и 38,30+1,35 nmol/L, соответственно. р>0.05).

У потомства, родившегося от самок, которым проводили НИЛИ на фоне гипоксии, отмечалось достоверное повышение содержания ТЗ по сравнению со второй группой крысят (2,89±0,11 пто1/Ь и 2,45+0,13 пто1/Ь, соответственно, р<0.05). которое соответствовало показателям в контрольной группе потомства (р>0.05).

При сопоставлении морфометрических параметров у животных, подвергшихся гппоксическому воздействию, относительно I группы, установлено достоверное снижение длины пупочного канатика с 1.8±0.02 см до 1.4+0.03 см (р<0.001) и линейных размеров материнской поверхности последа с 1,8±0,06 см до 1,3±0,0! см (р<0.001).

Средняя масса плацент во 2 группе составила 0,54±0,022 г, объем -0,6±0.02 см3; площадь материнской поверхности 0,23±0,01 см2. Плацентар-но-плодовый коэффициент был равен 0,11+0.01. Средняя масса плаценты и ее объем достоверно повышались за счет увеличения количества плодовых капилляров на 12.7% (р<0.05) и их диаметра на 9% (р<0.001) по сравнению с контролем. При этом толщина плацентарного барьера уменьшилась в 2.2 раза (р<0.001).

В лабиринте преобладали резко расширенные и полнокровные материнские синусы, напоминающие "кровяные озера". Наблюдался трехслойный трофобласт либо в виде узкой безъядерной полоски, либо с одним круглым ядром, который разграничивал материнский кровоток от днляти-рованных. умеренно полнокровных плодовых капилляров.

Повреждающий фактор (гипоксия) оказывал негативное воздействие ис только на тканевом, но и на клеточном уровне. Ядра в клетках трофобласт» первого слоя практически не обнаруживались. В единично встречающихся диплоидных ядрах конденсированный хроматин был расположен но периферии ядерной оболочки, либо происходила конденсация чу-хроматпновых структур. В уменьшенной по объему цитоплазме трофобла-па отмечалось снижение количества органелл с наличием дистрофических и деструктивных изменений, таких как деструкция крисг. сочетание гомо-

генизацни с крупноочаговыми просветлениями матрикса, локальное разрушение наружных мембран и вакуолизация митохондрии, фрагментация агранулярного ретикулума, гипорибосомня.

Деструктивные изменения сопровождались снижением их функции, о чем свидетельствовало истощение запасов гликогена в гликогеновых клетках и резкое снижение гистохимического коэффициента с 0.7 до 0.3 условных единиц (р<0.001).

Такого рода изменения приводили к нарушению трофической, энергетической, транспортной, синтезирующей функций в последе, которые в свою очередь явились причиной резорбции от 1 до 3 плодов, формирования единичных врожденных уродств и задержки внутриутробного развития основной массы плодов.

Дисциркуляторные и дистрофические процессы, обусловленные нарушениями материнского и фетального кровотока у 2 группы животных, преобладали над компенсаторно-приспособительными процессами и оказывали негативное воздействие не только на внутриутробно развивающиеся плоды, но и их постнатальное развитие, что подтверждалось достоверным снижением их массы тела на втором и четвертом месяцах жизни (р<0.02).

Средняя плодовитость самок этой группы составила 8,30±0,3. Новорожденные не соответствовали сроку гестацни и были с выраженными признаками задержки внутриутробного развития (цианоз кожи и слизистых, вялость, малоподвижность).

Продолжительность беременности у крыс с экспериментально созданной гипоксией составила 22,3±0,40 дня. Общее число потомства - 83. Масса самостоятельно родившихся крысят была равна 4,77±0,53 г, в два месяца составляла 65,31±1,66 г, а в четыре месяца была ниже, чем в контрольной группе животных (р<0.02).

Нами были выявлены морфологические изменения в плацентах и морфометрическпх параметрах плодов у животных, прошедших курс лече-

ния 1П1Л11 на фоне гипоксии. 1

Средняя длина пуповины составила 1,7+0,02 см. Средние размеры планеты: по диагонали - 1.5+0.2 см и 1.6+0,1 см; толщина - 0,3±0,01 см. Средняя масса, объем и площадь материнской поверхности соответственно составили: 0.426+0.016 г, 0.5+0.02 см-1. 0.17±0,012 см*. Планентарно-плодовый коэффициент был равен 0,10±0,01. Произошло снижение частоты встречаемости капилляров в единице площади плацентарной ткани на 5"" но сравнению с показателями 2 группы (р<0.05). Диаметр плодовых капилляров п последах,'крыс 3 группы был достоверно ниже чем у животных с внутриутробной гипоксией плода (0,147+0,009 мм и 0.169±0.004 мм, соответственно; р<0.05). Морфометрический показатель толщины плацентарного барьера после облучения был выше, чем у животных без лечения (0.73±0.()7 мкм и 0,49+0,03 мкм, соответственно; р<0.001), но еще оставался сниженным по сравнению с контролем (р<0.01)..

На фоне НИЛИ наблюдалось смещение объемных параметров структур лабиринта в сторону уменьшения материнских синусов на 10% (р<0.05) и увеличения трофобласта на 34% (р<0.01).

Ультраструктурные исследования плацент экспериментальных животных показали, что НИЛИ ИК-диапазона оказывало воздействие не столько на тканевом, сколько на клеточном и субклеточном уровне.

В органеллах клеток трофобласта (митохондрии, пластинчатый комплекс, гранулярный эндоплазматически» ретикулум, рибосомы) наряду с признаками перенесенной гипоксии (просветление матрикса, деструкция, частичная редукция, гипорибосомия) обнаруживались признаки, свиде-re.Ti.ciвующие о репарации органелл в ответ на повреждение - гиперплазия и пшертрофня митохондрий, гиперплазия гранулярного эндоплазматпче-ского регикулума, очаговая гиперрибосомия. Вследствие этого можно предположить, что НИЛИ способствовало развитию компенсаторно-приспособительных реакций в плацент экспериментальных животных.

И той же группе самок в циюплазме клеток трофобласта отмечалось

значительное количество пиноцитозных везикул, особенно в зонах контакта с материнскими синусами. Микропнноцитозные везикулы блокировали участки разрушенной плазмолеммы и клеточных мембран. В трофобласти-ческих клетках второго слоя количество везикул уменьшалось. В цитоплазме трофобласта промежуточного слоя преобладали органеллы, участвующие в синтезе энергетических субстанций и гормонов: это большое количество разной величины митохондрий с тубулярно-везпкулярными кри-сгами. Гиперплазия в некоторых клетках гранулярного эндоплазматиче-ского ретпкулума сопровождалась гиперплазией мембраносвя занных и свободных рибосом, а также гипертрофией комплекса Гольджи. Такого рода ультраструктурные перестройки характерны для гипертрофии, пролиферации и трансформации клеток, что подтверждало активность компенсации и регенерации поврежденных структур п органе.

Средняя плодовитость крыс в 3 группе составила 10,4±0,51. Масса гели извлеченных плодов была равна 4,24±0,12 г. Продолжительность беременности - 24,0±0,33 дня. Масса самостоятельно родившихся крысят составляла 4,34±0,10 г, в два месяца - 71,9±2,69 г и в четыре - 166,0±5,60 г, что превышало показатели и в контрольной группе (р<0.()1), и в группе с внутриутробной гипоксией (р<0.02).

Таким образом, положительный эффект ПИЛИ ИК-днапазона достигался уже при крайне низких дозах (0,9 Дж/см2, 300 сек, 6 сеансов), приводя к восстановлению сниженных показателей Т-клеточного звена иммунитета и гормонального фона самки, улучшению функционального состояния плаценты. Низкоинтенсивное лазерное излучение на фоне искусственно создаваемой гипоксии давало сосудорасширяющий эффект, приводило к улучшению кровоснабжения плаценты, способствовало положительным морфофункциональным изменениям составных компонентов планеты. А это и свою очередь приводило к нормализации иммунных, гормональных показателей, отражающих состояние плода и способствовало улучшению его развития:

выводы

1. Воздействие низкоиитенсивного лазерного излучения инфракрасною диапазона в низких дозах на область грудины в зоне проекции тимуса не оказывает иммуномодулируюшего действия как в группе здоровых беременных, так и небеременных лабораторных крыс.

2. У самок, перенесших во время беременности умеренную барока-мерную гипоксию, отмечается снижение относительного содержания Е-РОК. Е-активных-РОК, экспрессии СОЗ АГ на Т-клетках, которое сохраняется до конца беременности и коррелирует с морфофункциональными изменениями в плаценте и падением в периферической крови концентрации эстрадиола, прогестерона, тироксина (Т4) и трийодтиронина (ТЗ), но не влияет на уровень тпреотропного гормона (ТТГ).

3. При экспериментально созданной во время беременности гипоксии развивается фетоплацентарная недостаточность, которая сопровождается нарушением внутриутробного формирования плода, проявляющаяся уменьшением массы тела, увеличением количества резорбированных плодов, а также уменьшением содержания Е-РОК, Е-активных-РОК, отсутствием выработки МИФ, снижением концентрации тироксина (Т4) и трий-одгиронина (ТЗ) у потомства.

4. Морфологическим субстратом хронической декомпенсированной плацентарной недостаточности при симптоматической гипоксии являются нарушения материнского и фетального кровообращения в сочетании с дистрофическими и деструктивными изменениями в плаценте на фоне ретардации созревания основных структур лабиринта и базальной зоны.

5. Низкоинтенсивное лазерное излучение инфракрасного диапазона области проекции тимуса беременных крыс после умеренной барокамер-пой гипоксии приводит к усилению экспрессии Е-рецептора и СОЗ АГ на Т-лимфоцитах и их функциональной активности, увеличению содержания эстрадиола. I Пронина и трийодтироксина, но не влияет на уровень прогес-терона.н трамропного гормона (ТТГ).

6. Низкоинтенсивное лазерное излучение в малых дозах при гипоксии стимулирует компенсаторно-приспособительные реакции в плаценте экспериментальных животных: днлятацию плодовых и материнских синусов, снижение толщины плацентарного барьера, функционирование резервных капилляров, гиперплазию органелл (митохондрий, агранулярпого ретику-лума, внутреннего сетчатого аппарата и микроворсинок трофобласта).

7. Нпзкоинтепсивное лазерное излучение на фоне экспериментально созданной во время беременности гипоксии приводит у крысят к восстановлению нарушенных показателей Т-звена иммунитета, повышению уровня тироксина и трййодтиронина, росту массы извлеченных плодов, нормализации темпов развития к 2 и 4 месяцам жизни.

8. Использование иизкоинтенсивного лазерного излучения при беременности у крыс с экспериментально созданной внутриутробной гипоксии плода приводит к выраженному коррегирующему эффекту, не оказывающему отрицательного воздействия на плод, вследствие чего его следует рассматривать, как эффективный немедикаментозный метод лечения гипоксии при беременности.

П l'A К ГЦ Ч ECKI1 Е Г ЕКОМ ЕНДА ЦИ И

1. Рекомендуется использовать экспериментально созданную модель внутриутробной гипоксии плода у животных при беременности для изучения механизмов влияния иизкоинтенсивного лазерного излучения инфракрасного диапазона с длиной волны 920 нм.

2. Низкоинтенсивное излучение "мягких" красных лазеров рекомендуется включать в комплекс лечения плацентарной недостаточности, для коррекции нарушений в Т-звене иммунитета и гормонального фона у млекопитающих при осложненной беременности.

3. Рекомендуется использовать низкоинтенсивпое лазерное излучение инфракрасного диапазона мощностью 0,9 Дж/см2 , 5 мин, 6 сеансов для коррекции нарушений развития, иммунной и гормональной недостаточности у потомства, родившегося после перенесенной внутриутробной гипоксии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Лечение привычного невынашивания беременности методом им-муноцитотсрапни. отбор больных, дозы, пути введения. II Информационное письмо. - Иваново,. 1995,- 15 с. (соавт. Сотникова Н.Ю., Посисеева Л.В.. Бабакова Л.А.).

2. Экспериментальное обоснование немедикаментозного метода лечения угрозы невынашивания ранних сроков. II Сборник трудов научно-практической конференции. - Иваново, 1996.- с. 24-26 (соавт. Сотникова Н.Ю.. Бабакова Л.А.).

3. Влияние низконнтенсивного лазерного излучения на иммунологические и морфологические параметры, характеризующие состояние репродуктивной функции у крыс. // Актуальные проблемы физической медицины. Сборник научных трудов, посвященный юбилею кафедры Физической медицины ФПОВ ИГМА - Иваново, 1997.- с. 54-57 (соавт. Сотникова Н.Ю.. Перетятко Л.П., Бабакова Л.А.).