Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние некоторых производных 3-оксипиридина на морфо-функциональное состояние сердца при экспериментальном сахарном диабете

На правах рукописи

□□3452128

ЕЛИЗАРОВА ЮЛИЯ НИКОЛАЕВНА

ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ ПРОИЗВОДНЫХ 3-ОКСИПИРИДИНА НА МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ СЕРДЦА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология 14.00.16. - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 1 гч

1 и . ' !

Саранск-2008

Работа выполнена на кафедре фармакологии с курсом клинической фармакологии ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева»

Научные руководители: доктор медицинских наук

профессор Инчина Вера Ивановна

кандидат медицинских наук доцент Бакайкин Валерий Михайлович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

профессор Моисеева Инесса Яковлевна

доктор медицинских наук

профессор Малышев Вадим Геннадьевич

Ведущая организация:

ГОУВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава

Защита диссертации состоится »#^¿^£¿2008г. в «__» часов на заседании диссертационного совета Д 212.117.0» при ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» по адресу: 430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» по адресу: 430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

Автореферат разослан »

Ученый секретарь диссертационного совета^-——^

кандидаг медицинских наук, доцент ' —АтРгГолубев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Ашуальпость темы. Сахарный диабет представляет одну из ведущих медико-соииалышх проблем современного общества, что обусловлено высокой заболеваемостью и его распространенностью, частым возникновением хронических микро - и макрососудистых осложнений. Проблема заболеваемости СД актуальна для современной медицины, что обусловлено ростом показателей распространенности и частоты СД, а также определенными трудностями в современном выявлении больных СД (Кудрлкова C.B. и соавт., 2001; Гараган С.Ф., 2005; Ванюков Д.А., 2006).

По оценкам Всемирной организации здравоохранения, число больных с сахарным диабетом в мире в 2000г. составило 151 млн. к 2010г. их будет 239 млн, а к 2025 - 300 млн., что позволяет говорить о «глобальной эпидемии» диабета (Строков и соавт., 2004; Панченко Е.П., 2004).

СД является независимым и мощным фактором риска развития ИБС, а тромботические осложнения атеросклероза являются основной причиной смерти у 80% больных СД, причем три четверти из них связаны с различными проявлениями ИБС (Кононенко И.В. и соавт., 2005). ИБС у больных, особенно с СД 2 типа, встречается в 6 раз чаще, чем у лиц того же возраста, не имеющих нарушений углеводного обмена У больных СД 2 типа рано развивается атеросклероз и около 80 % от их общего числа погибают от его осложнений (Сыркин A.JÏ. и соавт., 2001).

Инфаркт миокарда наиболее грозное клиническое проявление ИБС. В 37% случаев является основной и непосредственной причиной смерти больных СД (Речкова Е.В. и соавт., 2000; Haffer M. et al., 1999). У больных СД отмечается прямая зависимость поражения элементов микроциркуляторного русла от продолжительности заболевания, поэтому наиболее раннее назначение адекватного лечения замедляет развитие диабетической макро- и микроангиопатии (Салтыков В.Б. и соавт., 2000; Dixon J.L., 1999).

Среди осложнений СД диабетическая полинейропатия является одной из самых распространенных. Более 50% больных СД страдают ДПН, факторами риска развития которой являются время течения и тип СД, длительность периодов выраженной гипергликемии, наличие патологии микроциркуляции и курение (Строков и соавт., 2004; Бондаренко О.Н. и соавт., 2004) Развивающаяся при диабете специфическая диабетическая кардиомиопатия, приводит к развитию хронической сердечной недостаточности. Развивающиеся осложнения приводят к преждевременной инвалидизации и смерти больных от инфаркта миокарда, инсульта, гангрены нижних конечностей.

Основным направлением в лечении сахарного диабета и профилактике его осложнений является коррекция гликемии. Однако, несмотря на высокое качество и разнообразие сахароснижающих препаратов, избежать развития поздних осложнений диабета и снизить, связанную сними смертность, пока не удается (Телкова И.Л., 2002; UKPDS., 1998; Albraira С., 1997) ,

Согласно многочисленным данным, отдаленные результаты лечения больных сахарным диабетом остаются неудовлетворительными. Несмотря на разнообразие кардиотропных препаратов, применяемых при лечении СД,

смертность от сердечно-сосудистых заболеваний в данной группе больных практически не изменилась (Шестакова В.М., 2005; Allen K.V. et а!., 2003; Gu К et al., 1999). Вышеперечисленные факты обуславливают поиск новых подходов в терапии сердечно-сосудистых расстройств при сахарном диабете. Имеющиеся в литературе указания на важную роль процессов перекисного окисления липидов в развитии ДПН и кардиоваскулярных осложнений при СД обосновывает важное место антиоксидантов в комплексном лечении диабета, как средств, способствующих снижению окислительного стресса при данном патологическом процессе.

Цель исследования изучить влияние 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината, 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината, 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорида, 3-оксипиридина ацетилцистеина-та на состояние вегетативной нервной системы сердца и метаболические изменения при аллоксановом диабете.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината, 3-оксипиридина ацетилцистеината, З-окси-б-метил-2-этилпиридина сукцината и 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорида на морфо-функциональное состояния сердца белых крыс, его холинергические и адреиергическис нервные элементы при аллоксановом диабете.

2. Исследовать изменения биоэлектрической активности миокарда на фоне применения изучаемых соединений в условиях экспериментального сахарного диабета.

3. Исследовать влияние 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината и 3-оксипиридина ацетилцистеината на некоторые метаболические показатели в сыворотке крови (уровень гликемии, процессы липопероксидации, состояние антиоксидантной системы) при аллоксановом диабете у крыс.

Научная новизна работы. Впервые были изучены в комплексе морфо-функциональные изменения сердца, состояние холинергических и адренерги-ческих нервных элементов сердца при экспериментальном аллоксановом диабете на фоне применения 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината, 3-оксипиридина ацетилцистеината, 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината, 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорида. Выявлено, что 2,4,6-триметил-3-гидроксипиридина сукцинат в дозе 12,5 мг/кг и 3-оксипиридина ацетилци-стеинат в дозе 25 мг/кг уменьшают степень морфо-функциональных изменений в миокарде, корригируют состояние холинергических и адренергических нервных элементов сердца экспериментальных животных при аллоксановом диабете.

Изучено влияние соединений на биоэлектрическую активность миокарда при аллоксановом диабете. Показано, что 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат в дозе 12,5 мг/кг и 3-оксипиридина ацетилцистеи-наг в дозе 25 мг/кг корригируют электрическую нестабильность миокарда в условиях моделируемой патологии.

Впервые показано, что 2,4,6-триметил-З-гнцроксипнридина сукцинат корригирует гипергликемию, дислигшдемию, процессы перекисного окисления липидов, гипопротеинемшо в условиях моделированного аллоксанового диабета.

Практическая ценность работы состоит в том, что результаты проведенного исследования расширяют представления о фармакологии 2,4,6-триметил-3-гидроксипиридин сукцината и З-оксипиридина ацетилцистеина. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о способности исследуемы): соединений с антиоксидантной активностью оказывать кардиопро-текторное действие в условиях моделируемой патологии.

Результаты исследования внедрены в научно-исследовательскую работу и учебный процесс кафедры фармакологии с курсом клинической фармакологии ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» и служат обоснованием для продолжения исследования кардиотропных эффектов соединений с антиоксидатным типом действия при сахарном диабете.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. 2 4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат в дозе 12,5 мг/кг, 3-оксипиридина ацетилцистеинат в дозе 25 мг/кг, 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцинат в дозе 25 мг/кг и 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорид в дозе 12,5 мг/кг препятствуют развитию выраженных изменений в холинергических и адренергических нервных элементах сердца при аллокса-новом диабете.

2. 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат и З-оксипиридина ацетилцистеинат в исследуемых дозах предупреждают активацию процессов перекисного окисления липидов и депрессию антиоксидантной системы в сыворотке крови экспериментальных животных при аллоксановом диабете.

3. 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат в дозе 12,5 мг/кг и 3-оксипиридина ацетилцистеинат в дозе 25 мг/кг корригируют нарушения углеводного и липидного обмена, развитие гипопротеинемии при экспериментальном сахарном диабете.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы были доложены и обсуждены на российской научно-практической конференции с международным участием «Сахарный диабет и его осложнения (морфология, патогенез, клиника) (Саранск, 2005), всероссийской научно-практической конференции, посвященной памяти профессора Я.В.Костина «Общество, здоровье, лекарство» (Саранск, 2005), V международной конференции по функциональной нейроморфологии «Колосовские чтения» (Санкт-Петербург, 2006), межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы медицинской науки и образования» (Пенза, 2007), VIH, IX, X, XI, XIII научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (Саранск, 2003, 2004, 2005, 2006, 2008), XXXIV, XXXV, XXXVI Огаревских чтениях (научной конференции Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева) (Саранск, 2005,2006,2007).

По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 158 стр. компьютерного набора, документирована 15 таблицами, иллюстрирована 27 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), изложения собственных результатов (З-б главы), обсуждения полученных результатов, выводов и библиографического указателя, включающего 250 источника, в том числе 173 отечественных и 77 иностранных.

Работа выполнялась в соответствии с научной тематикой кафедры фармакологии Мордовского государственного университета «Оптимизация фармакологической терапии соматической и психической патологии». Номер государственной регистрации 01200704781.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проводились на 100 половозрелых белых нелинейных крысах-самцах массой тела 180-200 г в осенний период года, содержавшихся в стандартных условиях вивария. Кардиопротекторные и антиоксидантные свойства исследуемых соединений изучались на экспериментальной модели сахарного диабета.

В ходе эксперимента подопытные животные были разделены нами на 9 групп. В 1-ой группе крысы на протяжении эксперимента находились на рационе питания вивария и составили интактную группу (п = 11). У 2-ой (контрольной) группы животных воспроизводилась экспериментальная модель сахарного диабета. После предварительной 24-часовой депривации пищи (при сохраненном доступе к воде) у крыс моделировали инсулинзависимый сахарный диабет, путем однократного внутрибрюшинного введения аллоксана в дозе 150 мг/кг. С целью формирования полного и стабильного диабета животных содержали в течение 14 дней на стандартной диете (п = 12).

Через 2 недели и в течение 14 дней ежедневно 1 раз в сутки животным 39 групп с аллоксановым диабетом вводили внутримышечно одно из изучаемых соединений в дозе 1% и 5% от LD 50%. 3 группа - 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат в дозе 2,5 мг/кг (п = 11); 4 группа - З-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорид в дозе 2,5 мг/кг (n = 11); 5 группа - 3-окси-б-метил-2-этилпиридина сукцинат в дозе 5 мг/кг (n = 11); 6 группа - 2,4,6-триметил-З-гидроксигшридина сукцинат в дозе 12,5 мг/кг (n = 11); 7 группа - 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорид в дозе 12,5 мг/кг (п = 11); 8 группа - З-окси-б-метил-2-этилпиридина сукцинат в дозе 25 мг/кг (n = 11); 9 группа -3-оксипиридина ацетилцистеинат 25 мг/кг (а = П).

После завершения эксперимента животных забивали на 28-й день путем декапитации под уретановым наркозом. В сыворотке крови определяли уровень глюкозы глюкозооксидазным методом с помощью стандартного набора реактивов "Глюкоза-ФКД" (Россия). Оценивалось содержание вторичного продукта ПОЛ - малонового диальдегида (метод Конюховой С.Г. с соавт., 1989), определялась активность каталазы (метод Королюк М.Ф с соавт., 1988), а также содержание триглицеридов энзиматическим методом, общего холестерина ферментативным методом, а-холестерииа методом осаждения фосфорно-

вольдолемовой кислотой и магнием 2+, р-липопротеидов турбидиметрическим методом по Бурштейну и Самаю, общего белка биуретовым методом, АлТ и АсТ методом Райтмана-Френкеля с использованием стандартных наборов реактивов фирмы "Vital Diagnostic".

В ходе эксперимента проводили регистрацию ЭКГ. В интактной группе ЭКГ проводилась в первый день эксперимента. В контрольной серии запись ЭКГ осуществлялась на 14 день, остальных сериях на 28 день Регистрацию ЭКГ проводили под уретановым наркозом при помощи игольчатых электродов в трех стандартных отведениях (I, II, III), трех усиленных однопольных (avR, avL, avF), используя электрокардиограф ЭК Т-ОЗМ. При анализе ЭКГ определяли ЧСС, интервал PQ, QTd и QTdc. По выраженности изменений данных показателей мы судили об электрической нестабильности миокарда.

Статистическая обработка материала осуществлялась с помощью пакета статистических программ «Excel» на персональном компьютере « Pentium-133». Мате,магическая обработка включала расчеты средних арифметических значений (М), их ошибок (±т), достоверности различия средних арифметических (р) с помощью t-критерия Стьюдента при 5 % уровне значимости ошибки

По окончании эксперимента вскрывали грудную полость и извлекали сердце. Для гистологического исследования кусочки миокарда фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина, а затем заливали в парафиновые блоки. Срезы стенок предсердий и желудочков окрашивали гематоксилином и эозином, железным гематоксилином по Гендейгайму. На светооптическом уровне оценивали качественное состояние эпикарда, миокарда и эндокарда. Проводили гистохимическое исследование сердца, выявляли изменения в тканях, в холинергических и адренергических нервных элеметах сердца при экспериментальном СД и на фоне коррекции исследуемыми соединениями. Исследование холинергических нервных элементов сердца производили с помощью ацетилтиохолинйодида по способу Гомори и в модификациях Карновского-Рутс и Кел.те-Фриденвальда. Контроль осуществляли бутирилтиохолинйоди-дом Адренергические нервные элементы сердца изучали с помощью гистохимического метода Фалька в модификациях Крохиной Е.М. (1973г.) и с использованием глиоксиловой кислоты. Обработанные в парах стандартизированного параформальдегида срезы сердца исследовали на катехоламины (норадрена-лин, адреналин, допамин) под люминесцентным микроскопом MJI-2 с использованием светофильтров СС-15, ФС-1 и ФС-2. Аутолюминисценцию исключали термической обработкой срезов сердца без параформальдегида

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В патогенезе полиорганной недостаточности при сахарном диабете значимая роль принадлежит активации процессов липопероксидации (Балаболкин МИ. и соавг., 2000). Учитывая ведущую роль окислительного стресса в развитии сахарного диабета и его осложнений, нами была выбрана модель сво-боднорадикальной патологии - аллоксановый диабет. Согласно результатам нашего исследования введение экспериментальным животным аллоксана в дозе 150 мг/кг приводит к достоверному увеличению содержания глюкозы в сы-

воротке крови с 4,25 ± 0,15 ммоль/л до 13,77 ± 0,23 ммоль/л (Ри<0,001). Введенный в организм аллоксан обратимо превращается в диапуроновую кислоту, процесс сопровождается накоплением свободных радикалов - 02, ОН, Н202, которые оказывают токсическое действие на ß-клетки (Алеева Г.Н. и соавт., 2002), нарушают структуру клеточных мембран и приводят в конечном итоге к гибели ß-клеток (Янькова В.И., Гвозденко Т.А., 2005).

При введении 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината в дозе 12,5 мг/кг и 3-оксипиридина ацетилцистеината в дозе 25 мг/кг отмечается достоверная тенденция к уменьшению уровня гликемии на 58% и 57% в сравнении с контролем. Экспериментальные данные согласуются с результатами Андриен-ковой Е.Г. (2005), Волковой H.A. (2003). Данный эффект 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината, по-видимому, связан с наличием модифицирующего действия препарата на состояние синапсов, ионных каналов, что позволяет предположить о возможности модулирующего действия на инсулино-вые рецепторы клеток и способности потенцировать эффекты инсулина.

Данные, полученные в результате нашего исследования, свидетельствуют об усилении скорости ПОЛ при аллоксановом диабете. Так, уровень вторичного продукта ПОЛ - МДА превышает значения интактной группы на 190%. На фоне интенсификации перекисного процесса снижается активность каталазы на 35% при сопоставлении с исходными данными. Результаты работы согласуются с данными литературы: при диабете увеличивается генерирование цитотоксичных АФК, вследствие чего происходит образование продуктов ПОЛ. Введение экспериментальным животным 3-оксипиридина ацетилцистеината в дозе 25 мг/кг, 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината в дозе 12,5 мг/кг приводит к снижению содержания МДА на 74% и 75% по сравнению с контролем. Наиболее значимо корригируют рост каталазной активности 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцинат в дозе 25 мг/кг, 3-оксипиридина аце-тилцистеинат в дозе 25 мг/кг на 32% и 16% по сравнению с контролем, что свидетельствует о напряжении АОЗ (Рис. 1).

Согласно результатам проведенного исследования на модели аллоксано-вого диабета, у крыс изменялся уровень показателей липидного обмена, таких как общий холестерин, а-холестерин, триглицериды и ß-липопротеиды. Уровень общего ХС контрольной группы превышал значения интактной на 137%. Тогда как содержание а-ХС снижалось на 34% по сравнению с интактными животными, что согласуется с литературным данным (Балаболкин М.И. и соавт., 2000; Сыркин А.Л. и соавт., 2001) (Рис. 2). При СД не только уменьшается содержание ЛПВП, но и изменяются их свойства. ЛПВП подвергаются гли-козилированию и пероксидации, что приводит к снижению функциональной активности, а также к глубоким и необратимым изменениям в них. В результате повышается атерогенный потенциал ЛП в крови, что увеличивает риск развития атеросклеротических процессов.

В нашем исследовании введение 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината, 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината, 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорида и 3-оксипиридина ацетилцистеината в исследуе-

мых дозах корригируют атерогенные сдвиги липидного спектра крови, снижая уровень общего ХС, ТГ, р-ЛП и повышая уровень а-ХС.

в

> —р

' f

х i УЯ9 ..

шшшшшшш\

ли

4I345B7SS

0 МДА Ш каталаза

1 - интактные; 2 - контроль — аллоксан 150 мг/кг; 3 - аллоксан + 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат 2,5 мг/кг; 4 - аллоксан + 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорид 2,5 мг/кг; 5 - аллоксан + 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцинат 5 мг/кг; 6 - аллоксан + 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат 12,5 мг/кг; 7 - аллоксап + З-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорид 12,5 мг/кг; 8 - аллоксан + 3-окси-6-метил-2-этилпиридииа сукцинат 25 мг/кг, 9 - аллоксан + З-оксиииридина ацетилцистеинат 25 мг/кг * - отличие от интактных животных ** - отличие от контроля

Р и с. 1 Динамика содержания малонового диальдегида и катал азной активности в сыворотке крови у крыс с аллоксановым диабетом на фоне введения исследуемых соединений

На фоне экспериментального аллоксанового диабета происходило достоверное повышение концентрации в сыворотке крови ТГ на 131% по сравнению с интактной серии крыс. По данным литературы отмечено, что при СД на фоне гипергликемии синтезируется большое количество ТГ, которое опосредованно приводит к снижению содержания антиатерогенных ЛПВП, приводя к ускоренному развитию атеросклероза (Яфасов К.М. и соавт., 2001).

При диабете отмечено возрастание содержание p-липопротеидов на 62% в сравнении с интактной группой. Гиперхолестеринемия при СД сопровождается повышением уровня ЛПНП, ЛПОНП и хиломикронов, которые затем поступают из плазмы крови в стенку артерий с последующим увеличением содержания гликолизированных липипротеидов в стенке артерий (Балаболкин М.И. и соавт., 2000). 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцинат в дозах 5 и 25 мг/кг оказывают максимальное гипотриглицеридемическое и гипо-р-липопротеинемическое действие, снижая уровень ТГ на 51% и 53%, уровень р-ЛП на 29% и 32% соответственно, в сравнении с контролем (Рис. 3).

Таким образом, экспериментальные исследования показывают, что при аллоксановом диабете наблюдаются выраженные нарушения липидного обмена в виде дислипидемии и усиления процессов ПОЛ, что является неблагоприятным в развитии и прогрессировании атеросклероза (Агеева В.В., 2000). Как видно из представленных данных, применение соединений с антиоксидантным типом действия ведет к нормализации липидного спектра крови, выражающееся в снижении уровня всех атерогенных фракций липидов, что, вероятно, свя-

зано с ингибированием СРО и уменьшением уровня окисления свободных жирных кислот.

123456789

BD общий холестерин йа-холестерин

1 - интактные; 2 - контроль - аллоксан 150 мг/кг; 3 - аллоксан + 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат 2,5 мг/кг-; 4 - аллоксан + 3-окси-6-метид-2-этилг>иридина гидрохлорид 2,5 мг/кг; 5 - аллоксан + З-окси-б-метил-2-эгилпиридина сукципат 5 мг/кг; 6 - аллоксан + 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукципат 12,5 мг/кг; 7 - аллоксан + З-окси-6-мстил-2-этилпиридина гидрохлорид 12,5 мг/кг; 8 - аллоксан +• 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукципат 25 мг/кг; 9 - аллоксан + 3-оксипиридина ацетилцистеинат 25 мг/кг * - отличие от интактных животных ** - отличие от контроля

Р и с. 2 Влияние исследуемых соединений на содержание общего холестерина и а-холестерина в сыворотке крови белых крыс на фоне аллоксанового диабета

2501х

В триглицериды Ц [3-липопротеиды

1 - интактные; 2 - контроль - аллоксан 150 мг/кг; 3 - аллоксан + 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридипа сукцинат 2,5 мг/кг; 4 - аллоксан + 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорид 2,5 мг/кг; 5 - аллоксан + З-окси-б-метил-2-этшширндина сукцинат 5 мг/кг; 6 - аллоксан + 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат 12,5 мг/кг; 7 - аллоксан + З-окси-6-метил-2-этилгшридина гидрохлорид 12,5 мг/кг; 8 - аллоксан + 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукципат 25 мг/кг; 9 - аллоксан + 3-оксипиридина ацстилцистеинат 25 мг/кг * - отличие от интактных животных ** - отличие от контроля

Р и с. 3. Влияние исследуемых соединений на содержание триглицеридов и (V лигюпротеидов в сыворотке крови белых крыс на фоне аллоксанового диабета

Оценка кардиопротекторного действия соединений была проведена по анализу их влияния на ЧСС, продолжительность интервала Р<5, дисперсию ин-

тервала ()Т и показатель дисперсии интервала (^Т, корригированного по ЧСС. В контрольной серии опытов на ЭКГ регистрировалась тахикардия - ЧСС увеличилась на 18% по сравнению с интактными значениями, что согласуется с данными авторов (Соколов Е.И. и соавт., 1998). Развитие тахикардии, видимо, связано, не только с нарушением вегетативной иннервации сердца, но и с метаболическими нарушениями, в основе которых лежат процессы активации ПОЛ. Подтверждением является эффективность 2,4,6-триметил-З-гидроксипкридина сукцината в дозе 2,5 мг/кг и 12,5 мг/кг, уряжая ЧСС на 18% и 20% в сравнении с контролем. Введение 3-оксипиридина ацетилцистеината в дозе 25 мг/кг менее эффективно способствовали снижению ЧСС.

СД приводит к развитию электрической нестабильности миокарда, основой которой является электрическая негомогенность сердца. О развитии электрической нестабильности миокарда свидетельствует увеличение интервала СГГ на 145%, а также дисперсии корригированного по ЧСС интервала ОТ на 104%. Наиболее эффективными оказались 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат в дозе 2,5 мг/кг и З-окси-б-метил-2-этилпиридина сукцинат в дозе 25 мг/кг, которые достоверно препятствовал росту (^ТсЗс на 42% и 39% в сравнении с контролем. Изменения показателя <ЗТс)с в других группах исследуемых соединений носили менее выраженный характер.

При моделировании экспериментального СД во всех слоях сердца белых крыс наблюдался комплекс различных морфо-функциональных изменений. В ткани миокарда, эпикарда и эндокарда желудочков и предсердий отмечался различной степени отек, коллагеновые и ретикулярные волокна межпучковых прослоек и клеточные элементы соединительной ткани разъединялись и набухали, некоторые коллагеновые волокна деформировались (Рис. 4а). В миокарде выявлялись различной формы и величины очаги эозинофилии, где в некоторых миокардиоцитах определялась нечеткая поперечная исчерченность (Рис. 46). Е!стречались мелкие очаги с грубо деформированными и разрушенными миофибриллами. В интерстиции миокарда при СД отмечался умеренный диффузный или мелкоочаговый склероз и массивные скопления жировых клеток.

Р и с. 4. а - Выраженный отек миокарда белой крысы в области венечной борозды при экспериментальном сахарном диабете. Окраска гематоксилин - эозином. Ув. 8 х ¡5; б - Очаги эозинофилии и выраженный отек миокарда левого желудочка белой крысы при экспериментальном сахарном диабете. Окраска гематоксилин - эозином. Ув 8x15.

Использование в качестве корригирующего средства 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината в дозе 12,5 мг/кг позволяло значительно ограни-

чить реактивные морфологические изменения тканей сердца под влиянием активных свободных радикалов. К 14-м суткам эксперимента наблюдалась улучшение морфологических структур миокарда: значительно снижался отек, восстанавливалась структура миокарда левого желудочка, исчезали или уменьшались многие очаги эозинофилии (Рис. 5а).

Введение 3-оксипиридина ацетилцистеината в дозе 25 мг/кг и З-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорида в дозе 12,5 мг/кг сохраняло достаточно хорошо поперечную исчерченность кардиомиоцитов. Отмечалась тенденция к уменьшению отека и восстановлению структуры миокарда, но в меньшей степени, чем при использовании 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината в дозе 12,5 мг/кг и 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината в дозе 25 мг/кг (Рис. 56).

ш

I ?

Р и с. 5. а - Уменьшение отека, восстановление структуры миокарда левого желудочка в области верхушки сердца белой крысы при коррекции изменений 2,4,6-тримстил-З-гидроксипиридина сукцинатом 15 дозе 12,5 мг/кг. Окраска гематоксилином - эозином. Ув. 8 х 10; б - Уменьшение отека, неполное восстановление структуры миокарда белой крысы при коррекции изменений 3-оксиииридина ацетилцистеинатом в дозе 25 мг/кг. Окраска гематоксилином - эозином. Ув. 8x15.

При экспериментальном СД происходило изменение состояния элементов гемомикроциркуляторного русла. Артериолы и мелкие артерии на срезах выглядели значительно измененными: стенки их были утолщены, гомогенизированы, просвет суживался, а у некоторых практически не определялся. В арте-риолах и мелких артериях одновременно отмечались отек и сдущивание эндо-телиоцитов в просвет. Капиллярное русло характеризовалось выраженными неровными контурами. Отмечалась десквамация эндотелия в просвет капилляров. Иногда в просвете капилляров и венул обнаруживались тромбы, перекрывающие их просвет.

На фоне введения 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината в дозе 12,5 мг/кг отмечалось более выраженное снижение отека стенки артериол, наличие просвета в сосудах. Данные положительные изменения наблюдались и при введении З-окси-б-метил-2-этилпиридина сукцината в дозе 25 мг/кг, но по сравнению с экспериментальной серией с 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинатом в дозе 12,5 мг/кг, эффект был менее выраженным. В сериях с применением 3-оксипиридина ацетилцистеинатом в дозе 25 мг/кг и З-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлоридом в дозе 12,5 мг/кг наблюдался минимальный положительный эффект.

При исследовании морфологических изменений в опытных сериях с введением 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинатом в дозе 2,5 мг/кт, 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлоридом в дозе 2,5 мг/кг и З-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцинатом в дозе 5 мг/кг значимых положительных изменений не выявлялось по сравнению с контролем.

Следовательно, анализ морфологических изменений позволяет предполагать, что исследуемые соединения обладают кардиопротекторной, ангиопро-текторной активностью на модели экспериментального сахарного диабета.

Проведено гистохимическое исследование холинергических и адренерги-ческих нервных элементов сердца крыс при экспериментальном диабете и на фоне коррекции химическими соединениями с антиоксидантным типом действия.

При гистохимическом исследовании в разных слоях стенки сердца ин-тактных крыс обнаруживалась высокая активность АХЭ в составе нервных волокон в виде плотного темного осадка сульфида меди (Рис. 6а). После введения аллоксана в нервных элементах сердца отмечалось выраженное снижение активности АХЭ, что проявлялось уменьшением плотности продукта гистохимической реакции в составе холинергических нервных волокон. По ходу значительного количества нервных волокон и стволов сплетений в различных отделах сердца определяются участки, лишенные сульфида меди. Наибольшее количество нервных волокон с низкой активностью АХЭ определялось в области верхушки сердца. Высокая степень снижения активности АХЭ определялась также в цитоплазме нейроцитов ганглиозного аппарата сердца (Рис.66).

Р и с. 6. а - Е'.ыеокая активность ацетилхолинэстеразы, густая сеть холинергических волокон в субэпикардиальном слое правого предсердия интактных белых крыс. Метод Келле-Фриденвальда. Ув. 8 х 10; б - Низкая активность ацетилхолинэстеразы, редкая сеть холинергических волокон в области верхушки левого желудочка белой крысы при экспериментальном диабете. Метод Келле-Фриденвальда. Ув. 8x30.

Все исследуемые соединения уменьшали выраженность реактивных изменений в холинергических нервных структурах. При использовании в качестве корригирующего средства 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината в дозе 12,5 мг/кг в миокарде предсердий и желудочков в большей степени выявлялись холинергических нервные элементы с высокой активностью АХЭ, что проявлялось интенсивным темно-коричневым осадком гистохимической реакции (Рис. 7а).

а

■0

а

Р и с. 7. а - Восстановление активности ацетилхолинэстеразы в нервных стволах, волокнах и нейроцитах вегетативного ганглия в миокарде задней стенки правого предсердия па фоне аллок-санового диабета при коррекции изменений 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинатом в дозе 12,5 мг/кг. Метод Келле-Фриденвальда. Ув. 40 х 7; б - Восстановление активности ацетилхолинэстеразы в нервных элементах миокарда левого желудочка белой крысы при коррекции изменений З-окси-б-метил-2-этилпирилина сукцинатом в дозе 25 мг/кг. Метод Келле-Фриденвальда. Ув. 20 х 7,

На фоне применение 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината в дозе 25 мг/кг наблюдались более выраженные гистохимические нарушения структуры миокарда: сохранялась сниженная активность АХЭ по ходу холинергических нервных элементах (Рис. 76). 3-оксипиридина ацетилцистеинат в дозе 25 мг/кг и 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорид в дозе 12,5 мг/кг в меньшей степени ограничивали гистохимические изменения в миокарде желудочков и предсердий.

При гистохимическом исследовании адренергические нервные элементы выявлялись во всех слоях стенки сердца интактных крыс в виде полигональных сплетений нервных волокон, имеющих четкообразный вид и интенсивно светящихся изумрудно-зеленым цветом (Рис. 8а). При аллоксановом экспериментальном диабете адренергические нервные элементы сердца претерпевали выраженные изменения: резко снижалась яркость свечения адренергиче-ских волокон, расположенных по ходу артерий, уменьшалось количество и величина гранул медиатора. Больше выявлялось адренергических нервных элементов с красно-оранжевым оттенком флюоресценции в миокарде и эпикарде. По ходу артерий обнаруживались участки сосудов, лишенные адренергических элементов или содержащие тонкие слабо светящиеся волокна. Часто в миокарде левого и правого желудочков определялись очаги различной величины и формы, лишенные изумрудно-зеленого свечения (Рис. 86).

Таким образом, снижение яркости свечения адренергических нервных элементов, диффузия катехоламинов в окружающие ткани свидетельствуют о патологических изменениях симпатической иннервации сердца при экспериментальном диабете. Введение исследуемых соединений оказывало в различной степени положительное влияние на активность адренергических нервных элементов сердечной мышцы при экспериментальном СД. Применение 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината в дозе 25 мг/кг снижало яркость свечения адренергических нервных элементов в меньшей степени. Как правило, сохранялось ярко-изумрудное зеленое свечение нервных волокон в толще миокарда желудочков, в толще межпредсердной и межжелудочковой перегородок. Участки стенки сердца, лишенные адренергических нервных элементов, встречались значительно реже и меньшей величины. Возрастали количество и величи-

а ГжкЯЮ?ЛажШг-1га1ЕЙ8 б ' .

Р и с. 8. а - Густая и четко выраженная сеть адренергических нервных волокон в миокарде левого желудочка интактных белых крыс. Метод Фалька. У в. 20 х 10; б •• Снижение интенсивности свечения адренергических нервных элементов, диффузия катехоламинов в окружающие ткани миокарда правого желудочка при экспериментальном диабете. Метод Фалька. Ув. 40 х 7.

на варикозных гранул, содержащих в большем количестве норадреналин по хо-дунервных волокон различных сплетений, что свидетельствовало о выраженном протекторном действии З-окси-б-метил-2-этилпиридина сукцината на симпатические нервные элементы сердца (Рис. 9а).

Использование в качестве препарата коррекции 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината в дозе 12,5 мг/кг также оказывало положительное воздействие на адренергическую иннервацию сердца, но менее выраженное в сравнении с 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцинатом в дозе 25 мг/кг. В меньшей степени сохранялось изумрудно-зеленое свечение адренергических нервных элементов, наблюдалось увеличение количества нервных элементов с красноватым оттенком флюоресценции, что свидетельствует об изменении соотношения медиаторных систем в нервном аппарате сердца (Рис. 96).

:

а I

Р и с. 9. а - Выявление гранул со скоплением медиатора, скопление медиатора в тучных клетках, снижение диффузии медиатора в окружающие ткани, восстановление интенсивности свечения адренергических нервных элементов миокарда левого желудочка белых крыс при коррекции изменений 3-окси-6-метил-2-этнлпиридина сукцинатом в дозе 25 мг/кг на фоне экспериментатьного диабета (Ув. 20 х 7); б - Восстанавление яркости свечения адренергических терминален миокарда задней стенки правого желудочка белой крысы при коррекции изменений 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинатом в дозе 12,5 мг/кг на фоне экспериментального сахарного диабета (Ув. 40 х 7).

Введение 3-оксипиридина ацетилцистеината в дозе 25 мг/кг и З-окси-6-метил-2-эти лпиридина гидрохлорида в дозе 12,5 мг/кг менее значимо влияло на гистохимическую картину нервных элементов сердца. Применение данных соединений не корригировало изменения в медиаторном составе адренергиче-

1 Т. м . | ш

ских нервных элементах, не устраняло диффузии норадреналина в окружающие ткани, что свидетельствует о снижении функциональной активности симпатической нервной системы сердца.

Резюмируя вышеизложенное, можно полагать, что применение 2,4,6-триметил-3-гидроксипиридина сукцината в дозе 12,5 мг/кг и 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината в дозе 25 мг/кг способствуют оптимальному восстановлению функциональной активности адренергических нервных элементов сердца. 3-оксипиридииа ацетилцистеинат в дозе 25 мг/кг и 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорид в дозе 12,5 мг/кг в меньшей степени снижали выраженность повреждений элементов симпатической иннервации сердца.

Таким образом, введение исследуемых соединений в различной степени оказывают влияние на морфо-функциональное состояние сердца. Экспериментально выявлено, что данные соединения обладают кардиопротекторной активностью, в большей степени 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат в дозе 12,5 мг/кг и З-окси-б-метил-2-этилпиридина сукцинат в дозе 25 мг/кг, восстанавливая морфологическую структуру миокарда, а также функциональную активность адренергической и холинергической иннервации сердца. 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорид в дозе 12,5 мг/кг и 3-оксипиридина ацетилцистеинат в дозе 25 мг/кг корригируют морфо-функциональное состояние сердца на фоне экспериментального сахарного диабета, но эти изменения менее выраженные в сравнении с 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинатом в дозе 12,5 мг/кг и 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцинатом в дозе 25 мг/кг.

ВЫВОДЫ

1. Моделирование экспериментального аллоксанового диабета приводит к выраженной активации процессов перекисного окисления липидов в сыворотке крови. Введение 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината и 3-оксипиридина ацетилцистеината в исследуемых дозах ограничивают рост малонового диапьдегида и депрессию каталазной активности.

2. Применение 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината и 3-оксипиридина ацетилцистеината корригируют гипергликемию, способствуют нормализации липидного спектра сыворотки крови, снижая уровень общего холестерина, триглицеридов, р-липопротеидов и повышая уровень а-холестерина, ограничивают рост ферментов цитолиза и снижают содержание общего белка в условия аллоксаного диабета.

3. 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат и 3-оксипиридина ацетилцистеинат корригируют развитие электрической нестабильности миокарда при аллоксановом диабете, уменьшая дисперсию интервала ОТ, а также дисперсию корригированного по ЧСС интервала ()Т в сравнении с контролем.

4. Использование соединений с антиоксидантным типом действия при лечении сахарного диабета снижает выраженность морфо-функционапьных изменений сердца' сосудистого полнокровия, перицеллюлярного и периваскуляр-ного отека, спазма мелких артерий и артериол, уменьшает число и форму очагов кровоизлияния и эозинофилии в миокарде, восстанавливает структуру со-

кратительных элементов миокардиоцитов. Наибольшая эффективность отмечена при введении 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината в дозе 12,5 мг/кг.

5. При экспериментальном диабете возникают реактивные и деструктивные изменения в холинергичсских и адренергических элементах внутриорганного нервного аппарата сердца животных. Наблюдается истощение медиаторных систем в составе адренергических и холинергических нервных элементов во всех слоях стенки сердца. Наиболее выраженные изменения отмечены в миокарде левого желудочка и правого предсердия.

6. 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат в дозе 12,5 мг/кг и З-окси-6-метил-2-этплпиридина сукцинат в дозе 25 мг/кг наиболее выражено предотвращают снижение медиаторной активности в вегетативной нервной системе сердца, его холинергических и адренергических нервных элементах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные данные являются экспериментальным обоснованием для дальнейшего изучения фармакологических эффектов 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината, , З-оксипиридина ацетилцкстеината, З-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината и 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорида при сахарном диабете.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Пакшина Ю Н. Морфофункциональное состояние сердца в условиях экспериментального сахарного диабета при лечении мексидолом / Ю.Н Пакшина, В.М. Бакайкин, В.И. Инчина // Материалы VIII научной конференции молодых ученых Мордовского государственного университета им. Н П. Огарева: 4.2: Естественные науки. - Саранск: ИМУ, 2003. - С. 73-74.

2. Бакайкин В.М. Морфофункциональные изменения сердца при экспериментальных воздействиях / В.М. Бакайкин, В И. Инчина, Ю.Н. Пакшина// Естественно-технические исследования: теория, методы, практика: Межвузовский сборник научных трудов Вып. III. - Саранск, 2003. - С. 55-57

3 Бакайкин В. М. Динамика биохимических показателей крови при экспериментальном диабете и на фоне применения некоторых препаратов с антиокси-дантным типом действия / В. М. Бакайкин, В.И. Инчина, Ю.Н Елизарова // Современные методы диагностики и лечения в медицине: проблемы, перспективы (Сборник научных трудов). - Вып. III. - Саранск- РНИИЦ, 2004. - С. 4950.

4. Инчина В.И. Сравнительная характеристика влияния 3-метилоксипиридина, эмоксипина, мексидола, 3-оксипиридинацетилцистеината на некоторые показатели липопероксидации, ферментативной активности и морфологического состояния сердца на фоне сахарного диабета / В.И. Инчина, В.М. Бакайкин, Ю.Н Елизарова // Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте: материалы X научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов медицинского факультета Мордовского

государственного университета. Вып. 3. Экспериментальная медицина. - Саранск: ИМУ,2005.-С. 8-10.

5. Инчина В.И. Изменения вегетативной нервной системы сердца при экспериментальном сахарном диабете и на фоне коррекции мексидолом I В.И.Инчина, В.М. Бакайкин, Ю.Н. Елизарова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов (Пятигорская гос. фармацевтическая академия). - Вып. 60. - Пятигорск, 2005. - С.

345-346.

6. Инчина В.И. Влияние мексидола, эмоксипина, 3-метилоксипиридина на биохимические показатели крови при аллоксановом диабете / В.И. Инчина, В.М. Бакайкин, Л.Д. Смирнов, Ю.Н.Елизарова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов (Пятигорская гос. фармацевтическая академия). - Вып. 60. - Пятигорск, 2005. - С.

346-347.

7. Бакайкин В.М. Сравнительное исследование влияния различных препаратов с антиоксидантным типом действия на морфологию сердца при экспериментальном сахарном диабете / В. М. Бакайкин, В.И.Инчина, Ю.Н. Елизарова // Морфологические ведомости. - Москва - Берлин, 2005. - №1-2.-С. 190.

8. Елизарова Ю.Н. Влияние на динамику показателей перекисного окисления липидов, цитолитической активности и состояния вегетативной нервной системы сердца препаратов с антиоксидантным типом действия на фоне сахарного диабета / Ю.Н. Елизарова // Морфологические ведомости. - Москва - Берлин, 2005. - №1-2. - С. 203-204.

9. Елизарова Ю.Н. Анализ изменений вегетативной иннервации сердца на фоне введения 3-метилоксипиридина, эмоксипина, мексидола и 3-оксипиридинацетилцистеината при экспериментальном диабете / Ю.Н. Елизарова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов (Пятигорская гос. фармацевтическая академия). - Вып. 61.- Пятигорск, 2006. - С. 353-354.

10. Бакайкин В.М. Гистохимическая характеристика нервных элементов сердца и поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете на фоне лечения препаратами с аитиоксидантным типом действия / В.М. Бакайкин, Ю.Н. Елизарова, В.И. Инчина// Морфология.- Санкт-Петербург, 2006. - Т. 129, №2.-С. 19.

11. Бакайкин В.М. Гистологическая и гистохимическая характеристика сердца при аллоксановом экспериментальном сахарном диабете на фоне лечения препаратами с антиоксидантным типом действия / В. М. Бакайкин, В.И. Инчина, Ю.Н. Елизарова // Актуальные проблемы медицинской науки и образования: сборник трудов межрегиональной научной конференции. - Пенза ИИЦ Г1ГУ, 2007.-С. 18-19.

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ АОЗ -• антиоксиданжая защита АХЭ - ацетилхолинэстераза ДМА - диабетическая микроангиопатия ДПН - диабетическая полинеГфопатия ИБС - ишемическая болезнь сердца ИМ - инфаркт миокарда ЬО - летальная доза

ЛПВП - липопротеиды высокой плотности

ЛПНГ1 - липопротеиды низкой плотности

ЛПОНГ1 - липопротеиды очень низкой плотности

МДА - малоновый диальдегид

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СД - сахарный диабет

СРО - свободнорадикальное окисление

ТГ - триглицериды

ХС - >олестерин

ЧСС - частота сердечных сокращений

ЭКГ - электрокардиографическое исследование

ОС - окислительный стресс

С}Тс1с - показатель дисперсии интервала (¡)Т, корригированного по ЧСС

Бумага офссшая. Формат 60x84 1/16 Гарнитура Тайме Печать способом ризографии Уел печ. л. 1,16 Уч.-изд л 1,6 Тираж 100 экз Заказ № 317.

Отпечатано с оригинала-макета заказчика в ООО «Референт» 430000,г Саранск, пр Ленина, 21 Тел (8342)48-25-33

Актуальность исследования. Сахарный диабет представляет одну из ведущих медико-социальных проблем современного общества, что обусловлено высокой заболеваемостью и его распространенностью, частым возникновением хронических микро - и макрососудистых осложнений. Проблема заболеваемости СД актуальна для современной медицины, что обусловлено ростом показателей распространенности и частоты СД, а также определенными трудностями в своевременном выявлении больных СД (Гараган С.Ф., 2005; Ванников Д.А., 2006; Кудрякова C.B. с соавт., 2001).

По оценкам Всемирной организации здравоохранения, число больных с СД в мире в 2000г. составило 151млн., к 2010г. их будет 239 млн., а к 2025г. - 300 млн., что позволяет говорить о «глобальной эпидемии» диабета (Кочер-гина И.И., 2006; Строков с соавт., 2004; Панченко Е.П., 2004; Сидоров П.И. с соавт., 2001; Lantion-Ang L., 2000).

СД является независимым и мощным фактором риска развития ИБС, а тромботические осложнения атеросклероза являются основной причиной смерти у 80% больных СД, причем три четверти из них связаны с различными проявлениями ИБС (Кононенко И.В. с соавт., 2005). ИБС у больных, особенно с СД 2 типа, встречается в 6 раз чаще, чем у лиц того же возраста, не имеющих нарушений углеводного обмена (Сыркин A.JI. с соавт., 2001). Инфаркт миокарда наиболее грозное клиническое проявление ИБС. В 37% случаев является основной и непосредственной причиной смерти больных СД (Речкова Е.В. с соавт., 2000; Haffer M. et al., 1999).

У больных СД отмечается прямая зависимость поражения элементов микроциркуляторного русла от продолжительности заболевания, поэтому наиболее раннее назначение адекватного лечения замедляет развитие диабетической макро- и микроангиопатии (Сидоров П.И. с соавт., 2007; Салтыков Б.Б. с соавт., 2000; Dixon J.L., 1999).

Среди осложнений СД диабетическая полинейропатия является одной из самых распространенных. Более 50% больных СД страдают диабетической полинейропатией, факторами риска развития которой являются время течения и тип СД, длительность периодов выраженной гипергликемии, наличие патологии микроциркуляции и курение (Строков с соавт., 2004; Бондаренко О.Н. с соавт., 2004). Развивающиеся осложнения приводят к преждевременной инва-лидизации и смерти больных от инфаркта миокарда, инсульта, гангрены нижних конечностей. Таким образом, СД это не только медико - экономическая, но и социальная проблема (Дворяшина И.В. с соавт., 2001).

Основным направлением в лечении СД и профилактике его осложнений является коррекция гликемии. Однако, несмотря на высокое качество и разнообразие сахароснижающих препаратов, избежать развития поздних осложнений диабета и снизить, связанную с ними смертность, пока не удается (Телкова И.Л., 2002; Malaisse W.J., 2003; UKPDS., 1998; Albraira С., 1997).

Согласно многочисленным данным, отдаленные результаты лечения больных СД остаются неудовлетворительными. В настоящее время с увеличением продолжительности жизни, увеличилось количество больных с осложнением диабета, которые требуют специфической терапии. Однако, несмотря на разнообразие кардиотропных препаратов, применяемых в диабетологии, смертность от сердечно-сосудистых заболеваний в группе больных СД практически не изменилась, а у женщин даже увеличилась (Шестакова В.М., 2005; Allen K.V. et al., 2003; Gu К et al., 1999). Вышеперечисленные факты обуславливают поиск новых подходов в терапии сердечно-сосудистых расстройств при СД. Имеющиеся в литературе указания на важную роль процессов пере-кисного окисления липидов в развитии кардиоваскулярных осложнений при СД обосновывает важное место препаратов с антиоксидантным типом действия в комплексном лечении диабета, как средств, способствующих снижению окислительного стресса при данном патологическом процессе.

Цель исследования изучить влияния 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината, З-окси-б-метил-2-этилпиридина сукцината, 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорида и 3-оксипиридина ацетилцистеината на состояние вегетативной нервной системы сердца и метаболические изменения при аллоксановом диабете.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината, 3-оксипиридина ацетилцистеината, 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината и 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорида на морфо-функциональное состояния сердца белых крыс, его холинергические и адренергические нервные элементы при аллоксановом диабете.

2. Исследовать изменения биоэлектрической активности миокарда на фоне применения изучаемых соединений в условиях экспериментального сахарного диабета.

3. Исследовать влияние 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината и 3-оксипиридина ацетилцистеината на некоторые метаболические показатели в сыворотке крови (уровень гликемии, процессы липопероксидации, состояние антиоксидантной системы) при аллоксановом диабете у крыс.

Научная новизна работы. Впервые были изучены в комплексе морфо-функциональные изменения сердца, состояние холинергических и адренерги-ческих нервных элементов сердца при экспериментальном аллоксановом диабете на фоне применения 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината, 3-оксипиридина ацетилцистеината, 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината, 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорида. Выявлено, что 2,4,6-триметил-3-гидроксипиридина сукцинат в дозе 12,5 мг/кг и 3-оксипиридина ацетилци-стеинат в дозе 25 мг/кг уменьшают степень морфо-функциональных изменений в миокарде, корригируют состояние холинергических и адренергических нервных элементов сердца экспериментальных животных при аллоксановом диабете.

Изучено влияние соединений на биоэлектрическую активность миокарда при аллоксановом диабете. Показано, что 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат в дозе 12,5 мг/кг и 3-оксипиридина ацетилцистеинат в дозе 25 мг/кг корригируют электрическую нестабильность миокарда в условиях моделируемой патологии.

Впервые показано, что 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат корригирует гипергликемию, дислипидемию, процессы перекисного окисления липидов, гипопротеинемию в условиях моделированного аллоксанового диабета.

Практическая ценность работы состоит в том, что результаты проведенного исследования расширяют представления о фармакологии 2,4,6-триметил-3-гидроксипиридин сукцината и 3-оксипиридина ацетилцистеина. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о способности исследуемых соединений с антиоксидантной активностью оказывать кардиопротекторное действие в условиях моделируемой патологии. ,

Результаты исследования внедрены в научно-исследовательскую работу и учебный процесс кафедры фармакологии с курсом клинической фармакологии ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» и служат обоснованием для продолжения исследования кардиотропных эффектов соединений с антиоксидантным типом действия при сахарном диабете.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат в дозе 12,5 мг/кг, 3-оксипиридина ацетилцистеинат в дозе 25 мг/кг, 3-окси-6-метил-2~ этилпиридина сукцинат в дозе 25 мг/кг и 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорид в дозе 12,5 мг/кг препятствуют развитию выраженных изменений в холинергических и адренергических нервных элементах сердца при аллокса-новом диабете.

2. 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат и 3-оксипиридина ацетилцистеинат в исследуемых дозах предупреждают активацию процессов перекисного окисления липидов и депрессию антиоксидантной системы в сыворотке крови экспериментальных животных при аллоксановом диабете.

3. 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат в дозе 12,5 мг/кг и 3-оксипиридина ацетилцистеинат в дозе 25 мг/кг корригируют нарушения углеводного и липидного обмена, развитие гипопротеинемии при экспериментальном сахарном диабете.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы были доложены и обсуждены на российской научно-практической конференции с международным участием «Сахарный диабет и его осложнения (морфология, патогенез, клиника) (Саранск, 2005), всероссийской научно-практической конференции, посвященной памяти профессора Я.В. Костина «Общество, здоровье, лекарство» (Саранск, 2005), V международной конференции по функциональной нейроморфологии «Колосовские чтения» (Санкт-Петербург, 2006), межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы медицинской науки и образования» (Пенза, 2007), VIII, IX, X, XI, XIII научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (Саранск, 2003, 2004, 2005, 2006, 2008), XXXIV, XXXV, XXXVI Огаревских чтениях (научной конференции Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева) (Саранск, 2005, 2006, 2007).

По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 158 стр. компьютерного набора, документирована 15 таблицами, иллюстрирована 27 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), изложения собственных результатов (3-6 главы), обсуждения полученных результатов, выводов и библиографического указателя, включающего 250 источников, в том числе 173 отечественных и 77 иностранных.

выводы

1. Моделирование экспериментального аллоксанового диабета приводит к выраженной активации процессов перекисного окисления липидов в сыворотке крови. Введение 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината и 3-оксипиридина ацетилцистеината в исследуемых дозах ограничивают рост малонового диальдегида и депрессию каталазной активности.

2. Применение 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината и 3-оксипиридина ацетилцистеината корригируют гипергликемию, способствуют нормализации липидного спектра сыворотки крови, снижая уровень общего холестерина, триглицеридов, (3 - л и п о протеидов и повышая уровень а-холестерина, ограничивают рост ферментов цитолиза и снижают содержание общего белка в условия аллоксаного диабета.

3. 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат и 3-оксипиридина ацетилци-стеинат корригируют развитие электрической нестабильности миокарда при аллоксановом диабете, уменьшая дисперсию интервала С^Т, а также дисперсию корригированного по ЧСС интервала (^Т в сравнении с контролем.

4. Использование соединений с антиоксидантным типом действия при лечении сахарного диабета снижает выраженность морфо-функциональных изменений сердца: сосудистого полнокровия, перицеллюлярного и периваскуляр-ного отека, спазма мелких артерий и артериол, уменьшает число и форму очагов кровоизлияния и эозинофилии в миокарде, восстанавливает структуру сократительных элементов миокардиоцитов. Наибольшая эффективность отмечена при введении 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината в дозе 12,5 мг/кг.

5. При экспериментальном диабете возникают реактивные и деструктивные изменения в холинергических и адренергических элементах внутриорганного нервного аппарата сердца животных. Наблюдается истощение медиаторных систем в составе адренергических и холинергических нервных элементов во всех слоях стенки сердца. Наиболее выраженные изменения отмечены в миокарде левого желудочка и правого предсердия.

6. 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцинат в дозе 12,5 мг/кг и 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцинат в дозе 25 мг/кг наиболее выражено предотвращают снижение медиаторной активности в вегетативной нервной системе сердца, его холинергических и адренергических нервных элементах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные данные являются экспериментальным обоснованием для дальнейшего изучения фармакологических эффектов 2,4,6-триметил-З-гидроксипиридина сукцината, , 3-оксипиридина ацетилцистеината, З-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината и 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорида при сахарном диабете.