Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Церебропротекторное, ноотропное и тимоаналептическое действие отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты при сахарном диабете

На правах рукописи

Рассохина Любовь Михайловна

ЦЕРЕБРОПРОТЕКТОРНОЕ, НООТРОПНОЕ И ТИМОАНАЛЕПТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ ПРОИЗВОДНЫХ 3-ОКСИПИРИДИНА И ЯНТАРНОЙ КИСЛОТЫ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ

14.03.06 - Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

1 о ОКТ 2013

Челябинск - 2013

005534732

Работа выполнена на кафедре фармакологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный консультант:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Волчегорский Илья Анатольевич

Официальные оппоненты:

Воронина Татьяна Александровна Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор, ФГБУ "Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова" РАМН, лаборатория психофармакологии, заведующая

Венгеровский Александр Исаакович Заслуженный работник высшей школы РФ, доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздрава России, кафедра фармакологии, заведующий

Новиков Василий Егорович доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Смоленская государственная медицинская академия» Минздрава России, кафедра фармакологии с курсом фармации ФПК и ППС, заведующий

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита диссертации состоится « 2013 года в часов на заседании

Диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, по адресу: 454092, г.Челябинск, ул.Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Автореферат разослан « 2013 года.

Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор медицинских наук

Ю.С. Шишкова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования и степень ее разработанности

Одним из наиболее проблемных разделов лечения сахарного диабета (СД) является коррекция его поздних неврологических осложнений (Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., Креминская В.М. Лечение сахарного диабета и его осложнений. М. : Медицина, 2005. 512 е.). Диабетические поражения нервной системы неизбежно возникают даже на фоне многолетней компенсации этого заболевания, достигнутой благодаря применению современных, эффективных и доступных сахароснижающих препаратов (Callaghan B.C., Hur J., Feldman E.L. Diabetic neuropathy: one disease or two? // Curr. Opin. Neurol. 2012. Vol. 25, № 5. P. 536-541.). Высокая медико-социальная значимость нейропатических осложнений СД связана с нарастающей распространенностью, инвалидизирующими и жизнеугрожающими последствиями диабетических поражений периферической нервной системы (Дедов И.И., Удовиченко О.В., Галстян Г.Р. Диабетическая стопа. М. : Практическая медицина, 2005. 197 е.; Tesfaye S., Selvarajah D. Advances in the epidemiology, pathogenesis and management of diabetic peripheral neuropathy // Diabetes Metab. Res. Rev. 2012. Vol. 28, Suppl. 1. P. 8-14.). Диабетические поражения центральной нервной системы (ЦНС) и, прежде всего, диабетическая энцефалопатия (ДЭ) привлекают внимание специалистов здравоохранения в значительно меньшей степени. Это связано с малосимптомной, «расплывчатой» клинической картиной и относительно медленным темпом прогрессирования начальных проявлений ДЭ. Тем не менее ДЭ характеризуется прогредиентным течением с самоускоряющиейся эскалацией аффективных расстройств и когнитивного дефицита, высоким риском фатальных цереброваскулярных катастроф и исхода в деменцию (Строков И.А., Захаров В.В., Строков К.И. Диабетическая энцефалопатия // Неврология, психиатрия, психосоматика. 2012, № 2. С. 30-40.). Развитие деменции на фоне прогрессирования ДЭ особенно часто отмечается у пациентов, страдающих СД 2 типа, которые также представляют собой группу риска по развитию болезни Альцгеймера (Hölscher С. Diabetes as a risk factor for Alzheimer's disease: insulin signalling impairment in the brain as an alternative model of Alzheimer's disease // Biochem. Soc. Trans. 2011. Vol. 39, № 4. P. 891-897). Накопленные к настоящему времени данные позволяют прогнозировать увеличение общего числа больных деменцией с 24 миллионов в 2001 году до 81 миллиона в 2040 году (Ferri С.Р., Prince M., Brayne С. et al. Global prevalence of dementia: a Delphi consensus study // Lancet. 2005. Vol. 366, № 9503. P. 2112-2117.). Это связано не только с увеличением популяционной доли пожилых и старых людей, но и со значительным нарастанием распространенности СД. В соответствии с текущим прогнозом предполагается, что к 2030 году число больных СД составит 552 миллиона человек, в основном за счет пациентов с СД 2 типа (Дедов И.И. Сахарный диабет - опаснейший вызов мировому сообществу // Вестн. РАМН. 2012. № 1. С. 7-13.). Несомненный прогресс в комплексном лечении СД способствует увеличению продолжительности жизни пациентов (Там же). Эти обстоятельства свидетельствуют о непрерывном нарастании медико-социальной значимости ДЭ, которая становится глобальной проблемой современного здравоохранения, требующей безотлагательного решения. Отсутствие стандартов диагностики, профилактики и лечения ДЭ диктует необходимость разработки эффективных, безопасных и экономически доступных подходов к предупреждению и терапии данного синдрома (Левин О.С., Ильясова Ф.Н. Когнитивные нарушения при сахарном диабете типа 2 // Consilium Medicum. 2012. T. 14, № 9. С. 92-97.; Sima A.A. Encephalopathies: the emerging diabetic complications // Acta Diabetol. 2010. Vol. 47, №4. P. 279-293.).

В качестве перспективных лекарственных средств (ЛС) для решения этой задачи можно рассматривать оригинальные отечественные производные 3-оксипиридина (3-ОП) и янтарной кислоты (ЯК). Первым зарегистрированным препаратом этой группы является эмоксипин (2-этил-6-метил-З-оксипиридина гидрохлорид), синтезированный в начале 1960-х годов в Институте биохимической физики РАН Л.Д. Смирновым, В.И. Кузьминым, K.M. Дюмаевым, С.Б. Гашевым. Его действие подробно изучено группой исследователей под руководством академика РАН Н.М. Эммануэля (Дюмаев K.M., Воронина Т.А., Смирнов Л.Д. Антиоксиданты

в профилактике и терапии патологий ЦНС. М. : Изд-во Института биомедицинской химии РАМН, 1995. 271 е.). Эмоксипин используется в основном в офтальмологической практике. В начале 1980-х годов в ГУ НИИ фармакологии РАМН Л.Д. Смирновым и В.И. Кузьминым синтезирован мексидол (2-этил-6-метил-3-тлоксипиридина сукцинат). Его фармакологическая активность изучена Т.А. Ворониной, С.Б. Середениным, A.B. Еремеенко, Л.Д. Лукьяновой и др. под общим руководством академика РАМН A.B. Вальдмана (Середенин С.Б., Воронина Т.А. Современная фармакотерапия эмоционально-стрессовых расстройств // Вестн. эстетической медицины. 2009. Т. 8, № 3. С. 32-40.). Широкий спектр фармакологических эффектов мексидола может быть сведен к двум основным действиям: собственно нейропротекгорному и вазотропному (Воронина Т.А. Мексидол: спектр фармакологических эффектов // Журн. неврологии и психиатрии. 2012. № 12. С. 86-90.). Это делает его особенно перспективным для лечения ДЭ, которая справедливо рассматривается как дисциркуляторно-метаболическая патология головного мозга (Коркина М.В., Елфимова Е.В. Диабет и когнитивное старение // Журн. неврологии и психиатрии. 2004. № 3. С. 80-84.). На сегодняшний день не сформулированы четкие отличия в спектре фармакологических эффектов эмоксипина и мексидола. Мексидол отличается от эмоксипина наличием сукцинатного аниона. В связи с этим заслуживает внимания препарат ЯК реамберин, разработанный и внедренный в клиническую практику в начале 2000-х годов специалистами отечественной фармацевтической компании ООО «НТФФ«ПОЛИСАН» (Реамберин: реальность и перспективы : сб. науч. ст. СПб, 2002. 168 е.). В настоящее время реамберин интенсивно применяется в качестве антигипоксического и дезинтоксикационного средства.

Эмоксипин, реамберин и мексидол, представляющие своеобразный ряд производных 3-ОП и ЯК, были подробно изучены при дистальной симметричной сенсомоторной полинейропатии у больных СД. Они продемонстрировали выраженное антинейропатическое действие и способность к снижению коморбидных тревожно-депрессивных расстройств (Волчегорский И.А., Москвичева М.Г., Чащина E.H. Влияние антиоксидантов на проявления сенсомоторной полиневропатии и аффективные нарушения при сахарном диабете // Журн. неврологии и психиатрии. 2005. Т. 105, № 2. С. 41-45.). Основой терапевтического эффекта производных 3-ОП и ЯК принято считать их антиоксидантное и антигипоксическое действие (Галенко-Ярошеский В.П., Гулевская О.Н., Зеленская A.B. и др. Современные проблемы коррекции нарушений окислительного гомеостаза в практике экспериментальной фармакологии // Новые технологии. 2011. № 2. С. 166-171.). Это свидетельствует об актуальности и перспективности изучения эффективности эмоксипина, реамберина и мексидола в лечении ДЭ. Особого внимания заслуживает сопоставление их потенциальных церебропротекторных эффектов с действием а-липоевой кислоты (а-ЛК), которая в течение длительного времени рассматривалась в качестве эталонного средства лечения диабетических нейропатий (Ziegler D., Tritschler H.-J., Строков И.А. и др. Лечение диабетической полиневропатии тиоктовой кислотой // Фарматека. 2008. № 17. С. 28-36.).

Цель исследования

Провести сравнительное экспериментальное изучение церебропротекторного, ноотропного и тимоаналептического действия производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты (эмоксипина, реамберина и мексидола) при сахарном диабете в сопоставлении с их влиянием на расстройства углеводного и липидного обмена, а также в зависимости от их антиоксидантной, антигипоксической, сахароснижающей и инсулин-потенциирующей активности. Оценить возможности клинического применения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты с целью коррекции аффективных нарушений и когнитивного дефицита у больных сахарным диабетом.

Задачи исследования

1. Изучить влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на устойчивость к острой гипоксии и чувствительность к инсулину в зависимости от способности исследуемых препаратов модулировать липидную пероксидацию in vitro.

2. Изучить влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на толерантность к нагрузке глюкозой.

3. Изучить влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на выраженность гипергликемии при аплоксановом диабете.

4. Изучить влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на выраженность дислипидемии и состояние системы «перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита» при аплоксановом диабете.

5. Изучить влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на изменения клеточного состава и гистохимические проявления оксидативного стресса в кортикальных и диэнцефальных структурах головного мозга крыс с аллоксановым диабетом.

6. Изучить влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на вьфаженность расстройств мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения экспериментальных животных с аллоксановым диабетом.

7. Провести экспериментальное сопоставление терапевтической эффективности производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты при аплоксановом диабете с действием а-липоевой кислоты, используемой в качестве препарата сравнения.

8. Изучить зависимость выраженности метаболических, церебропротекторных и психотропных эффектов производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты, а также а-липоевой кислоты от дозировок и кратности введения соответствующих лекарственных препаратов животным с экспериментальным сахарным диабетом. Сопоставить полученные данные с влиянием производных 3-оксипиридина, янтарной и а-липоевой кислоты на липидную пероксидацию in vitro, чувствительность к инсулину, толерантность к сахарной нагрузке и устойчивость к гипоксии.

9. На основании анализа результатов экспериментальных исследований выявить среди изучаемых производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты наиболее эффективное и безопасное лекарственное средство и провести его клинико-фармакологическую и фармакоэкономическую оценку в сравнении с препаратом а-липоевой кислоты по влиянию на качество жизни, аффективные и когнитивные расстройства у больных сахарным диабетом в сопоставлении с влиянием на показатели углеводного, липидного обмена и систему «перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита».

Методология и методы исследования

Работа включает экспериментальный и клинико-фармакологический разделы. Экспериментальный раздел исследования был осуществлен на лабораторных грызунах (мыши, крысы) с использованием модели аллоксанового диабета. В период с 4 по 17 день после индукции аллоксанового диабета проведено изучение церебропротекторного, ноотропного и антидепрессивного действия эмоксипина, реамберина и мексидола в сопоставлении с их влиянием на расстройства углеводного и липидного обмена, а также в зависимости от их антиоксидантной, антигипоксической, сахароснижающей и инсулин-потенциирующей активности. В качестве препарата сравнения изучалась а-липоевая кислота. Клинико-фармакологический раздел исследования был посвящен клинической и фармакоэкономической оценке наиболее эффективного и метаболически безопасного производного 3-оксипиридина и янтарной кислоты, отобранного по результатам экспериментальной терапии. Клиническая эффективность применения этого ЛС была сопоставлена с действием а-липоевой кислоты в рамках краткосрочного, проспективного, плацебо-контролируемого, простого «слепого», рандомизированного исследования влияния изученных препаратов на динамику нарушений аффективного статуса, когнитивных функций, качества жизни, показателей углеводного и липидного обмена у больных СД. В работе использованы биохимические, гистологические, гистохимические, морфометрические, клинико-лабораторные, психометрические, фармакоэкономические, статистические методы исследования.

Степень достоверности, апробация результатов, личное участие автора

Достаточный массив фактических данных, избранный дизайн и методы исследования, адекватные сформулированным в работе целям и задачам, корректный и разносторонний статистический анализ обеспечили достоверность полученных результатов, сформулированных выводов, положений и рекомендаций.

Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы в материалах Российского национального конгресса кардиологов «Повышение качества и доступности кардиологической помощи» (Москва, 2008), 2-го Чешско-Российского медицинского Форума «Инновационные технологии в медицине» (Чехия, Брно, 2008), V Российской конференции с международным участием «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2008), 3-го Международного Китайско-Российского фармакологического симпозиума (Китай, Харбин,

2008), научной сессии, посвященной 65-летию медицинской академии «Актуальные проблемы медицинской науки и практического здравоохранения» (Челябинск, 2009), Российской конференции «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Челябинск,

2009), II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Ученые Урала и Сибири - развитию отечественной фармации: от синтеза до инновационных лекарственных средств» (Новосибирск, 2011), Конгресса «Здравоохранение Российской Федерации, стран СНГ и Европы» (Москва, 2011), Российской научно-практической конференции «Фундаментальные вопросы гематологии. Достижения и перспективы» (Челябинск, 2012), IV съезда фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (Казань, 2012).

Апробация работы состоялась на расширенном заседании кафедры фармакологии с участием сотрудников кафедры профессиональных болезней и клинической фармакологии, кафедры клинической фармакологии и терапии факультета дополнительного профессионального образования Государственного бюджетного учреждения высшего профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России) с приглашением врачей клинических баз, на которых выполнялось исследование.

Автор лично теоретически разработал и практически реализовал концепцию исследования на основе научно-информационного поиска, выполнения экспериментального раздела работы на лабораторных животных, организации многоцентрового клинического исследования, проведения комплексного психометрического обследования больных, организации и контроля за выполнением лабораторных исследований, самостоятельной статистической обработки первичных данных, анализа и интерпретации ее результатов. Автором лично сформулированы положения, выносимые на защиту, выводы, практические рекомендации, написан текст диссертации.

Положения, выносимые на защиту

1. Моделирование аллоксанового диабета приводит к раннему развитию гипергликемии, дислипидемии и оксидативного стресса, сопровождающихся быстропрогрессирующим нарушением клеточного состава кортикальных и диэнцефальных структур головного мозга с сопутствующими расстройствами мотивированного поведения экспериментальных животных и их способности к условнорефлекторному обучению.

2. Оригинальные отечественные производные 3-оксипиридина и янтарной кислоты (эмоксипин, реамберин и мексидол) обладают модулирующим влиянием на липидную пероксидацию, устойчивость к гипоксии, чувствительность к инсулину, толерантность к нагрузке глюкозой и могут быть использованы для коррекции метаболических, нейроморфологических и поведенческих расстройств при экспериментальном сахарном диабете.

3. Применение эмоксипина, реамберина и мексидола при аллоксановом диабете корригирует гипергликемию в зависимости от способности изученных лекарственных средств

увеличивать толерантность к сахарной нагрузке, а также уменьшает дислипидемию в зависимости от их антигипоксической активности.

4. Курсовое применение производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты при аллоксановом диабете корригирует СД-ассоциированные нарушения клеточного состава церебральных структур, а также сопутствующие расстройства мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения в зависимости от характера влияния изученных лекарственных средств на липидную пероксидацию.

5. Эмоксипин, реамберин и мексидол не уступают по своей терапевтической эффективности при аллоксановом диабете а-липоевой кислоте.

6. Мексидол, одновременно являющийся производным 3-оксипиридина и янтарной кислоты, характеризуется оптимальным балансом между терапевтической эффективностью и метаболической безопасностью при аллоксановом диабете. Это позволяет рассматривать мексидол как предпочтительное производное 3-оксипиридина и янтарной кислоты для клинического применения у больных сахарным диабетом.

7. При курсовом двухнедельном введении больным сахарным диабетом мексидол не уступает а-липоевой кислоте по корригирующему влиянию на параметры углеводного обмена и аффективного статуса.

Научная новизна

Впервые проведено целенаправленное систематическое изучение структурно-родственных отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты (эмоксипина, реамберина, мексидола) на проявления экспериментальной диабетической энцефалопатии.

Впервые показано, что моделирование аллоксанового диабета в эксперименте на крысах приводит к формированию нейроморфологических и поведенческих проявлений диабетической энцефалопатии уже через 96 часов после введения аллоксана с дальнейшим непрерывным прогрессированием на протяжении последующих двух недель.

Впервые показано, что наличие сукцинатного аниона в структуре отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты способствует развитию прооксидантного эффекта и ограничивает антиоксидантное действие 3-оксипиридинового катиона.

Впервые установлено инсулин-потенциирующее действие эмоксипина и реамберина, а также способность эмоксипина, реамберина и мексидола увеличивать толерантность к нагрузке глюкозой. Впервые продемонстрировано, что позитивное влияние производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на толерантность к нагрузке глюкозой прямо зависит от их антигипоксического потенциала. Впервые показано, что курсовое применение эмоксипина, реамберина, мексидола и а-липоевой кислоты при аллоксановом диабете корригирует гипергликемию в прямой зависимости от способности изученных лекарственных средств увеличивать толерантность к сахарной нагрузке.

Впервые показано, что влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на выраженность дислипидемии при аллоксановом диабете существенно зависит от их антигипоксической активности.

Впервые продемонстрировано, что наличие 3-оксипиридинового катиона в структуре отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты и их антиоксидантная активность in vitro играют определяющую роль в реализации церебропротекторного, ноотропного и гипогликемизирующего эффектов изученных лекарственных средств при аллоксановом диабете. Показано, что наличие сукцинатного компонента в структуре отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты определяет преимущественную локализацию церебропротекторного действия этих лекарственных средств на уровне поверхностных слоев первичной соматосенсоной коры крыс с аллоксановым диабетом.

Впервые показано, что отечественные производные 3-оксипиридина и янтарной кислоты не уступают а-липоевой кислоте, изученной в качестве препарата сравнения, по способности корригировать метаболические, нейроморфологические и когнитивно-аффективные нарушения при сахарном диабете.

Теоретическая и практическая значимость работы

Установленные факты отражают новые, ранее неизвестные аспекты фармакодинамики отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты (эмоксипина, реамберина и мексидола) при лечении сахарного диабета. Установленные факты свидетельствуют о том, что антиоксидантная и антигипоксическая активность является определяющей в реализации корригирующего влияния изученных лекарственных средств на расстройства метаболизма и поражение центральной нервной системы при сахарном диабете.

Полученные в процессе диссертационной работы результаты свидетельствуют о целесообразности включения мексидола в схему комплексного лечения сахарного диабета. Подобное расширение стандартных схем лечения сахарного диабета позволит рассчитывать на эффективную и безопасную коррекцию нарушений углеводного обмена и аффективного статуса больных.

Внедрение результатов исследования в практику *

Результаты диссертационного исследования используются в учебном процессе ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России на кафедре Фармакологии в разделе «Средства, влияющие на центральную нервную систему» по темам «Антидепрессивные средства», «Ноотропные средства», на кафедре Химии фармацевтического факультета при изучении фармацевтической и токсикологической химии в разделе «Алифатические органические соединения» по теме «Предельные карбоновые кислоты», в разделе «Группы веществ, изолируемых экстракцией и сорбцией» по теме «Химико-токсикологический анализ производных барбитуровой кислоты» и в вариативной дисциплину по выбору «Спектральные методы в современном анализе», на кафедре Госпитальной терапии № 2 в цикле «Эндокринология» по теме «Дифференциальная диагностика при синдроме гипергликемии. Стандарты диагностики и лечения сахарного диабета», а также в модуле специальных дисциплин по теме «Сахарный диабет» для интернов по специальности «Терапия», «Эндокринология» и ординаторов по специальности «Общеврачебная практика (семейная медицина)».

Результаты диссертационного исследования используются в клинической практике МБУЗ «Ордена Трудового Красного Знамени Городская клиническая больница №1» и МБУЗ «Городская клиническая больница №9» г.Челябинска, а также Клиники ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России.

Публикации

Соискатель имеет 76 опубликованных работ, из них по теме диссертации опубликовано 27 научных работ общим объемом 6 печатных листов, в том числе 18 статей в научных журналах и изданиях, которые включены в перечень российских рецензируемых научных журналов и изданий для опубликования основных научных результатов диссертаций. Соискателем опубликовано 7 работ в материалах всероссийских и международных конференций и симпозиумов, 2 статьи - в региональных изданиях.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 344 листах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 48 таблицами, 20 рисунками. Список литературы содержит 525 источников, из которых 230 опубликовано в отечественной литературе и 295 - в зарубежных изданиях.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Работа выполнялась в 2006-2012гг. на кафедре фармакологии ГБОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» Минздрава России (с 1.04.2013г. - ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России), на базе эндокринологических отделений МБУЗ «Ордена Трудового Красного Знамени Городская клиническая больница №1» и МБУЗ «Городская клиническая больница №9» г.Челябинска, а также центра «Диабетическая стопа» Клиники

ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России в соответствии с планом научно-исследовательских работ по темам «Фармакология оксидативного стресса и иммуно-эндокринных взаимодействий» (№ госрегистрации 0120.0 511655) и «Клинико-экспериментальное изучение новых аспектов фармакодинамики производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты и обоснование их применения по новым показаниям» (№ госрегистрации 012011533159).

Экспериментальный раздел работы выполнен на 973 белых беспородных мышах массой 18-25 г и 893 белых беспородных крысах массой 140-250 г. Организация работы соответствовала этическим нормам, регламентирующим эксперименты на животных (Копаладзе P.A. Регламентация экспериментов на животных - этика, законодательства, альтернативы // Успехи физиологических наук. 1998. Т. 29, № 4. С. 74-92.), отражённым в международных и российских нормативно-правовых документах (Европейская конвенция о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях: EST № 123 от 18 марта 1986г. Страсбург, 1986. 15 е.; Об утверждении правил лабораторной практики : приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации № 267 от 19 июня 2003г. М., 2003. 22 е.). Эвтаназию грызунов осуществляли диэтиловым эфиром ингаляционно. Основные характеристики изученных лекарственных препаратов представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Лекарственные препараты, использованные в исследовании

Торговое название, производитель, страна МНН или группи-ровочное название Химическое название Форма выпуска Фармако-терапевтическая группа Код АТХ

Эмоксипин, ФГУП «Московский эндокринный завод», Россия Метил- этилпири- динол 3 -окси-б-метил-2 -этилпиридина гидрохлорид Раствор для инъекций 10мг/мл в ампулах по 1мл Антиокси- дантное средство N07XX Препараты для лечения заболеваний нервной системы другие

Реамберин, ооо«нтфф «полисан», Россия Меглюмина натрия сукцинат Ы-(1-дезокси-0-глюцитол-1 -ил)-Ы-метиламмония натрия сукцинат* Раствор для инфузий 1,5% в бутылках по 400 мл Дезинток- сикационное средство В05ВВ Растворы, влияющие на водно-электролитный баланс

Мексидол, ооо «нпк «Фармасофт», Россия Этил метил-гид роке и-пиридина сукцинат 2-этил-б-метил-З- гидроксипиридина сукцинат раствор для внутривенного и внутримышечного введения 50 мг/мл в ампулах по 2мл Антиокси- дантное средство N07XX Препараты для лечения заболеваний нервной системы другие

Берлитион 300, Берлин-Хеми/ Менарини Фарма ГмбХ, Германия Тиоктовая (а-липоевая) кислота 6,8-дитиооктановая кислота* концентрат для приготовления раствора для инфузий 25 мг/мл в ампулах по 12мл Метаболическое средство А16АХ01 Тиоктовая кислота

Примечание - Информация получена на официальном сайте Министерства здравоохранения Российской Федерации, Портал по ведению государственного реестра лекарственных средств (Режим доступа -http://grls.rosminzdrav.ru); АТХ - анатомо-терапевтическая химическая классификация; * - химические названия, не указанные в государственном реестре.

Исследуемые препараты вводили лабораторным животным в дозах, экстраполированных из разовых дозировок терапевтического диапазона для человека с учётом различий в величинах относительной площади поверхности тела (Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма / И.А. Волчегорский, И.И. Долгушин, O.JI. Колесников и др. Челябинск : Изд-во Челябинского гос. пед. ун-та, 2000. 167 е.). Во всех случаях минимальной дозой изучаемого диапазона являлась '/г от расчетного эквивалента средней терапевтической дозы (ЭСТД). В качестве максимальной дозировки использовался удвоенный ЭСТД (таблица 2). Исследуемые препараты разводили в 0,9 % растворе NaCl и применяли внутрибрюшинно. Животные контрольных подгрупп получали тем же путем соответствующие объемы 0,9 % раствора NaCl.

Для оценки антиоксидантного потенциала исследуемых препаратов изучалось их действие на липопероксидацию in vitro. Влияние изучаемых JIC на интенсивность перекисного

окисления липидов (ПОЛ) in vitro оценивали по изменениям накопления веществ, реагирующих с 2-тиобарбитуровой кислотой в 2% гомогенатах головного мозга крыс, инкубируемых в атмосфере воздуха при 37°С в течение 60 минут (Там же, с. 9). ПОЛ-модулирующее действие каждого ЛС изучали в диапазоне от нано- до миллимолярной концентрации.

Таблица 2 - Разовые дозы использованных лекарственных препаратов

Лекарственный препарат Диапазон разовых доз для человека Разовая доза для расчета ЭСТД ЭСТД для крыс ЭСТД для мышей

Эмоксипин 60-900 мг 150 мг 12,5 мг/кг 25 мг/кг

Реамберин 400-800 мл 400 мл 25 мл/кг 50 мл/кг

Мексидол 200-500 мг 300 мг 25 мг/кг 50 мг/кг

а-Липоевая кислота 300-600 мг 600 мг 50 мг/кг 100 мг/кг

В экспериментах по изучению влияния эмоксипина, реамберина, мексидола и а-ЛК на чувствительность к инсулину in vivo изученные ЛС вводили интактным крысам однократно внутрибрюшинно, после чего проводили струйную внутривенную инфузию нейтрального раствора инсулина для инъекций (Хумулин регуляр, «Eli Lilly», Франция) в дозе 40 IU/кг. Чувствительность животных к инсулину оценивали по латентности развития инсулиновой комы (Там же, с.9).

В экспериментах по оценке влияния эмоксипина, реамберина, мексидола и а-ЛК на толерантность к нагрузке глюкозой через 30 минут после однократного введения ЛС у крыс забирали кровь из хвостовых вен для регистрации исходных значений гликемии и выполняли тест толерантности к глюкозе (ТТГ). С этой целью применяли нагрузку глюкозой в дозе 2 г/кг (5 мл/кг 40% раствора глюкозы, внутрибрюшинно). Изменения гликемии в динамике ТТГ регистрировали через 60 и 120 минут после сахарной нагрузки.

Для оценки антигипоксического потенциала изученные препараты вводили мышам за 30 минут до моделирования острой гипоксической гипоксии. Влияние эмоксипина, реамберина, мексидола и а-ЛК на устойчивость к гипоксии оценивали по латентности асфиксической гибели мышей в тесте «асфиксии утопления» (Кулинский В.И., Ольховский И.А., Ковалевский А.Н. Защитное действие агонистов а-адренорецепторов при гипоксической гипоксии // Бюл.экспериментальной биологии и медицины. 1986. № 6. С. 669-671.).

Моделирование аллоксанового диабета у крыс осуществляли путем внутрибрюшинного введения аллоксана тригидрата («La Chema», Чехия) или аллоксана моногидрата («ДИАЭМ», Россия) в эквивалентных дозах (200 мг/кг и 163 мг/кг соответственно). Экспериментальный СД у мышей вызывали путем подкожного введения аллоксана тригидрата или аллоксана моногидрата в дозах 300 мг/кг и 245 мг/кг соответственно. Через 72 часа после индукции СД животных, получивших инъекцию аллоксана, равномерно распределяли на подгруппы экспериментальной терапии и контроля. Каждый препарат вводили животным внутрибрюшинно 1 раз в сутки на протяжении 1, 7 и 14 дней. Для предотвращения фатального кетоацидоза и гибели животных, начиная с 4 дня после инъекции аллоксана всем лабораторным грызунам с 7-ми и 14-дневным курсом терапии экспериментального СД проводили базисную инсулинотерапию путем подкожного введения инсулина аспарта двухфазного (НовоМикс 30 Пенфилл, «Novo nordisk», Дания) в дозах 3 IU/кг для крыс и 6 IU/кг для мышей. Через сутки после окончания экспериментальной терапии оценивали параметры мотивированного поведения животных, которых затем наркотизировали диэтиловым эфиром, декапитировали и получали кровь для биохимических исследований. У крыс дополнительно извлекали головной мозг для последующего гистологического изучения.

Выраженность расстройств углеводного обмена у крыс и мышей оценивали по показателям гликемии натощак глюкозооксидазным методом с помощью стандартных наборов («Новоглюк - К, М (500)», ЗАО «Вектор - Бест», Новосибирск). Дополнительно в сыворотке крови крыс регистрировали концентрацию фруктозамина (ФА) в мкМоль/1г альбумина

(Меньшиков В.В., Делекторская JI.H., Золотницкая Р.П. Лабораторные методы исследования в клинике. М. : Медицина, 1987. 368 е.). О состоянии липидного обмена у крыс судили по содержанию общего холестерина (ОХС) и триглицеридов (ТГ) в сыворотке крови (Там же). Уровень продуктов ПОЛ в сыворотке крови определяли спектрофотометрически с раздельной регистрацией липопероксидов в гептановой и изопропанольной фазах липидного экстракта (Волчегорский И.А., Налимов А.Г., Яровинский Б.Г. и др. Сопоставление различных подходов к определению продуктов перекисного окисления липидов в гептан-изопропанольных экстрактах крови // Вопр. мед. химии. 1989. Т. 35, № 1. С.127-131.). Результаты выражали в единицах индексов окисления (е.и.о.) - Е232/Е220 (относительное содержание диеновых коньюгатов; ДК) и Е278/Е220 (уровень кетодиенов и сопряженных триенов; КД и CT). О состоянии антиоксидантной защиты (АОЗ) судили по содержанию а-токоферола (а-ТК) и церулоплазмина (ЦП) в сыворотке крови. Концентрацию а-ТК определяли с использованием реактива Эммери-Энгель и поправкой на оптическое поглощение каротинов (Спиричев В.Б., Матусис И.И., Бронштейн Л.М. Витамин Е // Экспериментальная витаминология : справочное рук. Минск, 1979. С. 18-57.). Уровень ЦП регистрировали модифицированным методом Ревина (Колб В.Г., Камышников B.C. Клиническая биохимия. Минск, 1976. 311 е.).

Образцы головного мозга крыс разделяли на отделы по методу J. Glovinsky and L.L. [versen (Glowinski J., Iversen L.L. Regional studies of catecholamines in the rat brain. I. The disposition of H3-norepinephrine, H3-dopamine and H3-DOPA in various regions of the brain // J. Neurochem. 1966. Vol. 13, № 8. P. 655-669.). Для гистологического анализа отбирали участки первичной соматосенсорной коры (слои I-III и IV-VI поля Par 1), гиппокамп (поле CAI) и гипоталамус (паравентрикулярное ядро - ПВЯ). Гистологические срезы окрашивали по методу Ниссля для выявления нейронов, по методике Снесарева для выявления астроцитов и по технологии Мийагавы в модификации Александровой для выявления олигодендроцитов и микроглиоцитов, для выявления липофусцина применяли окраску по Шморлю (Сапожников А.Г., Доросевич А.Е. Гистологическая и микроскопическая техника : рук. Смоленск : САУ, 2000. 476 е.). Морфометрический анализ гистологических препаратов проводился на микроскопе Leica DMRXA с помощью компьютерной программы ImageScope (Германия) в 10 полях зрения. Количество клеток всех изученных популяций рассчитывали на 1 мм среза. Дополнительно учитывали процентную долю площади нейронов, занимаемую тигроидной зернистостью, а также процентную долю нейронов, содержащих липофусцин. При изучении структур гиппокампа проводилась регистрация пирамидных и корзинчатых нейронов с последующим исчислением их процентного и абсолютного содержания.

Для изучения влияния ЛС на аффективный статус лабораторных животных с аллоксановым диабетом проводилось исследование их поведения в тесте «открытое поле». При наблюдении за крысами применялся вариант актографа, разработанный И.А. Волчегорским и соавт. (Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма / И.А. Волчегорский, И.И. Долгушин, О.Л. Колесников и др. Челябинск : Изд-во Челябинского гос. пед. ун-та, 2000. 167 е.), при работе с мышами -описанный в работе M.L. Weischer (Weischer M.L. Eine einfache Versuchsanordnung zur quantitativen beurteilung von motilitat und neugierverhalten bei mausen // Psychopharmacology. 1976. Vol. 50. P. 275-279.). По завершении тестирования крыс в «открытом поле» оценивали их способность к выработке условного рефлекса активного избегания (УРАИ) плаванием за одну попытку (Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Дж.П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. М. : Высшая школа, 1991. 399 е.). О качестве формирования УРАИ судили по кратности снижения латентного периода избегания через 24 часа после обучающей попытки. После завершения тестирования мышей в «открытом поле» выполняли шестиминутный тест подвешивания за хвост с регистрацией длительности «поведения отчаяния», являющегося гомологом депрессивных расстройств у человека (Steru L., Chermat R„ Thierry В. et al. The tail suspension test: A new method for screening antidepressants in mice // Psychopharmacology. 1985. № 85. P. 367-370.).

Клинико-фармакологический раздел исследования одобрен этическим комитетом ГБОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» Минздрава России (протокол № 1 от 14 сентября 2010г.) и соответствовал положениям Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации последнего пересмотра (WMA Declaration of Helsinki -Ethical Principles for Medical Research Involving Human Subjects [Электронный ресурс]. Режим доступа: http://www.wma.net/en/30publications/10policies/b3/index.html.) и Национального стандарта Российской Федерации (Надлежащая клиническая практика : ГОСТ Р 52379-2005. М. : Стандартинформ, 2005. 39 е.). Все больные подписывали Форму информированного согласия до момента включения в исследование. Отбор больных для исследования осуществлялся в соответствии с клиническими критериями включения и исключения.

Критерии включения: СД 1 типа (инсулинзависимый) - ЕЮ, СД 2 типа (инсулиннезависимый) - Ell.

Критерии исключения: длительность СД менее 6 месяцев, острые осложнения СД, острый коронарный синдром, острые нарушения церебрального кровообращения, острые инфекционные заболевания, ишемическая форма синдрома диабетической стопы (СДС), диабетическая нефропатия III-IV стадии, онкологические заболевания, алкоголизм, беременность, лечение препаратами ацетилцистеина, аллилтиамина и токоферола, любое неблагоприятное изменение состояния в процессе комплексного лечения.

С помощью процедуры динамической рандомизация пациенты были распределены на три группы. Больным 1 группы дополнительно к базисному лечению проводили ежедневное внутривенное капельное введение 200 мл «поляризующей смеси» (10 мл 4% раствора калия хлорида, 10 мл раствора панангина, 4 единицы инсулина в 200 мл 5% раствора глюкозы). Данное воздействие рассматривалось как «активная плацебо-терапия» (Аведисова A.C., Чахова О.В., Люпаева Н.В. Плацебо-эффект в психиатрии: обзор литературы // Рос. психиатр, журн. 2003. № 3. С. 65-71.). Больные 2 группы ежесуточно получали внутривенные капельные инфузии 300 мг мексидола в 200 мл 0,9% раствора хлорида натрия. Больным 3 группы тем же путем ежедневно вводили 600 мг а-ЛК, разведенной в 200 мл 0,9% раствора хлорида натрия. Длительность инфузионной терапии во всех группах составила 14 дней. В процессе выполнения работы из исследования выбыли два пациента, оставшиеся 90 больных были включены в анализ эффективности исследованных ЛС.

У всех больных, включенных в исследование, была выявлена дистальная симметричная сенсомоторная полинейропатия с признаками нейропатической и нейроишемической форм СДС 0 - I стадии по Wagner (Wagner F.W. A classification and treatment program for diabetic, neuropatic and dysvascular foot problems // The American Academy of Ortopaedic Surgeons instructional course lectures. St. Louis : Mosby Year Book, 1979. P. 143-165.). 78 пациентов страдало артериальной гипертонией, 74 - энцефалопатией смешанного (дисциркуляторно-метаболического) типа, у 7 больных имелись указания на острое нарушение мозгового кровообращения в анамнезе. У многих пациентов было диагностировано ожирение (39 больных), катаракта (33 человека), ишемическая болезнь сердца (29 пациентов). Несколько реже отмечалась диабетическая ретинопатия, диабетическая нефропатия с хронической почечной недостаточностью 0 - II стадий, хронический пиелонефрит, патология гепатобиллиарной системы и остеохондроз. В отдельных случаях наблюдались язвенная болезнь желудка и 12-перстной кишки, хронический панкреатит, остеоартроз, бронхиальная астма и хроническая обструктивная болезнь легких, гипотиреоз, узловой зоб, доброкачественная гиперплазия предстательной железы и паркинсонизм.

Наряду с препаратами инсулина и (в случае СД 2 типа) пероральными сахароснижающими средствами всем больным проводили терапию поздних осложнений СД и сопутствующих заболеваний. Межгрупповое сопоставление частоты назначения средств базисной терапии продемонстрировало отсутствие достоверных различий по большинству перечисленных позиций (р = 0,093 - 0,936). Единственное исключение составила частота назначения индапамида, которая оказалась выше в группе больных, получавших а-ЛК (р = 0,022). Исходные различия подобного рода допускаются в контролируемых исследованиях

эффективности ЛС при условии сопоставимости сформированных групп по важным показателям клинического и метаболического статуса, а также частоте использования подавляющего большинства средств базисной терапии (Двойрин В.В., Клименков А.А. Методика контролируемых клинических испытаний. М. : Медицина, 1985. 144 е.). Сформированные группы были однородны не только по основным демографическим и анамнестическим характеристикам (таблица 3), но и по частоте встречаемости поздних осложнений СД и сопутствующих ему заболеваний (р = 0,11 - 0,977).

Таблица 3 - Анализ сопоставимости групп больных сахарным диабетом по основным демографическим и клинико-анамнестическим показателям

Показатель_____________—- " ___________ Группы Активная плацебо-терапия (п=28) а- Липоевая кислота (п=30) Мексидол (п=32) Р

Возраст, годы Мужчины/женщины Индекс массы тела, кг/м2 СД-1/СД-2 Продолжительность СД, годы 60,15±1,42 15/13 28,08±0,81 11/17 12,71±1,93 55,40±2,45 10/20 30,10±1,11 10/20 15,96±1,59 54,00±2,39 8/24 29,13±1,19 7/25 12,53±1,19 0,179 0,067 0,481 0,334 0,130

Примечание - Межгрупповые сопоставления проведены с использованием критерия Краскелла-Уоллиса

За день до начала лечения и по истечении двух недель у больных проводили психометрическое и клинико-лабораторное обследование. Квантифицированное изучение аффективных расстройств проводили с помощью шкалы депрессии Бека (ШДБ) с раздельной регистрацией каждой из 21 категории симптомов и жалоб (Белова А.Н., Щепетова О.Н. Шкалы, тесты и опросники в медицинской реабилитации : рук. для врачей и науч. работников. М. : Антидор, 2002. 440 е.). Выраженность тревоги оценивали с помощью шкалы самооценки тревоги Цунга (ШТЦ) (Там же). Критерием развития депрессии считали суммарный балл по ШДБ > 11 баллов (Rubin R.R., Knowler W.C., Ma Y. et al. Depression symptoms and antidepressant medicine use in diabetes prevention program participants // Diabetes Care. 2005. Vol. 28, № 4. P. 830-837.). Для изучения внимания применяли таблицы Шульте с исчислением интегральных показателей «врабатываемости» и «психической устойчивости» (Дьяконов И.Ф., Овчинников Б.В. Психологическая диагностика в практике врача : рук. для врачей. СПб. : СпецЛит, 2008. 144 е.). Интеллектуальные возможности больных оценивали с помощью «прогрессивных матриц» Равена, результаты выражали в единицах стандартного IQ (Новые тесты IQ / сост. М. Кошелева. Ростов-н/Д : Феникс, 2002. 352 е.). О качестве жизни (КЖ) судили по результатам заполнения русскоязычной версии опросника SF-36v2 . Выраженность нарушений углеводного обмена оценивали по содержанию гликозилированного гемоглобина (HbAic), уровню циркулирующего ФА и показателям суточного профиля гликемии. О состоянии липидного обмена судили по содержанию ОХС и ТГ в сыворотке крови, а также по унифицированным показателям липопротеинового распределения холестерина и индексу атерогенности (Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз. СПб. : Питер пресс, 1995. 304 е.). Уровень продуктов ПОЛ и состояние АОЗ оценивали согласно описанию в экспериментальном разделе. Фармакоэкономический анализ эффективности применения изученных ЛС проводили по показателю «затраты-эффективность». Расчеты основывали на объеме финансовых средств, израсходованных на приобретение исследованных препаратов. Показатели эффективности определялись по результатам статистической обработки полученных данных.

Статистический анализ полученных данных проведен с использованием пакетов прикладных программ SPSS - 13.0 и StatSoft Statistica v. 6.0. В экспериментальной части исследования полученные данные были обработаны методами дескриптивной статистики и представлены в виде средней арифметической и её стандартной ошибки (М±т). О достоверности межгрупповых различий судили с помощью непараметрических критериев Манна-Уитни, Вальда-Вольфовица и Колмогорова-Смирнова. Анализ динамики гликемии при

выполнении ТТГ проводился с помощью парного критерия Вилкоксона. Межгрупповые сопоставления показателей летальности проводили с помощью точного критерия Фишера. В клинико-фармакологической части работы качественные (номинальные) показатели, характеризующие сформированные группы пациентов на начальном этапе исследования, выражали абсолютным числом больных, обладающих изучаемыми признаками. Количественные (интервальные) и порядковые (ординальные) данные обработаны методами дескриптивной статистики и представлены в виде средней арифметической и её стандартной ошибки (М±т). Исходную сопоставимость групп оценивали с помощью критерия Краскелла-Уоллиса. О динамике интервальных и ординальных показателей в процессе лечения судили по средним величинам сдвига изучаемых параметров от исходного уровня с расчетом М±ш. Эффективность базисной терапии оценивали по величине сдвигов изучаемых параметров от исходных величин в группе «активная плацебо-терапия» с определением статистической значимости при помощи парного критерия Вилкоксона. Влияние мексидола и a-JIK на динамику изучаемых показателей в процессе лечения считали значимым только при достоверной неоднородности групп, установленной с помощью критерия множественных сравнений Краскелла-Уоллиса. Характер соответствующих межгрупповых различий уточняли с помощью критерия Манна-Уитни. Для изучения статистических взаимосвязей рассчитывали показатель ранговой корреляции по Спирмену (rs). Проверку статистических гипотез во всех случаях выполняли при критическом уровне значимости р = 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Экспериментальный раздел. Учитывая ключевую роль оксидативного стресса в развитии нейропатических осложнений СД и позиционирование производных 3-ОП и ЯК в качестве антиоксидантов, начальные этапы исследования были посвящены изучению влияния эмоксипина, реамберина и мексидола на липидную пероксидацию in vitro в сравнении с a-JIK. Установлено, что исследованные JIC неоднозначно действовали на свободнорадикальное окисление. При этом реамберин и a-ЛК оказали прямое прооксидантное действие in vitro, которое начиналось с микромолярных концентраций и достигало максимума при их миллимолярной концентрации (рисунок 1Б, Г). Производные 3-ОП эмоксипин и мексидол, наоборот, продемонстрировали антиоксидантную активность, выраженность которой у эмоксипина оказалась существенно выше, чем у мексидола (рисунок 1А, В). По - видимому, это различие является результатом присутствия ЯК в составе мексидола. Более того, максимальная (миллимолярная) концентрация мексидола оказала выраженный прооксидантный эффект. Прооксидантное действие реамберина и мексидола в максимальных концентрациях, вероятно, является результатом сукцинатдегидрогеназного окисления содержащейся в них ЯК фрагментами внутренних мембран митохондрий, присутствующих в стандартных гомогенатах головного мозга крыс.

£ 140 f

1 120

| 100 a

i 80 I

ijj 60 fx

S 40

6 20 8.

Г

■

^ 140

I

| 120

80 60 40

.j 0.98M

Рисунок 1 - Влияние эмоксипина (А), реамберина (Б), мексидола (В) и а-липоевой кислоты (Г) на переокисление липидов головного мозга крыс in vitro

Выявленные особенности ПОЛ-модулирующего действия производных 3-ОП и ЯК могут быть непосредственно связаны с их влиянием на чувствительность к инсулину. Справедливость этого положения иллюстрируется продемонстрированным в следующей серии экспериментов инсулин-потенциирующим действием а-ЛК и реамберина (таблица 4), характеризовавшихся прооксидантным действием in vitro. Особенно наглядно этот эффект проявился для а-ЛК, которая увеличивала скорость развития инсулиновой комы в 1,9 - 2,7 раза от контрольных значений в прямой зависимости от примененной дозы. Аналогичная закономерность была установлена для реамберина, ускорявшего развитие инсулиновой комы в 1,6 - 1,8 раза. Эмоксипин и мексидол обладали менее выраженной инсулин-потенциирующей активностью, которая подчинялась нелинейной зависимости от дозы (таблица 4). В обоих случаях максимальное снижение латентности инсулиновой комы (в 1,2 раза от контроля) отмечалось в середине изученного диапазона доз (ЭСТД).

Функциональная значимость инсулин-потенциирующего действия ЛС оценивалась по их влиянию на показатели ТТГ (таблица 4). Введение всех изученных ЛС крысам вызвало изменения их толерантности к глюкозе. Особенно ярко это проявилось через 2 часа после сахарной нагрузки, когда вслед за первоначальным увеличением гликемии на 60-ой минуте ТТГ следовало её небольшое снижение, но содержание глюкозы в крови ещё оставалось выше преднагрузочных значений. Наиболее выраженные изменения обсуждаемого параметра ТТГ развивались после введения мексидола, одновременно являющегося производным 3-ОП и ЯК. Все дозы мексидола снижали гликемию через 2 часа после сахарной нагрузки. Эмоксипин оказывал такое же действие лишь в относительно высоких дозировках (ЭСТД и 2 ЭСТД). Выраженный инсулин-потенциирующий эффект а-ЛК и реамберина не обеспечивал их преимущества по влиянию на ТТГ над производными 3-оксипиридина. Более того, а-ЛК существенно уступала эмоксипину и мексидолу по влиянию на толерантность к глюкозе. Единственная доза этого ЛС ('Л ЭСТД) достоверно уменьшала гликемию через 60 минут после введения глюкозы. Не исключено, что а-ЛК вызывает лишь слабовыраженное увеличение толерантности к глюкозе из-за чрезмерного потенцирования аутокринного действия инсулина на панкреатические (З-эндокриноциты. Подобное усиление аутокринного сигнала отрицательной обратной связи может ограничивать секрецию эндогенного инсулина в ответ на сахарную нагрузку. Вероятно, аналогичная закономерность лежит и в основе парадоксального снижения толерантности к глюкозе под действием реамберина. Все дозировки этого препарата ЯК увеличивали содержание глюкозы в крови через 2 часа после сахарной нагрузки.

Применение 14 ЭСТД реамберина дополнительно повышало гликемию через 60 минут после нагрузки. Важно подчеркнуть, что через 30 минут после введения всех доз реамберина достоверно возрастали даже преднагрузочные показатели гликемии.

Таблица 4 - Влияние а-липоевой кислоты, производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на латентность развития инсулиновой комы и толерантность к глюкозе у интактных крыс (М±т) _____

^^^ Показатели Группа ^........ Латентность инсулиновой комы (минуты) Гликемия до нагрузки (мМоль/л) Гликемия через 1 ч после нагрузки (мМоль/л) Гликемия через 2 ч после нагрузки (мМоль/л)

Эмоксипин

Контроль 247,10±5,47 4,91±0,33 9,95±0,50* 8,97±0,39 *

X ЭСТД (6,25мг/кг) 226,90±8,36 4,73±0,30 9,12±0,64 8,85±0,61

ЭСТД (12,5мг/кг) 209,70±8,08 ** 4,48±0,31 8,40±0,67 7,39±0,32**

2 ЭСТД (25мг/кг) 220,20±12,35 *» 4,23±0,26 9,17±0,65 7,62±0,46**

Реамберин

Контроль 236,50±5,49 4,12±0,17 10,11±0,37 * 7,68±0,26 *

'/2 ЭСТД (12,5мл/кг) 147,40±7,33 •* 5,93±0,25" 12,17±0,46" 9,90±0,45**

ЭСТД (25мл/кг) 135,40± 15,73 ** 5,43±0,13" И,01±0,53 9,38±0,54**

2 ЭСТД (50мл/кг) 129,60±6,29 " 5,22±0,16" 11,34±0,62 8,84±0,31**

Мексидол

Контроль 247,10±5,47 4,91±0,33 9,95±0,50 * 8,97±0,39 *

'/¡г ЭСТД (12,5мг/кг) 235,30±13,30 4,41±0,24 8,75±0,75 7,79±0,69"

ЭСТД (25мг/кг) 209,10±6,07 ** 5,19±0,34 8,89±0,65 7,61±0,51**

2 ЭСТД (50мг/кг) 232,70±7,14 5,06±0,49 9,11±0,73 7,60±0,63**

а-Липоевая кислота

Контроль 236,50±5,49 4,12±0,17 10,11±0,37 * 7,68±0,26 *

Уг ЭСТД (25мг/кг) 125,60±5,01 ** 4,20±0,32 8,79±0,26" 7,07±0,26

ЭСТД (50мг/кг) 91,40±5,21 ** 3,85±0,38 10,07±0,77 8,38±0,47

2 ЭСТД (100мг/кг) 86,60±5,49 " 3,71±0,27 10,44±0,48 8,42±0,41

Примечание - 1) Значимость отличий гликемии после нагрузки от преднагрузочного уровня оценивали с помощью парного критерия Вилкоксона; значимость различий с контрольной группой оценивали с помощью критерия Манна-Уитни 2) * - р < 0,05 по сравнению с преднагрузочными значениями гликемии (только для контрольных групп); ** - р< 0,05 в группах экспериментальной терапии по сравнению с соответствующими значениями контроля 3) в каждой группе по 10 животных.

Полученные результаты свидетельствуют о выраженной связи между ПОЛ-модулирующим действием изученных ЛС in vitro и их влиянием на инсулиночувствительность и толерантность к глюкозе in vivo. Препараты, оказывающие прооксидантное действие in vitro (а-ЛК и реамберин), характеризуются выраженной инсулин-потенциирующей активностью, но слабо повышают (в случае а-ЛК) или даже снижают (в случае реамберина) толерантность к нагрузке глюкозой. ЛС с антиоксидантной активностью (эмоксипин и мексидол), наоборот, отчетливо повышают толерантность к глюкозе, но обладают относительно слабым инсулин-потенциирующим действием.

Отдельного внимания заслуживает влияние изученных ЛС на устойчивость к острой гипоксической гипоксии, которая в большинстве случаев возрастала (рисунок 2). Было установлено, что мексидол вызывал наиболее выраженное увеличение латентности асфиксической гибели животных. Несколько меньшей антигипоксической активностью обладали эмоксипин и а-ЛК. Реамберин вообще не оказывал влияния на устойчивость к острой гипоксической гипоксии. Полученные данные хорошо соотносятся с влиянием изученных ЛС на показатели ТТГ, что иллюстрируется обратной корреляцией между стандартизованными показателями латентности асфиксической гибели и показателями гликемии через 2 часа после сахарной нагрузки (rs = - 0,601, р = 0,039) и свидетельствует о значительном вкладе антигипоксического действия исследуемых ЛС в реализацию их сахароснижающего эффекта.

Установленные на этапе предварительных экспериментов факты являются достаточным основанием для

предположения о потенциальной эффективности производных 3-ОП и ЯК как средств коррекции диабетических нарушений углеводного и липидного обмена, обусловливающих повреждение церебральных структур и сопутствующие расстройства высших интегративных функций мозга. Для изучения такой возможности мы избрали модель аллоксанового диабета, которая является предпочтительной для изучения оксидативных механизмов патогенеза СД в эксперименте (Lenzen S. The mechanisms of alloxan- and streptozotocin-induced diabetes // Diabetologia. 2008. Vol. 51. P. 216-226.). Данный выбор был обусловлен общеизвестными представлениями об антиоксидантной активности эмоксипина, реамберина, мексидола и а-ЛК в качестве важнейшего механизма их терапевтического действия.

Было установлено, что через 96 ч после однократного введения диабетогенной дозы аллоксана у крыс развивались отчетливые признаки оксидативного стресса. Это проявилось достоверным нарастанием большинства категорий продуктов ПОЛ с параллельным снижением концентрации а-ТК в сыворотке крови крыс. При этом развивалось более чем трехкратное нарастание гликемии, слабовыраженное снижение уровня ОХС и нарастание триглицеридемии более чем в 1,5 раза относительно контрольных значений. Высокая тяжесть метаболических расстройств на фоне проявлений окислительного стресса иллюстрируется гибелью 25% животных в период с 72 до 96 часов после инъекции диабетогена.

В последующем, через 10 дней после аллоксановой интоксикации, отмечено постепенное смягчение проявлений окислительного стресса и нарушений углеводного обмена с сопутствующим снижением летальности больных животных, которая в период с 4-х по 10-е сутки составила лишь 11,3%. Однако у больных крыс сохранялась гипертриглицеридемия и отмечалась инверсия раннего гипохолестеринемического эффекта аллоксановой интоксикации. Это проявилось достоверным увеличением содержания ОХС сыворотки крови на 12% относительно интактного контроля.

Через 17 дней после введения аллоксана наблюдалось дальнейшее снижение уровня продуктов ПОЛ в крови и слабовыраженное смягчение гипергликемии. На этом фоне отмечалось существенное нарастание концентрации фруктозамина и наибольшая выраженность дислипидемических расстройств, что проявилось приростом холестеринемии на 61% и двукратным увеличением концентрации ТГ в сыворотке крови больных крыс по сравнению с интактным контролем.

Анализ морфологических признаков поражения ЦНС выявил существенную убыль терминально дифференцированных клеток нейроэктодермального происхождения в корковых структурах уже через 96 часов после затравки аллоксаном. Это проявилось уменьшением числа олигодендроцитов, астроцитов и микроглиоцитов в поверхностных слоях первичной соматосенсорной коры, а также процентной доли пирамидных и корзинчатых нейронов в поле CAI гиппокампа. Следует подчеркнуть, что в гиппокампе существенно возрастала доля липофусцинсодержащих нейронов, что иллюстрирует важную роль оксидативного стресса в раннем диабетическом поражении палеокортекса при аплоксановом диабете.

эмоксипин реамберин мексидол a-JIK □ контроль Ш/2ЭСТД 0ЭСТД ■ 2 ЭСТД

Рисунок 2 - Влияние а-липоевой кислоты, производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на латентность асфиксической гибели мышей (* - р < 0,05 по сравнению с интактным контролем)

В дальнейшем, в период с 4-го по 10-й день, в поверхностных слоях соматосенсорной коры больных животных отмечалась прогрессирующая убыль нейронов и астроцитов. Менее выраженные морфологические проявления отмечались в структурах гиппокампа, который характеризовался уменьшением тигроидной зернистости нейронов. К 10-му дню после затравки аллоксаном диабетическое поражение ЦНС распространилось на диэнцефальные структуры. Об этом свидетельствовала убыль числа нейронов с одновременным нарастанием количества астроцитов и олигодендроцитов в ПВЯ гипоталамуса.

В период с 10-х по 17-е сутки после индукции аллоксанового диабета наблюдалось дальнейшее прогрессирование морфологических проявлений ДЭ, достигших к заключительному этапу эксперимента максимальной выраженности. В соматосенсорной коре и ПВЯ больных крыс наблюдалась убыль нейронов и всех категорий глиоцитов. Наименее выраженные сдвиги клеточного состава в виде уменьшения числа олигодендроцитов и микроглиоцитов были зарегистрированы в поле СА1 гиппокампа. Содержание липофусцин-позитивных нейронов было существенно повышено в неокортексе и, особенно, в палеокортекса, где оно возросло более чем двукратно.

Расстройства метаболизма у животных с аллоксановым диабетом сопровождались ярко выраженными нарушениями мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения. Уже через 96 часов после введения аллоксана у животных на 57% снижалась двигательная активность, на 64% - исследовательская и на 61% - ориентировочная. Параллельно отмечалось уменьшение груминга и качества формирования УРАИ (в 1,8 раза в обоих случаях) и небольшое (на 8%), но статистически значимое нарастание показателя анксиогенной дефекации. Через 10 дней после введения аллоксана у крыс сохранялись выраженные расстройства поведения в «открытом поле» на фоне двукратного уменьшения показателя качества формирования УРАИ. Одновременно наблюдалось нарастание параметров груминга (на 124%) и дефекации (на 264%), отражающих развитие тревоги. Через 17 дней после индукции диабета угнетение двигательной, исследовательской и ориентировочной активности крыс в «открытом поле» стало еще более глубоким, составив 30 - 34% от значений интактного контроля. На заключительной стадии исследования у больных крыс сохранялся высокий уровень тревоги, а показатель качества формирования УРАИ уменьшился в 2,6 раза. Снижение активности животных в «открытом поле» на всех сроках эксперимента следует рассматривать в качестве компенсаторной реакции, направленной на ограничение ДЭ-обусловленной убыли нейронов и глиоцитов в изученных церебральных структурах. Особенно ярко это проявилось на последнем этапе эксперимента (через 17 дней после введения аллоксана). В этот период наблюдалась отрицательная корреляция между двигательной активностью и содержанием нейронов в ПВЯ (rs= - 0,482; р = 0,031) и IV-VI слоях поля Par 1 (rs = - 0,569; р = 0,009) крыс с аллоксановым диабетом. Установленные изменения клеточного состава кортикальных и диэнцефальных структур, сопровождающиеся нарушениями поведения и условнорефлекторного обучения на фоне выраженной гипергликемии, вполне укладываются в рамки представлений о ДЭ (Kodl Т., Seaquist E.R. Cognitive dysfunction and diabetes mellitus // Endocrine Reviews. 2008. Vol. 29, № 4. P. 494-511.).

Применение исследованных JIC корригировало нарушения углеводного обмена у крыс с аллоксановым диабетом (таблица 5). В первую очередь следует подчеркнуть высокую терапевтическую эффективность производных 3-ОП (эмоксипина и мексидола), все дозы которых значимо (в 1,5 - 2,5 раза) уменьшали гипергликемию при 7-ми и 14-ти кратном введении. Наиболее выраженное нормализующее влияние на углеводный обмен оказал мексидол, который явился единственным препаратом, достоверно снизившим концентрацию ФА в сыворотке крови больных крыс с 38,08+5,82 до 22,82±5,40 мкМоль/1 г альбумина (р = 0,04) при семикратном введении минимальной дозы. Эмоксипин несколько уступал мексидолу по способности корригировать гипергликемию при аллоксановом диабете, что проявилось транзиторным увеличением содержания ФА в крови больных животных с 38,08±5,82 до 47,68±2,57 мкМоль/1г альбумина (р = 0,005) в результате 7-кратного введения его

максимальной дозы. Наименее выраженное корригирующее влияние на показатели гликемии оказал реамберин, проявивший сахароснижающее действие лишь при однократном введении ЭСТД крысам с аллоксановым диабетом. а-ЛК снижала гипергликемию только при 14-кратном введении во всем диапазоне исследованных доз. Полученные данные позволяют считать, что эмоксипин и мексидол способны вызывать более быструю нормализацию углеводного обмена в сравнении с а-ЛК. Совокупность исследованных Л С характеризовалась прямой зависимостью между способностью улучшать параметры ТТГ у интактных животных и корригировать гликемию при аллоксановом диабете (г5= 0,657; р = 0,020).

Не столь однозначным оказывалось влияние изученных ЛС на показатели липидемии (таблица 5). Это положение иллюстрируется данными о липидемических эффектах наиболее эффективного сахароснижающего средства из группы производных 3-ОП - мексидола. Было установлено уменьшение выраженности гипертриглицеридемии при 7-кратном применении его минимальной дозы, при однократном и 14-кратном использовании ЭСТД, а также при разовом введении максимальной дозы данного препарата. Вместе с тем, однократное применение минимальной дозы мексидола не только не вызывало уменьшения гипертриглицеридемии, но, наоборот, способствовало ее значимому усугублению. Эмоксипин, в отличие от мексидола, вызывал однозначное снижение концентрации ТГ при 7-кратном применении минимальной дозы и однократном применении ЭСТД. Установленные факты свидетельствуют о том, что наличие ЯК в составе мексидола может оказывать неблагоприятное влияние на липидемию. Производные 3-ОП (эмоксипин и мексидол) оказывали однонаправленное гипохолестеринемическое действие во всех изученных дозах. При этом эмоксипин уменьшал показатели холестеринемии при 7-кратном применении минимальной дозы и 14-кратном введении относительно высоких доз (ЭСТД и 2 ЭСТД). У мексидола диапазон режимов дозирования, оказывающих значимое гипохолестеринемическое действие, оказался гораздо шире, чем у эмоксипина. Наиболее ярко это проявилось при использовании максимальной дозы мексидола, все режимы введения которой достоверно снижали уровень холестеринемии. Кроме того, аналогичное действие мексидола проявлялось при 7-ми и 14-кратном введении минимальной дозы и при 14-кратном введении ЭСТД.

Действие на липидный обмен изолированного производного ЯК (реамберина) качественно отличалось от эффектов остальных препаратов, так как он в подавляющем большинстве случаев вызывал усугубление дислипидемии у крыс с аллоксановым диабетом. Статистически значимое нарастание уровня триглицеридов наблюдалось при 14-кратном введении минимальной дозы, 7-ми и 14-кратном использовании средней дозы, а также однократном введении максимальной дозы реамберина. Кроме того, реамберин не только не корригировал гиперхолестеринемию, но, наоборот, способствовал ее достоверному усугублению при однократном введении минимальной дозы. Лишь при единственном режиме введения (однократное применение ЭСТД) реамберин вызывал значительное снижение триглицеридемии одновременно с сахароснижающим действием. Полученные данные позволяют предположить, что оптимальная коррекция метаболических расстройств при СД под действием реамберина может быть достигнута при кратковременном использовании его средних терапевтических доз.

а-ЛК оказывала однозначное позитивное влияние на расстройства липидного обмена у крыс с аллоксановым диабетом. При однократном использовании препарата гипотриглицеридемическое действие отмечалось во всех дозах, а гипохолестеринемическое -лишь в максимальной дозировке. Удлинение курса экспериментальной терапии до 14 дней приводило к более существенному уменьшению уровня триглицеридов и ОХС в сыворотке крови больных животных во всем диапазоне использованных доз. Это иллюстрирует кумулятивный характер гиполипидемического действия а-ЛК.

В целом, результаты изучения влияния исследованных ЛС на расстройства метаболизма при аллоксановом диабете свидетельствуют о том, что отечественные производные 3-оксипиридина, и особенно мексидол, не уступают эталонному средству

лечения диабетических нейропатий (а-ЛК) по способности корригировать дислипидемию и превосходят а-ЛК по корригирующему эффекту в отношении гипергликемии.

Таблица 5 - Влияние а-липоевой кислоты, производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на показатели гликемии, липидемии и перекисного окисления липидов в сыворотке

крови крыс с экспериментальным сахарным диабетом (М±ш)

~^\Показатели Группй^^ Кратность^^^ п Гликемия Липидемия Перекисное окисление липидов

Глюкоза (мМоль/л) охс (мМоль/л) ТГ (мМоль/л) ДК[г] (е.и.о.) КД и СТ[ Г] (е.и.о.) ДК(„1 (е.и.о.) КД и СТ| „] (е.и.о.)

1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Эмоксипин

Интакт-ный контроль 1 11 4,61±0,43 2,05±0,14 0,71 ±0,12 0,57±0,04 0,17±0,02 0,57±0,02 0,40±0,03

7 10 4,67±0,23 1,70±0,14 0,48±0,06 0,79±0,04 0,14±0,02 0,69±0,02 0,40±0,03

14 И 5,59±0,42 1,25±0,12 0,34±0,04 0,73±0,04 0,08±0,04 0,60±0,02 0,43±0,02

Аллокса- новый диабет 1 11 17,77±2,55» 1,63±0,12* 0,90±0,23 0,64±0,03 0,13±0,03 0,60±0,03 0,42±0,03

7 11 12,21±1,27* 2,03±0,15 0,81±0,16* 0,71±0,02 0,11±0,03 0,64±0,01 0,39±0,02

14 10 14,19±1,30* 2,00±0,13* 0,75±0,15* 0,74±0,02 0,07±0,01* 0,57±0,03 0,42±0,01

И ЭСТД (6,25мг/кг) I 11 14,47±2,88 1,69±0,15 0,85±0,30 0,64±0,04 0,13±0,04 0,65±0,02 0,42±0,03

7 12 6,43±0,58** 1,72±0,05** 0,48±0,06** 0,81±0,03" 0,17±0,02 0,57±0,03** 0,42±0,02

14 10 9,88±2,11" 1,6б±0,11 0,48±0,04 0,84±0,05** 0,12±0,02 0,58±0,03 0,46±0,03"

ЭСТД (12,5мг/кг) 1 11 10,95±2,93 1,70±0,09 0,51±0,08** 0,68±0,04 0,18±0,04 0,65±0,04 0,46±0,03

7 10 6,49±0,64** 1,75±0,12 0,68±0,17 0,81±0,03** 0,15±0,02 0,70±0,02** 0,38±0,03

14 10 5,70±0,44" 1,60±0,06" 0,47±0,05 0,84±0,04 0,12±0,02** 0,60±0,03 0,45±0,01

2 ЭСТД (25 мг/кг) 1 11 11,05±3,28 1,60±0,14 0,67±0,15 0,67±0,04 0,18±0,03 0,64±0,03 0,47±0,03

7 12 7,97±2,00" 1,76±0,12 0,79±0,13 0,71±0,02 0,08±0,01** 0,65±0,02 0,40±0,01

14 10 6,10±0,72" 1,31±0,08" 0,40±0,06 0,77±0,01 0,11±0,03 0,59±0,03 0,45±0,02

Реамберин

Интакт-ный контроль 1 10 4,55±0,48 1,99±0,13 0,70±0,09 0,62±0,04 0,17±0,02 0,62±0,01 0,40±0,01

7 10 4,68±0,40 1,61±0,14 0,71±0,08 0,80±0,03 0,12±0,02 0,59±0,03 0,33±0,03

14 10 5,81±0,22 1,42±0,06 0,55±0,06 0,76±0,02 0,20±0,02 0,66±0,02 0,46±0,02

Аллокса- новый диабет 1 10 15,79±3,20* 1,74±0,15 1,14±0,17* 0,70±0,03 0,16±0,03 0,66±0,02 0,45±0,03

7 11 14,74±2,87* 1,69±0,15 0,67±0,11 0,82±0,04 0,10±0,02* 0,65±0,01 0,40±0,02

14 и 14,64±0,78* 1,65±0,14* 0,80±0,14* 0,76±0,03 0,20±0,01 0,65±0,01* 0,45±0,02

'/г ЭСТД (12,5мл/кг) 1 10 7,91 ±2,95 1,83±0,28" 0,89±0,39 0,63±0,04 0,15±0,03 0,63±0,03 0,45±0,03

7 11 7,70±1,42 1,55±0,09 0,89±0,12 0,81±0,04 0,07±0,01** 0,59±0,02** 0,42±0,02

14 10 8,02±0,35 1,58±0,12 1,35±0,04** 0,77±0,02 0,17±0,02 0,66±0,01" 0,43±0,01

ЭСТД (25 мл/кг) 1 10 6,32±1,23** 1,57±0,13 0,41±0,09" 0,64±0,04 0,20±0,03 0,65±0,02 0,45±0,02

7 13 11,54*1,91 1,72±0,08 1,22±0,17** 0,80±0,02 0,10±0,02 0,63±0,02** 0,39±0,01**

14 10 12,30±0,47 1,76±0,12 1,08±0,05** 0,76±0,02 0,19±0,02 0,67±0,01** 0,45±0,02

2 ЭСТД (50 мл/кг) 1 10 11,60±2,83 1,95±0,24 1,56±0,84** 0,62±0,04 0,18±0,03 0,62±0,03 0,47±0,02

7 и 9,67±2,36 1,56±0,07 0,66±0,07 0,82±0,05 0,09±0,02 0,61±0,03" 0,38±0,03

14 10 10,31 ±0,41 1,78±0,13 0,89±0,09 0,78±0,02 0,22±0,03** 0,67±0,02" 0,46±0,02

Мексидол

Ингакт-ный контроль 1 13 4,33±0,47 1,75±0,10 0,42±0,03 0,60±0,05 0,05±0,01 0,50±0,04 0,26±0,03

7 10 4,67±0,23 1,70±0,14 0,48±0,06 0,79±0,04 0,14±0,02 0,69±0,02 0,40±0,03

14 II 5,59±0,42 1,25±0,12 0,34±0,04 0,73±0,04 0,08±0,04 0,б0±0,02 0,43±0,02

Аллокса- новый диабет 1 11 10,33±1,84* 2,06±0,56 0,74±0,46* 0,62±0,04 0,05±0,01 0,45±0,04 0,23±0,02

7 и 12,21 ±1,27* 2,03±0,15 0,81±0,16* 0,71 ±0,02 0,11 ±0,03 0,64±0,01 0,39±0,02

14 10 14,19±1,30* 2,00±0,13* 0,75±0,15* 0,74±0,02 0,07±0,01* 0,57±0,03 0,42±0,01

•Л ЭСТД (12,5 мг/кг) 1 11 13,93±2,88 1,89±0,20 0,82±0,44** 0,61±0,04 0,04±0,02 0,46±0,05 0,22±0,03

7 и 6,98±0,55** 1,65±0,06** 0,55±0,15** 0,79±0,04 0,11 ±0,02 0,63±0,02 0,39±0,01

14 10 5,74±0,71** 1,45±0,10** 0,46±0,09 0,81±0,04 0,10±0,02 0,61±0,03 0,47±0,01**

ЭСТД (25 мг/кг) 1 11 8,19±2,14 1,87±0,15 0,43±0,13** 0,66±0,05 0,05±0,02 0,44±0,06 0,21±0,03»*

7 10 6,08±0,39** 1,78±0,09 0,62±0,10 0,70±0,03 0,11±0,03 0,65±0,04** 0,43±0,04

14 10 8,22±1,80** 1,63±0,10** 0,44±0,04** 0,77±0,03" 0,07±0,02 0,56±0,03 0,45±0,01

2 ЭСТД (50 мг/кг) 1 11 11,46±2,39 1,69±0,12** 0,58±0,18** 0,69±0,05 0,10±0,02** 0,58±0,03** 0,27±0,02

7 10 7,26±0,74** 1,68±0,07" 0,62±0ДЗ 0,77±0,03 0,12±0,02 0,55±0,04** 0,39±0,02

14 10 6,17±0,31** 1,44±0,09** 0,44±0,06 0,74±0,02 0,14±0,03 0,61±0,02 0,46±0,01

Продолжение таблицы 5

1 | 2 | 3 | 4 ] 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10

а-Липоевая кислота

Интакт-ный контроль 1 13 4,33±0,47 1,75±0,10 0,42±0,03 0,60±0,05 0,05±0,01 0,50±0,04 0,26±0,03

7 10 4,68±0,40 1,61±0,14 0,71±0,08 0,80±0,03 0,12±0,02 0,59±0,03 0,33±0,03

14 10 5,81 ±0,22 1,42±0,06 0,55±0,06 0,76±0,02 0,20±0,02 0,66±0,02 0,46±0,02

Аллокса- новый диабет 1 15 10,33±1,84* 2,06±0,56 0,74±0,46* 0,62±0,04 0,05±0,01 0,45±0,04 0,23±0,02

7 11 14,74±2,87* 1,69±0,15 0,67±0,11 0,82±0,04 0,10±0,02* 0,65±0,01 0,40±0,02

14 11 14,64±0,78* 1,65±0,14* 0,80±0,14* 0,76±0,03 0,20±0,01 0,65±0,01* 0,45±0,02

!4 ЭСТД (25 мг/ кг) 1 12 15,16±3,63 1,88±0,12 0,53±0,09** 0,67±0,04 0,06±0,02 0,53±0,04 0,22±0,03

7 13 8,75±1,41 1,52±0,07 0,70±0,08 0,84±0,03 0,08±0,01 0,62±0,02 0,36±0,02**

14 10 7,31±0,34** 1,51±0,09»* 0,33±0,03** 0,72±0,02 0,21±0,03 0,69±0,00" 0,48±0,01

ЭСТД (50 мг/кг) 1 12 11,23±2,57 1,69±0,12 0,33±0,06** 0,63±0,04 0,06±0,01 0,53±0,04 0,24±0,02

7 11 8,84±1,58 1,43±0,09 0,67±0,10 0,84±0,03 0,10±0,02 0,62±0,03** 0,40±0,03

14 10 6,73±0,38** 1,54±0,08" 0,37±0,05" 0,78±0,03 0,23±0,03" 0,68±0,01** 0,43±0,01

2 ЭСТД (100 мг/кг) 1 11 12,51±3,26 1,70±0,10** 0,56±0,09" 0,63±0,05 0,06±0,02" 0,53±0,05 0,24±0,03

7 12 12,97±2,13 1,57±0,08 0,50±0,06 0,76±0,03 0,10±0,01 0,59±0,02** 0,34±0,02**

14 И 6,65±0,29" 1,46±0,11" 0,26±0,03** 0,77±0,02 0,20±0,03 0,68±0,01** 0,43±0,01

Примечание - 1) Содержание продуктов перекисного окисления липидов представлено в виде индексов окисления (е.и.о.) ДК - Е232/Е220 ; КД и СТ - Егтц/Егго- Буквенные подиндексы , г , и , „ ) обозначают, соответственно гептановую и изопропанольную фазы липидного экстракта. 2) * - р<0,05 по сравнению с интактным контролем; ** - р< 0,05 по сравнению с контрольной группой животных с аллоксановым диабетом.

Оценка динамики состояния системы «ПОЛ - АОЗ» в крови животных с аллоксановым диабетом под действием изученных ЛС позволяет усомниться в однозначно антиоксидантной основе их действия (таблица 5). Однократное введение исследованных препаратов лишь в одном случае вызвало слабовыраженное, но достоверное уменьшение содержания циркулирующих липопероксидов. Это касается применения средней дозы мексидола, которая привела к уменьшению уровня изопропанолрастворимых КД и СТ в крови крыс с аллоксановым диабетом. Однократное использование максимальной дозы мексидола вызвало отчетливый и сильно выраженный прооксидантный эффект, проявившийся параллельным нарастанием уровня изопропанолрастворимых ДК и, особенно, гептанрастворимых КД и СТ. Применение максимальной дозы а-ЛК также вызвало достоверный прооксидантный эффект по критерию увеличения уровня гептанрастворимых КД и СТ. Эмоксипин и реамберин не оказали ПОЛ-модулирующего влияния при однократном применении у крыс с аллоксановым диабетом.

Семикратное введение исследованных препаратов при аллоксановом диабете, в отличие от однократного режима их применения,- в подавляющем большинстве случаев вызывало уменьшение содержания продуктов ПОЛ в крови больных крыс. В первую очередь это касалось реамберина, все дозы которого при этом режиме применения достоверно снижали уровень изопропанолрастворимых ДК. Коме того, минимальная доза данного ЛС обусловила достоверное снижение содержания гептанрастворимых КД и СТ, а его средняя дозировка привела к убыли изопропанолрастворимых КД и СТ. Полученные данные на первый взгляд диссонируют с результатами оценки влияния реамберина на липидную пероксидацию in vitro и свидетельствуют о непрямом (опосредованном) влиянии реамберина на систему «ПОЛ -АОЗ» in vivo. а-ЛК, также как реамберин обладавшая проксидантным действием in vitro, в условиях курсового 7-дневного применения тоже вызывала достоверное уменьшение уровня продуктов ПОЛ. Это касалась изопропанолрастворимых ДК, содержание которых значимо уменьшилось при использовании относительно высоких доз а-ЛК (ЭСТД и 2 ЭСТД), a также изопропанолрастворимых КД и СТ, уровень которых снизился при курсовом введении минимальной и максимальной доз. Особого обсуждения заслуживает изменение уровня продуктов ПОЛ при 7-кратном применении производных 3-оксипиридина (эмоксипина и мексидола). Невзирая на свое однозначно антиоксидантное действие in vitro, эмоксипин при 7-кратном режиме применения вызвал существенное увеличение уровня гептанрастворимых ДК

при использовании относительно низких доз ('/г ЭСТД и ЭСТД). 7-кратное введение максимальной дозы эмоксипина вызвало уменьшение содержания гептанрастворимых КД и СТ в крови больных крыс. Повторное введение эмоксипина на протяжении 7 дней оказало разнонаправленное действие на уровель изопропанолкастворимых ДК в зависимости от использованной дозировки. Минимальная доза эмоксипина снижала содержание обсуждаемой категории липопероксидов в крови больных животных, в то время как средняя доза, наоборот увеличивала уровень этой категории продуктов в сыворотке крови. Мексидол, который также как реамберин является сукцинатсодержащим JIC, при 7-кратном введении максимальной дозы, подобно реамберину, снижал уровень изопропанолрастворимых ДК в крови крыс с аллоксановым диабетом. Вместе с тем, повторное введение мексидола в относительно низкой дозе (ЭСТД), как и использование аналогичной дозы эмоксипина, оказывало прооксидантное действие по критерию накопления циркулирующих изопропанолрастворимых ДК.

Более продолжительное (14-дневное) введение всех изученных ЛС вызывало однонаправленное нарастание уровня циркулирующих продуктов ПОЛ. В случае эмоксипина это проявилось достоверным увеличением содержания гептанрастворимых ДК и изопропанолрастворимых КД и СТ при использовании минимальной дозы этого ЛС, а также нарастанием уровня гептанрастворимых КД и СТ в случае применения его средней дозировки. Реамберин во всем диапазоне изученных доз вызывал достоверный прирост содержания изопропанолрастворимых ДК, т.е. оказывал действие, диаметрально противоположное соответствующему эффекту при его 7-дневном применении. Кроме того, 14-кратное введение реамберина в максимальной дозе достоверно увеличивало содержание гептанрастворимых КД и СТ. Последствия 14-дневного применения а-ЛК весьма напоминали результаты применения реамберина и заключались в значимом нарастании уровня изопропанолрастворимых ДК во всем диапазоне изученных доз. При использовании в средней терапевтической дозе а-ЛК дополнительно вызывала значимое нарастание уровня гептанрастворимых КД и СТ. Следует подчеркнуть, что ПОЛ-модулирующее действие реамберина и а-ЛК при 14-дневном режиме их применения хорошо согласуется с данными о их прооксидантном потенциале in vitro. Мексидол, одновременно являющийся производным 3-оксипиридина и янтарной кислоты, оказывал такое же как эмоксипин, но менее выраженное действие. 14-кратное введение мексидола в минимальной дозе вызывало достоверное нарастание изопропанолрастворимых КД и СТ, а в средней дозе дополнительно увеличивало уровень гептанрастворимых ДК.

Полученные данные не позволяют расценивать влияние исследованных ЛС на систему «ПОЛ - АОЗ» в качестве главного, и тем более, единственного молекулярного механизма их влияния на метаболические процессы. Следует подчеркнуть, что производные 3-ОП и ЯК ни в одном из режимов применения не оказали значимого влияния на показатели токоферолемии и содержание церулоплазмина, являющихся узловыми компонентами антиоксидантной защиты плазмы крови. Единственное исключение составил препарат сравнения а-ЛК, значимо снижавший концентрацию циркулирующего церулоплазмина с 44,17±3,95 до 33,94±4,14 мг/дл (р = 0,043) при однократном введении максимальной дозы в острый период аллоксанового диабета. По-видимому, в целом фазное влияние изученных препаратов на липопероксидацию при аллоксановом диабете является вторичным, сложно опосредованным феноменом, имеющим косвенное отношение к терапевтической эффективности исследованных средств при СД. Понимание природы обсуждаемой динамики продуктов ПОЛ под действием изученных ЛС возможно лишь на основе интегрированного анализа их эффектов на циркулирующий и тканевой пул продуктов свободнорадикального окисления липидов.

Влияние изученных ЛС на церебральные процессы ПОЛ существенно различалось в зависимости от локализации отделов мозга. Наиболее яркие эффекты были отмечены на уровне корковых структур и существенно зависели от кратности введения препаратов. Однократное введение изученных ЛС не оказывало никакого влияния на содержание липофусцин-позитивных нейронов в поле Pari первичной соматосенсорной коры. При 7-кратном применении лишь мексидол, используемый в средней дозировке, вызвал значимое нарастание доли липофусцин-позитивных нейронов в I-III слоях изученной структуры

неокортекса с 17,89±1,01% у крыс с аллоксановым диабетом, получавшим только инсулинотерапию, до 38,45±7,87% (р = 0,011). Этот факт соответствует ранее отмеченному приросту уровня изопропанолрастворимых ДК в крови больных животных и подтверждает положение о прооксидантном действии 7-дневного использования ЭСТД мексидола.

Последствия двухнедельного введения изученных ЛС соответствовали их антигипоксической активности и влиянию на процессы ПОЛ in vitro. Производные 3-оксипиридина (эмоксипин и мексидол) во всем диапазоне изученных доз в 1,7 - 8 раз снижали количество липофусцин-содержащих нейронов в поверхностных слоях поля Pari (рисунок 3). Двухнедельное применение всех доз реамберина и а-ЛК, напротив, вызывало значимое нарастание доли липофусцин-позитивных нейронов в поверхностных слоях неокортекса. Аналогичная направленность действия изученных ЛС отмечена и на уровне глубоких слоев первичной соматосенсорной коры.

На уровне древней коры изученные препараты в подавляющем большинстве случаев оказывали однонаправленное антиоксидантное действие. При однократном введении наиболее ярко этот эффект проявился у эмоксипина, минимальная и максимальная дозы которого вызывали достоверное уменьшение содержания липофусцин-позитивных нейронов в поле CAI гиппокампа больных животных с 19,15±1,33% до 14,57±0,97% (р = 0,022) и 12,33±0,85% (р = 0,004) соответственно. При обсуждаемом режиме введения мексидол оказывал такое же действие лишь в средней дозировке, снижая долю липофусцин-позитивных нейронов с 19,77±1,99% до 13,62±1,39% (р = 0,022). Ни одна из доз а-ЛК не повлияла на содержание липофусцина в нейронах поля CAI аммонова рога при однократном введении. Отдельного внимания заслуживают эффекты реамберина, который, невзирая на свою прооксидантную активность, при однократном введении в минимальной дозе практически двукратно (с 18,28±2,13% до 9,92±1,69%, р = 0,032) снижал долю липофусцин-позитивных нейронов поля CAI гиппокампа у крыс с аллоксановым диабетом. Важно подчеркнуть, что эффект аналогичной направленности, но несколько меньшей выраженности сохранялся после 7-дневного введения реамберина в минимальной дозе, когда содержание нейронов с липофусцином уменьшилось с 20,38±3,96% до 12,22±2,97% (р = 0,022). 7-кратное введение минимальной дозы а-ЛК, также, как реамберин, обладавшей прооксидантным действием in vitro, в два раза (с 20,38±3,96% до 10,32±2,19%, р = 0,022) снижало долю липофусцин-позитивных нейронов в поле CAI. При этом средняя доза а-ЛК оказывала противоположное действие, слабо, но статистически значимо (с 20,38±3,96% до 22,72±4,17%, р = 0,028) увеличивая содержание липофусцин-позитивных нейронов в изученной структуре древней коры. 7-кратное введение мексидола не оказало никакого влияния на содержание липофусцин-позитивных нейронов в поле CAI. Эмоксипин, в отличие от мексидола, сохранял антиоксидантную направленность действия на уровне гиппокампа крыс с аллоксановым диабетом при введении в минимальной дозе, что проявилось уменьшением доли липофусцинпозитивных нейронов с 19,83±4,90% до 13,77±1,31% (р = 0,043).

Важно подчеркнуть, что 14-дневное применение всех изученных средств вызывало однонаправленное значимое снижение процентного содержания липофусцин-содержащих нейронов поля CAI во всем диапазоне использованных доз (рисунок 3). По-видимому, отмеченный эффект может быть связан с функциональной кумуляцией антиоксидантного эффекта для производных 3-оксипиридина (эмоксипина и мексидола) и ко-антиоксидантного эффекта для реамберина и а-ЛК.

На диэнцефальном уровне изученные ЛС влияли на процентное содержание липофусцин-позитивных нейронов только при курсовом введении. Все препараты оказали качественно однонаправленное прооксидантное действие, выраженность которого существенно зависела от влияния исследованных препаратов на липидную пероксидацию in vitro.

эмоксипин реамберин мексидол а-ЛК □ контроль ■ диабет □ 1/2 ЭСТД "ЭСТД я 2 ЭСТД

О

эмоксипин реамберин мексидол а-ЛК □ контроль »диабет ■ 1/2 ЭСТД "ЭСТД "2 ЭСТД

Рисунок 3 - Влияние 14 - кратного введения а-липоевой кислоты, производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на процентную долю липофусцин-содержащих нейронов в поверхностных слоях поля Par 1 первичной соматосенсорной коры (А) и поля CAI гинокампа (Б) крыс с аллоксановым диабетом (* - р < 0,05 по сравнению с интактным контролем, ** - р < 0,05 по сравнению с группой животных с аллоксановым диабетом здесь и далее в рисунках 4-6)

J1C с прооксидантной активностью (реамберин и a-JIK) увеличивали долю липофусцин-позитивных нейронов уже при 7-кратном введении минимальной дозы с 26,32±2,47% у крыс с аллоксановым диабетом, получавших только инсулинотерапию, до 42,94±5,30% (реамберин, р = 0,039) и до 42,33±3,00% (а-ЛК, р = 0,003). При 14-кратном введении соответствующий эффект наблюдался во всем диапазоне исследованных доз реамберина и а-ЛК. Реамберин увеличивал долю нейронов, содержащих липофусцин, в 1,1 - 1,2 раза (р = 0,006-0,027), а-ЛК -в 1,3 - 1,5 раза (р = 0,002 - 0,036). Производные 3-оксипиридина вызывали аналогичный эффект только при двухнедельном применении отдельных доз. Средняя доза эмоксипина повышала долю липофусцин-содержащих нейронов с 26,91±0,89% до 33,73±2,78% (р = 0,035), а средняя и максимальная дозы мексидола - до 38,22±1,86% (р = 0,004) и 36,16±1,77% (р = 0,006) соответственно.

Установленные эффекты производных 3-ОП и ЯК в отношении динамики содержания липофусцин-позитивных нейронов в изученных структурах головного мозга можно трактовать лишь в сопоставлении с сопутствующими изменениями клеточного состава церебральных структур и сдвигами этологического статуса крыс с аллоксановым диабетом. Изученные ЛС в целом оказывали нейропротекторное действие у крыс с аллоксановым диабетом. Эта закономерность весьма ярко проявилась в отношении количества нейронов первичной соматосенсорной коры больных животных в условиях курсового применения изученных ЛС. При этом препараты, обладающие антигипоксическим действием и антиоксидантной активностью in vitro (эмоксипин и мексидол), характеризовались нарастанием выраженности нейропротекторного действия по мере увеличения длительности применения. В то же время, реамберин и а-ЛК, оказавшие прооксидантное действие in vitro, наоборот, демонстрировали наибольшую выраженность протекторного эффекта при 7-дневной схеме применения с последующим уменьшением соответствующего действия к 14-му дню курса. Как видно (рисунок 4А), эмоксипин и мексидол при 7-кратной схеме введения оказали нейропротекторный эффект в поверхностных слоях соматосенсорной коры всего в двух дозах. Это касается относительно высоких доз (ЭСТД и 2. ЭСТД) для эмоксипина и относительно низких доз ('Л ЭСТД и ЭСТД) для мексидола. При увеличении длительности введения до 14

дней нейропротекторный эффект производных 3-оксипиридина в отношении нейронов поверхностных слоев неокортекса наблюдался во всем диапазоне исследованных доз (рисунок 4Б). При этом максимальная доза эмоксипина дополнительно повышала число нейронов глубоких слоев неокортекса с 268,06±34,79 на 1 мм2 у крыс с аллоксановым диабетом, получавших только инсулинотерапию, до 391,00±10,73 на 1 мм2 (р = 0,007). Максимальная и минимальная дозировки мексидола при 14-кратном введении также увеличивали число нейроцитов в IV-V1 слоях поля Pari до 381,85±22,07 на 1 мм2 (р = 0,034) и 413,13±33,30 на 1 мм2 (р = 0,021) соответственно.

Реамберин эффективно предотвращал убыль нейронов в поверхностных слоях неокортекса при 7-кратном введении всех изученных доз крысам с аллоксановым диабетом (рисунок 4А). Аналогичный эффект данного ЛС в отношении глубоких слоев соматосенсорной коры наблюдался только при введении минимальной и максимальной дозировок, повышавших число нейронов с 323,84±24,26 до 389,74±50,82 на 1 мм2 (р = 0,013) и 414,18±29,86 на 1 мм2 (р = 0,046) соответственно. а-ЛК увеличивала содержание неокортикальных нейронов в поверхностных слоях при семикратном применении относительно высоких доз (ЭСТД и 2ЭСТД). Такой же эффект в глубоких слоях коры развивался при 7-дневном применении максимальной дозы а-ЛК, когда число нейронов возрастало с 323,84±24,26 до 456,67±38,05 на 1 мм2 (р = 0,036). Увеличение длительности применения реамберина и а-ЛК до двух недель приводило к ослаблению их нейропротекторного действия. У реамберина этот эффект в отношении нейронов поверхностных слоев неокортекса сохранялся только для 2 ЭСТД, у а-ЛК - лишь для ЭСТД (рисунок 4Б) и не проявлялся на уровне глубоких слоев новой коры.

Рисунок 4 - Влияние 7 - кратного (А) и 14 - кратного (Б) введения а-липоевой кислоты, производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на количество нейронов поверхностных слоев поля Par 1 первичной соматосенсорной коры крыс с аллоксановым диабетом

Отдельного внимания заслуживает действие изученных ЛС на динамику другой категории терминально дифференцированных клеток нейроэктодермального происхождения (олигодендроцитов) в первичной соматосенсорной коре крыс с аллоксановым диабетом. При однократном режиме применения реамберин был единственным из изученных ЛС, оказавшим влияние на данный параметр. Это проявилось значимым снижением олигодендроцитов в поверхностных слоях поля Pari при применении 2 ЭСТД реамберина с 104,55±9,87 до 73,98±2,23 на 1 мм2 (р = 0,007). В отличие от однократного, 7-кратное введение реамберина не оказало никакого действия на число олигодендроцитов неокортекса. 14-дневное применение ЭСТД этого ЛС вызвало значимый прирост числа олигодендроцитов как в поверхностных

слоях поля Pari (с 145,70±10,20 до 186,57±7,72 на 1 мм2, р = 0,007), так и в глубоких (с 163,33± 14,26 до 214,25±5,39 на 1 мм2, р = 0,012). Аналогичное (двухфазное) действие на динамику числа олигодендроцитов оказала а-ЛК, которая значимо снижала анализируемый показатель в поверхностных слоях неокортекса при 7-кратном введении в средней дозировке (с 139,01±29,48 до 67,19±5,32 на 1 мм2, р = 0,038) и значимо, в 1,25 - 1,43 раза (р = 0,005 -0,024), увеличивала число олигодендроцитов в глубоких слоях новой коры при 14-кратном применении всех изученных доз крысам с аллоксановым диабетом. При 7-кратном применении эмоксипина в поверхностных слоях соматосенсорной коры число олигодендроцитов уменьшалось с 118,74±30,55 до 62,31±8,32 на 1 мм (р = 0,009) и до 76,18±6,48 на 1 мм2 (р = 0,049) при использовании !4 ЭСТД и ЭСТД этого ЛС соответственно. В глубоких слоях неокортекса эти же дозы препарата снижали количество олигодендроцитов с 131,54±38,84 до 72,54±3,09 на 1 мм2 (р = 0,028) и до 62,39±7,63 на 1 мм (р = 0,027) соответственно. При 14-кратном курсовом применении эффект эмоксипина в отношении олигодендроцитов претерпевал инверсию в поверхностных слоях неокортекса, где Уг ЭСТД и ЭСТД препарата повышали число олигодендроцитов с 138,54±3,79 на 1 мм у крыс с аллоксановым диабетом, получавших только инсулинотерапию, до 155,20±14,27 на 1 мм" (р = 0,022) и 171,81±10,37 на 1 мм2 (р = 0,021) соответственно. Характер влияния эмоксипина на число олигодендроцитов в глубоких слоях неокортекса не претерпел существенной динамики в сравнении с результатами 7-кратного введения этого ЛС. Мексидол оказывал влияние на олигодендроциты поля Pari больных крыс лишь при двухнедельном введении максимальной дозы, которая вызвала нарастание их содержания в глубоких слоях неокортекса с 190,39±21,44 до 195,87±7,42 на 1 мм2 (р = 0,032).

Наиболее распространенная клеточная популяция ЦНС (астроциты) продемонстрировала иную динамику сдвигов под действием изученных ЛС, эффекты которых реализовались только при курсовом применении. В подавляющем большинстве случаев производные 3-ОП и ЯК, так же как и а-ЛК, способствовали увеличению числа астроцитов неокортекса у крыс с аллоксановым диабетом. 7-кратное введение эмоксипина в дозах ЭСТД и 2 ЭСТД привело к увеличению числа астроцитов в поверхностных слоях соматосенсорной коры с 69,01±6,40 до 109,04±8,26 на 1 мм2 (р = 0,014) и до 137,92±27,26 на 1 мм (р = 0,01) соответственно. Аналогичный эффект той же локализации наблюдался при 14-кратном применении минимальной и максимальной доз эмоксипина (рисунок 5А). В то же время, двухнедельное введение средней дозы эмоксипина снижало число астроцитов в IV-VI слоях поля Pari с 225,15±10,96 до 201,12±7,23 на 1 мм2 (р = 0,021). Мексидол не влиял на число неокортикальных астроцитов при 7-кратном применении, но также как эмоксипин, увеличивал число этих клеток в поверхностных слоях неокортекса при 14-дневном введении минимальной и максимальной дозы. В отличие от эмоксипина, двухнедельное применение максимальной дозы мексидола дополнительно увеличивало число астроцитов в глубоких слоях соматосенсорной коры с 225,15±10,96 до 279,95±15,68 на 1 мм2 (р = 0,012). 7-кратное введение относительно высоких доз реамберина вызывало нарастание числа астроцитов во всех слоях неокортекса. Под действием ЭСТД этого ЛС количество астроцитов увеличилось в поверхностных слоях поля Pari с 111,13±13 75 до 199,42±24,81 на 1 мм (р = 0,015), а при введении 2 ЭСТД - до 188,48±27,67 на 1 мм2 (р = 0,019). В глубоких слоях поля Pari число астроцитов возросло с 135,16±14,84 до 202,74±23,15 на 1 мм2 (р = 0,021) и 205,19±29,55 на 1 Мм (р = 0,019) соответственно. При 14-кратном применении аналогичный эффект наблюдался под действием всех изученных доз реамберина в глубоких слоях неокортекса, где количество астроцитов повысилось в 1,3 - 1,4 раза (р = 0,009 - 0,034) в сравнении с больными животными, получавшими только инсулинотерапию. Семидневное применение а-ЛК в средней дозе также увеличивало содержание астроцитов в поверхностных слоях неокортекса с 111,13±13,75 до 171,12±25,03 на 1 мм2 (р = 0,035) и в глубоких слоях соматосенсорной коры - с 135,16±14,84 до 263,07±44,31 на 1 мм2 (р = 0,019). При 14-дневном применении эффект аналогичной направленности наблюдался только в поверхностных слоях новой коры под действием относительно низких доз а-ЛК - '/2 ЭСТД и ЭСТД (рисунок 5А).

27

Влияние изученных JIC на динамику глиоцитов мезенхимального происхождения (микроглиоцитов) у крыс с аллоксановым диабетом характеризовалось относительно меньшей выраженностью в сравнении с изменениями остальных клеточных популяций. При однократном режиме введения лишь реамберин увеличивал число неокортикальных микроглиоцитов в глубоких слоях при использовании минимальной дозы с 44,20±5,82 до 63,69±7,25 на 1 мм2 (р = 0,047). При 7-кратной схеме введения только эмоксипин в средней дозе уменьшал содержание микроглиоцитов в поверхностных слоях неокортекса с 42,96±7,67 до 17,94±3,98 на 1 мм2 (р = 0,05) и а-ЛК в максимальной дозе оказывала аналогичный эффект в глубоких слоях, снижая их число с 62,21± 14,80 до 29,08±1,98 на 1 мм2 (р = 0,004). 14-дневное применение всех изученных средств оказало однонаправленное действие на содержание микроглиоцитов в поле Pari (рисунок 5Б). Наибольшая дозовая распространенность этого действия отмечена у ЛС с прооксидантной активностью (реамберина и а-ЛК). Все дозы а-ЛК и относительно низкие дозы реамберина ('Л ЭСТД и ЭСТД) вызывали нарастание числа клеток микроглии в глубоких слоях соматосенсорной коры. При этом средние дозировки реамберина и а-ЛК увеличивали также число микроглиоциов в поверхностных слоях неокортекса с 99,26±11,14 до 129,89±6,40 на 1 мм2 (р = 0,043) и 159,03±14,12 на 1 мм2 (р = 0,005) соответственно. Средства с антиоксидантной активностью, эмоксипин и мексидол, повышали число микроглиоцитов лишь в единичных дозах. Это касается 14-дневного применения ЭСТД эмоксипина, вызывавшего нарастание числа микроглиоцитов в поверхностных слоях поля Pari с 120,69± 10,99 до 131,81±10,66 на 1 мм2 (р = 0,032) и 2 ЭСТД эмоксипина, оказывавшего аналогичный эффект в глубоких слоях неокортекса (рисунок 5Б). Мексидол повышал содержание клеток микроглии только в глубоких слоях соматосенсорной коры при использовании максимальной дозы (рисунок 5Б).

эмоксипин реамберин мексидол а-ЛК □ контроль □ диабет в 1 /2 ЭСТД ■ ЭСТД ■ 2 ЭСТД

эмоксипин реамберин мексидол a-JIK □ контроль □ диабет В 1/2 ЭСТД «ЭСТД Я2 ЭСТД

Рисунок 5 - Влияние 14 - кратного введения а-липоевой кислоты, производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на количество астроцитов поверхностных слоев (А) и микроглиоцитов глубоких слоев поля Par 1 (Б) первичной соматосенсорной коры крыс с аллоксановым диабетом

Особого внимания заслуживает влияние изученных ЛС на динамику основных клеточных популяций поля CAI гиппокампа, роль которого в регуляции аффективного статуса и когнитивных функций общеизвестна. Все изученные препараты оказывали значимое влияние на показатели содержания нейронов в этой структуре аммонова рога уже при однократном применении. В первую очередь это касалось процентного содержания пирамидных нейронов поля CAI, которое значимо нарастало при однократном применении максимальных доз эмоксипина (с 14,38±1,45% до 18,27±1,28%, р = 0,037) и реамберина (с

16,16±3,01% до 28,76±2,24%, р = 0,028), средней дозы а-ЛК (с 13,05±1,86% до 16,97±2,99%, р = 0,048) и минимальной дозы мексидода (с 13,05±1,86% до 17,99±1,34%, р = 0,037), который дополнительно увеличивал долю корзинчатых нейронов с 11,97±1,38% до 18,71± 1,13% (р = 0,005). Реамберин оказался единственным ЛС, вызвавшим достоверное нарастание абсолютного количества корзинчатых нейронов в поле CAI крыс с аллоксановым диабетом при использовании минимальной дозы с 213,73±15,15 до 387,27±92,31 на 1 мм2(р = 0,028).

В дальнейшем, при курсовом применении исследованных ЛС, их влияние на клеточные популяции гиппокампа, так же как и на уровне первичной соматосенсорной коры, существенно зависело от анти- или прооксидантной активности in vitro. Минимальная доза реамберина снижала общее число нейроцитов поля CAI с 2541,67±87,16 до 2121,20±290,47 на 1 мм2 (р = 0,013) и одновременно уменьшала процентное содержание корзинчатых клеток с 20,66±3,47% до 18,60±0,91% (р = 0,013) при 7-кратном курсовом применении. Средства с антиоксидантной активностью (эмоксипин и мексидол), наоборот, способствовали нарастанию числа нейронов гиппокампа в результате повторного 7-кратного введения. Данный режим применения эмоксипина был связан с увеличением как процентного содержания корзинчатых нейронов (с 14,28±0,83% до 20,82±1,75%, р = 0,028), так и их абсолютного количества (с 227,77±12,21 до 462,23±101,94 на 1 мм2, р = 0,048) при использовании максимальной дозы. Одновременно повышалось и общее число нейронов гиппокампа с 1980,36±63,52 до 2627,91±182,91 на 1 мм2 (р = 0,042). 7-кратное введение минимальной дозы мексидола привело к достоверному приросту абсолютного количества пирамидных нейронов (с 250,75±15,10 до 376,73±70,54 на 1 мм2, р = 0,028) и общего число нейронов (с 1980,36±63,52 до 2270,52±397,95 на 1 мм2, р = 0,015) в изученной структуре аммонова рога. Средняя доза мексидола также вызывала нарастание абсолютного числа пирамидных нейронов поля CAI с 250,75±15,10 до 363,92±73,91 на 1 мм2 (р = 0,008) при недельном курсовом применении у крыс с аллоксановым диабетом.

Результаты 14-дневного введения исследованных препаратов также существенно зависели от их влияния на липидную пероксидацию in vitro. При этом реамберин и а-ЛК вызывали снижение содержания пирамидных нейронов поля CAI древней коры. При двухнедельном применении всех дозировок а-ЛК абсолютное количество этой категории нейронов уменьшалось в 1,37 - 1,64 раза (р = 0,013 - 0,039), относительное - в 1,53 - 1,62 раза (р = 0,007 - 0,013), а при введении средней дозы реамберина - в 1,54 раза (р = 0,021) и 1,42 раза (р = 0,043) соответственно. Следует заметить, что минимальная доза реамберина вызывала нарастание относительного содержания корзинчатых клеток с 19,34±0,83% до 21,07±2,21% (р = 0,019). Производные 3-ОП (эмоксипин и мексидол) оказали влияние совершенно иной направленности на содержание нейронов древней коры при аллоксановом диабете. 14-кратное курсовое применение минимальной дозы эмоксипина привело к значимому нарастанию относительного (с 21,31±1,34% до 25,09±2,22%, р = 0,037) и абсолютного (с 320,56±31,56 до 431,31±41,96 на 1 мм2, р = 0,049) количества корзинчатых нейронов поля CAI, а также повышению общего числа нейронов (с 1548,32±58,78 до 1882,89±20,89 на 1 мм2, р = 0,003). При увеличении дозировок отмеченные эффекты претерпевали инверсию, что проявилось достоверным снижением процентной доли пирамидных (с 31,62±2,90% до 20,60±2,14%, р = 0,028) и корзинчатых (с 21,31±1,34% до 18,32±0,37%, р = 0,045) нейронов при использовании средней дозы, а также процентного содержания пирамидных нейронов при использовании максимальной дозы (с 31,62±2,90% до 25,62±1,57%, р = 0,030). Мексидол, уступавший по антиоксидантной активности эмоксипину, при 14-дневном применении минимальной дозы вызвал лишь нарастание процентного содержания корзинчатых нейроцитов (с 21,31±1,34% до 25,05±1,49%,р = 0,037).

Влияние исследованных препаратов на содержание глиальных клеток при однократном режиме применения не зависело от их антиоксидантного потенциала. Данный режим применения выявил наличие существенного глиопротекторного эффекта только у двух препаратов: эмоксипина и реамберина. Однократное введение относительно высоких дозировок (ЭСТД и 2 ЭСТД) эмоксипина крысам с аллоксановым диабетом привело к

значимому нарастанию олигодендроцитов в поле CAI гиппокампа больных животных с 89,07±0,69 до 119,87±14,02 на 1 мм2 (р = 0,046) и до 166,67±19,46 на 1 мм2 (р = 0,046) соответственно. Аналогичный режим применения средней и максимальной дозировок реамберина сопровождался увеличением числа олигодендроцитов поля CAI гиппокампа с 91,17±2,48 до 123,37±7,46 на 1 мм2 (р = 0,014) и до 117,00±4,78 на 1 мм2 (р = 0,004) соответственно. Кроме того, в минимальной дозе реамберин вызвал более чем двукратное нарастание содержания микроглиоцитов в обсуждаемой структуре древней коры (с 36,21±3,48 до 75,71±11,77 на 1 мм2, р = 0,009). Недельное курсовое применение изученных ЛС привело к нарастанию числа папеокортикальных олигодендроцитов только для средств с антиоксидантной активностью и отмечалось при использовании всех дозировок эмоксипина (в 1,59 - 2,69 раза, р = 0,009 - 0,024) и мексидола (в 1,63 - 2,21 раза, р = 0,006 - 0,009). а-ЛК, обладавшая наибольшим прооксидантным действием, вызвала уменьшение числа олигодендроцитов гиппокампа при использовании средней дозы с 115,84±13,52 до 74,71±7,78 на 1 мм2 (р = 0,030). Реамберин не оказал никакого влияния на содержание олигодендроцитов в древней коре при 7-кратном режиме применения, но одновременно вызвал достоверное нарастание числа астроцитов при использовании относительно низких доз: с 148,59±22,91 до 206,20± 12,71 на 1 мм2 при введении Y¡ ЭСТД (р = 0,046) и до 240,37±13,89 на 1 мм2 при введении ЭСТД (р = 0,009). Такой же эффект в отношении клеток астроглии поля CAI оказало 7-кратное введение максимальной дозы а-ЛК (увеличение числа астроцитов с 148,59±22,91 до 274,26±32,84 на 1 мм2, р = 0,026), средней дозы эмоксипина (с 109,51±10,21 до 255,39±24,86 на 1 мм2, р = 0,025) и минимальной дозировки мексидола (с 109,51±10,21 до 165,49±12,29 на 1 мм2, р = 0,025). Сукцинатсодержащие ЛС (реамберин и мексидол) вызвали уменьшение числа клеток микроглии в поле CAI при 7-дневном применении относительно высоких доз реамберина (с 55,29±5,74 до 46,32±2,97 на 1 мм2 при введении ЭСТД, р = 0,040 и до 48,26±0,67 на 1 мм2 при введении 2 ЭСТД, р = 0,040), а также максимальной дозировки мексидола (с 64,38±1,87 до 52,68±2,94 на 1 мм2, р = 0,027). При этом следует подчеркнуть, что минимальная доза мексидола, наоборот, повышала число микроглиоцитов до 83,33±21,88 на 1 мм2 (р = 0,024), так же как и количество других глиальных клеток (астроцитов и олигодендроцитов), в изученной структуре аммонова рога.

Результаты 14-дневного применения исследованных ЛС в отношении числа астроцитов существенно зависели от наличия сукцината в составе изученных препаратов. Сукцинатсодержащие ЛС при 14-кратном применении минимальных доз вызывали значимое нарастание числа астроцитов в поле CAI крыс с аллоксановым диабетом: реамберин - с 305,88±16,35 до 372,91±19,72 на 1 мм2 (р = 0,027), мексидол - с 321,29±19,96 до 381,28±16,50 на 1 мм2 (р = 0,036). Средние дозы эмоксипина оказали противоположный эффект, снизив число этой категории глиоцитов у крыс с аллоксановым диабетом с 321,29±19,96 до 299,72±7,68 на 1 мм2 (р = 0,032). а-ЛК не влияла на число палеокортикальных астроцитов при двухнедельном режиме применения. Количество олигодендроцитов и клеток микроглии нарастало под действием всех изученных ЛС при 14-кратном применении. Данный эффект наиболее ярко проявился при введении средства с наибольшей антиоксидантной активностью (эмоксипина), который вызвал прирост числа как олигодендроцитов (в 1,17 - 1,26 раза, р = 0,005 - 0,021), так и микроглиоцитов (в 1,26 - 1,49 раза, р = 0,001 - 0,016) во всех изученных дозах. Другое производное 3-оксипиридина (мексидол) вызвало нарастание олигодендроцитов с 200,51±10,67 до 256,б4±14,45 на 1 мм2 (р = 0,015) и до 265,16±11,32 на 1 мм2 (р = 0,002) при использовании минимальной и максимальной доз соответственно, а также увеличение количества микроглиоцитов поля CAI с 140,33±9,71 до 216,73±16,33 на 1 мм2 (р = 0,005) и до 189,68±8,58 на 1 мм2 (р = 0,022) при введении соответственно ЭСТД и 2 ЭСТД данного препарата крысам с аллоксановым диабетом. Относительно низкие дозы а-ЛК вызвали нарастание числа олигодендроцитов в аммоновом роге с 207,68±17,62 до 249,36±10,80 на 1 мм2 при применении 'Л ЭСТД (р = 0,022) и до 252,97±5,24 на 1 мм2 при использовании ЭСТД (р = 0,049). Введение средней и максимальной доз этого ЛС привело к аналогичным изменениям числа микроглиоцитов палеокортекса больных животных, содержание которых

повысилось с 158,12±12,32 до 211,08±3,79 на 1 мм2 (р = 0,015) и до 195,38±9,49 на 1 мм2 (р = 0,043) соответственно. Наименьшая «распространенность» соответствующего дозового эффекта была отмечена у реамберина, который при 14-кратном введении крысам с аллоксановым диабетом вызвал нарастание числа олигодендроцитов в средней дозе (с 207,68±17,62 до 272,94±16,35 на 1 мм2, р = 0,021) и микроглиоцитов в минимальной дозе (с 158Д2±12,32 до 227,16±7,00 на 1 мм2, р = 0,005).

Обобщая данные о влиянии изученных ЛС на структуры палеокортекса, можно предположить их способность модулировать процессы пролиферации и дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток древней коры, которая содержит значительную часть пула стволовых нервных клеток (Lee е., Son Н. Adult hippocampal neurogenesis and related neurotrophic factors // BMB Rep. 2009. Vol. 42, № 5. P. 239-244.). Высокая вероятность такого действия изученных препаратов связана с относительно слабовыраженными изменениями числа зрелых клеток нейроэктодермального происхождения (прежде всего нейронов) в изученной структуре аммонова рога в динамике аллоксанового диабета.

Не исключено, что действие исследованных ЛС на клеточный состав ПВЯ у крыс с аллоксановым диабетом тоже может быть в определенной степени связано с мобилизацией пролиферативного потенциала стволовых нервных клеток. Такая возможность иллюстрируется достоверным нарастанием числа нейронов ПВЯ с 371,36±44,17 до 444,13±16,01 на 1 мм2, р = 0,042) при однократном введении малой дозы эмоксипина. Наиболее выраженные эффекты изученных ЛС на диэнцефальном уровне были отмечены при 7-дневном применении. Важно подчеркнуть, что эти эффекты были однонаправленными, позитивными и не зависели от антиоксидантной и антигипоксической активности изученных ЛС. Недельное применение эмоксипина и реамберина вызвало значимое нарастание числа нейронов ПВЯ крыс с аллоксановым диабетом при использовании всех дозировок этих ЛС (рисунок 6А). а-ЛК оказала такое же действие при введении относительно высоких доз. При 14-кратном применении мексидол вызвал аналогичный эффект в единственной (минимальной) дозировке, повышая число нейронов ПВЯ с 532,48±15,62 до 626,59±41,31 на 1 мм (р = 0,034). Такой же режим введения а-ЛК привел к нарастанию числа нейронов ПВЯ с 529,96±25,30 до 631,№41,49 на 1 мм2 (р=0,048). Двухнедельное применение эмоксипина и реамберина не оказало никакого влияния на содержание нейронов в ПВЯ при аллоксановом диабете.

Число глиальных клеток ПВЯ также изменилось уже при однократном применении изученных ЛС. При этом в максимальной дозе реамберин снижал число клеток астроглии с 278,69±18,91 до 223,41±14,34 на 1 мм2 (р = 0,032), а а-ЛК, напротив, увеличивала их количество с 188,54±7,78 до 231,03±11,85 на 1 мм2 (р = 0,016). Однократное введение средней дозы эмоксипина уменьшало число олигодендроцитов с 294,04±15,20 до 224,95±16,27 на 1 мм (р = 0,014). 7-ми кратное введение максимальной дозы а-ЛК, как и однократное, приводило к увеличению содержания астроцитов в ПВЯ больных животных с 246,30±19,07 до 367,14±31,53 на 1 мм2 (р = 0,004). Мексидол при недельном применении в максимальной дозе снижал число олигодендроцитов (с 420,89±131,80 до 211,28±8,79 на 1 мм2, р = 0,009) и микроглиоцитов (с 154,21±57,30 до 60,92±7,13 на 1 мм2, р = 0,040) в ПВЯ. 7-кратное введение эмоксипина и реамберина существенно не изменило глиальный состав изученного ядра гипоталамуса. Наиболее выраженный глиопротекторный эффект изученных ЛС наблюдался при их двухнедельном применении. При этом производные 3-оксипиридина (эмоксипин и мексидол), обладавшие антиоксидантной активностью in vitro, существенно превосходили средства с прооксидантной активностью (реамберин и а-ЛК) по «дозовой распространенности» влияния на глиальные популяции ПВЯ больных крыс. Двухнедельное введение эмоксипина и мексидола во всем диапазоне изученных доз вызвало достоверное нарастание числа астроцитов (рисунок 6Б) и олигодендроцитов (рисунок 6В) у крыс с аллоксановым диабетом. На этом фоне лишь минимальная доза эмоксипина вызывал значимое уменьшение количества клеток микроглии в ПВЯ (рисунок 6Г). Повышение числа астроцитов наблюдалось под действием не только максимальной, но и минимальной дозы а-ЛК (рисунок 6Б). Следует подчеркнуть, что 14-дневное курсовое применение относительно низких доз а-ЛК (Уг ЭСТД и

ЭСТД) дополнительно увеличивало число олигодендроцитов и микроглиоцитов ПВЯ крыс с аллоксановым диабетом (рисунок 6 В, Г).

Вполне возможно, что увеличение «дозовой распространенности» глиопротекторного эффекта а-ЛК в определенной степени связано с кумуляцией ее ко-антиоксидантного действия. По-видимому, такой же феномен лежит в основе результатов курсового применения реамберина, который не влиял на число глиоцитов ПВЯ при 7-кратном режиме введения, но значимо увеличивал число олигодендроцитов в этой церебральной структуре при 14-кратном использовании средней дозы. Кроме того, 14-кратное применение реамберина вызывало достоверное нарастание числа микроглиоцитов ПВЯ во всем диапазоне изученных доз.

эмоксипин реамберин мексидол а-ЛК

□ контроль □ диабет В 1/2 ЭСТД ■ ЭСТД ■ 2 ЭСТД

эмоксипин реамберин мексидол а-ЛК

□ контроль □ диабет И 1 /2 ЭСТД ■ ЭСТД ■ 2 ЭСТД

эмоксипин реамберин мексидол а-ЛК □ контроль □ диабет Ш 1/2 ЭСТД ВЭСТД Я2 ЭСТД

эмоксипин реамберин мексидол а-ЛК □ контроль □ диабет Б 1/2 ЭСТД МЭСТД Я 2 ЭСТД

Рисунок 6 - Влияние а-липоевой кислоты, производных 3-оксиииридина и янтарной кислоты на содержание нейронов в паравентрикулярном ядре гипоталамуса при 7-кратном введении (А), а также астроцитов (Б), олигодендроцитов (В) и микроглиоитов (Г) при 14 - кратном введении препаратов крысам с аллоксановым диабетом

Обобщая данные о влиянии изученных ЛС на кортикальные и диэнцефальные структуры головного мозга крыс с аллоксановым диабетом, следует отметить, что 14-кратное введение оптимальных доз всех препаратов препятствует убыли нейронов в первичной соматосенсорной коре. Наибольшая выраженность этого эффекта отмечена при использовании производных 3-оксипиридина (эмоксипина и мексидола), двухнедельное введение которых

дополнительно приводило к снижению доли липофусцин-позитивных нейронов в неокортексе и поле CAI гиппокампа. Одновременно эмоксипин и мексидол увеличивали содержание корзинчатых нейронов, олигодендроцитов и клеток микроглии в изученной структуре аммонова рога, а также препятствовали убыли астроцитов в соматосенсорной коре и ПВЯ гипоталамуса. Реамберин и а-липоевая кислота уступали производным 3-оксипиридина по церебропротекторному действию при аллоксановом диабете и вызывали нежелательные побочные эффекты, проявившиеся снижением числа пирамидных нейронов в поле CAI гиппокампа, а также увеличением содержания липофусцин-позитивных нейронов в соматосенсорной коре и ПВЯ гипоталамуса. Изменения клеточного состава кортикальных и диэнцефальных структур под действием изученных лекарственных средств практически не зависели от их способности корригировать гипергликемию при аллоксановом диабете.

Функциональная значимость корригирующего влияния изученных JIC на клеточный состав головного мозга крыс с аллоксановым диабетом проявилась нормализацией параметров поведения в «открытом поле» и условнорефлекторного обучения животных. Уже через 96 часов после индукции аллоксанового диабета на фоне однократного введения производные 3-ОП и ЯК оказали заметное влияние на этологический статус больных крыс (таблица 6). Это проявилось уменьшением дефицита исследовательско-ориентировочной активности животных в «открытом поле». Наиболее выраженное действие оказал эмоксипин, минимальная доза которого вызывала увеличение показателей исследовательско-ориентировочной активности животных, а максимальная дополнительно увеличивала двигательную активность больных крыс. Аналогичное действие реамберина проявилось лишь в минимальной дозе, которая вызывала более чем двукратное нарастание показателей исследовательско-ориентировочной активности животных. Мексидол оказал диаметрально противоположное действие, проявившееся усугублением дефицита поведенческой активности при использовании относительно низких доз. Это проявилось достоверным уменьшением показателей ориентировочной активности крыс под действием минимальной дозы мексидола и снижением всех показателей исследовательско-ориентировочной активности при использовании ЭСТД. Важно заметить, что однократное применение максимальной дозировки мексидола, наоборот, увеличило показатель исследовательской активности больных крыс в «открытом поле». Не исключено, что наибольшая выраженность церебропротекторного действия мексидола при использовании относительно низких доз связана с усугублением дефицита поведенческой активности. Важно заметить, что отечественные производные 3-ОП и ЯК при однократном введении крысам с аллоксановым диабетом превосходили a-JIK, которая вообще не оказала значимого влияния на исследовательско-ориентировочную активность больных животных.

Отдельного внимания заслуживает анализ изменений интенсивности груминга и анксиогенной дефекации под действием изученных ЛС при однократном применении. В большинстве случаев производные 3-ОП и ЯК снижали интенсивность дефекации в «открытом поле», которая рассматривается как вегетативный эквивалент тревоги у лабораторных грызунов. Наиболее ярко это проявилось при однократном введении эмоксипина и реамберина, которые вызывали этот эффект во всем диапазоне изученных доз. Следует заметить, что на этом фоне у крыс, получавших эмоксипин и реамберин, наблюдалась нормализация показателей груминга. Мексидол снижал интенсивность груминга во всем диапазоне изученных доз, но значимо увеличивал интенсивность анксиогенной дефекации при использовании максимальной дозы. По-видимому, этот эффект, так же как увеличение исследовательской активности животных, отражает стимулирующее действие высоких дозировок мексидола. а-ЛК при однократном введении крысам с аллоксановым диабетом усугубляла дефицит груминга при использовании максимальной и минимальной доз и оказывала разнонаправленное действие на показатель анксиогенной дефекации при применении минимальной дозы (увеличение) и средней дозы (уменьшение).

Таблица 6 - Влияние а-липоевой кислоты, производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на поведение в «открытом поле» и формирование условного рефлекса активного избегания у крыс с экспериментальным сахарным диабетом (М±т)

Показатели п Горизонтальная Ориентировочная Исследовательская Груминг Дефекация Условный рефлекс

Группа, активность активность активность активного

кратность введеіїия. избегания

1 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Эмоксипин

Интактный 1 11 45,36+3,50 22,27±1,68 18,55+1,56 2,81+0,40 1,82+0,52 3,21+0,56

контроль 7 10 47,80±1,64 24,20±1,69 23,00±1,27 0,50±0,17 0,30±0,15 3,28±0,56

14 11 43,36+2,02 22,09±0,91 20,55+0,89 0,45+0,16 0,55+0,16 3,99+0,40

Аллокса- 1 И 18,10+3,03* 7,82±1,42* 7,55+1,30* 1,27+0,33** 2,00+0,54** 1,69+0,21*

новый 7 11 20,55 ± 1,07* 14,00 ± 1,18* 13,36 ± 1,12* 1,73 ±0,27* 1,64 ±0,31* 1,57 ±0,10*

диабет 14 10 14,7±1,37* 8,60+1,07* 7,00+1,13* 1,90+0,43* 2,00+0,39* 1,32+0,08*

Я ЭСТД 1 11 29,27±4,67 15,36±1,47** 12,36+1,40** 1,82+0,35** 1,73+0,52** 6,04+1,70**

(6,25 мг/кг) 7 12 26,08 ±2,59** 17,00 ±1,41 16,42 ±1,68 0,50±0,15** 0,42±0,19** 3,11±0,30**

14 11 18,18±1,88 11,45±1,29 10,64+1,40** 0,36+0,15** 0,55+0,21** 2,46+0,17**

ЭСТД 1 11 24,82±3,97 12,36±1,69 11,36+1,83 2,00+0,50** 1,18+0,38** 3,76+0,71**

(12,5 м г/кг) 7 10 26,00+ 1,45** 17,10 ±0,66 15,40 ±0,97 0,60±0,16** 0,20±0,13** 2,81±0,38**

14 11 24,18+1,87** 14,09±1,65** 13,91+2,02** 0,36+0,15** 0,18+0,12** 3,15+0,37**

2 ЭСТД 1 И 33,64±4,64** 15,09±1,51** 13,18+1,39** 2,09+0,41** 1,18+0,35** 5,20+1,39**

(25 мг/кг) 7 12 28,33 ± 1,44** 18,33±0,92** 17,92±0,54** 0,42±0,15** 0,25±0,13** 3,45±0,42**

14 10 23,60+1,40** 15,90+1,29** 13,70+1,54** 0,30+0,15** 0,30+0,15** 2,44+0,16**

Реамберин

Интактный 1 10 56,10±4,61 26,10+2,31 23,50+2,63 2,20+0,39 1,90+0,67 4,22+1,13

контроль 7 10 47,80 ±3,01 24,40 ±1,19 22,30 ± 1,63 0,90 ± 0,28 0,80 ± 0,20 2,80 ± 0,34

14 10 42,40±1,87 23,10±1,24 20,50±1,19 0,70±0,21 0,60±0,22 3,41±0,39

Аллокса- 1 10 20,70+6,26 * 6,90+2,11* 7,30+1,79 * 0,90+0,18* 2,70+0,50 * 2,04+0,29 *

новый 7 12 13,42 ± 1,53* 6,75 ± 0,78* 5,17 ± 1,20* 1,42 ±0,36* 2,33 ± 0,36* 1,49±0,14*

диабет 14 И 14,18±1,70* 6,00±1,17* 5,36±1,02* 1,27±0,24* 1,73±0,33* 1,53±0,13*

И ЭСТД 1 10 34,90+6,25 17,10+2,31 ** 15,10+2,09 ** 2,50+0,40 ** 1,80+0,33** 4,60+1,16**

(12,5 мл/кг) 7 13 21,69±1,82** 14,85±1,57** 13,77±1,29** 1,00+0,23** 0,77±0,20** 1,78 ±0,20

14 10 28,80±2,14** 16,40+1,01** 14,20+1,13** 1,00+0,22** 0,60+0,22** 1,80+0,36

ЭСТД 1 10 24,20+6,21 8,40+2,12 9,70+1,71 1,00+0,33 ** 1,80+0,90** 3,29+0,96

(25 мл/кг) 7 13 21,54 + 1,67** 14,38±1,19** 14,15+1,56** 0,85±0,22** 0,69±0,21** 2,27±0,28**

14 10 27,00±1,34** 15,30+1,28** 14,80+1,22** 1,12+0,16 0,52+0,16** 2,35+0,25**

2 ЭСТД 1 10 31,10+6,67 10,90+1,94 9,30+1,98 2,80+0,74 ** 2,00+0,56** 5,73+1,55**

(50 мл/кг) 7 13 24,92 ± 1,87** 15,08±1,11** 12,53±1,20** 0,85±0,22** 0,62±0,18** 1,93 ±0,21

14 10 28,30+1,58** 15,90+0,99** 14,40+1,14** 1,16+0,13 0,58+0,19** 1,87+0,24

Мексидол

Интактный 1 13 32,92±5,35 12,15+1,91 11,92+1,60 6,54+1,64 2,38+0,56 5,36+0,84

контроль 7 10 47,80±1,64 24,20±1,69 23,00±1,27 0,50±0,17 0,30+0,15 3,28±0,56

14 11 43,36+2,02 22,09+0,91 20,55+0,89 0,45+0,16 0,55+0,16 3,99+0,40

Аллокса- 1 15 18,00+4,53* 6,73+1,23* 5,87+1,13* 3,93+1,23* 2,07+0,51* 2,99+0,42*

новый 7 И 20,55 ± 1,07* 14,00+1,18* 13,36 ± 1,12* 1,73 ±0,27* 1,64 ±0,31* 1,57 ±0,10*

диабет 14 10 14,7±1,37 * 8,60+1,07* 7,00+1,13* 1,90+0,43* 2,00+0,39* 1,32+0,08*

й ЭСТД 1 14 13,14^3,32 5,64+1,56** 5,50+1,46 2,07+0,45** 2,00+0,64 4,75+1,05

(12,5 мг/кг) 7 11 28,64±1,65** 19,45±0,47** 18,45±1,30** 0,36±0,15** 0,36+0,15** 3,14±0,36**

14 10 25,60+1,12** 17,10+1,11** 16,20+1,36** 0,30+0,15** 0,50+0,22** 2,99+2,20**

ЭСТД 1 13 13,46±3,05** 6,46+1,68** 5,38+1,13** 2,46+0,90** 2,15+0,60 7,00+1,25**

(25 мг/кг) 7 11 27,55 ±2,62** 17,36 ± 1,60 17,91+1,50** 0,36±0,15** 0,36+0,15** 3,00±0,47**

14 12 20,92±2,18** 13,83+1,83** 12,00+1,59** 0,33+0,14** 0,42+0,15** 3,07+0,54**

2 ЭСТД 1 12 11,92±2,44 7,58+0,91 6,33+1,25** 2,58+0,62** 2,42+0,66** 4,52+1,14

(50 мг/кг) 7 10 27,40 ± 1,89** 18,70+1,28** 18,50+0,91** 0,40±0,16** 0,30+0,15** 3,09±0,42**

14 10 23,90+1,13** 17,90+1,16** 15,00+0,77** 0,30+0,15** 0,30+0,15** 2,87+0,23**

, 1 9 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 |8|9

а-Липоевая кислота

Интактный контроль 1 П 32,92±5,35 12,15±1,91 11,92±1,60 6,54±1,64 2,38±0,56 5,36±0,84

7 10 47,80 + 3,01 24,401 1,19 22,30+ 1,63 0,9010,28 0,8010,20 2,80 10,34

14 10 42,4011,87 23,1011,24 20,5011,19 0,7010,21 0,6010,22 3,41+0,39

Аллокса- новый диабет 1 15 18,00±4,53 * 6,73±1,23 * 5,87±1,13 * 3,93±1,23 * 2,07±0,51 * 2,99±0,42 *

7 12 13,42+ 1,53* 6,75 1 0,78* 5,1711,20* 1,4210,36* 2,3310,36* 1,4910,14*

14 11 14,18+1,70* 6,0011,17* 5,3611,02* 1,2710,24* 1,7310,33* 1,53Ю,13*

й ЭСТД (25 мг/кг) 1 1? 15,58±4,02 8,17±1,28 5,50±1,12 2,50±0,87** 2,83±0,53** 7,95±2,4**

7 13 25,69+1,91** 17,2311,25** 16,0811,26** 0,46Ю,18** 0,8510,25** 2,33+0,51

14 10 28,9010,97** 17,9010,99** 18,4011,03** 0,5010,17** 0,4010,22** 2,7010,46**

ЭСТД (50 мг/кг) 1 1? 21,08±5,07 6,83±1,42 8,00±1,93 4,00±1,51 1,67±0,68** 6,41±2,42

7 12 26,83+1,97** 17,1711,25** 16,2510,99** 0,42Ю,19** 0,58+0,15** 2,7910,41**

14 10 27,50+1,54** 17,1011,18** 17,0010,97" 0,30Ю,15** 0.5010,17** 3,8710,75**

2 ЭСТД (100 мг/кг) 1 11 15,82±4,33 10,36±2,18 7,45±1,59 3,36±0,98** 2,00±0,75 5,91±1,73

7 12 30,2511,66** 20,9210,96** 17,3311,41** 0,5810,23** 0,6710,22** 4,7211,94**

14 И 33,73+2,17** 20,0911,32** 18,4511,34** 0,4510,28** 0,4510,21** 3,7010,92**

Приме группой живот чани* ных _ * -аллс р < 0,05 по сравнению с интактным контролем; ** - р < 0,05 по сравнению с контрольной ксановым диабетом.

Значительно более яркие эффекты изученных J1C наблюдались при их курсовом применении. В первую очередь это касалось J1C, обладавших прооксидантным действием in vitro и инсулин-потенциирующей активностью in vivo (реамберина и а-ЛК). Эти ЛС существенно корригировали показатели двигательной и исследовательско-ориентировочной активности в всем диапазоне изученных доз как при 7-ми, так и при 14-дневном применении (таблица 6). Производные 3-ОП (эмоксипин и мексидол) оказали аналогичное, качественно сходное действие, но уступали реамберину и а-ЛК по дозовой распространенности эффектов. Это проявилось отсутствием достоверных изменений ориентировочной активности больных животных при 7-кратном введении относительно низких доз эмоксипина и средней дозы мексидола. При 14-кратном введении эмоксипин не оказал влияния на показатели двигательной и ориентировочной активности крыс при использовании минимальной дозы, в то время как мексидол не уступал по дозовой распространенности эффектов реамберину и а-ЛК.

Эффекты курсового применения изученных ЛС в отношении проявлений тревоги (груминга и дефекации) в значительной степени зависели от влияния препаратов на толерантность к нагрузке глюкозой in vivo и антиоксидантное действие in vitro. Эмоксипин и мексидол, наиболее сильно увеличивающие толерантность к глюкозе, а также обладающие наиболее выраженным антиоксидантным и антигипоксическим действием, корригировали проявления как груминга, так и дефекации во всем диапазоне изученных доз как при 7-ми, так и при 14-кратном режиме применения (таблица 6). Тоже самое касается а-ЛК. По-видимому, курсовое применение а-ЛК связано с ее депонированием в печени и последующей трансформацией в антиоксидантную форму (дигидролипоевую кислоту). Реамберин, также как остальные ЛС корригировавший груминг и дефекацию при 7-кратном применении во всем диапазоне изученных доз, продемонстрировал существенное сокращение дозовой распространенности влияния на груминг при 14-кратном применении при сохранении корригирующего действия на анксиогенную дефекацию во всем диапазоне изученных доз. Полученный факт хорошо соответствует постепенному снижению гипогликемизирующей активности реамберина при его 14-кратном применении.

Особого влияния заслуживает анализ влияния изученных ЛС на нарушенную способность больных животных к условно-рефлекторному обучению (таблица 6). Все изученные препараты характеризовались ноотропным действием, проявившимся в нормализации способности крыс с аллоксановым диабетом к условно-рефлекторному обучению при всех режимах введения. В первую очередь это касалось средств, обладавших антиоксидантным действием in vitro и антигипоксическим действием in vivo (эмоксипина и

мексидола). Эмоксипин, обладавший наибольшим антиоксидантным действием, продемонстрировал ноотропную активность во всем диапазоне доз при всех режимах введения. Мексидол, несколько уступавший эмоксипину по антиоксидантной активности, при однократном введении оказывал ноотропный эффект лишь в средней дозировке. Курсовое применение этого ЛС нормализовало нарушенную способность больных животных к условно-рефлекторному обучению во всем диапазоне изученных доз. Аналогичная закономерность была отмечена для а-ЛК, которая характеризовалась постепенным нарастанием дозовой распространенности ноотропного эффекта. Однократное применение а-ЛК улучшало показатель УРАИ только при использовании минимальной дозы. При 7-кратном введении такой же эффект наблюдался при использовании относительно высоких доз. 14-кратное применение а-ЛК вызывало ноотропный эффект во всем диапазоне изученных дозировок. Реамберин, который в отличие даже от а-ЛК, вообще не влиял на устойчивость к острой гипоксической гипоксии (рисунок 2), характеризовался постепенным уменьшением дозовой распространенности ноотропного эффекта в динамике его курсового применения. Так, однократное введение реамберина крысам с аллоксановым диабетом улучшало качество формирования УРАИ при использовании минимальной и максимальной доз. В дальнейшем, при 14-кратном применении соответствующий эффект наблюдался в одной единственной (средней) дозе. Полученные результаты в целом позволяют считать, что антиоксидантная активность изученных производных и связанное с ней положительное влияние на устойчивость к гипоксии и толерантность к нагрузке глюкозой в значительной степени определяют выраженность ноотропного действия изученных ЛС при курсовом применении у крыс с аллоксановым диабетом. Справедливость этого положения подтверждается результатами корреляционного анализа (рисунок 7А,Б). Важно добавить, что антигипоксическая активность исследованных ЛС также в значительной степени обусловливает церебропротекторное и гиполипидемическое действие при аллоксановом диабете (рисунок 7В,Г).

В следующей серии экспериментов эффективность терапии аллоксанового диабета с помощью производных 3-ОП и ЯК оценивалась на другом виде лабораторных грызунов (мышах). Результаты использования производных 3-ОП при экспериментальном СД у мышей показали, что курсовое применение эмоксипина и мексидола в течение 7 и 14 дней в дозах, эквивалентных терапевтическому диапазону для человека, оказывает антидепрессивное действие, проявляющееся коррекцией расстройств мотивированного поведения и, прежде всего, сокращением длительности «поведения отчаяния» в 6-минутном тесте подвешивания за хвост (таблица 7). Через 14 дней от начала применения эмоксипина и мексидола их антидепрессивный эффект сопровождается снижением содержания глюкозы в крови больных мышей. Эмоксипин, в отличие от мексидола, вызывал транзиторное усугубление диабетической гипергликемии через 7 дней от начала введения. Курсовое применение а-ЛК и реамберина в течении двух недель в дозах, эквивалентных терапевтическому диапазону для человека, также корригировало расстройства мотивированного поведения у мышей с аллоксановым диабетом. Антидепрессивный эффект двухнедельного применения а-ЛК и реамберина был связан с уменьшением выраженности гипергликемии. Реамберин, в отличие от а-ЛК, уменьшал содержание глюкозы в крови мышей с аллоксановым диабетом, снижал их летальность и корригировал расстройства поведения даже при однократном введении относительно низких доз.

Завершая обсуждение экспериментального раздела работы, можно прийти к выводу о наибольшей обоснованности применения в комплексном лечении больных СД производных 3-ОП (эмоксипина и мексидола). Существенным аргументом в пользу преимущественного использования в диабетологической практике мексидола является его метаболическая безопасность. Об этом свидетельствует отсутствие у мексидола транзиторного гипергликемизирующего действия, которое было продемонстрировано для эмоксипина в экспериментах на крысах и мышах. Не взирая на сходство многих эффектов а-ЛК и реамберина, он уступал а-ЛК по параметрам метаболической безопасности, так как

существенно усугублял проявления атерогенных дислипидемических расстройств в эксперименте. Исходя из вышеизложенного, в клиническом разделе работы была проведена сравнительная оценка терапевтической эффективности мексидола и а-ЛК, которая при курсовом применении оказывала вполне сопоставимые с мексидолом благоприятные метаболические и психотропные эффекты.

80 100 120 140

Гликемия через 30 минут после введения ЛС интактиым крысам (% от контроля)

160

100

110 120 130 140

Устойчивость к гипоксии у интактных мышеи (% от контроля)

Устойчивость к гипоксии у интактных мышей (% от контроля)

120

100 80 60 40 ¡. 20 о

100 110 120 130 140 150

Устойчивость к гипоксии у интактных мышей (% от контроля)

180 т 160 140 120 100 80 :: 60 ;; 40 •: 20 ;; о

100

г =0,720; р=0,008

Рисунок 7 - Зависимость ноотропного (А, Б), церебропротекторного (В) и гиполипидемического (Г) эффектов при 14-кратном введении изученных лекарственных средств при аллоксановом диабете от их влияния на устойчивость к острой гипоксической гипоксии и толерантность к нагрузке глюкозой у интактных животных

(треугольником обозначены '/г ЭСТД, кругом - ЭСТД, квадратом- 2 ЭСТД; прозрачная заливка - эмоксипин; черная заливка - реамберин; серая заливка с очерченными контурами -мексидол; серая заливка без очерченных контуров - а-липоевая кислота)

Таблица 7 - Влияние а-липоевой кислоты, производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на поведение в «открытом поле», длительность «поведения отчаяния» и выраженность гликемии у мышей с экспериментальным сахарным диабетом (М+ш)

Показатели Группа/\. Кратность ведения ^ч. п Горизонтальная активность Ориентировочная активность Исследовательская активность Длительность «поведения отчаяния» (сек) Глюкоза ( мМоль/л)

1 1 2 . 3 4 5 6 7 8

Эмоксипин

Интактный контроль 1 19 73,16±7,00 14,37+2,08 11,79+1,46 131,74+10,21 3,90+0,39

7 10 96,30+4,71 42,90+1,94 41,60+2,11 82,20+5,20 6,89+0,99

14 И 54,45±3,21 27,55+1,31 24,00+1,62 131,9116,47 6,4610,17

Аллоксано-вый диабет 1 14 66,29±9,11 10,86+1,81* 9,50+1,26* 173,21+8,96* 18,30+5,08*

7 12 38,75+3,86* 20,67+1,95* 17,83+1,60* 177,08+8,34* 23,93+2,80*

14 И 15,8212,22* 7,73±1,75* 7,09±1,78* 261,73111,25* 20,8111,61*

ЭСТД (12,5 мг/кг) 1 15 38,47+7,59« 8,07+1,77** 8,00+1,82** 258,13+25,39** 20,59+4,93

7 12 52,75+3,95« 25,50+2,32 22,42+2,40 139,00+8,14** 33,39+2,08**

14 10 23,90+2,18« 14,90+2,14" 14,4012,32** 208,40110,07** 16,7310,93

ЭСТД (25 мг/кг) 1 15 37,53+8,61 7,13+2,19 7,33+2,05 142,47+15,41 15,40+2,78

7 10 61,20+3,92« 30,10+2,47** 23,90+1,71** 135,40+4,54** 29,76+2,15

14 10 28,8012,18** 18,80+1,83*» 18,6011,15** 199,3018,54** 11,8011,22**

2 ЭСТД (50 мг/кг) 1 13 43,77±10,58 9,00+2,90 8,46+2,37 208,62+23,55 23,01+5,03

7 10 56,80+6,49« 24,20+2,68 23,80+3,45 139,60+7,17** 28,12+2,21

14 10 26,10+2,76« 15,9012,08** 15,5011,83** 198,90+11,74** 10,1111,08**

Реамберин

Интактный контроль 1 14 68,57+9,91 12,43+2,20 13,29+2,66 118,64+11,67 5,01+0,76

7 10 93,60+3,06 42,40+1,75 39,50+1,73 85,20+4,84 5,43+0,49

14 15 69,00+5,15 32,27+1,37 30,93+1,92 98,27+4,94 7,23+0,56

Аллоксано-вый диабет 1 12 25,58+9,34* 6,75+3,01* 4,83+2,25* 182,83+37,69* 21,60+3,89*

7 12 30,92+2,60* 17,08+2,23* 15,25+1,80* 183,67+5,78* 25,24+1,39*

14 13 24,08+2,70* 12,00+1,53* 11,62+1,50* 213,69+13,57* 23,69+1,86*

■Л ЭСТД (25 мл/кг) 1 15 57,80+9,59** 14,07+2,45** 9,87+1,87** 177,53+28,24 11,23+3,29**

7 11 63,64+5,64** 29,00+2,96** 25,45+2,73** 138,91+8,14** 25,43+3,21

14 11 32,36+3,87 18,82+2,21** 18,00+2,66** 173,55+18,68** 16,92+2,62**

ЭСТД (50 мл/кг) 1 16 43,25+9,60 7,56+2,42** 6,75+2,14** 170,31+24,09 15,59+3,25

7 11 57,36+5,11** 26,45+2,69** 24,27+2,58** 140,18+7,92** 25,76+3,84

14 11 39,45+2,48" 19,27+1,34** 24,91 + 1,18** 149,64+8,79** 14,52+1,91**

2 ЭСТД (100 мл/кг) 1 15 34,20+8,49 7,13+2,40** 5,80+2,20** 181,20+31,86 13,25+3,08

7 11 58,64+8,09** 29,36+3,86** 25,45+3,65** 144,73+12,33** 23,89+3,77

14 11 42,55+2,30** 26,55+1,13** 23,73+1,32** 138,55+7,10** 12,86+1,58**

Мексидол

Интактный контроль 1 18 80,67+7,48 13,83+2,33 13,17+1,62 107,89+6,70 8,42+1,03

7 10 96,30+4,71 42,90+1,94 41,60+2,11 82,20+5,20 6,89+0,99

14 11 54,45±3,21 27,55±1,31 24,00+1,62 131,9116,47 6,4610,17

Аллоксано-вый диабет 1 14 44,64+8,49* 11,36+2,37 9,71+1,91 181,79+22,31* 17,82+2,26*

7 12 38,75+3,86* 20,67+1,95* 17,83+1,60* 177,08+8,34* 23,93+2,80*

14 11 15,82±2,22* 7,73+1,75* 7,0911,78* 261,73+11,25* 20,8111,61*

■Л ЭСТД (25 мг/кг) 1 15 56,79+8,91 9,50+1,64 10,50+1,76 175,86+15,66 25,52+2,95

7 10 30,70+3,51 16,40+2,10 14,90+2,79 202,90+14,71 28,15+3,69

14 11 33,10±2,72** 19,27±1,48« 19,18+1,39" 189,18110,04** 10,0011,49**

ЭСТД (50 мг/кг) 1 14 56,54+11,62 6,70+1,41 7,00+1,62** 156,85+19,48 23,70+4,37

7 11 42,09+6,24 20,18+2,56 24,27+1,43** 118,91+12,45** 23,18+3,34

14 11 28,27±2,69** 17,82±2,05" 17,9111,52** 186,18110,13** 11,1111,32**

2 ЭСТД (100 мг/кг) 1 17 55,47+10,05 7,20+1,35 8,13+1,60 133,60+19,63 23,74+1,95

7 12 44,50+7,97 22,00+3,98 20,08+4,04 180,75+26,45 21,98+2,93

14 И 31,36±2,44" 18,00+1,83" 17,6411,19** 165,0019,60** 10,3011,15**

Продолжение таблицы 7_____

I 2 | 3 I 4 I 5 I 6

g-Липоевая кислота

Интактный контроль 1 18 80,67±7,48 13,83±2,33 13,17±1,62 107,89±б,70 8,42±1,03

7 10 62,40±5,67 29,60±2,50 28,00±2,33 90,20±5,75 5,91±0,36

14 11 60,82±3,93 31,10±1,45 29,91 ±1,86 97,64±4,82 7,52±0,67

Аллоксано-вый диабет 1 14 44,64±8,49* 11,36±2,37 9,71±1,91 181,79±22,31* 17,82±2,26*

7 10 24,80±2,56* 13,60±1,88* 11,00±1,42* 212,00±12,61* 23,29±1,56*

14 10 22,00±3,03* 12,00±1,86* 11,80±1,93» 212,10±17,32* 25,85±1,68*

'/г ЭСТД (50 мг/кг) 1 14 43,67±11,04 4,00±1,33** 5,13±1,94 139,87±17,17»* 25,67±5,49

7 15 35,40±2,90** 20,33±2,03" 20,93±1,87" 140,20±13,92** 16,10±0,98**

14 13 43,46±3,28" 25,00±1,89" 24,15±1,31*» 118,54±6,75** 10,13±1,10**

ЭСТД (100 мг/кг) 1 13 48,86±8,01 7,07±1,61 6,29±2,07** 149,64±23,34 20,76±4,28

7 12 33,42±2,96 21,00±2,15" 17,83±1,66" 160,67±10,25" 16,33±0,85"

14 11 39,91±2,63** 21,91±1,04** 22,18±1,26** 126,73±5,28" 9,13±1,25»*

2 ЭСТД (200 мг/кг) 1 15 50,59±6,49 7,18±1,45" 5,24±1,38»* 155,18±1б,93 20,29±2,18

7 10 40,50±4,70** 22,00±2,05** 21,80±1,94*» 127,90±8,30** 17,74±1,03**

14 11 41,45±3,27** 21,45±1,44** 22,36±1,61" 121,91±6,61" 9,17±0,56"

Прим ечани е - * - р < 0,05 по сравнению с интактным контролем; ** - р < 0,05 по сравнению с

контрольной группой животных с аллоксановым диабетом.

Клинико-фармакологический раздел. Было проведено краткосрочное, проспективное, плацебо-контролируемое, простое «слепое», рандомизированное исследование влияния мексидола и а-липоевой кислоты на динамику нарушений аффективного статуса, когнитивных функций и качества жизни в сопоставлении с изменениями показателей углеводного обмена и липидемии у 90 больных сахарным диабетом 1 и 2 типа.

Анализ состояния больных, включенных в исследование, продемонстрировал исходную сопоставимость сформированных групп по основным лабораторным показателям углеводного обмена, липидемии и параметров системы «ПОЛ-АОЗ» (р = 0,067 - 0,982). Перед началом лечения не было выявлено значимых межгрупповых различий по показателям аффективного статуса, когнитивных функций и параметров КЖ (р = 0,077 - 0,977).

Результаты лабораторного обследования больных перед началом лечения продемонстрировали неудовлетворительное состояние углеводного обмена. Средние показатели гликемии в группах пациентов, включенных в исследование, занимали пограничное положение между диапазонами субкомпенсации и декомпенсации во всех точках суточного профиля (от 5,78±0,45 до 10,00±0,71 мМоль/л, р = 0,053 - 0,911). Содержание НЪА,С от 8 32±0 40 до 8,61±0,30% (р = 0,662) свидетельствовало об исходной декомпенсации СД. Концентрации циркулирующих ТГ (от 1,46±0,17 до 1,55±0,20 мМоль/л, р = 0,9) и холестерина липопротеинов высокой плотности (от 1,14±0,05 до 1,17±0,04 мМоль/л, р - 0,847) соответствовали норме. Средние показатели содержания ОХС (от 4,91±0,22 до 4,98±0,22 мМоль/л, р = 0,966) и холестерина липопротеинов низкой плотности (от 2,99±0,19 до 3,07±0,20 мМоль/л, р = 0,944) превышали целевые уровни и свидетельствовали о риске сердечнососудистых осложнений СД (Алгоритмы специализированной медицинской помощи больным сахарным диабетом / под ред. И.И. Дедова, М.В. Шестаковой. М., 2009. 103 е.). Уровень а-ТК (от 16,78±0,82 до 20,14±1,51 мкМоль/л, р = 0,219) и концентрация ЦП (от 25,58±1,57 до 26 79±1,60 мг/дл, р = 0,717) в сыворотке крови перед началом лечения не выходили за границы нормального диапазона (Волчегорский И.А., Харченкова Н.В. Содержание продуктов перекисного окисления липидов, а-токоферола и церулоплазмина в крови больных с сосудистыми осложнениями инсулинзависимого сахарного диабета // Клинич. лаб. диагностика. 2003. № 4. С. 13-15.). Исходное содержание большинства циркулирующих продуктов ПОЛ превышало средние значения нормы (Там же). Это касалось обеих категорий изопропанолрастворимых липопероксидов (ДК от 0,55±0,02 до 0,59±0,02 е.и.о., р = 0,362; КД и СТ от 0,33±0,03 до 0,35±0,02 е.и.о., р = 0,589), а также гептанрастворимых КД и СТ (от

0,09±0,01 до 0,11±0,01 е.и.о., р = 0,348). Полученные данные соответствуют представлениям об интенсификации ПОЛ при СД.

Большинство пациентов, включенных в исследование, характеризовалось наличием клинически значимой депрессивной симптоматики. У 63 больных суммарный балл ШДБ оказался больше порогового значения (11 баллов), превышение которого является диагностическим критерием развития депрессии при СД (Rubin R.R., Knowler W.C., Ma Y. et al. Depression symptoms and antidepressant medicine use in diabetes prevention program participants // Diabetes Care. 2005. Vol. 28, № 4. P. 830-837.). Более чем в половине случаев (47 больных) исходная тяжесть депрессивной симптоматики по данным ШДБ соответствовала уровню от 17 баллов и выше, что укладывается в диапазон от умеренно выраженной (среднетяжелой) до тяжелой депрессии (Там же). Общая тяжесть депрессивной симптоматики прямо зависела от содержания HbAic(rs= 0,234; р = 0,042) и ОХС (rs= 0,253; р = 0,023) в крови пациентов, а также от величин индекса атерогенности (rs = 0,296; р = 0,008). Содержание гептанрастворимых ДК в сыворотке крови отрицательно коррелировало с суммарным баллом ШДБ (rs= - 0,243; р = 0,03), что соответствует представлениям об уменьшении интенсивности ПОЛ по мере снижения двигательной активности и падения кислородного запроса в связи с депрессией (Волчегорский И.А., Местер Н.В., Зотова О.Г. Предикторы диабетической энцефалопатии // Журн. неврологии и психиатрии. 2006. Т. 106, № 9. С. 12-16.). Уровень циркулирующего а-ТК прямо зависел от общей тяжести депрессивной симптоматики (rs = 0,255; р = 0,023). Эта закономерность согласуется с прямой зависимостью депрессивной симптоматики от холестеринемии, т.к. циркулирующий а-ТК транспортируется в составе атерогенных липопротеинов. Корреляционный анализ, выполненный на интегральной совокупности больных перед началом лечения, позволил установить нарастание проявлений тревоги и снижение КЖ по мере увеличения тяжести депрессивной симптоматики. Это проявилось прямой связью общей тяжести симптомов депрессии с показателем ШТЦ (rs = 0,551; р < 0,001) и отрицательной корреляцией суммарного балла ШДБ с шкалой «жизнеспособности» опросника SF-36v2 (rs= - 0,453; р < 0,001).

Через 14 дней от начала лечения у больных группы «активная плацебо-терапия» было отмечено значимое снижение содержания циркулирующего ФА, являющегося интегративным показателем гипергликемии на протяжении предшествующих трех недель, с 42,89±2,90 до 37,34±2,54 мкМоль/1 г альбумина (р = 0,034). Установленный факт отражает эффективность базисного лечения СД. Справедливость этого положения иллюстрируется достоверным снижением гипотимии (с 0,85±0,16 до 0,56±0,15, р = 0,011), «утраты аппетита» (с 0,79±0,18 до 0,46±0,18, р = 0,021) и суммарного показателя ШДБ (с 16,71±1,88 до 14,17±1,94, р = 0,044) по сравнению с исходными величинами. Аналогичные сдвиги были установлены для проявлений тревоги (интегральный балл ШТЦ снизился с 42,88±2,01 до 37,50±2,15, р < 0,001) и времени заполнения пятой таблицы Шульте, длительность работы с которой сократилась с 55,21±3,27 до 49,75±2,55 секунд (р = 0,015). Вместе с тем, средние значения гликемии в изученных точках суточного профиля, показатели липидемии, системы «ПОЛ-АОЗ», интегральные параметры внимания, величины 1Q и составляющие КЖ не претерпели значимой динамики. Не исключено, что снижение депрессивной «утраты аппетита» в динамике базисного лечения ограничивает его эффективность за счет известной роли гиперфагии в эскалации метаболических расстройств при СД2, которым страдала большая часть (68,9 %) пациентов, включенных в исследование (таблица 3).

Включение а-ЛК и мексидола в схему комплексной терапии СД привело к определенной коррекции расстройств углеводного обмена. Это проявилось снижением гликемии на 13.00 у больных, получавших а-ЛК (на 1,76±0,92 мМоль/л, р = 0,024) и мексидол (на 1,06±0,55 мМоль/л, р = 0,027), в сравнении с соответствующим сдвигом в группе «активная плацебо-терапия» (повышение на 0,83±0,50 мМоль/л по сравнению с исходным значением). Установленный факт хорошо согласуется с данными об инсулин-потенциирующем действии изученных ЛС. Следует подчеркнуть, что 50 % пациентов, включенных в исследование (45 больных), получали препараты инсулина средней продолжительности действия. Введение этих

препаратов утром натощак (в 7.00 - 8.00) связано с развитием максимального сахароснижающего эффекта через 6 часов (т.е. в 13.00 - 14.00). Ни одно из исследованных ЛС не повлияло на динамику липидологических параметров и показателей системы «ПОЛ-АОЗ» в сравнении с «активной плацебо-терапией».

Усиление сахароснижающего эффекта базисного лечения сопровождалось избирательным улучшением динамики депрессивного «чувства вины» под действием а-ЛК (снижение на 0,30±0,12 балла, р = 0,033) и мексидола (снижение на 0,44±0,19 балла, р = 0,038) в сравнении с группой «активная плацебо-терапия» (повышение на 0,19±0,15 балла). При этом ни одно из изученных ЛС не повлияло на выраженность снижения суммарного показателя ШДБ. Невзирая на равноэффективную коррекцию «чувства вины», а-ЛК и мексидол существенно различались по влиянию на составляющие КЖ. Курсовое лечение мексидолом привело к достоверно большему нарастанию показателя шкалы «жизнеспособности» опросника 8Р-36у2 (на 8,89±1,99) в сравнении с группой «активная плацебо-терапия» (0,00±2,16, р = 0,002) и больными, получавшими а-ЛК (0,91±1,90, р = 0,003). Применение а-ЛК способствовало более выраженой коррекции связанных с болью органичений КЖ (повышение показателя на 5,16±1,32, р = 0,011) по сравнению с мексидолом (снижение на 1,01±2,17). Двухнедельное применение а-ЛК привело к существенному улучшению показателей внимания. Это проявилось снижением показателя «врабатываемости», низкие величины которого отражают хорошую способность к быстрому и эффективному началу требующей внимания работы (уменьшение на 0,07±0,03 против повышения на 0,06±0,03 в группе «активной плацебо-терапии», р = 0,004). Необходимо добавить, что динамика показателя «врабатываемости» у больных, получавших а-ЛК, оказались достоверно лучше соответствующих сдвигов в группе «мексидол» (повышение на 0,07±0,03, р = 0,007). При этом ни одно из изученных ЛС не повлияло на динамику 10, исходные величины которого соответствовали уровню «хорошей нормы».

В процессе фармакоэкономического анализа сахароснижающего действия препаратов установлено, что показатель соотношения «затраты-эффективность» в группе больных, получавших а-ЛК, был в 1,2 раза ниже соответствующего показателя в группе больных, получавших мексидол. Принципиально иная картина наблюдалась при оценке экономической эффективности изучаемых ЛС в отношении депрессивного «чувства вины». В данном случае стоимость единицы эффекта мексидола оказалась вдвое меньше соответствующей величины при использовании а-ЛК. Результаты фармакоэкономического анализа свидетельствуют о более эффективном и экономически доступном применении а-ЛК для коррекции метаболических расстройств и очевидных преимуществах мексидола по коррекции депрессивного «чувства вины».

Результаты проведенного исследования свидетельствуют о целесообразности включения а-ЛК и мексидола в схемы комплексного лечения больных СД. Двухнедельное применение этих ЛС равновыраженно потенцирует действие сахароснижающей терапии с одновременным уменьшением депрессивного «чувства вины». В случае использования мексидола данные эффекты сопровождаются позитивной динамикой «жизнеспособности», отражающей улучшение КЖ пациентов. Курсовое применение а-ЛК дополнительно способствует улучшению внимания больных.

Завершая обсуждение результатов клинико-фармакологического раздела работы, необходимо подчеркнуть, что двухнедельное применение мексидола и а-ЛК у больных СД не оказало никакого влияния на интегральные показатели тяжести депрессивных расстройств, тревоги, интеллектуального потенциала, а также параметры липидемии и системы «ПОЛ -АОЗ». Указанные факты свидетельствуют о более низкой эффективности изученных ЛС в клинике по сравнению с их применением для терапии экспериментальной ДЭ. Скорее всего, это связано с тем, что в экспериментальной части работы изученные производные 3-ОП и ЯК, а также а-ЛК применялись, начиная с самых ранних этапов развития экспериментального СД.

Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности включения мексидола, одновременно являющегося производным 3-оксипиридина и янтарной кислоты, в схему

комплексного лечения больных СД, начиная с момента постановки диагноза этого заболевания. Подобное расширение действующего стандарта позволит рассчитывать на увеличение чувствительности больных к препаратам инсулина, нарастание толерантности пациентов к углеводному компоненту рациона, коррекцию атерогенных дислипидемических расстройств, предотвращение или замедление развития диабетической энцефалопатии с сопутствующей нормализацией аффективной сферы и когнитивных функций, а также повышение качества жизни больных СД. Важно подчеркнуть, что относительно мягкое инсулин-потенцирующее действие мексидола при его очевидной сахароснижающей активности позволяет поставить вопрос о широком использовании мексидола в диабетологической практике вне зависимости от типа СД.

Заключение

Полученные результаты позволяют рассматривать оригинальные отечественные производные 3-ОП и ЯК как средства, церебропротекторное, ноотропное и тимоаналептическое действие которых при СД не уступает соответствующим эффектам a-JIK, считающейся эталонным средством лечения диабетических нейропатий. Наилучшим средством вторичной профилактики и терапии диабетической энцефалопатии следует считать мексидол, одновременно являющийся производным 3-ОП и ЯК.

Выводы

1. Оригинальные отечественные производные 3-оксипиридина и янтарной кислоты (эмоксипин, реамберин, мексидол), а также эталонное средство лечения диабетических нейропатий а-липоевая кислота влияют на устойчивость к острой гипоксической гипоксии и чувствительность к инсулину в зависимости от своей способности модулировать липидную пероксидацию in vitro. Производные 3-оксипиридина (эмоксипин и мексидол), обладающие антиоксидантным действием в концентрациях менее 10"4 Моль, превосходят реамберин и а-липоевую кислоту, оказывающие прооксидантное действие in vitro, по антигипоксическому действию, но уступают им по инсулин-потенциирующему эффекту.

2. Влияние эмоксипина, реамберина, мексидола и а-липоевой кислоты на толерантность к сахарной нагрузке прямо зависит от антигипоксической активности изученных лекарственных средств. Эмоксипин и мексидол, превосходящие реамберин и а-липоевую кислоту по антигипоксической активности, вызывают наибольшее увеличение толерантности к нагрузке глюкозой. Реамберин, не влияющий на устойчивость к острой гипоксической гипоксии, снижает толерантность к нагрузке глюкозой.

3. Курсовое применение эмоксипина, реамберина, мексидола и а-липоевой кислоты при аллоксановом диабете корригирует гипергликемию в прямой зависимости от способности изученных лекарственных средств увеличивать толерантность к сахарной нагрузке. Курсовое введение эмоксипина связано с развитием транзиторного гипергликемизирующего эффекта. Выраженность сахароснижающего действия реамберина при аллоксановом диабете снижается по мере увеличения длительности курсового применения. а-Липоевая кислота, наоборот, характеризуется нарастанием гипогликемизирующего эффекта по мере увеличения кратности введения. Мексидол вызывает наиболее эффективную коррекцию гипергликемии при аллоксановом диабете.

4. Влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на выраженность дислипидемии при аллоксановом диабете существенно зависит от их антигипоксической активности. Наиболее выраженную коррекцию гиперхолестеринемии и гипертриглицеридемии вызывают производные 3-оксипиридина (эмоксипин и мексидол), превосходящие реамберин и а-липоевую кислоту по антигипоксической активности. Реамберин, не влияющий на устойчивость к острой гипоксической гипоксии, усугубляет выраженность атерогенных дислипидемических расстройств при экспериментальном сахарном диабете.

5. Курсовое 14-дневное применение эмоксипина и мексидола у крыс с аплоксановым диабетом предотвращает накопление липофусцина в нейронах первичной соматосенсорной коры и поле CAI гиппокампа, вызывая одновременное нарастание уровня липопероксидов в периферической крови. Курсовое использование реамберина и а-липоевой кислоты

сопровождается развитием однонаправленного прооксидантного эффекта на уровне соматосенсорной коры и периферической крови и одновременным снижением доли липофусцинсодержащих нейронов в поле CAI аммонова рога крыс с аллоксановым диабетом. Изученные производные 3-оксипиридина и янтарной кислоты, также как а-липоевая кислота, способствуют нарастанию доли липофусцинсодержащих нейронов в паравентрикулярном ядре головного мозга крыс с аллоксановым диабетом.

6. Курсовое 14-дневное применение эмоксипина и мексидола у крыс с аллоксановым диабетом препятствует снижению содержания нейронов, олигодендроцитов и микроглиоцитов в поверхностных слоях первичной соматосенсорной коры и способствует увеличению содержания этих клеток в поле CAI аммонова рога. Курсовое применение реамберина и а-липоевой кислоты оказывает нейро- и глиопротекторный эффект на уровне поверхностных слоев соматосенсорной коры, но вызывает уменьшение содержания пирамидных нейронов в гиппокампе крыс с аллоксановым диабетом.

7. Коррекция показателей нейронального и глиального состава поля CAI гиппокампа в результате курсового применения эмоксипина и мексидола сопровождается нормализацией активности крыс с аллоксановым диабетом в «открытом поле» с одновременным снижением показателей тревоги (груминга и дефекации), а также повышением способности больных животных к условнорефлекторному обучению.

8. Невзирая на снижение числа пирамидных нейронов поля CAI гиппокампа крыс с аллоксановым диабетом под действием двухнедельного применения реамберина и а-липоевой кислоты, эти лекарственные средства вызывали нормализацию поведения больных животных в «открытом поле» с одновременной коррекцией их мнестического дефицита.

9. Курсовое применение эмоксипина, реамберина, мексидола и а-липоевой кислоты у мышей с аллоксановым диабетом сопровождается уменьшением выраженности гипергликемии с одновременной нормализацией поведения больных животных в «открытом поле» и увеличением их устойчивости к экспериментальному депрессогенному воздействию в

тесте «подвешивания за хвост».

10. Двухнедельное введение а-липоевой кислоты (в разовой дозе 600мг) и мексидола (в разовой дозе 300мг) больным сахарным диабетом способствует уменьшению гликемии на 13.00 с одновременным снижением депрессивного «чувства вины». В случае использования мексидола данные эффекты сопровождаются позитивной динамикой «жизнеспособности» как составляющей качества жизни пациентов по данным опросника SF-36v2. Курсовое применение а-липоевой кислоты дополнительно способствует улучшению внимания по показателю «врабатываемости» по данным таблиц Шульте. Благоприятные психотропные эффекты а-липоевой кислоты и мексидола не связаны с изменениями липидемии и показателей системы «перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита» в крови

больных сахарным диабетом.

11. а-Липоевая кислота характеризуется более низкой стоимостью единицы сахароснижающего эффекта по сравнению с мексидолом, но превосходит его по стоимости единицы снижения депрессивного «чувства вины» при курсовом применении у больных сахарным диабетом.

Практические рекомендации

1. Для экспериментального изучения новых подходов к профилактике и лечению диабетической энцефалопатии целесообразно использовать модель аллоксанового диабета, характеризующуюся ранним формированием и быстрым прогрессированием нарушений клеточного состава кортикальных и диэнцефальных структур головного мозга, сопровождающихся расстройствами мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения. Изучение начальных стадий развития экспериментальной диабетической энцефалопатии целесообразно проводить в период с 4-го по 17-й день после затравки аллоксаном.

2. Включение мексидола в комплексную терапию сахарного диабета целесообразно начинать сразу после выявления данного заболевания. Подобное расширение стандартных

схем терапии позволяет рассчитывать на эффективную профилактику и/или лечение диабетических поражений головного мозга у больных сахарным диабетом.

3. Дополнительное двухнедельное курсовое применение мексидола (в разовой дозе 300 мг в сутки внутривенно) является эффективным подходом к оптимизации комплексного лечения сахарного диабета за счет улучшения коррекции гипергликемии и сопутствующих аффективных расстройств.

4. Дополнительное двухнедельное курсовое применение а-липоевой кислоты (в разовой дозе 600 мг в сутки внутривенно) является эффективным подходом к оптимизации комплексного лечения сахарного диабета за счет коррекции сопутствующих нарушений внимания.

5. Выявленные в эксперименте прооксидантный, дислипидемический и значительный инсулин-потенциирующий эффекты реамберина иллюстрируют целесообразность дальнейших клинических исследований по обоснованию оптимальных доз и схем его терапевтического применения у больных сахарным диабетом.

6. Выявленное в эксперименте транзиторное гипергликемизирующее действие эмоксипина свидетельствует о перспективе целенаправленного клинического изучения безопасности его применения у больных с неудовлетворительной компенсацией сахарного диабета.

Список работ, опубликованных автором по теме диссертации

1. Волчегорекая, М.И. Депрессия как вероятный предиктор кардиальной патологии у больных сахарным диабетом / М.И. Волчегорекая, JI.M. Рассохина, М.Н. Алексеев // Инновационные технологии в медицине : материалы 2-го Чешско-Российского медицинского Форума. - Челябинск, 2008. - С. 27-28.

2. Волчегорекая, М.И. Электрокардиографические и эхокардиографические предикторы аффективных расстройств при сахарном диабете / М.И. Волчегорекая, М.Н. Алексеев, JI.M. Рассохина // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2008. - Т. 7, № 6. - С. 72-73. -Прил. 1 : Российский национальный конгресс кардиологов «Повышение качества и доступности кардиологической помощи».

3. Волчегорский, И.А. Антиоксиданты при экспериментальном сахарном диабете / И.А. Волчегорский, JI.M. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Проблемы эндокринологии. - 2008. - Т. 54, № 5. - С. 43-49.

4. Волчегорский, И.А. Влияние а-липоевой кислоты и мексидола на нейро- и аффективный статус больных с начальными стадиями синдрома диабетической стопы / И.А. Волчегорский, М.Н. Алексеев, М.И. Волчегорекая, Л.М. Рассохина // Клиническая медицина. - 2008. - Т. 86, № 10. - С. 52-59.

5. Волчегорский, И.А. Сравнительный анализ влияния производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на устойчивость к острой гипоксической гипоксии / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Патогенез. - 2008. - Т. 6, № 3. - С. 50-51. - V Российская конференция с международным участием «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция».

6. Волчегорский, И.А. Антидепрессивное действие а-липоевой кислоты и реамбернна при аллоксановом диабете у мышей У И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Проблемы эндокринологии. - 2009. - Т. 55, № 4. - С. 20-25.

7. Волчегорский, И.А. Антидепрессивное действие эмоксипина и мексидола при аллоксановом диабете у мышей / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2009. - Т. 72, № 2. -С. 11-15.

8. Волчегорский, И.А. Влияние лекарственных средств с «антиоксидантной активностью» на переокисление липидов нервной ткани in vitro / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко, K.M. Местер, П.Н. Новоселов, Т.В. Астахова, И.А. Денисенко // Актуальные проблемы медицинской науки и практического здравоохранения :

труды научной сессии, посвященной 65-летию медицинской академии. - Челябинск, 2009. -С.73-77.

9. Волчегорский, И.А. Влияние производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на толерантность к глюкозе и этологические проявления экспериментальной диабетической энцефалопатии / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2009. - № 4. - С. 94-99.

10. Волчегорский, И.А. Влияние производных 3-оксипиридина на толерантность к глюкозе и этологические проявления экспериментальной диабетической энцефалопатии / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии : Российская конференция, посвященная 80-летию со дня рождения Р.И. Лифшица. - Челябинск, 2009. - С. 109-112.

П. Волчегорский, И.А. Влияние про- и антиоксидантов на чувствительность к инсулину и толерантность к глюкозе / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко, К.М. Местер, П.Н. Новоселов, Т.В. Астахова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2010. - Т. 150, № 9. - С. 295-301.

12. Волчегорский, И.А. Инсулинпотенцирующее действие антиоксидантов при экспериментальном сахарном диабете / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Проблемы эндокринологии. - 2010. - Т. 56, № 2. - С. 27-35.

13. Волчегорский, И.А. Антигипоксическое действие производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты и их ноотропный эффект при аллоксановом диабете / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Экспериментальная и клиническая фармакология. -2011. - Т. 74, № 12. - С. 27-32.

14. Волчегорский, И.А. Оригинальные российские производные 3-оксипиридина и янтарной кислоты - эффективные средства дополнительного лечения диабетических нейропатий / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2011. - № 3/1. - С. 92.

15. Волчегорский, И.А. Сравнительный анализ влияния а-липоевой кислоты и мексидола на аффективный статус, когнитивные функции и качество жизни больных сахарным диабетом / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, М.И. Колядич, М.Н. Алексеев // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2011. - Т. 74, № 11. - С. 17-23.

16. Волчегорский, И.А. Церебропротекторное действие производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты в остром периоде аллоксанового диабета у крыс / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко II Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2011. - Т. 74, № 5. - С. 17-25.

17. Волчегорский, И.А. Влияние а-липоевой кислоты и мексидола на аффективный статус, когнитивные функции и качество жизни больных сахарным диабетом / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, М.И. Колядич, М.Н. Алексеев // Инновации в современной фармакологии : материалы IV съезды фармакологов России. - Казань, 2012. - С. 39.

18. Волчегорский. И.А. Влияние отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на устойчивость к гипоксии, расстройства углеводного обмена и условнорефлекторное обучение при аллоксановом диабете / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2012. -№ 2. - С. 50-51.

19. Волчегорский, И.А. Метаболические предикторы депрессии при сахарном диабете / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, М.И. Колядич, М.Н. Алексеев // Клиническая лабораторная диагностика. - 2012. - № 5. - С. 28-31.

20. Рассохина, Л.М. Оптимизация стандартов лечения социально значимых заболеваний с использованием оригинальных отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты (анализ современной российской медицинской периодики) / Л.М. Рассохина // Медицина и качество жизни. - 2012. - № 2. - С. 56-58. - Конгресс «Здравоохранение Российской Федерации, стран СНГ и Европы».

21. Волчегорский, И.А. Динамика начальных проявлений экспериментальной диабетической энцефалопатии / И.А. Волчегорский, J1.M. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - 2013. - Т. 99, № 4. - С. 491-500.

22. Волчегорский, И.А. Динамика состояния системы перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита при аллоксановом диабете у крыс / И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2013. - Т. 155, № 1. - С. 31-35.

23. Волчегорский, И.А. Протекторное действие цитофлавина и его компонентов при острой аллоксановой интоксикации у мышей / И.А. Волчегорский, JI.M. Рассохина, С.Г. Ермакова, И.Ю. Мирошниченко // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2013. - Т. 76, № 4. - С. 26-31.

24. Волчегорский, И.А. Церебропротективное действие производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты при экспериментальном сахарном диабете / И.А. Волчегорский, JI.M. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. - 2013. - № 6. - С. 50-61.

25. Волчегорский, И.А. Церебропротективные эффекты эмоксипина, реамберина и мексидола при аллоксановом диабете / И.А. Волчегорский, JI.M. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко II Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2013. — Т. 155, № 1.-С. 63-70.

26. Рассохина, JI.M. Сравнительный анализ эффективности прямых затрат на приобретение а-липоевой (тиоктовой) кислоты и мексидола (2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината), используемых в схемах комплексного лечения больных сахарным диабетом / JI.M. Рассохина // Известия высших учебных заведений. Уральский регион.-2013,-№2.-С. 124-127.

27. Volchegorskii, I.A. Antineuropathic and antidepressant action of alpha-lipoic acid and mexidol in patients with initial stages of diabetic foot syndrome / I.A. Volchegorskii, M.N. Alekseev, M.I. Volchegorskaya, L.M. Rassokhina // The 3-rd China-Russia International Symposium on Pharmacology: materials of symposium. - Harbin, 2008. - P. 20-21.

Список сокращений

АОЗ - антиоксидантная защита ТТГ

ДК - диеновые коньюгаты УРАИ

ДЭ - диабетическая энцефалопатия ФА

е.и.о. - единицы индекса окисления

КД - кетодиены цнс

КЖ - качество жизни ЦП

лс - лекарственное средство ШДБ

з-оп - 3-оксипиридин штц

охс - общий холестерин эстд

пвя - паравентрикулярное ядро як

пол - перекисное окисление липидов

СД - сахарный диабет а-ТК

сдс - синдром диабетической стопы а-ЛК

ст - сопряженные триены НЬАїс

тг - триглицериды

тест толерантности к глюкозе условный рефлекс активного избегания фруктозамин

центральная нервная система церулоплазмин шкала депрессии Бека шкала тревоги Цунга эквивалент средней терапевтической дозы янтарная кислота альфа токоферол альфа-липоевая кислота гликозилированный гемоглобин

На правах рукописи

Рассохина Любовь Михайловна

ЦЕРЕБРОПРОТЕКТОРНОЕ, НООТРОПНОЕ И ТИМОАНАЛЕПТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ ПРОИЗВОДНЫХ 3-ОКСИПИРИДИНА И ЯНТАРНОЙ КИСЛОТЫ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ

14.03.06 - Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Челябинск - 2013

Отпечатано в ООО «Типография ВК». 454048, г. Челябинск, ул. Красная, 42; тел.: 727-74-50. Подписано к печати 12.09.2013г. Заказ № 1756. Объем 2 п.л. Формат 64x90/16. Гарнитура «Times New Roman суг». Бумага для офисной техники, 80 мг/м2. Тираж 100 экз.